Αφηρημένο

Παρά το γεγονός ότι ένα αυξημένο επίπεδο του ειδικού προστατικού αντιγόνου μπορεί να είναι μια ένδειξη για τον καρκίνο του προστάτη, για άλλους λόγους συχνά να οδηγήσει σε ένα υψηλό ποσοστό των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων. Ως εκ τούτου, ένα επιπλέον ορολογικό έλεγχο αυτοαντισωμάτων σε ορούς ασθενών θα μπορούσε να βελτιώσει την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη. Πραγματοποιήσαμε πρωτεΐνη μακροσυστοιχία διαλογής με ορούς από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη 49, 70 ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη και 28 υγιείς μάρτυρες και συγκρίθηκε η αυτοάνοση απόκριση σε αυτές τις ομάδες. Είχαμε τη δυνατότητα να διακρίνουν τους ασθενείς με καρκίνο του προστάτη από φυσιολογικούς ελέγχους με ακρίβεια 83,2%, οι ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη από φυσιολογικούς ελέγχους με ακρίβεια 86,0% και ο καρκίνος του προστάτη ασθενείς από ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη με ακρίβεια 70,3%. Συνδυάζοντας μοτίβο οροδραστικότητας με ένα επίπεδο PSA υψηλότερη από 4,0 ng /ml η ταξινόμηση αυτή θα μπορούσε να βελτιωθεί με ακρίβεια 84,1%. Για επιλεγμένων πρωτεϊνών ήμασταν σε θέση να επιβεβαιώσει την διαφορική έκφραση χρησιμοποιώντας Luminex σε 84 δείγματα. Παρέχουμε μια ελάχιστα επεμβατική ορολογική μέθοδο για τη μείωση των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων στην ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη και σύμφωνα με έλεγχο PSA για να διακρίνουν τους άνδρες με καρκίνο του προστάτη από τους άνδρες με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη

Παράθεση:. Leidinger P, Keller Α, Milchram L, Harz C, Hart Μ, Werth A, et al. (2015) Συνδυασμός των αυτοαντισωμάτων Υπογραφή με την PSA επίπεδο επιτρέπει μια ιδιαίτερα ακριβή βάση το αίμα Διαφοροποίηση του καρκίνου του προστάτη ασθενείς από ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. PLoS ONE 10 (6): e0128235. doi: 10.1371 /journal.pone.0128235

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Mohammad Saleem, Hormel Ινστιτούτο, το Πανεπιστήμιο της Μινεσότα, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 17 Ιουνίου 2014? Αποδεκτές: 24 Απριλίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 3 Ιουνίου 2015

Copyright: © 2015 Leidinger et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έλαβαν καμία ειδική χρηματοδότηση για το έργο αυτό

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι ένας από τους πιο θανατηφόρα καρκίνους στους άνδρες παγκοσμίως και η δεύτερη πιο συχνή σχετίζονται με τον καρκίνο αιτία θανάτου στις Ηνωμένες Πολιτείες. Το 2012, ο καρκίνος του προστάτη εκτιμάται ότι αντιπροσωπεύουν περισσότερο από 417.000 νέες περιπτώσεις και 92.000 σχετίζονται με τον καρκίνο των θανάτων στην Ευρώπη [1]. Κυρίως, πάνω από τα δύο τρίτα όλων των καρκίνων του προστάτη διαγνώστηκε σε άνδρες ηλικίας 65 ετών και άνω. [2] Ο καρκίνος του προστάτη χαρακτηρίζεται συχνά από μια σταδιακή ανάπτυξη και πρόοδο. [3] Σύμφωνα με την ιστολογική μοτίβα των καρκινικών κυττάρων η πρόοδος του καρκίνου του προστάτη βαθμολογείται από το σκορ Gleason:. καλά διαφοροποιημένα κύτταρα καρκινώματος (Gleason σκορ 2-4), μετρίως διαφοροποιημένων κυττάρων καρκινώματος (Gleason σκορ 5-7), και κακώς διαφοροποιημένα κύτταρα καρκινώματος (Gleason σκορ 8-10) [4] ο καρκίνος του προστάτη ασθενείς με Gleason σκορ 8-10 τρέξει ένα περισσότερο από τρεις φορές υψηλότερο κίνδυνο θανάτου από καρκίνο του προστάτη μέσα σε 10 χρόνια από ό, τι οι ασθενείς με Gleason σκορ 2-4 (8,3%). [5] Πράγματι, η ασθένεια είναι ιάσιμη όταν είναι νωρίς ανιχνεύεται [2].

Περίπου τα δύο τρίτα των ανδρών των ΗΠΑ ηλικίας 50 ετών και άνω τακτικά-ή τουλάχιστον μια φορά-σε διαλογή για τον καρκίνο του προστάτη. [6] Ψηφιακές εξέταση του ορθού (DRE), και του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) διαλογής έχουν γίνει καλά καθιερωμένες μεθόδους σε καρκίνο προστάτη διαγνωστικής. Ωστόσο, DRE απαιτεί μακρόχρονη εμπειρία στην ανίχνευση του καρκίνου. Επιπλέον, DRE δεν είναι ένα ευαίσθητο εργαλείο για την πρόωρη ασθένεια. Συχνά ανιχνεύει τον καρκίνο σε όψιμα στάδια. [7]

PSA, μία πρωτεάση σερίνης, είναι ένα ειδικό μόριο όργανο που παράγεται από τον προστάτη επιθήλιο. τεστ PSA εισήχθη στη δεκαετία του 1980 παρέχει τη δυνατότητα να ανιχνεύσουν τον καρκίνο χωρίς θετικό αποτέλεσμα DRE. Σύμφωνα με την Αμερικανική Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων, η οποία επέτρεψε τη δοκιμή PSA ως διαγνωστικό εργαλείο, το 1994 ένα PSA, επίπεδο μεγαλύτερο από 4 ng /ml θεωρείται ως μια κρίσιμη τιμή. Ένα επίπεδο PSA λιγότερο από 4 ng /ml αντιστοιχεί σε φυσιολογικό εύρος. PSA μπορεί να ανιχνευθεί, είτε ως «δωρεάν» (ελεύθερο PSA) ή «δεσμευμένο» (PSA-ACT) μορφή των ασθενών, ορούς. [8] Stenman και οι συνεργάτες του αποκάλυψε ότι οι άνδρες με υψηλό επίπεδο δεσμευμένου PSA διατρέχουν υψηλότερο κίνδυνο να υποστούν από καρκίνο του προστάτη, ενώ το επίπεδο του ελεύθερου PSA αποδείχθηκε ότι είναι χαμηλότερες σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη από ό, τι στους άνδρες με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. [9] Partin et al. ήταν σε θέση να ανιχνεύσει τον καρκίνο του προστάτη με ευαισθησία 95% και ειδικότητα 20% με δωρεάν προβολή του PSA. [10] Αν και προβολές PSA μειώσει το ποσοστό θνησιμότητας των ασθενών με καρκίνο του προστάτη, η μέθοδος διαλογής είναι αναποτελεσματική και οδηγεί σε περιορισμούς, που συχνά να οδηγήσει σε υψηλό ποσοστό των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων που ακολουθείται από μη απαραίτητων βιοψιών προστάτη [11-13]. Επιπλέον, οι ηλικιωμένοι άνδρες έχουν συνήθως ένα υψηλότερο επίπεδο PSA που δεν αντιστοιχούν σε οποιαδήποτε ασθένεια του προστάτη. [14] Τα υψηλά επίπεδα PSA είναι επίσης ανιχνεύσιμα σε ασθενείς που πάσχουν από καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. [15] μέθοδοι Ως εκ τούτου, η περαιτέρω διαλογή με υψηλότερη απόδοση για τον καρκίνο είναι απαραίτητο.

οι βιοδείκτες έχουν εξελιχθεί σε ένα απαραίτητο κλινικό εργαλείο. Ειδικά, καρκινικοί δείκτες πρέπει να πληρούν ορισμένα κριτήρια. Πρέπει να έχει υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα, είναι εύκολο να ανιχνευθούν, οικονομική, και εκφράζεται σημαντικά. Τρέχουσες μελέτες έδειξαν το δυναμικό του προσυμπτωματικού αυτοαντισωμάτων σε διαφορετικούς τύπους καρκίνου, π.χ., καρκίνος του πνεύμονα, καρκίνωμα του μαστού, του όγκου των ωοθηκών, και μηνιγγίωμα. [16-19] Αυτοαντισώματα αποκαλύπτουν τη δυνατότητα έγκαιρης ανίχνευσης και διαδοχικές θεραπεία. Η έναρξη των αυτοαντισωμάτων επιτρέπει επίσης μια πιο λεπτομερή ματιά σε μοριακές διεργασίες στην πρώιμη ανάπτυξη της νόσου. Έχουμε περιέγραψε πρόσφατα μια μέθοδο δοκιμής αίματος χρησιμοποιώντας αντισώματα για τον εντοπισμό του καρκίνου του πνεύμονα με ευαισθησία 97,9% και ειδικότητα 97,0%. [20] Επιπλέον, ο Wang και οι συνεργάτες του δημιούργησε ένα φάγων-πρωτεΐνη μικροσυστοιχιών για τον εντοπισμό αντισωμάτων κατά του καρκίνου του προστάτη. [ ,,,0],21] Στη μελέτη τους, την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη με ειδικότητα 88,2% και ευαισθησία 81,6%. Πράγματι, η μελέτη ανιχνεύθηκε επίσης αρκετές πρωτεΐνες με μικρότερη ομολογία με γνωστές πρωτεΐνες.

Στην παρούσα μελέτη, έχουμε περιγράψει μία πρωτεΐνη διαλογής μακροσυστοιχία για την ανίχνευση αυτοαντισωμάτων σε patients`sera καρκίνο του προστάτη. Συνολικά, αναλύσαμε 136 δείγματα αίματος: 48 δείγματα ασθενών με καρκίνο του προστάτη, 60 δείγματα της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη, και 28 δείγματα αίματος από υγιή άτομα. Δείχνουμε ότι ο έλεγχος επιτρέπει την διάκριση των ορών των ασθενών με καρκίνο του προστάτη, και τους ελέγχους. Δείχνουμε επίσης ότι ανοσογόνα αντιγόνα μπορεί να είναι χρήσιμη για τη διαφοροποίηση ασθενείς με καρκίνο προστάτη από ασθενείς καλοήθους προστατικής υπερπλασίας. Επιπλέον, οι ασθενείς που πάσχουν από καλοήθη υπερπλασία του προστάτη μπορούν να διαχωριστούν από τους ελέγχους. Επιπλέον, έχουμε επικεντρωθεί στην ακόλουθη ερώτηση: Μπορεί ο συνδυασμός της PSA και αυτοαντισωμάτων δοκιμές βελτιώσει την ευαισθησία και την ειδικότητα για τη διάγνωση του καρκίνου του προστάτη

δοκιμών PSA ως μια ενιαία διαγνωστική μέθοδος συχνά οδηγεί σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Νέα βιοδείκτη μπορεί να προσφέρει μια ευκαιρία για να ενισχύσει την ευαισθησία και την ειδικότητα για τον καρκίνο του προστάτη. Ειδικά έλεγχο αυτοαντισωμάτων μαζί με την εξέταση PSA μπορεί να είναι ένα χρήσιμο διαγνωστικό εργαλείο για την ανίχνευση καρκίνου του προστάτη σε πρώιμο στάδιο και να μειώσει τη θνησιμότητα σχετιζόμενη με τον καρκίνο του προστάτη. Επιπλέον, η ταυτοποίηση νέων ανοσογονικών αντιγόνων μπορεί να είναι ένα πρώτο βήμα προς την ανάπτυξη νέων θεραπειών.

Υλικά και Μέθοδοι

πληθυσμός Μελέτη

Τα δείγματα αίματος των ασθενών με καρκίνο του προστάτη και ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη ελήφθησαν από το Τμήμα Ουρολογίας, Saarland University Hospital. δείγματα αίματος από υγιείς δότες ελήφθησαν από το Τμήμα Hemostaseology και μετάγγιση Ιατρικής, Σάαρλαντ Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο. Ορός παρασκευάστηκε από monovettes ορό και αποθηκεύτηκε σε κλάσματα των 2 ml στους -70 ° C. Όλα τα δείγματα που λαμβάνονται με των ασθενών, γραπτή συγκατάθεση πριν από τη συμμετοχή. Η μελέτη συμπεριλαμβανομένης της διαδικασίας συναίνεσης εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας (Re.-No. 3755). Συνολικά, 147 οροί αναλύθηκαν, που προέρχονται από 49 καρκίνου του προστάτη (PCA) ασθενείς, 70 καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) ασθενείς και 28 υγιείς άνδρες εθελοντές. Λεπτομερείς πληροφορίες για όλους τους ασθενείς και υγιή άτομα παρέχεται στον Πίνακα 1.

Η

Πρωτεΐνη μακροσυστοιχία διαλογής

Θα προβληθεί μακροδέσμες υψηλής πυκνότητας πρωτεΐνη που περιέχει 38.016

E

.

coli

εκφραζόμενες πρωτεΐνες του hex1 (ανθρώπινης έκφρασης cDNA εγκεφάλου εμβρύου) βιβλιοθήκη με τα κέντρα 150 ορούς ασθενών με διαφορετικές όγκου και μη όγκου ασθενειών, συμπεριλαμβανομένων δύο δεξαμενές προστάτη ορών (5 οροί ανά ομάδα) και μία πισίνα 5 ΒΡΗ ορών. [22] ένα σύνολο 1.827 κλώνους, που ήταν θετικοί για αυτοαντισώματα σε τουλάχιστον μία ομάδα ορού, επελέγησαν και στίγματα εις διπλούν σε υπο-συστοιχίας φίλτρων. Αυτά τα υπο-μακροδέσμες σαρώθηκαν με 49 προστάτη, 70 ΚΥΠ και 28 φυσιολογικούς ορούς (βλέπε Εικ S1).

Εν συντομία, μακροδέσμες πλύθηκαν δύο φορές σε ΤΒδΤΤ (TBS, 0,05% Tween 20, 0.5% Triton Χ -100) και τέσσερις φορές σε TBS. Μετά από αποκλεισμό με 3% άπαχο ξηρό γάλα σε TBST (TBS, 0,05% Tween 20), μακροδέσμες επωάστηκαν όλη τη νύχτα με αραιωμένο ορό (1: 1000). Μετά την επώαση, οι οροί αποθηκεύτηκαν για ένα δεύτερο γύρο της επώασης. Οι μακροδέσμες υποβλήθηκαν σε τρία στάδια πλύσης με TBST και ακολούθησε επώαση με 70 ° C απογύμνωση διαλύματος. Στη συνέχεια μακροδέσμες πλύθηκαν δύο φορές σε TBST και τέσσερις φορές σε TBS. Μετά την επώαση με το κλείδωμα μακροδέσμες λύση υποβλήθηκαν σε δεύτερο γύρο της επώασης του ορού. Μακροδέσμες πλύθηκαν τρεις φορές σε TBST, και επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα (κουνελιού αντι-ανθρώπινη IgG, IgA, IgM-Cy5 (H + L), Dianova, 1: 1000). Τέλος, μακροδέσμες πλύθηκαν τέσσερις φορές σε TBST, δύο φορές σε TBS και στέγνωσε όλη νύκτα. Σήματα ανιχνεύθηκαν με σάρωση με Τυφώνας 9410 σαρωτή (GE Healthcare).

Η ανάλυση εικόνας και στατιστικές

τιμών έντασης Spot υπολογίστηκαν από την Αρκαδία, ένα λογισμικό ανάλυσης εικόνας που αναπτύχθηκε ειδικά για την αξιολόγηση δέσμη πρωτεΐνης [20]. Εν συντομία, η εικόνα της μακροσυστοιχία χωρίστηκε σε subgrids. Αυτές οι subgrids περαιτέρω χωρίζονται σε σημείο περιοχές που περιέχουν ένα σημείο της πρωτεΐνης. Τέλος, η ένταση κάθε κηλίδας υπολογίστηκε ως η μέση τιμή όλων των εικονοστοιχείων της αντίστοιχης spot πρωτεΐνη.

Πραγματοποιήσαμε πρότυπο ποσοστημόριο ομαλοποίηση να ελαχιστοποιηθεί array-to-συστοιχία παραλλαγές. Ειδικά για τα χαρακτηριστικά στην άκρη του πίνακα που παρατηρείται ελαφρά μείωση της ποιότητας. Τα αντίστοιχα χαρακτηριστικά, ωστόσο, θα δυνητικά ωθούν την ανάλυση. Έτσι, οι αντίστοιχες θέσεις έχουν σημανθεί ως μη διαθέσιμες. Στη συνέχεια, θα αποκλείονται 169 κηλίδες πρωτεΐνης που απουσίαζαν σε περισσότερες από 10 που αναλύθηκαν μακροδέσμες. Τα υπόλοιπα 1.658 κλώνοι χρησιμοποιούνται για τις ταξινομήσεις από ένα γραμμικό Support Vector Machine (SVM).

Συνολικά 20 επαναλήψεις μιας τυπικής επικύρωσης 10 φορές σταυρό πραγματοποιήθηκαν και μέση ευαισθησία, ειδικότητα και ακρίβεια για τις τέσσερις ταξινόμηση καθηκόντων υπολογίστηκε. Ως μέτρο του πληροφοριακού περιεχομένου των μονά αντιγόνα για την ικανότητά τους να διαφοροποιούν ορούς περιοχή δύο διαφορετικές ομάδες κάτω από το δέκτη-χειριστή χαρακτηριστικά καμπύλη (ROC) τιμές (AUC) υπολογίστηκαν. Η καμπύλη ROC απεικονίζει την ειδικότητα ως συνάρτηση του 1-ευαισθησίας. Για κάθε αντιγόνο, όλες οι κανονικοποιημένες τιμές έντασης για όλους τους ορούς χρησιμοποιήθηκαν ως κατώτατα όρια για τη διάκριση ορούς ασθενών από τους ελέγχους. Για όλους αυτούς τους όρια, ορούς ασθενών με τιμή έντασης πάνω από το όριο θεωρήθηκαν ως αληθώς θετικά (TP), ορούς ασθενών με τιμή έντασης κάτω από το όριο, όπως ψευδώς αρνητικό (FN). Συνεπώς, οροί ελέγχου με τιμή έντασης κάτω από το όριο θεωρήθηκαν ως αληθινό αρνητικό (ΤΝ), οροί ελέγχου με τιμή έντασης πάνω από το όριο, όπως ψευδώς θετικό (FP). Στη συνέχεια, η ευαισθησία (ΤΡ /(ΤΡ + ΡΝ)) και εξειδίκευση (ΤΝ /(TN + FP)) όλων των κατώτατων ορίων χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό της καμπύλης ROC και AUC αξία της εξεταζόμενης αντιγόνου. Αν οι τιμές της έντασης της εξεταζόμενης αντιγόνου στον ορό των ασθενών είναι υψηλότερες από ό, τι σε ορούς ελέγχου, AUC τιμές κυμαίνονται μηδέν έως 0,5. AUC τιμές που κυμαίνονται από 0,5 έως 1 προσδίδουν σε υψηλότερο μέση ένταση του αντιγόνου στους ορούς ελέγχου σε σύγκριση με ορούς ασθενών. Θεωρήσαμε αντιγόνα με τιμές AUC κάτω από 0.3 ή πάνω από 0.7 ως πληροφοριακό για τη συγκεκριμένη ταξινόμηση. Τέλος, υπολογίστηκε η συχνότητα των οροαντιδραστικότητα εναντίον των αντιγόνων στα θεωρούνται ομάδες χρησιμοποιώντας ένα κατώφλι έντασης σημείο 50 για τη θετική οροαντιδραστικότητα. Τα δεδομένα μακροσυστοιχία πρωτεΐνη κατατέθηκαν στο διαθέσιμο στο κοινό Gene Expression Omnibus βάση δεδομένων (GEO? Ιστοσελίδα https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/geo/, GSE67068).

Επικύρωση

για να είναι έγκυρη αυτοαντισώματα έναντι ανοσογονικών κλώνους, θα αγοράσει αντίστοιχων κλώνων από την Πηγή Bioscience, δηλαδή, D02594, E19574, L16556, A22594, και C11549. Ένθετα αλληλουχήθηκαν από το 5 ‘και 3’ άκρα για να επιβεβαιώσει την ταυτότητα και το μήκος των απεικονιζόμενων αντιγόνων. αποκάλυψε τα δεδομένα ακολουθίας, ότι ο κλώνος D02594 ήταν ένα υβρίδιο των δύο πρωτεϊνών YBX1 και PDP1, που εκπροσωπούν το 5 ‘άκρο του πρώτου 275aa των YBX1 και στο 3’ άκρο του την τελευταία 91aa (ξεκινώντας από aa446) του PDP1 με μια άγνωστη ακολουθία συνδετήρα ανάμεσα. Αυτή η πρωτεΐνη αποκλείστηκε από περαιτέρω ανάλυση. Τα άλλα 4 κλώνοι επιβεβαιώθηκε ότι περιλαμβάνουν ακολουθίες RPS27A, RPL15, DDX54 και RPL7. Για να προσδιοριστεί η παρουσία των αυτοαντισωμάτων εναντίον αυτών των αντιγόνων, χρησιμοποιήσαμε την τεχνολογία Xmap (Luminex, Austin, TX, USA). Με λίγα λόγια, με επισύναψη του αντιγόνα που εκφράζονται σε

E

.

coli

σύμφωνα με τις συστάσεις του προμηθευτή, καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας σφαιρίδια αγαρόζης Νί-ΝΤΑ και συζευγμένο με μαγνητικά μικροσφαιρίδια σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή με μικρές τροποποιήσεις. Πενήντα μΙ ενός beadmix περιείχε 1000 συζευγμένης μικροσφαιρίδια ανά αναλύθηκε πρωτεΐνη επωάστηκε με ορούς ασθενών και ελέγχων (1: 400 αραιωμένο σε 100 mM Tris-HCl ρΗ 7,0, 1% BSA 300 mM, NaCl 0.1% Tween-20) για 2 ώρες σε RT σε έναν αναδευτήρα. Bound αυτοαντισώματα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα 1: 1 μίγμα από 2.5 μ§ /ml R-φυκο AffiniPure F (ab ‘) 2 Frag Gt αντι-ΗΜΝ IgG [Ρογ] (Jackson ImmunoResearch Cat.No. 109-116-098) και 2.5 μg /ml του R-φυκο συγγένειας F (ab ‘) 2 Frag Gt αντι-HMN IgG [F (ab’) 2] (Jackson ImmunoResearch Cat.No. 109-116-097). Μετά από 1 ώρα επώαση με δευτερογενή αντισώματα, σφαιρίδια πλύθηκαν τρεις φορές με PBS-Tween 0,05% και μετρήθηκε με Luminex Flexmap 3D. Εκτός από τυποποιημένες δοκιμές υπόθεση όπως t-test ή ανάλυση διασποράς, η AUC έχει υπολογιστεί. Τέλος, οι μετρήσεις συσχετίστηκαν με τα σκορ και PSA επίπεδα Gleason.

Αποτελέσματα

Ένα σύνολο 1.827 κλώνοι cDNA ελέγχθηκαν με 147 δείγματα ορού, συμπεριλαμβανομένων 49 προστάτη ορών, 70 BPH ορούς, και 28 οροί από υγιείς άνδρες (Πίνακας 1). Από αυτούς τους ορούς επιλέξαμε ένα ίδιας ηλικίας υποσύνολο που περιελάμβανε 44 ΣΕΣΣ και BPH ορούς, το καθένα με μια μέση ηλικία των 67 ετών. Επιπλέον συγκρίναμε υποσύνολα των 36 ορών από ασθενείς του προστάτη με το επίπεδο PSA & gt? 4 ng /ml και των 33 ορών ασθενών ΒΡΗ και με επίπεδα PSA & gt? 4 ng /ml.

Συχνότητα του ανοσοποιητικού κλώνων

Για να ελαχιστοποιηθεί η σειρά-σε-σειρά παραλλαγών το 147 ανέλυσε μακροδέσμες ομαλοποιήθηκαν με τη χρήση τυποποιημένων quantile εξομάλυνση. Επιλέγουμε ένα κατώφλι έντασης σημείο 50 για τον προσδιορισμό των θετικών οροαντιδραστικότητα. Εμείς αποκλείονται όλοι οι κλώνοι cDNA που έδειξε έλλειψη οροαντιδραστικότητα για περισσότερες από 10 από τις 147 σειρές. Από τις υπόλοιπες 1658 κλώνους cDNA, 1612 κλώνοι αντιδρούν με τουλάχιστον ένα PCa ορού. Η συχνότητα των οροαντιδραστικότητα κυμαινόταν από 2,3% για το cDNA κλωνοποίηση του αντιδρά λιγότερο με τους ορούς προστάτη, σε 97,7% για το πλέον αντιδραστικό κλώνο cDNA. Βρήκαμε 1613 κλώνους που αντέδρασαν με τουλάχιστον ένα ΒΡΗ ορού. Η συχνότητα των οροαντιδραστικότητα κυμαίνεται από 2,3% έως 95,5%. Είναι ενδιαφέρον, 1533 κλώνους αντέδρασε με φυσιολογικούς ορούς (συχνότητες από 3,6% έως 96,4%. Η σύγκριση των προαναφερθέντων κλώνων αποκάλυψε μια επικάλυψη του 1485 κλώνων μεταξύ PCa, ΒΡΗ και φυσιολογικό ορό. Αυτοί οι κλώνοι μπορεί να λεγόμενες φυσικά αυτοαντισώματα τα οποία υπάρχουν σε κάθε ορό υγιών ατόμων σε αξιοσημείωτο σταθερά επίπεδα και χαρακτηρίζονται από ελάχιστες μεμονωμένες ποσοτικές διαφορές. [23] το διάγραμμα Venn στο Σχήμα 1 δείχνει την κατανομή των αντιδρώντων κλώνων.

το διάγραμμα Venn δείχνει την κατανομή του 1658 αντιδρώντας κλώνους για τις τρεις ομάδες του ορού (PCA, BPH, Normal). οι περισσότεροι από τους κλώνους είναι αντιδραστικά και στις τρεις ομάδες, ενώ ένας μικρός αριθμός των κλώνων είναι απλώς αντιδραστική σε κάθε ομάδα.

η

Όπως οι περισσότεροι από οι αναλύθηκαν αντιγόνα ήταν αντιδραστικά σε ορούς ασθενών προστάτη, οι ασθενείς ΒΡΗ, καθώς και υγιείς μάρτυρες αυτοί οι κλώνοι δεν φαινόταν να είναι πολύ σημαντική για την περαιτέρω προσεγγίσεις. ως εκ τούτου, εστιάσαμε στην αυτούς τους κλώνους που αντέδρασαν μόνο με ορούς από μία από τις τρεις ομάδες ορού , δηλαδή, είτε PCa ορούς ή ορούς ΒΡΗ ή φυσιολογικό ορό. Εδώ βρήκαμε δέκα κλώνους αντιδραστικά μόνο με τουλάχιστον μία ορού PCa, 12 κλώνοι αντιδραστικά μόνο με τουλάχιστον μία ΒΡΗ ορού και 5 κλώνοι μόνο αντιδραστική με τουλάχιστον ένα φυσιολογικό ορό. Όσον αφορά τις συχνότητες οροαντιδραστικότητα κάθε ομάδας ορού τα αποτελέσματα ήταν κάπως απογοητευτικά ως το πολύ μόνο επτά από 49 προστάτη οροί αντέδρασαν με τα ειδικά αντιγόνα PCa, το πολύ μόνο επτά από τους ορούς 70 ΒΡΗ αντιδρούν με τα ειδικά αντιγόνα ΒΡΗ, και μόνο ένας φυσιολογικός ορός αντιδρά με τα 5 ειδικά αντιγόνα που βρίσκονται μόνο σε φυσιολογικούς ορούς. Ως εκ τούτου, φαίνεται ότι αυτά τα αντιγόνα μπορεί να αντικατοπτρίζουν τις ατομικές παραλλαγές.

Περιεχόμενο του ανοσοποιητικού κλώνων

Όπως λαμβάνοντας υπόψη μόνο τις συχνότητες οροδραστικότητας ανά ομάδα ορού δεν φαίνεται να είναι ένα καλό μέτρο, θα υπολογίζεται για κάθε cDNA κλωνοποίηση του εμβαδού κάτω από την καμπύλη χαρακτηριστικά χειριστής δέκτης (AUC) όπως περιγράφεται στο τμήμα Υλικά και Μέθοδοι. Η AUC είναι ένα μέτρο για το περιεχόμενο των πληροφοριών του κάθε αντιγόνου για το διαχωρισμό των δύο διαφορετικών ομάδων ορός από κάθε άλλο. Εδώ έγινε φανερό, ότι οι κλώνοι που αντιδρούν με περισσότερες από μία ομάδα ορού μπορεί, ωστόσο, να έχουν μια υψηλή περιεκτικότητα σε πληροφορίες για ορισμένους διαχωρισμούς.

Οι τιμές AUC των 1658 αναλύθηκαν κλώνους, συμπεριλαμβανομένων των 461 κλώνων εντός πλαισίου, συνοψίζονται στον πίνακα 2. Έχουμε κατατάσσεται των κλώνων cDNA σύμφωνα με το περιεχόμενο των πληροφοριών που συνέβαλαν στις διάφορες εργασίες ταξινόμησης. Οι κλώνοι με την AUC τιμή & gt? 0.7 ή & lt? 0.3 θεωρήθηκαν πολύ κατατοπιστική για μια συγκεκριμένη εργασία ταξινόμησης.

Η

Για την διάκριση του προστάτη και φυσιολογικό ορό, 199 κλώνους (12%) θεωρήθηκαν ότι είναι κατατοπιστική, συμπεριλαμβανομένων των 52 σε πλαίσιο κλώνους. Μεταξύ των ενημερωτικών κλώνοι, 78 κλώνοι έδειξαν τιμές AUC & gt? 0.7, συμπεριλαμβανομένων των 32-καρέ κλώνους και 121 κλώνοι έδειξαν τιμές AUC & lt? 0.3, συμπεριλαμβανομένων 20 κλώνοι εντός πλαισίου. Το εκτός-πλαισίου κλώνου D20552 με μία ομολογία αλληλουχίας με την κινάση εγκεφάλου κρεατίνης (CKB) έδειξε την χαμηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.142) για τη διάκριση των προστάτη και φυσιολογικό ορό. Αυτός ο κλώνος ήταν επίσης κατατοπιστική για τη διάκριση της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη και φυσιολογικό ορό (AUC = 0,190), αλλά όχι για τη διάκριση του προστάτη και οι οροί BPH (AUC = 0,466). Το εκτός-πλαισίου κλώνου E03526 με ομολογία αλληλουχίας προς διμεθυλαργινίνης dimethylaminohydrolase 1 (DDAH1) έδειξε την υψηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.811). Και πάλι, αυτός ο κλώνος ήταν επίσης κατατοπιστική για τη διάκριση της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη και φυσιολογικό ορό (AUC = 0.760), αλλά όχι για τη διάκριση του προστάτη και οι οροί BPH (AUC = 0.558).

Ο κλώνος D02594 με ομολογία αλληλουχίας με νουκλεάση πρωτεΐνη συνδέσεως ευαίσθητο στοιχείο 1 (YBX1) ήταν ο κλώνος εντός πλαισίου με τη χαμηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.209) και τον κλώνο A06579 με ομολογία αλληλουχίας με τις πρωτεΐνες (πεπτιδυλο-προλυλο cis /trans ισομεράσης) (pin4) ήταν η εντός πλαισίου κλώνος με την υψηλότερη τιμή AUC (AUC = 0,806).

για την διάκριση της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη και φυσιολογικό ορό, 110 κλώνων (6,63%), συμπεριλαμβανομένων των 24 κλώνων σε πλαίσιο θεωρήθηκαν ότι είναι κατατοπιστική. Μεταξύ αυτών, 39 κλώνοι έδειξαν τιμές AUC & gt? 0.7, συμπεριλαμβανομένων των 5-πλαισίου κλώνους και 71 κλώνους έδειξαν τιμές AUC & lt? 0.3, συμπεριλαμβανομένων 6 κλώνους εντός πλαισίου. Το εκτός-πλαισίου κλώνου C18596 έδειξε την χαμηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.144) για τη διάκριση της ΚΥΠ και φυσιολογικό ορό, δηλαδή, αυτός ο κλώνος έδειξε μια ισχυρότερη ανοσολογική απόκριση με ορούς ασθενών ΒΡΗ σε σύγκριση με φυσιολογικούς ορούς. Αυτός ο κλώνος ήταν επίσης κατατοπιστική για τη διάκριση των προστάτη και φυσιολογικό ορό (AUC = 0.236) και έδειξε ισχυρότερη ανοσολογική απόκριση σε ορούς ασθενών προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικούς ορούς. Ωστόσο, για τη διάκριση της ΚΥΠ ορούς και προστάτη ορούς ο κλώνος C18596 επιτευχθεί μόνο τιμή AUC των 0.528 και είχαν ως εκ τούτου λιγότερο πληροφοριακό περιεχόμενο για αυτό το διαχωρισμό. Το εκτός-πλαισίου κλώνου E13519 με ομολογία αλληλουχίας προς οξειδάσης (κυτόχρωμα c) συναρμολόγησης 1-σαν (OXA1L) έδειξε την υψηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.782) ειδικά για τη διάκριση του ΒΡΗ και φυσιολογικό ορό, δηλαδή, υψηλότερη ανοσογονικότητα σε φυσιολογικό ορό σε σχέση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη ορούς. Ωστόσο, αυτός ο κλώνος δεν είχε περιεχόμενο πληροφοριών για τον διαχωρισμό του προστάτη από φυσιολογικούς ορούς (AUC = 0,646) και για το διαχωρισμό της ΚΥΠ από προστάτη (AUC = 0.446). Για την διάκριση της ΚΥΠ και φυσιολογικούς ορούς ο κλώνος E19574 με ομολογία αλληλουχίας προς το ψευδογονιδίου παρόμοια με ουμπικουϊτίνης και πρόδρομος S27a ριβοσωμική πρωτεΐνη ταυτοποιήθηκε ως η πιο κατατοπιστική εντός πλαισίου κλώνου με AUC & lt? 0,3, δηλαδή, υψηλότερη ανοσολογική απόκριση σε ορούς ασθενών ΒΡΗ ό, τι σε φυσιολογικούς ορούς (AUC = 0,175). Η εντός πλαισίου κλώνος L16556 με ομολογία αλληλουχίας προς ριβοσωμικής πρωτεΐνης L15 (RPL15) αναγνωρίστηκε ως η πιο κατατοπιστική σε πλαίσιο κλώνος με AUC & gt? 0,7, δηλαδή, υψηλότερη ανοσογονικότητα σε φυσιολογικό ορό σε σύγκριση με ορούς ασθενών καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (AUC = 0.773).

Κατά τη σύγκριση του προστάτη και BPH ορούς, 99,3% (1646 κλώνους) των ανοσογονικών κλώνων έδειξε τιμές AUC μεταξύ 0,3 και 0,7, πράγμα που σημαίνει ότι είναι μη κατατοπιστική. Μόνο το 18 κατατοπιστική κλώνους (1,09%), συμπεριλαμβανομένων τεσσάρων κλώνων σε-πλαίσιο, παρέμεινε. Μεταξύ αυτών, 5 κλώνοι έδειξαν τιμές AUC & lt? 0,3 και 13 κλώνους έδειξαν τιμές AUC & gt? 0.7. Το out-of-πλαισίου κλώνος N22510 με ομολογία αλληλουχίας προς MARCKS-όπως 1 (MARCKSL1) έδειξε την υψηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.773) για τη διάκριση του προστάτη και BPH. Ο κλώνος A22594 έδειξε τη χαμηλότερη τιμή AUC (AUC = 0,266). Και οι δύο κλώνοι ήταν επίσης κατατοπιστική για τη διάκριση της ΚΥΠ και φυσιολογικούς ορούς, αλλά όχι για την PCA ορούς εναντίον φυσιολογικών ορών. Ο τελευταίος κλώνος A22594 ήταν πλαισίου εντός και με τον τρόπο αυτό ο κλώνος με τη χαμηλότερη AUC. Ο κλώνος C11549 με ομολογία αλληλουχίας προς 60S ριβοσωμική πρωτεΐνη L7 ήταν ο κλώνος εντός πλαισίου με την υψηλότερη τιμή AUC (AUC = 0.710).

Για την διάκριση των ορών από ασθενείς με διαφορετικές ασθένειες του ίδιου οργάνου, δηλαδή , του προστάτη ή καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, πήραμε επίσης την προεγχειρητική τιμή PSA υπόψη. Ως εκ τούτου, επιλέξαμε 36 PCa ορούς και 33 ΒΡΗ ορών με PSA ≥ 4,0 ng /ml από το αρχικό πληθυσμό της μελέτης. Η επικάλυψη με το προηγούμενο αναφέρεται ίδιας ηλικίας ομάδα του ορού ήταν 32 ΣΕΣΣ και 17 BPH ορούς. Η ακόλουθη ταξινόμηση αποκάλυψε 166 ενημερωτική κλώνους, συμπεριλαμβανομένων των 42 κλώνων σε πλαίσιο. Μεταξύ των ενημερωτικών κλώνοι, 81 κλώνοι έδειξαν τιμές AUC & lt? 0.3, συμπεριλαμβανομένων των 28 σε πλαίσιο κλώνους και 91 κλώνους έδειξαν τιμές AUC & gt? 0.7, συμπεριλαμβανομένων των 14 κλώνων σε πλαίσιο. Στην διάκριση PCa έναντι ΒΡΗ, το καθένα με PSA ≥ 4,0 ng /ml, οι κλώνοι N12603 εκτός-πλαισίου και N22510 έδειξε τα καλύτερα τιμές AUC του 0,174 και 0,838, αντίστοιχα. Ο κλώνος N12603 έχει ομολογία αλληλουχίας με χολινεργικό υποδοχέα νικοτινικού άλφα (CHRNA2) και του κλώνου N22510 να MARCKS-σαν 1 (MARCKSL1). Είναι ενδιαφέρον ότι, ο τελευταίος κλώνος N22510 ήταν επίσης ο κλώνος με την υψηλότερη τιμή AUC για τον διαχωρισμό PCa έναντι ΒΡΗ, ανεξάρτητα από το επίπεδο PSA.

Ο κλώνοι A18602 (ομολογία αλληλουχίας προς ριβοσωμική πρωτεΐνη S2 (RPS2)) και J04520 (ομολογία αλληλουχίας με το Υ κουτί δεσμευτική πρωτεΐνη 1 (YBX1)) ήταν οι κλώνοι σε πλαίσιο με τις καλύτερες τιμές AUC των 0.188 και 0.818, αντίστοιχα.

αποτελέσματα Ταξινόμηση

Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στα Υλικά και ενότητα Μέθοδοι, ταξινόμηση πραγματοποιήθηκε από Vector Machine γραμμική υποστήριξης (SVM). Εδώ, 20 επαναλήψεις ενός προτύπου επικύρωσης σταυρός 10-πλάσια διεξήχθησαν και σημαίνουν ευαισθησία, ειδικότητα, και η ακρίβεια για τέσσερα καθήκοντα κατάταξης υπολογίστηκε. Όλα τα αποτελέσματα ταξινόμησης λεπτομερώς στον Πίνακα 3. Τα καλύτερα αποτελέσματα ελήφθησαν για την ταξινόμηση ΒΡΗ έναντι κανονικών με ακρίβεια 86%. Η ταξινόμηση του προστάτη σε σχέση με την κανονική απέδωσε ακρίβεια 83,2%. Η χειρότερη ακρίβεια ταξινόμησης 70,3% λήφθηκε για τα αντίστοιχης ηλικίας δείγματα του προστάτη σε σχέση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. Όμως, λαμβάνοντας υπόψη το επίπεδο του PSA & gt? 4.0 σαφώς βελτιωμένα τα αποτελέσματα της κατάταξης. Εδώ έχουμε λάβει ακρίβεια 84,1%.

Η

Επικύρωση

Από τεχνολογιών υψηλής απόδοσης συχνά να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα βιοδείκτη, η επικύρωση από ανεξάρτητους τεχνολογία είναι απαραίτητη. Από την προηγούμενη ανάλυση πήραμε πέντε κλώνοι: D02594, E19574, L16556, A22594, και C11549. Αυτές αντιστοιχούν σε πρωτεΐνες RPS27A, RPL15, DDX54 και RPL7. Από την εκ νέου προσδιορισμό της αλληλουχίας έδειξε ότι ο κλώνος D02594 ήταν ένα υβρίδιο των δύο πρωτεϊνών YBX1 και PDP1, αφέθηκε έξω από τη στατιστική ανάλυση. Οι κλώνοι ελέγχθηκαν με μία ομάδα από 84 άτομα, μεταξύ των οποίων 27 ασθενείς ΣΕΣ, 30 ασθενείς ΚΥΠ και 27 ελέγχους. Μια ανάλυση της διακύμανσης έδειξε σημαντικά αποτελέσματα για DDX54 (p = 0.03) και RPL7 (p = 0.04). Ένας τρίτος κλώνος, RPL15, υπερέβη ελαφρά το όριο σημαντικότητας (p = 0,074).

Στα πειράματα διαλογής, DDX54 έδειξαν αυξημένη μέση οροδραστικότητας σε ορούς ελέγχου (44,9) και οι ασθενείς του προστάτη (44,6) σε σύγκριση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη ( 41.2) ασθενείς. Αυτή η υψηλότερη αντιδραστικότητα στους ελέγχους σε σύγκριση με ασθενείς ΒΡΗ έχει επιβεβαιωθεί από την ανάλυση επικύρωση (Σχήμα 2Α). Για τη δεύτερη πρωτεΐνη, RPL7, τα αρχικά αποτελέσματα αυξημένη αυτοαντισωμάτων σε ασθενείς ΒΡΗ (44,8) σε σύγκριση με τους ασθενείς PCa (39.0). Αυτή η τάση παρατηρήθηκε επίσης στα πειράματα επικύρωσης (Σχήμα 2Β). Αν και λίγο δεν είναι στατιστικά σημαντική, η συνολική τάση της τριτοβάθμιας οροδραστικότητας κατά RPL15 σε φυσιολογικά δείγματα σε σχέση με τα δύο του προστάτη και ασθενείς BPH επαναλήφθηκε με επιτυχία σε επικύρωση (Σχήμα 2C). Συσχετίζοντας την έκφραση της πρωτεΐνης με τα επίπεδα PSA δεν είχαμε παρατηρήθηκαν σημαντικά αποτελέσματα.

Box-Whisker οικόπεδα για αντιδραστικότητα εναντίον DDX54 (Α), RPL7 (Β) και RPL15 (C) με ορό από ασθενείς με καλοήθη προστάτη υπερπλασία (ΒΡΗ), καρκίνωμα προστάτη (PCA) και των υγιών μαρτύρων (Ν) σε πρωτεΐνη μακροσυστοιχία (αριστερά πάνελ) και την επικύρωση Luminex (δεξιά πάνελ). Για κάθε ομάδα, τα πλαίσια δείχνουν το 2. και 3. τεταρτημόριο των οροδραστικότητας, τα μουστάκια δείχνουν ελάχιστη και μέγιστη τιμή. Οι οριζόντιες μαύρες γραμμές δείχνουν τη μέση οροδραστικότητας στην ομάδα. Παρόμοιες τάσεις οροδραστικότητας υποδεικνύεται από αγκύλες.

Η

Συζήτηση

Υπάρχει κοινή συναίνεση ότι η διαλογή PSA έχει μειωθεί το ποσοστό θνησιμότητας των ασθενών προστάτη για χρόνια. Παρ ‘όλα αυτά, τον έλεγχο του PSA εξακολουθεί να είναι ένα αμφιλεγόμενο ζήτημα για αυτό συχνά οδηγεί σε λανθασμένα αποτελέσματα, υπερδιάγνωσης, και ψευδή θεραπεία πηγαίνει μαζί με το υψηλό κόστος. [24] Ο προσδιορισμός της περαιτέρω βιοδεικτών, π.χ., PCA3, GSTP1, AMACR, ή miRNAs, αποκαλύπτει η ευκαιρία να βελτιώσουν την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη. [25] Επιπλέον, νέα βιοδείκτες μπορεί να ενισχύσει την παρακολούθηση και να δώσει μια πιο λεπτομερή εικόνα στην πρόοδο και την ανάπτυξη του καρκίνου.

Στη μελέτη μας, σας παρουσιάζουμε ένα συνδυασμό των αυτοαντισωμάτων υπογραφής με το επίπεδο PSA. Θα προβληθεί ένα σύνολο 1.827 κλώνων cDNA με 49 προστάτη ορούς, 70 BPH ορούς, και 28 ορούς από υγιή άτομα από την ανάλυση πρωτεϊνών μακροσυστοιχία. Επιπλέον, συγκρίναμε seroactivity των ασθενών προστάτη, ασθενείς ΚΥΠ και ελέγχους από τον υπολογισμό των τιμών AUC. Οι τιμές AUC & lt? 0.3 και & gt? 0.7 θεωρήθηκαν ως κατατοπιστική. Συνολικά, εντοπίσαμε 199 ενημερωτική κλώνους (συμπεριλαμβανομένων των 52-καρέ-κλώνους) για την ταξινόμηση των προστάτη σε σχέση με την κανονική, 110 ενημερωτικό κλώνους (συμπεριλαμβανομένων των 24-καρέ-κλώνους) για την κατάταξη της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη σε σχέση με την κανονική, και μόνο το 18 κατατοπιστική κλώνους (συμπεριλαμβανομένων των 4-καρέ-κλώνους) για την ταξινόμηση των προστάτη σε σχέση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. Λαμβάνοντας υπόψη μόνο προστάτη και BPH ορούς με τα επίπεδα του PSA & gt? 4,0 ng /ml εντοπίσαμε 166 κλώνους (συμπεριλαμβανομένων των 42-καρέ-κλώνους) για την ταξινόμηση των προστάτη σε σχέση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη.

Δεν ήταν σε θέση να διαχωρίσει οροί από ασθενείς του προστάτη και των ελέγχων με ακρίβεια 83,2%, ένα ευαισθησία 70,2% και ειδικότητα 91,5%. ΚΥΠ ορών και φυσιολογικούς ορούς διαχωρίστηκαν με ακρίβεια 86,0%, ευαισθησία 73,9% και ειδικότητα 93,6%. Η χειρότερη ακρίβεια ταξινόμησης με 70,3% λήφθηκε για την PCA σε σχέση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. Είναι ενδιαφέρον, το αποτέλεσμα ταξινόμησης βελτιώνει αφού λάβει το επίπεδο του PSA & gt? 4,0 ng /ml υπόψη. Εδώ, έχουμε διαχωρίζονται προστάτη ορούς και BPH ορούς με ακρίβεια 84,1%, ευαισθησία 84,5% και ειδικότητα 83,8%. Αυτό έχει σημασία επειδή αυτή η μέθοδος επιτρέπει τον διαχωρισμό κακοήθους νόσου από καλοήθη νόσο.

Τα αποτελέσματά μας βασίζονται σε συγκεκριμένες αντιδράσεις του ανοσοποιητικού συστήματος. Εκτός PSA και άλλοι βιοδείκτες σχετίζονται με τον καρκίνο αντιγόνα μπορεί να είναι πολύ ειδικό δείκτη και κατάλληλο ως διαγνωστικό εργαλείο. Το ανοσοποιητικό σύστημα αναγνωρίζει τα καρκινικά κύτταρα με την παραγωγή ειδικών αυτοαντισωμάτων έναντι αυτών σχετίζονται με τον καρκίνο αντιγόνα. Τα αυτοαντισώματα μπορεί εύκολα να ανιχνευθεί σε patients`sera. Επιπλέον, έχουν μια μακρά ημίσεια ζωή και είναι ανιχνεύσιμα με χαμηλό κόστος. [26] Τα ταυτοποιημένα αντιγόνα ανιχνεύονται στον ορό ασθενών προστάτη και ασθενείς ΒΡΗ μπορεί να χρησιμεύσει ως βιοδείκτες ή ως στόχοι για τη μελλοντική θεραπεία για ασθενείς με διαφορετικές ασθένειες του προστάτη. Τα αντιγόνα που βρήκαμε μπορεί να παίζει ένα λειτουργικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη. Συνολικά, βρήκαμε 12 φάγων-πεπτιδίου κλώνους με ομολογία προς γνωστές πρωτεΐνες. Κλώνους με ομολογία προς CKB, DDAH1, YBX1, pin4, OXA1L, ψευδογονίδιο παρόμοια με ουβικιτίνης και πρόδρομος S27a ριβοσωμικής πρωτεΐνης, και RPL15 ήταν κατατοπιστική για τη διάκριση των φυσιολογικών ορών και προστάτη και BPH, αντίστοιχα. Κλώνους με ομολογία με 60S ριβοσωμική πρωτεΐνη L7, και MARCKS1 ήταν κατατοπιστική για τη διάκριση του προστάτη ορών και BPH ορούς. Κλώνους με ομολογία προς CHRNA2, RPS2, YBX1 και MARCKS1 ήταν κατατοπιστική για τη διάκριση του προστάτη ορών και BPH ορούς που λαμβάνονται στο επίπεδο PSA υπόψη. Είναι ενδιαφέρον ότι, ο φάγος-πεπτιδίου κλώνος με αλληλουχία ομόλογο προς MARCKSL1 ήταν πολύ κατατοπιστική για την ταξινόμηση των προστάτη έναντι ΒΡΗ με και χωρίς να ληφθεί υπόψη το επίπεδο PSA. MARCKSL1 είναι ένα μέλος της οικογένειας MARCKS, μια ομάδα πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην καλμοδουλίνη (CaM) οδό σηματοδότησης, η πρωτεϊνική κινάση C (PKC) μονοπάτι σηματοδότησης, και στη ρύθμιση του κυτταρικού σκελετού ακτίνης. [27] MARCKS μπορεί να συσχετιστεί με