Αφηρημένο

MUC1 συνδέεται με την κυτταρική μεταμόρφωση και ογκογονικότητα και είναι θεωρείται σημαντικό σχετιζόμενο με τον όγκο αντιγόνο (ΤΑΑ) για τη θεραπεία του καρκίνου. Αναφέραμε προηγουμένως ότι το αντι-MUC 1 μονοκλωνικό αντίσωμα C595 (MAb C595) συν docetaxel (DTX) αυξημένη αποτελεσματικότητα της DTX μόνο και προκάλεσε καλλιεργημένα κύτταρα ανθρώπινου επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών (EOC) να υποστούν απόπτωση. Για να μελετηθεί περαιτέρω οι μηχανισμοί αυτού του συνδυασμού-μεσολαβούμενη απόπτωση, διερευνήσαμε την αποτελεσματικότητα αυτής της θεραπείας συνδυασμού

in vivo

σε ένα μοντέλο ποντικού EOC ενδοπεριτοναϊκή (ε.π.). OVCAR-3 κύτταρα εμφυτεύθηκαν ενδοπεριτοναϊκώς σε θηλυκούς αθυμικούς γυμνούς ποντικούς και αφήνεται να αναπτυχθεί όγκου και ασκίτη. Οι ποντικοί στη συνέχεια κατεργάζεται με ενιαίο MAb C595, DTX, δοκιμή συνδυασμός (MAb C595 και DTX), έλεγχος συνδυασμός (αρνητικός MAb IgG

3 και DTX) ή ε.π. ελέγχου του οχήματος για 3 εβδομάδες. Τα επεξεργασμένα ποντίκια θανατώθηκαν 4 εβδομάδες μετά τη θεραπεία. αξιολογήθηκαν όγκος Ασκίτης, το βάρος του όγκου, τα επίπεδα CA125 από ασκίτες και την επιβίωση των ζώων. Η έκφραση των MUC 1, CD31, Ki-67, TUNEL και αποπτωτικών πρωτεϊνών σε ξενομοσχεύματα όγκου αξιολογήθηκε με ανοσοϊστοχημεία. MAb C595 μόνη ανέστειλε την ε.π. την ανάπτυξη του όγκου και την παραγωγή ασκίτη με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, αλλά δεν προφανώς εμποδίζει την ανάπτυξη όγκων. Ωστόσο, δοκιμή συνδυασμός μείωσε σημαντικά ασκίτη όγκου, ανάπτυξη όγκου και των μεταστάσεων, τα επίπεδα CA125 σε ασκίτη και βελτιωμένη επιβίωση των ποντικών σε σύγκριση με ποντικούς απλού παράγοντα-θεραπεία, έλεγχος συνδυασμός ή ποντίκια ελέγχου έλαβαν όχημα (

P

& lt? 0.05). Τα δεδομένα ήταν σε καλή συμφωνία με εκείνη από καλλιεργημένα κύτταρα

in vitro

. Οι μηχανισμοί πίσω από τα παρατηρούμενα αποτελέσματα θα μπορούσε να είναι μέσω της στόχευσης των αντιγόνων MUC 1, η αναστολή της αγγειογένεσης του όγκου, και την επαγωγή της απόπτωσης. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η προσέγγιση αυτή ο συνδυασμός μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά το φορτίο του όγκου και ασκίτη, να παρατείνει την επιβίωση των ζώων μέσω της επαγωγής της απόπτωσης όγκου και νέκρωση, και μπορεί να παρέχει μια πιθανή θεραπεία για προχωρημένο μεταστατικό ΕΓΚ

Παράθεση:. Wang L, Chen Η Pourgholami ΜΗ, Beretov J, Hao J, Chao H, et al. (2011) Αντι-MUC 1 μονοκλωνικό αντίσωμα (C595) και Docetaxel μειώνεται σημαντικά όγκου Βάρος και ασκίτη, και παρατείνει την επιβίωση σε ένα

in vivo

καρκίνου των ωοθηκών μοντέλο. PLoS ONE 6 (9): e24405. doi: 10.1371 /journal.pone.0024405

Επιμέλεια: Ilya Ulasov, University of Chicago, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 23, 2011? Αποδεκτές: 9, Αυγούστου 2011? Δημοσιεύθηκε: 9 Σεπ 2011

Copyright: © 2011 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε εν μέρει από μια διεθνή συνεργασία Επιχορήγηση από Henan συμβούλιο Υγείας, Κίνα (LW, HMC και HTC), ένα Cancer Institute NSW Career Development Fellowship (YL) και του Αγίου Γεωργίου Νοσοκομείο ωοθηκών Cancer Research Trust Fund (YL και JK). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC) είναι η πιο θανατηφόρα γυναικολογική κακοήθεια και η πέμπτη πιο κοινή αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους στις γυναίκες στις Ηνωμένες Πολιτείες, με αποτέλεσμα να υπολογίζεται ότι 21.880 νέα κρούσματα και 13.850 θάνατοι το 2009 [1 ]. Οι ασθενείς με προχωρημένη νόσο έχουν ποσοστό απόκρισης άνω του 80% μετά από εγχείρηση και επικουρική χημειοθεραπεία με πλατίνα-ταξάνης, με διάμεση ελεύθερη προόδου διάστημα 18 μηνών [2]. Δυστυχώς, ο καρκίνος θα επανεμφανιστεί στην πλειοψηφία των ασθενών αυτών, και το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για ασθενείς με προχωρημένο στάδιο της νόσου είναι μόνο 23-30% [3]. Συμβατική χημειοθεραπεία του καρκίνου συχνά οδηγεί σε σοβαρές παρενέργειες που σχετίζονται με την μη-ειδική τρόπους δράσης. Μελέτες αξιολόγηση των διαφόρων κυτταροτοξικών παραγόντων σε επαναλαμβανόμενες EOC έχουν βρει ποσοστά ανταπόκρισης του 10-28% με ένα συνοδευτικό προοδευτική αύξηση του αριθμού των όγκων ανθεκτικών στα φάρμακα [4]. Έτσι, νέες θεραπευτικές στρατηγικές χρειάζονται επειγόντως να βελτιώσουν την έκβαση αυτής της θανάσιμης ασθένειας. Μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση που μπορεί να βελτιώσει τα αποτελέσματα των ασθενών είναι η χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων (MAbs) σε συνδυασμό με την παραδοσιακή χημειοθεραπεία.

MUC 1 είναι ένα μεγάλο μοριακό βάρος διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που υπερεκφράζεται σε πολλά καρκινώματα [5], [6], συμπεριλαμβανομένων EOC [7] – [9], και μεσολαβεί γεγονότα μεταγωγής σήματος που διεγείρουν την κινητικότητα, εισβολή, και μετάσταση των καρκινικών κυττάρων [10]. MUC1 υπερεκφράζεται στο 90% της κυτταρικής επιφανειών ΕΓΚ [7], [8]. Τα ενισχυμένα επίπεδα έκφρασης MUC 1 από καρκινικά κύτταρα μπορεί να καλύψει τον εξω-κυτταρικών πεδίων από ανοσολογική επαγρύπνηση, προσδίδοντας πλεονέκτημα επιβίωσης σε κακοήθη κύτταρα και παίζουν ένα σημαντικό ρόλο στην ικανότητα των όγκων να εισβάλει και να κάνουν μετάσταση [11]. Ετσι, που σχετίζονται με όγκους MUC 1 είναι μια πολλά υποσχόμενη μοριακός στόχος για μία νέα θεραπεία για ασθενείς EOC.

C595 είναι ένα IgG

3, MAb ποντικού που εγείρεται έναντι της πρωτεΐνης πυρήνα της ανθρώπινης MUC1 (ουρική επιθηλιακά mucin1) [ ,,,0],12]. Χαρτογράφηση επιτόπου έχει δείξει ότι C595 αναγνωρίζει ένα μοτίβο τετραπεπτίδιο (RPAP) μέσα στον πυρήνα πρωτεΐνη MUC1 βλεννίνης που περιέχει μια μεγάλη περιοχή από πολλαπλάσια μιας εξαιρετικά διατηρημένη αλληλουχία επανάληψης 20-αμινο-οξύ (PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA) [12], [13]. MAb C595 έχει επισημανθεί με γ-ραδιοϊσότοπο εκπομπής (

111In) να δοκιμάσουν την ικανότητά της για τον εντοπισμό του καρκίνου και την ταυτοποίηση σε 19 ασθενείς με κλινική υποψία κακοήθειας των ωοθηκών, και πέτυχε την τελική ακρίβεια του 79% και 64% σε σύγκριση με μαγνητική τομογραφία απεικόνισης και υπερήχων σε σχέση με την τελική ιστολογία του όγκου [14]. Μετά την επισήμανση με α-εκπομπού (

213Bi),

213Bi-C595 α-συζυγούς (AC) έχει χρησιμοποιηθεί για τη στόχευση ενιαίο προστάτη [15], παγκρεατικό [16] και τα κύτταρα των ωοθηκών [17]

σε vitro

και υποχωρούν παγκρέατος υποδόρια ξενομοσχεύματα

in vivo

[18]. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι η MAb C595 είναι χρήσιμο είτε μόνη της είτε σε συνδυασμό με άλλες θεραπείες για τη βελτίωση της θεραπείας του προχωρημένου ΕΓΚ.

Αν και η πακλιταξέλη χρησιμοποιείται σε θεραπεία πρώτης γραμμής, αναλόγου του docetaxel (DTX) έχει πλεονεκτήματα, συμπεριλαμβανομένων βραδύτερη κυτταρική εκροή και υψηλότερη διαλυτότητα, επιτρέποντας υψηλότερες ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις [19]. Σε κλινικές δοκιμές, DTX οδήγησε σε αντίστοιχα ποσοστά ανταπόκρισης και έχει δείξει δραστικότητα έναντι paclitaxel πυρίμαχα καρκινώματα [20], [21]. DTX έχει επιδείξει σημαντική δραστηριότητα και στις δύο προ-κλινικές και κλινικές μελέτες για τη θεραπεία πολλών στερεών κακοηθειών περιλαμβανομένων EOC [22] – [25]. Είναι εύλογο ότι DTX μπορεί να γίνει μέρος της θεραπείας πρώτης γραμμής για την ΕΓΚ. DTX σε συνδυασμό με μία ένωση πλατίνας (όπως καρβοπλατίνη) έχει γίνει η συστηματική χημειοθεραπεία της επιλογής για την πρωτοβάθμια ΕΓΚ, με υψηλή αποτελεσματικότητα. Ωστόσο, η τοξικότητα σχετιζόμενη με τη δόση και την ενδεχόμενη ανάπτυξη αντοχής είναι σημαντικά ζητήματα που απαιτούν προσοχή σε μια γυναικολογική ογκολογία. Τελικά, οι περισσότεροι από αυτούς τους ασθενείς θα πεθάνουν από μεταστατική νόσο. Η διατήρηση χαμηλών επιπέδων του φαρμάκου στη συστηματική κυκλοφορία μέσω εντοπισμένης παροχής μπορεί κατά συνέπεια να μειώσει τις τοξικές παρενέργειες, και να αυξήσει τις τοπικές συγκεντρώσεις του φαρμάκου στο περιτόναιο, όπου οι όγκοι ωοθηκών και ασκίτη κατοικούν. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί μέσω της ί.ρ. διαχείριση. Το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου συνέστησε ε.π. χημειοθεραπεία να λαμβάνονται υπόψη για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου των ωοθηκών [26]. Η συνδυαστική θεραπεία που χρησιμοποιεί ειδικά στρατηγικές όπως χημειοθεραπευτικό παράγοντα συν ένα αντίσωμα μέσω ί.ρ. η χορήγηση μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά την τοξικότητα που περιορίζει τη δόση και να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας

Σε μια πρόσφατη μελέτη, δείξαμε ότι το MAb C595 και μόνο θα μπορούσε να σκοτώσει τα κύτταρα EOC με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο.? Αυτή η δολοφονία ήταν, επίσης, εξαρτάται από τα επίπεδα έκφρασης MUC1. Χαμηλή δόση MAb C595 σε συνδυασμό με την αυξημένη DTX EOC ευαισθησία στο φάρμακο χημειοθεραπείας και μείωσε την απαιτούμενη δόση [27]. Σε αυτή τη μελέτη, υποθέσαμε ότι αυτή η θεραπεία συνδυασμού μπορεί να λειτουργήσει αποτελεσματικά σε ένα

in vivo

EOC ζωικό μοντέλο. Βρήκαμε ότι το MAb C595 θα μπορούσε να αναστείλει ε.π. την ανάπτυξη του όγκου και την παραγωγή ασκίτη στο μοντέλο ξενομοσχεύματος OVCAR-3 ποντικού και να ενισχύσει τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα του DTX σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο, και ότι μετά από ε.π. ένεση, αυτή η θεραπεία συνδυασμού (δοκιμή) (MAb C595 και DTX) θα μπορούσε να μειώσει αισθητά το φορτίο του όγκου και ο ασκίτης και συνεπώς παρατείνει την επιβίωση των ζώων που έλαβαν. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι αυτό το νέο συνδυασμό κρατά την υπόσχεση ως μια πιθανή θεραπεία για τη θεραπεία του προχωρημένου μεταστατικού ΕΓΚ.

Υλικά και Μέθοδοι

Drug

DTX αγοράστηκε από Sigma-Aldrich , Pty Ltd, Κάστρο Hills, Νέα Νότια Ουαλία, Αυστραλία. Το φάρμακο αραιώθηκε πρώτα σε [hydroperoxymethyl κυτταρίνη (HPMC) που παρασκευάστηκε όπως 0,5% σε PBS] και αποθηκεύθηκαν στους 4 ° C για χρήση.

Αντισώματα

MAb C595 παρασχέθηκε ευγενώς από τον Πανεπιστήμιο Nottingham ( Nottingham, UK). Ποντικού αντι-ανθρώπινης IgG ελέγχου

3 ισότυπος MAb αγοράστηκε από Zymed Laboratories Inc (South San Francisco, CA, USA). Κουνέλι αντι-ανθρώπινο Ki-67, κασπάσης-3 (ενεργό), και PARP-1 (διασπάται ρ85) MAbs δόθηκαν από Epitomics (Burlingame, CA, USA). Επίμυς αντι-ποντικός CD31 MAb αγοράστηκε από Βϋ Pharmingen (Bedford, ΜΑ, USA). Swine αντι-κατσίκας, -mouse, Κουνέλι IgG /βιοτινυλιωμένο, IgG αντι-αρουραίου κουνελιού /βιοτινυλιωμένο, στρεπταβιδίνη /ραφανιδική υπεροξειδάση (HRP) και IgG ποντικού

1 αρνητικός έλεγχος MAb αγοράστηκαν από Dakopatts (Glostrup, Δανία).

γραμμή κυττάρων και ζωικό μοντέλο

παλιά 6~8 εβδομάδες γυναικεία γυμνά αθυμικά BALB /c nu /nu ποντίκια (Κέντρο ζώων Πόρων, Περθ, Δυτική Αυστραλία). Τα ποντίκια στεγάστηκαν και διατηρήθηκαν σε στρωτή ροή ντουλάπια κάτω από ειδικές συνθήκες άνευ παθογόνου σε εγκαταστάσεις εγκεκριμένες από το Πανεπιστήμιο της Νέας Νότιας Ουαλίας (UNSW) Φροντίδα Ζώων και Επιτροπής Δεοντολογίας (ACEC). Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την ACEC, UNSW (ID: 08 /110Α). Τα ζώα διατηρήθηκαν τουλάχιστον 1 εβδομάδα πριν από την πειραματική διαδικασία.

Η πρωταρχική OVCAR-3 EOC κυτταρική γραμμή ελήφθη από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA), και το υπο-γραμμή του OVCAR-3 επιλέχθηκε και με επιτυχία εγκατεστημένος σε ip μοντέλο ξενομοσχεύματος χρησιμοποιώντας γυμνά ποντίκια στο εργαστήριο μας [28]. Αυτή η επιλογή μπορεί να αυξήσει την ογκογονικότητα των κυττάρων OVCAR-3

in vivo

. Εν συντομία, τα βιώσιμα OVCAR-3 κύτταρα (5 × 10

6/500 μL σε DPBS) εγχύθηκαν ί.ρ. χρησιμοποιώντας μία σύριγγα του 1 mL με βελόνα 26-gauge και αφέθηκαν να αναπτυχθούν. την εξέλιξη του όγκου τεκμηριώθηκε μία φορά την εβδομάδα για 10 εβδομάδες με μετρήσεις της κοιλιακής περιφέρειας για τους κοιλιακούς αύξηση χρησιμοποιώντας ένα μαλακό χάρακα. Μετά την θυσία, οι όγκοι αφαιρέθηκαν για τη στάθμιση και προχωρώντας για ιστολογική δοκιμή

Τα θεραπευτικά πρωτόκολλα

Οι μελέτες τοξικότητας σε γυμνά ποντίκια χωρίς όγκους:. Μελέτες τοξικότητας πραγματοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της μέγιστης δόσης ανοχής (MTD) σε ποντίκια για ενιαία MAb C595, IgG ποντικού

3 αρνητικό MAb ελέγχου, DTX, δοκιμή συνδυασμό (MAb C595 και DTX) και τον έλεγχο συνδυασμό (αρνητική MAb IgG

3 και DTX). Η σχέση δόσης-ανοχή εξετάστηκε σε γυμνούς ποντικούς (χωρίς όγκους) για μία μοναδική ε.π. χορήγηση MAb C595, DTX και θεραπεία συνδυασμού (δοκιμή) σε σύγκριση με τη θεραπεία ελέγχου συνδυασμό. Ομάδες των πέντε ποντικών έλαβαν συνολικά εγχέεται συγκέντρωση 1, 5, 10, 15, 20 mg /kg του MAb C595, ή 3, 5, 7, 10, 15 mg /kg του DTX καθώς και των συνδυασμένων MAb C595 (1 /3 του MTD δηλαδή 5 mg /kg) ή 5 mg /kg MAb IgG

3 με 3, 5, 7, 10 mg /kg του DTX για 3 εβδομάδες. Τα επιλεγμένα δόσεις MAbs βασίστηκαν στην MTD του ενιαίου του MAb C595 και DTX. βάρη Mouse συγκρίθηκαν με εκείνα κατά την ημέρα 0 (πρώτη ημέρα της χορήγησης θεραπείας) για να προσδιοριστεί ποσοστιαία μεταβολή του βάρους. Η τοξικότητα που περιορίζει τη δόση ορίστηκε ως καταληκτικά σημεία: η απώλεια 15% του σωματικού βάρους ή αναξιοπαθούντα συμπεριφορά (δηλαδή, απώλεια της όρεξης και της δραστηριότητας, σκυμμένοι στάση του σώματος). Το MTD ορίστηκε ως η υψηλότερη δόση στην οποία το ένα τρίτο της κοόρτης έφθασε περιοριστική της δόσης τοξικότητα άκρο σημεία [29]. Μετά από 10 εβδομάδες, υγιή ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία. Τα ακόλουθα πειράματα βασίστηκαν στην MTD από τις μελέτες τοξικότητας

μελέτες Αποτελεσματικότητα σε OVCAR-3 EOC ζωικό μοντέλο:. Μετά την ανάπτυξη του ασκίτη, η περιτοναϊκή κοιλότητα εκπλύθηκε με 2 ml στείρου φυσιολογικού ορού. Οι περιτοναϊκή περιεχόμενα αναμίχθηκαν με τη διαχείριση απαλά και στη συνέχεια αναρροφήθηκαν πλήρως [28]. Τα ποντίκια στη συνέχεια κατανέμονται τυχαία μέσα είτε της μονοθεραπείας ενιαία ομάδα θεραπείας MAb C595 ή DTX ή τη δοκιμή συνδυασμού (MAb C595 και DTX) και ο έλεγχος του συνδυασμού (MAb IgG

3 και DTX) ομάδα (n = 10, ανά ομάδα). Διαφορετικές θεραπείες άρχισαν αμέσως μετά την αναρρόφηση του ασκιτικού υγρού.

α). Για μία θεραπεία MAb C595, χαμηλή δόση (LD) (5 mg /kg) ή υψηλή δόση (HD) (15 mg /kg) MAb εναιωρήθηκε σε 1 mL φυσιολογικού ορού, και τον ίδιο όγκο φυσιολογικού ορού με 15 mg /kg ποντικού MAb IgG

3 (μάρτυρες) χορηγήθηκαν μία φορά /εβδομάδα για 3 εβδομάδες.

β). Για εφάπαξ θεραπεία DTX, LD (5 mg /kg) ή HD (10 mg /kg) DTX εναιωρήθηκε σε 1 κ.εκ. HPMC (που παρασκευάζεται όπως 0,5% σε PBS) σαν ένα όχημα και τον ίδιο όγκο HPMC σαν ένας έλεγχος.

γ). Για τη δοκιμή συνδυασμού (MAb C595 και DTX) και τον έλεγχο συνδυασμό (MAb IgG

3 και DTX) ομάδες, χρησιμοποιήθηκε η ακόλουθη. δοκιμή Συνδυασμός περιλαμβάνεται μία μόνο δόση του MAb C595 (1/3 δόση MTD, δηλαδή 5 mg /kg σε εναιώρηση εντός 0,5 ml φυσιολογικού ορού) σε συνδυασμό με μία μόνο δόση του DTX (10 mg /kg DTX εναιωρήθηκε σε 0,5 mL HPMC). ελέγχου Συνδυασμός περιλαμβάνεται μία μόνο δόση του MAb IgG

3 (5 mg /kg σε εναιώρηση εντός 0,5 ml φυσιολογικού ορού) σε συνδυασμό με μία μόνο δόση του DTX (10 mg /kg DTX εναιωρήθηκε σε 0,5 mL HPMC). Η θεραπεία συνδυασμού (δοκιμής και ελέγχου) χορηγήθηκε διαδοχικά από MAb C595 ή MAb IgG

3 έως DTX.

Όλες οι θεραπείες έγιναν ε.π. και προορίζονται διάρκεια της θεραπείας ήταν 4 εβδομάδες βασισμένες σε προηγούμενες μελέτες μας. Μετά τις θεραπείες, αν κοιλιακή περιφέρεια ενός ζώου έφθασε 9,5 cm ή αν είχαν αναμένεται να γίνει ετοιμοθάνατα μέσα σε σύντομο χρονικό διάστημα, τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία. χρόνος επιβίωσης του κάθε ζώου υπολογίστηκε ως ο αριθμός των ημερών παρήλθε μεταξύ την έναρξη της θεραπείας και την ευθανασία. Στο τέλος των πειραμάτων, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με αυχενική εξάρθρωση, ενώ κάτω από αναισθησία urethrane.

Δείγμα συλλογή

Πριν την ευθανασία, ένα δείγμα αίματος συλλέχθηκε μέσω καρδιακής παρακέντησης υπό αναισθησία. Στο τέλος των πειραμάτων, 2 ml φυσιολογικού ορού εγχύθηκαν ε.π. και η περιτοναϊκή κοιλότητα ήταν εντελώς πλυμένα και αναρροφήθηκε για ανίχνευση CA125. όγκοι Ασκίτης στην περιτοναϊκή κοιλότητα καταγράφηκαν. Οι ασκίτες πλύσης ρευστού, οι όγκοι αποκόπηκαν από την περιτοναϊκή κοιλότητα, και το πλάσμα, ήταν όλα αποθηκεύθηκαν στους -80 ° C για μετέπειτα ανάλυση. Σωρευτική πραγματικός όγκος του ασκίτη συλλέγεται μετά από κάθε προσδοκία υπολογίστηκε με αφαίρεση της 2 ml από το συνολικό όγκο που συλλέγονται.

επίπεδα CA125 σε υγρό ασκίτη

επίπεδα καρκινικού δείκτη (ΟΑ125 Ku /L) στο κελί -δωρεάν ασκητικό υγρό από μόνο MAb C595, DTX και θεραπείες συνδυασμού (δοκιμής και ελέγχου) προσδιορίζεται με μία δοκιμασία ELISA σύμφωνα με τις οδηγίες στο St George Νοσοκομείο Βιοχημείας Laboratories. Η συγκέντρωση του CA125 στα ασκίτη ομαλοποιήθηκε με τον πραγματικό όγκο των ασκίτη που συλλέγονται.

Ποντίκι ιστούς και ιστολογία

Οι ιστοί όγκου από ενιαίο MAb, DTX, συνδυασμό ή όχημα ζώα ελέγχου που έλαβαν ήταν είτε αμέσως snap παγώσει για τα κατεψυγμένα τμήματα ή σταθερό σε 10% φορμόλη για 24 ώρες, ενσωματωμένο σε παραφίνη μπλοκ για την H & amp? χρώση Ε και ανοσοϊστοχημεία. Πέντε-μικρόμετρο κατεψυγμένες τομές φρέσκου δείγματα όγκων χρησιμοποιήθηκαν για CD31 ανοσοχρώση. Για τις μελέτες τοξικότητας, σχετικά όργανα του ποντικιού, όπως τα νεφρά, το συκώτι, την καρδιά και το μυελό των οστών συλλέχθηκαν, φορμόλη-σταθερές και αποστέλλονται για παθολογική εξέταση (IDEXX Laboratories, Σίδνεϊ, Αυστραλία).

Αιματολογική τοξικότητα και την εξέταση της νεφρικής λειτουργίας

Για τον προσδιορισμό αιματολογικών τοξικότητα, 200 μL αίματος σε κάθε ποντικού συλλέχθηκε σε K3 EDTA και σωλήνες minicollect γέλη Ζ ορού (Greiner Bio-one, Γερμανία) μέσω της σαφηνούς φλέβας και Microvette (SARSTEDT, Γερμανία) πριν από τη θεραπεία και στις 2 και 3 εβδομάδες μετά εφάπαξ ή συνδυασμός ένεση. Διεξήχθησαν Αιματολογικές αναλύσεις των λευκών αιμοσφαιρίων (WBC), λεμφοκύτταρα, ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBC), και ο αριθμός των αιμοπεταλίων. Το αίμα που λαμβάνεται στο τέλος των πειραμάτων για βιοχημικές αναλύσεις ορού για την νεφρική λειτουργίες.

Ανοσοϊστοχημεία

Πρότυπες διαδικασίες ανοσοϋπεροξειδάσης χρησιμοποιήθηκε για να απεικονίσει MUC1, Ki-67, κασπάσης-3 (ενεργό) και PARP-1 (διασπάται ρ85). Εν συντομία, τομές παραφίνης αφαιρείται η παραφίνη σε ξυλόλιο, που ακολουθείται από μια διαβαθμισμένη σειρά αλκοολών (100%, 95%, και 75%) και εκ νέου ενυδατωμένο σε νερό που ακολουθείται από τρις-ρυθμιστικό.

Saline (TBS) ( ρΗ 7.5). Τα πλακίδια στη συνέχεια εμβαπτίζονται σε ζέον 0.01 Μ κιτρικού ρυθμιστικού (ρΗ 6,0) επί 15 λεπτά για την ενίσχυση της ανάκτησης αντιγόνου, υποβλήθηκε σε επεξεργασία με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% και κατόπιν επωάστηκαν με πρωτογενές MAbs: MUC1 (1:500 αραίωση), Ki-67 (1:50 αραίωση), κασπάσης-3 (ενεργό) (1:100 αραίωση) και PARP-1 (διασπάται ρ85) (1:100 αραίωση), αντιστοίχως για όλη τη νύχτα (Ο /Ν) στους 4 ° C. Μετά από πλύσιμο με TBS, τα πλακίδια επωάστηκαν με αντι-χοίρων κατσίκα, ποντικό, κουνέλι βιοτινυλιωμένο δεύτερο αντίσωμα IgG (1:150 αραίωση) για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT), και στη συνέχεια με αβιδίνη /υπεροξειδάσης χράνου διάλυμα (HRP) (1 :300 αραίωση) επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Οι τομές αναπτύσσεται τελικά με 3,3 ‘διαμινοβενζιδίνη (DAB) διάλυμα υποστρώματος (Sigma-Aldrich, Pty Ltd, Κάστρο Hills, Νέα Νότια Ουαλία, Αυστραλία), στη συνέχεια με αιματοξυλίνη? θετικών κυττάρων εμφανίστηκε καφέ. πλάκες ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τον ίδιο τρόπο, και χρωματίστηκαν με το mAb ισοτύπου ή παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος ως αρνητικός έλεγχος. Οι θετικοί μάρτυρες επιλέχθηκαν ανάλογα με τα διαφορετικά MAbs, ιστός καρκινώματος κόλου για MUC1, ιστός γλώσσα για Ki-67 και DTX επεξεργασμένο κυτταρική γραμμή OVCAR-3 για κασπάση-3 (ενεργά) και PARP-1 (διασπάται ρ85).

για τη χρώση CD31, οι κατεψυγμένες τομές αποψύχθηκαν, ξηραίνεται στον αέρα και σταθεροποιήθηκαν σε ψυχρή ακετόνη για 10 λεπτά σε RT. Μετά από μια γρήγορη αέρα ξηρού και το πλύσιμο με TBS, οι τομές επωάστηκαν με αντι-ποντικού αρουραίου CD31 MAb (1:100 αραίωση) ο /η στους 4 ° C. Μετά το ξέπλυμα με TBS, οι τομές επωάστηκαν με αντίσωμα κουνελιού αντι-αρουραίου βιοτινυλιωμένης IgG (1:200 αραίωση) για 45 λεπτά, και στη συνέχεια με στρεπταβιδίνη συζευγμένη /HRP (1:200 αραίωση) για άλλα 30 λεπτά. Τμήματα αναπτύχθηκαν με το διάλυμα DAB (Sigma-Aldrich, Pty Ltd, Κάστρο Hills, Νέα Νότια Ουαλία, Αυστραλία), και αντίθετα με αιματοξυλίνη. πλάκες ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τον ίδιο τρόπο, και χρωματίστηκαν με το mAb ισοτύπου ή παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος ως αρνητικός έλεγχος.

δοκιμασία TUNEL για αποπτωτικά κύτταρα

in vivo

Η

η απόπτωση εκτιμήθηκε σε ιστούς ξενομοσχεύματος όγκου χρησιμοποιώντας τη μέθοδο TUNEL με το TdT-fragEL in situ κιτ ανίχνευσης αποπτωτικά (Calbiochem, San Diego, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ιδιαιτερότητα του TUNEL αντιδραστικότητας επιβεβαιώθηκε με σχετική αρνητική (TdT παραλείπεται από το μίγμα επισήμανση) και θετική (αντιμετωπίζονται HL-60 διαφάνειες που παρέχονται από την εταιρεία) ελέγχους. Διαφάνειες εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας μια Leica μικροσκόπιο φωτός (Nussloch, Γερμανία).

Αξιολόγηση της ανοσοκηλιδώσεως

ένταση χρώσης (0-3) αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας οπτικό μικροσκόπιο (Leica μικροσκόπιο, Γερμανία) σε μια × 40 στόχος ως – (αρνητικά), + (αδύναμη), ++ (μέτρια), και +++ (ισχυρή). Αξιολόγηση της χρώσης του ιστού έγινε, ανεξάρτητα, από δύο έμπειρους παρατηρητές (LW και HMC). Όλα τα δείγματα βαθμολογήθηκαν τυφλά και λήφθηκε ο μέσος όρος των βαθμών. Αν ελήφθησαν αντικρουόμενα αποτελέσματα, οι διαφορές επιλύθηκαν από κοινού επανεξέταση και τη διαβούλευση με τρίτο παρατηρητή, με εμπειρία στην ανοσοϊστοχημική παθολογία.

Η στατιστική ανάλυση

Όλα τα αριθμητικά δεδομένα εκφράστηκαν ως ο μέσος όρος των τιμών που λαμβάνονται , και η τυπική απόκλιση (SD) υπολογίσθηκε. Τα δεδομένα από αγωγή και τον έλεγχο των ομάδων συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας t τεστ δύο ουρά σπουδαστή. Όλα τα

P

τιμές ήταν 2 όψεων. Ένας τρόπος ANOVA, που ακολουθείται από post hoc δοκιμασία του Dunnett, εκτελέσθηκε για τον προσδιορισμό σημαντικών διαφορών στις μέσες μεταβολές βάρους ποντικούς σε τοξικολογικές μελέτες. Η επιβίωση υπολογίστηκε ως ο αριθμός των ημερών που παρήλθε μεταξύ την έναρξη της θεραπείας και την ευθανασία, και% ποντίκια που επιβίωσαν ήταν ο αριθμός των ζώων που απομένουν σε κάθε ομάδα (χ 10) στο τέλος κάθε εβδομάδας μετά την έναρξη της θεραπείας.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του GraphPad Prism 4.00 πακέτο (GraphPad, San Diego, CA, USA).

Αποτελέσματα

Τοξικολογική αξιολόγηση του ενιαίου MAb C595, DTX και ο συνδυασμός θεραπειών

Η χορήγηση μιας δόσης του MAb C595 στα 1, 5, 10, 15 mg /kg και DTX σε 3, 5, 7, 10 mg /kg για τις πρώτες 3 εβδομάδες δεν φθάνουν τελικά σημεία τοξικότητας σε 70 ημέρες μετά την αγωγή (Εικ. 1Α και Β). Μια μεμονωμένη χορήγηση ελέγχου MAb IgG

3 στα 15 και 20 mg /kg για τις πρώτες 3 εβδομάδες δεν φθάνουν τέλος τοξικότητα σημεία σε 70 ημέρες μετά την αγωγή (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με 20 mg /kg MAb C595 /εβδομάδα ή 15 mg /kg DTX /εβδομάδα ξεκίνησε να χάσουν βάρος και υποβλήθηκαν σε ευθανασία 4 εβδομάδες μετά τη θεραπεία, λόγω της συμπτώματα δυσφορίας? ιστοπαθολογική εξέταση έδειξε ήπια νεφροπάθεια σε αυτές τις ομάδες. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η MTD για μονή δόση MAb C595 κυμαίνεται μεταξύ 15 και 20 mg /kg, ενώ η MTD για μια εφάπαξ χορήγηση του DTX βρίσκεται μεταξύ 10 και 15 /kg mg.

Μέσο αλλαγές βάρους ποσοστό σε σύγκριση με την ημέρα 0 (δηλαδή, ημέρα εφάπαξ ή συνδυασμού διοίκηση). A. σχέση δόσης-ανοχή σε ποντίκια με ενιαία MAb C595. ▪: MAb C595 (1 mg /kg)? ▴: MAb C595 (5 mg /kg)? ▾: MAb C595 (10 mg /kg)? ♦: MAb C595 (15 mg /kg)? •: MAb C595 (20 mg /kg). Η σημαντική διαφορά βρέθηκε μεταξύ 20 mg /kg ομάδα MAb C595 αγωγή και άλλων MAb C595-αγωγή ομάδες (5-15 mg /kg) (

P

& lt? 0,05). Β σχέση δόσης-ανοχή σε ποντίκια με ενιαία DTX. ▪: DTX (3 mg /kg)? ▴: DTX (5 mg /kg)? ▾: DTX (7 mg /kg)? ♦: DTX (10 mg /kg)? •: DTX (15 mg /kg). Η σημαντική διαφορά βρέθηκε μεταξύ 15 mg /kg ομάδα DTX-αγωγή και άλλων ομάδων DTX-αγωγή (5-15 mg /kg) (

P

& lt? 0,05). C. σχέση δόσης-ανοχής σε ποντικούς με δοκιμή συνδυασμού [MAb C595 (5 mg /kg) + DTX (3-10 mg /kg)]. ▪: MAb C595 + DTX (3 mg /kg)? ▴: MAb C595 + DTX (5 mg /kg)? ▾: MAb C595 + DTX (7 mg /kg)? ♦: MAb C595 + DTX (10 mg /kg). Δ σχέση δόσης-ανοχής σε ποντικούς με έλεγχο συνδυασμού [MAb IgG

3 ελέγχου (5 mg /kg) + DTX (3-10 mg /kg)]. ▪: MAb IgG

3 + DTX (3 mg /kg)? ▴: MAb IgG

3 + DTX (5 mg /kg)? ▾: MAb IgG

3 + DTX (7 mg /kg)? ♦: MAb IgG

3 + DTX (10 mg /kg). Σημεία, μέση (η = 5 σε κάθε ομάδα)? μπαρ, SD.

Η

Για τις θεραπείες συνδυασμού, χρησιμοποιήσαμε 1/3 MTD MAb C595 (ήτοι 5 mg /kg) ως δοκιμασία και 5 mg /kg του αρνητικού MAb IgG3 σαν ένας έλεγχος σε συνδυασμό με την μια σειρά από DTX (1~10 mg /kg) για να αξιολογήσει περαιτέρω την τοξικότητα των θεραπειών συνδυασμού. Δεν τοξικότητα βρέθηκε σε θεραπείες συνδυασμού (Εικ. 1 C και D). Δεν υπήρξαν μακροσκοπικές ενδείξεις χρόνιας τοξικότητας σε κύρια όργανα για τυχόν ποντίκια. αριθμός των λευκοκυττάρων συμπιέστηκαν σε περιφερικό αίμα σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή κατά 2 εβδομάδες μετά την ένεση, με ανάκτηση που συμβαίνουν από 4 εβδομάδες και η κανονική αιματολογία παρατηρήθηκε σε 70 ημέρες. Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι θεραπείες συνδυασμό με MAb C595 και DTX ή με μονοκλωνικό αντίσωμα ελέγχου IgG

3 και DTX θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί με ασφάλεια σε ζωικά μοντέλα για τη μελέτη της αποτελεσματικότητας.

Επίδραση του ενιαίου MAb C595 και DTX για αναστολή ανάπτυξης όγκου και την παραγωγή ασκίτη

Εμείς κατ ‘αρχάς σε σύγκριση με την αντικαρκινική δράση του ενιαίου MAb C595, MAb IgG

3 έλεγχο, μόνο DTX και τον έλεγχο του οχήματος (HPMC), μετά την ανάπτυξη του ασκίτη και την αρχική φιλοδοξία για 3 εβδομάδες. Σωρευτική όγκος του ασκιτικού υγρού παράγονται ανά ζώο παρουσιάζεται στο Σχ. 2Α. λαβόντες όχημα ποντικούς συνέχισαν να παράγουν ασκίτη σε συχνότερη ρυθμό και έπρεπε να επανειλημμένα αναρρόφηση κατά τη διάρκεια της θεραπείας (28 ημέρες) ενώ MAb C595-αγωγή ποντικούς που παράγεται λιγότερο ασκίτη που σχετίζονται με τη δόση του MAb C595 (4 ± 1 mL για HD και 5 ± 1 mL για LD, αντίστοιχα) σε σύγκριση με ποντικούς ελέγχου MAb IgG3 (7 ± 2 mL) (Σχ. 2Α). DTX-αγωγή ποντικοί ανέπτυξαν ασκίτη αργά σε σύγκριση με τον έλεγχο HPMC (6 ± 1 mL) και την παραγωγή ασκίτη σχετιζόταν με τη δόση της DTX (2 ± 1 mL για HD και 4 ± 1 mL για LD, αντιστοίχως) (Σχ. 2Α ). Το HD του DTX (10 mg /kg) μείωσε σημαντικά την ανάπτυξη του ασκίτη (Ρ & lt?. 0.05, Σχήμα 2Α). Εκτός από την παραγωγή ασκίτη, αξιολογήσαμε επίσης τη συνολική μεταβολή βάρους του όγκου σε κάθε ομάδα στο τέλος των πειραμάτων (4 εβδομάδες μετά την επεξεργασία). Η μεταβολή βάρους του όγκου είναι συνεπής με την αλλαγή της παραγωγής ασκίτη (Εικ. 2Β). Ενιαία MAb C595 ανέστειλε μόνο εν μέρει την ανάπτυξη των OVCAR-3 όγκων, όπως αποδεικνύεται από το βάρος του όγκου των 380 ± 80 mg σε LD (5 mg /kg) και 260 ± 76 mg σε HD (150 mg /kg) έναντι 560 ± 77 mg σε ποντικούς που λαμβάνουν αρνητικό έλεγχο IgG3 MAb (15 mg /kg) (Ρ & lt? 0,05), αντίστοιχα, ενώ ενιαία DTX ανέστειλε προφανώς την ανάπτυξη των OVCAR-3 όγκων, όπως αποδεικνύεται από το βάρος του όγκου των 230 ± 66 mg σε LD (5 mg /kg ) και 75 ± 14 mg σε HD (10 mg /kg) έναντι 540 ± 96 mg σε ποντικούς που έλαβαν τον ίδιο όγκο HPMC (Ρ & lt? 0,05), αντίστοιχα (Σχήμα 2Β).. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι και οι δύο MAb C595 και DTX μπορεί να επάγει υποχώρηση του OVCAR-3 ανάπτυξης όγκου σε έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο και ότι η αντικαρκινική δραστικότητα του DTX είναι πιο αποτελεσματική από εκείνη των MAb C595.

Μετά την ευθανασία, η περιτοναϊκή κοιλότητα του κάθε ποντικού πλύθηκε με 2 κ.εκ. φυσιολογικού ορού, και μετά από αναρρόφηση, ο όγκος του ασκίτη παρούσας καταγράφηκε. Α Σωρευτική όγκοι ασκίτη συλλέχθηκε από κάθε ζώο από την έναρξη της θεραπείας [MAb C595 (Η και L), MAb IgG

3, DTX (Η και L) δείχνονται. Η προφανής διαφορά παρατηρήθηκε μεταξύ DTX (H) ομάδα κατεργασμένα ομάδα και άλλοι αγωγή (

P

& lt? 0,05). βάρη Β όγκου (mg) στο τέλος των πειραμάτων μετά από εφάπαξ MAb C595, MAb IgG

3, DTX ή όχημα θεραπείες με διαφορετικές δόσεις. Ο όγκος ζυγίζουν ήταν προφανώς χαμηλότερη σε MAb επεξεργασμένου και DTX-αγωγή ομάδες έναντι MAbIgG

3-θεραπεία και HPMC-αγωγή ομάδες ελέγχου (

P

& lt? 0,05). C. Επίδραση της ενιαίας MAb C595, MAb IgG

3, DTX ή όχημα για την καταστολή της αύξησης του δείκτη όγκου CA125 (ΟΑ125 Ku /L) στο ρευστό ασκίτη (περιτοναϊκή πλύση) στο τέλος των πειραμάτων. Το επίπεδο της CA125 ήταν προφανώς χαμηλότερη σε MAb C595 (H) κατεργασμένα και DTX-αγωγή ομάδες έναντι MAbIgG

3-θεραπεία και HPMC-αγωγή ομάδες ελέγχου (

P

& lt? 0,05). Η: υψηλή δόση? L: χαμηλή δόση. Αντιπροσωπευτικά γραφήματα απεικονίζεται.

Η

Επίδραση του συνδυασμού MAb C595 και DTX στην ανάπτυξη του όγκου, την παραγωγή ασκίτη και την επιβίωση

Στη συνέχεια συγκρίναμε την αντικαρκινική δράση του συνδυασμού 1/3 MTD MAb C595 (5 mg /kg) ή ελέγχου MAb IgG

3 (5 mg /kg) με ένα DTX δόση (10 mg /kg) μετά από ανάπτυξη του ασκίτη και την αρχική φιλοδοξία για 3 εβδομάδες. Η δοκιμή συνδυασμού (5 mg /kg MAb C595 και 10 mg /kg DTX) θα μπορούσε να αναστείλει σημαντικά την ανάπτυξη ασκίτη σε σύγκριση με τον έλεγχο του συνδυασμού (5 mg /kg MAb IgG3 και 10 mg /kg DTX) και ελέγχου του οχήματος (Σχ. 3Α) . Το μοτίβο της παραγωγής ασκίτη στην ομάδα ελέγχου συνδυασμού είναι παρόμοια με αυτή που παρατηρείται για ένα ενιαίο kg θεραπεία 10 mg /DTX όπως περιγράφεται ανωτέρω. Σωρευτική όγκος του ασκιτικού υγρού παράγονται ανά ζώο παρουσιάζονται για δοκιμή συνδυασμού (0.4 ± 0.2 ml), έλεγχος συνδυασμού (2 ± 1 mL) και ελέγχου του οχήματος (7 ± 2 mL) στο Σχ. 3Β (P & lt? 0,05). Τέσσερις εβδομάδες μετά τη θεραπεία, η θεραπεία δοκιμή συνδυασμός ανέστειλε σημαντικά την αύξηση του OVCAR-3 όγκων, όπως αποδεικνύεται από το βάρος του όγκου 15 ± 11 mg έναντι 65 ± 16 mg στην ομάδα ελέγχου συνδυασμού και 560 ± 100 mg στην ομάδα ελέγχου οχήματος (Ρ & lt ? 0,05), αντίστοιχα (Σχήμα 4Α και Β).. Η επιβίωση των ζώων που ήταν πολύ καλύτερη στην ομάδα δοκιμής συνδυασμός από τις ομάδες ελέγχου συνδυασμού και όχημα ελέγχου (Ρ & lt? 0,05). (Εικ. 4C)

A. Στο τέλος των πειραμάτων, δεν εμφανή σημάδια σχηματισμού ασκίτη δει σε δοκιμή συνδυασμού (5 mg /kg MAb C595 + 10 mg /kg DTX) κατεργασμένα ποντίκια (α)? σημάδια σχηματισμού ασκίτη βρέθηκε στον έλεγχο συνδυασμό (5 mg /kg MAb C595 + 10 mg /kg DTX) κατεργασμένα ποντίκια (β)? εμφανή σημάδια σχηματισμού ασκίτη βρέθηκε σε όχημα (1/2 αλατούχο +1 /2 HPMC) κατεργασμένα ποντίκια (γ). B. Οι σωρευτικές όγκοι ασκίτη από δοκιμή συνδυασμό, ελέγχου συνδυασμό ή ποντίκια υπό αγωγή με όχημα εμφανίζονται (

P

& lt? 0,05). C. Επίδραση της δοκιμής συνδυασμό, τον έλεγχο ή συνδυασμός οχήματος επί καταστολή της αύξησης της στάθμης του καρκινικού δείκτη (CA 125 Ku /L) στο ρευστό ασκίτη (περιτοναϊκή πλύση) στο τέλος των πειραμάτων (

P

& lt? 0,05 ). Αντιπροσωπευτική εικόνα και γραφήματα εμφανίζονται.

Η

Α. Το βάρος του όγκου αλλάζει κατά το τέλος των πειραμάτων μετά τη δοκιμή συνδυασμού, έλεγχος συνδυασμό ή όχημα θεραπείες με διαφορετικές δόσεις (

P

& lt? 0,05). B. Ο όγκος του όγκου σε συνδυασμό ποντικών δοκιμής αγωγή ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό, τι στα ποντίκια ελέγχου έλαβαν όχημα (

P

& lt? 0,01). C. Για όλα τα ζώα, η προβλεπόμενη διάρκεια της θεραπείας ήταν 4 εβδομάδες. Τα ποντίκια (10 ανά ομάδα) υποβλήθηκαν σε ευθανασία εάν οφείλεται σε κακή υγεία, που αναμένεται να γίνει ετοιμοθάνατα μέσα σε σύντομο χρονικό διάστημα. Η επιβίωση υπολογίστηκε ως ο αριθμός των ημερών που παρήλθε μεταξύ την έναρξη της θεραπείας και την ευθανασία, και% ποντίκια που επιβίωσαν ήταν ο αριθμός των ζώων που απομένουν σε κάθε ομάδα (χ 10) στο τέλος κάθε εβδομάδας μετά την έναρξη της θεραπείας. Το ποσοστό επιβίωσης των ζώων στην ομάδα δοκιμής συνδυασμός ήταν πολύ καλύτερη από ότι στην ομάδα ελέγχου ομάδα συνδυασμό ή φορέα (

P

& lt? 0,05). Αντιπροσωπευτικές εικόνες και το γράφημα που φαίνεται.

Η

Ενιαίου ή θεραπείας συνδυασμού επηρεάζει τα επίπεδα CA125 δείκτη όγκου

Στο τέλος των πειραμάτων, η αλλαγή στη μέση επίπεδα CA125 για ενιαία MAb C595 στο LD δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε σύγκριση με MAb IgG

3 έλεγχο, ενώ η μεταβολή της μέσης επίπεδα CA125 για την ενιαία CA125 σε HD ή μόνο DTX ήταν προφανώς διαφορετικό σε σύγκριση με το MAb IgG

3 ή HPMC ελέγχου, αντίστοιχα (

P

& lt?. 0,05) (Σχ 2C). Είναι προφανές ότι η ομάδα δοκιμής συνδυασμός είχε ανέστειλε σημαντικά επίπεδα CA125 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου συνδυασμού (

P

& lt? 0,05) ή της ομάδας ελέγχου φορέα (

P

& lt? 0,01) (Σχ. 3C). Σε ευθανασία, οι τιμές CA125 όχημα ήταν 68.000 ± 12.000 Ku /L, σε σύγκριση με την δοκιμή συνδυασμού και συνδυασμός έλεγχο των 14030 ± 5022 Ku /L και 28.306 ± 11.403 Ku /L, αντίστοιχα. Η μείωση των επιπέδων του υγρού CA125 ασκίτη ελεύθερα κυττάρων είναι συνεπής με την μείωση του όγκου ασκίτη και το βάρος του όγκου.

ιστολογικές μεταβολές σε ξενομοσχεύματα όγκου μετά τη θεραπεία με συνδυασμό

Για να συγκριθεί η ιστολογία της κάθε ομάδας,