Αφηρημένο

υδαρής καρκίνου των ωοθηκών (SEOC) είναι η πιο θανατηφόρα κακοήθεια γυναικολογικό. Τα microRNAs (miRNAs) είναι μία κατηγορία των μικρών RNAs μη κωδικεύουσας οποίες ρυθμίζουν την έκφραση των γονιδίων και την μετάφραση πρωτεΐνης. MiRNAs επίσης κωδικοποιούνται από ιούς με σκοπό τη ρύθμιση δικά τους γονίδια και εκείνα των μολυσμένων κυττάρων. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη για την αξιολόγηση ιογενή miRNAs στην SEOC. MiRNAs δεδομένα αλληλουχίας από 487 ασθενείς SEOC είχαν κατεβάσει από την ιστοσελίδα TCGA και αναλύθηκαν μέσω in-house αγωγού αλληλουχίας. Για την ανάλυση TCGA cross-επικύρωση, μετρήσαμε την έκφραση του miR-H25 από ποσοτική ανοσοφθορισμό σε μια πρόσθετη ομάδα των 161 ασθενών SEOC. Γονίδιο, η έκφραση των miRNAs, και κυτταροτοξικότητα δοκιμασία πραγματοποιήθηκαν σε πολλαπλές κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών επιμολυσμένα με miR-H25 και miR-BART7. Ανάλυση αποτέλεσμα έγινε χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική μέθοδο Cox και Kaplan-Meier. Viral miRNAs είναι πιο εκφράζονται σε SEOC ό, τι σε φυσιολογικούς ιστούς. Επιπλέον, ιογενή miRNAs έρπητος (miR-BART7 από EBV και miR-H25 από HSV-2) είναι σημαντικές και προγνωστική βιολογικών δεικτών της έκβασης στην πολυμεταβλητή ανάλυση Cox. MiR-BART7 συσχετίζεται με αντοχή στην πρώτη γραμμή χημειοθεραπείας και πρόωρο θάνατο, ενώ miR-H25 φαίνεται να προσδίδουν μια προστατευτική επίδραση και μακροχρόνια επιβίωση. Ολοκληρωμένη ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης και την ιογενή miRNAs υποδηλώνει ότι το miR-BART7 προκαλεί άμεσα σισπλατίνη-αντίσταση, ενώ miR-H25 μεταβάλλει την επεξεργασία του RNA και επηρεάζει την έκφραση των επιβλαβών ανθρώπινα miRNAs όπως miR-143. Αυτή είναι η πρώτη έρευνα που συνδέει ιικό έκφραση miRNA να έκβαση του καρκίνου των ωοθηκών. Viral miRNAs μπορεί να είναι χρήσιμη για την ανάπτυξη βιολογικών δεικτών για την έγκαιρη διάγνωση και ως δυνητικό θεραπευτικό εργαλείο για τη μείωση SEOC θνησιμότητα

Παράθεση:. Pandya D, Mariani Μ, McHugh Μ, Andreoli M, Sieber S, Ο S, et al . MicroRNA Έκφραση (2014) ιό του έρπητα και Σημασία στη υδαρής καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 9 (12): e114750. doi: 10.1371 /journal.pone.0114750

Επιμέλεια: Pierre Busson, Gustave Roussy, Γαλλία

Ελήφθη: 12 του Ιουνίου του 2014? Αποδεκτές: 13 Νοεμβρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 8 Δεκεμβρίου 2014

Copyright: © 2014 Pandya et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Η ανάλυση έχει πραγματοποιηθεί για το σύνολο δεδομένων TCGA το οποίο είναι ελεύθερα προσβάσιμο στην πύλη δεδομένων TCGA (https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/). Επίπεδο δεδομένων 3 είναι προσβάσιμα χωρίς περιορισμούς, ενώ το επίπεδο 1 δεδομένα και κλινικές πληροφορίες είναι προσβάσιμες μετά από αίτηση κατατίθεται μέσω της δικτυακής πύλης δεδομένων TCGA. Οι πολιτικές για την TCGA πρόσβαση σε δεδομένα εξήγησε σε https://cancergenome.nih.gov/abouttcga/policies/policiesguidelines

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή υποστηρίζεται μερικώς από μια επιχορήγηση από AIRC (Associazione Italiana Ricerca sul Cancro, IG11975 ), Associazione OPPO e le μηνύσει Stanze ONLUS, από την Ruth C. Donovan Καρκίνου του Προγράμματος Έρευνας και από έναν φιλελεύθερο δωρεά από το κύριο και την κυρία Ruggles. Το έργο αυτό είναι αφιερωμένο στην Μόνικα DeFeo που έχασαν τη θαρραλέα μάχη της κατά του καρκίνου στην ηλικία των 53. Χορηγοί της μελέτης δεν είχε κανένα ρόλο στη σύλληψη και τη διαχείριση της μελέτης

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

υδαρής καρκίνου των ωοθηκών (SEOC) είναι η πιο θανατηφόρα γυναικολογική κακοήθεια. Λόγω της κλινικής νωθρότητα της, η πλειοψηφία των ασθενών έχουν διαγνωσθεί προχωρημένο στάδιο όταν η χειρουργική επέμβαση από μόνη της είναι ανεπαρκής για να εξαλειφθεί πλήρως τον όγκο. Κατά συνέπεια, η χημειοθεραπεία συνήθως απαιτείται για τον περαιτέρω έλεγχο της νόσου. Χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής για τον καρκίνο των ωοθηκών περιλαμβάνει τυπικά ένα μέσο πλατίνας (συνήθως καρβοπλατίνη) και ένα ταξάνιο (συνήθως paclitaxel) [1]. Βιοδείκτες που είναι προοπτικά προβλεπτική της ευαισθησίας ή της αντίστασης στη χημειοθεραπεία χρειάζονται απεγνωσμένα να εξατομικεύσει σωστά θεραπευτικές επιλογές και να αποφευχθούν τοξικές θεραπείες για τους ασθενείς που θα είναι ανθεκτική στη χημειοθεραπεία. Το έργο της ανάπτυξης τέτοιων βιοδεικτών, προβληματική για όλα τα στερεά κακοήθειες, είναι ιδιαίτερα εξοργιστικό για τον καρκίνο των ωοθηκών όπου ακραία κλωνική ετερογένεια είναι ο κανόνας και για τις οποίες δεν έχουν μεταλλάξεις οδήγηση έχουν εντοπιστεί [2].

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μια κατηγορία μικρών, μη κωδικεύουσας RNAs τα οποία ρυθμίζουν την έκφραση των γονιδίων και πρωτεϊνών μετάφραση και επηρεάζουν όλες τις πτυχές της κυτταρικής φυσιολογίας. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι πολλοί miRNAs τα έκτροπα που εκφράζεται σε καρκίνους του ανθρώπου, και τα προφίλ έκφρασης των miRNAs έχουν αυξηθεί προγνωστικές πληροφορίες που παρέχονται από τα παραδοσιακά συστήματα ταξινόμησης που σχετίζονται με το στάδιο και υπότυπο [3], [4], [5]. Οι ιοί κωδικοποιούν επίσης miRNAs και με αυτόν τον τρόπο επηρεάζουν τη λειτουργία των μολυσμένων κυττάρων. Στα θηλαστικά, ιογενής λοίμωξη είναι ένας ισχυρός σκανδάλη της απόκρισης ιντερφερόνης η οποία αναστέλλει την αντιγραφή του ιού και μετριάζει την ιογενή βλάβη. Η μόλυνση των κυττάρων των θηλαστικών από ιούς RNA, εκτός ρετροϊούς, οδηγεί στην παραγωγή των μακρών dsRNAs κατά τη διάρκεια του κύκλου ζωής του ιού. DNA ιών παράγουν dsRNAs από συγκλίνουσες μεταγραφή του συμπαγούς ιικών γονιδιωμάτων τους. Viral dsRNA είναι ένας ισχυρός σκανδάλη της απόκρισης ιντερφερόνης η οποία φωσφορυλιώνει την eIF2a παράγοντα μετάφραση και οδηγεί στην παγκόσμια μεταφραστική σύλληψη και απόπτωση [6], [7], [8]. Ως προσαρμοστική στρατηγική, οι ιοί έχουν εξελιχθεί ένα ευρύ φάσμα των αντισταθμιστικών μέτρων για να εμποδίσει την παραγωγή ιντερφερόνης, και μερικά από αυτά βασίζονται σε ιογενείς miRNAs ως τελεστές της κυτταρικής ελέγχου. Όλοι οι ιοί του έρπητα είναι σήμερα γνωστές (ανθρώπινα και μη-ανθρώπινα) κωδικοποιούν πολλαπλές miRNAs [9]. Ως παράδειγμα, ο hCMV miR-UL112-1 όχι μόνο αναστέλλει ιική εμφάνιση ΙΕ1 αλλά και έκφραση κυτταρικών MICB για την προώθηση της ιικής λανθάνουσας κατάστασης και την αποφυγή εξάλειψης από φυσικά φονικά κύτταρα [10]. Ως εκ τούτου, φαίνεται ότι οι ιοί του έρπητα είναι σε θέση να αεροπειρατεία την ενδοκυτταρική έλεγχο της γονιδιακής έκφρασης /πρωτεΐνης μέσω της ιογενούς miRNAs. Λοιμώξεων

Η ερπητική είναι πεισματικά κοινά και διάχυτη στον άνθρωπο. EBV [11] και CMV [12] λοιμώξεις είναι παρούσα σε τουλάχιστον το 80% του πληθυσμού. Worldwide ποσοστά ιός του απλού έρπητα (HSV) λοίμωξη, μετρώντας τόσο έρπης (HSV-1) και έρπητα των γεννητικών οργάνων (HSV-2), είναι μεταξύ 65% και 90% [13]. Αυτά τα επιδημιολογικά δεδομένα υποδηλώνουν μια υψηλή πιθανότητα ότι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών είναι φορείς τουλάχιστον μία ή περισσότερες μολύνσεις από έρπη. Λόγω της ευρείας επικράτησης και την επιμονή και την ικανότητα να επηρεάσουν τη μεταγραφή και τη μετάφραση στα μολυσμένα κύτταρα τους, υποθέτουμε ότι ιό του έρπητα miRNAs είναι κλινικά σημαντικοί μεσολαβητές της SEOC βιολογίας με σημαντικές δυνατότητες ως βιοδείκτες και τους στόχους των ναρκωτικών.

Αποτελέσματα

Η έκφραση των ιογενών miRNAs είναι υψηλότερη σε SEOC από ό, τι σε φυσιολογικούς ιστούς

Το έργο [14] Cancer Genome Atlas (TCGA) αναλύονται και καταλογογραφηθεί έκφραση του αγγελιοφόρου RNA, την έκφραση των miRNAs (Illumina Hiseq), μεθυλίωση προαγωγού και DNA αριθμό αντιγράφων σε 489 advanced ορώδες αδενοκαρκινώματα των ωοθηκών και οι αλληλουχίες DNA των εξονίων από κωδικοποίησης γονιδίων σε 316 από αυτούς τους όγκους. Το πρωτοποριακό αυτό έργο είναι μια εξαιρετική πηγή για την ανάπτυξη νέων και καινοτόμων στρατηγικών για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών. Οι μελέτες TCGA miRNA δημοσιευθεί μέχρι σήμερα χρησιμοποιούνται μόνο τα δεδομένα επιπέδου 3 το οποίο αντιπροσωπεύει την αντιστοιχισμένη miRNAs χρησιμοποιώντας μόνο το ανθρώπινο (όχι ιογενής) miRNAome ως αναφορά. Για να ξεπεραστεί αυτός ο περιορισμός, θα κατεβάσει το επίπεδο του 1 ανεπεξέργαστα δεδομένα, και πραγματοποιήσαμε χαρτογράφηση miRNA-seq για 487 ασθενείς αναφορά τόσο των ανθρώπων όσο

και

ιογενή miRNAomes. Ήμασταν επιτυχία στην χαρτογράφηση 88,2% των διαβάζει. Ο μέσος αριθμός χαρτογραφηθεί διαβάζει για κάθε ασθενή ήταν 9,2 εκατομμύρια. Όπως αναμενόταν, το μεγαλύτερο μέρος του έχει χαρτογραφήθηκε στο ανθρώπινο miRNAome. Ωστόσο, ένα ανιχνεύσιμο και μάλλον αρκετά μεγάλο αριθμό των διαβάζει (n = 184.618) χαρτογραφήθηκε επί του ιικού miRNAome, επιδεικνύοντας έτσι την παρουσία ιικών miRNAs σε ασθενείς SEOC. Τα αποτελέσματα κανονικοποιήθηκαν για να ληφθεί υπόψη ότι ο συνολικός αριθμός των διαβάζει από κάθε ασθενής δεν ήταν πανομοιότυπα και ότι, εν απουσία της κανονικοποίησης, οι μεταβολές στον αριθμό των μεμονωμένων διαβάζει miRNA θα μπορούσε να οφείλεται σε βάθος ανάλυση της αλληλουχίας. Γι ‘αυτό κανονικοποιημένα δεδομένα όπως TPM (μεταγραφές ανά εκατομμύριο) διαβάζει. Ο μέσος αριθμός των ιικών miRNA διαβάζει για κάθε ασθενή ήταν 45,6 TPM. Τα πιο άφθονα ιογενή miRNAs χαρτογραφήθηκαν στο HSV-1 (n = 128.701) και HSV-2 γονιδιώματος (n = 51.709). HH6VB και EBV αντιπροσώπευαν το 986 και 1.260 διαβάζει, αντίστοιχα. CMV (κυτταρομεγαλοϊός) και KSHV (σάρκωμα Kaposi ιό του έρπητα) ήταν παρόντες με 96 και 178 διαβάζει, αντίστοιχα. TCGA δεν περιλαμβάνει συνήθεις ελέγχους ωοθηκικού ιστού για miRNA-seq. Για να έχουμε ένα εύρος αναφοράς για την έκφραση των ιικών miRNAs σε μη καρκινικούς ιστούς, που κατεβάσαμε 607 φυσιολογικούς ιστούς από την TCGA συμπεριλαμβανομένων κύστη, το κεφάλι του μαστού & amp? Λαιμού, νεφρού, ήπατος, πνεύμονα, πλακούντα, του θυρεοειδούς, του προστάτη και της μήτρας για ένα σύνολο 7,7 δισ αλληλουχιών. Τα δείγματα αναλύθηκαν ακολουθώντας την ίδια διαδικασία που περιγράφεται ανωτέρω. Σε noncancerous ιστούς, τα επίπεδα του ιού miRNA κατά μέσο όρο σημαντικά χαμηλότερα (TPM 11.8), σε σύγκριση με ένα TPM μέση τιμή 45,6 στο SEOC (Εικ. 1). Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η έκφραση της ιικής miRNAs είναι υψηλότερη σε SEOC ό, τι σε μη καρκινικό ιστούς

Διπλή αστερίσκοι δεικνύουν σημαντική διαφορά (ρ & lt? 0,0001, t-test). Μεταξύ της έκφρασης των ιικών miRNA σε SEOC σε σύγκριση με noncancerous ιστούς. Τα δεδομένα εκφράζονται με το άθροισμα όλων των ιικών miRNAs. Τα δεδομένα εκφράζονται ως TPM και το μπαρ στο γράφημα αντιστοιχεί στο μέσο όρο των noncancerous ιστούς (11,8) και SEOC (45,6).

Η

Στη συνέχεια, θα πραγματοποιηθεί μια συγκριτική ανάλυση των επιπέδων έκφρασης των δύο miR -H25 και miR-BART7 και ορισμένες ανθρώπινες miRNAs τυπικά εκφράζεται στο επιθηλιακό συστατικό του SEOC (mIR-21) [15], [16] και στα ερυθρά αιμοσφαίρια (mIR-16) [17] (Εικ. 2). MiR-21 επίπεδα έκφρασης ήταν σημαντικά υψηλότερες από αυτές του miR-16 (ρ & lt? 0.001, paired t-test). Ένα παρόμοιο μοτίβο παρατηρήθηκε επίσης και για τις δύο miR-H25 και miR-BART7, που εκφράστηκαν σε σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα σε σύγκριση με το miR-21 (p & lt? 0,001, paired t-test). Σε σύγκριση με miR-16, και πάλι και οι δύο ιικές miRNAs ήταν σημαντικά εκφράζεται σε χαμηλότερα επίπεδα (ρ & lt? 0.001, paired t-test), ακόμη και αν στην περίπτωση αυτή η διαφορά στην έκφραση ήταν λιγότερο συνεπής από ότι παρατηρήσει για miR-21

οι γυναίκες είχαν χαρακτηριστεί ως αρνητικά ή θετικά για miR-BART7 και miR-H25 αν TPM & gt? 0 ή TPM = 0, αντίστοιχα. Σε κάθε οικόπεδο η οριζόντια γραμμή αντιστοιχεί στη μέση, το κουτί για να το 25

ου-75

ο εκατοστημόριο και οι γραμμές στο διάστημα εμπιστοσύνης (5

ου-95

ο εκατοστημόριο).

προγνωστική ρόλο της ιογενούς miRNAs σε SEOC

για να εκτιμηθεί κατά πόσον η έκφραση ιικών miRNAs ήταν προγνωστικό, αναλύσαμε κάθε άτομο ιογενή miRNA σε ένα μοντέλο παλινδρόμησης κατά Cox. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση όπως η ηλικία και το στάδιο, δεδομένου ότι αυτές οι μεταβλητές ήταν σημαντικά μονοπαραγοντική προγνωστικούς παράγοντες. Το τελικό σημείο ήταν η συνολική επιβίωση (OS) που μετράται σε μήνες. Μια αναλογία κινδύνου (HR) & gt? 1 έδειξε μια καταστρεπτική επίδραση στο λειτουργικό σύστημα, ενώ HR & lt? 1 σηματοδότησε μια προστατευτική επίδραση. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της έκφρασης του ιικού miRNA (TPM) ως συνεχή μεταβλητή. Η συνολική συγκεντρωτική ανάλυση για κάθε ιό δεν παρέχουν σημαντικές δυνατότητες πρόβλεψης στο πολυπαραγοντικό μοντέλο Cox (

σ

& gt? 0,05). Μόνο HSV-1 κινήθηκαν προς μια σημαντική προστατευτική επίδραση με ένα

σ

-τιμή στην πολυμεταβλητή ανάλυση 0.053 (HR = 0,33? CI 0,03 – 1,01). Όταν περιορίζοντας την πισίνα, ωστόσο, να περιλαμβάνει μόνο τις HSV-2 ιογενή miRNAs συνήθως εκφράζεται κατά τη διάρκεια της παραγωγικής μόλυνσης (miR-H9, miR-H11, miR-Η12, miR-H13, miR-Η19, miR-H20, miR-H21, miR-H22, miR-H23 και [9]) miR-H25, η προστατευτική επίδραση ήταν στατιστικά σημαντική (HR = 0.2, CI 0,04 έως 0,89,

σ

= 0,032). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η έκφραση ιικών miR-H25 (HSV-2), βρέθηκε σε 233/487 (48% με TPM & gt? 0) των δειγμάτων. Πολυπαραγοντική ανάλυση που χρησιμοποιεί το μοντέλο Cox έδειξαν ότι η υψηλή έκφραση αυτής της ιογενούς miRNA σχετιζόταν με καλύτερη έκβαση (HR = 0,1? CI 0,01 – 0,55?

σ

= 0,006). Επιπλέον, η έκφραση του miR-H25 ήταν υψηλότερη σε ασθενείς με πλήρη απόκριση σε χημειοθεραπεία και χαμηλότερη σε ασθενείς με προοδευτική ασθένεια (Εικ. 3). Αν και ο μηχανισμός είναι άγνωστος, παραγωγική μόλυνση του HSV-2 με συνδεδεμένες υψηλή έκφραση του miR-H25 μπορεί να αναστέλλει την αντιγραφή των καρκινικών κυττάρων απ ‘ευθείας ή αύξηση θανάτωσης HSV-2 που έχουν μολυνθεί καρκινικά κύτταρα από το ανοσοποιητικό σύστημα.

αστερίσκοι σημαδεύουν σημαντική μειώνει την έκφραση του miR-H25 σε ασθενείς τόσο με PD και SD, σε σύγκριση με τους ασθενείς με CR. Το εύρημα αυτό υποστηρίζει ένα προστατευτικό ρόλο της έκφρασης miR-H25.

Η

Στη συνέχεια, αναλύσαμε την έκφραση του miR-H25 σε μια πρόσθετη ομάδα των 161 ασθενών SEOC των οποίων τα κλινικά χαρακτηριστικά συνοψίζονται στον πίνακα 1. Για κάθε ασθενή, έως και 12 πυρήνες ιστού ελήφθησαν από διαφορετικές περιοχές του κάθε καρκίνου (933 πυρήνες συνολικά), και αυτά ανακρίθηκαν σε μορφή ιστού micro array (TMA). Η έκφραση του miR-H25 (βάφονται με custom made καθετήρα Exiqon) σε κάθε πυρήνα αναλύθηκε με λογισμικό AQUA η οποία χρησιμοποιεί ένα προκαθορισμένο σύνολο αλγορίθμων και χωρίς επίβλεψη μέθοδο για την αξιολόγηση των στόχων σε διάφορες κυτταρικές υπο-τμήματα (ή «μάσκες»). Cytokeratin και βιμεντίνης αντισώματα χρώση έδωσε την όγκου και στρωματικά μάσκες αντίστοιχα, και ϋΑΡΙ χρησίμευσε για να καθορίσει το πυρηνικό μάσκας. Μια περίληψη των αποτελεσμάτων των AQUA βαθμολόγησης αναφέρεται στο Σχ. 4. συνολική ένταση του miR-H25 ήταν υψηλότερη στο κυτταρόπλασμα των καρκινικών κυττάρων και κάτω στη μάσκα του στρώματος. Αρνητικά και θετικά δείγματα αναφοράς ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα ολιγονουκλεοτίδιο δεν στοχεύουν σε οποιαδήποτε περιοχή του ανθρώπινου γονιδιώματος (SiC) και το U6 μικρό RNA, αντίστοιχα. SiC ανιχνευτής δεν εμφάνισαν καμία χρώση (Σχήματα 5 & amp?. 6Α). Όπως ήταν αναμενόμενο, ο ανιχνευτής U6 κατέδειξε πυρηνική έκφραση σε σχεδόν το 100% των κυττάρων (Σχ. 6Β). Η έκφραση του U6 ήταν υψηλότερη στα επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα σε σύγκριση με τα επίπεδα που παρατηρείται σε στρωματικά κύτταρα (Σχ. 6Β). καθετήρα MiR-H25 ανιχνεύθηκε με δύο μορφές έκφρασης. Στο ένα, η χρώση ανιχνευτής περιορίστηκε στον πυρήνα των κυττάρων του όγκου (Σχ. 6C). Σε μια δεύτερη, υπήρχε διάχυτη κυτταροπλασματική χρώση τόσο των καρκινικών κυττάρων και στρωματικών (Εικ. 6D). Τα πρόσθετα στοιχεία για να περιγράψει σε μεγαλύτερη μεγέθυνση το πρότυπο χρώσης που παρέχονται ως S1, S2, S3, S4 και S5 Στοιχεία. πολυπαραγοντική ανάλυση Cox όπως η ηλικία και το στάδιο αποκάλυψε ότι η έκφραση του πυρηνικού miR-H25 δεν ήταν πρόβλεψης του αποτελέσματος (HR 0.91, CI 0,65 – 1,24), ενώ η έκφραση με ένα κυτταροπλασματικό πρότυπο χρώσης ήταν σημαντικά σχετίζονται με την καλή έκβαση (HR 0,56? CI 0,39 – 0,79?

σ

= 0,0008). Αυτή η ανάλυση AQUA υποστηρίζει πλήρως την ανακάλυψή μας από TCGA σύνολο δεδομένων, δηλαδή ότι η παραγωγική μόλυνση HSV-2 (με ταυτόχρονη κυτταροπλασματική miR-H25 υπερ-έκφραση) προσφέρει προστασία στους ασθενείς SEOC.

Κάθε κουκίδα αντιστοιχεί στην αξία ενός ατόμου πυρήνας ιστού. AQUA βαθμολογίες υπολογίστηκαν στη μάσκα στρωματικά (μπλε κουκκίδες), στην πυρηνική μάσκας (κόκκινες κουκκίδες), στον όγκο κυτταροπλασματική μάσκας (πράσινες κουκκίδες) και στη μάσκα του όγκου (κίτρινες κουκκίδες). Οι αντίστοιχες γραμμές αναφέρονται στην λείες μέσο όρο για κάθε ασθενή και το χρώμα είναι το ίδιο με των στιγμών.

Η

Στην κορυφή καθετήρα SiC και στο κάτω μέρος του miR-H25 καθετήρα. Μπλε σήμα = DAPI. Κίτρινο = Cytokeratin. Πράσινο = βιμεντίνης. Ροζ = miR-H25 καθετήρα. μέγεθος bar ισούται με 100 μΜ

Η

Από πάνω προς τα κάτω:. συγχωνευθεί εικόνα, πυρηνική χρώση (DAPI), μάσκα όγκου (κυτοκερατίνη ανοσοχρώση), μάσκα στρωματικά (vimentin ανοσοχρώση) και ο ανιχνευτής RNA. Ανιχνευτές είναι SiC (ομελέτα παρεμβαίνει ελέγχου) (Α), U6 (θετικός έλεγχος) (Β), και miR-H25 (C & amp? D). C αντιπροσωπεύει την έκφραση του miR-H25 χαρακτηριστική της λανθάνουσας λοίμωξης HSV-2 (πυρηνική χρώση των καρκινικών κυττάρων). D αντιπροσωπεύει έκφραση του miR-H25 χαρακτηριστικό της παραγωγικής μόλυνσης HSV-2 (κυτταροπλασματική έκφραση σε όγκο και στρώμα). μέγεθος bar ισούται με 100 μΜ.

Η

Αντίθετα, η ανάλυση TCGA miRNA-αλληλουχίας έδειξε ότι η έκφραση του miR-BART7 (που παράγεται από EBV) συνδεόταν με μικρότερη PFI (πλατίνα διάστημα χωρίς) και των φτωχών αποτέλεσμα. Αν και η έκφραση του miR-BART7 (TPM & gt? 0) αναγνωρίστηκε μόλις το 7,9% των δειγμάτων Συνολικά, ήταν υπερεκπροσωπούνται σε ασθενείς με ανθεκτική και ανθεκτική νόσο σε σύγκριση με την χημειο-ευαίσθητη ομάδα (Σχ. 7Α και 7Β) . Κατά συνέπεια, miR-BART7 θετικούς ασθενείς παρουσίασαν μειωμένη συνολική επιβίωση Kaplan Meier (Εικ. 7C) και Cox πολυπαραγοντική ανάλυση (HR 3,4, CI 2.2 έως 6.6,

σ

= 0,002).

: οι ασθενείς είχαν επισημανθεί σύμφωνα με την ΠΟΣ ως πυρίμαχα (PFI & lt? 6 μήνες), ανθεκτικό (PFI 6-12 μήνες) και ευαίσθητα (ΠΟΣ & gt? 12 μήνες). Έκφραση του miR-BART7 είναι σημαντικά χαμηλότερη στην ευαίσθητη σε σύγκριση με πυρίμαχα και ανθεκτικά ομάδες (διπλό αστερίσκο, σ & lt? 0.001, t-test). Β: Ανάλυση για απρόβλεπτα (μωσαϊκό οικόπεδο) των ασθενών που ομαδοποιούνται για την έκφραση του miR-BART7 (TPM & gt? 0 είναι θετικό (n = 38), μπλε γραμμές? TPM = 0 (n = 449) είναι αρνητική, κόκκινες γραμμές) και σύμφωνα με απόκριση σε χημειοθεραπεία, όπως περιγράφεται στο Α Double αστερίσκους δείχνουν ότι το ποσοστό των ευαίσθητων ασθενών είναι υψηλότερη στην ομάδα αρνητικού miR-BART7 (ακριβής δοκιμή Fisher, ρ & lt? 0.001, διπλό αστερίσκοι). C: Kaplan-Meier ανάλυση των ασθενών TCGA (n = 487) σύμφωνα με την έκφραση του miR-BART7. Το ποσοστό πρόωρης θνησιμότητας είναι σημαντικά υψηλότερη σε miR-BART7 θετικούς ασθενείς (τεστ Wilcoxon, ρ = 0,01). OS (άξονας Χ) αντιπροσωπεύει τη συνολική επιβίωση εκφράζεται σε μήνες.

Η

Αναγνώριση των μηχανισμών τροποποίησης του SEOC βιολογίας

Ένα από τα πλεονεκτήματα του συνόλου δεδομένων TCGA είναι η ένταξή του τόσο miRNA-seq και τα δεδομένα γονιδιακής έκφρασης. Αυτό το χαρακτηριστικό επιτρέπει την απόδοση της ολοκληρωμένης αναλύσεις με στόχο τον προσδιορισμό υποψήφια γονίδια που ρυθμίζονται από ιογενή miRNAs όπως περιγράφηκε προηγουμένως για τα ανθρώπινα miRNAs [18]. Είχαμε επικεντρωθεί αναλύσεις μας για τις δύο ατομικές ιογενή miRNAs (miR-H25 και miR-BART7) η οποία έδειξε σημασία σε μελέτες κλινική έκβαση, όπως περιγράφεται παραπάνω. Έχουμε κατεβάσει το επίπεδο 2 αναφοράς δεδομένων γονιδιακής έκφρασης αναλύσεις χρησιμοποιώντας Affymetrix U133 μάρκες. Για 414 ασθενείς (οι οποίοι τυχαιοποιήθηκαν είτε σε μια κατάρτιση ή σύνολο δοκιμών), αναλύσαμε με επιτυχία τόσο του γονιδίου και της έκφρασης ιικού miRNA. Εμείς ομαδοποιούνται οι ασθενείς, σύμφωνα με τα επίπεδα έκφρασης των δύο ιογενείς miRNAs ενδιαφέροντος (θετικό = TPM & gt? 0 εναντίον αρνητικών = TPM = 0). Τα γονίδια σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο αυτών ομάδων εντοπίστηκαν σε επίπεδο εμπιστοσύνης

σ

& lt? 0,05 μετά από πολλαπλές διόρθωση υπόθεση με τη μέθοδο Benjamini-Hochberg. Χρησιμοποιώντας αυτή την προσέγγιση, βρήκαμε 262 γονίδια εκφράζονται διαφορικά για miR-H25. Σύμφωνα με τον πόρο βιοπληροφορικής DAVID [19], που ομαδοποιούνται σε 12 ανεξάρτητες λειτουργικές ομάδες, με RNA επεξεργασίας, μάτισμα και των μεταφορών ως το πιο σημαντικό (Εικ. 8). Η επίδραση στην επεξεργασία του RNA συνοδεύθηκε από σημαντική ρύθμιση της έκφρασης ορισμένων ανθρωπίνων miRNAs. Για παράδειγμα, οι γυναίκες με υψηλά επίπεδα miR-H25 (Σχ. 9Α), αλλά όχι miR-BART7 (Σχ. 9Β) έδειξαν σημαντική μείωση στην έκφραση του miR-143. MiR-143 είναι ένας ισχυρός miRNA, η οποία, στη μελέτη TCGA, σχετιζόταν με κακή έκβαση στο πολυπαραγοντικό μοντέλο Cox (HR 14,8, CI 5,9 – 37,9,

σ

& lt? 0.001) και ανάλυση Kaplan-Maier (Σχ. 9C). Η επίδραση του miR-H25 σε Mir-143 φαίνεται άσχετη με μη ειδική προς τα κάτω ρύθμιση της επεξεργασίας miRNA, ως μη σημαντική διαφορά μεταξύ miR-H25 αρνητικών και θετικών ασθενών στη συνολική έκφραση του μη κωδικοποιητικού RNA παρατηρήθηκε (Εικ. 9D). Η επιρροή του miR-H25 στην έκφραση του miR-143 μπορεί, στην πραγματικότητα, να είναι συγκεκριμένες και άμεσες? ήμασταν σε θέση να αναπαράγει το ίδιο φαινόμενο in vitro χρησιμοποιώντας δύο κυτταρικές σειρές SEOC (Α2780 και SKOV-3) επιμολυσμένα με ένα συνθετικό miR-H25. Υπερ-έκφραση του miR-H25 ελέγχθηκε σε τρεις συγκεντρώσεις (0.1, 1 και 10 ηΜ) χρησιμοποιώντας το μέσο επιμόλυνσης, ένα κωδικοποιημένο ολιγο δεν στοχεύουν σε οποιαδήποτε περιοχή του ανθρώπινου γονιδιώματος (SiC) και ένα ιικό miRNA δεν εκφράζονται σε SEOC (ΜΙΚ UL112) ως αρνητικοί έλεγχοι. Μόνο miR-H25 παρήγαγε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του miR-143 έκφρασης (Εικ. 10).

Το δίκτυο miR-H25 δείχνει 35 γονίδια που εμπλέκονται στην επεξεργασία του RNA, μάτισμα και των μεταφορών. Κάλυψη του δικτύου στη βάση δεδομένων DAVID είναι 15/35 (42%, μαύροι κύκλοι).

Η

διάγραμμα οικοπέδου Box-μουστακιού που δείχνει την έκφραση του miR-143 (TPM), σύμφωνα με την έκφραση του ΜΙΚ H25 (Α) και miR-BART7 (Β). Οι ασθενείς που ορίζονται ως θετικά για έκφραση ιικών miRNA εάν η τιμή TPM ήταν & gt? 0 (n = 233). Ασθενείς με TPM = 0 ορίστηκαν αρνητικό (n = 254). Το διάγραμμα δείχνει μια σημαντική προς τα κάτω ρύθμιση των miR-143 σε γυναίκες θετικό για miR-H25 (p & lt? 0.001, t-test), αλλά όχι σε ασθενείς θετικοί για miR-BART7. Kaplan-Meier ανάλυση των ασθενών σύμφωνα με την έκφραση του miR-143 (C). Ασθενείς με υψηλή έκφραση του miR-143 παρουσιάζουν μια σημαντικά χειρότερη έκβαση σε σύγκριση με τους ασθενείς με χαμηλή έκφραση του miR-143 (P & lt? 0.001, Wilcoxon τεστ). D: Ανάλυση της έκφρασης του μη-κωδικοποίησης RNA (όπως TPM) σε ασθενείς ομαδοποιούνται για έκφραση miR-H25. Πράσινες γραμμές και τα διαμάντια απεικονίζουν τα μέσα και τα διαστήματα εμπιστοσύνης των μέσων των δύο ομάδων. Διαφορά δεν είναι στατιστικά σημαντική (

σ

& gt? 0,05, t-test).

Η

Στην Α-Γ και Β-Α, η έκφραση του miR-H25 και miR-143, αντίστοιχα. Στην Α-Β και C-D, Α2780 και τα κύτταρα SKOV-3, αντίστοιχα. Μπλε: έλεγχος με μέσο την επιμόλυνση? Κόκκινο: Κωδικοποιημένα ελέγχου συνθετικό ανιχνευτή (sic)? Πράσινο: miR-UL112 συνθετικά? Μαύρο: miR-H25 συνθετικά. Τα δεδομένα δείχνουν ότι η έκφραση του miR-H25 (10 nM) καταστέλλει την έκφραση του miR-143 και στις δύο κυτταρικές σειρές.

Η

Για ότι αφορά miR-BART7, πραγματοποιήσαμε την ίδια ανάλυση του δικτύου γονίδιο που περιγράφεται παραπάνω για το miR -H25. έκφραση MiR-BART7 σύμπλεγμα με 221 γονίδια σε 6 λειτουργικές ομάδες, το πιο σημαντικό από τα οποία είναι το μονοπάτι ενεργοποίησης των Τ κυττάρων (Εικ. 11). Επίσης, έχουμε εντοπίσει μια σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση του γονιδίου ADH1B. Αυτό το γονίδιο κωδικοποιεί για αφυδρογονάσης αλκοόλης 1Β, το ένζυμο κλειδί για τη μετατροπή αιθανόλης σε ακεταλδεΰδη, μια ουσία που επηρεάζει την επιδιόρθωση του DNA [20]. ADH1B ήταν σημαντικά αυξημένη στις γυναίκες που εκφράζουν miR-BART7 (Εικ. 12Α), ενώ παρέμεινε αμετάβλητη στις γυναίκες που εκφράζουν miR-H25 (Σχ. 12Β). Στήριξη του miR-BART7 προγνωστικά δεδομένα που παρουσιάζονται στο Σχ. 5, οι γυναίκες με υψηλή έκφραση του ADH1B ήταν σχετικά υπερεκπροσωπούνται μεταξύ των ασθενών ανθεκτική ή ανθεκτική σε χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής (Σχ. 12C). Προκειμένου να διερευνήσει τη σχέση ανάμεσα στην έκφραση του miR-BART7 και την αντίσταση στη χημειοθεραπεία, έχουμε επιμολυσμένα Α2780 και Hey κύτταρα (δύο κυτταρικές σειρές σισπλατίνη-ευαίσθητο) με συνθετικό miR-BART7 (10 nM, εικ. 13) ή με ένα ανακατωμένο έλεγχο (SiC ). Αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης επιβεβαιώθηκε με qPCR (Εικ. 13Α). Τα αποτελέσματα του miR-BART7 αξιολογήθηκαν επίσης από την άποψη της επαγωγής ADH1B στο πρωτεϊνικό επίπεδο με την τεχνική της κηλίδα western (Σχ. 13Β). MiR-BART7 παρήγαγε μια σημαντική αύξηση της έκφρασης των ADH1B και στα δύο κυτταρικά μοντέλα. Αύξηση ποσοτικοποιήθηκε με πυκνομετρική ανάλυση σε τρία ανεξάρτητα πειράματα και ήταν 4,5 και 3,2 σε Α2780 και Hey κύτταρα, αντίστοιχα (

ρ

& lt? 0.001 t-test). Μετά από 12 ώρες από την επιμόλυνση, τα κύτταρα επωάστηκαν με σισπλατίνη για 72 ώρες και στη συνέχεια μετρήθηκαν. Προκειμένου να ποσοτικοποιηθούν τα αποτελέσματα θα χρησιμοποιηθούν για την ενεργή περιοχή σισπλατίνη (%) όπως περιγράφεται πρόσφατα από Barretina και Coll. [21]. Η επιμόλυνση με miR-BART7 παρήγαγε μία σημαντική αύξηση στην αντίσταση σισπλατίνη σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχ. 13C και Εικ. 13D). Όπως παρατηρήσει σε ασθενείς στο επίπεδο του γονιδίου, miR-BART7 προκάλεσε μια σημαντική αύξηση της έκφρασης ADH1B στις δύο κυτταρικές σειρές. Επιπλέον, ελέγξαμε την επίδραση της fomepizole, ένα γνωστό ειδικό αναστολέα της δραστικότητας ADH1B [22]. Fomepizole καταργηθεί εντελώς η επίδραση των miR-BART7 σχετικά με την τοξικότητα σισπλατίνης (Σχ. 13Ε, 13F και 13G), αποδεικνύοντας έτσι ότι το miR-BART7 μειώνει την αποτελεσματικότητα της σισπλατίνης με την αύξηση ADH1B δραστηριότητα.

Το δίκτυο miR-BART7 δείχνει 67 γονίδια εμπλέκεται στην ενεργοποίηση των Τ κυττάρων. Κάλυψη του δικτύου στη βάση δεδομένων DAVID είναι 47/67 (70%, μαύροι κύκλοι).

Η

Box-μουστακιού chart γραφική παράσταση που δείχνει την έκφραση της ADH1B σύμφωνα με την έκφραση του miR-BART7 (Α) και miR-H25 (Β). Αστερίσκος υποδεικνύει μια σημαντική υπερέκφραση του ADH1B στο miR-BART7 θετικούς ασθενείς (

σ

= 0,02, t-test), αλλά όχι σε miR-H25 θετικούς ασθενείς. Ανάλυση έκτακτης ανάγκης (C) (μωσαϊκό οικόπεδο) των ασθενών διαχωρισμένες σύμφωνα με το ADH1B έκφρασης (μπλε και το κόκκινο είναι για την υψηλή και χαμηλή έκφραση, αντίστοιχα) και η ευαισθησία στη χημειοθεραπεία (πυρίμαχα, ανθεκτικά και ευαίσθητες κατηγορίες όπως περιγράφεται στο Σχ. 5Α). ADH1B έκφραση είναι σημαντικά υψηλότερη σε πυρίμαχα και ανθεκτικά ασθενείς (

σ

& lt? 0,05, Fisher exact test). Σε σύγκριση με την ευαίσθητη ομάδα (παρόμοια με miR-BART7)

Η

Εκπρόσωπος qPCR ανάλυση Α2780 κύτταρα επιμολυσμένα με ένα συνθετικό miR (10 ηΜ) που αντιστοιχεί στην αλληλουχία του miR-BART7 (πράσινη γραμμή) (Α). Οι έλεγχοι που αντιπροσωπεύεται από κύτταρα κατεργασμένα με μόνο το μέσο επιμόλυνσης (μπλε γραμμή) και μία αλληλουχία δεν στοχεύουν στο ανθρώπινο γονιδίωμα (SiC, κόκκινη γραμμή). Αντιπροσωπευτικά στύπωμα western σε κύτταρα κατεργασμένα όπως στο (Α). Η θεραπεία με το συνθετικό miR-BART7 επαγόμενη την έκφραση ADH1B στο πρωτεϊνικό επίπεδο στις δύο κυτταρικές σειρές. GAPDH χρησίμευσε ως έλεγχος φόρτωσης (Β). Γραμμικό γράφημα δείχνει την επίδραση της σισπλατίνης σε Α2780 (C) και Hey κύτταρα (D) επιμολυσμένα όπως περιγράφεται στο (Α). Γραμμικό γράφημα που δείχνει την επίδραση της σισπλατίνης συν fomepizole (10 μΜ) σε Α2780 (Ε) και Hey κύτταρα (F) επιμολυσμένα όπως περιγράφεται στο (Α). ιστόγραμμα (G) δείχνει την ενεργή περιοχή της σισπλατίνης στο Α2780 και τα κύτταρα Γεια σου. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως στο (D-E). Σισπλατίνη επιδράσεις παρακολουθήθηκαν μετά από 72 ώρες καλλιέργειας με την παρουσία (ή όχι) των fomepizole 10 μΜ. Μπαρ και μπάρες σφάλματος αντιστοιχούν σε μέση και SD δειγμάτων εις τριπλούν πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν. Δίκλινο αστερίσκοι σηματοδοτούν μια σημαντική επίδραση σε ένα

σ

& lt?. 0.001 επίπεδο (t-test)

Η

Συζήτηση

SEOC είναι η πιο θανατηφόρα κακοήθεια γυναικολογικό. Οι ασθενείς θα ωφεληθούν από την αναγνώριση των βιοδεικτών χρήσιμα για τη διάγνωση της πρώιμης (πάνω θεραπεύσιμη) ασθένεια, και από την ανάπτυξη στοχευμένη θεραπεία. Αυτή η μελέτη είναι, εξ όσων γνωρίζουμε, η πρώτη λεπτομερή διερεύνηση του ρόλου της έκφρασης ιικών miRNA στον καρκίνο των ωοθηκών. Πρώτον, δείχνουμε ότι η έκφραση του συνολικού ιικού miRNAs είναι υψηλότερη σε SEOC σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς. Ως μέρος των στρατηγικών που υιοθετούνται από τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών για να ξεφύγουν από την αναγνώριση από το ανοσοποιητικό σύστημα, υπάρχει η αναστολή της ενδογενούς απόκρισης ιντερφερόνης [23], [24], [25]. Η ανεπαρκής απόκριση ιντερφερόνης δημιουργεί ένα κυτταρικό περιβάλλον υποστηρικτικό για ιική ανάπτυξη και αναδιπλασιασμό [8], εξηγώντας έτσι τα αυξημένα επίπεδα ιικού miRNAs σε ιστούς SEOC. Δεδομένου ότι miRNAs είναι ανθεκτικά σε αποικοδόμηση και μπορεί να ανιχνευθεί στο περιφερειακό αίμα [26], υποθέτουμε ότι κυκλοφορούν σύνολο ιικών miRNAs θα είναι υψηλότερη στον πληθυσμό του καρκίνου των ωοθηκών σε σχέση με τους μάρτυρες. Ένας περιορισμός της έρευνάς μας είναι ότι στο σύνολο δεδομένων TCGA δεν υπάρχουν φυσιολογικούς ελέγχους που προέρχονται από ιστούς ωοθήκης. Ωστόσο, πήραμε σε υπόψη τα φυσιολογικά επίπεδα έκφρασης που λαμβάνονται σε ένα μεγάλο πάνελ ιστών. Σε όλους αυτούς τους ιστούς noncancerous δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην έκφραση των ιικών miRNAs. Ως εκ τούτου, θεωρούμε εξαιρετικά απίθανο ότι ωοθηκών φυσιολογικό ιστό για κάποιους λόγους υπάρχει μια αυξημένη έκφραση των ιογενών miRNA.

Δεύτερον, αναφέρουμε ότι δύο επιμέρους ιογενή πράξη miRNAs miR-H25 και miR-BART7, ως ρυθμιστές της SEOC βιολογία. HSV-2 παραγωγική μόλυνση επάγει ένα υψηλό επίπεδο miR-H25 [27] η οποία συσχετίζεται με ένα καλύτερο αποτέλεσμα. Έχουμε τεκμηριώσει αυτή την προφανή προστατευτική επίδραση σε δύο ανεξάρτητες κλινικές ομάδες χρησιμοποιώντας δύο ανεξάρτητες προσεγγίσεις, miRNA-αλληλουχίας (TCGA) και ποσοτική ανοσοφθορισμού (AQUA). AQUA επιτρέπει την ανάλυση κυτταρική υποδιαμέρισμα, και η μέθοδος αυτή αποκαλύπτει ότι η προστατευτική επίδραση του miR-H25 είναι εμφανής μόνο όταν η έκφραση της είναι κυτταροπλασματική (και χαρακτηριστικό της παραγωγικής μόλυνσης HSV-2) και όχι πυρηνικό (υπονοώντας λανθάνουσα λοίμωξη HSV-2). MiR-H25 μπορεί να ασκήσει τα αποτελέσματά της από την πειρατεία επεξεργασία του RNA ξενιστή και προς τα κάτω ρύθμισης της ανθρώπινης miR-143, ένα ισχυρό miRNA στην κυτταρική λειτουργία του ανθρώπου [28]. Πράγματι, παρέχουμε άμεση απόδειξη γι ‘αυτό το φαινόμενο σε κύτταρα επιμολυσμένα με ένα συνθετικό miR-H25. Παρά το γεγονός ότι, η χρήση του ογκολυτικού στελεχών HSV ως θεραπεία για ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών έχει αναφερθεί προηγουμένως [29], [30], [31], η στρατηγική συνεπαγόταν εμβολιασμός με σκοπό τον περιορισμό παραγωγικής μόλυνσης HSV. Οι παρατηρήσεις μας προτείνουν, αντιθέτως, ότι η παραγωγική μόλυνση HSV-2 είναι δυνητικά επωφελείς και θα μπορούσε να αξιοποιηθεί για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας ογκολυτικού στελεχών HSV.

ότι miR-H25 παρέχει ένα εμφανές προστατευτική επίδραση, miR-BART7 συνδέεται με υψηλή πρόωρη θνησιμότητα. Σύμφωνα με πρόσφατα ευρήματα στο καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα [32], δείχνουμε έναν ρόλο για miR-BART7 στην πρόκληση μειωθεί πλατίνα διάστημα χωρίς (ΠΟΣ) σε ένα μικρό υποσύνολο των ασθενών στους οποίους εκφράζεται αυτή η miRNA. μελέτες επιμόλυνση με ένα συνθετικό miR-BART7 παρήγαγε μία σημαντική αύξηση στην σισπλατίνη ανθεκτικά κύτταρα τα οποία είναι πλήρως επανήλθε με τη χρήση fomepizole, ενός γνωστού αναστολέα του ADH1B. Στην ανάλυσή μας, τόσο miR-BART7 και ADH1B είναι αυξημένα σε ασθενείς με ανθεκτική ή ανθεκτικά στη χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής. Η σχέση μεταξύ του miR-BART7 και ADH1B έχει ενδιαφέρον λόγω της έκθεσης της ADH1B ως πιθανή πηγή χημειοαντίσταση στον καρκίνο των ωοθηκών [33]. Fomepizole σήμερα εγκριθεί για τη θεραπεία της μεθανόλης και αιθυλενογλυκόλης δηλητηριάσεων με φαινόμενη εξαιρετικό τοξικολογικό προφίλ [22]. Έτσι, φαίνεται εύλογο ότι, σε ασθενείς με υψηλά επίπεδα miR-BART7, ADH1B αναστολή μπορεί να οδηγήσει σε μια καλύτερη ανταπόκριση στη σισπλατίνη.

Η μελέτη μας είναι η πρώτη έκθεση που δείχνει μια πιθανή συμμετοχή της ιογενούς miRNA ως οδηγοί βιολογία του καρκίνου των ωοθηκών. Μπορούμε να εξηγήσουμε τα ευρήματά μας με τρεις μη αποκλειστική παθογενετικών μοντέλα. Στην πρώτη, ιογενής λοίμωξη συμβαίνει στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών με την ταυτόχρονη παραγωγή ιικών miRNA. Πιστεύουμε ότι αυτή η δυνατότητα απίθανο, για την υψηλή διαφορά στα επίπεδα έκφρασης των ιικών miRNAs σε σύγκριση με την ανθρώπινη miRNA εκφράζονται σε καρκινικά κύτταρα, όπως miR-21. Στη δεύτερη, η μόλυνση λαμβάνει χώρα στο ωοθηκικού ιστού σε στρωματικά κύτταρα όταν είναι γνωστό ότι ο ιός μπορεί να αναπαραχθεί όπως τα Β και νευρικά κύτταρα για EBV και HSV-2, αντίστοιχα. Ένα τρίτο μοντέλο είναι ότι η μόλυνση δεν συμβαίνει στην ωοθηκικού ιστού αλλά σε απομακρυσμένη τοποθεσία και την ιική miRNA λαμβάνονται από τον καρκίνο μέσω της κυκλοφορίας.

Εν κατακλείδι, παρέχουν πειστικές αποδείξεις για το ρόλο των ερπητοϊών κωδικοποιημένων miRNAs σε SEOC. Οι παρατηρήσεις μας ότι το σύνολο των ιικών miRNA και τουλάχιστον δύο ειδικά ιικά miRNAs αυξημένη σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών μπορεί να βοηθήσει στην ανάπτυξη βιολογικών δεικτών του αρχικού σταδίου της νόσου και τη διαμόρφωση νέων αντικαρκινικών στρατηγικών.

Υλικά και Μέθοδοι