Αφηρημένο

Αντρας είναι ένας παράγοντας κινδύνου για την ανάπτυξη ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC), αλλά οι μηχανισμοί δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Η σύνδεση γονίδιο μοτίβο στο χρωμόσωμα Υ (RBMY) RNA, το οποίο κωδικοποιεί ένα αρσενικό γεννητικών κυττάρων-ειδικό ρυθμιστή μάτισμα RNA κατά τη διάρκεια της σπερματογένεσης, είναι παρεκκλίνοντα ενεργοποιείται σε ανθρώπινα αρσενικά καρκίνων του ήπατος. Αυτή η μελέτη διερεύνησε την

in vitro

ογκογόνο δράση και ο πιθανός μηχανισμός της RBMY σε ανθρώπινου ηπατώματος κυτταρική γραμμή HepG2 και του

in vivo

επίδραση όσον αφορά τα συκώτια των ανθρώπινων και διαγονιδιακά ποντίκια. έκφραση RBMY σε κύτταρα HepG2 χτυπήθηκε κάτω από παρεμβολή RNA και ο φαινότυπος των καρκινικών κυττάρων χαρακτηρίζεται από σχηματισμό μαλακό άγαρ αποικία και ευαισθησία στο υδρογόνο-υπεροξείδιο επαγόμενη απόπτωση. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι RBMY knockdown μείωσε την μεταμόρφωση και αντι-αποπτωτικά αποδοτικότητα των κυττάρων HepG2. Η έκφραση του RBMY, υποδοχέα ανδρογόνου (AR) και ανασταλτικές παραλλαγή AR45 του, AR-στόχευση γονιδίων ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας 1 (IGF-1) και η σύνδεση με ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα πρωτεΐνη 3 (IGFBP-3) αναλύθηκε με ποσοτική RT -PCR. Up-ρύθμιση της παραλλαγής AR45 και τη μείωση των IGF-1 και IGFBP-3 έκφραση ανιχνεύθηκε μόνο σε RBMY knockdown κυττάρων. Επιπλέον, RBMY θετικό ανθρώπινο αρσενικό HCC εξέφρασε χαμηλότερο επίπεδο AR45 σε σύγκριση με RBMY ιστούς αρνητική HCC. Οι ογκογόνες ιδιότητες των RBMY περαιτέρω αξιολογήθηκαν σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού. Liver-ειδική RBMY διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν ηπατική προ-καρκινικές βλάβες, αδένωμα, και HCC. RBMY επιταχύνθηκε επίσης χημικό καρκινογόνο επαγόμενη ηπατοκαρκινογένεσης σε διαγονιδιακά ποντίκια. Συλλογικά, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι το Υ χρωμόσωμα-ειδικών RBMY είναι πιθανόν εμπλέκονται στην ρύθμιση της δράσης του υποδοχέα ανδρογόνων και συμβάλλει στην ανδρική κυριαρχία του HCC

Παράθεση:. Tsuei DJ, Lee PH, Peng ΗΥ, Lu SL, Su DS, Jeng ΥΜ, et al. (2011) Αρσενικό γεννητικών κυττάρων-Ειδικές RNA Δεσμευτική Πρωτεΐνη RBMY: Μια νέα Oncogene Εξηγώντας στους άνδρες σε καρκίνο του ήπατος. PLoS ONE 6 (11): e26948. doi: 10.1371 /journal.pone.0026948

Συντάκτης: John D. Minna, Πανεπιστήμιο του Τέξας Southwestern Medical Center στο Ντάλας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 27 του Ιουνίου 2011? Αποδεκτές: 6η Οκτωβρίου, 2011? Δημοσιεύθηκε: 4 του Νοέμβρη του 2011

Copyright: © 2011 Tsuei et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις NHRI-EX93-117BN, NHRI-EX95 (96, 97, 98) -9418BI από το Εθνικό Ερευνητικό Ινστιτούτο Υγείας της Ταϊβάν. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) είναι ένας από τους κορυφαίους καρκίνους στον κόσμο [1]. Οι κυριότεροι παράγοντες που προσδιορίζονται κινδύνου περιλαμβάνουν τον ιό της ηπατίτιδας Β (HBV) ή της ηπατίτιδας C (HCV), η έκθεση σε αφλατοξίνες, και το άρρεν φύλο [2]. Η αναλογία ανδρών-σε-θηλυκό HCC φέρεται μέσους 4-5:1 και είναι ιδιαίτερα υψηλότερη σε HBV που σχετίζονται με HCC (5-11:1) [3]. Επιδημιολογικές μελέτες έδειξαν ότι ένα αυξημένο επίπεδο τεστοστερόνης ορού ήταν σημαντικά σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο HCC σε αρσενικούς φορείς HBV [4]. Ωστόσο, αρσενικό επικράτηση με αναλογία 3-4:1 παρατηρείται επίσης στην παιδική ηλικία HCC με πρώιμη έναρξη, από την ηλικία των & lt? 10 ετών πριν από την εφηβεία, και δεν μπορεί να εξηγηθεί άμεσα από ανδρογόνο δράση [5], [6] .

Ο υποδοχέας ανδρογόνων (AR) έχει αποδειχθεί ότι συνεισφέρουν στην ανδρική προτίμηση των ηπατοκαρκινογένεσης του HBV και φορείς του HCV [7], [8]. Η πρωτεΐνη AR διαμεσολαβεί τη δράση των ανδρογόνων και μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη των ανδρικών HCC σε ποντίκια [9]. Μετά τη σύνδεση με συνδέτες, AR σχηματίζει ομοδιμερή και ενεργοποιεί τη μεταγραφή των γονιδίων στόχων όπως είναι η ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα 1 (IGF-1) και παρόμοιο με ινσουλίνη πρωτεΐνη 3 (IGFBP-3) αυξητικός παράγοντας δέσμευσης [10], [11]. Η λειτουργία AR ρυθμίζεται με συν-ενεργοποιητές ή συν-καταστολείς [12], η ανασταλτική ισομορφή AR45 [13], και μικρότερες CAG επαναλήψεις (που οδηγεί σε υψηλότερη δραστικότητα AR) στο πρώτο εξόνιο του γονιδίου AR [14]. Η πρωτεΐνη ΗΒν Χ είναι ένα πολύ γνωστό AR συν-ενεργοποιητή [15], [16] και αναφέρθηκε για να συνεισφέρουν στην ανδρική υπεροχή του HBV που σχετίζονται με την ανθρώπινη αρσενικό HCC [17]. Σε μη-HBV HCC, άλλοι άγνωστοι παράγοντες φύλο προώθηση του σχηματισμού HCC στους άνδρες έχει γίνει μια σημαντική ανησυχία.

Δυσλειτουργία του χρωμοσώματος Υ-ειδικών γονιδίων έχει βρεθεί σε αρσενικό HCC, αλλά τους ρόλους τους στην ανδρική κυριαρχία των HCC μέχρι στιγμής δεν έχουν αντιμετωπιστεί [18], [19]. Το RNA-δεσμευτικές γονίδιο μοτίβο στο χρωμόσωμα Υ (RBMY) είναι ένα αρσενικό γονίδιο έκφρασης κυττάρου-ειδική μικρόβιο που περιέχει μοτίβα αναγνώριση RNA στο Ν άκρο [20]. Η έκφρασή του περιορίζεται στους πυρήνες των αρσενικών γεννητικών κυττάρων και η διαγραφή του μπορεί να προκαλέσει τη σύλληψη των γεννητικών κυττάρων στο στάδιο μειωτική της σπερματογένεσης [21]. RBMY λειτουργεί ως ένα αρσενικό γεννητικών κυττάρων-ειδικό ρυθμιστή μάτισμα με διαμόρφωση της δραστικότητας των εκφράζουν συντακτικά παράγοντες ματίσματος [22], [23]. ανώμαλη ενεργοποίηση του ανιχνεύεται σε περίπου το 1/3 των αρσενικών HCC και ηπατοβλάστωμα καρκινικών ιστών, αλλά όχι σε ζεύγη μη καρκινικούς ιστούς του ήπατος, των γυναικών HCC, ή άλλους τύπους καρκίνων [24]. Αν και RBMY μπορούν να αλληλεπιδράσουν με AR συν-ενεργοποιητή SAM68 [25], [26], ο ρόλος του στην οδό σηματοδότησης AR δεν έχει ακόμη αναφερθεί.

Η παρούσα μελέτη είχε ως σκοπό να αξιολογήσει την μεταμόρφωση και αντι-αποπτωτική δραστικότητα των RBMY στα ανθρώπινα κύτταρα ηπατώματος, και ηπατοκαρκινογόνου αποτελεσματικότητα της RBMY σε διαγονιδιακά ποντίκια, και να διερευνήσει πιθανές υποκείμενες μοριακών μηχανισμών της. Τα αποτελέσματά μας

in-vitro

,

in-vivo

, και σε κλινικές αρσενικό άνθρωπο HCC ιστούς υποδηλώνουν ότι μπορεί να ενισχύσει RBMY δραστικότητα AR και ηπατοκαρκινογένεσης με τη μείωση της έκφρασης του AR ανασταλτικής παραλλαγής AR45.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα ανθρώπινων ιστών

Αξιόπιστες όγκων και μη καρκινικών ιστών του ήπατος συλλέχθηκαν από άνδρες ασθενείς 66 χειρουργικές HCC (44 HBV που σχετίζονται με, 10 που σχετίζονται με HCV, 5 HBV /HCV που σχετίζονται με, και 7 μη-HBV /HCV που σχετίζονται) στο Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν Νοσοκομείο (NTUH) το 2007. Όλες οι κλινικά δείγματα ελήφθησαν μετά από έγκριση της Επιτροπής Ερευνών Δεοντολογίας της NTUH (NTUHREC έγκριση Νο 9361701139) .

κυτταρική καλλιέργεια και επιμόλυνση

Οι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ηπατοκυτταρικού καρκινώματος HepG2 και Hep3B είχαν αρχικά ληφθεί από τη Συλλογή Bioresource και Ερευνητικό Κέντρο (BCRC, Ταϊβάν). HepG2, Hep3B και Huh7 (από Dr. Hui-Lin Wu του NTUH ηπατίτιδας Research Center) κύτταρα αναπτύχθηκαν σε μέσο Dulbecco τροποποιημένο Eagle (ϋΜΕΜ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (HyClone, Logan, UT). Οι επιμολύνσεις πραγματοποιήθηκαν με χρήση Lipofectamine (Invitrogen /Life Technologies, Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.

παρεμβολή RNA

Η στρατηγική που βασίζεται pSUPER χρησιμοποιήθηκε για να knockdown έκφραση RBMY. RBMY μικρό φουρκέτα RNA (shRNA) δημιουργήθηκε με σύνδεση τριών αλληλουχιών 19-νουκλεοτιδίων ειδική για RBMY SRGY περιοχή (εξώνια 7-10) εντός του φορέα (OligoEngine, Inc., Seattle, WA). Οι αλληλουχίες δείχνονται στον Πίνακα S1. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε 80% συρροή για διαμόλυνση και επιμολυσμένα κύτταρα επελέγησαν με 300 μg /ml γενετικίνης.

ημι-ποσοτική RT-PCR και ποσοτική PCR

Το ολικό RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας RNeasy Mini κιτ (QIAGEN, GmbH, Hilden, Γερμανία) και υποβλήθηκε σε αντίστροφη μεταγραφή χρησιμοποιώντας SuperScript III ανάστροφης μεταγραφάσης (Invitrogen). Οι αλληλουχίες εκκινητή και τις συνθήκες αντίδρασης φαίνονται στον Πίνακα S1. Ποσοτική PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το TaqMan Gene Expression μείγμα Δοκιμασία για RBMY στόχο (Hs00359074_m1) ή ενδογενή υποξανθίνης ελέγχου φωσφοροριβοσυλ-τρανσφεράσης 1 (Hs99999909_m1) (Applied Biosystems, Foster City, CA). Ποσοτική PCR για AR, AR45, IGF-1, IGFBP-3, και ενδογενής έλεγχος S26 διεξήχθη χρησιμοποιώντας το κύριο μίγμα Plus για SYBR Green (Applied Biosystems). σήματα πολλαπλασιασμού ανιχνεύθηκαν από prism7700 ΑΒΙ ή 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems).

δοκιμασίες

μαλακό άγαρ και την επιβίωση

Για δοκιμασία μαλακού άγαρ, 2500 κύτταρα ανά φρεάτιο σε μέσο ανάπτυξης που περιέχει 0.35% αγαρόζη τοποθετήθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων με βάση αγαρόζη 0,5%. Μετά από 14 ημέρες επώασης, οι αποικίες χρωματίζονται με 0.005% κρυσταλλικό ιώδες σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα και μετρήθηκαν για κάθε πλάκα.

Για δοκιμασία επιβίωσης, τα κύτταρα HepG2 επιμολύνθηκαν με πλασμίδια shRNA υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 0,5 ή 0,75 υπεροξείδιο του υδρογόνου mM για 24 ώρες για να επάγει απόπτωση. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το Κιτ Πολλαπλασιασμού Κυττάρου Ι (ΜΤΤ) (Roche Diagnostics, Germany). Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 590/690 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη μικροπλάκας MRX (Dynex Technologies, Inc., VA) και η επιβίωση των κυττάρων εκφράστηκε ως απορροφητικότητα σε σχέση με εκείνη του μάρτυρα.

Προσδιορισμός υποδοχέα ανδρογόνων CAG επαναλήψεων μήκους σε ανθρώπινους ιστούς HCC

Η γονιδιωματική περιοχή που περιέχει το τρινουκλεοτίδιο CAG επανάληψη ενισχύθηκε με PCR και σημασμένο με FAM, υποβλήθηκε σε ΑΒΙ 3700 Genetic Analyzer, και σημείωσε χρησιμοποιώντας το λογισμικό GeneMapper (Applied Biosystems). Η πρότυπη καμπύλη για τον υπολογισμό του αριθμού CAG επανάληψη βασίστηκε σε τέσσερα δείγματα ελέγχου με αριθμούς επανάληψης CAG που κυμαίνονται από 17 έως 35. ανάλυσης αλληλουχίας διεξήχθη σε ιστούς HCC από 66 άτομα της μελέτης με αριθμούς επανάληψης CAG από την πρότυπη καμπύλη.

Καθιέρωση RBMY διαγονιδιακών ποντικών και την παρακολούθηση ιστοπαθολογία

Η αλληλουχία που κωδικοποιεί RBMY ενισχύθηκε και υπο-κλωνοποιήθηκε στο pBS-HCRHPI-ένας φορέας με έναν υποκινητή του ήπατος-ειδική α1-αντιτρυψίνη. Το κατασκεύασμα υποβλήθηκε σε πέψη με

SpeI

για να δημιουργήσει ένα θραύσμα διαγονίδιο για έγχυση μέσα στα προ-πυρήνες των γονιμοποιημένων ωαρίων των FVB N ποντίκια /. Η Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση του College of Medicine και το Κολέγιο Δημόσιας Υγείας, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν ενέκρινε τη φροντίδα των ζώων και πειραματικές διαδικασίες (IACUC έγκριση Νο 20060217).

Τα ποντίκια θυσιάστηκαν στις 4-24 μηνών. ήπαρ τους σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη-ή ενσωματωμένα σε OCT ένωση (Sakura Finetek, Torrance, CA). τομές παραφίνης χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για ιστοπαθολογική εξέταση, ενώ κατεψυγμένες τομές βάφτηκαν με ερυθρό ελαίου Ο για την ανίχνευση συσσώρευση λιπαρών σταγονιδίων. Η σοβαρότητα της στεάτωση εκτιμήθηκε από το ποσοστό των θετικών χρώση χρησιμοποιώντας μορφολογικά ημι-ποσοτική μέθοδο και κατατάσσονται σε βαθμό 1 (& lt? 33%), βαθμού 2 (33-66%), ή βαθμού 3 (& gt? 66%) ως περιγράφηκε προηγουμένως [27].

θεραπεία diethylnitrosamine και ιστοπαθολογική εξέταση σε ποντίκια

στο μοντέλο χημικό καρκινογόνο, 14-ημερών RBMY διαγονιδιακά ή τον έλεγχο ποντίκια έλαβαν τυχαία μία μόνο ενδο-περιτοναϊκή έγχυση diethylnitrosamine ( DEN) (Sigma-Aldrich, Inc., St Louis, ΜΟ) στα 10 mg /kg σωματικού βάρους ή αλατούχο διάλυμα ίσου όγκου, αντίστοιχα. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν στις 26 και 34 εβδομάδες μετά τη θεραπεία. Επιπλέον, νωρίτερα θυσία στις 14 εβδομάδες εκδόθηκε ειδικά για αρσενικά ποντίκια που είχαν φέρεται ιδιαίτερα ευαίσθητα στην DEN που προκαλείται ηπατοκαρκινογένεσης. Μετρήσεις μάζες όγκων ορατά στην επιφάνεια του ήπατος καταγράφηκαν. Μικροσκοπικές αλλοιώσεις μετρήθηκαν από δύο αντιπροσωπευτικές τομές (απόσταση 50 μm) από κάθε ήπαρ ποντικού.

Immuno-ιστοχημεία

Immuno-ιστοχημική χρώση για το αντιγόνο RBMY πραγματοποιήθηκε σε κατεψυγμένες τομές ήπατος. Μετά ανάκτηση αντιγόνου και ψύξη των ενδογενών υπεροξείδωση, το αντίσωμα αντι-κουνελιού SRGY [24] επωάστηκε με τομές στο 1:400 αραίωση επί μία νύκτα στους 4 ° C. HRP-DAB χρησιμοποιήθηκε ως σύστημα ανίχνευσης (R &? D Systems, Inc., Minneapolis, ΜΝ) και αντι-βάφτηκαν με αιματοξυλίνη

κηλίδωση Western

Η εκχύλιση της συνολικής πρωτεΐνης, Western. ανάλυση κηλίδας, και παρασκεύασμα αντισώματος αντι-SRGY διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Εν συντομία, 50 μg της συνολικής πρωτεΐνης που εξάγεται από άτομο ηπατικού ιστού ποντικού διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση με τη χρήση τυποποιημένων SDS-PAGE. Οι κηλίδες επωάστηκαν με αντισώματα αντι-κουνελιού πολυκλωνικό SRGY στο 1:5000 αραίωση και μονοκλωνικά ποντικού αντι-αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH) αντισώματα (Abcam, Cambridge, UK) σε αραίωση 1:1000.

η στατιστική ανάλυση

οι στατιστικές διαφορές στη σχέση μεταξύ AR-CAG επαναλήψεις και RBMY, ανάλυση βιωσιμότητας, διπλώστε την αλλαγή στην έκφραση του RNA, και ανάλυση της θεραπείας DEN αναλύθηκαν από δύο ουρά του Student

t-test

. Διαφορά περιπτώσεων στεάτωση μεταξύ των διαγονιδιακών και ελέγχου ποντικούς αναλύθηκε με Chi-square τεστ. δοκιμασία αποικίας Soft-άγαρ αξιολογήθηκε με μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από

t-τεστ

. Μετά την εξομάλυνση εναντίον S26, σε σχέση με τις τιμές των AR και AR45 έκφραση αναλύθηκαν από Φοιτητών

t-test

με άνιση διακύμανση. Ένα

σ

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική, ενώ ένα

σ

τιμή μεταξύ 0,05 και 0,1 θεωρήθηκε ότι έχει μια τάση της διαφοράς

Αποτελέσματα

RBMY νοκ ντάουν μείωσε το μετασχηματισμό και την αντι-αποπτωτική αποδόσεις των κυττάρων HepG2

Γηγενής εκφράζεται RBMY στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά ηπατώματος HepG2 ήταν παρεμβολές από shRNA που στοχεύουν ειδικά στον τομέα SRGY της RBMY. Ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι & gt? 95% των μεταγραφών RBMY ανεστάλησαν σε pSUPER-680 και pSUPER-914 επιμολυσμένα κύτταρα HepG2, ενώ pSUPER-778 δεν είχε καμία επίδραση knockdown σε σύγκριση με κύτταρα επιμολυσμένα φορέα (Σχήμα 1Α).. ανάλυσης ανοσο-ιστοχημεία επιβεβαιώθηκε περαιτέρω αποτελεσματική εξουδετέρωση των RBMY σε pSUPER-680 και pSUPER-914 επιμολυσμένα κύτταρα (Εικ. 1Β). Οι φορείς του ιού μόνο μορφομετατροπείς εξέφρασαν παρόμοια επίπεδα RBMY σύγκριση με γονικά κύτταρα HepG2 και επομένως χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες για

in vitro πειράματα

κύτταρο.

(Α) Ποσοτική RT-PCR ανάλυση του RBMY σε γονικής (G2), τον φορέα πλασμίδιο (VC), pSUPER-680, pSUPER-778, και pSUPER-914 πλασμίδια επιμολυσμένα κύτταρα HepG2. (Β) Ανοσο-ιστοχημική χρώση των HepG2 και τα αντίστοιχα προϊόντα επιμόλυνσης για RBMY πρωτεΐνη. σχηματισμό (C) Αποικία της γονικής ή επιμολυσμένα κύτταρα HepG2 σε μαλακό άγαρ. (Δ) Ποσοστό της βιωσιμότητας των κυττάρων με ΜΤΤ μετά δοκιμασία 0.5 ή 0.75 mM υπεροξείδιο του υδρογόνου (H

2O

2) θεραπεία. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή ± SD σε τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα. *

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt?. 0.01

Η

Η δοκιμασία αγκυροβόλιο ανεξαρτησίας έδειξε ότι RBMY εκφράζουν κύτταρα HepG2 είχε ισχυρότερη κλωνογονικού ικανότητα σε σύγκριση με RBMY νοκ ντάουν κύτταρα (

p

& lt? 0,0001, μονόδρομη ANOVA). Οι αριθμοί αποικιών του pSUPER-680 και pSUPER-914 επιμολυσμένων κυττάρων σε μαλακό άγαρ μειώθηκαν κατά 45% και 40%, αντίστοιχα, σε σύγκριση με άδειο μορφομετατροπείς φορέα (Σχ. 1 C). σχηματισμό αποικίας των RBMY εκφράζουν pSUPER-778 επιμολύνσεις ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερα από ό, τι νοκ ντάουν επιμολύνσεων (680 έναντι 778,

σ

& lt? 0,0001? 914 έναντι 778,

σ

= 0.001).

Τα αντι-αποπτωτικά ικανότητες RBMY εκφράζουν και knockdown μορφομετατροπείς HepG2 αναλύθηκαν με δοκιμασία επιβίωσης μετά τη θεραπεία υπεροξείδιο του υδρογόνου. Σε σύγκριση με άδειο μορφομετατροπείς φορέα, η βιωσιμότητα των pSUPER-680 shRNA επιμολύνσεις με 0.5 ή 0.75 mM θεραπεία υπεροξειδίου του υδρογόνου μειώθηκε κατά 46% και 53% (

ρ

& lt? 0,05), αντίστοιχα, και εκείνες του pSUPER- 914 μορφομετατροπείς μειώθηκαν κατά 34% και 54% (

ρ

& lt? 0,05), αντίστοιχα (Εικόνα 1ϋ.). Η βιωσιμότητα των RBMY εκφράζουν μορφομετατροπείς pSUPER-778 ήταν 16-19% χαμηλότερη από εκείνη των επιμολύνσεων φορέα (

σ

= 0.5).

RBMY knockdown αύξησε την έκφραση του ανασταλτικού παραλλαγής υποδοχέα ανδρογόνων AR45 και μειωμένη δραστικότητα AR τρανς-ενεργοποιήσεως, ενώ RBMY υπερέκφραση κατέστειλε τα επίπεδα AR45

έχει αναφερθεί ότι SAM68, ως εναλλακτική ρυθμιστής ματίσματος και πρωτεΐνη αλληλεπίδρασης του RBMY, θα μπορούσε να ρυθμίζουν AR-ρυθμίζονται μεταγραφική δραστικότητα σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [ ,,,0],25]. Να εξετάσει κατά πόσον ο λόγος έκφρασης του AR και ανασταλτικών ισομορφή του AR45 επλήγησαν από RBMY, ημι-ποσοτική RT-PCR διεξήχθη για RBMY εκφράζουν ή νοκ ντάουν κύτταρα HepG2. ανάλυση πυκνότητας έδειξε τρεις φορές αύξηση των επιπέδων AR45 σε RBMY νοκ ντάουν επιμολύνσεων (pSUPER-680 και pSUPER-914) σε σύγκριση με το φορέα μόνο (VC) επιμολύνσεων (

σ

& lt? 0,05) (Εικ. 2Α) . επίπεδα AR45 σε γονικά κύτταρα HepG2 και pSUPER-778 μορφομετατροπείς ήταν παρόμοια με εκείνα σε επιμολυντές φορέα. Δεν υπήρξε καμία σημαντική αλλαγή στα επίπεδα AR μεταξύ RBMY εκφράζουν και νοκ ντάουν κύτταρα. Οι αναλογίες AR /AR45 σε RBMY νοκ ντάουν επιμολύνσεων (pSUPER-680 και pSUPER-914) μειώθηκαν κατά 2 έως 2,5 φορές σε σύγκριση με το φορέα μόνο (VC) επιμολύνσεων (Εικ. 2Α).

(Α ) Ημι-ποσοτική RT-PCR και πυκνομετρική ανάλυση RBMY, AR και AR45 σε γονική (G2), τον φορέα πλασμίδιο (VC), pSUPER-680, pSUPER-778, και pSUPER-914 πλασμίδια επιμολυσμένα κύτταρα HepG2. (Β) Η ποσοτική ανάλυση RT-PCR του RBMY, AR45, IGF-1 και IGFBP-3 σε RBMY knockdown μορφομετατροπείς (680 και 914) και μη-knockdown μορφομετατροπείς (VC και 778). Οι τιμές κανονικοποιήθηκαν ενάντια στην S26 εσωτερικού ελέγχου. Τα δεδομένα είναι μέσος όρος ± SD διπλώνει πάνω από τον φορέα ελέγχου (VC). ανάλυση (C) Ποσοτική RT-PCR του AR και AR45 τον έλεγχο των φορέων ή RBMY επιμολυσμένα κύτταρα Hep3B και Huh7. Τα δεδομένα είναι μέσος όρος ± SD διπλώνει πάνω από τον φορέα ελέγχου (VC). (D) Ημι-ποσοτική ανάλυση RT-PCR του RBMY στον όγκο (Τ) και μη-όγκου (Ν) μέρη του ανθρώπινου αρσενικού HCCs. S26 είναι ένα εσωτερικό έλεγχο και άλφα εμβρυοπρωτεΐνη (AFP) ως δείκτη όγκου. (Ε) ανοσο-ιστοχημική χρώση των πρωτεϊνών πυρηνικής RBMY σε ιστούς HCC μόνο (× 400). έκφραση (F) AR και AR45 mRNA σε 7 RBMY εκφράζουν και 5 μη-εκφράζουν ανθρώπινο αρσενικό HCC ιστούς. Τα αποτελέσματα ήταν ο μέσος όρος των τριών διαφορετικών πειραμάτων. *

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt?. 0.01

Η

Όπως AR45 αναφέρθηκε για την καταστολή AR δραστηριότητα trans-ενεργοποίησης [13], την έκφραση των γονιδίων στόχων AR IGF-1 και IGFBP-3 αξιολογήθηκε και συγκρίθηκε μεταξύ RBMY εκφράζουν και νοκ ντάουν HepG2 κύτταρα. ανάλυση Ποσοτική RT-PCR αποκάλυψε ότι RBMY knockdown κύτταρα εξέφρασαν υψηλά επίπεδα του AR45 αλλά σημαντικά μειωμένη IGF-1 (

ρ

& lt? 0,05) και IGFBP-3 (

ρ

& lt? 0,01) τα επίπεδα (Εικ. 2Β), δείχνοντας ότι RBMY νοκ ντάουν συσχετίζεται με αυξημένη έκφραση AR45 και καταστέλλεται δραστηριότητα AR.

Επιπλέον, η καταστολή της έκφρασης AR45 με υπερ-έκφραση RBMY επίσης αποδειχθεί σε κύτταρα Hep3B και Huh7. επίπεδα AR45 μειώθηκαν σε 42% το RBMY επιμολυσμένα Hep3B και 60% σε κύτταρα Huh7 (

σ

& lt? 0,05) (Εικ. 2C). Δεν υπήρξε καμία σημαντική αλλαγή στα επίπεδα AR μεταξύ RBMY-επιμολυσμένα και τα κύτταρα φορέα-επιμολυσμένα.

έκφραση RBMY σχετίζεται με μειωμένα επίπεδα AR45 και μικρότερες AR-CAG επαναλήψεις στο ανθρώπινο αρσενικό HCC ιστούς

Με βάση την τα προαναφερθέντα αποτελέσματα δείχνουν ότι η έκφραση RBMY συσχετίστηκε με τα επίπεδα χαμηλότερα AR45 στα κύτταρα HepG2, AR και εκφράσεις AR45 συγκρίθηκαν περαιτέρω σε RBMY εκφράζουν και μη εκφράζουν ανθρώπινο αρσενικό HCC ιστούς. Ημι-ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι RBMY ανιχνεύθηκε στο 35% (23/66) αρσενικούς ιστούς όγκου HCC, τα οποία επιβεβαιώθηκαν από την έκφραση του όγκου δείκτη άλφα εμβρυοπρωτεΐνη (Σχ. 2D). χρώσης ανοσο-ιστοχημική επιβεβαίωσε την πυρηνική έκφραση της RBMY μόνο σε ιστούς όγκων HCC (Εικ. 2Ε) .Το θετικό ρυθμό μεταγραφές RBMY ήταν 36% (16/44) σε HBV που σχετίζονται με HCC, το 40% (4/10) στην HCV φύσης που HCC, το 20% (1/5) σε ασθενείς με HBV /HCV που σχετίζονται με HCC, και το 29% (2/7) μη-ιικά σχετικές HCC. δεν υπήρχαν ανιχνεύσιμες μεταγραφές RBMY ή πρωτεϊνών στα τμήματα μη-όγκου των ιστών 66 HCC ήπατος.

Η έκφραση του AR και AR45 παραλλαγή σε επτά RBMY εκφράζουν και πέντε μη-εκφράζοντα αρσενικό ανθρώπινους ιστούς HCC προσδιορίστηκε από 2exp

(- ΔΔCt) μέθοδος για σχετική ποσοτικοποίηση. Τα επίπεδα mRNA σε ιστούς HCC κανονικοποιήθηκαν έναντι του εσωτερικού ελέγχου S26 και σε σύγκριση με τα επίπεδα σε φορέα μόνο HepG2 μορφομετατροπείς. Σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα AR45 ανιχνεύθηκαν σε RBMY εκφράζουν αρσενικό HCC σε σύγκριση με μη-RBMY εκφράζουν HCC ιστούς (

σ

& lt? 0,05) (Σχήμα 2F.), Γεγονός που αντανακλά την καταστολή RBMY για AR45 μεταγραφή. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά των επιπέδων AR μεταξύ RBMY εκφράζουν και μη εκφράζουν HCC ιστούς.

Για να εκτιμηθεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ RBMY και τη δραστηριότητα AR, το CAG-επανάληψη μήκος του γονιδίου AR, μια AR activity- σχετιζόμενους παράγοντες, προσδιορίστηκε σε RBMY εκφράζουν ή μη εκφράζοντας αρσενικό ανθρώπινους ιστούς HCC. Η μέση διάρκεια CAG-επανάληψης σε 49 HBV που σχετίζονται με ιστούς αρσενικό HCC (RBMY θετικών /αρνητικών = 17/32) ήταν σημαντικά μικρότερη σε εκείνους με ό, τι σε εκείνους που δεν έχουν έκφραση RBMY (21,0 ± 2,8 έναντι 22,9 ± 2,8,

p

& lt? 0,05). Η ένωση του CAG-επανάληψης μήκους και RBMY έκφρασης αποκάλυψε μια τάση της διαφοράς (21,4 ± 2,54 έναντι 22.7 ± 2.75,

σ

= 0,064), όταν είχαν συμπεριληφθεί μη-HBV HCC ιστούς (RBMY θετικών /αρνητικών = 23 /43).

RBMY διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν ηπατική λιπώδη αλλαγή και νεοπλασματικών βλαβών

καθορίστηκαν διαγονιδιακά ποντίκια με ήπαρ-ειδική έκφραση του RBMY (Σχ. 3Α). κηλίδας Western έδειξε χαμηλή έκφραση RBMY σε διαγονιδιακά ιδρυτές RF1 και RF2, αλλά το υψηλό επίπεδο RBMY στην RF4 και RF6 (Σχ. 3Β). Δεν υπήρχε διαγονιδιακά RBMY ανιχνεύθηκε στον εγκέφαλο, την καρδιά, τους νεφρούς, τους πνεύμονες, σπλήνα, στομάχι, όρχεις ή με RT-PCR (Σχ. 3C), υποδεικνύοντας μία ήπατος-ειδική έκφραση του RBMY σε διαγονιδιακά ποντίκια. Ποσοτική RT-PCR αποτελέσματα περαιτέρω υποστηρίζονται RF4 ως υψηλή ιδρυτής της έκφρασης (Εικ. 3D). χρώση IHC έδειξε ότι RBMY ήταν κυρίως βρίσκεται στον πυρήνα των διαγονιδιακών ποντικών ιστών του ήπατος (Εικ. 3Ε).

(Α) Genetic χάρτης της RBMY διαγονιδίου 4,2 kb, συμπεριλαμβανομένου ενός ηπατικού περιοχή ελέγχου τόπου από την απολιποπρωτεΐνη Ε γονίδιο (ApoE-HCR), ήπατος-ειδική α1-αντιθρυψίνης υποκινητή (haat-Pr), περικόπτεται παράγοντα IX ιντρόνιο (hFIX-ΙΑ), και το σήμα πολυαδενυλίωσης βόειας αυξητικής ορμόνης (bGHpA). (Β) ανάλυση Western blot των RBMY παρασκευάζονται από τα συκώτια των μεμονωμένων διαγονιδιακών (RF1-6, RF2-265, RF4-89, RF6) και ελέγχου (NT1, ΝΤ2) ποντίκια. (C) Liver-ειδική έκφραση του RBMY σε διαγονιδιακά ποντίκια με RT-PCR χρησιμοποιώντας ΟΑΡϋΗ ως εσωτερικός έλεγχος. Αντιδράσεις χωρίς εκμαγείο RNA (RTC) ή cDNA (NTC) ήταν αρνητικοί έλεγχοι. (D) Έκφραση RBMY σε διαγονιδιακά (RF1-176, RF1-278, RF2-62, RF2-390, RF4-19, RF4-21) και ελέγχου (ΝΤ1, ΝΤ2) ποντικούς με ποσοτική RT-PCR. (Ε) ανοσο-ιστοχημική χρώση των διαγονιδιακών (RF4-89) και ελέγχου (ΝΤ) ιστούς ποντικών ήπατος για RBMY. Τα διαγονιδιακά ποντίκια έδειξε πυρηνική χρώση για RBMY (× 400). (F) κόκκινη βαφή Oil έδειξε ηπατική λιπώδη αλλαγές σε ποντίκια ελέγχου (NT1 και ΝΤ2), χαμηλή RBMY (RF2-62 και RF2-390) και υψηλή RBMY (RF4-19 και RF4-21) διαγονιδιακά ποντίκια (× 400).

Το ηπατοκυτταρικό αλλαγές αναλύθηκαν από τα τμήματα του ήπατος των 79 διαγονιδιακά ποντίκια και 30 του ελέγχου FVB /Ν ποντίκια. Υψηλή RBMY εκφράζουν ιδρυτές RF4 (RF4-19 και RF4-21) εμφανίζεται πιο σοβαρή λιπαρών καταθέσεων από το χαμηλό RBMY εκφράζουν ιδρυτές RF2 (RF2-62 και RF2-390) (Εικ. 3F). Σε RBMY διαγονιδιακά ποντίκια, η συχνότητα εμφάνισης της ανάπτυξης μέτριας έως σοβαρή ηπατική στεάτωση ήταν 60-89% (μέσος όρος 73%), που ήταν περίπου 2,5 φορές υψηλότερη από εκείνη της ομάδας ελέγχου (κατά μέσο όρο 30%,

ρ

& lt? 0.001) (Πίνακας 1). έκφραση RBMY δεν αύξησε ίνωση ή κίρρωση στο διαγονιδιακό μοντέλο ποντικών.

Η

Μεταξύ των 45 διαγονιδιακά ποντίκια τα οποία ήταν ηλικίας άνω των 15 μήνες, τρεις από αυτούς ανέπτυξε ηπατική καρκινικές αλλοιώσεις (Πίνακας 1). Ένα οζίδιο (διαμέτρου 1 mm) βρέθηκε στο δεξιό λοβό του RF1-278 ποντικού (15 μήνες) και ιστολογική εξέταση αποκάλυψε ένα προ-νεοπλασματικής βλάβης (Εικ. 4Α-C). Το ποντίκι RF4-21 (24 μήνες) είχαν οζίδιο αδένωμα (4 mm σε διάμετρο) στο δεξιό λοβό (Σχ. 4D-F), ενώ RF2-390 (21 μήνες) είχε μέτρια διαφοροποιημένο HCC (διαμέτρου 6 mm) στο κεντρικό λοβό (Σχ. 4G-I). Μεσαία έως σοβαρή λιπαρών μεταβολές παρατηρήθηκαν στα τμήματα του όγκου των τριών ποντικών. Κανένας από 17 ποντίκια ελέγχου, ηλικίας άνω των 15 μηνών που αναπτύχθηκε ηπατική καρκινικές βλάβες.

(Α-Γ) Η προ-νεοπλασματικής βλάβης σε ένα 15-μηνών αρσενικό RF1-278 ποντίκι. (D-F) αδένωμα (AD) σε 24-μηνών θηλυκό RF4-21 ποντίκι. (G-Ι) HCC σε ένα 21-μηνών αρσενικό RF2-390 ποντίκι. Μεγέθυνση: B, E, H, Χ 50? C, F, I, × 200.

Η

RBMY επιτάχυνση διαιθυλικό νιτροζαμινών που προκαλείται ηπατοκαρκινογένεσης

Τα αποτελέσματα προαγωγής του καρκίνου της RBMY περαιτέρω αξιολογήθηκε στο μοντέλο χημική καρκινογένεση. Λόγω της υψηλής ευαισθησίας των αρσενικών ποντικών να DEN, αρσενικό ομάδες θυσιάστηκαν στις 14 εβδομάδες μετά τη θεραπεία. Μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης καρκινικές βλάβες παρατηρήθηκε σε διαγονιδιακά αρσενικά ποντίκια σε σύγκριση με εκείνη στην ομάδα ελέγχου (12/14 έναντι 5/12,

ρ

& lt? 0,05). Σε 34 εβδομάδες μετά τη θεραπεία, αρσενικό RBMY διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν περισσότερο όγκους με διάμετρο & gt? 3 mm σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (52 έναντι 19,

ρ

& lt? 0,05) (Πίνακας 2). Υπήρξε επίσης μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης δοκιδωτού καρκινικές βλάβες στα θηλυκά διαγονιδιακά ποντίκια σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου σε 26 εβδομάδες (7/9 έναντι 1/10,

ρ

& lt? 0,01) και 34 εβδομάδες (9/10 έναντι 3/13,

σ

& lt?. 0.01) θεραπεία μετά DEN (Πίνακας 2)

η

Συζήτηση

RBMY θεωρείται ως όρχεις ειδικά μάτισμα παράγοντας στην σπερματογένεση [22], [23]. Έχει αναφερθεί ότι εκφράζεται σε περισσότερο από το ένα τρίτο των ανθρώπινων ιστών αρσενικών HCC [24]. Αυτή η μελέτη αποδεικνύει περαιτέρω ότι RBMY knockdown συσχετίζεται με αυξημένη έκφραση παραλλαγή AR45 και μειωμένη αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη και αντι-αποπτωτικό ικανότητες της ανθρώπινης κυτταρικής γραμμής ηπατώματος HepG2. AR45 ισομορφή έχει αναφερθεί ότι δρα ως κυρίαρχο-αρνητικό αναστολέα της λειτουργίας AR μέσω του σχηματισμού AR-AR45 ετεροδιμερή [13]. Μπορούμε επίσης να αποδείξει ότι RBMY νοκ ντάουν μειώνει την δραστηριότητα τρανς-ενεργοποίηση AR σε κύτταρα HepG2. Ως εκ τούτου, RBMY μπορεί να λειτουργήσει ως ένα αρσενικό-ειδικό ογκογονίδιο και να αυξήσει τον κίνδυνο ανθρώπινου αρσενικού ηπατοκαρκινογένεσης μέσω της ρύθμισης της γονιδιακής έκφρασης AR και δραστηριότητας.

Το γονίδιο AR, αντί ανδρογόνων, έχει δειχθεί ότι παίζει βασικό ρόλο στο αρσενικό επικράτηση του HCC σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού HBV [17]. Ανθρώπινη AR αποτελείται από Ν τερματικό πεδίο μετενεργοποίησης, ένα κεντρικό πεδίο σύνδεσης ϋΝΑ, και ένα πεδίο σύνδεσης συνδετήρα τερματικού C. AR45, ένα φυσικό μορφή παραλλαγής του ανθρώπινου υποδοχέα ανδρογόνων, δεν έχει την Ν-τελική περιοχή που απαιτείται για την πλήρη συνδέτη ενεργοποιείται μεταγραφική δραστηριότητα [13]. Η αντίστροφη συσχέτιση των AR και AR45 έκφραση έχει παρατηρηθεί στην ανθρώπινη καρδιά και τους μυϊκούς ιστούς με τα υψηλότερα επίπεδα των AR45 και τα χαμηλότερα επίπεδα των AR [13]. Σε αυτή τη μελέτη, RBMY knockdown αυξήσεις έκφραση του AR45 σε ανθρώπινα κυτταρική γραμμή ηπατώματος HepG2, ενώ RBMY υπερέκφραση μειώνει τα επίπεδα AR45 σε κυτταρικές σειρές Hep3B και Huh7. Επιπλέον, RBMY-θετικό ανθρώπινο αρσενικό HCC ιστοί εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα AR45 σε σύγκριση με RBMY αρνητικά HCC. Η προς τα κάτω ρύθμιση των γονιδίων στόχων AR IGF-1 και IGFBP-3 σε RBMY knockdown κύτταρα HepG2 περαιτέρω απεικονίζει την ενισχυτική επίδραση του RBMY επί AR δραστηριότητα τρανς-ενεργοποιήσεως. HBV Χ πρωτεΐνη έχει αναφερθεί ότι λειτουργεί ως ιός κωδικοποιεί AR συν-ενεργοποιητή που συμβάλλει σημαντικά στην ανδρική υπεροχή του HBV που σχετίζονται με την ανθρώπινη HCC [16]. Ωστόσο, αυτό δεν μπορεί να εξηγήσει την ανισότητα των δύο φύλων μη-HBV που σχετίζονται με HCC. Παρόμοια αναλογία της έκφρασης RBMY του HBV που σχετίζονται με HCV που σχετίζονται, και μη-ιικά σχετίζονται αρσενικό HCCs υποδεικνύει ότι RBMY μπορεί να είναι ένας κοινός παράγοντας κινδύνου αυξάνοντας αρσενικό ευαισθησία για καρκίνο του ήπατος. Τα ευρήματά μας παρέχουν ένα νέο μηχανισμό ερμηνεύοντας το αρσενικό επικράτηση σε όλους τους τύπους των καρκίνων του ήπατος μέσω του γονιδίου RBMY χρωμόσωμα-ειδικών Υ.

Το AR45-ειδικό εξόνιο 1Β βρίσκεται μεταξύ του πρώτου και του δεύτερου εξώνια του γονιδίου AR. Δύο υποθετικά ρυθμιστικούς μηχανισμούς για τη σύνθεση AR45 έχουν προταθεί, συμπεριλαμβανομένης μιας μεταγραφικό έλεγχο με μια νέα υποκινητή ανοδικά του εξονίου 1Β ή εναλλακτικό μάτισμα συμβάν [13]. RBMY ενεργεί ως όρχεις ειδικό ρυθμιστή μάτισμα και φέρεται αλληλεπιδρά με RNA-πρωτεΐνη σύνδεσης SAM68 στους όρχεις [26]. SAM68 είναι ένα πανταχού παρόν ρυθμιστής ματίσματος και επίσης ένας προς τα κάτω στόχος του μονοπατιού σηματοδότησης Src [28], [29]. Κατά συνέπεια, είναι πολύ σαφές αν ή όχι RBMY είτε ρυθμίζει άμεσα AR45 μεταγραφής /μάτισμα ή μέσω αλληλεπίδρασης με SAM68. Επιπλέον, SAM68 θεωρείται AR συν-ενεργοποιητή, καθώς μπορεί να ρυθμίζουν AR μεταγραφική δραστικότητα σε καρκίνους του προστάτη [25]. Η οδός σηματοδότησης Src έχει επίσης δειχθεί ότι είναι κρίσιμη για την πρωτεΐνη μεσολάβηση ενίσχυση HBV Χ της λειτουργίας AR [30]. Είτε RBMY εμπλέκεται στην SAM68 μεσολάβηση οδού σηματοδότησης Src είναι μια ενδιαφέρουσα θέμα που πρέπει να μελετηθεί στο μέλλον.

Η ογκογονικότητα των RBMY έχει δειχθεί από τον μετασχηματισμό των ινοβλαστών ποντικού ΝΙΗ3Τ3 κυτταρική γραμμή [24]. Αυτή η μελέτη δείχνει επίσης ότι RBMY ενισχύει το συκώτι καρκινογένεση

in vivo

σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού. Τα αναφερόμενα ποσοστά αύξησης αυθόρμητη όγκο ήπατος είναι 3% και 0% σε 24 μηνών αρσενικών και θηλυκών άγριου τύπου FVB Ν ποντίκια /, αντίστοιχα [31]. RBMY διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν όγκους ήπατος σε 8,7% (2/23) των αρσενικών και 4.5% (1/22) των θηλυκών ποντικών ηλικίας άνω των 15 μηνών, η οποία είναι περισσότερο από 2 φορές υψηλότερη από ό, τι οι αυθόρμητες συχνότητες εμφάνισης ηπατικών όγκων.

στο μοντέλο του DEN-επαγόμενης ηπατοκαρκινογένεσης, η σημασία του RBMY ενισχυτικό αποτέλεσμα επί του σχηματισμού καρκινική βλάβη παρατηρείται ήδη 14 εβδομάδες μετά τη θεραπεία σε αρσενικούς διαγονιδιακούς ποντικούς. Επιπλέον, μεγαλύτερους όγκους (διαμέτρου ≥3 mm) που έχει αναπτυχθεί σε διαγονιδιακά αρσενικά ποντίκια σε 34 εβδομάδες, δείχνοντας βελτίωση RBMY στο DEN-επαγόμενη ηπατοκαρκινογένεσης. Ακόμη και θηλυκά ποντίκια RBMY διαγονιδιακά επίσης έχουν αυξηθεί σημαντικά συχνότητα εμφάνισης καρκινικές βλάβες και στα δύο 26 και 34 εβδομάδες μετά τη θεραπεία. Αν και οι άγριου τύπου θηλυκά ποντίκια είναι ανθεκτικά σε DEN καρκινογένεση λόγω του προστατευτικού αποτελέσματος των οιστρογόνων μεσολάβηση αναστολή της παραγωγής IL-6 από τα κύτταρα Kupffer [32], [33], τα αποτελέσματα εδώ καταδεικνύουν την παράδοση και την ενεργοποίηση ενός αρσενικού-ειδική RBMY γονίδιο επιταχυνόμενη ανάπτυξη καρκίνου του ήπατος, ακόμη και σε θηλυκά διαγονιδιακά ποντίκια.

εν κατακλείδι, RBMY knockdown προκαλεί ανασταλτικές επιδράσεις στη μεταμόρφωση και αντι-αποπτωτική ικανότητες του κυτταρική γραμμή ανθρώπινου ηπατώματος HepG2. Η ανασταλτική επίδραση του RBMY στα επίπεδα AR45 καταδεικνύεται στο RBMY knockdown κυττάρων HepG2 και RBMY υπερ-εκφράζοντα κύτταρα Hep3B και Huh7. Ως εκ τούτου, η ογκογόνος μηχανισμός RBMY μπορεί να συνδέεται με ρύθμιση της δραστικότητας AR τρανς-ενεργοποιήσεως από την αύξηση της παραλλαγής AR45, τον αναστολέα του AR. έκφραση AR45 ανιχνεύεται σε RBMY-εκφράζουν ανθρώπινο αρσενικό HCC είναι επίσης σημαντικά χαμηλότερη σε σύγκριση με μη-εκφράζοντα ιστούς HCC. Επιπλέον, RBMY επιδεικνύει δραστικότητα προαγωγής όγκων

in vivo

σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικών και επιταχύνει την ανάπτυξη των νεοπλασματικών βλαβών σε diethylnitrosamine επαγόμενης ηπατοκαρκινογένεσης ζωικό μοντέλο. Η καρκινογόνος επίδραση στην κυτταρική γραμμή ηπατώματος και ανθρώπινους ιστούς HCC, μαζί με το

in vivo

προαγωγή όγκων στα διαγονιδιακά ποντίκια, παρέχει μια νέα ρόλος του RBMY ως αρσενικό-ειδικό ογκογονιδίου για να εξηγήσει το αρσενικό επικράτηση του καρκίνου του ήπατος.

Υποστήριξη Πληροφορίες

πίνακα S1.