Αφηρημένο

Η γαστρική και του παχέος εντέρου (GC και CRC) έχουν κακή πρόγνωση και είναι ανθεκτικά στην χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία. Στην παρούσα μελέτη, οι προφυλακτικές επιδράσεις των δενδριτικών κυττάρων (DC) εμβολιασμό αξιολογείται σε εξέλιξη της νόσου και κλινικά οφέλη σε μια ομάδα 54 GC και οι ασθενείς CRC αγωγή με DC ανοσοθεραπεία σε συνδυασμό με κυτοκίνη επαγόμενη από φονικά κύτταρα (CIK) μετά από χειρουργική επέμβαση, με ή χωρίς χημειο-ακτινοθεραπεία. DC προετοιμάστηκαν από τα μονοπύρηνα κύτταρα απομονώθηκαν από ασθενείς που χρησιμοποιούν IL-2 /GM-CSF και φορτωμένο με καρκινικά αντιγόνα? CIK κύτταρα παρασκευάστηκαν με επώαση λεμφοκυττάρων περιφερικού αίματος με IL-2, ΙΡΝ-γ και αντισώματα CD3. Η θεραπεία DC /CIK ξεκίνησε 3 ημέρες μετά από τη χημειοθεραπεία χαμηλής δόσης και επαναλήφθηκε 3-5 φορές σε 2 εβδομάδες ως ένας κύκλος με συνολικά 188,3 ± 79,8 × 10

6 DCs και 58,8 ± 22,3 × 10

8 CIK κύτταρα. επίπεδα κυτταροκινών στον ορό των ασθενών πριν και μετά τις θεραπείες μετρήθηκαν και η παρακολούθηση διεξήχθη για 98 μήνες για να καθορίσει την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS). Τα αποτελέσματα αποδεικνύουν ότι όλες οι κυτοκίνες δοκιμάστηκαν ήταν αυξημένα με σημαντικά υψηλότερα επίπεδα ΙΡΝ-γ και IL-12 τόσο GC και CRC κοόρτεις DC /CIK αγωγή ασθενείς. Με ανάλυση παλινδρόμησης Cox, θεραπεία DC /CIK μείωσε τον κίνδυνο μετεγχειρητικής εξέλιξης της νόσου (ρ & lt? 0,01) με αυξημένη OS (& lt? 0,01). Αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν ότι εκτός από την χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία, DC /CIK ανοσοθεραπεία είναι μια πιθανή αποτελεσματική προσέγγιση στον έλεγχο της ανάπτυξης του όγκου για μετεγχειρητική GC και οι ασθενείς CRC

Παράθεση:. Gao D, Li C, Xie Χ, Zhao P, Wei Χ, Sun W, et al. (2014) αυτόλογο όγκο Lysate-Pulsed δενδριτικά κύτταρα ανοσοθεραπεία με την επαγόμενη από κυτοκίνες Killer Cells βελτιώνει την επιβίωση σε γαστρικό και του παχέος εντέρου ασθενείς. PLoS ONE 9 (4): e93886. doi: 10.1371 /journal.pone.0093886

Επιμέλεια: Μιχαήλ Lim, Johns Hopkins Hospital, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 1 Αύγ 2013? Αποδεκτές: 10 Μαρτίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 3 Απριλίου, 2014

Copyright: © 2014 Gao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Αντίστοιχες συγγραφέα Jian Jian Li είναι ένα PLoS ONE Συντακτική μέλος του Διοικητικού συμβουλίου, και αυτό δεν αλλάζει προσήλωση μας στην PLoS ONE Editorial πολιτικές και κριτήρια

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) και του παχέος εντέρου (CRC) είναι σημαντικά κακοήθεις παθήσεις του πεπτικού σωλήνα. Ενώ GC είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου στην περιοχή της Ασίας-Ειρηνικού, CRC κατατάσσεται ως η τέταρτη πιο κοινή κακοήθεια σε όλο τον κόσμο, με περίπου 1,2 εκατομμύρια νέα κρούσματα και 609.051 θανάτους ετησίως [1]. Η χειρουργική εκτομή με ή χωρίς ανοσοενισχυτικό χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία παραμένει το κλειδί τροπικότητα για GC και CRC, αλλά δυστυχώς παρουσιάζει περιορισμένη κλινικά οφέλη λόγω του υψηλού ποσοστού της μετάστασης του όγκου. Αν και η θεραπεία χημειο-ακτινοβολία ρεύμα ανοσοενισχυτικό έχει δειχθεί ότι παρατείνει την επιβίωση των ασθενών με την παρουσία των επαναλαμβανόμενων βλαβών [2], [3], σοβαρές παρενέργειες συνήθως περιορίζουν την αποτελεσματικότητα αυτού του τρόπου αντικαρκινικών [2] – [4]. Για την περαιτέρω βελτίωση της συνολικής επιβίωσης για GC και οι ασθενείς CRC, είναι κρίσιμο να διερευνήσει νέες προσεγγίσεις για τον έλεγχο μετάσταση όγκου, με ή χωρίς τη χρήση των παραδοσιακών χημειο-και /ή ακτινοθεραπεία.

Τα δενδριτικά κύτταρα (DCs) παίζουν ένα κρίσιμο ρόλο στην επαγωγή αποκρίσεων Τ-κυττάρων ειδικών για το αντιγόνο για την παροχή δραστικής ανοσοθεραπείας [5] – [7]. Κλινικές μελέτες που χρησιμοποιούν ειδικά σχεδιασμένα DC-στοχευμένες εμβόλια καρκινικών κυττάρων αποδεικνύεται διαφορετικά κλινικά οφέλη. Οι ασθενείς με λέμφωμα [8], [9], το μεταστατικό μελάνωμα [10], [11], ο καρκίνος του παχέος εντέρου, και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [12] έδειξε ότι ο εμβολιασμός με όγκο αντιγόνο παλμικά DCs, είτε απομονωμένη κατευθείαν από το αίμα ή δημιουργείται

ex vivo

από προδρόμους του αίματος, που προκαλείται αντιγόνου ειδική ανοσολογική αντίδραση και, σε ορισμένες περιπτώσεις, σημαντικές αποκρίσεις όγκου. Στην πραγματικότητα, η εφαρμογή ενός δραστικού αγωγή ανοσοθεραπείας, Sipuleucel-T (APC8015) που χρησιμοποιείται από την ενεργοποίηση μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) με όξινη προστατική φωσφατάση (ΡΑΡ), μια πρωτεΐνη σύντηξης του αντιγόνου καρκίνου του προστάτη, με GM-CSF, κατέληξε σε περίπου 4 μηνών παρατεταμένη μέση επιβίωση στο ασθενείς με καρκίνο προστάτη [13] – [15], και εγκρίθηκε από το FDA για τη θεραπεία του μεταστατικού καρκίνων του προστάτη [14], [16], [17]. Τα CIK κύτταρα είναι ένα υποσύνολο των φυσικών φονικών Τ λεμφοκύτταρα (ΝΚΤ) που είναι κατά κύριο λόγο CD3

+ CD56

+ τύπου II κύτταρα ΝΚΤ [18], και αυτά τα κύτταρα μπορούν να παραχθούν

ex vivo

με επώαση λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος με έναν αγωνιστικό μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-CD3, ιντερλευκίνη (IL) -2, IL1-β και η ιντερφερόνη (IFN) -γ. κύτταρα CIK, που υποστηρίζεται από την ενθάρρυνση των κλινικών δοκιμών στις δύο αυτόλογη και αλλογενή πλαίσια, είναι γνωστό για την εξάλειψη κυτταρολυτικά κύτταρα του όγκου [19]. Σε αντίθεση με ενεργοποιημένα με λεμφοκίνη κύτταρα φονείς (LAK), τα οποία είναι κυτταροτοξικά ενεργά Τ-κύτταρα διεγείρονται κυρίως σε απόκριση στην υψηλή συγκέντρωση της ιντερλευκίνης-2 (IL-2), κύτταρα CIK εμφανίζουν αυξημένη δραστικότητα καρκινικών κυττάρων λυτική [20], [21 ], υψηλότερο ρυθμό πολλαπλασιασμού [22], και σχετικά μικρότερη τοξικότητα [23]. Αν και παθητική ανοσοθεραπεία με θετή μεταφορά Τ κυττάρων πιστεύεται ότι είναι αποτελεσματικός στον έλεγχο των πρωτογενών όγκων, είναι ασαφές εάν παθητική ανοσοθεραπεία είναι αποτελεσματική στη μακροπρόθεσμο έλεγχο του υποτροπή του όγκου [24]. Από την άλλη πλευρά, η ενεργός ανοσοθεραπεία χρησιμοποιώντας όγκου-ειδικά εμβόλια, όπως το εμβόλιο DC, έχει τη δυνατότητα όφελος να ενισχύσει σημαντικά ογκο-ειδικό τελεστή και Τ κύτταρα μνήμης. Οι αποκρίσεις κατά των όγκων που προκαλούνται από θεραπεία DC /CIK έχουν αναφερθεί σε έναν αριθμό

ex vivo

[25] – [29] και

in vivo

[30] μελετών καθώς και στην προκαταρκτικές κλινικές δοκιμές σε ασθενείς με λέμφωμα μη Hodgkin και του Hodgkin [31], [32] και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα με λίγες παρενέργειες [33]. Στην παρούσα μελέτη, οι κλινικά οφέλη αξιολογήθηκε σε μία ομάδα από 54 GC και CRC ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με DC ανοσοθεραπεία σε συνδυασμό με κυτοκίνη κύτταρα επάγεται φονείς (CIK) μετά από χειρουργική επέμβαση, με ή χωρίς χημειο-ακτινοθεραπεία. Τα αποτελέσματα δείχνουν βελτίωση των ποσοστών της DFS και OS με αυξημένα επίπεδα της IFN-γ και IL-12 τόσο GC και CRC ομάδες της DC /CIK ασθενείς που έλαβαν θεραπεία.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Σχεδιασμός της μελέτης , την πρόσληψη των ασθενών, και τη συλλογή δεδομένων

Εμείς πραγματοποίησε τη μελέτη με ασθενείς που έλαβαν θεραπεία στο Τμήμα Χειρουργικής και Κέντρο βιολογική θεραπεία, Qingdao Κεντρικό Νοσοκομείο, Qingdao, Κίνα 2005-2010 (Πίνακας 1). Οι ασθενείς είχαν προσληφθεί με τα ακόλουθα κριτήρια: 1) 18 ετών και άνω, 2) παθολογικά επιβεβαιώθηκε GC ή CRC, 3) υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή των πρωτοπαθών όγκων, 4) καμία ένδειξη μετάστασης όγκου ή επανάληψης πριν από τη λήψη των κυττάρων με βάση ανοσοθεραπεία, 5) έχοντας ολοκληρώσει χημειο-και /ή ακτινοθεραπεία για τουλάχιστον 1 μήνα και 6) υπογράφοντας το έντυπο συγκατάθεσης. Οι ασθενείς στην ομάδα ελέγχου είχαν προσληφθεί με δημογραφικά και κλινικά παθολογικά χαρακτηριστικά. Συνολικά 27 ασθενείς τυχαιοποιήθηκαν να βασίζονται σε κύτταρα ανοσοθεραπεία και 27 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν στην ομάδα ελέγχου. Οι όγκοι οργανώθηκαν σύμφωνα με το (UICC) ταξινόμηση βασίζεται σε υποσύνολα pTNM της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου του. ενημερωμένες εγκρίσεις όλων των ασθενών ελήφθησαν και οι διαδικασίες της μελέτης εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από το Διοικητικό ηθική κριτική του Qingdao Κεντρικό Νοσοκομείο. Μετά βασίζονται σε κύτταρα ανοσοθεραπεία, όλοι οι ασθενείς που ελήφθη παρακολούθηση από επισκέψεις στο νοσοκομείο ή /και τηλεφωνικές συνεντεύξεις σε τουλάχιστον κάθε 6 μήνες. Τοπική υποτροπή του όγκου και μακρινή μετάσταση εξετάστηκαν από την απεικόνιση αναλύσεις. DFS (ελεύθερη νόσου επιβίωση, το χρονικό διάστημα μεταξύ χειρουργική επέμβαση και επανεμφάνιση του όγκου) και OS (συνολική επιβίωση, το χρονικό διάστημα μεταξύ χειρουργική επέμβαση και τελευταία παρακολούθηση) συλλέχθηκαν στη βάση δεδομένων ερευνητικό έργο. DFS και OS ποσοστά υπολογίστηκαν στις δύο ομάδες θεραπείας και ελέγχου από τις ημερομηνίες της χειρουργικής επέμβασης και οι παρακολουθήσεις έχουν ολοκληρωθεί για όλους τους ασθενείς μέχρι τον Αύγουστο του 2011, συμπεριλαμβανομένων και των ασθενών με 12 μήνες ή μεγαλύτερο χρονικό διάστημα μετά την ανοσοθεραπεία.

Η

DC εμβόλιο και CIK κυτταρικής θεραπείας

Μια δόση του 1 × 10

6 μονάδες IL-2 (Quangang Pharma Co. Shandong, Κίνα) σε 250 ml φυσιολογικού ορού παρασκευάστηκε και ενδοφλεβίως χορηγείται σε ασθενείς σε η ομάδα θεραπείας, μία φορά την ημέρα για 5 διαδοχικές ημέρες. Τρεις έως έξι ημέρες μετά την IL-2 ένεσης, μονοπύρηνα κύτταρα (4-6 × 10

9) συλλέχθηκαν από το σύνολο των 6-9 λίτρα του κυκλοφορούντος αίματος από COBE Spectra με αφαίρεση Συστήματος (Gambro BCT, Inc., Κολοράντο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής ) και αποθηκεύονται σε 120-150 ml πλάσματος. Αν τα μονοπύρηνα κύτταρα ήταν λιγότερο από 4 × 10

8 /λίτρο, GM-CSF (150 μα) υποδόρια εφαρμόζεται στους ασθενείς-μία φορά την ημέρα για 1-3 ημέρες πριν από την περαιτέρω συλλογή των μονοπύρηνων κυττάρων υποβλήθηκε σε επεξεργασία.

Antigen παρασκευή

αντιγόνο όγκου παρασκευάστηκε ακολουθώντας την καθιερωμένη πρωτόκολλο [34], [35] από ανθρώπινα AGS γαστρικού καρκίνου ή LS-174Τ κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου. Τα καρκινικά κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 2-3 περάσματα (1-2 × 10

8), και συλλέγεται, και πλένεται με φυσιολογικό ορό για 3 φορές, και λύθηκαν με κατάψυξη-απόψυξη τρεις φορές και αναλύθηκαν με υπερήχους κυτταρική διάσπαση. Τα προϊόντα λύσης από κύτταρα όγκου στη συνέχεια κλασματώθηκαν με φυγοκέντρηση (1200 rpm χ 5 λεπτά), και το υπερκείμενο συλλέχθηκε και διηθήθηκε με ένα φίλτρο 0.22 (Carrighwohill, Co. Cork, Ιρλανδία), και η συγκέντρωση πρωτεΐνης στο υπερκείμενο μετρήθηκε πριν την αποθήκευση στους – 80 ° C.

Παρασκευή DC και CIK κύτταρα

τα μονοπύρηνα κύτταρα απομονώθηκαν από τα κύτταρα που συλλέγονται από περιφερικό αίμα του GC και CRC ασθενής ακολουθώντας μια καθιερωμένη μέθοδο [36], [37] χρησιμοποιώντας Ficoll (GE Healthcare Life Science, Σαγκάη, Κίνα). Απομονωμένα κύτταρα εναιωρήθηκαν σε RPMI 1640 σε συγκέντρωση 1 × 10

7 mL

-1 και καλλιεργήθηκαν σε 175 cm

2 φιάλες καλλιέργειας κυττάρων στους 37 ° C, 5% CO

2 για 2 ώρες. Τα προσκολλημένα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ελεύθερο ορού μέσο καλλιέργειας DC (CellGenix, Freiburg, Germany) που περιέχει 20 ng /mL ιντερλευκίνη 4 (IL-4) και 50 ng /mL GM-CSF στους 37 ° C, 5% CO

2 για 6 ημέρες. DC μέσο καλλιέργειας που περιέχει παρασκευάστηκε αντιγόνο όγκου στη συνέχεια προστέθηκε σε καλλιεργημένα κύτταρα σε μία τελική συγκέντρωση 50 μg /ml, και καλλιεργήθηκαν για άλλες 2 ημέρες. Ωριμάσει ΑΧ εξετάστηκαν με κυτταρομετρία ροής για DC Σημάδια CD83 και HLA-DR. Παρασκευάσματα ελέγχθηκαν ως βακτήρια και άνευ πυρετογόνων. Ένα τμήμα του παρασκευασθέντος DC εγχύθηκε σε ασθενείς και οι υπόλοιπες DCs φυλάχθηκαν στους -80 ° C. κύτταρα Αναστολή καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 (2 × 10

6 /mL) που περιέχει 10% BFS, 100 U /mL IL-2, 300 U /mL ΙΡΝ-γ, το μονοκλωνικό αντίσωμα (Κ & 20 ng /mL CD3? D Systems, Minneapolis, ΜΝ, USA), και 40 U /mL γενταμυκίνη. Την ημέρα 8, ένα τμήμα των κυττάρων εξετάστηκαν με κυτταρομετρία ροής για δείκτες κυτταρικής CIK με αντισώματα έναντι CD3, CD8, CD56 και. Τα κύτταρα στη συνέχεια διατηρήθηκαν σε φυσιολογικό ορό με λευκωματίνη% 1, και το υπόλοιπο των αιωρημάτων κύτταρα διατηρήθηκαν σε καλλιέργεια για άλλες 7 ημέρες.

εμβόλιο DC και CIK χορήγηση κυττάρων

Οι ασθενείς στην ομάδα θεραπείας έλαβε έναν κύκλο έναρξης χημειοθεραπείας χαμηλή δόση την επόμενη ημέρα μετά τη συλλογή μονοπύρηνα κύτταρα με Carmofure (100 mg, po., bid) για 5~6 ημέρες. Η έγχυση των κυττάρων DCs και CIK ξεκίνησε την ημέρα 2 ή 3 ημέρες μετά τη χημειοθεραπεία. Παρασκευάστηκε κύτταρα DC χωρίστηκαν σε δύο μέρη: το ένα μέρος αναμίχθηκε με κύτταρα CIK σε 250 ml φυσιολογικό αλατούχο διάλυμα που περιείχε 1500 U /mL IL-2 και 1% αλβουμίνη, και εγχύονται σε ασθενείς ενδοφλεβίως. Το άλλο μέρος αιωρήθηκε σε 1.5 ml φυσιολογικού ορού και ενίεται υποδορίως στην περιοχή του λεμφαδένες παροχέτευσης γειτονικά προς τις θέσεις του όγκου. Η θεραπεία επαναλήφθηκε 3-5 φορές σε 2 εβδομάδες ως ένας κύκλος. Ασθενείς με προχωρημένο στάδιο ασθένειες έλαβε 2 κύκλους θεραπείας, ενώ οι ασθενείς πρώιμο στάδιο υποβλήθηκαν σε θεραπεία με έναν κύκλο. Οι ανοσολογικές αποκρίσεις των ασθενών παρακολουθήθηκαν πριν και μετά την θεραπεία με μέτρηση των επιπέδων στον ορό της IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 και IL-12 προσδιορίζεται με ELISA (R &? Συστήματα D, Minneapolis, ΜΝ, ΗΠΑ). Τα χρονοδιαγράμματα της DC και CIK προετοιμασία και έγχυσης που φαίνεται στο Σχήμα 1.

Οι προγνώσεις των ασθενών καταγράφηκαν έως και 98 μήνες μετά την ημερομηνία της επέμβασης και στις δύο ομάδες θεραπείας και ελέγχου.

Η

η στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ποσοστά, σημαίνει με τυπική απόκλιση (μέση τιμή ± SD), ή διάμεση τιμή με διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (95% CI). Δοκιμασία Chi-square, έλεγχος τ ή δοκιμή Mann-Whitney, γραμμική Pearson ή Spearman rank τεστ χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση ανάλογα με την περίπτωση. έκβαση της θεραπείας αναλύθηκε με καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier με δοκιμασία log rank και πολυπαραγοντική αναλογικών κινδύνων κατά Cox δοκιμές παλινδρόμησης. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε στο p & lt? 0,05. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 16.0 για Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Baseline πληροφορίες

Ένα σύνολο των 54 ασθενών με ιστολογικά επιβεβαιωμένη γαστρικό ή ορθοκολικού αδενοκαρκινώματος χωρίστηκαν τυχαία προσληφθεί σε αυτή τη μελέτη που αποτελείται από 27 ασθενείς σε κάθε ομάδα. Τα δημογραφικά και κλινικά παθολογικά δεδομένα των ασθενών στις ομάδες θεραπείας και ελέγχου παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Οι μισοί από τους ασθενείς στην ομάδα θεραπείας και όλους τους ασθενείς στην ομάδα ελέγχου είχαν λάβει τουλάχιστον ένα κύκλο χημειο-ακτινοβολία πριν από την εγγραφή. Ανοσοθεραπεία άρχισε τουλάχιστον ένα μήνα μετά τη λήξη της χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία και του χρόνου παρακολούθησης ήταν 98 μήνες για όλους τους ασθενείς σε ομάδες θεραπείας και ελέγχου.

Χαρακτηριστικά των κυττάρων DC /CIK για έγχυση κυττάρων

Ο μέσος αριθμός των κυττάρων που εγχύονται σε ασθενείς σε ένα κύκλο ήταν 188,3 ± 79 × 10

6 για ΑΧ και 58,8 ± 22,3 × 10

8 για τα κύτταρα CIK. Κύτταρα που εκφράζουν DR /CD11c και CD83 (δείκτες DC) ή CD3 /CD8 και CD3 /CD56 (δείκτες CIK) αναλύθηκαν. DCs παρασκευάστηκε από ασθενείς GC ήταν 88% -81% θετικά για DR /Οϋ11ο και 85% -71% θετικά για CD83 (Σχ. 2Α, Β). CIK κύτταρα που παρασκευάζονται από ασθενείς GC έδειξε 73% -46% θετικά για CD3 /CD8 και το 42% -16% θετικά για CD3 /CD56 (Σχ. 2C, D). Επιπλέον, DC παρασκευάζονται από ασθενείς CRC ήταν 87% -80% θετικά για DR /Οϋ11ο και 84% -71% θετικά για CD83 (Σχ. 3Α, Β), και τα κύτταρα CIK από ασθενείς CRC ήταν 75% -48% θετικά για CD3 /CD8 και το 41% ​​-11% θετικά για CD3 /CD56 αντίστοιχα (Σχ. 3C, D). Η συνολική κυτταρολυτική αποτελεσματικότητα των CIK κυττάρων από όλους τους ασθενείς ενισχύθηκε -2.5 φορές. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η πλειοψηφία των ΑΧ και CIK κυττάρων που παρασκευάζεται από τους ασθενείς ήταν ώριμη και λειτουργική.

Η

ορού επίπεδα κυτοκινών μετά από DC /CIK θεραπεία

Εξετάσαμε τα επίπεδα ορού μιας ομάδας κυτοκίνης για κάθε ασθενή πριν και μετά την DC /θεραπείες CIK (Σχήμα 4 για GC (Α) και CRC (Β)). Τα επίπεδα της IL-2, IL-6 και IL-10 ελαφρώς ενισχυμένη, χωρίς στατιστική σημασία στους ορούς GC και ασθενών CRC (Σχ. 4Α, Β). Ωστόσο, ο ορός IL-12 και ΙΡΝ-γ επίπεδα αυξήθηκαν σημαντικά τόσο σε GC και ασθενείς CRC, υποδεικνύοντας ότι η θεραπεία DC /CIK μπορεί να προωθήσει ειδικά ένα Th1 ανοσοαπόκριση να μεσολαβήσει όγκου θανάτωση επίδραση της θεραπείας με DC /CIK.

ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) και τη συνολική επιβίωση (OS) των ασθενών μετά την ανοσοθεραπεία που βασίζεται σε κύτταρα

Όπως φαίνεται στα σχήματα 5 και 6, DFS και OS ήταν τόσο παρατεταμένη σημαντικά σε ασθενείς σε DC /ομάδες θεραπείας CIK (GC: 5-year DFS ποσοστό: 66%, ποσοστό OS: 66%? CRC: 5-year DFS ποσοστό: 66%, ποσοστό OS: 75%) σε σύγκριση με τους ασθενείς σε ομάδες ελέγχου (GC: 5- έτους DFS ποσοστό: 34%, ποσοστό OS: 34%? CRC: 5-year DFS ποσοστό: 8%, ποσοστό OS: 15%? p & lt? 0,01). Για να εξεταστεί η διαφορική απόκριση του GC και CRC, αναλύσαμε δύο ομάδες (GC: ρ & lt? 0,05? CRC: ρ & lt? 0,01) και διαπίστωσε ότι CRC είναι πιο ευαίσθητα στη θεραπεία με DC /CIK από GC. Επιπλέον, η ανάλυση με πολυπαραγοντική Cox αναλογικό παλινδρόμησης επιβεβαίωσε ότι η θεραπεία DC /CIK σημαντικά και ανεξάρτητα μείωσε τον κίνδυνο μετεγχειρητικής εξέλιξης της νόσου (Μονά αναλογία: 0.09, 95% CI: 0,02 – 0,42? P & lt? 0,01) ή ο ασθενής Ασθένειες (Μονά αναλογία: 0.05, 95% CI:. 0,01 – 0,37? p & lt? 0,01) μετά την προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο, το βαθμό του όγκου, τα στάδια ΤΝΜ και η προηγούμενη χημειοθεραπεία και /ή θεραπείες ακτινοβολίας

(α) το συνολικό ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με γαστρικό καρκίνο. Τα ποσοστά επιβίωσης 1-, 3-, και 5-χρόνου στην ομάδα θεραπείας ήταν 93%, 82% και 66%, σε σύγκριση με τον έλεγχο 79%, 42%, και 34% αντίστοιχα. Β) Νόσος του ρυθμού ελεύθερης επιβίωσης των ασθενών με γαστρικό καρκίνο. Τα ποσοστά επιβίωσης 1, 3, και 5 ετών στις ομάδες θεραπείας (κόκκινο κουτί με την ένδειξη) ήταν 86%, 73% και 66%, σε σύγκριση με τον έλεγχο 79%, 42% και 34% αντίστοιχα. Οι αθροιστικές καμπύλες επιβίωσης σε Α και Β αναλύθηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier.

Η

(Α) Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου. Τα ποσοστά επιβίωσης 1-, 3-, και 5-χρόνου στην ομάδα θεραπείας ήταν 100%, 77%, και 75%, σε σύγκριση με τον έλεγχο του 85%, 23%, και 15% αντίστοιχα. (Β) Νόσος ελεύθερη επιβίωση των ασθενών με γαστρικό καρκίνο. Τα ποσοστά επιβίωσης 1-, 3-, και 5-χρόνου στην ομάδα θεραπείας ήταν 100%, 69% και 66%, σε σύγκριση με τον έλεγχο 69%, 15% και 8% αντίστοιχα. Οι αθροιστικές καμπύλες επιβίωσης σε Α και Β αναλύθηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier.

Η

Πιθανές δυσμενείς επιπτώσεις της κυτταρικής ανοσοθεραπείας με βάση

Η πιο συχνή ανεπιθύμητη ενέργεια που παρατηρήθηκε σε όλους τους ασθενείς που λαμβάνουν θεραπεία DC /CIK ήταν πυρετός, η οποία συνέβη σε 9 από τους ασθενείς έλαβαν 27 (33%) στην περιοχή από 37,5 έως 40 ° C. Όλοι οι ασθενείς ανέκαμψαν αυθόρμητα ή μετά αντιπυρετική αγωγή με μη στεροειδή φάρμακα. Δεν παρατηρήθηκαν άλλες σημαντικές επιπλοκές που συνοδεύουν με βάση τα κύτταρα ανοσοθεραπεία.

Συζήτηση

ανοσοθεραπεία του καρκίνου είχαν δείξει μια πιθανή αποτελεσματικότητα στον έλεγχο της ανάπτυξης του όγκου και της επιβίωσης ασθενών [14], [38], [39] καθώς η είδηση ​​κυκλοφόρησε ότι «Αντί να χρησιμοποιεί τη χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία, ή ακτινοθεραπεία, ερευνητές από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας βρίσκουν έτσι στιγμής περιορισμένη, αλλά εμπνέει επιτυχία σε μια νέα προσέγγιση για την καταπολέμηση του καρκίνου, χρησιμοποιώντας το ανοσοποιητικό σύστημα να επιτεθεί στους όγκους ο τρόπος θα ήταν ένα κρυολόγημα ή γρίπη. -CNN.com (Αύγουστος 2006) «. Αν και εκτεταμένα μελετηθεί σε κύτταρα και ζωικά μοντέλα, εξακολουθούν να διερευνηθούν περαιτέρω τα κλινικά δεδομένα σχετικά με το ακριβές όφελος της ανοσοθεραπείας στην επιβίωση των ασθενών και την εξέλιξη της νόσου [17], [40]. Παρά το περιορισμένο μέγεθος της ομάδες, η μελέτη αυτή δείχνει μια αξιοσημείωτη βελτίωση στη μετεγχειρητική έλεγχο της υποτροπής και της επιβίωσης ποσοστά όγκου σε GC και ασθενείς CRC αγωγή με συνδυασμένη θεραπεία DC /ΟΙΚ. Έχει επίσης αποδειχθεί ότι οι ΑΧ προνομιακή αφελή Τ-κυττάρων και εμβόλιο DC σε συνδυασμό με κυτταρική θεραπεία CIK έχει επιτευχθεί ενθαρρυντική υπόσχεση ως μια νέα θεραπευτική προσέγγιση για τον έλεγχο της νόσου σε συγκεκριμένους καρκίνους [41]. DCs [6], [7], [42] έχουν τη δυνατότητα να παρουσιάζουν αντιγόνα όγκου σε Τ λεμφοκύτταρα και να επάγουν τα ειδικά κυτταροτοξικά Τ κύτταρα έναντι αντιγόνων όγκου [43]. Sipuleucel-T, το πρώτο εμβόλιο DC, είχε εγκριθεί για κλινική εφαρμογή από το FDA στις ΗΠΑ για τη θεραπεία της ασυμπτωματικής μεταστατικό ευνουχισμού ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη, η βελτίωση OS ασθενών στη μελέτη φάσης ΙΙΙ [14]. Πρόσθετες ελπιδοφόρα αποτελέσματα αναφέρθηκαν σε πρόσφατη δοκιμές φάσης ΙΙΙ με τη χρήση του εμβολίου όγκου για τη θεραπεία διαφόρων μορφών καρκίνου προχωρημένο στάδιο [44], συμπεριλαμβανομένου του μελανώματος, το οζώδες λέμφωμα, CRC, και NSCLC. Μελέτες σε κλινικές απέδειξαν ότι τα αντιγόνα που σχετίζονται με όγκους DCs σύλληψη και τη διαδικασία και να εκκρίνουν κυτοκίνες να κινήσει μία ανοσολογική απόκριση [45].

Εκτός εμβόλιο DC, CIKs επάγονται από κυτοκίνες και έχουν μη ειδική κυτταροτοξικότητα κατά των όγκων [24]. Τα CIK κύτταρα μπορεί να θανατώνουν κύτταρα όγκου απευθείας, αλλά έχουν αποτελεσματικότητα σημαντικά βραχυπρόθεσμα αντικαρκινικών και είναι λιγότερο πιθανό να ελέγξουν την ανάπτυξη όγκων σε μακροπρόθεσμη [24]. Σε αντίθεση, το εμβόλιο DC φαίνεται να επάγει όγκο-ειδική τελεστή και μνήμης Τ κύτταρα [24]. Ως εκ τούτου, ο συνδυασμός του εμβολίου DC με θεραπεία CIK έχει δυνητικό υψηλότερη κυτταροτοξική δραστηριότητα και ειδικότητα στα δραστικά Τ κύτταρα, η οποία δείχνει τόσο την αποτελεσματικότητα βραχυπρόθεσμα όσο και μακροπρόθεσμα κατά του όγκου. Σε συμφωνία με τα κλινικά οφέλη παρατηρούνται και σε άλλες κλινικές δοκιμές [44], η μελέτη μας δείχνει ότι η θεραπεία DC /CIK μπορεί να ενισχύσει σημαντικά την επιβίωση των ασθενών, με αποτέλεσμα το μέλλον κλινική έρευνα.

Παρά το γεγονός ότι μια σειρά από προ-φλεγμονωδών κυτοκινών ήταν αυξημένα στο DC /CIK αγωγή ασθενών, μόνο δύο Th1 κυτοκινών, IL-12 και ΙΡΝ-γ, έδειξε μια σημαντική αύξηση σε ορούς ασθενών στη μελέτη μας. Μελέτες έδειξαν ότι η ΙΡΝ-γ και IL-12 παίζουν κρίσιμους ρόλους στην ανοσοθεραπεία χρησιμοποιώντας DC και CIK [28], [33]. Τα καρκινικά κύτταρα είναι άκρως ετερογενή [46] και ένα ειδικό όγκου μπορεί να περιέχει κύτταρα με πληθυσμούς τόσο υψηλές και χαμηλές MHC-I [47], [48]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση MHC-I δείχνει ετερογενής μεταξύ των κυττάρων του όγκου και ακτινοβολία προάγει την ανοσολογική αναγνώριση των κυττάρων του όγκου από κύτταρα του ανοσοποιητικού μέσω MHC-I [49]. Ωστόσο, πιθανώς λόγω της ανομοιογένειας σε ένα δεδομένο όγκο, ένα μόνο είδος του ανοσοποιητικού θεραπεία μπορεί να είναι αποτελεσματική σε υποπληθυσμό των ασθενών με καρκίνο μόνο. Παρομοίως, καρκινικά κύτταρα με υψηλότερη έκφραση MHC-I μπορεί να είναι πιο ευαίσθητη στη θεραπεία εμβόλιο DC ενώ τα κύτταρα με χαμηλότερη έκφραση MHC-I μπορεί να σκοτωθεί από CIK. Τα αποτελέσματά μας υποστήριξης που συνδυασμένη θεραπεία DC /CIK μπορεί να προάγει καρκινικών κυττάρων κυτταροτοξικότητα με τη στόχευση διαφορετικών πληθυσμών των κυττάρων του όγκου, όπως εκείνα με διάφορα επίπεδα MHC-I.

Οι δόσεις των DC και CIK στους ασθενείς σε αυτό μελέτη προσδιορίστηκαν με βάση την κλιμάκωση της δοκιμής προηγούμενη δόση, και βρέθηκε να είναι ασφαλής σε όλους τους ασθενείς. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι στην παρούσα μελέτη, τα δεδομένα προήλθαν από ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ένα τροποποιημένο σχήμα, δηλαδή, πριν από τη συλλογή των λεμφοκυττάρων από ενδοφλέβια χορήγηση IL-2 για να βελτιώσει τη λειτουργία και τον αριθμό των λεμφοκυττάρων, τα οποία μπορούν να συνεισφέρουν ένα σημαντικό ρόλο στην DC /θεραπείας CIK. Επιπλέον, οι ασθενείς έλαβαν επίσης 1 κύκλο χαμηλής δόσης χημειοθεραπείας πριν από την έγχυση DC και CIK, η οποία μπορεί επίσης να επηρεάσει τη συνολική αποτελεσματικότητα της θεραπείας με DC /CIK. Υποθέσαμε ότι ένα κενό 3-ημερών είναι κρίσιμη για επαρκή «έκπλυσης» του χημειοθεραπευτικού παράγοντα, έτσι ώστε να μην επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα του εγχυόμενου DC και CIK. Οι ασθενείς στην ομάδα ελέγχου είχαν προηγουμένως υποβληθεί σε θεραπεία με τουλάχιστον 1 κύκλο της χημειοθεραπείας, συγκρίσιμη με ασθενείς που συμμετείχαν στην ομάδα ανοσοθεραπεία (Πίνακας 1 και τα Σχήματα 5, 6). Οι πιθανές επιπτώσεις της χαμηλής δόσης χημειοθεραπείας πριν από την έγχυση των κυττάρων [28] μπορεί επίσης να προκαλέσει θανάτωση των καρκινικών κυττάρων, ρυθμίζουν την έκφραση του αντιγόνου όγκου και συμβάλλουν στη σύνθεση των κυττάρων του ανοσοποιητικού ξενιστή. Ως εκ τούτου, περαιτέρω μελέτες θα διεξάγονται με μεγαλύτερες ομάδες ασθενών. Εν κατακλείδι, αυτή η κλινική μελέτη δείχνει ότι ο συνδυασμός του εμβολίου DC και θεραπείας CIK μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την ελεύθερη νόσου επιβίωση σε ασθενείς με γαστρικό και του παχέος εντέρου.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ William Murphy και ο Δρ Cheikh Menaa στο NCI-σχεδιασμένο ολοκληρωμένο κέντρο του καρκίνου του Πανεπιστημίου της Καλιφόρνια στο Ντέιβις για τις χρήσιμες συζητήσεις, και η τεράστια υποστήριξη των γιατρών και νοσηλευτών στο κέντρο βιοθεραπεία, Qingdao Κεντρικό Νοσοκομείο.