Αφηρημένο

Δεν υπάρχει σήμερα τεράστιο ενδιαφέρον για την ανάπτυξη θεραπευτικών αντικαρκινική στόχευση κυττάρων μονοπάτια σημαντικό τόσο για το μεταβολισμό των καρκινικών κυττάρων και την ανάπτυξη σηματοδότησης. Αρκετές επιδημιολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι οι διαβητικοί ασθενείς που λαμβάνουν μετφορμίνη έχουν μειωμένη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του παγκρέατος. Αυτό ώθησε τις προσπάθειες για την αξιολόγηση μετφορμίνη, ένα φάρμακο με αμελητέα τοξικότητα, ως θεραπευτικό τροπικότητα σε καρκίνο του παγκρέατος. Προκλινικές μελέτες σε ξενομοσχεύματα γραμμή κυττάρων και μία μελέτη σε ασθενείς που προέρχονται από ξενομόσχευμα (PDX) μοντέλα ήταν ελπιδοφόρα, ενώ πρόσφατα δημοσιευμένες κλινικές δοκιμές έδειξαν κανένα όφελος από την προσθήκη μετφορμίνης σε αγωγές θεραπείας συνδυασμού για τοπικά προχωρημένο και μεταστατικό καρκίνο του παγκρέατος. έχουν PDX μοντέλα στα οποία οι όγκοι ασθενής μεταμοσχευμένα απευθείας σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς έχει δειχθεί ότι είναι εξαιρετική προκλινικά μοντέλα για βιοδεικτών ανακάλυψη και ανάπτυξη θεραπευτικών. Αξιολογήσαμε την απόκριση των τεσσάρων γραμμών όγκου PDX στην αγωγή με μετφορμίνη και διαπίστωσε ότι και οι τέσσερις γραμμές μας PDX ήταν ανθεκτικά στη μετφορμίνη. Βρήκαμε ότι οι μηχανισμοί της αντοχής μπορεί να συμβεί λόγω της έλλειψης παρατεταμένης ενεργοποίησης αδενοσίνης μονοφωσφορικής ενεργοποιημένης πρωτεϊνικής κινάσης (AMPK) ή κατάντη επανενεργοποίηση του στόχου της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR). Επιπλέον, συνδυασμένη θεραπεία με μετφορμίνη και αναστολείς mTOR απέτυχε να βελτιώσει τις απαντήσεις σε κυτταρικές σειρές, η οποία δείχνει περαιτέρω ότι η μετφορμίνη μόνη της ή σε συνδυασμό με αναστολείς mTOR θα είναι αναποτελεσματική σε ασθενείς, και ότι η αντίσταση στη μετφορμίνη μπορεί να προκύψει μέσω πολλαπλών οδών. Περαιτέρω μελέτες απαιτούνται για την καλύτερη κατανόηση αυτών των μηχανισμών αντίστασης και την ενημέρωση των δυνητικών θεραπειών συνδυασμό με μετφορμίνη και των υφιστάμενων ή νέων θεραπευτικών

Παράθεση:. Lipner MB, Marayati R, Ντενγκ Υ, Wang Χ, Raftery L, O’Neil BH, et al. (2016) Έχει μετφορμίνη θεραπεία δεν αναστέλλουν την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος ξενομοσχευμάτων που λαμβάνονται από ασθενή. PLoS ONE 11 (1): e0147113. doi: 10.1371 /journal.pone.0147113

Επιμέλεια: Marie-Josée Boucher, Université de Sherbrooke, Καναδάς

Ελήφθη: 25 Ιούλη του 2014? Αποδεκτές: 29 Δεκέμβρη, 2015? Δημοσιεύθηκε: 13η Ιανουαρίου, 2016

Copyright: © 2016 Lipner et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:.. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από την Lineberger Περιεκτική Κέντρο Καρκίνου (BHO) και CA140424 και CA193650 (JJY) από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο επιθετική και θανατηφόρα κακοήθειες, με το 80% των ασθενών που προσέρχονται με τοπικά προχωρημένο ή μεταστατική νόσο που προμηνύει ένα 6-12 μηνών διάμεση επιβίωση και μελαγχολική 6% ποσοστό πενταετούς επιβίωσης [1]. Η χημειοθεραπεία προκαλεί μόνο μέτριες βελτιώσεις στην επιβίωση, και νέες θεραπείες χρειάζονται απεγνωσμένα να βελτιώσει τις θεραπευτικές επιλογές για αυτό το μεγάλο πληθυσμό ασθενών [2]. Υπάρχει επί του παρόντος τεράστιο ενδιαφέρον για την ανάπτυξη αντικαρκινικών θεραπευτικών που στοχεύουν μονοπάτια κυτταρικής σηματοδότησης σημαντικό τόσο μεταβολισμό των κυττάρων και την ανάπτυξη των κυττάρων [3]. αδενοσίνη-ενεργοποιημένη πρωτεϊνική κινάση (ΑΜΡΚ) οδός της 5 ‘έχει κερδίσει αυξανόμενο ενδιαφέρον, όπως ΑΜΡΚ αναστέλλει φυσιολογικά το στόχο της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR) να διατηρεί την ομοιόσταση σε συνθήκες μειωμένης διαθέσιμες πηγές κυτταρικής ενέργειας [4, 5]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η σηματοδότηση mTOR παίζει βασικό ρόλο στην επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό των κακοήθων κυττάρων [6, 7]. Έτσι, ΑΜΡΚ ενεργοποιητές έχουν δημιουργήσει ουσιαστικό ενδιαφέρον ως πιθανοί αντινεοπλασματικοί παράγοντες που λειτουργούν αλλάζοντας το μεταβολισμό και αναστέλλοντας το μονοπάτι mTOR [3].

Η μετφορμίνη είναι ο παράγοντας πρώτης γραμμής για τη θεραπεία του σακχαρώδους διαβήτη τύπου 2. Η μετφορμίνη αναστέλλει μιτοχονδριακή οξειδωτική φωσφορυλίωση, αυξάνοντας έτσι την αναλογία του ΑΜΡ σε ΑΤΡ [8, 9]. Υψηλά επίπεδα ΑΜΡ ενεργοποιούν ΑΜΡΚ, η οποία στη συνέχεια αναστέλλει οδούς που καταναλώνουν ενέργεια, όπως σύνθεση πρωτεΐνης, εν μέρει από ρύθμιση προς τα κάτω σηματοδότηση mTOR με άμεση φωσφορυλίωση του καταστολέα όγκου TSC2 και του εταίρου δέσμευσης mTOR Raptor [9-13]. Η κατάσταση της διατήρησης της ενέργειας που προκαλείται από τη μετφορμίνη έχει προταθεί για να εξηγήσουν την κυτταροστατική επίδραση της μετφορμίνης για τον καρκίνο [9] και την προφανή προστατευτική δράση που παρατηρείται σε διαβητικούς ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με μετφορμίνη ο οποίος στη συνέχεια να αναπτύξουν καρκίνο του παγκρέατος [14].

αρκετές επιδημιολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι οι ασθενείς με διαβήτη που λαμβάνουν μετφορμίνη έχουν μειωμένη συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του παγκρέατος [14-17]. Αυτό ώθησε μεγάλη ενθουσιασμό για την αξιολόγηση μετφορμίνη, ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο φάρμακο με αμελητέα τοξικότητα, ως θεραπευτικό τροπικότητα σε καρκίνο του παγκρέατος. Υπάρχουν επί του παρόντος 3 κλινικές δοκιμές αξιολόγησης μετφορμίνη σε συνδυασμό με διάφορα χημειοθεραπευτικά σχήματα σε καρκίνο του παγκρέατος (cancer.gov/clinicaltrials). Προκλινικές μελέτες σε ξενομοσχεύματα κυτταρικής γραμμής και μια πρόσφατη μελέτη σε ξενομοσχεύματος που λαμβάνονται από ασθενή (PDX) μοντέλα έχουν δείξει υπόσχεση [18-22].

PDX μοντέλα στα οποία οι όγκοι ασθενής μεταμοσχευμένα απευθείας σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς έχει δειχθεί ότι Ανακεφαλαιώνοντας πρωτογενούς όγκου αρχιτεκτονική και τα γενετικά χαρακτηριστικά, ακόμη και μετά από ανακαλλιέργεια και τη διεύρυνση των όγκων σε διαδοχικές γενεές των ποντικών [23, 24]. Επιπλέον, τα μοντέλα PDX είναι ανώτερα παραδοσιακές ξενομοσχεύματα κυτταρικής σειράς, τα οποία είναι προσαρμοσμένα να in vitro ανάπτυξη και στερούνται την ετερογένεια των όγκων των ασθενών, για την αξιολόγηση των απαντήσεων σε θεραπείες και νέων βιολογικών δεικτών [23-27]. Μέχρι πρόσφατα, υπήρξαν πολύ περιορισμένες μελέτες των απαντήσεων PDX σε πολλούς προτεινόμενη ογκολογική παράγοντες, και τα αποτελέσματα για μεταβολικές θεραπείες, όπως η μετφορμίνη είναι ακόμα σημαντική έλλειψη [27]. Έτσι, ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η ανταπόκριση του καρκίνου του παγκρέατος μοντέλα PDX στην μετφορμίνη και για τη διερεύνηση του μηχανισμού μετφορμίνη της δράσης και την αντισταθμιστική αντίσταση μονοπάτια.

Υλικά και Μέθοδοι

Ναρκωτικών και αντιδραστήρια

η υδροχλωρική μετφορμίνη (Spectrum, New Brunswick, NJ, USA) διαλύθηκε σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) για τόσο in vitro όσο και in vivo μελέτες. Η ραπαμυκίνη (LC Laboratories, Woburn, MA, USA) και BEZ235 (Κέντρο Ολοκληρωμένης Chemical Biology and Drug Discovery, UNC Eshelman Τμήμα Φαρμακευτικής, Chapel Hill, NC, USA) διαλύθηκαν σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) για μελέτες in vitro θεραπεία συνδυασμού . Αντισώματα έναντι φωσφορυλιωμένης AMPKα (Thr172), AMPKα, AMPKα1, AMPKα2, φωσφορυλιωμένη mTOR (Ser2448), mTOR, φωσφορυλιωμένη p70S6K (Thr389), p70S6K, φωσφορυλιωμένη 4E-BP1 (Thr37 /46), και 4Ε-BP1 ήταν από την Cell Signaling (Beverly , MA, USA). Αντι-φωσφορική αφυδρογονάση γλυκεραλδεΰδης (GAPDH) και συζευγμένη με ραφανιδική υπεροξειδάση κατσίκας αντι-κουνελιού IgG ήταν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Pierce® ECL Western Blotting υπόστρωμα από Thermo Scientific (Rockford, IL, USA). Apo-ΕΝΑ Ομογενή kit Caspase-3/7 δοκιμασία ήταν από την Promega (Madison, WI, USA).

Κυτταρική καλλιέργεια και μεταγωγή με φακοϊό

Ο καρκίνος του παγκρέατος κυτταρικές γραμμές Capan-2, CFPAC- 1, ΗΡΑΡ-ΙΙ, και SW1990 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC), επικυρώνονται μέσω βραχείας διαδοχική επανάληψη (STR) προφίλ (Genetica, Burlington, NC, USA), και αρνητικές για μυκόπλασμα με έμμεση χρώση. Οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), 100 U /ml πενικιλίνη, και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη (Invitrogen, Carlsbad, California, USA) στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO2 ατμόσφαιρα.

Ο τομέας πουρομυκίνης του πλασμιδίου αναφοράς AMPKα1-859 pLKO.1 (γενναιόδωρα δώρισε από το εργαστήριο του Channing Der, διδάκτορας του Πανεπιστημίου της Βόρειας Καρολίνας, Chapel Hill, NC, USA) αντικαταστάθηκε με ένα βλαστισιδίνη τομέα με πέψη ενζύμου περιορισμού με BamHl και KpmI. Η δεύτερη γενιά ανίκανος αναδιπλασιασμού lentivirus παρήχθη σε κύτταρα 293Τ με μια τέσσερις-πλασμιδίου σύστημα: το πλασμίδιο αναφοράς, pMDL gag /pol RRE, pRSV-Rev, pCMV και VSV-G. Για μεταγωγή με φακοϊό, 1 × 10

6 CFPAC-1 και ΗΡΑΡ-ΙΙ κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 100 mm, με φακοϊό και μια τελική συγκέντρωση πολυβρενίου 8 μg /mL. Μετά από 24 ώρες, το μέσο αντικαταστάθηκε, και τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν επί άλλες 4 ημέρες, με 2 μg /ml πουρομυκίνης ή 10 ημέρες με 10 μg /ml του βλαστισιδίνη. Τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν και αναλύθηκαν με στύπωση western για τον προσδιορισμό του γονιδίου knockdown.

Ο φορέας έκφρασης για myc-mTOR παροδική υπερέκφραση ελήφθη από Addgene (πλασμίδιο 1861, Cambridge, ΜΑ, USA). Η επιμόλυνση του 5×10

5 CFPAC-1 ή ΗΡΑΡ-ΙΙ κύτταρα διεξήχθη με Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, California, USA) χρησιμοποιώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά 24 ώρες επώασης, τα επιμολυσμένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5 mM μετφορμίνη για επιπλέον 24 ώρες, στο οποίο σημείο τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, συλλέχθηκαν με απόξεση, και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την απομόνωση της πρωτεΐνης.

ΜΤΤ προσδιορισμός για κυτταρικό πολλαπλασιασμό

για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά από φαρμακευτικές αγωγές, 5×10

3 κύτταρα επιστρώθηκαν εις τετραπλούν σε πλάκες 96 φρεατίων σε 200 μΐ RPMI 1640 και καλλιεργούνται όλη τη νύκτα. Το μέσο στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο που περιείχε είτε PBS ως μάρτυρα οχήματος, μετφορμίνη (0-5 mM), ή μετφορμίνη συν είτε ραπαμυκίνη (0-80 μΜ) ή BEZ235 (0-1 μΜ). Μετά από μία επιπλέον επώαση 48 ωρών, 50 μΙ από 5 mg /mL βρωμιούχο 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλ τετραζόλιο (ΜΤΤ) διαλυμένο σε PBS σε ρΗ 7.4 προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Μετά από 1 ώρα επώασης, το μέσο καλλιέργειας και το αντιδραστήριο ΜΤΤ αναρροφήθηκε και 200 ​​μΙ διμεθυλοσουλφοξειδίου προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και αναμιγνύονται πλήρως. Η απορρόφηση στα OD560 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας αναγνώστη Synergy 2 πλάκας (BioTek, Winooski, VT, USA). Σχετική πολλαπλασιασμό σε κάθε συγκέντρωση φαρμάκου υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο: 100% * (πειραματική OD560 /όχημα OD560). Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση ANOVA με δοκιμή πολλαπλών συγκρίσεων του Dunnett. Για τις μελέτες θεραπεία συνδυασμού, η συνέργεια αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό Compusyn που χρησιμοποιεί την αρχή Chou-Talalay μέσου αποτελέσματος (ComboSyn, Inc. Paramus, NJ, USA). Όλες οι δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

συνθήκες κηλίδος Western

Μετά τον προκαθορισμένο χρόνο επώασης με μετφορμίνη, τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, συλλέχθηκαν με απόξεση και στη συνέχεια λύθηκαν σε 200 μL ρυθμιστικό RIPA που περιέχει 50 mM Tris-HCl (ρΗ 7,4), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% Triton Χ, 1 mM NaF, και αναστολείς πρωτεάσης δεοξυχολικό και Na 0,25%. Εκχυλίσματα πρωτεΐνης (30 μg) ηλεκτροφορήθηκαν σε πηκτές SDS πολυακρυλαμιδίου 10% και ηλεκτρομεταφέρθηκαν σε διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (PVDF) μεμβράνες. Για τον προσδιορισμό της knockdown του AMPKα1 και AMPKα2, οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο ξηρό γάλα σε ρυθμισμένο με Τπδ αλατούχο διάλυμα και στη συνέχεια επωάζονται όλη τη νύκτα στους 4 ° C με 1: 1000 αραιώσεις των αντι-AMPKα1, αντι-AMPKα2, και αντι- AMPKα αντισώματα. Για κυττάρων και ιστών λύματα απομονώθηκε μετά από θεραπείες με μετφορμίνη, οι μεμβράνες επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύχτα με 1: 1000 αραιώσεις αντι-φωσφο-mTOR, αντί-mTOR, αντι-φωσφο-p70S6K, αντι-p70S6K, αντι-φωσφο-4ε- BP1, αντι-4E-BP1, αντι-φωσφο-AMPKα, και αντι-ΑΜΡΚ αντισώματα. Οι μεμβράνες στη συνέχεια πλύθηκαν και επωάστηκαν με αραίωση 1: 5000 του χρένου συζευγμένο με υπεροξειδάση δευτερογενές αντίσωμα αντι-κουνελιού κατσίκας (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Ανοσοαντιδραστικές ζώνες ανιχνεύθηκαν με χημειοφωταύγεια χρησιμοποιώντας το Pierce® ECL Western Blotting Substrate. Ένταση κάθε ανοσοδραστική ζώνη ποσοτικοποιήθηκε με πυκνομετρία χρησιμοποιώντας λογισμικό J εικόνας (ΝΙΗ, Bethesda, Maryland, USA), και εκφράζεται σε σχέση με τις PBS-επεξεργασμένα κύτταρα ή ποντίκια. GAPDH χρησιμοποιήθηκε για να διασφαλίσει ισοδύναμο φορτίο πρωτεΐνης. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας Φοιτητών

t

-ΜΕΛΕΤΕΣ για δύο συγκρίσεις δείγματος και μονόδρομη ανάλυση ANOVA με δοκιμή πολλαπλών συγκρίσεων του Dunnett για τρεις ή περισσότερες συγκρίσεις δείγμα.

PDX επέκτασης ομάδα

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα ιστών από ασθενείς αποχαρακτηριστούν με εντοπισμένο καρκίνο του παγκρέατος οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπευτική χειρουργική εκτομή ελήφθησαν από το Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας Διοικητικού κριτική Θεσμική (IRB) εγκεκριμένη εγκατάσταση προμήθεια ιστών μετά IRB έγκριση (08-1153). Όγκου ιστός μεταμοσχευτεί υποδορίως στα πλευρά των ποντικιών NSG /NOD, επεκτάθηκαν και περάστηκαν την πάροδο του χρόνου, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28, 29]. 7-8 εβδομάδων Νυ /ηυ ποντικών με μέσο βάρος 18-20 g χρησιμοποιήθηκαν σε όλα τα πειράματα. Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις ΗΠΑ Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (NIH) Οδηγός για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου υπό πρωτόκολλα εγκεκριμένα από το Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας Θεσμικών φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήση (12-314).

θεραπεία μετφορμίνη της PDX ομάδα

η θεραπεία ξεκίνησε μετά από μεταμοσχευμένα όγκοι αναπτύχθηκαν σε ένα μέσο μέγεθος όγκου 108 mm

3. Τουλάχιστον πέντε ποντικοί συμπεριελήφθησαν σε κάθε ομάδα θεραπείας για κάθε γραμμή όγκου PDX. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με μετφορμίνη (200 ή 400 mg /kg) ή PBS (20 μΙ /g) από μία φορά την ημέρα από του στόματος καθετηριασμό. Η πρώτη ημέρα της αγωγής ορίστηκε ως ημέρα 0 και η θεραπεία συνεχίστηκε για 28 ημέρες. Ο όγκος του όγκου (V) μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα χρησιμοποιώντας δαγκάνες, και υπολογίζεται ως (μήκος Χ πλάτος

2) /2. σωματικά βάρη των ζώων μετρήθηκαν μία φορά την εβδομάδα. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση ANOVA με δοκιμή πολλαπλών συγκρίσεων του Dunnett. Ιστός όγκου συλλέχθηκε δύο ώρες μετά την τελευταία θεραπεία και κόβονται σε δύο μέρη: το ένα μέρος ήταν καταψύχθηκαν ακαριαία σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την απομόνωση πρωτεϊνών, ενώ το δεύτερο μέρος σταθεροποιήθηκε σε 10% φορμαλίνη και βυθίσθηκαν σε παραφίνη ( FFPE). κομμάτια ιστού FFPE κόπηκαν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για ιστοπαθολογική αξιολόγηση.

Αποτελέσματα

Η μετφορμίνη δεν αναστέλλει την ανάπτυξη των όγκων PDX

Αξιολογήσαμε την απόκριση των τεσσάρων καρκίνου του παγκρέατος γραμμές όγκου PDX για μετφορμίνη (200 και 400 mg /kg) για 28 ημέρες. Αυτές οι δόσεις επιλέχθηκαν ως και υψηλότερες δόσεις έχει αποδειχθεί ότι είναι αναγκαία σε ποντίκια για να παράγουν μια μείωση της γλυκόζης στο αίμα σε διαβητικά ζώα [19, 30, 31]. Επιπλέον, υψηλότερες δόσεις μετφορμίνης (0.1% β /β) έχει αποδειχθεί ότι αυξάνουν την μακροβιότητα των ποντικών [32]. Αριθ αναστολή της ανάπτυξης του όγκου ή υποχώρηση παρατηρήθηκε σε οποιαδήποτε από τις τέσσερις γραμμές όγκου PDX σε οποιοδήποτε χρονικό σημείο που μετράται (Εικόνα 1). Καμία αλλαγή στο βάρος σώματος συνέβη κατά τη διάρκεια της αρχιτεκτονικής μελέτης και του όγκου παρέμεινε αμετάβλητη μετά χονδροειδώς 28 ημέρες θεραπείας όπως αξιολογήθηκε με χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης (S1 Σχήμα).

Δεν παρατηρήθηκε σημαντική αναστολή ανάπτυξης παρατηρήθηκε σε τέσσερις διαφορετικές παγκρεατικό καρκίνο γραμμές όγκου PDX σε οποιοδήποτε χρονικό σημείο κατά την διάρκεια θεραπείας 28 ημερών με 200 mg /kg ή 400 mg /kg μετφορμίνη χορηγείται με ημερήσια από του στόματος καθετηριασμό.

η

Ενεργοποίηση της ΑΜΡΚ και αναστολή της φωσφορυλίωσης p70S6K σε PDX όγκοι δεν είναι σταθερή μετά από μια θεραπεία 28 ημερών με μετφορμίνη

για να προσδιοριστεί εάν η θεραπεία με μετφορμίνη μεταβληθεί ΑΜΡΚ και mTOR σηματοδότησης, αξιολογήσαμε όλες τις τέσσερις γραμμές όγκου PDX για φωσφορυλίωση της ΑΜΡΚ (Thr172) και p70S6K (Thr389) κατά τη τέλος της θεραπείας των 28 ημερών (Σχήμα 2Α και 2Β και S2 Εικ). Σε αυτή την μακροχρόνια θεραπεία κοόρτης, καμία αλλαγή στην φωσφορυλίωση της ΑΜΡΚ και p70S6K παρατηρήθηκε στην μετφορμίνη σε σύγκριση με τους όγκους που έλαβαν φορέα. Στη συνέχεια αξιολογήθηκε η επίδραση της μετφορμίνης σε δύο όγκους PDX μετά από μόλις 3 ημέρες θεραπείας. Σε αντίθεση με τις μακροπρόθεσμες όγκους θεραπεία, οι βραχυπρόθεσμες όγκους αγωγής παρουσίασαν αυξημένη φωσφορυλίωση της ΑΜΡΚ και μειωμένη φωσφορυλίωση p70S6K (Σχήμα 2C και 2D).

Η φωσφορυλίωση του AMPKα και p70S6K στο (Α) και P505 όγκων (Β) P710 PDX μετά 28 ημέρα θεραπείας με 400 mg /kg μετφορμίνη. Η φωσφορυλίωση του AMPKα και p70S6K σε (C) P505 και (Δ) P710 PDX όγκους μετά από 3 ημέρα θεραπείας με 400 mg /kg μετφορμίνη (* ρ & lt? 0,05).

Η

μετφορμίνη αναστέλλει την ανάπτυξη και μεταβάλλει ΑΜΡΚ και mTOR σηματοδότηση σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του παγκρέατος

Δεδομένου ότι η έλλειψη παρατεταμένης ανταπόκρισης σε μοντέλα μας PDX ήταν έκπληξη, εξετάσαμε την επόμενη τις επιδράσεις της μετφορμίνης επί του πολλαπλασιασμού των τεσσάρων παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές (Capan-2, CFPAC-1 , ΗΡΑΡ-ΙΙ, και SW1990). Η μετφορμίνη αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο σε όλες τις τέσσερις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 3Α). θεραπεία μετφορμίνη ενεργοποιείται ΑΜΡΚ όπως προσδιορίζεται με φωσφορυλίωση της AMPK σε Thr (172) σε όλες τις κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν, με μια ενεργοποίηση αιχμή που εμφανίζονται σε 4-8 ώρες μετά την κατεργασία (Σχήμα 3Β). Δεδομένου ότι η ενεργοποίηση ΑΜΡΚ είναι γνωστό ότι αναστέλλει mTOR, αναλύσαμε περαιτέρω τα αποτελέσματα της θεραπείας μετφορμίνης για την κατάσταση φωσφορυλίωσης του mTOR και κατάντη των στόχων της p70S6K και 4Ε-ΒΡ1. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε μια καθυστερημένη αναστολή της mTOR και κατάντη φωσφορυλίωση στόχου, με το ναδίρ των παρατηρούμενων φωσφορυλίωσης p70S6K και 4Ε-ΒΡ1 συμβαίνουν σε 48 ώρες και στις δύο κύτταρα ΗΡΑΡ-ΙΙ (Σχήμα 3C και 3D) CFPAC-1 και.

(Α) τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν εις τετραπλούν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 5χ10

3 ανά φρεάτιο, επωάστηκαν όλη τη νύκτα, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με μέσα που περιέχουν είτε PBS ως μάρτυρα φορέα ή διάφορες συγκεντρώσεις της μετφορμίνης (0 -5 mM). Μετά από 48 ώρες, οι δείκτες πολλαπλασιασμού προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ΜΤΤ και ομαλοποιήθηκε με εκείνα των κυττάρων που υποστεί αγωγή με έκδοχο. Όλες οι δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. (Β) Η φωσφορυλίωση των AMPKα και συνολικής AMPKα σε διάφορα χρονικά σημεία μετά τη θεραπεία με 5 mM μετφορμίνη. Η θεραπεία ξεκίνησε σε 0 ώρες (ώρες). (Γ) Η φωσφορυλίωση του mTOR, p70S6K, και 4Ε-ΒΡ1 σε διάφορα χρονικά σημεία μετά τη θεραπεία με 5 mM μετφορμίνη. (Δ) πυκνομετρία φωσφορυλιωμένου AMPKα, mTOR, p70S6K, και 4Ε-ΒΡ1 σε σχέση με τα συνολικά επίπεδα που φαίνεται στο (Β) και (C).

Η

ΑΜΡΚ απαιτείται μόνο εν μέρει για την αντι-πολλαπλασιαστική δράση μετφορμίνης

το αντι-πολλαπλασιαστική δράση της μετφορμίνης έχει κυρίως αποδοθεί στην ικανότητά του να ενεργοποιεί το μονοπάτι ΑΜΡΚ. Υποθέσαμε ότι η έλλειψη παρατεταμένης ενεργοποίησης ΑΜΡΚ παρατηρήθηκε σε όλες τις τέσσερις σειρές όγκων PDX μπορεί να εξηγήσει την έλλειψη απόκρισης ανάπτυξης του όγκου. Έτσι, πραγματοποιήσαμε shRNA επαγόμενη knockdown του ενός ή και των δύο καταλυτικές υπομονάδες της ΑΜΡΚ σε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές για να προσδιοριστεί κατά πόσον θα επηρεαστούν οι αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της μετφορμίνης. Βρήκαμε ότι knockdown του ΑΜΡΚ α1 και /ή α2 ΑΜΡΚ μερικώς αλλά όχι πλήρως αντιστραφεί ικανότητα μετφορμίνης να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Σχήμα 4Α και 4Β).

(Α) shRNA knockdown του AMPKα υπομονάδων σε CFPAC-1 και ΗΡΑΡ -II κυτταρικές γραμμές. (Β) Πολλαπλασιασμός CFPAC-1 και ΗΡΑΡ-ΙΙ κυτταρικές γραμμές με σταθερά knockdown του AMPKα υπομονάδων μετά τη θεραπεία με διαφορετικές συγκεντρώσεις της μετφορμίνης (0-5 mM). (Γ) Η φωσφορυλίωση της mTOR και p70S6K σε CFPAC-1 και ΗΡΑΡ-II κυτταρικές σειρές με σταθερή νοκ ντάουν της AMPKα υπομονάδων.

Η

Η μετφορμίνη φαίνεται να δρα σε mTOR σε ΑΜΡΚ-ανεξάρτητο τρόπο

επόμενο διερευνηθεί κατά πόσον η έλλειψη παρατεταμένης αναστολής p70S6K δει στην γραμμή όγκου P710 PDX παρά τα στοιχεία κάποιας παρατεταμένη ενεργοποίηση ΑΜΡΚ μπορεί να οφείλεται σε ΑΜΡΚ-ανεξάρτητο μηχανισμό. Αξιολογήσαμε την επίδραση της μετφορμίνης επί της φωσφορυλίωσης του mTOR και p70S6K ακόλουθα knockdown του ΑΜΡΚ α1 και /ή α2 ΑΜΡΚ. κυτταρικές σειρές CFPAC-1 και ΗΡΑΡ-ΙΙ με σταθερή knockdown του NS, ΑΜΡΚ α1 και /ή α2 ΑΜΡΚ (Σχήμα 4Α) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5 mM μετφορμίνη (Εικόνα 4Β και 4C). Σε αμφότερες τις κυτταρικές γραμμές, knockdown του ενός ή και των δύο υπομονάδες δεν σώσει την ικανότητα της μετφορμίνης να αναστέλλουν την ανάπτυξη ή φωσφορυλίωση του mTOR και p70S6K, γεγονός που υποδηλώνει ότι η ικανότητα της μετφορμίνης για την αναστολή mTOR και p70S6K είναι τουλάχιστον μερικώς ανεξάρτητη από την ενεργοποίηση ΑΜΡΚ σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές.

mTOR υπερέκφραση είναι επαρκής για να ξεπεραστούν τα αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της μετφορμίνης, αλλά συνδυαστική θεραπεία με αναστολείς mTOR μετφορμίνη και δεν παράγει συνεργία

Επειδή η μετφορμίνη απέτυχε να διατηρήσει την αναστολή της οδού της mTOR όπως μετρήθηκε με φωσφορυλίωση p70S6K σε μακροχρόνια αγωγή με μετφορμίνη όγκους PDX μας, και επειδή τα ευρήματά μας ότι η μετφορμίνη επαγόμενη αναστολή mTOR ήταν τουλάχιστον μερικώς ΑΜΡΚ-ανεξάρτητη, εμείς επόμενο προσδιοριστεί αν η ενεργοποίηση του mTOR μόνο ήταν αρκετή για να καταργήσει τις επιδράσεις της μετφορμίνης. Βρήκαμε ότι η υπερέκφραση του mTOR χρησιμοποιώντας ένα κατασκεύασμα myc-mTOR ήταν αρκετή για να παραχθεί πλήρης αναστολή της ανάπτυξης αντίστασης και για να περιοριστεί η μείωση στην φωσφορυλίωση p70S6K μετά από αγωγή με μετφορμίνη (Σχήμα 5Α και 5Β). Για να προσδιοριστεί εάν ο συνδυασμός μετφορμίνης με στοχευμένες αναστολείς mTOR μπορεί να είναι μια λογική θεραπευτική στρατηγική, υποβάλλαμε σε αγωγή κυτταρικές γραμμές με δόσεις σταθερή αναλογία της μετφορμίνης και είτε η αλλοστερική ραπαμυκίνη αναστολέας mTOR ή ο αναστολέας καταλυτικής mTOR BEZ235, τα οποία είναι γνωστό ότι αναστέλλουν τον καρκίνο του παγκρέατος κυτταρική σειρά ανάπτυξη. Η αναστολή της ανάπτυξης δεν ενισχύθηκε σε οποιοδήποτε συνδυασμό δοσολογία σε σχέση με ενιαία φαρμακευτική αγωγή, και καμία συνέργεια μεταξύ μετφορμίνης και είτε αναστολέα mTOR υπολογίστηκε σε οποιαδήποτε δόση χρησιμοποιώντας την διάμεση εξίσωση αποτέλεσμα Chou-Talalay (Σχ 5C και 5D).

(Α) φωσφορυλίωση p70S6K σε και (Β) πολλαπλασιασμό κυττάρων ΗΡΑΡ-ΙΙ μετά από θεραπεία με 5 mM μετφορμίνη μετά από παροδική έκφραση ενός διαμολυνθέντος κατασκευάσματος myc-mTOR. Χρησιμοποιώντας το διάμεσο υπολογισμό εξίσωση ισχύει για δείκτη συνδυασμού (CI) μετά 3 ημέρα θεραπείας με δόσεις σταθερή αναλογία της μετφορμίνης και είτε (γ) το αλλοστερικό ραπαμυκίνη αναστολέα mTOR ή (D) στον αναστολέα καταλυτικής mTOR BEZ235 απέτυχαν να παράγουν συνέργεια (CI & lt? 1 ) σε οποιοδήποτε συνδυασμό δόση. Τιμές CI κατά 50% αναστολή της ανάπτυξης: (C) CFPAC-1 1.54, ΗΡΑΡ-ΙΙ 1,43? (D) CFPAC-1 1.30, ΗΡΑΡ-ΙΙ 1,29. (* P & lt? 0.050, ** p & lt? 0.005, *** p & lt? 0.001).

Η

Συζήτηση

Επιδημιολογικές μελέτες σε διαβητικούς ασθενείς έχουν διαπιστώσει ότι οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με μετφορμίνη έχουν μειωμένη συχνότητα εμφάνισης των πολλαπλών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παγκρέατος [14-17]. Αρκετές προκλινικές μελέτες μετφορμίνης ως θεραπευτικό αντικαρκινικό υπήρξαν ελπιδοφόρα, καταδεικνύοντας την αναστολή της ανάπτυξης του όγκου εντυπωσιακή [20, 22, 33] και την απόπτωση [34] του καρκίνου του παγκρέατος κυτταρικές γραμμές. Ωστόσο, ξενομοσχεύματα κυτταρικής σειράς ήταν γενικά αναξιόπιστα προάγγελοι των απαντήσεων του φαρμάκου σε ανθρώπους. Lonardo et al. αξιολόγησε την επίδραση της μετφορμίνης σε τέσσερις παγκρεατικού γραμμές όγκου του καρκίνου PDX και, παρόμοια με προηγούμενες μελέτες ξενομοσχεύματος κυτταρικής γραμμής, βρέθηκε σημαντική αναστολή της ανάπτυξης [21]. Αντίθετα, οι αναδυόμενες κλινικές δοκιμές αξιολόγησης μετφορμίνη σε καρκίνο του παγκρέατος έχουν μετριαστεί η αισιοδοξία που δημιουργήθηκε από αυτή την προκλινική εργασία. Μια διπλή-τυφλή, τυχαιοποιημένη, ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο μελέτη φάσης ΙΙ, την αξιολόγηση της μετφορμίνης σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη και erlotinib σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο του παγκρέατος δεν έδειξε καμία διαφορά στην έκβαση ως αποτέλεσμα της θεραπείας με μετφορμίνη [35]. Ένας άλλος ΙΙ δοκιμή φάσης συνδυασμό με μετφορμίνη με πακλιταξέλη σε ασθενείς με γεμσιταβίνη-ανθεκτική νόσο απέτυχε να ανταποκριθεί πρωτεύον καταληκτικό σημείο του ποσοστού ελέγχου της νόσου [36].

Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε μια ομοιόμορφη έλλειψη ανταπόκρισης στη μετφορμίνη στην τέσσερις γραμμές όγκου PDX που αξιολογήθηκαν. Υπάρχουν αρκετές πιθανές αιτίες για τα ανόμοια αποτελέσματα των προηγούμενων προκλινικές εργασίας σε σύγκριση με τη μελέτη μας και τις πρόσφατες κλινικές δοκιμές. Κατ ‘αρχάς, PDX όγκοι είναι εγγενώς εξαιρετικά ετερογενής, επειδή τα PDX όγκοι περάστηκαν σε μεγάλες ποσότητες και είναι αντιπροσωπευτική «βιοψίες» ομοίως ετερογενών όγκων των ασθενών πηγή. Δεύτερον, αν και το εύρος δόσης στην μελέτη μας επικαλύπτει με προηγούμενες μελέτες, η φαρμακοκινητική της πρόσληψης μετφορμίνης είναι ακόμη ασαφείς [37]. Στο μικροπεριβάλλον του όγκου και του περιεχομένου στρωματικά φαίνεται να επηρεάζουν την πρόσβαση μετφορμίνη στην καρκινικά κύτταρα, τα οποία μπορούν να οδηγήσουν σε διαφορετικά αποτελέσματα μεταξύ μελετών [21]. Τρίτον, ο όγκος του όγκου κατά την οποία ξεκίνησε θεραπεία ποικίλλει μεταξύ των μελετών, οι οποίες μπορούν να επηρεάσουν τη σύνθεση των όγκων, ειδικά του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων επιβάρυνση. Lonardo et al. και άλλοι έχουν δείξει ότι μόνο αυτό βλαστοκυττάρων υποπληθυσμό υφίσταται απόπτωση ως αποτέλεσμα της θεραπείας με μετφορμίνη, ενώ η μεγάλη πλειονότητα των κυττάρων όγκου βιώνουν αναστρέψιμη αναστολή της ανάπτυξης [18, 21]. Είναι ενδιαφέρον ότι, αν και Lonardo et al. διαπίστωσε ότι η μετφορμίνη ήταν σε θέση να επιβραδύνει την ανάπτυξη του όγκου αρχικά PDX, σημείωσε ότι όλοι οι όγκοι PDX προχώρησε τελικά στη θεραπεία [21], γεγονός που υποδηλώνει ότι η μετφορμίνη ως μονοθεραπεία δεν θα είναι αποτελεσματική σε ασθενείς.

Για να αποκτήσουν εικόνα για πιθανούς μηχανισμούς της αντίσταση, θα αξιολογηθούν περαιτέρω δύο από τις τέσσερις γραμμές PDX μας και διαπίστωσε ότι η αντίσταση στη μετφορμίνη μπορεί να είναι πολυπαραγοντική και όγκου-εξαρτώμενη. Για παράδειγμα, το P505, ενεργοποίηση ΑΜΡΚ δεν είχε υποστεί, ενώ στο P710, συνεχίστηκε η ανάπτυξη του όγκου συνέβη παρά την κάποια παρατεταμένη ενεργοποίηση ΑΜΡΚ. επακόλουθη αποτελέσματά μας σε κυτταρικές σειρές δείχνουν ότι αυτό μπορεί να είναι για δύο λόγους. Πρώτον, η επίδραση της μετφορμίνης επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού φαίνεται να είναι μόνο εν μέρει ΑΜΡΚ-εξαρτώμενη. Δεύτερον, η ικανότητα της μετφορμίνης να αναστέλλει το μονοπάτι mTOR σε καρκίνο του παγκρέατος επίσης φαίνεται να είναι μόνο εν μέρει ΑΜΡΚ-εξαρτώμενη. Σε όλους τους τύπους καρκίνου, ο βαθμός στον οποίο η μετφορμίνη επικαλείται την ενεργοποίηση AMPK να αναστέλλουν την ανάπτυξη και να μεταβάλλουν mTOR /p70S6K σηματοδότηση είναι ασαφής και πιθανόν τον τύπο του κυττάρου-εξαρτώμενη. Η αναστολή της έκφρασης ΑΜΡΚ μέσω αποσιώπηση της καταλυτικής ΑΜΡΚ α υπομονάδας χρησιμοποιώντας ειδικούς αναστολείς της ΑΜΡΚ ή ​​νοκ-άουτ του LKB1, το ανοδικό σήμα για ενεργοποίηση ΑΜΡΚ, ανέστρεψε τα αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της μετφορμίνης σε καρκίνο του μαστού και των ωοθηκών κύτταρα [38-40]. Αντίθετα, ο Μπεν Sahra et al. έδειξε ότι προς τα κάτω ρύθμιση της ΑΜΡΚ δεν είχε καμία επίδραση στην ικανότητα μετφορμίνης να αναστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη και mTOR σηματοδότηση [41]. Αντ ‘αυτού, οι ερευνητές διαπίστωσαν ότι η μετφορμίνη οδήγησε σε αναστολή του mTOR και διακοπή του κυτταρικού κύκλου με την ενεργοποίηση του αναστολέα mTORC1 REDD1 [42]. Άλλες μελέτες σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών και του μαστού έχουν επίσης βρεθεί ότι οι επιδράσεις της μετφορμίνης μπορεί να εξαρτάται εν μέρει μόνο από την ενεργοποίηση ΑΜΡΚ [43, 44]. Η αντι-πολλαπλασιαστική δράση της μετφορμίνης διατηρήθηκε στη γραμμή Α2780 ωοθήκης καρκινικό κύτταρο παρά siRNA αποσιώπηση του AMPKα1. Επιπλέον, η θεραπεία με μετφορμίνη ήταν σε θέση να εξασθενούν τον πολλαπλασιασμό τόσο AMPKα1 /2 άγριου τύπου και AMPKα1 /2 ελλειμματικά ποντικού εμβρυϊκών ινοβλαστών (ΠΜΑ), αν και AMPKα1 /2 με ανεπάρκεια ΠΜΑ ήταν ελαφρώς λιγότερο ευαίσθητα στη μετφορμίνη [43]. Σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του μαστού, η αναστολή του HER2 από τη μετφορμίνη βρέθηκε να είναι εντελώς ΑΜΡΚ ανεξάρτητη [44]. Πρόσφατες μελέτες σε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές βρεθεί ότι η μετφορμίνη μπορεί να αναστέλλει την ανάπτυξη ανεξάρτητα από ΑΜΡΚ μέσω προς τα πάνω ρύθμιση miR-26a [45], ενώ επιδράσεις μετφορμίνη για τον καρκίνο του παγκρέατος βλαστικά κύτταρα μπορεί να διαμεσολαβούνται μέσω επανέκφραση συγκεκριμένων miRNAs [18]. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η τροποποίηση της έκφρασης miRNA μπορεί να είναι ακόμη ένας άλλος σημαντικός μηχανισμός που διέπει τις βιολογικές επιδράσεις της μετφορμίνης.

Σε συνδυασμό με τις παραπάνω μελέτες, τα αποτελέσματα μας ότι knockdown του ΑΜΡΚ υπομονάδων δεν διασώθηκε τα ανασταλτικά αποτελέσματα της μετφορμίνης επί mTOR /p70S6K φωσφορυλίωσης αλλά ότι επανέκφραση mTOR ήταν σε θέση να αντιστρέψει τις αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της μετφορμίνης, υποδηλώνουν ότι η ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ και αναστολή της οδού mTOR /p70S6K με μετφορμίνη είναι ανεξάρτητες γεγονότων που μπορεί να συνεισφέρει τόσο στην αναστολή της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων. Επιπλέον, η ρύθμιση της ΑΜΡΚ με μετφορμίνη μπορεί να είναι κυτταρικό τύπο που εξαρτώνται από, και σε καρκίνο του παγκρέατος, τα αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της μετφορμίνης μπορεί να είναι μερικώς ή σε μεγάλο βαθμό ΑΜΡΚ-ανεξάρτητη.

Συνολικά, η μελέτη μας δείχνει ότι αν και η μετφορμίνη αναστέλλει την παγκρεατική πολλαπλασιασμός γραμμή καρκινικών κυττάρων, η επίδρασή της στους όγκους των ασθενών θα είναι πιθανώς παροδική και πολύ πιο περίπλοκη. Ενώ οι μηχανισμοί αντίστασης πιθανώς περιλαμβάνουν ενεργοποίηση μονοπατιού mTOR, η ταυτόχρονη θεραπεία με μετφορμίνη και αναστολείς mTOR μπορεί να κάνει ελάχιστα για να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα ούτε θεραπείας. Περαιτέρω μελέτες απαιτούνται προκειμένου να διαπιστωθεί κατά πόσον η μετφορμίνη μπορεί κάποια μέρα να παρέχει όφελος στους ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος με τη μόχλευση πολύπλοκες μεταβολικές και επιδράσεις σε συνδυασμό με χημειοθεραπευτικά ή στοχευμένες θεραπείες σηματοδότησης.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. Η μακροχρόνια θεραπεία με μετφορμίνη δεν επηρεάζει το βάρος του ποντικιού ή ιστολογία του όγκου.

(Α) Βάρη ποντικιών πάνω από ένα κύκλο θεραπείας 28 ημερών είτε με 200 mg /kg ή 400 mg /kg μετφορμίνη φαίνεται σε σχέση με την αρχική τιμή βάρη. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρώση (Β) P505 και (C) P710 ξενομοσχεύματος όγκους ασθενών που προέρχεται ακόλουθες 28 ημέρα θεραπείας με όχημα (αριστερό πάνελ) ή 400 mg /kg μετφορμίνη (δεξιά πάνελ) δείχνουν καμία διαφορά στην αρχιτεκτονική του όγκου, σχηματισμός πόρου, ή στρωματικά περιεχόμενο. Κλίμακα μπαρ είναι 300 μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0147113.s001

(ΔΕΘ)

S2 Εικ. Η ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ και αναστολή της φωσφορυλίωσης p70S6K σε όγκους PDX δεν είναι σταθερή μετά από 28 ημέρες θεραπείας μετφορμίνης.

Φωσφορυλίωση AMPKα και p70S6K στο (Α) P722 και (Β) όγκους PT4 PDX μετά 28 ημέρα θεραπείας με 400 mg /kg . μετφορμίνη

doi: 10.1371 /journal.pone.0147113.s002

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Charlene Μ Σάντος στο Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας (UNC ) Lineberger Comprehensive Cancer Center ζώων Σπουδών πυρήνα, το UNC PDX Πρόγραμμα, ο μηχανισμός ιστών Προμηθειών UNC, και η UNC Μεταγραφική Εργαστήριο Παθολογικής Ανατομικής για τεχνική βοήθεια.