Αφηρημένο

Στόχοι

ΑΕΕΑΠ /DKK-3 ρυθμίζεται προς τα κάτω σε ένα ευρύ φάσμα των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων και θεωρείται ότι λειτουργεί ως καταστολέας των όγκων. Αναφέραμε προηγουμένως ότι ΑΕΕΑΠ /DKK-3 που εκφράζουν φορέα αδενοϊού (Ad-ΑΕΕΑΠ) προκάλεσε ενδοπλασματικό δίκτυο (ER) άγχος και ειδική για τον καρκίνο απόπτωση σε ανθρώπινα καρκίνο του προστάτη. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε τη θεραπευτική επίδραση της Ad-ΑΕΕΑΠ για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC).

Υλικά και Μέθοδοι

Εξετάσαμε την αντικαρκινική δράση του Ad-ΑΕΕΑΠ στις 25 κυτταρικές σειρές NSCLC

in vitro

και κύτταρα Α549

in vivo

. Δύο από αυτές τις κυτταρικές σειρές τεχνητά καθιερωθεί ως αναστολέας της κινάσης EGFR-τυροσίνης (ΤΚΙ) ανθεκτικά sublines.

Αποτελέσματα

Ad-ΑΕΕΑΠ-θεραπεία ανέστειλε τη βιωσιμότητα των κυττάρων κατά 40% ή περισσότερο στο 13 ( 52%) από τις κυτταρικές σειρές 25 κατά πολλαπλότητα μόλυνσης (ΜΟΙ) 20 (20 ΜΟΙ). Αυτές οι κυτταρικές σειρές είχαν θεωρηθεί ως ιδιαίτερα ευαίσθητα κύτταρα. Η κυτταρική βιωσιμότητα μιας μη κακοηθών αθανατοποιημένη κυτταρική γραμμή, OUMS-24, δεν αναστάλθηκε σε 200 ΜΟΙ Ad-ΑΕΕΑΠ. Τα αποτελέσματα της Ad-ΑΕΕΑΠ σε ανθεκτικά EGFR-ΤΚΙ sublines ήταν ισοδύναμες με εκείνες στις γονικές κυτταρικές σειρές. Εδώ, δείξαμε ότι η αγωγή με Ad-ΑΕΕΑΠ ενεργοποιημένο c-Jun Ν-τερματικής κινάσης (JNK) σε κυτταρικές σειρές NSCLC, υποδεικνύοντας την επαγωγή ER στρες με GRP78 /ΒίΡ (GRP78) ρύθμιση προς τα πάνω και προκαλεί απόπτωση. Μία μόνο ένεση εντός του όγκου Ad-ΑΕΕΑΠ ανέστειλε σημαντικά την ογκογόνο αύξηση των κυττάρων Α549

in vivo

. Ως προγνωστικοί παράγοντες της ευαισθησίας για τη θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ στο NSCLC, εξετάσαμε την κατάσταση έκφρασης του GRP78 και ιό coxsackie και αδενοϊό υποδοχέα (CAR). Βρήκαμε ότι ο συνδυασμός των καθεστώτων GRP78 και εκφραστικές αυτοκίνητο μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός παράγοντας για την ευαισθησία Ad-ΑΕΕΑΠ στα κύτταρα NSCLC.

Συμπέρασμα

Ad-ΑΕΕΑΠ ενεργοποίησης που προκαλείται από JNK και την επακόλουθη απόπτωση στα κύτταρα NSCLC. Η μελέτη μας έδειξε ότι Ad-ΑΕΕΑΠ έχει θεραπευτικές δυνατότητες έναντι NSCLC και ότι οι καταστάσεις έκφραση GRP78 και αυτοκινήτων μπορεί να προβλέψει ένα δυνητικό θεραπευτικό όφελος του Ad-ΑΕΕΑΠ

Παράθεση:. Shien K, Tanaka Ν, Watanabe Μ, Soh J, Sakaguchi Μ, Matsuo Κ, et al. (2014) αντικαρκινικές επιδράσεις των ΑΕΕΑΠ /DKK-3-κωδικοποιεί αδενοϊό Vector για τη θεραπεία του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (2): e87900. doi: 10.1371 /journal.pone.0087900

Επιμέλεια: Sumitra Deb, Βιρτζίνια Πανεπιστήμιο της Κοινοπολιτείας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 4 Δεκέμβρη του 2013? Αποδεκτές: 30 Δεκέμβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 3, Φεβρουαρίου του 2014

Copyright: © 2014 Shien et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Δεν υπάρχει τρέχουσα πηγές χρηματοδότησης για τη μελέτη αυτή

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο σε όλο τον κόσμο , και η μεταστατική μορφή είναι ένας σημαντικός παράγοντας που οδηγεί σε θνησιμότητα [1]. Υπάρχουν δύο κύριες ιστολογική υποτύπους καρκίνου του πνεύμονα: μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα. Πρόσφατες εντατικές μελέτες έχουν προσδιορίσει αιτιολογικός μοριακές αλλαγές που οδήγησαν άμεσα με την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών και έχουν βελτιώσει την πρόγνωση των ασθενών [2]. Για παράδειγμα, οι μεταλλάξεις του γονιδίου του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (

EGFR

) βρίσκονται σε περίπου 30% των NSCLCs, ειδικά σε αδενοκαρκινώματα πνεύμονα, και αναστολείς κινάσης EGFR-τυροσίνη (ΤΚΙδ) είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικές σε αυτούς τους όγκους [ ,,,0],3], [4]. Πιο πρόσφατα, crizotinib έχει αποδειχθεί ότι είναι αποτελεσματική για NSCLCs με

EML4-ALK

γονίδιο σύντηξης [5], [6]. Ωστόσο, ο αριθμός των ασθενών με αυτές τις τροποποιήσεις είναι περιορισμένη και μικρή βελτίωση στην πρόγνωση έχει ληφθεί σε NSCLCs χωρίς αυτά τα ευαίσθητα σε φάρμακο αλλοιώσεις. Περαιτέρω, επίκτητη αντοχή εμφανίζεται τελικά στην πλειονότητα των

EGFR

μεταλλαγμένου όγκων, η οποία είχε προηγουμένως ανταποκριθεί σε EGFR-ΤΚΙ, κατά μέσο όρο μετά από 10 μήνες θεραπείας [7]. Έτσι, μια νέα θεραπευτική μέθοδο είναι απαραίτητη για να βελτιωθεί η κλινική έκβαση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα.

ΑΕΕΑΠ /DKK-3, ένα μέλος της οικογένειας γονιδίων Dickkopf (DKK), αρχικά βρέθηκε στα αθάνατα κύτταρα και έχει έχουν αναφερθεί ότι είναι ένας καταστολέας όγκου? η έκφρασή του είναι σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται σε ένα ευρύ φάσμα καρκινικών κυτταρικών τύπων, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του πνεύμονα [8]. Ο θερμικός χάρτης εικόνα του αγγελιοφόρου RNA (mRNA) έκφραση του

ΑΕΕΑΠ /DKK-3

γονίδιο από το Cancer Genome UCSC Αναζήτηση, η οποία είναι ελεύθερα διαθέσιμη δημόσια βάση δεδομένων (https://genome-cancer.ucsc.edu/) (εμείς κατεβάσει τα δεδομένα στις 16 Ιουλίου 2013), έδειξαν ότι το

ΑΕΕΑΠ /DKK-3 έκφραση

γονιδίου μειώθηκε σε πλειονότητα των εξεταζόμενων δειγμάτων και των δύο αδενοκαρκινώματα πνεύμονα και καρκινώματα πλακωδών κυττάρων σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς πνεύμονα (Σχήμα S1) . Επιπλέον, θα μπορούσε να επιβεβαιωθεί από μια δημόσια βάση δεδομένων που έκφραση του

ΑΕΕΑΠ /DKK-3

ήταν επίσης χαμηλή σε πολλές NSCLC κυτταρικές σειρές (έκφραση γονιδίων Omnibus αποθετήριο [http: //www.ncbi.nlm.nih .gov /geo, GEO ένταξη GSE4824]). Α.Ε.Ε.Α.Π. /DKK-3 είναι γνωστό ότι παρεμβαίνει με σηματοδότηση Wnt μέσω υποδοχέων Wnt [9], [10] και προηγουμένως αναφερθεί ότι παίζει ένα ξεχωριστό ρόλο στην επαγωγή της απόπτωσης και την αναστολή της μετάστασης [11], [12]. Η επαγωγή της απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα οφείλεται κυρίως σε ενδοπλασματικό δίκτυο (ER) στρες που προκαλείται από την υπερπαραγωγή του ΑΕΕΑΠ /DKK-3 στα κύτταρα. ER στρες προκαλεί την ενεργοποίηση του c-Jun Ν-τερματικής κινάσης (JNK), που είναι ένα κρίσιμο γεγονός στην απόπτωση που επάγεται από την υπερπαραγωγή ΑΕΕΑΠ /DKK-3 με τη χρήση ενός φορέα αδενοϊού (Ad-ΑΕΕΑΠ) [11], [13] . Σε προηγούμενες μελέτες μας, βρήκαμε ότι Ad-ΑΕΕΑΠ είχαν θεραπευτική δράση σε διάφορους τύπους ανθρώπινου καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του προστάτη, των όρχεων, του υπεζωκότα και καρκινώματα του μαστού [11], [13] – [15]. μόλυνση Ad-ΑΕΕΑΠ και πρωτεΐνη ΑΕΕΑΠ /DKK-3 είναι επίσης γνωστό ότι πλειορύθμιση της ανοσοποιητικού συστήματος κατά του όγκου [16]. Βάσει των προκλινικών δεδομένων, μια κλινική δοκιμή με τη χρήση του Ad-ΑΕΕΑΠ για την ανθρώπινη καρκίνο του προστάτη έχει σε εξέλιξη στην Ιαπωνία και τις ΗΠΑ (NCT01197209).

Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε το θεραπευτικό αποτέλεσμα των Ad-ΑΕΕΑΠ σε κύτταρα NSCLC

in vitro

και

in vivo

. Εξετάσαμε, επίσης, παράγοντες που σχετίζονται με την ευαισθησία των κυτταρικών σειρών σε Ad-Α.Ε.Ε.Α.Π. ως ένα βήμα προς την ανάπτυξη εξατομικευμένων θεραπειών Ad-ΑΕΕΑΠ για τους ασθενείς με NSCLC.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την επιτροπή των ζώων Φροντίδα και Χρήση του Πανεπιστημίου Okayama (Αριθμός Άδειας: OKU-2012-549). Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις διεξήχθη υπό κεταμίνη και ξυλαζίνη αναισθησία, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Οι κυτταρικές σειρές

κυτταρικές σειρές Δεκαέξι αδενοκαρκινώματος ανθρώπινου πνεύμονα, 3 πλακώδες καρκίνωμα, 3 μεγάλα καρκίνωμα , 1 αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, 2 EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτική υποσειρές από HCC827 και PC-9 κύτταρα (HCC827-GR-HIGH2 και RPC-9), η ανθρώπινη μεσοθηλίωμα κυτταρική γραμμή MSTO-211H (211H), και το φυσιολογικό κύτταρο ανθρώπινων ινοβλαστών γραμμή OUMS-24 χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη (Πίνακας 1). Οι λεπτομέρειες των κυτταρικών σειρών που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη που περιγράφεται στη Μέθοδο S1. Οι κυτταρικές γραμμές RPC-9 HCC827-GR-HIGH2 και καθιερώθηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [17], [18]. OUMS-24 ιδρύθηκε στο ίδρυμά μας [19].

Η

διάνυσμα αδενοϊό που μεταφέρουν ΑΕΕΑΠ /DKK-3

ΑΕΕΑΠ /DKK-3 υπερεκφράζεται χρησιμοποιώντας ένα αδενοϊό (Ad-ΑΕΕΑΠ) ότι έχουμε παράγονται προηγουμένως [11]. Ένα πλήρους μήκους cDNA του ΑΕΕΑΠ /DKK-3 ενσωματώθηκε σε ένα φορέα κοσμιδίου pAxCAwt και μεταφέρεται σε έναν φορέα αδενοϊού με τη μέθοδο COS-TPC (Takara Bio, Shiga, Japan). Ένας φορέας αδενοϊού που φέρει το γονίδιο LacZ (Ad-LacZ) χρησιμοποιήθηκε επίσης ως έλεγχος [11].

Κυτταρική βιωσιμότητα

δοκιμασία

Τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 1,5 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο σε 48 ώρες μετά τη μόλυνση με Ad-LacZ ή Ad-Α.Ε.Ε.Α.Π. σε πολλαπλότητα μόλυνσης (ΜΟΙ) 20, 100, ή 200 ΜΟΙ. Η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε 3 ημέρες αργότερα με τη χρήση μίας ανιχνεύσεως MTS με Αντιδραστήριο CellTiter 96 Υδατικό One Solution (Promega, Madison, WI).

Προσδιορισμός απόπτωσης

Για να εξεταστεί η

in vitro

επαγωγή της απόπτωσης μετά από την επεξεργασία, μπορούμε εμβολιάζονται τα κύτταρα σε πλάκες 6-φρεατίων και τα επωάστηκαν για 24 ώρες. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Ad-LacZ ή Ad-ΑΕΕΑΠ στους 20 ΜΟΙ σε μέσο άνευ ορού (500 μL) για 2 ώρες? Το μέσο στη συνέχεια ανταλλάσσεται με νέο πλήρες μέσο (2 mL). Μετά από επιπλέον 48 ώρες επώασης, χρωστική Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ) προστέθηκε στο μέσο σε μια συγκέντρωση 2 μg /mL, και τα κύτταρα επωάστηκαν στο σκοτάδι για 10 λεπτά. Hoechst 33342 είναι μια χρωστική παρεμβολής που επιτρέπει τον προσδιορισμό των μεταβολών στη συνολική ποσότητα της χρωματίνης και τον βαθμό συμπύκνωσης χρωματίνης [15]. Χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φθορισμού, εντοπίσαμε αποπτωτικά κύτταρα από την παρουσία υψηλά συμπυκνωμένη ή κατακερματισμένη πυρήνες. Αποπτωτικά κύτταρα μετρήθηκαν σε 5 διαφορετικούς τομείς κάτω από μικροσκοπική παρατήρηση.

ανάλυση Western blot

Το λεπτομερές πρωτόκολλο για την ανάλυση κηλίδος Western περιγράφεται στη Μέθοδο S1. Ήταν εκτελείται υπό συμβατικές συνθήκες χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα αντισώματα: αντι-ανθρώπινο ΑΕΕΑΠ /DKK-3 αντίσωμα κουνελιού που εγείρεται στο εργαστήριο μας [11]? αντι-ανθρώπινο GRP78 κουνέλι /ΒίΡ (GRP78) (ab21685? Abcam, Cambridge, ΜΑ)? κουνελιού αντι-ανθρώπου SAPK /JNK (# 9252) και κουνελιού αντι-ανθρώπινης φωσφο-SAPK /JNK (Thr183 /Tyr185? # 9251) (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ)? αντι-ανθρώπινο ιό Coxsackie και αδενοϊού υποδοχέα κουνελιού (CAR) (HPA030411? Atlas αντισώματα, Στοκχόλμη, Σουηδία)? και αντι-ακτίνης ποντικού (MAB1501? Millipore, Billerica, ΜΑ). Τα ακόλουθα δευτερεύοντα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: κατσίκας αντι-κουνελιού ή αντι-ποντικού IgG συζευγμένο με υπεροξειδάση (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Για να ανιχνευθούν τα ειδικά σήματα, οι μεμβράνες εξετάστηκαν με τη χρήση ECL συν Western Blotting Αντιδραστηρίων Ανίχνευσης (Amersham Biosciences UK Limited, Buckinghamshire, UK). Επιπλέον, οι εντάσεις ταινιών για GRP78, CAR, και ακτίνης, που αντιπροσωπεύουν τα επίπεδα έκφρασης τους, μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageQuant TL (GE Healthcare Bioscience) και ποσοτικοποιήθηκε με GRP78 ή αναλογία CAR /ακτίνης.

Η ανάπτυξη του όγκου ποσοτικού προσδιορισμού vivo

Α549 κύτταρα (5 × 10

6 σε 50 μλ αλατόνερου ρυθμισμένου με φωσφορικό [PBS]) αναμιγνύονται με 50 μι Matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA) εγχύθηκαν υποδορίως στην δεξιά πλευρά ενήλικων θηλυκών BALB /c ηυ /ηυ ποντίκια (CLEA Japan, Tokyo, Japan). Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον εμπειρικό τύπο V = 1/2 × [(η μικρότερη διάμετρος)

2 × (η μακρύτερη διάμετρος)]. Όταν οι όγκοι είχαν φθάσει περίπου 50-100 mm

3, τα ποντίκια (η = 15) χωρίστηκαν τυχαία σε 3 ομάδες αγωγής: (α) PBS? (Β) Ad-LacZ? και (γ) Ad-ΑΕΕΑΠ. Ιοί (1 × 10

9 pfu) σε 100 μΐ μέσου χωρίς ορό χορηγήθηκαν εντός του όγκου. Στο τέλος των πειραμάτων, τα ποντίκια θυσιάστηκαν μετά από 24-ημέρες μετά την ιική ένεση και οι όγκοι συλλέχθηκαν, μετρήθηκαν και φωτογραφήθηκαν.

Στατιστικές αναλύσεις

Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας STATA ver.12 (STATA Corp., College Station, TX). ακριβής δοκιμασία του Fisher εφαρμόστηκε κατά περίπτωση. Για τη σύγκριση της επαγωγής της απόπτωσης μεταξύ του Ad-ΑΕΕΑΠ επεξεργασμένο και Ad-LacZ-επεξεργασμένα κύτταρα Α549, ένα στατιστικά Cochran-Mantel-Haenszel εφαρμόστηκε για τη σύγκριση. Επαναλαμβανόμενες μετρήσεις ANOVA εφαρμόστηκε για τη σύγκριση των ξενομεταμοσχευμένων μεγέθη του όγκου NSCLC μεταξύ PBS, Ad-LacZ και Ad-ΑΕΕΑΠ.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων.

Αποτελέσματα

Επίδραση του Ad-ΑΕΕΑΠ σε NSCLC κυτταρικές σειρές

Εξετάσαμε την αναστολή της βιωσιμότητας των κυττάρων χρησιμοποιώντας Ad-ΑΕΕΑΠ και μια δοκιμασία MTS . Σε 13 (52%) του 25 κυτταρικών σειρών NSCLC, θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ στους 20 ΜΟΙ ανέστειλε την βιωσιμότητα των κυττάρων (40% -60% αναστολή), σε σύγκριση με τη θεραπεία Ad-LacZ (Πίνακας 1, Εικόνα 1). Αυτές οι κυτταρικές σειρές είχαν θεωρηθεί ως ιδιαίτερα ευαίσθητος σε Ad-ΑΕΕΑΠ. Σε αντίθεση, 12 κυτταρικές γραμμές (48%) δεν ανεστάλησαν από κατεργασία Ad-ΑΕΕΑΠ στους 20 ΜΟΙ και θεωρήθηκαν ως ανθεκτικά κύτταρα. OUMS-24 δεν αναστάλθηκε σε 20 ή 200 ΜΟΙ Ad-ΑΕΕΑΠ. Αξίζει να σημειωθεί, Ad-Α.Ε.Ε.Α.Π κατεργασία στους 100 και 200 ​​ΜΟΙ βελτίωσε την αναστολή της βιωσιμότητας των κυττάρων (100 ΜΟΙ: 15% -59% αναστολή, 200 ΜΟΙ: 40% -78% αναστολή), σε σύγκριση με τη θεραπεία Ad-LacZ (Πίνακας 1) . Έτσι, ορίσαμε 20 ΜΟΙ ως χαμηλή τιμή MOI και 200 ​​ΜΟΙ ως υψηλής αξίας MOI. Για σύγκριση, η θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ διεξήχθη επίσης στην 211H ανθρώπινη μεσοθηλίωμα κυτταρική γραμμή, την οποία προηγουμένως αναφερθεί ότι είναι Ad-ΑΕΕΑΠ ευαίσθητη [14]. Το 211H δεν αναστάλθηκε σε 20 ΜΟΙ αλλά αναστάλθηκε σε 200 ΜΟΙ Ad-ΑΕΕΑΠ (Πίνακας 1). Τα γνωστά μοριακά χαρακτηριστικά της κάθε κυτταρικής σειράς παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Οι 25 κυτταρικές γραμμές με NSCLC αποτελείτο από 8

EGFR

μεταλλαγμένου, 6

KRAS

μεταλλαγμένου, 1

HER4

μεταλλαγμένου, 1

NRAS

μεταλλαγμένου, 1

PIK3CA

μεταλλαγμένου, 1

EML4-ALK

σύντηξης, 1

HER2

-amplified, και 6 κυτταρικές σειρές χωρίς γονίδιο αλλαγές που παρατίθενται. Εννέα από τα 17

EGFR

κυτταρικές σειρές -wild τύπου ήταν ευαίσθητα στην Ad-ΑΕΕΑΠ. HCC827 και ανθεκτική υπογραμμή της, HCC827-GR-HIGH2, έδειξε ένα παρόμοιο βαθμό ευαισθησίας σε Ad-ΑΕΕΑΠ. Αριθ τάση στο μοριακό γονότυπο παρατηρήθηκε μεταξύ των ευαίσθητων και μη ευαίσθητων κυτταρικών γραμμών. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η επίδραση της Ad-ΑΕΕΑΠ δεν εξαρτάται από ένα γνωστό μοριακό γονότυπο.

Τα ποσοστά αναστολής των 25 κυτταρικών σειρών NSCLC επιμολυσμένα με Ad-ΑΕΕΑΠ σε σύγκριση με το Ad-LacZ εμφανίζεται ως μαύρη γραμμή στο 20 MOI και λευκή γραμμή σε 200 ΜΟΙ. Τα δεκατρία κυτταρικές σειρές με ποσοστό αναστολής πάνω από 40% σε 20 ΜΟΙ ορίζεται ως εξαιρετικά ευαίσθητη και 12 κυτταρικές σειρές με χαμηλότερο ποσοστό αναστολής σε 20 ΜΟΙ ορίζεται ως ανθεκτική. Όλες οι ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές δείχνει πάνω ρυθμός αναστολής του 40% σε 200 ΜΟΙ. Οι κυτταρικές γραμμές ταξινομούνται σε 3 κατηγορίες με βάση το επίπεδο έκφρασης GRP και πρωτεΐνη CAR ως εξής? κατηγορίας Α (χαμηλή GRP /υψηλή CAR), κατηγορία Β (χαμηλή GRP /χαμηλό αυτοκίνητο ή υψηλή GRP /υψηλή CAR), κατηγορία Γ (υψηλής GRP /χαμηλή CAR). Όλα τα 8 εξαιρετικά ευαίσθητα κυτταρικές γραμμές που περιλαμβάνονται στην κατηγορία Α, και όλοι οι 5 ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές που περιλαμβάνονται στην κατηγορία Γ Sq? πλακώδες καρκίνωμα, AD? αδενοκαρκίνωμα, LC? καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου, ADSQ? αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, ΜΜ? κακόηθες μεσοθηλίωμα, NHF? φυσιολογικό ανθρώπινο ινοβλαστών.

Η

Hoechst χρώση 33342 εκτελέσθηκε σε κύτταρα Α549 να εξετάσει την επαγωγή απόπτωσης. Τα αποπτωτικά κύτταρα παρατηρήθηκαν σε Ad-ΑΕΕΑΠ επεξεργασμένα κύτταρα Α549 (Σχήμα 2α). Ο μέσος ρυθμός της απόπτωσης ήταν 22%, και ήταν σημαντικά (ρ & lt? 0,001 με δοκιμή Cochran-Mantel-Haenszel). Αυξήθηκε σε σύγκριση με τον έλεγχο της θεραπείας Ad-LacZ

(α) Επαγωγή της απόπτωσης μετά

in vitro

Ad-ΑΕΕΑΠ μεταχείριση εξετάζονται σε κύτταρα Α549 χρησιμοποιώντας Hoechst χρώση 33342. Το άνω πάνελ δείχνει την εμφάνιση των αποπτωτικών κυττάρων μετά από θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ. Το κάτω πάνελ δείχνει την αποπτωτική ποσοστό των κυττάρων Α549 μετά την ενδεικνυόμενη θεραπεία. Ένα σύνολο από 5 διαφορετικά πεδία εξετάστηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο για να καθορίσει την αποπτωτική ρυθμό. Μια σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε (* p & lt? 0.001) μεταξύ του Ad-LacZ και τη θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ. (Bar: 100 μm) (β) ανάλυση κηλίδας Western για πρωτεΐνες που εμπλέκονται στη μεταγωγή σήματος ενεργοποιείται από Ad-ΑΕΕΑΠ. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν στις 48 ώρες μετά την επιμόλυνση με Ad-LacZ ή Ad-ΑΕΕΑΠ στους 20 ΜΟΙ. (Γ) Η460 κύτταρα, τα οποία είναι ανθεκτικά σε μεταγωγή αδενοϊό, συλλέχθηκαν στις 48 ώρες μετά την επιμόλυνση με Ad-LacZ ή Ad-ΑΕΕΑΠ στα 20, 100, και 200 ​​ΜΟΙ.

Η

Η επίδραση του ανασυνδυασμένου Α.Ε.Ε.Α.Π. πρωτεΐνη /DKK-3 σε κυτταρικές σειρές NSCLC εξετάστηκε σε 7 τυχαία επιλεγμένα κυτταρικές σειρές (NCI-Η522, ΝΟΙ-H611, ΝΟΙ-Η1299, ΝΟΙ-H1819, ΝΟΙ-Η2009, PC-9, και Α549). Η δοκιμασία MTS έδειξε ότι ΑΕΕΑΠ /DKK-3 πρωτεΐνη δεν επηρέασε την κυτταρική βιωσιμότητα στις εξετασθείσες κυτταρικές γραμμές όταν χορηγείται σε συγκέντρωση που κυμαίνεται από 1 έως 200 μg /mL (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Έκφραση GRP78 και CAR στην ανταπόκριση στη θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ

ως προγνωστικοί παράγοντες της ευαισθησίας Ad-ΑΕΕΑΠ στο NSCLC, εξετάσαμε τις εκφράσεις του GRP78 και CAR? Αυτές οι καταστάσεις έκφρασης συσχετίστηκε με την αναστολή της βιωσιμότητας των κυττάρων με Ad-ΑΕΕΑΠ σε 13 κυτταρικές γραμμές. Μια προηγούμενη μελέτη ανέφερε ότι η υπερέκφραση του GRP78 ανέστειλε ER-στρες, το οποίο μπορεί να συσχετισθεί αντίθετα με την επίδραση της Ad-ΑΕΕΑΠ. έκφραση CAR είναι σφικτά συνδεδεμένες με την αποτελεσματικότητα της μόλυνσης αδενοϊού, η οποία μπορεί να συσχετισθεί θετικά με την επίδραση του Ad-ΑΕΕΑΠ. Κηλίδωση Western Διεξήχθη, και το επίπεδο έκφρασης ποσοτικοποιήθηκε όπως φαίνεται στον Πίνακα 1 και στο Σχήμα 1. Η μέση (εύρος) του GRP78 και εκφράσεις CAR ήταν 0,24 (0,075 έως 0,98) και 0,60 (0,080 έως 2,1), αντίστοιχα. Με βάση αυτά τα δεδομένα, τα κύτταρα με ένα επίπεδο έκφρασης GRP78 περισσότερο από 0,25 ορίστηκαν ως έκφραση High CRP78, ενώ εκείνοι με ένα GRP78 λιγότερο από 0,24 ορίστηκαν ως έκφραση Low GRP78. Όσον αφορά το CAR, 15 κυτταρικές σειρές σημαντικά υψηλό επίπεδο έκφρασης CAR (πάνω από 0,50) ορίστηκαν έκφραση ως Ύπατος CAR, ενώ το 10 κυτταρικές σειρές εκείνες με σημαντικά χαμηλό επίπεδο έκφρασης CAR (κάτω από 0,20) ορίστηκαν έκφρασης όπως Χαμηλή CAR. έκφραση GRP78 ήταν χαμηλή σε 8 από τα 13 Ad-ΑΕΕΑΠ-ευαίσθητα κύτταρα (62%) και σε 4 από τις 12 Ad-ΑΕΕΑΠ-ανθεκτικά κύτταρα (33%). έκφραση CAR ήταν υψηλή σε 12 από τα 13 Ad-ΑΕΕΑΠ-ευαίσθητα κύτταρα (92%) και σε 3 από τις 12 Ad-ΑΕΕΑΠ-ανθεκτικά κύτταρα (25%).

Στη συνέχεια, θα κατατάσσονται οι κυτταρικές σειρές σε τρεις κατηγορίες με βάση τις καταστάσεις GRP78 και έκφραση CAR? κύτταρα με έκφραση /High ΑΥΤΟΚΙΝΗΤΩΝ Χαμηλή GRP78 είχαν ταξινομηθεί στην κατηγορία Α, τα άτομα με χαμηλό GRP78 /Χαμηλή αυτοκίνητο ή έκφραση /Υψηλή αυτοκίνητο υψηλών GRP78 είχαν ταξινομηθεί ως κατηγορίας Β, και εκείνοι με την έκφραση /Χαμηλή αυτοκίνητο υψηλών GRP78 είχαν ταξινομηθεί στην κατηγορία C. τα υψηλά ποσοστά ευαίσθητο κυττάρων ήταν 100% στην κατηγορία Α (8 από 8, 95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI]: 63-100), το 42% στην κατηγορία Β (5 από 12, 95% CI: 15 – 72), και 0% στην κατηγορία C (0 από 5, 95% CI: 0-52) (Πίνακας 2). Οι κατηγορίες σχετίζονταν σημαντικά με την ευαισθησία στη θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ (p & lt? 0,01).

Η

JNK και την έκφραση GRP78 σε κυτταρικές σειρές NSCLC αγωγή με Ad-ΑΕΕΑΠ

Μια western αποτύπωση ανάλυση έδειξε τη σημαντική έκφραση της ΑΕΕΑΠ /DKK-3 πρωτεΐνης σε 14 κυτταρικές σειρές NSCLC αγωγή με Ad-ΑΕΕΑΠ. Σε 9 κυτταρικές σειρές που έχουν μολυνθεί με 20 ΜΟΙ, θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ είχε ως αποτέλεσμα την φωσφορυλίωση της JNK και την ρύθμιση προς τα πάνω του GRP78 (Σχήμα 2β). Στις άλλες 8 κυτταρικές γραμμές, οι οποίες ήταν σχετικά ανθεκτικά στην Ad-ΑΕΕΑΠ, την ενεργοποίηση των JNK και GRP78 παρατηρήθηκαν σε υψηλότερες τιμές ΜΟΙ (100 και 200 ​​ΜΟΙ) (Σχήμα 2c).

Επίδραση του Ad-ΑΕΕΑΠ για NSCLC όγκων σε ένα μοντέλο ξενομεταμόσχευσης

Ερευνήσαμε την επίδραση των Ad-ΑΕΕΑΠ για την ανάπτυξη των κυττάρων Α549

in vivo

. Μία εβδομάδα μετά τη μεταμόσχευση, όταν ο όγκος του όγκου έφθασε 50 έως 100 mm

3, 1 × 10

9 μονάδες σχηματισμού πλάκας του Ad-ΑΕΕΑΠ ή Ad-LacZ σε 100 μL PBS ή 100 μΙ μόνο PBS είχαν ένεση εντός του όγκου. Οι όγκοι αναπτύχθηκαν προοδευτικά στις ομάδες θεραπείας PBS και Ad-LacZ κατά την επόμενη περίοδο παρατήρησης 24 ημερών. Αντίθετα, η ανάπτυξη του όγκου στην ομάδα αγωγής Ad-ΑΕΕΑΠ ήταν σημαντικά (ρ & lt? 0.001 με επαναλαμβανόμενη μέτρηση ANOVA). Καταστέλλεται κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης (Σχήμα 3α, β)

(α) Ο μέσος όγκος του υποδόρια ξενομοσχεύματος όγκων υπολογίστηκε για 5 ποντίκια σε κάθε ομάδα. Μια σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ των αποτελεσμάτων των Ad-ΑΕΕΑΠ και θεραπεία Ad-LacZ (* ρ & lt? 0,001 από την επανειλημμένη μέτρηση του ANOVA). (Β) Η εμφάνιση των όγκων κατά τη στιγμή της θυσίας μετά τη θεραπεία με PBS, Ad-LacZ και Ad-ΑΕΕΑΠ.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι ad-ΑΕΕΑΠ ήταν άμεσα αποτελεσματική σε περισσότερες από τις μισές από τις κυτταρικές σειρές NSCLC που εξετάστηκαν, ανεξάρτητα από γνωστές τροποποιήσεις του οδηγού, όπως

EGFR

και

KRAS

μεταλλάξεις. Ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος σε ζώα έδειξαν επίσης το θεραπευτικό αποτέλεσμα των Ad-ΑΕΕΑΠ. Το αποτέλεσμα κατά του όγκου του Ad-ΑΕΕΑΠ εξαρτάται από την ενεργοποίηση ER-στρες μεσολάβηση ΙΝΚ φορτωθεί από την υπερπαραγωγή ΑΕΕΑΠ /DKK-3 πρωτεΐνης, με αποτέλεσμα την επαγωγή της απόπτωσης [14], [20]. Η ενεργοποίηση της JNK, η οποία αποτελεί ουσιαστικό βήμα για την επαγωγή του ER στρες και απόπτωσης με Ad-ΑΕΕΑΠ, παρατηρήθηκε στους 20 ΜΟΙ σε κυτταρικές σειρές NSCLC. Από την άλλη πλευρά, η αντικαρκινική δράση της ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης ΑΕΕΑΠ /DKK-3 δεν παρατηρήθηκε, όπως και σε άλλες μορφές καρκίνου που είχαν προηγουμένως εξετάστηκαν. Αρχικά, Α.Ε.Ε.Α.Π /DKK-3 αναγνωρίστηκε ως εκκριτική πρωτεΐνη και θεωρήθηκε για να ασκήσει μια φυσιολογική λειτουργία, αλλά υποδοχέα στην κυτταρική επιφάνεια και το ρόλο της ως εκκριτική πρωτεΐνη δεν έχουν εντοπιστεί.

Ορίσαμε 20 ΜΟΙ όπως μια χαμηλή τιμή ΜΟΙ και 200 ​​ΜΟΙ ως υψηλής αξίας MOI, επειδή τα φυσιολογικά ανθρώπινα κυτταρική γραμμή ινοβλαστών OUMS-24 δεν αναστάλθηκε σε 20 ή 200 ΜΟΙ Ad-ΑΕΕΑΠ, ενώ κακοήθεις κυτταρικές σειρές ανεστάλησαν όταν η τιμή ΜΟΙ ανυψώθηκε σε 100 και 200 MOI σε κυτταρικές σειρές στις οποίες Ad-ΑΕΕΑΠ ήταν αναποτελεσματική σε 20 ΜΟΙ. Στο NSCLC, Ad-Α.Ε.Ε.Α.Π ήταν αποτελεσματική σε χαμηλή τιμή MOI σε περισσότερες από τις μισές από τις κυτταρικές σειρές που ελέγχθηκαν. Λαμβάνοντας υπόψη το αποτέλεσμα 211H ανεστάλη μόνο σε μια υψηλή τιμή MOI, Ad-ΑΕΕΑΠ μπορεί να είναι πιο αποτελεσματική σε NSCLC από ό, τι στο μεσοθηλίωμα.

Κατά την επιλογή ασθενών με βάση τα μοριακά χαρακτηριστικά των καρκινικών κυττάρων είναι ένα σημαντικό θέμα για τη μεγιστοποίηση της θεραπευτικό όφελος και ελαχιστοποίηση των δυσμενών επιπτώσεων. Για το σκοπό αυτό, εστιάσαμε στα επίπεδα έκφρασης GRP78 και έκφραση CAR. GRP78 είναι ένα μέλος της οικογένειας Hsp70, το οποίο χρησιμεύει ως ρυθμιστής ER στρες-σηματοδότηση [21]. Μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η υπερέκφραση του GRP78 ανατίθενται αντίσταση σε μία ευρεία ποικιλία χημειοθεραπευτικών παραγόντων σε διάφορα είδη κυττάρων [22]. Δείξαμε επίσης ότι η επίκτητη αντοχή κλώνο του PC-3 κύτταρα σε Ad-ΑΕΕΑΠ συστάθηκε μετά από επανειλημμένη έκθεση σε Ad-ΑΕΕΑΠ παρουσίασαν ένα υψηλό επίπεδο έκφρασης της GRP78, σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα PC-3 [13]. Θεωρητικά, Ad-ΑΕΕΑΠ θα πρέπει να είναι αποτελεσματική για τα κύτταρα του όγκου που ορίζεται στην κατηγορία Α και όχι ως αποτελεσματικό για εκείνους που ορίζονται στην κατηγορία C. Παρά το γεγονός ότι εντοπίστηκαν τα ευαίσθητα κύτταρα της κατηγορίας Β, τα 8 κύτταρα στην κατηγορία Α ανταποκρίθηκαν στη θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι καταστάσεις έκφραση GRP78 και CAR σε όγκους μπορεί να είναι χρήσιμη ως βιοδείκτες για την προσαρμοσμένη θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ στο NSCLC, ενώ περαιτέρω επιβεβαίωση που χρειάζεται μια μεγάλη κλίμακα έρευνα, χρησιμοποιώντας διάφορα είδη των κυτταρικών σειρών.

Όπως μια πρόσφατη θέμα της θεραπείας του καρκίνου του πνεύμονα, EGFR-TKIs έχουν δειχθεί ότι είναι αποτελεσματικές για τη θεραπεία του

EGFR

μεταλλαγμένου NSCLCs. Ωστόσο, επίκτητη αντοχή σε EGFR-TKIs μετά τη θεραπεία ΤΚΙ είναι ένα πρόβλημα που πρέπει να ξεπεραστεί. Στην παρούσα μελέτη, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η επίδραση του Ad-ΑΕΕΑΠ έναντι αποκτήσει EGFR-ΤΚΙ-ανθεκτικά κύτταρα ήταν ίση με εκείνη έναντι των γονικών κυττάρων, γεγονός που υποδηλώνει ότι Ad-ΑΕΕΑΠ μπορεί να είναι χρήσιμο μετά την εξαγορά της αντίστασης σε EGFR-TKIs.

Αν και αδενοϊό φορείς που φέρουν τα κατάλληλα ογκοκατασταλτικών γονιδίων, όπως Α.Ε.Ε.Α.Π /DKK-3, έχουν μεγάλο δυναμικό για γονιδιακή θεραπεία του καρκίνου, δεν επιδεικνύουν ειδικότητα στόχου και ως εκ τούτου μπορεί επίσης να μολύνει φυσιολογικά κύτταρα στην περιοχή των καρκινικών κυττάρων . Οι συγγραφείς ανέφεραν ότι η μόλυνση των φυσιολογικών ανθρώπινων ινοβλαστών (NHF) με Ad-ΑΕΕΑΠ δεν προκάλεσε την απόπτωση του ίδιου NHF, αλλά αντ ‘αυτού επάγεται η παραγωγή της ιντερλευκίνης (IL) -7. Όταν Ad-ΑΕΕΑΠ μολυσμένα NHF αναμίχθηκαν με μη επεξεργασμένα καρκινικά κύτταρα και το μίγμα μεταμοσχεύθηκαν σε ποντίκια, η ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων ήταν σημαντικά κατασταλεί, υποδηλώνοντας μια έμμεση όγκο κατασταλτική επίδραση του Ad-ΑΕΕΑΠ διαμεσολαβούνται από την IL-7 [20] . Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η λανθασμένη στόχευση μόλυνση των κυττάρων καρκίνου του στρώματος με Ad-ΑΕΕΑΠ ενεργοποιεί το ανοσοποιητικό σύστημα μέσω της παραγωγής της IL-7. Επιπλέον, οι συγγραφείς ανέφεραν ότι ΑΕΕΑΠ /DKK-3 πρωτεΐνη έπαιξε κυτοκίνη σαν ρόλο στη διαφοροποίηση των μονοκυττάρων σε δενδριτικά κύτταρα παρόμοια με τα χαρακτηριστικά

in vitro

και ότι η διείσδυση του CD11c- και CD8-θετικά (δενδριτικά και δείκτες φονικά Τ κυττάρων, αντίστοιχα κύτταρα) παρατηρήθηκε κατά τα επεξεργασμένα όγκους

in vivo

. Στο πείραμα χρησιμοποιώντας ένα ορθοτοπικό πρότυπο όγκου προστάτη με προκαθορισμένες μετάσταση πνεύμονα, ο αριθμός των μεταστατικών όγκων του πνεύμονα μειώθηκε σημαντικά μετά την έγχυση του Ad-ΑΕΕΑΠ στην πρωτογενή θέση όγκου εκτός από την αναστολή της ανάπτυξης του ορθοτοπική όγκων του προστάτη, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα αντι-καρκίνου του ανοσοποιητικού πάνω ρύθμιση με επεξεργασία Ad-ΑΕΕΑΠ στην πρωτοβάθμια θέσεις όγκου ενεργοποιείται αποτελέσματα κατά των όγκων, ακόμη και σε απομακρυσμένες περιοχή του όγκου [16]. Αυτά τα γεγονότα υποδηλώνουν έντονα ότι ΑΕΕΑΠ /DKK-3 δείχνει μια έμμεση δράση κατά του όγκου μέσω του ανοσοποιητικού συστήματος κατά του όγκου που είναι ένας σημαντικός παράγοντας στη θεραπεία της μεταστατικής νόσου. Επειδή Ad-ΑΕΕΑΠ έχει τόσο άμεσες όσο και έμμεσες επιπτώσεις στην θεραπεία του καρκίνου, μπορεί να γίνει μια ισχυρή θεραπευτική επιλογή ως «one-σφαίρα, δύο χέρια» αντικαρκινικός παράγοντας ειδικά για NSCLCs, τα οποία συχνά μεταστάσεις σε άλλα όργανα.

σε ό, τι αφορά την κλινική χρήση, επειδή τα δεδομένα μας δείχνουν ότι καταστάσεις CAR και έκφραση GRP78 στα καρκινικά κύτταρα να προβλέψει την ανταπόκριση της θεραπείας Ad-ΑΕΕΑΠ, η θεραπεία Ad-ΑΕΕΑΠ θα πρέπει να γίνεται κατά προτίμηση για τους ασθενείς που έχουν χαρακτηριστεί ως υψηλού ευαίσθητη ομάδα στις αρχές του φάση της θεραπείας με χαμηλή δόση Ad-ΑΕΕΑΠ. Για τους ασθενείς των οποίων τα καρκινικά κύτταρα αποκαλύπτουν ενδιάμεσο ή φτωχή αποτελεσματικότητα με χαμηλή δόση Ad-ΑΕΕΑΠ, θα πρέπει να είναι αργά φάση στην επεξεργασία τους με υψηλή δόση Ad-ΑΕΕΑΠ. Για αυτούς τους ασθενείς, θα πρέπει να εξεταστεί προσεκτικά η αποτελεσματικότητα του κόστους για τη θεραπεία και την κλινική έκβαση. Όσο για τη στρατηγική διοίκηση, τοπική αυτοδιοίκηση μπορεί να είναι προτιμότερο, αντί συστηματική χορήγηση για να ελαχιστοποιηθούν οι δυσμενείς επιπτώσεις σε κλινικές καταστάσεις. Επιβεβαιώσαμε προηγουμένως στο μοντέλο ποντικού που Ad-ΑΕΕΑΠ θα μπορούσε να διανεμηθεί ευρέως στους φορείς μετά την εντός του όγκου της τοπικής διοίκησης και της τοπικής αυτοδιοίκησης ήταν αποτελεσματική όχι μόνο άμεσα αλλά και έμμεσα μέσω του ανοσοποιητικού συστήματος επίδραση [16], [23]. Επιπλέον, intrapleural τοπική αυτοδιοίκηση θα μπορούσε να είναι μια άλλη στρατηγική διοίκηση για τους ασθενείς με κακοήθη πλευριτική συλλογή. Έχει αναφερθεί ότι η ενδοπλευρική χορήγηση της γονιδιακής θεραπείας αδενοϊικού μεσολάβηση είναι μια χρήσιμη προσέγγιση για την παραγωγή των αντι-καρκινικών άνοσων αποκρίσεων σε κακόηθες μεσοθηλίωμα και μεταστατική πλευρική έκχυση σε αρκετές κλινικές μελέτες [24], [25].

Εν κατακλείδι, έχουμε αποδείξει ότι Ad-ΑΕΕΑΠ που προκαλείται από την ενεργοποίηση της JNK και την επακόλουθη απόπτωση σε κύτταρα NSCLC ανεξάρτητα από το είδος των γνωστών μοριακών μεταβολών ή την ευαισθησία σε EGFR-ΤΚΙ. Η παρούσα μελέτη δείχνει ότι Ad-ΑΕΕΑΠ έχει θεραπευτικές δυνατότητες για NSCLC, και οι καταστάσεις έκφραση GRP78 και αυτοκινήτων μπορεί να είναι ένας προγνωστικός δείκτης της θεραπείας Ad-ΑΕΕΑΠ.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Ο θερμικός χάρτης εικόνα της έκφρασης του mRNA της

ΑΕΕΑΠ /DKK-3

γονίδιο. Το επίπεδο έκφρασης του mRNA της

ΑΕΕΑΠ /DKK-3

γονίδιο λήφθηκε από το Cancer Genome UCSC Αναζήτηση, η οποία είναι ελεύθερα διαθέσιμη δημόσια βάση δεδομένων (https://genome-cancer.ucsc.edu/) (έχουμε κατεβάσει το δεδομένα στις 16 Ιουλίου 2013), έδειξαν ότι το

ΑΕΕΑΠ /DKK-3

έκφραση γονιδίου μειώθηκε σε πλειονότητα των εξεταζόμενων δειγμάτων και των δύο (α) πνευμόνων αδενοκαρκινώματα και (β) καρκινώματα πλακωδών κυττάρων, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων.

doi: 10.1371 /journal.pone.0087900.s001

(PDF)

Μέθοδος S1.

Συμπληρωματικές πληροφορίες για τις κυτταρικές σειρές και ανάλυση κηλίδας Western

doi:. 10.1371 /journal.pone.0087900.s002

(DOC)