Αφηρημένο

PHB είναι ένας αναφερθεί ογκογονίδιο και ογκοκατασταλτικό σε καρκίνο του στομάχου. Εδώ, θα αξιολογηθεί κατά πόσον η

PHB

αριθμός αντιτύπων και ο πολυμορφισμός rs6917 επηρεάζουν την έκφραση του σε καρκίνο του στομάχου. Κάτω ρύθμιση και up-ρύθμιση του

PHB

παρατηρήθηκαν στις αξιολογούνται όγκους. Μειωμένη έκφραση συσχετίστηκε με αποδιαφοροποίηση του όγκου και την έναρξη του καρκίνου. Η Τ αλληλόμορφο του πολυμορφισμού rs6917 συσχετίστηκε με μειωμένο

PHB

επίπεδα mRNA. Επιπλέον, ο προς τα πάνω ρύθμιση του

ΡΗΒ

φάνηκε να ρυθμίζεται από το κέρδος του πρόσθετα αντίγραφα γονιδίου. Έτσι,

PHB

αντιγράψετε παραλλαγή αριθμό και τη διαφορική έκφραση του πολυμορφισμού rs6917 μπορεί να παίξει ένα ρόλο στην

PHB

μεταγραφική ρύθμιση

Παράθεση:. Leal MF, Cirilo Δημοκρατία του Λάος, Mazzotti TKF , Calcagno DQ, Wisnieski F, Demachki S, et al. (2014) Prohibitin Έκφραση απορρύθμιση σε γαστρικός καρκίνος συνδέεται με την 3 ‘αμετάφραστη περιοχή 1630 C & gt? T Πολυμορφισμός και αριθμός αντιτύπου Παραλλαγή. PLoS ONE 9 (5): e98583. doi: 10.1371 /journal.pone.0098583

Συντάκτης: Amanda Ewart Toland, Πολιτειακό Πανεπιστήμιο του Οχάιο Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 17 Φεβ 2014? Αποδεκτές: 5 Μάη 2014? Δημοσιεύθηκε: May 30, 2014

Copyright: © 2014 Leal et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nivel Superior (CAPESP), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Τεχνολογικό (CNPq? RC, MACS και RRB) και Fundação de Amparo à Pesquisa κάνει Estado de São Paulo (FAPESP? MFL, PdRC και DQC ) ως επιχορηγήσεις και τα βραβεία υποτροφία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. RC είναι ένα ακαδημαϊκό πρόγραμμα επεξεργασίας για PLoS ONE. Οι άλλοι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα γι ‘αυτούς. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE Editorial πολιτικές και κριτήρια.

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) είναι η τέταρτη πιο κοινή μορφή καρκίνου και η δεύτερη κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο σχετίζονται με σε όλο τον κόσμο [1]. Παρά τις σημαντικές προόδους στην μελέτη του GC, οι μοριακές αλλαγές που εμπλέκονται στην καρκινογένεση γαστρικό παραμένουν άγνωστοι.

χρωμόσωμα 17 είναι ένα από τα πιο κοινά χρωμοσώματα που εμφανίζουν αριθμητικών εκτροπών σε GC (βλέπε ανασκόπηση [2]). Η ομάδα μας έχει αναφερθεί στο παρελθόν την παρουσία του χρωμοσώματος 17 ανευπλοειδίας, αμφότερα τα κέρδη και τις ζημίες, σε GC σε άτομα στη Βόρεια Βραζιλία [3], [4], [5], [6], καθώς και σε όλες τις κυτταρικές σειρές GC ιδρύθηκε από νεοπλασίες σε αυτό πληθυσμός [7], [8]. Ως εκ τούτου, αυτό το χρωμόσωμα μπορεί να περιέχει σημαντικά γονίδια που εμπλέκονται στην γαστρική καρκινογένεση.

Η prohibitin-1 (

PHB

) γονίδιο χάρτες στο χρωμόσωμα 17q21 τόπο. Αυτό το γονίδιο κωδικοποιεί μία πανταχού παρούσα, εξελικτικά συντηρημένη πρωτεΐνη που βρίσκεται σε ένα ευρύ φάσμα οργανισμών, περιλαμβανομένων των βακτηρίων, φυτών, ζυμομυκήτων, πρωτόζωα και τα θηλαστικά [9]. ΡΗΒ αρχικά πιστεύεται ότι παίζουν κεντρικό ρόλο στην αναστολή της προόδου του κυτταρικού κύκλου. Πιο πρόσφατα, ΡΗΒ έχει χαρακτηριστεί ως συνοδού που εμπλέκονται στη σταθεροποίηση των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών? Έτσι, ΡΗΒ έχει εμπλακεί σε αρκετές κυτταρικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης του πολλαπλασιασμού, η απόπτωση και η μεταγραφή του γονιδίου [10].

ΡΗΒ φαίνεται να παίζει ένα ρόλο στην ανάπτυξη των διαφόρων τύπων καρκίνου. Η υπερέκφραση του ΡΗΒ έχει αναφερθεί στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, του οισοφάγου, του μαστού, του πνεύμονα, της ουροδόχου κύστης, του θυρεοειδούς, των ωοθηκών και του προστάτη. Σε αντίθεση, η μειωμένη έκφραση ΡΗΒ έχει παρατηρηθεί σε γλοιώματα, και σωματικές μεταλλάξεις εις

ΡΗΒ

έχουν ανιχνευθεί σε σποραδικούς καρκίνους του μαστού [9]. Επιπλέον, ένα λειτουργικό πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP) στο

ΡΗΒ

γονίδιο, αλλάζοντας ένα κυτοσίνη σε θυμίνη στη θέση 1.630 στο 3 ‘UTR (rs6917), δημιουργεί μια παραλλαγή που δεν έχει αντιπολλαπλασιαστική δραστηριότητα [11] [12], και στη συνέχεια μπορεί να αυξήσει τον κίνδυνο κακοήθους ανάπτυξης. Η Τ αλλήλιο αυτού του SNP έχει συσχετισθεί με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του μαστού [13] και το μελάνωμα [14]. Ως εκ τούτου, ο ρόλος των ΡΗΒ στον πολλαπλασιασμό ή /και καταστολή του καρκίνου παραμένει αμφιλεγόμενη.

Ο ρόλος των ΡΗΒ στη γαστρική καρκινογένεση δεν έχει πλήρως διευκρινιστεί. Ορισμένες προηγούμενες μελέτες έχουν περιγράψει αυξημένη έκφραση ΡΗΒ σε δείγματα GC [15], [16], [17], [18] και στον ορό ασθενών GC [19]. Ωστόσο, άλλες μελέτες έχουν αναφέρει ΡΗΒ ρύθμιση προς τα κάτω σε αυτόν τον τύπο καρκίνου [20], [21]. Η διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών που εμπλέκονται στη ρύθμιση της μεταγραφής του

PHB

μπορεί να προσφέρει νέες γνώσεις σχετικά με το ρόλο της στην GC και να βοηθήσει την ανάπτυξη νέων αντικαρκινικών θεραπειών.

Σε αυτή τη μελέτη, πρέπει πρώτα αξιολογηθεί η έκφραση mRNA και πρωτεΐνης του ΡΗΒ σε GC και συμφωνημένα μη νεοπλαστικά δείγματα γαστρικού ιστού. Επιπλέον, οι πιθανές συσχετίσεις μεταξύ των

PHB

και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά ερευνήθηκαν. Επειδή το

PHB

γονίδιο βρίσκεται σε μια χρωμοσωμική περιοχή που εμπλέκονται συχνά σε αριθμητικές εκτροπές στο GC [2], θα αξιολογηθεί επίσης η

PHB

αριθμού αντιγράφων στα δείγματα των όγκων. Επιπλέον, το αλληλόμορφο-ειδική έκφραση του

ΡΗΒ

mRNA εκτιμήθηκε να διερευνηθεί η σχετική μεταγραφή του κάθε αλληλόμορφου σε ετερόζυγα άτομα με την rs6917 πολυμορφισμό ως πιθανός μηχανισμός που εμπλέκονται στην

ΡΗΒ

ρύθμιση. Για τις γνώσεις μας, καμία προηγούμενη μελέτη δεν έχει αξιολογηθεί

PHB

αντιγράψετε τον αριθμό και την έκφραση συγκεκριμένου αλληλόμορφου σε δείγματα όγκων.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα δείγματα ιστών

Σαράντα οκτώ ζεύγη δειγμάτων GC και τα αντίστοιχα μη νεοπλαστικά δείγματα γαστρικού ιστού (& gt? 5 cm από την άκρη του όγκου) χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί

ΡΗΒ

έκφραση mRNA και το γονότυπο SNP rs6917. Σε 38 από αυτά τα δείγματα GC, το

PHB

αντιγράψετε εκτιμήθηκε επίσης τον αριθμό. PHB ανοσολογική αντίδραση αξιολογήθηκε σε 12 δείγματα GC.

Όλα τα γαστρικά δείγματα ελήφθησαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε γαστρεκτομή για GC σε João de Barros Barreto Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο (HUJBB) στη Βόρεια Βραζιλία. Όλοι οι ασθενείς είχαν αρνητικό ιστορικό έκθεσης σε είτε χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν την επέμβαση, και δεν υπήρχε συνύπαρξη άλλων διάγνωση καρκίνων. Γραπτή συγκατάθεση με την έγκριση της επιτροπής δεοντολογίας της HUJBB ελήφθη.

Μέρος της κάθε αποσυντίθενται δείγμα του όγκου ήταν φορμόλη-σταθερές και ενσωματωμένα σε παραφίνη (FFPE). Τομές ιστού FFPE χρώση με αιματοξυλίνη-ηωσίνη για ιστολογική εκτίμηση ή να χρησιμοποιηθούν για ανοσοϊστοχημεία ανάλυση (IHC). Επιπλέον τμήματα κάθε όγκου και αντιστοιχισμένο μη νεοπλαστικά δείγμα ιστού καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι τον καθαρισμό νουκλεϊκών οξέων.

Όλα τα δείγματα ταξινομήθηκαν σύμφωνα με την Lauren [22], και οι όγκοι σταδιακή σύμφωνα με τα κριτήρια σταδιοποίησης TNM [23].

DNA και mRNA καθαρισμός

Ολικό DNA και πιΚΝΑ ταυτόχρονα απομονώθηκαν από δείγματα γαστρικού ιστού χρησιμοποιώντας ένα /ΚΝΑ /Protein Kit AllPrep DNA (Qiagen, Germany) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι συγκεντρώσεις και η ποιότητα DNA και RNA προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο NanoDrop (Kisker, Γερμανία), και η ακεραιότητα του RNA προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση πηκτής.

Expression ΡΗΒ Gene

ΡΗΒ

έκφραση αξιολογήθηκε με ανάστροφη μεταγραφή αλυσιδωτής αντίδρασης ποσοτικής πολυμεράσης (RT-qPCR). Πρώτον, συμπληρωματικό DNA (cDNA) συντέθηκε χρησιμοποιώντας ένα υψηλής χωρητικότητας cDNA Archive Kit (Applied Biosystems, Πολωνία) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Σε πραγματικό χρόνο ανάλυση RT-qPCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας QuantiFast SYBR Green Master Mix (Qiagen, γερμανικά) σε Fast Real-Time PCR μηχάνημα 7500 (Applied Biosystems, USA). Οι παρακάτω εκκινητές (150 ηΜ το καθένα) είχαν σχεδιαστεί για RT-qPCR ενίσχυση:

ΡΗΒ

F5′-GTGTGGTTGGGGAATTCATGTGG-3 ‘και R5′-CAGGCCAAACTTGCCAATGGAC-3’?

ACTB

F5′-AGAAAATCTGGCACCACA-3 ‘και R5′-AGAGGCGTACAGGGATAG-3’. Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν τόσο για το γονίδιο-στόχο και τον εσωτερικό έλεγχο (

ACTB

).

PHB

έκφραση ομαλοποιήθηκε να

ACTB

έκφρασης. Η αφθονία του mRNA έκφρασης ρυθμίστηκε με αποτελεσματικότητα ενίσχυσης (

ΡΗΒ

= 99%,

ACTB

= 102%) [24]. Ένα μη-νεοπλασματική δείγμα γαστρικού ιστού χαρακτηρίστηκε ως βαθμονομητής για κάθε συνδεδεμένο όγκου για τον υπολογισμό της σχετικής ποσοτικοποίησης (RQ) [24].

Έκφραση ΡΗΒ Protein

Οι τομές παραφίνης υποβλήθηκαν σε IHC . τομές ιστών όγκου (3 ή 4 mm σε πάχος) αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε διαβαθμισμένη σειρά αιθανόλης. Επιτόπου ανάκτηση πραγματοποιήθηκε σε κιτρικό ρυθμιστικό, ρΗ 6,0, σε υγρή θερμότητα σε μια χύτρα ταχύτητας. Στη συνέχεια, οι τομές ιστών επωάστηκαν με ένα πρωτογενές μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι PHB (ΙΙ-14-10, αραίωση 1:100? ThermoFisher Scientific, USA). Sites ανοσοαντιδραστικότητας οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης SuperPicture Polymer (Invitrogen, USA). Οι πλάκες δει με μικροσκόπιο φωτός χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Nikon Eclipse E600 (Nikon, USA) εξοπλισμένη με μια ψηφιακή φωτογραφική μηχανή Nikon DSM1200F (Nikon, USA). Η μη χρωματισμένο περιοχή (λευκή περιοχή) επιλέχθηκε και να ορίσετε ως φόντο. Οποιαδήποτε χρώση θεωρείται ότι είναι ένα θετικό αποτέλεσμα, ανεξάρτητα από την ένταση. Οι αρνητικοί έλεγχοι, στο οποίο το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε από 5% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) σε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο (PBS), συμπεριλήφθηκαν σε όλες τις σειρές, και τα τμήματα του φυσιολογικού ιστού ανθρώπινου προστάτη χρησιμοποιήθηκαν ως θετικοί έλεγχοι.

PHB

αριθμός Αντιγραφή

για την αξιολόγηση του αριθμού αντιγράφων παραλλαγές (CNV), η διαδικασία qPCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας ποσοτικές αναλύσεις TaqMan CNV (Life Technologies, USA) για το

PHB

γονίδιο (Hs00178432_cn) και για τον εσωτερικό έλεγχο

RNase P

(# 4403326). Multiplex αντιδράσεις qPCR διεξήχθησαν εις τετραπλούν με gDNA ανάλογα με τις συνθήκες πρωτόκολλο και το ποδήλατο του κατασκευαστή σε 7500 Fast Real-Time PCR μηχάνημα (Life Technologies, USA). Ο σχετικός αριθμός αντιγράφων του κάθε δείγματος υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας Αντιγραφή καλούντος Λογισμικό V1.0 (Life Technologies, USA). Εμπορική ανθρώπινη gDNAs (G1471 και G1521? Promega, USA) χρησιμοποιήθηκαν για τη βαθμονόμηση

PHB

Γονοτυπικές DNA

από μη νεοπλασματικά δείγματα χρησιμοποιήθηκε για

PHB.

του γονότυπου. Τα θέματα ήταν ο γονότυπος για τον πολυμορφισμό rs6917 χρήση προσαρμοσμένων TaqMan SNP ανιχνευτές και εκκινητές (Applied Biosystems, Foster City, CA). Οι παρακάτω εκκινητές και MGB ανιχνευτές σχεδιάστηκαν για διάκριση αλληλόμορφων: εκκινητές F5′-TTGGTCCCTCTCAGATACCCA-3 ‘και R5′-CCGTGAGAAGGGCAGTCTCT-3′? FAM-σημασμένου ανιχνευτή 5’-CTGCCAAAGACGTGT-3 ‘? και μικρές αλληλόμορφο VIC-σημασμένο ανιχνευτή 5’-CTGCCAAAGATGTGT-3 ‘.

ΡΗΒ

αλληλόμορφων-ειδική έκφραση

αλληλόμορφων-ειδική έκφραση πρώτα προσδιορίστηκε με ανάλυση αλληλουχίας. Είκοσι έως 40 ng του DNA ή cDNA χρησιμοποιήθηκε ως μήτρα για ενίσχυση PCR με τους εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για

ΡΗΒ

γονότυπου. Πριν αλληλουχίας, τα προϊόντα PCR διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης 2%, και η ειδική ζώνη εκχυλίστηκε και καθαρίστηκε. Διεξήχθη αλληλούχηση χρησιμοποιώντας τον πρόσθιο εκκινητή που χρησιμοποιείται για την ενίσχυση PCR και ένα κιτ BigDye Terminator Cycle Sequencing v3.1 (Applied Biosystems, USA). προϊόντα Sequencing διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα ΑΒΙ 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA). Μερικά από τα δείγματα αναλύθηκαν τουλάχιστον δις, συμπεριλαμβανομένων διακριτές RT-PCRs και προσδιορισμούς αλληλούχισης.

Η αλληλόμορφη επίπεδα έκφρασης προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό PeakPicker [25]. Το λογισμικό χρησιμοποιείται για την εκτέλεση πρώτα ένα βήμα κανονικοποίησης, στο οποίο το ύψος αλληλόμορφο SNP συγκρίθηκε με το ύψος των κορυφών αναφοράς πλευρικές αλληλουχίες. Εμείς περιορίζεται αυτό το βήμα κανονικοποίησης μέσα σε ένα παράθυρο 21-βάσης. τιμές λόγου πάνω από 1 μετασχηματίστηκαν σε 1 /(αναλογία) για να μετατρέψει το σύνολο των αξιών σε μια κλίμακα 0-1, και οι τιμές στη συνέχεια ρυθμίστηκαν στο μέσο των κορυφών αναλογίες ένταση από ένα ετερόζυγο δείγμα αναφοράς DNA για τον πολυμορφισμό rs6917. Γενωμικού DNA από ετερόζυγο (Ν = 3) και ομόζυγα δείγματα (Ν = 3, για την CC γονότυπο? Ν = 2, για τον γονότυπο ΤΤ) χρησιμοποιήθηκε για να επικυρωθεί η ανάλυση και να επιβεβαιώσει τις αλληλομόρφων αναλογίες 50:50 και 0:100, αντίστοιχα. Επιπλέον, το cDNA από δείγματα ιστών (καρκινικών και μη καρκινικών δείγματα) από τα δύο θέματα ομόζυγα για το ελάχιστο αλληλόμορφο πολυμορφισμού στο rs6917 χρησιμοποιήθηκαν επίσης ως έλεγχοι.

αλληλόμορφων ειδικών

ΡΗΒ

έκφραση αξιολογήθηκε επίσης σε ετερόζυγα δείγματα με RT-qPCR, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26]. Χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία του γονότυπου Προσαρμοσμένη TaqMan SNP για

PHB

του γονότυπου, δημιουργήσαμε μια γραμμική καμπύλη παλινδρόμησης για την ένταση log10 φθορισμού

vs

αναλογία log10 αλληλομόρφων με βάση τον αύξοντα αραίωση CC- και TT- γονότυπος γενωμική DNA από δείγματα ελέγχου (δείγματα από δύο ομόζυγα άτομα) σε διάφορες αναλογίες (CC: TT 8:01, 4:01, 2:01, 1:01, 1:02, 1:04, 1:08) με RT -qPCR (Σχήμα 1Α). Η αναλογία των αλληλομόρφων γονιδιακής έκφρασης έγινε προβολή από το σημείο τομής του log10 της FAM: Ένταση VIC στην πρότυπη καμπύλη. ROX (εσωτερική χρωστική αναφοράς) και μη ειδικών FAM και VIC φθορισμός κανονικοποιήθηκε σε όλες τις αναλύσεις. Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν.

Α) Το αρχείο καταγραφής

10 αναλογίας έντασης FAM /VIC για

PHB

συναρτήσει της καταγραφής

10 FAM /VIC αλληλόμορφο αναλογία ανάμιξης ομόζυγο ΟΝΑ σε διαφορετικές αναλογίες (8:01, 4:01, 2:01, 1:01, 1:02, 1:04, 1:08 FAM /VIC αλληλόμορφο). Β)

PHB

έκφραση με rs6917 γονότυπο στο γαστρικό δείγματα. C) C /αναλογία των αλληλομόρφων Τ σε cDNA από γαστρικά δείγματα ετερόζυγη ασθενών με αλληλούχιση? Δ) αναλογία FAM /VIC αλληλόμορφων σε γαστρικό δείγματα ετερόζυγων ασθενών χρησιμοποιώντας δοκιμασία προσαρμοσμένη Γονοτυποποίηση TaqMan, στην οποία ένα ειδικό ανιχνευτή για το αλληλόμορφο C σημάνθηκε με χρωστική FAM και ένα δευτερεύον ανιχνευτής αλληλόμορφο Τ σημάνθηκε με VIC χρωστική. * Διαφορικά εκφράζεται μεταξύ των ομάδων από την T-test για ανεξάρτητα δείγματα,

P

& lt?. 0.05

Η

Για τα ετερόζυγα δείγματα cDNA, αλληλομόρφων αναλογίες & lt? 0.8 ή & gt? 1.2 ήταν θεωρείται ενδεικτικό της έκφρασης συγκεκριμένων αλληλόμορφων.

Στατιστική ανάλυση

για την ανάλυση της έκφρασης mRNA, αξιολογήσαμε πρώτα την υπόθεση ότι τα δεδομένα είχαν μια κανονική κατανομή με τη χρήση της δοκιμής Shapiro-ομαλότητα Wilk να καθορίσει την κατάλληλη δοκιμές για τις επόμενες στατιστικές συγκρίσεις. Η

PHB

επίπεδα mRNA δεν ήταν κανονικά κατανεμημένες και μεταμορφώθηκαν (z-score) για ανάλυση. Παρατηρήσεις & gt? 2 ή & lt? -2 Θεωρήθηκαν ακραίες τιμές και εξαιρούνται από τις αναλύσεις. Μια paired t-test εκτελέστηκε για να συγκριθεί η μέση

ΡΗΒ

έκφραση μεταξύ μη νεοπλασματικών και όγκων δειγμάτων. Η T-test για ανεξάρτητα δείγματα και μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από την post-hoc τεστ Games-Howell χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθούν οι πιθανές συσχετίσεις μεταξύ

ΡΗΒ

έκφρασης και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά, πρωτεΐνη ανοσοαντιδραστικότητα, αριθμός αντιγράφων γονιδίου και γονότυπο . Η Chi-square test ή την ακριβή δοκιμασία του Fisher χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τη σχέση μεταξύ

PHB

αριθμός αντιτύπων και η ανοσολογική αντίδραση και κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες. συσχέτισης Pearson χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει την πιθανή συσχέτιση μεταξύ της αλληλουχίας και την δοκιμασία TaqMan για ανάλυση έκφρασης αλληλόμορφο-ειδική. Σε όλες τις αναλύσεις,

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

PHB

έκφραση mRNA σε γαστρικών όγκων

PHB

έκφραση δεν διέφεραν μεταξύ νεοπλασματικών και συμφωνημένα μη νεοπλασματικών γαστρικό δείγματα (0,173 ± 0,255

vs

0,227 ± 0,297,

P

= 0,149). Ωστόσο, τα επίπεδα mRNA μειώθηκαν τουλάχιστον 1,5 φορές σε 20 (45,5%) των δειγμάτων GC και αυξημένη σε 9 (20,5%) σε σύγκριση με συζευγμένες μη νεοπλασματικά δείγματα γαστρικών ιστών.

Ο Πίνακας 1 δείχνει οι συσχετίσεις μεταξύ των

PHB

έκφρασης και τα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, καθώς και ο αριθμός πρωτεΐνη ανοσολογική αντίδραση, rs6917 γονότυπο και αντίγραφο του γονιδίου. Χαμηλής διαφοροποίησης όγκους που παρουσιάζονται μειωμένες

PHB

έκφρασης όταν συγκρίνεται με μετρίως διαφοροποιημένων όγκους (

P

= 0,029? Πίνακας 1). Ωστόσο, τόσο φτωχά διαφοροποιημένο GC (0,025 ± 0,022

vs

0,239 ± 0,303?

P

& lt? 0.001, ANOVA ακολουθούμενο από το τεστ Games-Howell post-hoc) και μετρίως διαφοροποιημένων GC (0.057 ± 0,051

vs

0,239 ± 0,303?

P

& lt? 0.001, ANOVA που ακολουθείται από τους Αγώνες-Howell-hoc μετά τη δοκιμή) παρουσιάζονται μειωμένες

PHB

έκφρασης σε σύγκριση με μη νεοπλασματικά δείγματα γαστρικού ιστού

η

μειωμένη

PHB

έκφραση σχετίστηκε με χαμηλότερο εισβολή (

P

= 0,002? Πίνακας 1). και η απουσία της μετάστασης λεμφαδένα (

P

= 0.040? Πίνακας 1). Επιπλέον, στις αρχές του GC παρουσίασε μειωμένη

PHB

έκφρασης σε σύγκριση με την προηγμένη GC (

P

= 0,002? Πίνακας 1). Επιπλέον, μόνο στις αρχές GC παρουσίασε σημαντική μείωση σε

PHB

επίπεδα mRNA σε σύγκριση με τα μη-νεοπλασματικές δείγματα (0,044 ± 0,027

vs

0,239 ± 0,303,

P

& lt? 0.001, ANOVA ακολουθούμενο από το τεστ Games-Howell post-hoc).

ΡΗΒ Ανοσοαντιδραστικότητα σε γαστρικών όγκων

Protein ανοσοχρώση παρατηρήθηκε σε όλα τα δείγματα όγκου αξιολογήθηκε με IHC (Πίνακας 2). Σε όλες τις περιπτώσεις, ΡΗΒ ανοσοαντιδραστικότητα ανιχνεύθηκε σε νεοπλασματικά και μη νεοπλασματικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των εντερικών μεταπλαστικών και φλεγμονώδη κύτταρα (Σχήμα 2Α-Η). ΡΗΒ κυρίως εκφράζεται στο κυτταρόπλασμα. Η ένταση χρώσης και το ποσοστό των ανοσοδραστικών κυττάρων κυμαινόταν μεταξύ των μελετήθηκαν περιπτώσεις (Πίνακας 2). Δείγματα που παρουσιάζουν & lt? 80% των καρκινικών κυττάρων με ΡΗΒ ανοσοαντιδραστικότητα έδειξαν μειωμένη έκφραση του mRNA (

P

= 0,036, Πίνακας 1)

Α) χρώση ΡΗΒ σε φυσιολογικά γαστρικό βλεννογόνο (400χ).? Β) ανοσοαντιδραστικότητα ΡΗΒ σε φυσιολογικό γαστρικό βλεννογόνο και φλεγμονώδη κύτταρα (400χ)? Γ) ισχυρή χρώση PHB στα εντερικά κύτταρα μεταπλασίας (400x)? Δ) ισχυρή χρώση PHB σε όγκο εντερικού τύπου? Ε) μέτρια έως έντονη ανοσολογική αντίδραση PHB σε χαμηλής διαφοροποίησης του όγκου? ΣΤ) μέτρια έως έντονη ανοσολογική αντίδραση PHB σε μετρίως διαφοροποιημένων όγκου? G) ασθενής χρώση ΡΗΒ σε μια μέτρια διαφοροποιημένο όγκου (400χ)? Δ) ασθενή χρώση PHB σε έναν όγκο διάχυτη τύπου (400x).

Η

PHB

Αριθμός Αντιγραφή σε γαστρικών όγκων

PHB

ενισχύθηκε σε 13 από τους 38 (34,2%) των όγκων, συμπεριλαμβανομένων των 2 δειγμάτων με 4 αντίγραφα. Δεν όγκου παρουσίασε ένα

PHB

διαγραφή. Είναι ενδιαφέρον, 3 δείγματα που παρουσιάζονται ακραία τιμές για

PHB

έκφραση του mRNA παρουσίασε επίσης ενίσχυση του γονιδίου. Ως εκ τούτου, όταν οι τιμές ακραία συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση,

PHB

έκφραση ήταν υψηλότερη στα δείγματα με ενίσχυση γονιδίου σε σχέση με εκείνους που δεν έχουν ενίσχυση γονιδίου (διάμεση τιμή ± διατεταρτημοριακό εύρος: 0,344 ± 0,335

vs

0.047 ± 0,07?

P

= 0,003, μη παραμετρική δοκιμή Mann-Whitney? Σχήμα 3).

PHB

κέρδος σχετιζόταν με όψιμη έναρξη της GC σε σύγκριση με πρώιμη έναρξη GC (

P

= 0,022? Πίνακας 2). Καμία συσχέτιση μεταξύ των

PHB

αριθμός αντιτύπων και η πρωτεΐνη ανοσολογική αντίδραση ή οποιαδήποτε άλλα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά βρέθηκε (Πίνακας 3).

Γραμμές δείχνουν τη μέση και διατεταρτημοριακό εύρος

PHB

έκφρασης. * Διαφορικά εκφράζεται μεταξύ των ομάδων με τη δοκιμασία Mann-Whitney,

P

& lt?. 0.05

Η

PHB

αλληλόμορφο-ειδική έκφραση

Ερευνήσαμε επίσης αν η παρουσία του ανηλίκου αλληλόμορφο σε rs6917 συνδέθηκε με την απορρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης σε ασθενείς GC. Στο δείγμα μας, 11 από 48 ασθενείς (22,9%) ήταν ετερόζυγα και 2 ασθενείς (4,17%) ήταν ομοζυγώτες για το ελάχιστο αλληλόμορφο του πολυμορφισμού rs6917. Όλα τα δείγματα με το αλληλόμορφο Τ παρουσιάζονται 2 αντίγραφα του

ΡΗΒ

γονίδιο. Η παρουσία του αλληλόμορφου Τ στη πολυμορφισμού rs6917 σχετίστηκε με μειωμένη

ΡΗΒ

έκφραση σε GC (

P

& lt? 0,001? Πίνακας 1? Εικόνα 1Β) και σε μη νεοπλασματικά δείγματα (μέση ± SD:. 0,302 ± 0,325

vs

0,045 ± 0,043?

P

& lt? 0.001? Εικόνα 1Β)

Ένα ζευγάρι ετερόζυγα δείγματα (όγκου και μη όγκου) δεν χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της έκφρασης συγκεκριμένων αλληλόμορφων. Μια συσχέτιση μεταξύ της αναλογίας των αλληλομόρφων του πολυμορφισμού rs6917 προσδιορίζεται με αλληλούχηση και τη δοκιμασία TaqMan ανιχνεύθηκε (

P

= 0.003? R = 0,627). Με προσδιορισμό αλληλουχίας, περίπου 50% των περιπτώσεων που παρουσιάζονται διαφορική αλληλική έκφραση (Σχήμα 1 C). Ωστόσο, η δοκιμασία TaqMan έδειξε ότι οι αλληλόμορφα Τ και C παρουσιάζονται διαφορική αλληλική έκφραση στους περισσότερους ασθενείς (Σχήμα 1 D). Ο βαθμός διαφορά στην έκφραση μεταξύ των δύο αλληλίων ποικίλλει μεταξύ των ατόμων. Η αναλογία έκφρασης αλληλόμορφων Τ σε C ήταν παρόμοια στις περισσότερες ζεύγη δείγματα όγκου και μη όγκου. Μόνο ένας ασθενής παρουσίασε μια υψηλότερη αναλογία C /T τόσο όγκου και μη νεοπλαστικά δείγματα και στις δύο δοκιμασίες. Στις περισσότερες περιπτώσεις, μια μικρότερη αναλογία C /T ανιχνεύτηκε ανεξάρτητα από την εφαρμοζόμενη μεθοδολογία (Σχήματα 1C και 1D). Καμία συσχέτιση μεταξύ της διαφορικής αλληλομόρφων έκφρασης και ηλικία έναρξης της νόσου ή οποιασδήποτε άλλης κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητή ανιχνεύθηκε.

Συζήτηση

PHB φαίνεται να είναι απαραίτητη για την κυτταρική ομοιόσταση. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι ΡΗΒ μπορεί να δρα ως προ-ογκογόνο και αντι-ογκογόνο παράγοντα σε διάφορους τύπους κυττάρων (βλέπε ανασκόπηση [10]). Στην παρούσα μελέτη, το προφίλ της έκφρασης της πρωτεΐνης και του mRNA της PHB παρουσίασε ένα ετερογενές πρότυπο μεταξύ των δειγμάτων όγκου. Αν και δεν βρήκαμε μια σημαντική διαφορά μεταξύ GC και συμφωνημένα μη νεοπλαστικά δείγματα, παρατηρήσαμε ότι το επίπεδο mRNA μειώθηκε 1,5 φορές σε 45.5% των δειγμάτων GC και αυξήθηκαν σε 20,5% των όγκων. Η μειωμένη έκφραση του mRNA ήταν εν μέρει οφείλεται σε μειωμένη συχνότητα των καρκινικών κυττάρων που παρουσιάζουν PHB ανοσολογική αντίδραση, η οποία υπογραμμίζει την ετερογένεια μεταξύ καρκινικών κυττάρων κλώνων.

Liu et al. [21] περιγράφεται μειωμένη έκφραση mRNA σε τέσσερα γαστρικών όγκων σε σύγκριση με τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς τους, το οποίο επιβεβαιώνει εν μέρει τα αποτελέσματα μας. Στήριξη ένα αντι-ογκογόνο ρόλο, ΡΗΒ είσοδος μπλοκ στη φάση S [27]. Επιπλέον, οι rs6917 άγριου τύπου

ΡΗΒ

3’UTR και μόνο είναι σε θέση να αναστείλει την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου [11], [28] και την ανάπτυξη του όγκου [12], καθώς και τη μείωση της κινητικότητας των κυττάρων [29]. Επιπλέον, ΡΗΒ παίζει ένα ρόλο στη διατήρηση της φυσιολογικής λειτουργίας των μιτοχονδρίων και μορφολογία [30]. Έχει προταθεί ότι η απώλεια της μιτοχονδριακής έκφρασης ΡΗΒ (κυτταροπλασματική εντόπιση, όπως παρατηρήθηκε σε δείγματα μας) θα μπορούσε να οδηγήσει σε επιταχυνόμενη πρωτεόλυση των πρωτεϊνών της μεμβράνης και τη λειτουργία της μιτοχονδριακής αναπνευστικής αλυσίδας [10] βλάψουν. προηγούμενο πρωτεομική μελέτη μας έδειξε ότι πολλές πρωτεΐνες εμπλέκονται σε οδούς μεταβολισμό της ενέργειας (μιτοχονδριακή δυσλειτουργία, πυροσταφυλικό μεταβολισμό, οξειδωτική φωσφορυλίωση, κιτρικό κύκλο, γλυκόλυση /γλυκονεογένεση) έχουν απορρυθμισμένη [31] και πρότεινε ότι εξέχοντα μιτοχονδριακή λειτουργίες μπορεί να μεταβληθεί, μετατοπίζοντας την παραγωγή ενέργειας σε GC κύτταρα και προτείνοντας το αποτέλεσμα Warburg [32].

Για τις γνώσεις μας, λίγες μελέτες έχουν αξιολογήσει την πιθανή συσχέτιση μεταξύ του

PHB

επίπεδα mRNA και τον πολυμορφισμό rs6917. Σε μια μελέτη, Tang et al. Δεν παρατηρούμε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του πολυμορφισμού rs6917 και mRNA έκφραση σε λεμφοβλαστοειδείς κυτταρικές σειρές περιλαμβάνονται στη βάση δεδομένων HapMap [33]. Ωστόσο, αυτές οι συγγραφείς ανέφεραν ότι ο Τ αλληλίου συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του μαστού. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η παρουσία του αλληλομόρφου T στη πολυμορφισμού rs6917 σχετίστηκε με μειωμένη

ΡΗΒ

έκφραση σε μη νεοπλασματικά και νεοπλασματικών γαστρικά κύτταρα. Η πολυμορφισμός rs6917 βρίσκεται στην 3’UTR και είναι παρούσα μόνο σε ισομορφή 1 του ΡΗΒ, η οποία ανιχνεύθηκε στην παρούσα μελέτη με προσδιορισμό της αλληλουχίας του cDNA και μια δοκιμασία TaqMan. Η 3’ΙΙΤΡ περιέχει πολλαπλά

cis

– και

trans

-Στοιχεία, και αυτές οι δομές έχουν μια ευρεία επίδραση στη μετάφραση του mRNA, τη σταθερότητα και την υποκυτταρική εντόπιση [34], [35], [36 ]. Η παραλλαγή Τ δημιουργεί μία πιθανή θέση πρόσδεσης για τα microRNAs έχει-miR-1292 και έχει-886-5p (https://snpinfo.niehs.nih.gov/cgi-bin/snpinfo/mirna.cgi?2_rs6917), η οποία μπορεί να μεταβάλλουν έκφραση γονιδίου είτε από το mRNA φθορά ή μετάφραση. Άλλες microRNAs είχαν προηγουμένως συνδέονται με τη ρύθμιση του

PHB

έκφραση στο GC. Liu et al. [21] έχουν αναφέρει ότι

PHB

ρυθμίζεται από το miR-27a, το οποίο είναι κοινώς up-ρυθμίζονται σε GC. Οι συγγραφείς πρότειναν ότι ο προς τα κάτω ρύθμιση

ΡΗΒ

από την παρούσα microRNA μπορεί να εξηγήσει γιατί η καταστολή του miR-27a μπορεί να αναστείλει την ανάπτυξη των κυττάρων GC. Επιπλέον, η 3’UTR του

ΡΗΒ

κωδικοποιεί αντιπληροφοριακό RNA (Gene ENSG00000250186? ΑΒΑΝΑ https://www.sanger.ac.uk/). Η παρουσία του σπάνιου αλληλόμορφου στον αντιπληροφοριακό RNA μπορεί να τροποποιήσει τη δευτερεύουσα δομή και να μειώσει την kcal /mol σε σύγκριση με την αλληλουχία ευρέως τύπου χρησιμοποιώντας CLC RNA Workbench 4.0 λογισμικό (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως εκ τούτου, ο πολυμορφισμός rs6917 μπορεί να οδηγήσει σε

PHB

ρύθμιση προς τα κάτω με τη δημιουργία νέων θέσεων στόχων microRNA, είτε μέσω ρύθμισης του από το αντιπληροφοριακό RNA σε γαστρικά κύτταρα, συμβάλλοντας έτσι στην γαστρική καρκινογένεση.

Σε μας δείγματα, οι περισσότεροι από τους ασθενείς παρουσίασαν ετερόζυγων αυξημένη έκφραση του αλληλόμορφου Τ σε σύγκριση με το αλληλόμορφο C. Η διαφορά στα σχετικά επίπεδα mRNA από τα δύο αλληλόμορφα θα μπορούσε να είναι το αποτέλεσμα των διαφορών σε μεταγραφή ή τη σταθερότητα του mRNA, και δείχνουν ότι αυτός ο πολυμορφισμός παρουσιάζει μια

cis

επίδραση στο γαστρικό κύτταρα. Απ ‘όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να αξιολογηθεί η ΡΗΒ απόκλιση

αλληλόμορφο-ειδική έκφραση σε δείγματα όγκων. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι ένας

ΡΗΒ

παραλλαγή με το αλληλόμορφο Τ στη θέση 1630 στην 3’UTR στερείται αντι-πολλαπλασιαστική και όγκου ικανότητες καταστολής της ανάπτυξης in vitro και σε ζωικά μοντέλα [29]. Ως εκ τούτου, η παρουσία του αλληλόμορφου Τ, ιδιαίτερα όταν παρουσιάζει αυξημένη έκφραση σε σχέση με το αλληλόμορφο C, μπορεί να προκαλέσει ένα «φαινόμενο σφουγγάρι» για την μετα-μεταγραφική ρυθμιστές όπως miRNAs και συμβάλλουν σε πολλαπλασιασμό γαστρικού κυττάρων, προδιαθέτοντας ετερόζυγα άτομα να GC.

Η πιθανή επίδραση του

PHB

κάτω ρύθμιση – λόγω του πολυμορφισμού rs6917, για παράδειγμα – σε κίνδυνο GC είναι σε συμφωνία με τις συσχετίσεις μεταξύ των μειωμένων

PHB

mRNA και κάτω εισβολή, η έλλειψη λεμφαδένα μετάσταση και πρώιμο στάδιο GC. Για τις γνώσεις μας, καμία προηγούμενη μελέτη στη βιβλιογραφία έχει αξιολογήσει την πιθανή συσχέτιση μεταξύ του

PHB

έκφρασης και GC προγνωστικούς παράγοντες. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι

μπορεί να απαιτηθεί PHB

κάτω ρύθμιση για την έναρξη του όγκου.

Ωστόσο, προηγούμενες πρωτεομική μελέτες έχουν αναφερθεί PHB ρύθμιση προς τα πάνω σε γαστρικών όγκων [15], [16], [17] . Επιπλέον, Kang et al. [18] έχουν αναφέρει την υπερέκφραση της πρωτεΐνης ΡΗΒ και mRNA σε GC (σε σύγκριση με παρακείμενο φυσιολογικό γαστρικό ιστούς) στην ασιατική άτομα. Στο δείγμα μας, το 20,5% των όγκων παρουσιάζονται επίσης αυξηθεί

PHB

έκφρασης. ΡΗΒ φαίνεται να παίζει ένα ρόλο στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την προσκόλληση και τη μετανάστευση και, ως εκ τούτου, στην πρόοδο της κακοήθους μετασχηματισμού μέσω RAS-RAF σηματοδότηση [37]. Υποθέτουμε ότι η αυξημένη

PHB

επίπεδο mRNA είναι απαραίτητη για την εξέλιξη GC. Η αξιολόγηση των ανθρώπινων δειγμάτων επιτρέπει μόνο τη διερεύνηση ενός μοναδικού χρονικού σημείου (κατά το χρόνο της χειρουργικής αποκατάστασης)? Έτσι, δεν είμαστε σε θέση να αξιολογήσουν τη δυναμική ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης. Ωστόσο,

PHB

έκφραση είναι πολύ πιθανό να σχετίζεται με την κυτταρική και μοριακή πλαίσιο υπόβαθρο των γαστρικών κυττάρων.

Kang et al. [18] ανέφεραν ότι η πρωτεΐνη ΡΗΒ και mRNA έκφραση διαφέρουν μεταξύ μετρίως και ελάχιστα διαφοροποιημένα GC και ότι μόνο ελάχιστα διαφοροποιημένα καρκινώματα παρούσα ΡΗΒ υπερέκφραση σε σύγκριση με μη νεοπλασματικά δείγματα. Στο δείγμα μας, λίγα όγκοι ταξινομούνται ανάλογα με το βαθμό διαφοροποίησης. Ωστόσο, παρατηρήσαμε ότι και οι δύο καλά και μέτρια διαφοροποιημένα καρκινώματα που παρουσιάζονται μειωμένες

PHB

έκφρασης σε σύγκριση με μη-νεοπλασματικές δείγματα και ότι οι

PHB

επίπεδα mRNA ήταν χαμηλότερα στα φτωχά διαφοροποιημένα καρκινώματα. Ως εκ τούτου, σε δείγματα μας,

PHB

έκφραση φάνηκε να μειώνεται με την αποδιαφοροποίηση του όγκου. Περαιτέρω έρευνες είναι αναγκαίες για την καλύτερη κατανόηση του ρόλου ΡΗΒ στη διαδικασία διαφοροποίησης σε φυσιολογικά και νεοπλαστικά γαστρικών κυττάρων.

Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι το 34,2% των όγκων που αποκτήθηκε αντιγράφων

ΡΗΒ

. Μεταβολές σε χρωμόσωμα 17 έχουν συσχετιστεί με την εξέλιξη του όγκου και κακοήθους δυναμικού στην πρωτοβάθμια GC [38], [39]. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να χρησιμοποιήσετε μια ακριβή και ισχυρή τεχνική για να αξιολογηθεί η

PHB

αριθμού αντιγράφων σε δείγματα GC. Παρατηρήσαμε σύνδεσης μεταξύ

PHB

αντιγράψετε τον αριθμό και τα επίπεδα mRNA, αποκαλύπτοντας ένα cis-δοσολογία επίδραση της CNV στα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η CNV είναι ένα σημαντικό στοιχείο στην οδήγηση κατάντη

PHB

μεταγραφή σε ορισμένες γαστρικών όγκων. Αυτή η γενετική μηχανισμός, που παρατηρείται κυρίως στην καθυστερημένη έναρξη GC, μπορεί να συμβάλει για την

PHB

ρόλο ως ογκογονίδιο. Το εύρημα αυτό τονίζουν επίσης ότι διάφοροι μηχανισμοί μπορούν να οδηγήσουν σε

PHB

απελευθέρωση στα κύτταρα GC.

Η αύξηση του

PHB

αντιγράψετε τον αριθμό συνδέθηκε με όψιμη έναρξη της GC. έχουν κλινικοπαθολογοανατομικές διαφορές μεταξύ πρώιμης έναρξης και όψιμης έναρξης GC περιγραφεί [40], [41], [42], αλλά λίγα είναι γνωστά για τις γενετικές μεταβολές που συνδέονται με την ηλικία έναρξης της GC [2]. Buffart et al. [43] στο παρελθόν έδειξαν ότι μικροί και μεγάλοι ασθενείς ανήκουν σε ομάδες με διαφορετικά γονιδιωματική προφίλ. Η ενίσχυση του

PHB

τόπο υπογραμμίζει την ετερογένεια της GC.

Ο κύριος περιορισμός αυτής της μελέτης είναι σχετικά μικρό μέγεθος του δείγματος της. Επομένως, ορισμένες στατιστική ανάλυση που παρουσιάζεται μειωμένη δύναμη για την ανίχνευση σημαντικών διαφορών μεταξύ των ομάδων πιθανώς λόγω του μεγάλου ετερογένεια μεταξύ των δειγμάτων. Ως εκ τούτου, ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα μπορεί να έχει συμβεί. Περαιτέρω αξιολογήσεις εξακολουθούν να είναι αναγκαίες για την αξιολόγηση του ρόλου του

PHB

στη γαστρική καρκινογένεση και τη ρύθμιση της μεταγραφής του.

Εν κατακλείδι, τόσο η ρύθμιση προς τα κάτω και πάνω ρύθμιση

PHB

μπορεί να παρατηρηθεί σε GC. Η μείωση του

ΡΗΒ

έκφραση φαίνεται να εμπλέκεται στη διαδικασία αποδιαφοροποίηση του όγκου και την έναρξη του καρκίνου. Το αλληλόμορφο Τ στο

PHB

rs6917 πολυμορφισμός μπορεί να συμβάλλει στην παρατηρούμενη μείωση του

PHB

επίπεδα mRNA και ως εκ τούτου συμβάλλουν στον κίνδυνο GC. Ωστόσο,

PHB

πάνω ρύθμιση φαίνεται να ρυθμίζεται από τον αριθμό αντιγράφων του γονιδίου. Διαφορική έκφραση του πολυμορφισμού rs6917 στο γαστρικό δείγματα αναφέρθηκε για πρώτη φορά, και αυτή η μεταβολή μπορεί να παίζει ένα ρόλο στη ρύθμιση του

ΡΗΒ

έκφρασης.