Αφηρημένο

Εισαγωγή

Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι οι μικροσκοπικές μεταστάσεις στους λεμφαδένες και κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων μπορεί να έχει κλινική σημασία σε καρκίνο του πνεύμονα. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιορίσει νέων μοριακών δεικτών για κύτταρα όγκου σε περιφερειακό λεμφαδένες (LNs) και περιφερικό αίμα (ΡΒ) από ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC).

Μέθοδοι

επιλεγμένα

οι υποψήφιες δείκτες βασίστηκαν σε ψηφιακό προφίλ απομαγνητοφώνηση και προηγούμενη βιβλιογραφία.

KRT19

,

CEACAM5

,

EpCAM, DSG3, SFTPA, SFTPC

και

SFTPB

επίπεδα mRNA αρχικά επικυρωθεί από πραγματικό χρόνο αντίστροφη μεταγραφή PCR- με βάση την ποσοτικοποίηση σε 16 όγκους NSCLC και 22 LNs και 12 ΡΒ δείγματα από άτομα χωρίς γνωστό καρκίνο. Πέντε από τις υποψήφιες δείκτες επιλέχθηκαν για τη δευτεροβάθμια επικύρωση από την ποσοτικοποίηση παράλληλα βιοψίες των όγκων, των περιφερειακών LNs και ΡΒ δείγματα από 55 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση για NSCLC. LN και δείκτη PB κατάστασης συγκρίθηκαν με κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένων του ασθενούς.

Αποτελέσματα

Όλα τα επιλεγμένα δείκτες, εκτός από DSG3 ήταν παρόντες σε υψηλά επίπεδα στους πρωτοπαθείς όγκους και σε πολύ χαμηλές ή μη ανιχνεύσιμα επίπεδα στο φυσιολογικό LNs και ΡΒ στον πρώτο γύρο της επικύρωσης, υποδεικνύοντας μια πιθανότητα για την ανίχνευση καρκινικών κυττάρων σε ασθενείς με NSCLC. Τα προφίλ έκφρασης του

KRT19

,

CEACAM5, DSG3, SFTPA

και

SFTPC

mRNA επιβεβαιώθηκαν στην μεγαλύτερη ομάδα κατά τη διάρκεια της δευτεροβάθμιας επικύρωσης. Χρησιμοποιώντας το υψηλότερο φυσιολογικό επίπεδο LN του κάθε δείκτη ως κατώφλι, 39 (71%) από τους 55 ασθενείς είχαν αυξημένα επίπεδα τουλάχιστον ενός δείκτη στο περιφερειακό LNs. Παρομοίως, 26 (47%) ασθενείς είχαν αυξημένα επίπεδα τουλάχιστον ενός δείκτη στο ΡΒ. Ένα σημαντικά μεγαλύτερο αριθμό ασθενών με αδενοκαρκίνωμα είχαν θετική κατάσταση LN για αυτούς τους δείκτες, σε σύγκριση με άλλες ιστολογικών τύπων (P = 0,004).

Συμπεράσματα

Πολλά υποσχόμενη δείκτες μοριακών καρκινικών κυττάρων στο περιφερειακό LNs και PB εντοπίστηκαν, συμπεριλαμβανομένων των νέων

SFTPA

και

SFTPC

mRNA. Κλινική παρακολούθηση σε μια μεγαλύτερη ομάδα χρειάζεται να διευκρινιστεί προγνωστική αξία τους

Παράθεση:. Nordgard O, Singh G, Solberg S, Jørgensen L, Halvorsen AR, Smaaland R, et al. (2013) Συσκευές νέων μοριακών όγκων κυττάρων στην περιφερειακή λεμφαδένες και δείγματα αίματος από ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 8 (5): e62153. doi: 10.1371 /journal.pone.0062153

Επιμέλεια: Alfons Navarro, Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης, Ισπανία

Ελήφθη: τρίτης Δεκέμβρη 2012? Αποδεκτές: 18 του Μάρτη του 2013? Δημοσιεύθηκε: May 3, 2013

Copyright: © 2013 Nordgard et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από 1) Νοτιοανατολική Νορβηγία Περιφερειακή Αρχή Υγείας και 2) Folke Ταμείο Hermansen. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο σε όλο τον κόσμο [1]. Η πρόγνωση είναι καλύτερη για τους ασθενείς με μικρούς όγκους και δεν μεσοθωρακίου ή απομακρυσμένες μεταστάσεις. Ασθενείς με σύστοιχη πυλαία μεταστάσεις λεμφαδένων μπορεί να λάβει τη χειρουργική επέμβαση εάν άλλως ταιριάζει. Το σύστημα TNM είναι ευρέως αποδεκτό για προχειρουργική ταξινόμηση [2], και καθοδηγεί περαιτέρω επεξεργασία.

Πολλοί ασθενείς με μικρούς όγκους και χωρίς εμφανείς μεταστάσεις λεμφαδένων θα εξακολουθεί να υποκύψει στην νόσο. Το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης σε ασθενείς με εντοπισμένη νόσο είναι 50% στις γυναίκες και 41% σε άνδρες [3]. Αυτό δείχνει ότι ένα υποσύνολο των ασθενών με μικρούς όγκους είχαν μεταστατική εξάπλωση πριν τη χειρουργική επέμβαση, και ότι επί του παρόντος διαθέσιμες μέθοδοι για τον προσδιορισμό αυτών εξάπλωσης έχουν αποτύχει. Με τον προσδιορισμό υπολειμματική καρκινικά κύτταρα, επιλέγονται οι ασθενείς μπορούσαν να λάβουν επικουρική θεραπεία για την εξάλειψη των καρκινικών κυττάρων δεν αφαιρεθεί με χειρουργική επέμβαση.

Πολλά σχέδια έχουν στόχο την εξεύρεση δείκτες για τον εντοπισμό μικρομεταστάσεων και υπολειμματικά καρκινικά κύτταρα, είτε ως καρκινικά κύτταρα στο αίμα , λεμφαδένες (LN) ή μυελού των οστών, ή ως RNA ή πρωτεΐνες που προέρχονται από τα καρκινικά κύτταρα στο αίμα, LNs ή μυελού των οστών [4], [5]. Κοινό τεχνολογίες για την ανίχνευση μεταστάσεων περιλαμβάνουν αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής (RT-PCR), ανοσοκυτταροχημεία και ανοσοϊστοχημεία. αναγνώρισης καρκινικών κυττάρων από το CellSearch σύστημα (με βάση ανοσομαγνητικά εμπλουτισμό και ανοσοφθορισμού) ή τις διαδικασίες φιλτραρίσματος, έχουν διεξαχθεί τόσο σε ένα γενικό πνεύμονα καρκίνο πληθυσμού [5], [6], και σε ασθενείς που υποβάλλονται σε ειδική επεξεργασία σε μια κλινική δοκιμή [7] . Ποσοτική RT-PCR ανάλυση των προϊόντων λύσης λεμφαδένων πιστεύεται ότι είναι μια πιο ευαίσθητη τεχνική σε σύγκριση με ανοσοϊστοχημεία, και η μέθοδος αυτή επιτρέπει την έρευνα ολόκληρων LNs παρά μόνο επιλεγμένα τμήματα. Δείγματα αίματος μπορεί επίσης να αξιολογηθεί με RT-PCR για την ανίχνευση μεταστατική νόσο, και θα είναι η λιγότερο επεμβατική από τις μεθόδους για τον εντοπισμό μεταστατικών κυττάρων.

Αρκετές διαφορετικές πρωτεΐνες και οι μεταγραφές έχουν ερευνηθεί ως δείκτες των καρκινικών κυττάρων στο αίμα και LNs. Τα mRNAs για επιθηλιακά ειδικά κυτοκερατίνη (CK) 19 και 7 έχουν προταθεί ως δείκτες της μικροσκοπικής λεμφικού εξάπλωσης [8]. Έκφραση του

SFTPB, TACSTD1

, και

PVA

έχουν δείξει ελπιδοφόρα σύμπτωση με μεταστάσεις στους λεμφαδένες [9], και

CEACAM5

και

PLUNC

έκφρασης λεμφαδένες αξιολογήθηκαν με RT-PCR, αποκαλύπτοντας ένα συσχέτιση με την επιβίωση [10].

CEACAM5

επίπεδα mRNA σε λεμφαδένες παρουσίασαν συσχέτιση με την επιβίωση σε μια κινεζική μελέτη των ασθενών με NSCLC [11]. Τα αποτελέσματα έχουν εμφανίσει αποκλίσεις, τόσο όσον αφορά τα ποσοστά ανίχνευσης και κλινικές επιπτώσεις, πιθανώς λόγω των διαφορών στη μεθοδολογία και τα μεγέθη των δειγμάτων.

Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε αρκετά υποθετικά ενδιαφέρον δείκτες σε LNs και στο περιφερικό αίμα (ΡΒ) από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα πρώιμου σταδίου που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση. Συγκρίναμε την έκφραση των διαφόρων δεικτών στους όγκους, τα LNs και ΡΒ δείγματα σε σχέση με τα κλινικά χαρακτηριστικά του ασθενούς.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς

Οι ασθενείς που έχουν εισαχθεί προς Όσλο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο – το Εθνικό Νοσοκομείο για χειρουργική θεραπεία ιστολογικά επαληθεύεται μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) προσλήφθηκαν προοπτικά στη μελέτη κατά την περίοδο 2009 έως 2010. Οι όγκοι από ασθενείς συμπεριλήφθηκαν στην βιοτράπεζα ανάλογα με τη διαθεσιμότητα νοσοκόμα της μελέτης, και συμπεριλήφθηκαν περίπου 53% του συνολικού αριθμού των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα χειρουργική θεραπεία κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου. Η ταξινόμηση βάσης ανάλογα με την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, το στάδιο (ΤΝΜ-7-κατάταξης) και ιστολογία παρουσιάζεται στον Πίνακα 1. Η μέση ηλικία ήταν 66,5 χρόνια.

Η

Δήλωση Ηθικής

το σχέδιο εγκρίθηκε από το Διοικητικό συμβούλιο νορβηγική Ράδιο Νοσοκομείο Institutional Review και το Περιφερειακό Επιτροπή Δεοντολογίας της Νοτιοανατολικής (αριθμός άδειας: S-05307). Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα.

Δείγματα

Όλες οι βιοψίες των όγκων ελήφθησαν από προφανώς ζωτικής σημασίας ιστό του όγκου. Σε μικρότερους όγκους χωρίς σημάδια νέκρωσης, τα δείγματα αφαιρέθηκαν από το κεντρικό τμήμα του όγκου. Σε μεγαλύτερους όγκους με τα σημάδια της κεντρικής νέκρωσης, τα δείγματα αφαιρέθηκαν από περισσότερες περιφερειακά τμήματα του όγκου. Έγιναν προσπάθειες να λάβουν καθαρό ιστό του όγκου, χωρίς περιβάλλοντα ιστό των πνευμόνων.

Η δειγματοληψία LN στις περισσότερες περιπτώσεις έγινε σύμφωνα με την Ευρωπαϊκή Εταιρεία Χειρουργών Θώρακος (ESTS) κατευθυντήριες γραμμές [12]. Τα δείγματα ελήφθησαν κυρίως από την αναμενόμενη περιοχή απορροής του όγκου. Λίγες εξαιρέσεις συνέβη σε καταστάσεις, όταν ο χειρουργός ύποπτη παθολογία σε άλλους σταθμούς LN.

Ένα έως τέσσερα πυλαία LNs αποκόπηκαν από τα χειρουργικά δείγματα όλων των ασθενών, αφήνοντας το ήμισυ τον κόμβο για ρουτίνα παθολογική εξέταση και το ήμισυ για τη μοριακή αναλύσεις. Τόσο οι κόμβοι ιστού και της λέμφου όγκου καταψύχθηκαν ακαριαία σε υγρό άζωτο στο χειρουργείο, και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την απομόνωση του RNA. Η περιεκτικότητα των κυττάρων του όγκου στα δείγματα όγκου ήταν περισσότερο από 70% στα περισσότερα δείγματα.

Δεκαέξι χωρίς καρκίνο LNs από 8 ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για καλοήθεις ασθένειες του παχέος εντέρου και 6 LNs από 6 ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για καλοήθεις πνευμονικές νόσους ήταν συλλέγεται ως κανονικό υλικό αναφοράς LN.

για όλους τους ασθενείς 2,5 ml αίματος συλλέχθηκε σε ΡΑΧ-σωλήνες πριν την επέμβαση για τη συντήρηση RNA. Τα δείγματα αίματος ελήφθησαν από φλεβικό λιμάνι, και τα δείγματα που ελήφθησαν για την έρευνα δεν ήταν η πρώτη? ως εκ τούτου, τα επιθηλιακά μόλυνση των κυττάρων ήταν απίθανο. Δείγματα περιφερικού αίματος ελήφθησαν επίσης από 12 υγιείς ελέγχους.

RNA Extraction

LNs και καρκινικού ιστού ομογενοποιήθηκαν και υποβλήθηκαν σε λύση, και το RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ (Invitrogen).

Για τα δείγματα αίματος, σωλήνες PAXgene RNA αίμα αποψύχθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου όλη τη νύκτα. Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το PAXgene Blood Kit miRNA Απομόνωση, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. ποσότητα RNA και η καθαρότητα εκτιμήθηκε με τη χρήση της NanoDrop ND-1000 φασματοφωτόμετρο (ThermoFisher Scientific, Wilmington, Delaware, USA). ποιότητα του RNA ελέγχεται από την Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA).

DNAse θεραπεία και Αντίστροφη Μεταγραφή

Το RNA DNAse επεξεργασμένο με επώαση 500 ng ολικού RNA από κάθε δείγμα με 1 μονάδα RQ1 RNAse DNAse απαλλαγμένη (Promega) σε συνολικό όγκο 10 λίτρα 1 χ First Strand Synthesis ρυθμιστικό (Invitrogen) που περιέχει 10 μονάδες αναστολέα RNAse RNAseOUT (Invitrogen). Το μίγμα της αντίδρασης επωάστηκε στους 37 ° C για 30 λεπτά και η ϋΝΑση αδρανοποιείται με την προσθήκη διαλύματος διακοπής RQ1 1 L και επώαση 10 λεπτών στους 65 ° C. Συμπληρωματικό DNA συντέθηκε από την ϋΝΑση επεξεργασμένο RNA από την M-MLV αντίστροφη μεταγραφάση σε ένα συνολικό όγκο 20 λίτρων σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Invitrogen).

εκκινητές PCR

Τουλάχιστον ένα από τα οι εκκινητές PCR σε κάθε ζεύγος εκκινητών σχεδιάστηκε για να καλύπτουν τα όρια εξονίου /εξονίου ή είχαν σχεδιαστεί να δεσμεύονται σε διαφορετικά εξόνια. Η ταυτότητα των αξιολογήθηκαν μεταγραφές δείκτη και τις αλληλουχίες εκκινητή παρατίθενται στον Πίνακα 2.

Η

ποσοτική PCR

ενισχύσεις PCR διεξήχθησαν με το κιτ qPCR SYBR Green Πυρήνας (Eurogentec) σύμφωνα με συστάσεις του κατασκευαστή. Αντίστροφη μεταγραφή του RNA (20 ng) ενισχύθηκε σε συνολικό όγκο 25 L που περιείχε 1 χ ρυθμιστικό αντίδρασης, 0,2 mM dNTP, 0,75 l 1:200 SYBR Green Ι αραιώνεται σε DMSO και MgCl, εμπρός και όπισθεν συγκεντρώσεις εκκινητή όπως φαίνεται στο πίνακα 2. θερμοκυκλοποίηση και σε πραγματικό χρόνο μετρήσεις φθορισμού διεξήχθησαν σε ένα Mx3000P πραγματικού χρόνου PCR όργανο (Stratagene), με ένα στάδιο ενεργοποίησης 10 λεπτά στους 95 ° C που ακολουθείται από 40 κύκλους των 30 δευτερολέπτων στους 95 ° C και 60 δευτερόλεπτα σε 60 ° C. Στη συνέχεια, τα προϊόντα PCR αναλύθηκαν με καμπύλες τήξης. Όλες οι καμπύλες τήξης αποκάλυψε σαφώς καθορισμένες κορυφές με τις αναμενόμενες θερμοκρασίες τήξης, επιβεβαιώνοντας την ειδικότητα των εκκινητών υπό τις συνθήκες της αντίδρασης. ταυτότητες αμπλικόνιο επιβεβαιώθηκαν επίσης με προσδιορισμό της αλληλουχίας. Αντίδραση set-up, προσθήκη πρότυπο και θερμοκυκλοποίηση διεξήχθησαν σε σε τρία ξεχωριστά, αφιερωμένη δωμάτια. Έλεγχοι που δεν περιέχουν το πρότυπο συμπεριλήφθηκαν σε κάθε επιχείρηση να παρακολουθεί πιθανή μόλυνση.

Σχετική επίπεδα το καθένα mRNA δείκτη προσδιορίστηκαν από κανονικοποίηση κατά την απομαγνητοφώνηση αναφοράς BCR και ένα δείγμα βαθμονομητή περιλαμβάνονται σε κάθε τρέξιμο, χρησιμοποιώντας το μοντέλο [13] , [14]. Το δείγμα βαθμονόμησης έγινε με ανάμιξη RNA από το NCI-Η441 (Ευρωπαϊκή Συλλογή Καλλιεργειών Κυττάρων) κυτταρική γραμμή (50%) και δύο όγκους NSCLC (25% το καθένα), επιλέχθηκε λόγω των υψηλών επιπέδων όλων των πιθανών δεικτών. Η επαναληψιμότητα των δοκιμασιών προσδιορίστηκε με μέτρηση του ίδιου δείγματος αναφοράς σε πέντε διαδοχικά πειράματα. Οι συντελεστές διακύμανσης καθορίζονται ήταν 7,5%, 9,6%, 6,1%, 7,3% και 8,1% για το

CK19

,

CEACAM5, DSG-3, SFTPA

, και

SFTPC

προσδιορισμούς, αντίστοιχα. Τα οριακά επίπεδα για την θετικότητα του κάθε δείκτη στο αίμα και της λέμφου τέθηκαν στα υψηλότερα επίπεδα σε φυσιολογικά LNs και ΡΒ δείγματα.

Το πραγματικό χρόνο ποσοτικούς προσδιορισμούς PCR πραγματοποιήθηκαν από δύο άτομα (GS και ON), οι οποίοι είχαν τυφλωθεί με τα χαρακτηριστικά των ασθενών και πρωτογενείς όγκους.

Bioinformatic Marker Αναζητήσεις

Εκφράζεται βιβλιοθήκες tag αλληλουχίας (EST) και σειριακή ανάλυση έκφρασης γονιδίου (SAGE) βιβλιοθήκες αναζητήθηκαν για τις υποψήφιες δείκτες από το cDNA και SAGE ψηφιακή γονίδιο displayer έκφρασης (DGED) εργαλεία στην ιστοσελίδα Cancer Gene Ανατομία του έργου (CGAP) (www.ncbi.nih.gov/cgap). Αναλυτικά, όλα τα διαθέσιμα βιβλιοθήκες EST από φυσιολογικό ιστό πνεύμονα ενήλικα και καρκίνοι του πνεύμονα (πισίνα Α) συγκρίθηκαν με βιβλιοθήκες από κανονικό LNs και φυσιολογικό μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (πισίνα Β). Το εργαλείο DGED παράγεται μια λίστα βαθμολόγησης των γονιδίων διέταξε, σύμφωνα με διαφορές στα επίπεδα έκφρασης μεταξύ των δύο βιβλιοθηκών πισίνες, υπολογίζεται για κάθε μεταγραφή ως ο λόγος των ακολουθιών στην πισίνα Μια έναντι πισίνα B. Η SAGE DGED αναζητήσεις έγιναν παρομοίως. Μεταγραφές που διαμένουν στην κορυφή και των δύο καταλόγων υψηλής βαθμολογίας (EST και SAGE DGED) επιλέχθηκαν για περαιτέρω χαρακτηρισμό. Τα υψηλά επίπεδα σε πολλές από τις βιβλιοθήκες της πισίνας Α προτιμάται σε εξαιρετικά υψηλά επίπεδα σε ένα περιορισμένο αριθμό από αυτά.

Στατιστική Ανάλυση

επίπεδα mRNA δεν ήταν κανονικά κατανεμημένες και συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U test. Κατηγορικά δεδομένα συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher. Ανάλυση σε κύριες συνιστώσες [15] έγινε από το

prcomp

λειτουργία στην Ε [16], την κλιμάκωση των μεταβλητών να έχει μονάδα διακύμανσης πριν από την ανάλυση. Δύο όψεων στατιστικές δοκιμασίες διεξήχθησαν και ρ-τιμές P0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές. Όλοι οι υπολογισμοί έγιναν με το πακέτο λογισμικού R (www.r-project.org) έκδοση 2.13.1.

Αποτελέσματα

Επιλογή και επικύρωση των υποψήφιων Μαρκαδόροι

Εμείς συστηματικά αναζήτηση εκφράζεται tag αλληλουχίας (EST) και σειριακή ανάλυση έκφρασης γονιδίου (SAGE) βιβλιοθήκες για mRNAs που ήταν εν δυνάμει δείκτες των καρκινικών κυττάρων στους λεμφαδένες (LNs) και περιφερικό αίμα (ΡΒ) από ασθενείς με NSCLC. Υποψήφιος δείκτες βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με τη διαφορά επίπεδο έκφρασης μεταξύ των καρκίνων του πνεύμονα και κανονικό LNs /PB. Από τους καταλόγους των μεταγραφών με την υψηλότερη βαθμολογία, επιλέξαμε κερατίνη 19 (

KRT19

), καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο που σχετίζονται με μορίου προσκόλλησης κυττάρων (

CEACAM5

), επιθηλιακό μόριο κυτταρικής προσκόλλησης (

EpCAM

), επιφανειοδραστικό πρωτεΐνες Α (

SFTPA

) και C (

SFTPC

) για περαιτέρω επικύρωση ως υποψήφιος δείκτες.

KRT19, CEACAM5

και

EpCam

mRNA είχε αναφερθεί στο παρελθόν ως πολλά υποσχόμενη δείκτες καρκινικών κυττάρων σε LNs από ασθενείς με NSCLC [17], ενώ η

SFTPA

και

SFTPC

ήταν νέα γονίδια σε αυτό το πλαίσιο. Με βάση την προηγούμενη βιβλιογραφία, μπορούμε επίσης να επιλεγεί δεσμογλεΐνης 3

DSG3

και πρωτεΐνη επιφανειοδραστικού Β (

SFTPB

) mRNA για περαιτέρω επικύρωση [17]. Επιφανειοδραστικό πρωτεΐνες είναι βασικά συστατικά της πνευμονικού επιφανειοδραστικού ρευστό, το οποίο είναι σημαντικό για τη λειτουργία και ομοιόσταση των κυψελίδων των πνευμόνων. SFTPA Ασχολείται κυρίως με την άμυνα κατά των αναπνευστικών παθογόνων [18], ενώ SFTPB και SFTPC διατηρήσει την ακριβή κατάσταση του φιλμ λιπιδίων επιφανειοδραστικού [19].

Ως πρώτο επικύρωση των 7 υποψηφίων δείκτες, μετρήσαμε τους επίπεδα σε 16 βιοψίες όγκων NSCLC, 22 χωρίς καρκίνο LNs και 12 φυσιολογικά δείγματα ΡΒ ελέγχου με ποσοτική RT-PCR (Εικόνα 1). Εκτός από

DSG3

, τα επίπεδα όλων των δεικτών ήταν πολύ υψηλότερη στους όγκους σε σχέση με τις LNs ελέγχου και PB (P0.001).

CEACAM5

και

SFTPC

mRNA ήταν μη ανιχνεύσιμο σε φυσιολογικά δείγματα αίματος. Είναι ενδιαφέρον ότι, το επίπεδο του

SFTPA

mRNA στα 6 LNs ελέγχου από τους πνεύμονες ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι στις LNs ελέγχου από το μεσεντέριο κόλον (Ρ = 0,002). Μια παρόμοια τάση, αν και δεν είναι στατιστικά σημαντική, παρατηρήθηκε επίσης για

SFTPB

και

SFTPC

, αλλά όχι για τις υπόλοιπες υποψήφιες δείκτες.

μέσες τιμές υποδεικνύονται με μικρή οριζόντια γραμμές, ενώ τα δείγματα με επίπεδα κάτω από το όριο ανίχνευσης (LOD) υποδεικνύεται κάτω από την διακεκομμένη οριζόντια γραμμή. Τα επίπεδα των διαφόρων δεικτών είναι σε σχέση με ένα δείγμα βαθμονομητή και δεν είναι άμεσα συγκρίσιμα.

Η

Εμείς υπολογίζονται δείκτες ειδικότητα για κάθε δείκτη διαιρώντας το μέσο επίπεδο του όγκου του κάθε δείκτη από το υψηλότερο επίπεδο στην κανονική LNs ελέγχου και ΡΒ δείγματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) [20]. Οι τρεις υψηλότερες δείκτες ειδικότητας λήφθηκαν για

SFTPB

,

CEACAM5

, και

SFTPA

(φθίνουσα σειρά) στο LNs και για το

SFTPA

,

KRT19

, και

SFTPB

σε PB. ευρετήρια ειδικότητα για

CEACAM5

και

SFTPC

στο αίμα δεν θα μπορούσε να υπολογιστεί, λόγω της μη ανιχνεύσιμα επίπεδα δείκτη στο φυσιολογικό αίμα. Καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι όλοι αξιολογούνται οι υποψήφιοι, εκτός από

DSG3

φαινόταν να έχει καλό δυναμικό ως δείκτες των καρκινικών κυττάρων στην LNs ασθενή και ΡΒ δείγματα, σύμφωνα με τις διαφορές στα επίπεδα έκφρασης μεταξύ των όγκων και τον τύπο ενδιαφέρον δείγμα.

Συγκεκριμένες επιθηλιακά mRNAs μπορεί να ρυθμίζεται προς τα κάτω σε υποσύνολα των όγκων, μειώνοντας τη χρησιμότητά τους ως δείκτες μετάσταση στους αντίστοιχους ασθενείς. Κατά συνέπεια, πραγματοποιήθηκε ανάλυση σε κύριες συνιστώσες των επιπέδων δείκτη στο 16 εξέτασε όγκους NSCLC για τον εντοπισμό συμμεταβολές. Οι δύο πρώτες κύριες συνιστώσες εξήγησε το 62% της διακύμανσης στο σύνολο δεδομένων. Μια biplot των αρχικών μεταβλητών (συγκεντρώσεις σε σχέση mRNA) και τα δείγματα όγκων προβάλλονται πάνω στις δύο πρώτες κύριες συνιστώσες έδειξε ότι

SFTPA

,

SFTPB

και

SFTPC

επίπεδα mRNA συσχετίστηκαν με το άλλο (τα βέλη δείχνουν προς την ίδια κατεύθυνση), ενώ

EpCAM

και

CEACAM5

και

KRT19

mRNA covariated επίσης (σχήμα 2). Για να επιλέξετε ένα σύνολο υποψήφιων δεικτών που καλύπτουν άριστα το φάσμα των καρκίνων NSCLC, επιλέξαμε δύο δείκτες από κάθε μία από αυτές τις ομάδες συνμεταβολή για περαιτέρω επικύρωση εκτός από

DSG3

, η οποία φαινόταν να έχει ένα ανεξάρτητο πρότυπο έκφρασης πρωτοπαθούς όγκου. Η προκύπτουσα πάνελ δείκτης αποτελείται από

KRT19

,

CEACAM5

,

DSG3

,

SFTPA

, και

SFTPC

mRNA.

Οι μαύροι κύκλοι δείχνουν τα δείγματα δεδομένων προβάλλεται πάνω στην πρώτη και δεύτερη κύριες συνιστώσες. Τα κόκκινα βέλη δείχνουν τα παλιά μεταβλητή άξονες προβάλλονται προς τα κύρια συστατικά.

Η

Marker επίπεδα σε όγκους, LNs, και δείγματα αίματος από ασθενείς με ΜΜΚΠ

Για να επικυρώσετε περαιτέρω οι 5 δείκτες στην εκλεπτυσμένη πάνελ, προσδιορίσαμε σχετικά επίπεδα τους σε όγκους (συμπεριλαμβανομένου του 16 από την αρχική επικύρωση), περιφερειακά LNs και ΡΒ δείγματα από 55 ασθενείς με NSCLC που υποβάλλονται σε χειρουργική θεραπεία (Σχήμα 3). Συνολικά 84 LNs από τους 55 ασθενείς που εξετάστηκαν (μέσος όρος 1,5 LN /ασθενή, εύρος 1-3). Μερικοί από LNs των ασθενών και ΡΒ δείγματα είχαν αυξημένα επίπεδα σε σύγκριση με τις συνήθεις ελέγχους. Ωστόσο, τα επίπεδα δείκτη σε LNs προέρχονται από ασθενείς με θετική κατάσταση κόμβου (PN +) σύμφωνα με την ρουτίνα ιστολογική αξιολόγηση δεν ήταν σημαντικά διαφορετική από τις άλλες LNs, αν και υπήρχαν σαφείς τάσεις για ορισμένες από τις δεικτών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Χρησιμοποιήσαμε το υψηλότερο φυσιολογικό επίπεδο κάθε δείκτη ως κατώφλι για τον ορισμό παθολογία σε LNs και ΡΒ δείγματα, αφού τα αυξημένα επίπεδα πιθανότατα ήταν λόγω της παρουσίας των καρκινικών κυττάρων. Με βάση αυτά τα όρια, προσδιορίσαμε τον αριθμό των ασθενών που ήταν θετικοί για κάθε δείκτη καρκινικών κυττάρων σε LNs και ΡΒ δείγματα (Πίνακας 3). Συνολικά, 39 (71%) από τους 55 ασθενείς ήταν θετικοί για τουλάχιστον ένα δείκτη στην εξετάστηκαν LNs, ενώ 26 (47%) των ασθενών είχαν θετικά δείγματα ΡΒ. Για LNs, οι πέντε δείκτες συνέβαλαν σημαντικά στην ταυτοποίηση των ασθενών με μοριακά ενδείξεις μεταστάσεων LN. Σε δείγματα PB,

KRT19

mRNA έπαιξε κυρίαρχο ρόλο στον εντοπισμό πιθανών κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων. Παρατηρήθηκε σημαντική επικάλυψη μεταξύ των διαφορετικών δεικτών. Δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ LN και PB κατάσταση δείκτη.

Οι μέσες τιμές υποδεικνύονται από μικρή οριζόντιες γραμμές, ενώ τα δείγματα με επίπεδα κάτω από το όριο ανίχνευσης (LOD) αναγράφεται κάτω από τη διακεκομμένη οριζόντια γραμμή. Τα επίπεδα των διαφόρων δεικτών είναι σε σχέση με ένα δείγμα βαθμονομητή και δεν είναι άμεσα συγκρίσιμα.

Η

Σύγκριση με κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένων

μοριακής καθορίζεται LN και PB κατάσταση των καρκινικών κυττάρων και κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένα ασθενούς (Πίνακας 1) συγκρίθηκαν, αλλά αναγνωρίστηκε μόνο ένα στατιστικά σημαντική συσχέτιση. Ένα σημαντικά υψηλότερο αριθμό LN-θετικούς ασθενείς που είχαν αδενοκαρκινώματα σε σύγκριση με άλλες ιστολογικών τύπων όγκου (Ρ = 0,004). Ελέγξαμε εάν η διαπίστωση αυτή είχε σχέση με τα κύρια επίπεδα του όγκου των επιμέρους δεικτών, και διαπίστωσε ότι

SFTPC

επίπεδα ήταν σημαντικά υψηλότερα σε αδενοκαρκινώματα από ό, τι σε άλλους υποτύπους όγκου (P = 0,005). Ωστόσο,

SFTPA

,

CEACAM5

και

DSG3

παρουσίασαν παρόμοιες τάσεις, με οριακή στατιστική σημαντικότητα (P = 0,06, P = 0,07 και p = 0,09, αντίστοιχα).

Για την περαιτέρω διερεύνηση της σχέσης μεταξύ της πρωτοβάθμιας επίπεδα όγκου κάθε πληροφορία δείκτη και ιστολογία υπότυπο, ανάλυση κύριων συνιστωσών έγινε (Σχήμα 4). Η προκύπτουσα biplot έδειξε ότι πρωταρχικός

SFTPA

και

SFTPC

επίπεδα συσχετίστηκαν, καθώς και

KRT19

και

επίπεδα DSG3

. Ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα φαίνεται να έχουν υψηλά επίπεδα και των δύο αυτών ομάδων δείκτη, αλλά όχι

CEACAM5

mRNA. Mann-Whitney U δοκιμές επιβεβαίωσαν σημαντικά χαμηλότερα

CEACAM5

επίπεδα mRNA και υψηλότερη

DSG3

επίπεδα mRNA σε squaumous καρκινώματα (P = 0.003 και P = 0,002, αντίστοιχα).

Μαύρο αριθμοί υποδεικνύουν τον τύπο ιστολογία (1 = αδενοκαρκίνωμα, 2 = αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, 3 = βρογχιολοκυψελιδικό καρκίνωμα, 4 = καρκινοειδές, 5 = καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου, 6 = καρκίνωμα μικρών κυττάρων, 7 = καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων).

Η

Συζήτηση

για να διερευνηθεί η κλινική σημασία της διάδοσης των καρκινικών κυττάρων στην περιφερειακή LNs και PB σε ασθενείς με ΜΜΚΠ, οι βέλτιστες μέθοδοι ανίχνευσης που απαιτείται. Στη μελέτη μας επιλέξαμε μια έμμεση προσέγγιση ανίχνευσης, χρησιμοποιώντας επιθηλιακά ειδικά μεταγραφές ως υποκατάστατοι δείκτες για τα καρκινικά κύτταρα. Κατά συνέπεια, αρκετά ελπιδοφόρα δεικτών για κύτταρα όγκου σε περιφερειακό LNs και ΡΒ εντοπίστηκαν και αξιολογήθηκαν στην παρούσα μελέτη. Η ενδελεχής επικύρωση σε κλινικά δείγματα αποκάλυψε ότι

KRT19

,

CEACAM5

,

SFTPA

,

SFTPC

και

DSG3

ήταν ελπιδοφόρα δείκτες για καρκινικά κύτταρα σε LNs και ΡΒ από NSCLC ασθενείς. Η

KRT19

,

CEACAM5

και

DSG3

δείκτες έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [9], ενώ

SFTPA

και

SFTPC

ήταν μυθιστόρημα σε αυτό το πλαίσιο.

με βάση τα αποτελέσματα από τις επικυρώσεις μας και την ανάλυση κύριων συνιστωσών του πρωτογενούς επίπεδα όγκου φαίνεται στο Σχήμα 4, σας προτείνουμε να χρησιμοποιήσετε ένα πάνελ multimarker αποτελείται από

KRT19

,

CEACAM5

και

SFTPA

. Αυτές οι τρεις δείκτες αντιπροσωπεύουν τις τρεις ομάδες για την ανάλυση biplot, υποδηλώνοντας ότι όλες οι 55 όγκοι στα επικύρωση ομάδα μας είχαν υψηλά επίπεδα τουλάχιστον ενός δείκτη. Όλες οι δείκτες βρέθηκαν σε πολύ χαμηλά επίπεδα σε φυσιολογικό LNs και PB, ενώ όλα εκτός από

DSG3

εκφράστηκαν σε υψηλά επίπεδα στους περισσότερους όγκους.

DSG3

εκφράστηκε σε υψηλά επίπεδα στα περισσότερα καρκινώματα πλακωδών κυττάρων (Σχήμα 4 και [9]), αλλά το ίδιο ίσχυε επίσης για

KRT19

. Επειδή

KRT19

ήταν επίσης πανταχού παρούσα και σε άλλες ιστολογικές υποτύπους, και είχε ένα μεγαλύτερο διαφορές στα επίπεδα έκφρασης μεταξύ των όγκων, LNs, και PB, είμαστε υπέρ αυτού του δείκτη από το

KRT19

/

DSG3

ομάδα. Το προτεινόμενο πίνακα multimarker πρέπει να διερευνηθεί για κλινικές επιπτώσεις σε μελλοντικές μελέτες.

Όλοι οι δείκτες αξιολογούνται στην παρούσα μελέτη είχαν σχέση με ένα επιθηλιακό φαινότυπο, ως συνέπεια της inital κριτήρια μας. Πρόσφατα στοιχεία υποδεικνύουν ότι μερικοί ΚΜΑ υποβάλλονται σε επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), η οποία μπορεί να διευκολύνει τη μετανάστευση και την ικανότητα να εισβάλλουν σε άλλα όργανα [21], [22] τους. Αυτή η μετάβαση είναι σε κάποιο βαθμό συνδέεται με μια προς τα κάτω ρύθμιση των επιθηλιακών γονιδίων, πράγμα που σημαίνει ότι επηρεάζονται ΚΜΑ θα είναι πιο δύσκολο να ανιχνευθεί με προσδιορισμούς στηριζόμενη σε επιθηλιακά μεταγραφές και πρωτεΐνες. Παρά το γεγονός αυτό, οι περισσότερες σήμερα διαθέσιμες μεθόδους CTC εμπλουτισμού και ανίχνευσης βασίζεται σε επιθηλιακά δείκτες [23], [24]. Για να μειωθεί το πρόβλημα, προτείνουμε τη χρήση ενός συνδυασμού πολλών επιθηλιακών δεικτών, όπως ο προσδιορισμός multimarker προτείνεται στην παρούσα εργασία. Τέτοιες δοκιμασίες θα είναι λιγότερο ευάλωτα σε αρνητική ρύθμιση των συγκεκριμένων επιθηλιακών μεταγραφές από δοκιμασίες και μόνο δείκτη.

Περιμέναμε υψηλότερα ποσοστά θετικότητας των μοριακών δεικτών μας στα LNs από ασθενείς με μεταστάσεις LN προσδιορίζονται από εξέταση ρουτίνας όλων ανακτηθεί κόμβους (ρΝ1 ), σε σύγκριση με τους ασθενείς με αρνητικούς λεμφαδένες (PN0). Η προσδοκία αυτή βασίστηκε τόσο σε προηγούμενες μοριακές αναλύσεις μας φρουρού LNs από ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου [25], [26] και σε προηγούμενες εκθέσεις της διάδοσης των καρκινικών κυττάρων σε ασθενείς με ΜΜΚΠ [4], [27]. Ωστόσο, δεν παρατηρήσαμε καμία στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ του σταδίου Pn και η ανάλυσή μας μοριακή LN στην παρούσα μελέτη. Μία εξήγηση για αυτό μπορεί να είναι ο χαμηλός αριθμός των κόμβων που αναλύθηκαν από κάθε ασθενή στη μελέτη μας (μέση 1,5), το οποίο αύξησε την σχετική πιθανότητα της παρουσίας των μεταστάσεων σε λεμφαδένες δεν αναλύθηκαν. Για να διευκρινιστεί αυτό το ερώτημα θα ήταν ενδιαφέρον να συγκρίνετε ρουτίνα ιστολογική ανάλυση της ενιαίας LNs σε μοριακές αναλύσεις μας. Ωστόσο, ιστολογικά καθοριστεί η κατάσταση μετάσταση για τους μεμονωμένους κόμβους δεν ήταν διαθέσιμη σε αυτή τη μελέτη. Από την άλλη πλευρά, εννέα από τα 12 θετικούς λεμφαδένες ασθενείς είχαν LNs θετικά με δείκτες μας, η οποία είναι αποδεκτή, λαμβάνοντας τον αριθμό των LNs αναλύθηκαν υπόψη. Ο κύριος λόγος για την έλλειψη στατιστικής σημαντικότητας φαίνεται να είναι ο μεγάλος αριθμός των θετικών ευρημάτων σε ασθενείς με άλλο τρόπο αρνητικούς λεμφαδένες, το οποίο μπορεί να οφείλεται σε λανθάνουσες μεταστάσεις.

Επίσης, παρατηρήσαμε καμία στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ κλινικό στάδιο και που κυκλοφορεί (CTC) κατάσταση των καρκινικών κυττάρων. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με τη μελέτη του Krebs κ.ά., στην οποία σημαντικά περισσότεροι ασθενείς θετικό καρκίνο του πνεύμονα σταδίου IV CTC αποτελέσματα σε σύγκριση με εκείνους με καρκίνο σταδίου III [6]. Η μελέτη μας περιελάμβανε πολύ λίγοι σταδίου III και κανένα στάδιο IV ασθενείς, κάνοντας μια άμεση σύγκριση δύσκολη. Ο αριθμός των ΚΜΑ αναμένεται να είναι χαμηλότερη σε καρκίνους πρώιμο στάδιο, όπως παρατηρείται στον καρκίνο του μαστού [23]. Επιπλέον, Krebs et al. χρησιμοποίησε το CellSearch σύστημα για την ανίχνευση ΚΜΑ, ενώ εμείς χρησιμοποιήσαμε σε πραγματικό χρόνο ποσοτική RT-PCR, επίσης, τη μείωση της συγκρισιμότητας. Επιπλέον, τα επίπεδα δείκτη σε δείγματα αίματος μας ήταν μόλις πάνω από τα όρια ανίχνευσης (Σχήμα 3), ειδικά στην περίπτωση του

CEACAM5

και SFPTC. Λόγω της δυνητικά χαμηλή αναπαραγωγιμότητα κοντά στο όριο ανίχνευσης, μπορούμε να αναλύονται όλα

CEACAM5

και

SFTPC

θετικά δείγματα αίματος για επιβεβαίωση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα χαμηλά επίπεδα δείκτη πιθανώς αντιστοιχούσαν σε μάλλον χαμηλό αριθμό CTC. Αυτό είναι σύμφωνο με τις παρατηρήσεις σε ασθενείς με πρώιμο καρκίνο του μαστού [28]. Κατ ‘αρχήν, η ανίχνευση του 1-2 ΚΜΑ είναι επιρρεπής σε χαμηλή αναπαραγωγιμότητα. Το CellSearch σύστημα βασίζεται σε 7.5 ml δείγματα αίματος. Ο όγκος του δείγματος αίματος στη μελέτη μας περιορίστηκε σε 2,5 ml, μειώνοντας περαιτέρω την πιθανότητα ανίχνευσης CTCs.

Η διαθεσιμότητα των πυλαία LNs από ασθενείς χωρίς καρκίνο ήταν χαμηλή. Ως εκ τούτου, αναλύσαμε επίσης 16 LNs από την παχέος μεσεντέριο ως κανονικό υλικό αναφοράς. Μπορεί να υποστηριχθεί ότι μεσεντερίων LNs δεν είναι απολύτως συγκρίσιμα με LNs από τους πνεύμονες. Ως εκ τούτου, έχουμε πράγματι παρατηρήσει υψηλότερα επίπεδα της πρωτεΐνης επιφανειοδραστικού mRNAs στις έξι μεσοθωρακίου LNs. Μια απλή εξήγηση για αυτό θα μπορούσε να είναι ότι τα μεσοπνευμόνια LNs είχαν μολυνθεί από τα επιθηλιακά κύτταρα από τους πνεύμονες, είτε με χειρουργική χειρισμού ή της κανονικής φυσιολογικής δραστικότητας των LNs. Ωστόσο, το γεγονός ότι οι άλλοι δείκτες είχαν παρόμοια επίπεδα και στις δύο ομάδες LN φαίνεται να αντιταχθεί στην εξήγηση. Από την άλλη πλευρά, οι επιφανειοδραστικό mRNAs δεν ήταν παρόντα στο επιθήλιο του κόλου. Παρ ‘όλα αυτά, επειδή χρησιμοποιούνται τα υψηλότερα επίπεδα δείκτη στην ομάδα ελέγχου ως κατώφλι για θετικότητα, οι μεσοθωρακίου LNs καθοριστεί το όριο για το

SFTPA

,

SFTPB

και

SFTPC

δεικτών.

Εμείς δεν βρήκε καμία συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων του δείγματος LN και PB των δεικτών μας. Αυτό θα μπορούσε να οφείλεται σε διαφορετικές οδούς μεταστατικής εξάπλωσης, καθώς ορισμένοι όγκοι εξαπλωθεί μέσω του λεμφικού συστήματος, ενώ άλλοι εξαπλωθεί μέσω του αίματος. Τα υψηλά επίπεδα του mRNA LN επιθηλιακών ειδικά πιστεύεται ότι αντιπροσωπεύουν κύτταρα όγκου με μεταστατικό δυναμικό. Ωστόσο, τα εν λόγω επίπεδα μπορεί να αντιπροσωπεύει κύτταρα που προέρχονται από τον όγκο, αλλά ότι βρίσκονται στο στάδιο της εξαλειφθεί από το ανοσοποιητικό σύστημα, ή τα κυτταρικά υπολείμματα. Τέτοιες διακρίσεις δεν μπορεί να προσδιοριστεί σε αυτή τη μελέτη, και πρέπει να αξιολογηθεί σε μελλοντικές μελέτες η κλινική επίπτωση.

Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά εντοπίστηκε στα ποσοστά θετικότητας μεταξύ των διαφόρων σταδίων καρκίνου, ή μεταξύ ανδρών και γυναικών. Περισσότεροι ασθενείς με αδενοκαρκινώματα είχαν υψηλά επίπεδα όγκου του μερικά από τα εξετάστηκαν δεικτών, σε σύγκριση με εκείνους με ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα, αλλά αυτό θα πρέπει να interpreteded με προσοχή λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος.

Οι κλινικοί γιατροί πρέπει βελτιώσεις στο πώς να διαστρωμάτωση των ασθενών για την επικουρική θεραπεία. χρυσό πρότυπο μας, το σύστημα ΤΝΜ-ταξινόμησης, δεν παρέχει ικανοποιητικές και ακριβείς εκτιμήσεις των ποσοστών επιβίωσης. Αυτό δείχνει ότι οι ασθενείς που θα μπορούσαν να επωφεληθούν από την επικουρική θεραπεία δεν θα πρέπει να προσφέρονται τέτοιες, ενώ ορισμένοι ασθενείς θεραπευτεί μόνο με χειρουργική επέμβαση λαμβάνουν περιττό επικουρική θεραπεία. Βελτιωμένη διάκριση μεταξύ των ασθενών με υπολειμματική καρκινικά κύτταρα, ενδεχομένως να χρειάζονται πρόσθετη θεραπεία, και εκείνους που δεν έχουν αυτή την ανάγκη, θα ωφελήσει τους ασθενείς.

Εν κατακλείδι, τα στοιχεία που υποστηρίζουν την κλινική σημασία των απόκρυφων μεταστάσεις στους λεμφαδένες και κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων στο οι ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα αναδυόμενες [5], [29]. Πρόβλεψη του αποτελέσματος και την ανταπόκριση στη θεραπεία είναι μεταξύ των πιθανών κλινικών εφαρμογών. Στην παρούσα μελέτη, αναγνωρίσαμε μια ομάδα πολλά υποσχόμενη δεικτών καρκινικών κυττάρων σε LNs και ΡΒ δείγματα από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα πρώιμο στάδιο. Περαιτέρω χαρακτηρισμός απαιτείται να διευκρινισθεί η κλινική σημασία των ευρημάτων μας και να εντοπίσει νέους στόχους για τη βελτίωση της πρόληψης των κινδύνων και την προσαρμογή της θεραπείας.

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να αναγνωρίσουμε Ingjerd Solvoll για πρακτική βοήθεια.