Αφηρημένο

Ιστορικό

ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) είναι ένας αιτιολογικός παράγοντας για την αμυγδαλών καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (TSCC) και σε ασθενείς με HPV θετικό (HPV

+) TSCC έχουν μια καλύτερη κλινική έκβαση από ό, τι τα άτομα με HPV αρνητικό (HPV

-) TSCC. Ωστόσο, δεδομένου ότι δεν είναι όλοι οι ασθενείς με HPV

+ TSCC ανταποκρίνονται στη θεραπεία, οι πρόσθετες βιοδείκτες απαιτείται μαζί με την κατάσταση του HPV για την καλύτερη ανταπόκριση στη θεραπεία και την εξατομίκευση της θεραπείας. Για το σκοπό αυτό, θα εξεταστεί κατά πόσον ο αριθμός των όγκων διείσδυση κυτταροτοξικών και ρυθμιστικά Τ-κύτταρα σε TSCC συσχετίζεται με την κατάσταση του HPV και την κλινική έκβαση.

Μέθοδοι

φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη TSCC, προηγουμένως αναλυθεί για τον HPV DNA, που προέρχεται από 83 ασθενείς, χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες ανάλογα με την κατάσταση του HPV του όγκου και της κλινικής έκβασης. Οι όγκοι υπέστησαν χρώση με ανοσοϊστοχημεία και αξιολογούνται για τον αριθμό των διηθητικών κυτταροτοξικά (CD8

+) και ρυθμιστικό (Foxp3

+) Τ-κύτταρα.

Αποτελέσματα

Ένα υψηλό CD8

+ διείσδυση Τ-κυττάρων ήταν σημαντικά συσχετίζεται θετικά σε μια καλή κλινική έκβαση σε δύο ασθενείς με HPV

+ και HPV

– ασθενείς TSCC. Ομοίως, ένα υψηλό CD8

+ /Foxp3

+ ΤΙΤ δείκτης συσχετίστηκε με ένα 3-ετή επιβίωσης χωρίς νόσο. Επιπλέον, HPV

+ TSCC είχε σε σύγκριση με HPV

-TSCC, μεγαλύτερο αριθμό των διηθητικών CD8

+ και Foxp3

+ Τ-κύτταρα.

Συμπεράσματα

Συμπερασματικά, μια θετική συσχέτιση μεταξύ ενός υψηλού αριθμού διηθητικών CD8

+ κυττάρων και την κλινική έκβαση δείχνει ότι sup> + κύτταρα CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία των κυττάρων μπορεί δυνητικά να χρησιμοποιηθεί για τον ίδιο σκοπό

Παράθεση:. Näsman Α, Romanitan M, Nordfors C, Grün Ν, Johansson Η, Hammarstedt L , et al. (2012) που διηθούν τους όγκους CD8

+ και Foxp3

+ λεμφοκύτταρα Correlate σε κλινικό αποτέλεσμα και Ανθρωπίνων Θηλωμάτων (HPV) Κατάσταση στον Καρκίνο αμυγδαλών. PLoS ONE 7 (6): e38711. doi: 10.1371 /journal.pone.0038711

Συντάκτης: Joseph Califano, John Hopkins Medical School, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: έβδομης Φεβρουαρίου, 2012? Αποδεκτές: 11 Μαΐου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 12 Ιουνίου 2012 |

Copyright: © 2012 Näsman et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη σουηδική Εταιρεία Καρκίνου (TD, 100.258), το σουηδικό Συμβούλιο Ιατρικής Έρευνας (TD, TR, K2011-56X-15282-07-6), η Στοκχόλμη Αντικαρκινική Εταιρεία (TD, 101.081), το Henning και Ida Ίδρυμα Perssons (TD), το Ινστιτούτο Καρολίνσκα (TD, TR) και το Δημοτικό Συμβούλιο της Στοκχόλμης (TD, TR, ΕΕΚ, 2010067). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συν-συγγραφέας Torbjörn Ramqvist είναι μια Συντακτική μέλος του Διοικητικού Συμβουλίου PLoS ONE. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Πρόσφατες μελέτες από την Ευρώπη και τις ΗΠΑ έχουν αναφέρει μια αύξηση στη συχνότητα εμφάνισης της στοματοφαρυγγικής πλακώδους καρκίνωμα (OSCC), ιδιαίτερα για αμυγδαλών ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (TSCC). Αυτή η αύξηση έχει αποδοθεί σε ένα αυξημένο επιπολασμό ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) [1], [2], [3], [4]. Κατά συνέπεια, ένα 7-πλάσια αύξηση στην HPV-θετικά (HPV

+) TSCC, παράλληλα με τη μείωση των HPV-αρνητικό (HPV

-) TSCC έχει αποδειχθεί για τους ασθενείς στη Στοκχόλμη της Σουηδίας, τα τελευταία τρία δεκαετίες [3] και μια παρόμοια τάση έχει αποδειχθεί στις ΗΠΑ [2]. Είναι σημαντικό επίσης, HPV έχει αποδειχθεί ότι είναι ένας ευνοϊκός προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με OSCC συμπεριλαμβανομένων TSCC [5], [6], [7], [8]. Ωστόσο, δεν είναι όλοι οι ασθενείς με HPV

+ TSCC πηγαίνουν καλά και έτσι, αν και HPV από μόνο του αποτελεί ένα σημαντικό προγνωστικό δείκτη, οι πρόσθετες βιοδείκτες απαιτούνται TSCC να προβλέψει την καλύτερη ανταπόκριση στη θεραπεία πριν εξατομικευμένη θεραπεία μπορεί να εφαρμοστεί στην κλινική πράξη.

έχει προταθεί ότι ο HPV

+ και HPV

-TSCC είναι δύο διαφορετικές νοσολογικές οντότητες όγκου με διαφορετικό όγκο και τα χαρακτηριστικά του ασθενούς. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η HPV συνδέεται όγκους, συμπεριλαμβανομένων των HPV

+ TSCC οδηγούνται από ιογενή ογκογονίδια, π.χ. Ε6 και Ε7, και έχουν λιγότερες κυτταρικές μεταλλάξεις, HPV

-TSCC αναπτυχθεί από τη συσσώρευση των γενετικών αλλαγών που προκαλούνται κυρίως από περιβαλλοντικούς παράγοντες, όπως το κάπνισμα [9]. Όπως ξένα αντιγόνα, Ε6 και Ε7 μπορούν να δράσουν ως πιθανοί στόχοι για ανοσοαπόκριση έναντι επαγόμενης HPV όγκων και

in vitro

μελέτες έχουν δείξει ότι τα Τ-κύτταρα που απομονώνονται από τον HPV

+ καρκίνο του τραχήλου μπορεί να αναγνωρίσει και να σκοτώσει Ε6 και κύτταρα που εκφράζουν Ε7 όγκου [10]. Επιπλέον, όγκου ειδικών Τ-κύτταρα ανιχνεύονται σε ασθενείς με καρκίνο πλέον του τραχήλου της μήτρας, αν και σε χαμηλά και ανεπαρκή επίπεδα [11], [12] και η παρουσία των λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο (TILs) έχει συνδεθεί με μια καλύτερη πρόγνωση [13], [ ,,,0],14]. Αυτό έχει επίσης παρατηρηθεί για άλλους τύπους όγκων χωρίς γνωστή ιική ένωση [15], [16]. Ωστόσο, TILs μπορεί να δράσει ως ένα δίκοπο μαχαίρι. Ενώ μια έντονη διείσδυση του

+ λεμφοκυττάρων CD8 έχει συνδεθεί με ένα ευνοϊκό πρόγνωση σε πολλές κακοήθειες, ο ρόλος των διηθητικών ρυθμιστικών κυττάρων Τ (Tregs) (συχνά ορίζεται ως Foxp3

+ λεμφοκύτταρα) είναι συχνά η αντίστροφη [17] . Tregs μπορεί να προωθήσει την εξέλιξη του όγκου, και η αυξημένη τα επίπεδα των Tregs έχουν παρατηρηθεί σε ασθενείς με μία ποικιλία όγκων και να συνδέεται με χειρότερη πρόγνωση [18], [19], αν και υπάρχουν εξαιρέσεις όπου Treg διείσδυση έχει συνδεθεί με μια ευνοϊκή πρόγνωση [ ,,,0],20], [21]. Παρ ‘όλα αυτά, ο ρόλος της διεισδύοντας CD8

+ και Foxp3

+ λεμφοκύτταρα έχει, εξ όσων γνωρίζουμε, δεν έχει διερευνηθεί σε TSCC σε σχέση με το αποτέλεσμα και HPV κατάσταση του ασθενούς.

Η

ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να εξετάσει την παρουσία διηθητικών του όγκου CD8

+ και Foxp3

+ Τ-κύτταρα σε TSCC σε σχέση με την κλινική έκβαση και την κατάσταση του HPV όγκου, και να διαπιστωθεί αν αυτές οι TILs μπορεί δυνητικά να χρησιμοποιηθεί σε η κλινική ως βιοδείκτες είτε μόνη της, είτε σε συνδυασμό με την κατάσταση του HPV του όγκου να προβλέψει την κλινική έκβαση.

TSCC με (Α) χαμηλή και (Β) υψηλής CD8

+ διήθηση και (Γ) χαμηλά και (Δ) υψηλής Foxp3

+ διείσδυση.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας στο Karolinska Institutet, Στοκχόλμη, Σουηδία, σύμφωνα με τις ηθικές δικαιώματα 2005 /431-31 /4, 2005 /1330-1332 και 2009 /1278-1231 /4. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες στη μελέτη.

Α) αριθμός των CD8

+ TILs, β) τον αριθμό Foxp3

+ TILs και Γ) του CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία των κυττάρων. «Καλή» και «κακή» δηλώνει κλινική έκβαση. Εκτός από τις τέσσερις ομάδες TSCC ορίζονται στο κεφάλαιο Μέθοδοι, διαφορετικούς συνδυασμούς ομάδων έχουν επίσης συγκριθεί. Έτσι, «HPV

+ καλή» αντιστοιχεί στην ομάδα Α? «HPV

+ φτωχών» στην ομάδα Β? «HPV

– καλής» στην ομάδα Γ? «HPV

– φτωχών» στην ομάδα Δ? HPV

+ για τις κατηγορίες Α + Β, HPV

– στις ομάδες C + D? «Καλό» για τις ομάδες Α + Γ? και «κακή» στις ομάδες Β + Δ. Για να απεικονίσει καλύτερα τις λεπτομέρειες στο κάτω μέρος του σχήματος 1C το άνω μέρος του διαγράμματος περιλαμβάνεται και το ανώτερο μουστακιού (σε αναλογία 80) παραλείφθηκε.

Η

Α) HPV

+ TSCC και Β) του HPV

-TSCC ασθενείς στρωματοποιημένη από τον αριθμό των CD8

+ TILs. Υψηλής και χαμηλής δηλώνει CD8

+ ΤΙΤ μετράνε πάνω και κάτω από τις μέσες τιμές του 33 για τον HPV

+ TSCC και 4.4 HPV

-TSCC. C) HPV

+ TSCC και Δ) HPV

-TSCC ασθενείς στρωματοποιημένη με την αναλογία των CD8

+ /FoxP3

+ αναλογία των κυττάρων. Υψηλής και χαμηλής δηλώνει CD8

+ /FoxP3

+ αναλογία των κυττάρων πάνω και κάτω από 1.

Η

Ασθενείς και Υλικό

Η ομάδα αποτελείτο από όλους τους ασθενείς, που είχαν διαγνωστεί 2000- 2006 με TSCC (ICD-10 C09.0-9), που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με την πρόθεση να θεραπεύσει στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Καρολίνσκα, Στοκχόλμη, Σουηδία, και είχε στη διάθεσή του προ-θεραπεία παραφίνης ενσωματωμένο βιοψίες των όγκων. Η θεραπεία συνίστατο από επιταχυνόμενη ακτινοθεραπεία (RT) (1.1 + 2.0 Gy /ημέρα για 4,5 εβδομάδες, συνολικής δόσης: 68 Gy) ή συμβατικό RT (2.0 Gy /ημέρα, για 6.5-7 εβδομάδα, συνολική δόση: 68 Gy), ή, σε τέσσερα περιπτώσεις, Εισαγωγή χημειοθεραπείας ακολουθούμενη από την ταυτόχρονη RT (CRT). Μετά τη θεραπεία, οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν από την κλινική εξέταση κάθε 3 μήνες κατά τα πρώτα 2 χρόνια και κάθε 6 μήνες το 3ο έτος.

Η

Τα δεδομένα για την παρουσία των τύπων HPV υψηλού κινδύνου (παρουσία του HPV DNA με PCR) και ρ16

κατάσταση ΙΝΚ4 & (με ανοσοϊστοχημεία) ελήφθησαν από προηγούμενες μελέτες [3], [7], [22] και οι ασθενείς χωρίστηκαν σε 4 ομάδες (AD) στη βασική γραμμή (για περαιτέρω λεπτομέρειες βλέπε πίνακες 1 και 2)? (Α) ένα τυχαίο δείγμα (n = 31) όλων των ασθενών (n = 109) με HPV

+, p16

ΙΝΚ4 & θετικό (& gt? 75% p16

ΙΝΚ4 & θετικά καρκινικά κύτταρα) (p16

+) όγκους με ένα καλό κλινικό αποτέλεσμα (που ορίζεται ως μη υποτροπής και ζωντανό 3 χρόνια μετά τη διάγνωση)? (Β) όλοι οι ασθενείς (n = 21) με HPV

+, p16

+ όγκους με κακή κλινική έκβαση (που ορίζεται ως υποτροπιάσει στην ασθένεια ή /και νεκρούς της νόσου εντός 3 ετών μετά τη διάγνωση)? (C) όλοι οι ασθενείς (n = 11) με HPV

-, p16

ΙΝΚ4 & αρνητικό (p16

-) όγκους με ένα καλό κλινικό αποτέλεσμα? (D) όλοι οι ασθενείς (n = 20) με HPV

-, p16

– όγκους με κακή κλινική έκβαση (Πίνακας 1). Ένα δείγμα 31 των 109 πρωτότυπα όγκοι στην ομάδα Α επιλέχθηκε να ληφθεί ένα πιο παρόμοιο αριθμό ασθενών από κάθε ομάδα για περαιτέρω μελέτες των TILs, δεδομένου ότι αυτή η ομάδα κυριάρχησε με 68% του συνολικού αριθμού των όγκων. Οι ασθενείς με HPV

+, p16

– (n = 17) και HPV

-, p16

+ όγκους (n = 4) αποκλείστηκαν από περαιτέρω ανάλυση για την απόκτηση ομοιογενών ομάδων και να περιλαμβάνονται μόνο HPV

+ TSCC εκφράζουν HPV Ε6 /Ε7, αφού p16

έκφραση ΙΝΚ4 & το HPV

+ όγκους θεωρείται ένδειξη της έκφρασης Ε7 [23]. Επίσης αποκλείονται οι ασθενείς πεθαίνουν από άλλες αιτίες από TSCC. Όλα HPV

+ TSCC ήταν HPV16

+ με εξαίρεση ένα όγκου με HPV33 και ένα με ΗΡν56.

Η ανοσοϊστοχημεία

Μια τυποποιημένη μέθοδο υπεροξειδάσης στρεπταβιδίνης-βιοτίνης που απασχολούνται στα 4 μm φορμαλίνη, ενσωματωμένα σε παραφίνη, τομές χρησιμοποιώντας τα μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού αντι-CD8 (αραίωση, από 1:40? κλώνος 4B11? Novocastra Laboratories) και αντι-Foxp3 (αραίωση 1:100, κλώνος 236Α /Ε7? eBioscience). Όλες οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα αντι-ποντικού (1:200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) που ακολουθείται από επώαση με το αβιδίνης-βιοτίνης-ΡΟ χρησιμοποιώντας το κιτ VECTASTATIN® Elite® ABC (Vector Laboratories) και αναπτύχθηκε στο DAB.

Ο CD8

+ και Foxp3

+ διείσδυση λεμφοκυττάρων όγκου αξιολογήθηκε με δύο ερευνητές, τυφλή για κλινική έκβαση, το καθένα μετρώντας τα κύτταρα σε 10 τυχαίως επιλεγμένα πεδία υψηλής ισχύος ( 40 ×) ανά δείγμα. Η μέση τιμή αναφέρθηκε για κάθε όγκο. Η αναλογία του όγκου διεισδύουν CD8

+ και Foxp3

+ κυττάρων υπολογίστηκε για κάθε μεμονωμένο όγκο, ο μέσος όρος αυτών των δεικτών στη συνέχεια υπολογίζεται ανά υποομάδα.

Στατιστική Ανάλυση

Δοκιμές για τις συγκρίσεις των συνεχών δεδομένων πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση γραμμικών μοντέλων παλινδρόμησης. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσες διαφορές ή αποδόσεις-αναλογίες μαζί με διάστημα εμπιστοσύνης 95%. Οι συγκρίσεις των χαρακτηριστικών του ασθενούς και των όγκων μεταξύ των διαφόρων ομάδων στους πίνακες 1 και 2 διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher (two-tailed). Όλα αυτά ανάλυση διεξήχθησαν στο STATA11 (StataCorp). Μια ρ-value≤0.05 θεωρήθηκε ως σημαντική.

ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) ορίστηκε ως διάστημα από την ημερομηνία της διάγνωσης από την ημερομηνία της τελευταίας γνωστής φορά που ο ασθενής ήταν απαλλαγμένη από την ασθένεια ή την ημερομηνία της υποτροπής της νόσου (τοπικό, περιφερειακό ή απομακρυσμένη υποτροπή). Θάνατος χωρίς τεκμηριωμένη υποτροπής λογοκρίθηκε κατά την ημερομηνία του θανάτου. Καμπύλες Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκαν για να παρουσιάσει τα δεδομένα επιβίωσης και η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση καμπυλών επιβίωσης. Στην πολυπαραγοντική αναλύσει, ένα Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιούνται για την προσαρμογή για συμπαράγοντες. Δύο όψεων ρ-τιμές αναφέρθηκαν. Αυτές οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν στο SPSS (IBM SPSS Statistics, V20).

Αποτελέσματα

κλινικά και παθολογικά παραμέτρων των ασθενών και όγκοι

Λεπτομέρειες όλων των ασθενών και των όγκων τους παρουσιάζονται στους πίνακες 1 και 2. Όπως περιγράφηκε παραπάνω, οι ασθενείς χωρίστηκαν σε 4 ομάδες μελέτης ανάλογα με την κατάσταση του HPV όγκου και της κλινικής έκβασης εντός 3 ετών. Η μόνη σημαντική διαφορά μεταξύ των διαφόρων ομάδων της μελέτης ήταν ότι οι ασθενείς με HPV

-tumors και την καλή κλινική έκβαση είχαν χαμηλότερο κλινικό στάδιο από ό, τι οι ασθενείς με κακή κλινική έκβαση (p = 0,005).

Δεν υπήρχαν διαφορές σε σχέση με οποιοδήποτε από τα μελετήθηκαν κλινικών παραμέτρων μεταξύ του δείγματος των 31 ασθενών και του συνολικού πληθυσμού 109 ασθενών με HPV

+ TSCC και την καλή κλινική έκβαση (Πίνακας 2).

Ο αριθμός των CD8

+ TILs συσχετίζεται με HPV Κατάσταση και της κλινικής έκβασης για τους ασθενείς με TSCC

ασθενών TSCC με ένα καλό κλινικό αποτέλεσμα είχαν σημαντικά υψηλότερο αριθμό των CD8

+ TILs σε όγκους τους (Σχήμα 1), από ό, τι τα άτομα με κακή κλινική έκβαση, ανεξάρτητα από την κατάσταση του HPV όγκου (μέση 50,4 και 12,8 αντίστοιχα, ρ & lt?. 0.001), (Πίνακας 3 και Εικόνα 2Α). Επιπλέον, όταν διαστρωμάτωση για την κατάσταση του HPV, HPV

+ TSCC, από τους ασθενείς με μια καλή κλινική έκβαση, είχε περισσότερα CD8

+ TILs από εκείνα από ασθενείς με κακή κλινική έκβαση (μέση τιμή 61,4 και 21,0 αντίστοιχα., P = 0,002 ), (Πίνακας 3). Ο μέσος αριθμός των CD8

+ TILs ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη σε HPV

-TSCC από ασθενείς με καλή κλινική έκβαση, σε σύγκριση με HPV

-TSCC από ασθενείς με κακή κλινική έκβαση (μέση τιμή 19,4 και 4,7 αντίστοιχα. , p = 0,001).

Επιπλέον, HPV

+ TSCC είχαν σημαντικά υψηλότερη μέση αριθμός των διηθούν όγκο CD8

+ λεμφοκυττάρων σε σύγκριση με HPV

-TSCC (μέση τιμή 45,6 και 9,9 αντίστοιχα. , ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 2Α). Αυτή η διαφορά ήταν ακόμα σημαντικό όταν ρυθμίζεται για την πρόγνωση (p = 0,001).

Για να μελετηθεί η συσχέτιση μεταξύ των CD8

+ TILs και DFS σε HPV

+ ασθενείς TSCC, μια ανάλυση Kaplan-Meier διεξήχθη . HPV

+ και HPV

-TSCC ασθενείς διαχωρίστηκαν μεταξύ τους με βάση τη μέση τιμή (33 και 4.4 αντίστοιχα) των CD8

+ TILs. Όπως καταδεικνύεται σε ασθενείς Σχήμα 3Α με HPV

+ όγκους και έναν υψηλό αριθμό CD8

+ TIL είχαν σωρευτικές επιβίωση 84% σε σύγκριση με 55% για ασθενείς με χαμηλό αριθμό CD8

+ (p = 0.02 ). Παρόμοιες τάσεις σωρευτική επιβίωση (64% και 36%, respecitvely) παρατηρήθηκαν επίσης για τον HPV

– ασθενείς, αν και αυτές οι διαφορές δεν ήταν στατιστικά σημαντικές (Σχήμα 3Β). Αξίζει να σημειωθεί ότι, για ασθενείς με HPV

+ TSCC οι καμπύλες Kaplan-Meier υπολογίστηκε στο δείγμα της ΕΡΔΚΠ που ανήκουν στην ομάδα Α και όλα TSCC από την ομάδα Β (Σχήμα 3Α).

Ο αριθμός των Foxp3

+ TILs συσχετίζεται με HPV Κατάσταση στην TSCC

Ένα σημαντικά υψηλότερο αριθμό Foxp3

+ TILs (Σχήμα 1) παρατηρήθηκαν σε HPV

+ TSCC σε σύγκριση με εκείνη του HPV

-TSCC (μέση τιμή 33,2 και 14,7, αντίστοιχα, p & lt?. 0.001) (Σχήμα 2Β). Κατά τη ρύθμιση για την πρόγνωση, αυτή η διαφορά ήταν ακόμα σημαντική (p = 0,001). Ωστόσο, δεν διαπιστώθηκαν διαφορές στα επίπεδα του Foxp3

+ παρατηρήθηκαν TILs σε όγκους από ασθενείς με καλή ή κακή κλινική έκβαση (μέση 27,9 και 24,6, αντίστοιχα.) (Πίνακας 3).

A High CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία συνδέεται με την ορθή κλινική έκβαση σε ασθενείς με TSCC

Ως μέτρηση του σχετικού αριθμού των κυτταροτοξικών και ρυθμιστικών Τ-κυττάρων στους όγκους, ο λόγος του όγκου διεισδύοντας CD8

+ και Foxp3

+ κυττάρων υπολογίστηκε για κάθε όγκο. Ένα υψηλό CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία κυττάρων είναι μια ένδειξη ότι τα ρυθμιστικά Τ-κύτταρα είναι σε μια μειονότητα και έτσι είναι λιγότερο πιθανό να επισκιάσει τη λειτουργία των κυτταροτοξικών Τ-κυττάρων. Για τους ασθενείς με TSCC ένα υψηλό CD8

+ /Foxp3

+ δείκτης συσχετίστηκε θετικά σε μια καλή κλινική έκβαση όταν ρυθμιστεί για την πρόγνωση (p = 0,04) (Πίνακας 3). Ωστόσο, η διαφορά που σχετίζονται με την πρόγνωση σε CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία ΤΙΤ δεν ήταν σημαντική όταν οι ασθενείς με HPV

+ TSCC ή HPV

-TSCC αναλύθηκαν ξεχωριστά, αν και η τάση ήταν παρόμοια με που παρατηρήθηκε για τους ασθενείς TSCC γενικότερα.

για να μελετήσουμε τη συσχέτιση μεταξύ ενός υψηλού /χαμηλού CD8

+ /Foxp3

+ λόγος ΤΙΤ και DFS για TSCC, έγινε μια ανάλυση Kaplan-Meier. HPV

– και HPV

+ ασθενείς TSCC διαχωρίστηκαν μεταξύ τους με βάση ένα CD8

+ /Foxp3

αναλογία + ΤΙΤ πάνω ή κάτω από 1. Όπως καταδεικνύεται στο Σχήμα 3D ασθενείς με HPV

-TSCC και ένα υψηλό CD8

+ /Foxp3

+ λόγος ΤΙΤ είχε μια αθροιστική επιβίωση του 73% σε σύγκριση με 28% για τους ασθενείς με χαμηλό CD8

+ /Foxp3

+ λόγος ΤΙΤ (p = 0,03) . Ομοίως, HPV

+ ασθενείς TSCC με υψηλό CD8

+ /Foxp3

αναλογία + ΤΙΤ είχαν υψηλότερη αθροιστική επιβίωση (82%) από ό, τι τα άτομα με χαμηλό CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία TIL (54%, p = 0,04) (Σχήμα 3C).

Συσχέτιση κλινικές παραμέτρους, CD8

+ και Foxp3

+ κύτταρα και 3-year DFS σε ασθενείς με TSCC

Όταν CD8

+ και Foxp3

+ τιμές TILs για όλους TSCC, στρωματοποιημένη για το καθεστώς του HPV, αναλύθηκαν για την ηλικία, το φύλο ή το κλινικό στάδιο, δεν βρέθηκε συσχέτιση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

οι αναλογίες κινδύνου (HR) υπολογίστηκαν ξεχωριστά για τον HPV

+ και HPV

-TSCC, χρησιμοποιώντας τόσο μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική δοκιμές (Πίνακας 4). Για HPV

+ TSCC η αναλογία κινδύνου για ένα μεγάλο αριθμό των CD8

+ κυττάρων ήταν 0,27 (p = 0,029), ενώ για τον HPV

-TSCC η αναλογία κινδύνου για υψηλή CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία ήταν 0,27 (p = 0,048). Για να διαπιστωθεί αν τα CD8

+ κυττάρων και CD8

+ /Foxp3

+ λόγος ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες, μια πολυμεταβλητή ανάλυση Cox έγινε με το κλινικό στάδιο, την ηλικία και το φύλο ως συμπαράγοντες (Πίνακας 4). Για HPV

+ TSCC, τόσο ο αριθμός των CD8

+ κύτταρα και ηλικίας ανεξάρτητα σημαντικά συσχετίζεται με 3-year DFS (p = 0,034 και p = 0,009, αντίστοιχα.). Για HPV

-TSCC τόσο CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία και το στάδιο ήταν σημαντικά ανεξάρτητα συσχετίζεται με 3-year DFS (p = 0,023 και p = 0,039, αντίστοιχα.). Ομοίως, ένα υψηλό CD8

+ /Foxp3

+ λόγος συσχετίζεται με ένα 3-year DFS τόσο στην μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση, επίσης, για τον HPV

+ TSCC (HR 0,33, p = 0,048 και HR 0,23, p = 0,015 αντίστοιχα) (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ ενός υψηλού CD8

+ Τ-κυττάρων διείσδυση και την κλινική έκβαση τόσο για τους ασθενείς με HPV

+ και HPV

-TSCC, καθώς και μεταξύ των υψηλού CD8

+ /Foxp3

+ ΤΙΤ αναλογία και απαλλαγμένα από ασθένειες επιβίωσης για τους ασθενείς με HPV

+ και HPV

-TSCC. Επιπλέον, έχουμε καταδείξει μια σχέση τόσο μεταξύ διηθούν όγκο CD8

+ και Foxp3

+ Τ-κύτταρα σε κατάσταση HPV σε TSCC.

Το γεγονός ότι τα CD8

+ διείσδυση ήταν εντονότερη και επηρεάζεται πρόγνωση θετικά σε αυτή τη μελέτη για τον HPV

+ TSCC, μπορεί να είναι ένας σημαντικός λόγος για τον οποίο η πλειοψηφία των HPV

+ TSCC έχουν ένα καλό κλινικό αποτέλεσμα σε σύγκριση με HPV

-TSCC [6], [7 ]. Αυτό θα ήταν σύμφωνο με τις πειραματικές μελέτες που δείχνουν τη σημασία του ανοσοποιητικού συστήματος για την καταπολέμηση του ιού HPV

+ το κεφάλι και το καρκίνωμα του λαιμού πλακωδών κυττάρων (HNSCC) [24]. Το αποτέλεσμα είναι, επίσης, σε αντιστοιχία με πολλές μελέτες σε όγκους από άλλους δικτυακούς τόπους, π.χ. για του παχέος εντέρου και του καρκίνου του τραχήλου [13], [14], [15], [18]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, όπου η συντριπτική πλειοψηφία των όγκων είναι HPV

+, και τα δύο ένας υψηλός αριθμός CD8

+ TIL και μια υψηλή αναλογία

ρυθμιστικών Τ-κυττάρων + /CD8 συσχετίστηκαν με την απουσία λεμφαδένα μετάσταση [14]. Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα έχει επίσης δημοσιευθεί για HNSCC, όπου Ogino και οι συνεργάτες του να επιδείξουν θετική συσχέτιση μεταξύ της διείσδυσης

Τ-κυττάρων + υψηλής CD8 και προκαλούν συγκεκριμένες επιβίωσης [25]. Επιπλέον, η παρουσία του HPV16 ειδικών Τ-κυττάρων σε HPV

+ HNSCC αποδείχθηκε πρόσφατα, αν και συσχέτιση με πρόγνωση δεν ερευνήθηκε [26]. Η ισχυρή θετική συσχέτιση μεταξύ CD8

+ TILs και καλή κλινική έκβαση για ασθενείς με TSCC υποδεικνύει ότι η αξιολόγηση των CD8

+ TILs θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως ένα επιπλέον προγνωστική βιοδείκτη σε συνδυασμό με την κατάσταση του HPV όγκου.

δείξαμε επίσης ότι ένα υψηλό CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία Τ-κυττάρων συσχετίζεται σημαντικά με τη νόσο επιβίωση χωρίς σε δύο ασθενείς με HPV

+ και HPV

-TSCC. Προηγούμενες δημοσιεύσεις έχουν συνδέσει Foxp3

+ TILs σε χειρότερη πρόγνωση σε π.χ. καρκίνο των ωοθηκών και του μαστού [16], [18]. Επιπλέον, ένα υψηλό ποσοστό των Tregs έχει συσχετιστεί με φτωχή επιβίωση 5 ετών σε καρκίνο του τραχήλου [27]. Ωστόσο, υπάρχουν επίσης περιπτώσεις όπου έχουν Foxp3

+ TILs έχουν συνδεθεί με μια ευνοϊκή πρόγνωση όπως π.χ. στον καρκίνο του παχέος εντέρου, λέμφωμα Hodgkin και HNSCC [20], [21], [28]. Το αποτέλεσμα που λαμβάνεται στην παρούσα μελέτη δείχνει ότι ενδοδιηθητικά κύτταρα Τ επίσης είναι σημαντικά για την κλινική έκβαση για ασθενείς με HPV

-TSCC, αν και πιθανώς και σε μικρότερο βαθμό. αναλογία των Τ-κυττάρων + την αξιολόγηση των CD8

+ /Foxp3

θα μπορούσε έτσι να χρησιμοποιηθεί επίσης ως κλινική προγνωστικός δείκτης για ασθενείς με HPV

+ ή HPV

-TSCC.

Σημαντικά, εκτίμηση CD8

+ και Foxp3

+ TILs από την IHC μπορεί να πραγματοποιηθεί σε μονάδες παθολογία στα νοσοκομεία. Η κατάσταση HPV των TSCC ήδη αξιολογείται τακτικά σε ορισμένες κλινικές, π.χ. στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Καρολίνσκα στη Στοκχόλμη, και αν χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με την αξιολόγηση των CD8

+ και Foxp3

+ TILs σε μονάδες παθολογία, μπορεί να επιτευχθεί μια καλύτερη πρόβλεψη του κλινικού αποτελέσματος. Ωστόσο, το μέγεθος του πεδίου αξιολογούνται και τιμές αποκοπής πρέπει να οριστεί με ακρίβεια.

Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι ο HPV

+ TSCC είχαν σημαντικά υψηλότερη διείσδυση τόσο των CD8

+ και Foxp3

+ κυττάρων από τον HPV

-TSCC. Αυτό δεν ήταν απροσδόκητο δεδομένου ότι HPV

+ TSCC εκφράζει ξένα αντιγόνα του ιού. Στην πραγματικότητα, τα στοιχεία δείχνουν ότι, αν και η άμυνα του ανοσοποιητικού παρέλειψε να εμποδίζουν την ανάπτυξη του HPV

+ TSCC, υπάρχει ακόμα μια ανοσολογική διαφορά μεταξύ του HPV

+ και HPV

-TSCC.

είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η παρουσία των TILs σε TSCC δεν είναι αρκετό για την απόρριψη του όγκου. Ωστόσο, έχει καταδειχθεί σε ένα μοντέλο ποντικού που ένα ανέπαφο ανοσολογική άμυνα είναι σημαντική για μια πλήρη κάθαρση του όγκου κατά την κατεργασία ακτινοβολίας [24]. Επιπλέον, είναι πιθανό ότι η ακτινοβόληση μπορεί να ενεργοποιήσει την ανοσολογική αντίδραση τόσο κατά υπόλοιπα βιώσιμα κύτταρα του αρχικού όγκου και κατά της μετάστασης λεμφαδένα.

Πρόσφατα, έχουν πολλές βιοδείκτες όγκου έχουν διερευνηθεί σε σχέση με την πρόγνωση για τους ασθενείς με HNSCC [ ,,,0],29], [30], [31], [32]. Ωστόσο, στις περισσότερες από αυτές τις μελέτες δεν ελήφθη η κατάσταση HPV των όγκων υπόψη και συχνά σε όγκους από διαφορετικούς υπο-θέσεις HNSCC ομαδοποιήθηκαν μαζί όταν βιοδείκτες συσχετίστηκαν με πρόγνωση. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης καταδεικνύουν τη σημασία του διαχωρισμού όγκων ανάλογα με την κατάσταση του HPV. Επιπλέον, σε μελέτες αυτού του είδους, οι όγκοι πρέπει να στρωματοποιείται ανάλογα με υπο-θέση του όγκου, αφού π.χ. η συνολική επιβίωση για ασθενείς με HNSCC διαφέρει ανάλογα τόσο την κατάσταση του HPV και δευτερεύουσα όγκου.

Υπάρχουν κάποιοι περιορισμοί στην παρούσα μελέτη. Πρώτον, είναι μια αναδρομική μελέτη με όλους τους ασθενείς που διαγιγνώσκονται με TSCC στη Στοκχόλμη κατά τη διάρκεια του 2000-2006 και αντιμετωπίζεται με την πρόθεση να θεραπεύσει. Ωστόσο, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η θεραπεία κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου τυποποιήθηκε με συμβατικό /επιταχυνόμενη RT. Επιπλέον, προηγούμενες δημοσιεύσεις, αναλύοντας την κλινική έκβαση των ασθενών που συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη, έχουν αποτύχει να αποδείξουν διαφορές στην κλινική έκβαση για ασθενείς με στοματοφαρυγγική καρκίνους, ανάλογα με τη θεραπεία [33], [34].

Δεύτερον , οι περισσότεροι TSCC σήμερα είναι HPV

+ με ευνοϊκή κλινική έκβαση για τους ασθενείς. Ως εκ τούτου, αυτή η ομάδα μειώθηκε στην παρούσα μελέτη από την τυχαιοποίηση. Από την άλλη πλευρά, δεν ήμασταν σε θέση να αποδείξουν σημαντικές διαφορές μεταξύ του δείγματος μελέτη και το συνολικό υλικό σε αυτή την ομάδα. Ένας άλλος περιορισμός είναι οι λίγοι αριθμοί των ασθενών του HPV

– ομάδες, αν και όλοι οι ασθενείς συμπεριλήφθηκαν με αυτό το χαρακτηριστικό. Να μελετήσουν καλύτερα το HPV

πληθυσμού -TSCC, θα πρέπει να συμπεριληφθούν και άλλα ιατρικά κέντρα.

Τέλος, δεν έχουμε αξιολογηθεί εάν ο όγκος διεισδύοντας CD8

+ και Foxp3

+ κύτταρα στοχεύουν ενάντια ειδικά σχετίζεται με όγκο αντιγόνα ή προσδιορίστηκαν για τα λειτουργικά CD8

+ χρησιμοποιώντας π.χ. γρανζύμου Β Επιπλέον, δεδομένου ότι Foxp3, αν και σε χαμηλά επίπεδα, μπορεί να προκληθεί παροδικά σε CD4

+ και CD8

+ Τ-κύτταρα κατά την διέγερση, κάθε Foxp3

+ TILs δεν μπορεί να είναι Tregs [35]. Ωστόσο, για τους σκοπούς της παρούσας μελέτης, δηλαδή να βρουν κλινικά σημαντική και εύκολα αναγνωρίσιμο δείκτες, αυτό δεν ήταν σημαντική, αν και θα ήταν ενδιαφέρον να αντιμετωπιστούν αυτά τα ζητήματα και σε άλλες μελέτες.

Εν κατακλείδι, διηθούν όγκο CD8

+ και Foxp3

+ κυττάρων σε TSCC εμφανίζουν διαφορετικά προφίλ ανάλογα με την κατάσταση του HPV όγκου και της κλινικής έκβασης. Έτσι, συνδυάζοντας την παρουσία των CD8

+ Τ-κύτταρα και /ή CD8

+ /Foxp3

+ αναλογία των κυττάρων με την ιδιότητα του HPV, μπορεί να είναι προσθετικό προγνωστική αξία και για την καλύτερη εξατομίκευση της θεραπείας του ασθενούς.