Abstract

Μετάσταση εξακολουθεί να είναι μια από τις πιο διαδεδομένες αιτίες που οδηγούν σε κακή μακροπρόθεσμη επιβίωση του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) ασθενείς. Οι κλινικές σημασίες του όγκου μεταστατικών καταστολέα, Ν-myc μειωτικά γονίδιο 1 (NDRG1), έχουν αναφερθεί με ασυνέπεια σε μία ποικιλία καρκινικών νόσων. Σε αυτή τη μελέτη με 240 κλινικά δείγματα CRC, δείξαμε ότι η έκφραση NDRG1 μειώθηκε σημαντικά στους περισσότερους των ιστών CRC σε σύγκριση με τα ζεύγη των ομολόγων μη-όγκου. Η στατιστική ανάλυση έδειξε μια σημαντική αντίστροφη συσχέτιση της έκφρασης NDRG1 με το στάδιο του όγκου, την κατάσταση διαφοροποίησης και μετάσταση. Σε σύγκριση με NDRG1-αρνητική ομάδα, NDRG1-positve ομάδα είχε καλύτερη ελεύθερη νόσου /συνολική επιβίωση (

σ

= 0.000) άνω των 5 ετών παρακολούθησης. Επιπλέον, NDRG1 θεωρήθηκε ως ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση (

σ

= 0,001) και στην επανάληψη (

σ

= 0,003). Η μελέτη μας καταλήγει στο συμπέρασμα ότι NDRG1 είναι μια νέα ευνοϊκή προγνωστικό παράγοντα για την πρόγνωση σε ασθενείς με CRC

Παράθεση:. Μάο Z, Sun J, Feng Β, Ma J, Zang L, Dong F, et al. (2013) Η Καταστολή μετάσταση, Ν-myc μειωτικά Gene 1 (NDRG1), είναι ένας προγνωστικός βιοδεικτών για τα Ανθρώπινα τον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 8 (7): e68206. doi: 10.1371 /journal.pone.0068206

Επιμέλεια: Αντώνης W. Ι Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 4 Μάρ 2013? Αποδεκτές: 28 Μαΐου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Ιουλίου 2013

Copyright: © 2013 Μάο et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε οικονομικά από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC, 30873000). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες παγκοσμίως [1]. Έχει αποδειχθεί ότι στο πρώιμο στάδιο, CRC μπορεί να θεραπευτεί με ελάχιστα επεμβατικές ριζική χειρουργική εκτομή [2]. Ωστόσο, ένα μεγάλο μέρος του πληθυσμού της CRC ασθενής έχει διαγνωστεί σε προχωρημένο στάδιο και συμβατικές επιλογές θεραπείας δεν είναι πλέον διαθέσιμες [3]. Επιπλέον, CRC αντιπροσωπεύει μια επιθετικά επεμβατική και μεταστατικές τύπο όγκου [4] και μεταστατική υποτροπή εξακολουθεί να είναι μια από τις πιο διαδεδομένες αιτίες που οδηγούν σε κακή μακροπρόθεσμη επιβίωση και υψηλό ποσοστό θνησιμότητας [5]. Ως εκ τούτου, η κατανόηση της μοριακής παθογένεσης της υποτροπής του καρκίνου και μετάσταση θα συμβάλει στη βελτίωση των καθεστώτων θεραπεία και πρόγνωση της νόσου για τους ασθενείς CRC

παχέος καρκινογένεση είναι μια πολύπλοκη διαδικασία που περιλαμβάνει πολλές πρωτο-ογκογονίδια και ογκοκατασταλτικά γονίδια [6] -. [9 ]. Εμείς και άλλοι έχουν βρει ότι παρεκκλίνουσα έκφραση ενός νέου καταστολέα μετάστασης, Ν-myc μειωτικά γονίδιο 1 (NDRG1), συμμετείχε στη διαδικασία της ανάπτυξης CRC [9] – [12]. NDRG1 ασκεί τη λειτουργία του μέσω της ρύθμισης των κυρίων οδών σηματοδότησης σε μια μεγάλη ποικιλία τύπων όγκου συμπεριλαμβανομένων CRC [9], [10], [13] – [15]. Παρ ‘όλα αυτά, η ένωση των NDRG1 με την εξέλιξη του καρκίνου έχει αναφερθεί με ασυνεπή παρατηρήσεις. Για παράδειγμα, η έκφραση NDRG1 σε μαστού, του ήπατος, των πνευμόνων και του τραχήλου της μήτρας συσχετίστηκε θετικά με την υποτροπή της νόσου και ήταν ένας φτωχός προγνωστικός δείκτης για την επιβίωση των ασθενών [16] – [20]. Αντιθέτως, η έκφραση NDRG1 σε προστάτη, του παχέος εντέρου και του οισοφάγου όγκοι ήταν ένα ευνοϊκό παράγοντα για την κλινική έκβαση των ασθενών [21] – [23]. Προφανώς, η κλινική ρόλο της NDRG1 σε καρκινικούς νόσος εμφανίζεται σε ένα πλαίσιο-εξαρτώμενο τρόπο.

Οι κλινικές έννοιες και προγνωστικές αξίες της NDRG1 στο CRC δεν έχουν καλά αξιολογηθεί. Παραδοσιακά, το βάθος διήθηση του όγκου, ο αριθμός των μεταστατικών λεμφαδένων, τοποθεσία του όγκου, απομακρυσμένη μετάσταση και την πληρότητα της εκτομής, και τα επίπεδα του καρκινοεμβρυονικού αντιγόνου μετεγχειρητικής ορού (CEA) και το αντιγόνο υδατάνθρακα 19-9 (CA19-9) έχουν χρησιμοποιηθεί ως δείκτες πρόγνωσης, οι οποίες δεν είναι πλήρως αξιόπιστα ακόμη [24]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη νέων προγνωστικούς βιοδείκτες θα είναι σημαντικά για την καθοδήγηση της θεραπείας της CRC. Πρόσφατα, ένας αριθμός των υποτιθέμενων βιοδεικτών έχουν αναπτυχθεί για να προβλέψουμε την απόκριση σε ειδικά επικουρική θεραπεία. Αυτές οι βιοδείκτες περιλαμβάνουν πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων (PCNA), CEA, CA19-9, ρ53, Kirstenrat σάρκωμα-2 ιός ογκογονίδιο (K-ras), αστάθεια μικροδορυφόρου (MSI), αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) και

κλπ

. [25]. Από την κλινική άποψη, προγνωστικές και θεραπευτικές σημασίες τους δεν έχουν πλήρως επικυρωθεί [25]. Σε αυτή τη μελέτη, η έκφραση του NDRG1 και κλινικοπαθολογικών σημασίες του διερευνήθηκαν σε 240 CRC δείγματα και αντιστοιχισμένο ομολόγους μη-όγκου τους. Οι μελέτες μας έδειξαν ότι NDRG1 είναι μια νέα ευνοϊκή βιοδεικτών για τη μακροπρόθεσμη επιβίωση σε ασθενείς με CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς Επιλογή

Οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε λαπαροσκοπική χειρουργική επέμβαση για καρκίνο του παχέος εντέρου ήταν διαδοχικά εγγραφεί από τον Ιανουάριο του 2006 μέχρι τον Δεκέμβριο του 2007. η δίκη είχε εγκριθεί από την Επιτροπή Ερευνών Δεοντολογίας της Ruijin Νοσοκομείο, Jiao Tong της Σαγκάης Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου, και η γραπτή συγκατάθεση λαμβάνεται από όλους τους ασθενείς που συμμετέχουν πριν από αυτή τη μελέτη. Κανένας από τους ασθενείς που συμμετείχαν είχαν γίνει δεκτές προεγχειρητική ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία. Προεγχειρητική σταδιοποίηση του καρκίνου έγινε με ενισχυμένη αξονική τομογραφία. Όλοι οι ασθενείς που συμμετείχαν είναι επιλέξιμοι να αντιμετωπίζεται με λαπαροσκοπική προσέγγιση μετά την προεγχειρητική αξιολόγηση. Όλες οι λαπαροσκοπικές διαδικασίες διεξήχθησαν με τον ίδιο χειρουργική ομάδα. Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις ακολούθησαν ένα πρότυπο D2 λεμφαδένων πρωτόκολλο ανατομή, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Ριζοσπαστικής Λαπαροσκοπική χειρουργική επέμβαση για καρκίνο του παχέος εντέρου (2006), που συστάθηκε από την Ομάδα Μελέτης του Λαπαροσκοπική και Ενδοσκοπική Χειρουργική συνδεδεμένες με κινεζική Medical Association. Όλοι οι ασθενείς CRC που είχαν παθολογικά διαγνωστεί ως σταδίου III-V αποδεκτή επικουρική χημειοθεραπεία μετεγχειρητικά. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν:

in situ

νόσου, παρουσίαση έκτακτης ανάγκης, δείκτη μάζας σώματος (ΔΜΣ) & gt? 35 kg /m

2, Αμερικανική Εταιρεία Αναισθησιολογίας (ASA) ταξινόμηση IV-V, που συνδέονται ασθένεια του γαστρεντερικού ότι απαιτείται εκτεταμένη αξιολόγηση λειτουργική ή επέμβαση, η εγκυμοσύνη ή κακοήθη νόσο τα τελευταία 5 έτη (με εξαίρεση επιφανειακή πλακώδες ή βασικοκυτταρικό καρκίνωμα του δέρματος ή

in situ

καρκίνο του τραχήλου της μήτρας). Η μετεγχειρητική κλινική σταδιοποίηση βασιζόταν στο εγχειρίδιο UICC καρκίνου στάσης (7η έκδοση, 2009), την αξιολόγηση

μέσω

προεγχειρητική ενισχυμένη αξονική τομογραφία, διεγχειρητική ανακαλύψεις μαζί με μετεγχειρητική παθολογική αξιολογήσεων.

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC)

ιστούς όγκων και τα ζεύγη μη καρκινικούς ιστούς που βρίσκονται στο περιθώριο εκτομής συλλέχθηκαν, μονιμοποιήθηκαν με φορμαλδεΰδη και ενσωματωμένα με παραφίνη. χρώση IHC διεξήχθη όπως περιγράφεται προηγουμένως [26]. Μετά διαπερατότητας και αντιγόνου ανάκτηση, οι τομές επωάστηκαν με αντι-NDRG1 αντισώματα (HPA006881, Sigma-Aldrich, St Louis, ΜΟ, USA) στους 4 ° C όλη τη νύκτα, που ακολουθείται από επώαση για 1 h /20 ° C με την υπεροξειδάση αρμορακίας (HRP) δευτερογενές αντίσωμα (Sigma-Aldrich). Οι αρνητικοί έλεγχοι ελήφθησαν με την προσθήκη του αποκλεισμού πεπτιδίου με το πρωτεύον αντίσωμα. Οι τομές μετά πλύθηκαν με TBS και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 2-Solution Kit DAB (Invitrogen, Camarillo, CA, USA) σύμφωνα με τη διαδικασία του κατασκευαστή. Οι ιστοί με αιματοξυλίνη Mayer του.

Η βαθμολόγηση των αποτελεσμάτων IHC χρώσης

Όλα τα τμήματα IHC εξετάστηκαν και βαθμολογήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο φωτός (Olympus, Tokyo, Japan) από έναν παθολόγο και του κύριου ερευνητών. Περιπτώσεις με αντιφατικά αποτελέσματα ήταν αναβαθμολόγηση με τις ίδιες ή πρόσθετες σκόρερ για την απόκτηση συναίνεσης βαθμολογία. NDRG1 βαθμολόγησης έγινε σύμφωνα με την ευρέως χρησιμοποιούμενη γερμανικό σύστημα ημι-ποσοτική βαθμολόγηση, λαμβάνοντας υπόψη την ένταση χρώσης και το ποσοστό των χρωματισμένων κυττάρων όγκου [27], [28]. επίπεδα χρώσης βαθμολογήθηκαν ως 0 (καθόλου χρώση), 1 (ασθενής χρώση), 2 (μέτρια χρώση) και 3 (ισχυρή χρώση), με βάση την ένταση χρώσης στα καρκινικά κύτταρα. Το ποσοστό των προετοιμασμένα κύτταρα όγκου σε κάθε τμήμα μετρήθηκε και τα τμήματα βαθμολογήθηκαν ανάλογα (& lt? 10% = 0, 10-25% = 1, 26-50% = 2, 51-75% = 3, 76-100% = 4). Το τελικό σκορ immunostainning κάθε τμήματος του ιστού του όγκου προσδιορίζεται πολλαπλασιάζοντας τις βαθμολογίες έντασης με τις βαθμολογίες των θετικά χρωματισμένων κυττάρων του όγκου, με την ελάχιστη βαθμολογία των 0 και μέγιστη βαθμολογία των 12. τμήματα όγκου με σκορ 1-4 θεωρήθηκαν ως αρνητικά, ενώ τμήματα του όγκου με σκορ 5-12 θεωρήθηκαν ως θετικές.

πρωτεΐνη Εξόρυξη και Ανοσοστύπωμα

Φρέσκα καρκινικούς ιστούς από 10 ασθενείς CRC (σταδίου III-IV) και τα ζεύγη των ομολόγων μη-όγκου ήταν συγκομίζονται και οι συνολικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν. Τα ανοσοστυπώματα εκτελέσθηκαν σύμφωνα με τα καθιερωμένα πρωτόκολλα [10]. Οι εκφράσεις του NDRG1 και GAPDH αξιολογήθηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα ενάντια NDRG1 (HPA006881, Sigma-Aldrich) και GAPDH (sc-32233? Santa Cruz, CA, USA), που ακολουθείται από επώαση με συζευγμένο με HRP αντι-κουνελιού (A9169) και αντι -mouse (A4416) αντισώματα (Sigma-Aldrich). Τα σήματα χημειοφωταύγειας έγιναν ορατές και κατέλαβε με το Σύστημα bioimaging (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Image Lab ™ Έκδοση λογισμικού 4.0.1 (Bio-Rad). Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές ανεξάρτητα. Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης NDRG1 σε πειράματα τριπλούν ομαλοποιήθηκαν στο επίπεδο του GAPDH.

Μετεγχειρητική Παρακολούθηση Αξιολόγησης

Όλοι οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν μετά την απόρριψή τους από το νοσοκομείο μέχρι την ημερομηνία της 10ης Δεκεμβρίου 2012. οι υποτροπές επιβεβαιώθηκαν κλινικά ή ιστολογικά αν ανιχνεύθηκαν μακρινή μετάσταση, τοποπεριοχική υποτροπή (αύξηση του όγκου περιορίζεται στο αναστόμωση ή την περιοχή της πρωτογενούς λειτουργίας) και τομής μετάσταση. Η διάρκεια από την ημερομηνία λειτουργίας μέχρι την ημερομηνία που υποδεικνύει την τελευταία παρακολούθηση της αξιολόγησης, η αποτυχία της θεραπείας /υποτροπής ή θανάτου καταγράφηκε.

Στατιστική Ανάλυση

Τα στοιχεία συλλέχθηκαν προοπτικά χρησιμοποιώντας μια ηλεκτρονική βάση δεδομένων σύμφωνα με να προ-μελέτης

Ισχύς

υπολογισμού. Ποσοτικά δεδομένα προσβάσιμα μέσω του Student

t-test

. δεδομένα Καταμέτρηση αξιολογήθηκαν με Mann-Whitney, Chi-Square ή την ακριβή δοκιμασία του Fisher, όταν κρίνεται σκόπιμο. Υποτροπής και συνολική επιβίωση αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν με δοκιμασία log-rank. Ανάλυση των προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση εκτελέστηκε και οι μεταβλητές που σχετίζονται με υποτροπή και η επιβίωση χρησιμοποιήθηκαν στη συνέχεια για την πολυμεταβλητή ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο Cox παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων κατά στάδια. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε ως

σ

& lt? 0,05. Όλοι οι υπολογισμοί έγιναν με την έκδοση του πακέτου λογισμικού SPSS 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Δημογραφικά, ανατοιιοπαθολογική και Κλινικής Δεδομένων

Ένα σύνολο 240 ασθενείς εντάχθηκαν στη μελέτη. Η μέση ηλικία της έναρξης της νόσου ήταν 68, με τους περισσότερους ασθενείς κυμαίνονταν σε ηλικία μεταξύ 60 και 80 (61,67%) (Πίνακας 1). Υπήρχαν 132 (55%) άνδρες ασθενείς και 108 (45%) γυναίκες ασθενείς που συμμετέχουν σε αυτή τη μελέτη, με ΔΜΣ 21,6 ± 5,8 kg /m

2 (16,3 – 31,7) (Πίνακας 1). Μεταξύ αυτών των 240 ασθενών, 136 ασθενείς συνενώθηκαν με περιεγχειρητική συννοσηρές νόσο (Πίνακας 1). Επιπλέον, η τοποθεσία του όγκου στον πληθυσμό της μελέτης ήταν επίσης παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

Έρευνες προς μετεγχειρητική δειγμάτων έδειξε ότι η εγγύς περιθώριο εκτομή ήταν 12,3 ± 5,9 cm και το άπω διέκπριση περιθώριο ήταν 10,8 ± 4,1 εκατοστά σε περιπτώσεις καρκίνου του παχέος εντέρου. Σε ορθού περιπτώσεων καρκίνου, το εγγύς περιθώριο εκτομή ήταν 9,1 ± 2,7 cm και το άπω διέκπριση περιθώριο ήταν 5,2 ± 1,9 cm (Πίνακας 2). περιθώρια εκτομή μετρήθηκαν σε φρέσκα δείγματα μετά την επέμβαση χωρίς σταθεροποίηση. Η μετεγχειρητική παθολογική επιβεβαίωση έδειξε ότι δεν υπήρχε περίπτωση με θετικό περιθώριο εκτομή. Επιπλέον, οι λεμφαδένες ανακτήθηκαν από κάθε δείγμα μετά από στερέωση και ο αριθμός των λεμφαδένων ανακτώνται ήταν 14 ± 6 (Πίνακας 2). Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την επίδραση των τυποποιημένων λειτουργικές διαδικασίες σε αυτή τη μελέτη.

Η

Μετεγχειρητική παθολογικές στάσης έγιναν από μια ομάδα έμπειρων παθολόγων. Το μέσο μέγεθος όγκου ήταν 4,6 ± 1,7 cm (1,5 έως 9,0 cm) (Πίνακας 2). Οι όγκοι που ορίζονται ως καλά διαφοροποιημένο σε 26 περιπτώσεις (10,83%), μέτρια διαχωριζόμενες σε 140 περιπτώσεις (58,33%), κακώς διαχωριζόμενες σε 34 περιπτώσεις (14,17%) και βλεννώδες καρκίνωμα σε 40 περιπτώσεις (16,67%) (Πίνακας 2 ). Οι αξιολογήσεις της διήθησης του όγκου (ΡΤ), λεμφαδένα μετάσταση (ΡΝ) και μετάσταση (ΡΜ1) φαίνονται στον Πίνακα 2. Συνολικά, η κλινική σταδιοποίηση TNM έδειξε ότι 30 περιπτώσεις (12,5%) ήταν στο στάδιο Ι, 124 περιπτώσεις (51,67 %) στο στάδιο ΙΙ, 62 περιπτώσεις (25,83%) στη φάση III και 24 περιπτώσεις (10%) στη φάση IV (Πίνακας 2).

Όλοι οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν σύμφωνα με την προτεινόμενη μετεγχειρητική πρωτόκολλο επιτήρησης . Η συνολική διάρκεια παρακολούθησης ήταν 3,8 έως 83,9 μήνες, με μέσο χρόνο παρακολούθησης 67,4 μήνες. Όλων των εγγεγραμμένων ασθενών, 72 περιπτώσεις (30%) επιβεβαιώθηκαν ως μετεγχειρητική υποτροπή (Πίνακας 3). Επιπλέον, το συνολικό ποσοστό θνητότητας ήταν 28,33% (68 περιπτώσεις), στην οποία 66 περιπτώσεις (27,5%) ήταν ογκο-συναφών και δύο θάνατοι προκλήθηκαν από οξεία εγκεφαλική αιμορραγία και αναπνευστική δυσλειτουργία, αντίστοιχα (Πίνακας 3). Σε αυτές τις περιπτώσεις 66, 45 περιπτώσεις (68%) ήταν αρνητικά NDRG1 και 21 περιπτώσεις (32%) ήταν θετικοί NDRG1 (p = 0.000). Δεν υπάρχουν σημαντικές σχέσεις μεταξύ NDRG1 και των κλινικοπαθολογοανατομικές κριτήρια παρατηρήθηκαν σε αυτή την «ομάδα θανάτου» (Πίνακας 4).

Η

Έκφραση NDRG1 μειώθηκε στο CRC ιστοί Συγκρίνοντας στους ιστούς Paired μη-όγκου

έκφραση NDRG1 σε CRC και μη καρκινικούς ιστούς εξετάστηκε με IHC και ανοσοστύπωμα. χρώση IHC έδειξε ότι ήταν κυρίως NDRG1 παρουσιάστηκε στο κυτταρόπλασμα στα κύτταρα CRC και φυσιολογικών κυττάρων στους ιστούς του παχέως ζεύγη μη-όγκου. έκφραση NDRG1 παρατηρήθηκε επίσης στο κυτταρική μεμβράνη (Εικόνα 1). Σε δείγματα CRC, η έκφραση NDRG1 ήταν αρνητική σε 104 περιπτώσεις (43.33%), και τα θετικά σε 136 περιπτώσεις (56,67%). Ωστόσο, στις μη καρκινικούς ιστούς, NDRG1 έδειξε υψηλή έκφραση σε 196 περιπτώσεις (81,67%) και αρνητική έκφραση σε 44 περιπτώσεις (18,33%). Αυτό έδειξε ότι η μείωση ή απώλεια της NDRG1 μπορεί να διευκολύνει την ογκογένεση στο παχύ έντερο.

(Α-Δ) αντιπροσωπευτικά δείγματα με χρώση HE (Α) και αρνητική έκφραση NDRG1 (Β) σε καρκινικό ιστό, καθώς επίσης και χρώση HE ( C) και NDRG1 θετική έκφραση (D) στην ζεύγη μη καρκινικό ιστό. (Ε-Η) Αντιπροσωπευτικά δείγματα με χρώση HE (Ε) και NDRG1 θετική έκφραση (F) σε καρκινικό ιστό, καθώς και ο ίδιος χρώση (G) και NDRG1 θετική έκφραση (H) στην ζεύγη μη καρκινικό ιστό. Τα μαύρα βέλη δείχνουν έκφραση NDRG1 στο κυτταρόπλασμα, ενώ οι κοίλες βέλη δείχνουν NDRG1 έκφρασης στην κυτταρική μεμβράνη. Μεγέθυνσης, 200 ×.

Η

έκφραση NDRG1 αναλύθηκε επίσης με ανοσοαποτύπωση σε 10 CRC όγκους στο στάδιο ΙΙΙ-IV και 10 ζεύγη μη καρκινικούς ιστούς (Σχήμα 2). Σε σύγκριση με το επίπεδο των NDRG1 στους μη καρκινικούς ιστούς, 8 CRC ιστούς έδειξαν σημαντική μείωση του NDRG1 (

ρ

& lt? 0.001-0.01). Μόνο 2 ιστούς CRC εξέφρασε ένα παρόμοιο επίπεδο NDRG1 με αυτή που παρατηρήθηκε στα ζεύγη μη καρκινικούς ιστούς. Συνολικά, τα δεδομένα αυτά υποστηρίζονται περαιτέρω μείωση της έκφρασης NDRG1 σε προχωρημένο ιστούς CRC

C:. Μη καρκινικό ιστό? T: Ιστός όγκου. επίπεδα NDRG1 εκφράστηκαν σε σχέση με τον έλεγχο φόρτωσης, GAPDH. Τα δεδομένα είναι τυπικά 3-5 πειραμάτων και οι τιμές ιστόγραμμα είναι μέσος ± SD. **

σ

& lt? 0,01, ***

σ

& lt?. 0.001, σε σχέση με την αντίστοιχη ομάδα ελέγχου

Η

NDRG1 Έκφραση σε CRC συσχετίζεται με την έκβαση των ασθενών

Δεδομένου ότι η έκφραση του NDRG1 σε ιστούς CRC μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με ότι σε μη καρκινικούς ιστούς, οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης NDRG1 σε CRC και τα κλινικά χαρακτηριστικά αναλύθηκαν και συνοψίζονται στον πίνακα 5. έκφραση NDRG1 ανιχνεύθηκε σε 136/240 (56.67%) περιπτώσεις CRC. έκφραση NDRG1 ήταν αντιστρόφως ανάλογη με Pt (

σ

= 0,013), pn (

σ

= 0,012), PM (

σ

= 0,027), παθολογική διαφοροποίηση (

σ

= 0,042) και το στάδιο των κλινικών ΤΝΜ (

σ

= 0,011) (Πίνακας 5). Τα δεδομένα μας αποκάλυψαν ότι NDRG1 ήταν εντόνως εκφρασμένο σε λιγότερο επιθετικούς όγκους και είχε μια αντίστροφη συσχέτιση με τις καθιερωμένες προγνωστικούς παράγοντες αξιολόγησης. Ως εκ τούτου, NDGR1 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως μια πιθανή ευνοϊκή προγνωστικό βιοδείκτη σε CRC.

Η

επόμενο διερευνήθηκε η συσχέτιση της έκφρασης NDRG1 με την επιβίωση του ασθενούς. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α, το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών σε NDRG1 θετική ομάδα ήταν 82,35%, ενώ στην NDRG1 αρνητική ομάδα, το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5-ετών ήταν 51,92%. Επιπλέον, ο εκτιμώμενος συνολικός χρόνος επιβίωσης ήταν 76,4 ± 2,4 μήνες σε NDRG1 θετική ομάδα και 55,3 ± 4,1 μήνες σε NDRG1 αρνητική ομάδα. Η θετική ομάδα NDRG1 έδειξε σημαντική βελτίωση της συνολικής επιβίωσης σε σύγκριση με την αρνητική ομάδα NDRG1 (

p =

0.000) (Σχήμα 3Α).

(Α) Η συνολική ανάλυση επιβίωσης μεταξύ NDRG1 θετικών και αρνητικών ομάδας έγινε με τη μέθοδο Kaplan-Meier. Η θετική πληθυσμός NDRG1 είχε σημαντική (

σ

= 0.000) καλύτερη συνολική επιβίωση από NDRG1 αρνητικού πληθυσμού. (Β) ανάλυση επιβίωσης χωρίς καρκίνο μεταξύ NDRG1 θετικών και αρνητικών ομάδα έγινε με τη μέθοδο Kaplan-Meier. Η θετική πληθυσμός NDRG1 είχε σημαντική (

σ

= 0.000) καλύτερη καρκίνο του επιβίωση ελεύθερη από NDRG1 αρνητικού πληθυσμού.

Η

Το ποσοστό επιβίωσης χωρίς καρκίνο 5 ετών σε NDRG1 θετική ομάδα ήταν 80,89%. Ωστόσο, αυτό ήταν μόνο 44,23% σε NDRG1 αρνητική ομάδα. Επιπλέον, ο εκτιμώμενος συνολικός χρόνος επιβίωσης ήταν 75,7 ± 2,6 μήνες στην NDRG1 θετική ομάδα και 47,2 ± 4,8 μήνες στην NDRG1 αρνητική ομάδα. Η ομάδα θετικού NDRG1 έδειξε σημαντική καλύτερο ποσοστό επιβίωσης χωρίς καρκίνο συγκριτικά με την αρνητική ομάδα NDRG1 (

p = 0,000

) (Σχήμα 3Β). Έτσι, NDRG1 θα μπορούσε να είναι ένα ιδανικό βιοδείκτη για την επιβίωση και την ανάκτηση ελεύθερη νόσου στο CRC ασθενή.

Έκφραση NDRG1 μπορεί να θεωρηθεί ως παράγοντας κινδύνου για CRC

Ασθενής

Όπως καταδεικνύεται στον Πίνακα 6, μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η παθολογική διαφοροποίηση (

σ

= 0,008), pT

(p

= 0,030), pn (

σ

= 0,001), pM (

p

= 0.000), κλινικό στάδιο (

σ

= 0.001) και NDRG1 έκφρασης (

σ

= 0.000) βρέθηκαν να είναι ανεξάρτητοι παράγοντες κινδύνου για τη συνολική επιβίωση. Το μέγεθος του όγκου (

σ

= 0,044), PT (

σ

= 0,006), pn (

σ

= 0,014), κλινικό στάδιο (

p

= 0.000) και NDRG1 (

σ

= 0.000), θεωρήθηκαν ότι είναι ανεξάρτητοι παράγοντες κινδύνου για υποτροπή.

η

επίσης, πολυπαραγοντική ανάλυση (Πίνακας 7) περαιτέρω έδειξαν ότι pt (

σ

= 0,002), pn (

σ

= 0,007), pM (

σ

= 0,004), κλινικό στάδιο (

σ

= 0,032) και NDRG1 (

σ

= 0.001) ήταν ανεξάρτητοι παράγοντες κινδύνου για τη συνολική επιβίωση. Παρ ‘όλα αυτά, μόνο κλινικό στάδιο (

σ

= 0,021) και NDRG1 (

σ

= 0,003) ήταν οι σημαντικές ανεξάρτητους παράγοντες κινδύνου για υποτροπή. Στο σύνολό τους, NDRG1 είναι ένα πολλά υποσχόμενο ανεξάρτητο βιοδείκτη για την αξιολόγηση υποτροπή της νόσου και την επιβίωση σε ασθενείς με CRC.

Η

Συζήτηση

Παρά τις προόδους σε χειρουργική και μη χειρουργικές θεραπείες για CRC, μετάσταση και η επανάληψη εξακολουθούν να παραμένουν οι μεγάλες προκλήσεις για τους χειρουργούς και τους ογκολόγους [4]. Υποτροπής και μετάσταση αποτελούν την κύρια αιτία θανάτου σε ασθενείς CRC μετά από ριζική χειρουργικές επεμβάσεις [1], [29]. Τα κλινικά διαθέσιμη βιοδείκτες, συμπεριλαμβανομένων των PCNA, CEA, CA19-9, p53, K-ras, MSI και VEGF, έχουν χρησιμοποιηθεί για την έγκαιρη διάγνωση και την παρακολούθηση-ups για μετεγχειρητική υποτροπή και μετάσταση [25]. Παρά το γεγονός ότι αυτοί οι βιοδείκτες μπορούν να παρέχουν χρήσιμες πληροφορίες για την πρόβλεψη της έκβασης των ασθενών, υπάρχει μια έλλειψη καλής γραμμική σχέση με το CRC μετάσταση και ποσοστό υποτροπής [25]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη νέων προγνωστικούς βιοδείκτες με μεγαλύτερη ειδικότητα και ευαισθησία θα επωφεληθούν για τους ασθενείς CRC στη θεραπευτική παρέμβαση.

Τα περισσότερα από τα ανθρώπινα συμπαγών όγκων χαρακτηρίζονται ως υψηλού μεταβολικού ρυθμού, που δραστηριοποιούνται στη μετανάστευση των κυττάρων και την ικανότητα εισβολής και εκτροπή μεταγωγές σηματοδότησης που παίζουν σημαντικό ρόλο στη μετάσταση [30]. Δεδομένων αυτών των χαρακτηριστικών σε κύτταρα όγκου, αυτά τα κύτταρα αναπτύσσονται σε ένα περιβάλλον με έλλειψη οξυγόνου και θρεπτικών ουσιών μέχρι αγγειογένεσης όγκου ή εμφύτευση στο νέο περιβάλλον [31], [32]. Έτσι, τα γονίδια που επάγονται από υποξία, όπως NDRG1 [33], μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση. Εμείς και άλλοι απέδειξαν ότι NDRG1 είναι ένας νέος όγκος μεταστατική καταστολέα σε διαφορετικά κύτταρα όγκου συμπεριλαμβανομένων CRC [9], [10], [12]. Σε αυτή τη μελέτη, η έκφραση του NDRG1 σε δείγματα ασθενών CRC διερευνήθηκε. Δείξαμε ότι η έκφραση NDRG1 ήταν σημαντικά μειωμένη σε ιστούς CRC σε σύγκριση με τα ζεύγη μη καρκινικούς ιστούς, υποστηρίζοντας περαιτέρω μια λειτουργία καταστολής όγκου των NDRG1 σε CRC όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [11], [22]. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν επίσης σε πάγκρεας, προστάτη, μαστού και ιστού οισοφαγικό καρκίνωμα, όπου το mRNA και η πρωτεΐνη NDRG1 επίπεδα ήταν τόσο μειωμένη σε σύγκριση με την κανονική τους ομολόγους [21], [34] – [38]. Αντίθετα, NDRG1 βρέθηκε να εκφράζεται έντονα στο ήπαρ και ο καρκίνος του τραχήλου ιστούς και η έκφραση του συνδέθηκε με αγγειακή εισβολή, μετάσταση, και φτωχή πρόγνωση [13], [16], [17]. Είναι εύλογο ότι ο ρόλος NDRG1 στην πρόοδο του καρκίνου ρυθμίζεται από πιθανές μεταλλάξεις της σε διάφορους καρκινικής νόσου, οδηγώντας σε ένα «απώλεια του κύκλου λειτουργίας» ή από την εγγενή γενετική μηχανισμός των συγκεκριμένων οργάνων.

Αρκετές έρευνες έχουν έχουν αναφερθεί με αναφορά στα λεπτομερή μηχανισμούς NDRG1 στην αναστολή του παχέος μετανάστευση καρκίνος, εισβολή και μετάσταση

in vitro

[9], [10], [12].

NDRG1

mRNA όπως επίσης και η έκφραση της πρωτεΐνης έχουν αναφερθεί ότι υπερ-εκφράζεται σε φυσιολογικό ανθρώπινο κόλον επιθηλιακών ιστών [39]. Επιπλέον, Li και Chen ανέφερε ότι NDRG1 παίζει ζωτικό ρόλο στην καταστολή της μετάστασης όγκου και συχνά σιγήσει σε μεταστατικούς καρκίνους του παχέος εντέρου [12]. Απέδειξαν μια συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης H3S10p ιστόνης και σίγηση του γονιδίου NDRG1 σε καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή SW620, υποδηλώνοντας μια πιθανή μηχανισμό NDRG1 καταστολής κατά τη διάρκεια της μετάστασης του καρκίνου του παχέος εντέρου. Πρόσφατες μελέτες έδειξαν νέες λειτουργίες του NDRG1 στην αναστολή της ΤΟΡ-β επαγόμενη επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) [9] και τη συναρμολόγηση του πολυμερισμού και το άγχος ίνα νηματίου ακτίνης μέσω διαμόρφωσης της οδού ROCK1 /pMLC2 σε κυτταρικές σειρές CRC [10]. Τα ευρήματα αποκάλυψαν πιθανούς μηχανισμούς που διέπουν τη λειτουργία καταστολής όγκου των NDRG1 στο CRC που παρατηρήθηκε σε αυτή τη μελέτη.

Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η μειωμένη έκφραση NDRG1 ήταν ανεξάρτητη δυσμενείς προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση των ασθενών με υψηλό κίνδυνο σταδίου ΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου [ ,,,0],22]. Σε υποστήριξη αυτού, συμπεριλάβαμε 240 CRC δείγματα με διάφορα στάδια ΤΝΜ (Ι-IV) για τη διερεύνηση της κλινικής δυναμικό των NDRG1 μόνος ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας. Σε αυτές τις περιπτώσεις CRC που υποβλήθηκαν σε λαπαροσκοπική διαδικασίες, έκφραση NDRG1 αντιστρόφως ανάλογη με Pt, PN, ρΜ και το στάδιο TNM. Περιέργως, η ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς CRC με όγκους αρνητικούς NDRG1 είχαν σημαντικά χειρότερη πρόγνωση τόσο τη συνολική επιβίωση και τον καρκίνο του επιβίωση ελεύθερη. Ως εκ τούτου, NDRG1 ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας τόσο για τη συνολική επιβίωση και την επανάληψη και την θετικότητα του θα μπορούσε να είναι ένα ευνοϊκό προγνωστικό βιοδείκτη για κλινική εφαρμογή σε ασθενείς CRC. Δεδομένης της σημασίας των άλλων γνωστών βιοδεικτών, συμπεριλαμβανομένων PCNA, K-ras και MSI στο CRC, είναι κλινικής σημασίας να εξετάσει τη σύνδεση των NDRG1 με αυτούς τους βιοδείκτες σε ασθενείς CRC.

Ευχαριστίες

Με ιδιαίτερη χαρά ανακοινώνουμε το Δημοτικό Κέντρο της Σαγκάης για τον έλεγχο των Ασθενειών & amp? Πρόληψη για έρευνες παρακολούθησης των ασθενών. Μπορούμε επίσης ειδικά να ευχαριστήσω τον καθηγητή Qian Zhao και ο Δρ Ying Zheng από τη Σαγκάη Jiao Tong University School of Medicine για τα πολύτιμα σχόλιά και την αναθεώρηση του χειρογράφου τους.