Αφηρημένο

Ιστορικό

Mycoplasma hyorhinis

(

M.hyorhinis , M.hy

) σχετίζεται με την ανάπτυξη των γαστρικών και του προστάτη. Η inflammasome NLRP3, ένα πρωτεϊνικό σύμπλοκο που ελέγχει την ωρίμανση των σημαντικών προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες ιντερλευκίνη (IL) -1β και IL-18, εμπλέκεται επίσης στην ογκογένεση και τη μετάσταση διαφόρων καρκίνων.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

για να διευκρινιστεί κατά πόσον

M.hy

προώθησε την ανάπτυξη του όγκου μέσω inflammasome ενεργοποίησης, αναλύσαμε μονοκύτταρα για την IL-1β και IL-18 παραγωγής κατά την

M.hy

πρόκληση. Όταν εκτίθεται σε

M.hy

, ανθρώπινα μονοκύτταρα παρουσίασε ταχεία και ισχυρή IL-1β και την έκκριση IL-18. Εντοπίσαμε περαιτέρω ότι η πρωτεΐνη της μεμβράνης των λιπιδίων που σχετίζονται με (LAMP) από το

M.hy

ήταν υπεύθυνος για την IL-1β επαγωγής. Εφαρμόζοντας ανταγωνιστικοί αναστολείς, γονίδιο ειδικό shRNA και γονίδιο στοχευμένες ποντίκια, διαπιστώσαμε ότι

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β ήταν NLRP3 εξαρτώμενη από

in vitro

και

in vivo

. δραστηριότητα καθεψίνης Β, Κ

+ εκροής, Ca

2 + εισροή και την παραγωγή ROS ήταν όλα που απαιτούνται για την ενεργοποίηση inflammasome NLRP3 από

M.hy

. Είναι σημαντικό, είναι η IL-1β αλλά όχι IL-18 παράγεται από τα μακροφάγα διεγείρονται με

M.hy

προωθείται γαστρικού μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και την εισβολή.

Συμπεράσματα

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η ενεργοποίηση του inflammasome NLRP3 από

M.hy

μπορεί να σχετίζεται με την προώθηση του γαστρικού μετάστασης του καρκίνου, και αντι-

M.hy

θεραπεία ή τον περιορισμό της σηματοδότησης NLRP3 θα μπορούσε να είναι αποτελεσματική προσέγγιση για τον έλεγχο του γαστρικού καρκίνου προόδου

Παράθεση:. Xu Y, Li H, Chen W, Yao Χ, Xing Υ, Wang Χ, et al. (2013)

Mycoplasma hyorhinis

Ενεργοποιεί το NLRP3 Inflammasome και προωθεί τη μετανάστευση και την διείσδυση των κυττάρων του καρκίνου του στομάχου. PLoS ONE 8 (11): e77955. doi: 10.1371 /journal.pone.0077955

Επιμέλεια: Suresh Yenugu, Πανεπιστήμιο της Hyderabad, Ινδία

Ελήφθη: 5 Ιούν, 2013? Αποδεκτές: 6 Σεπ 2013? Δημοσιεύθηκε: 6 Νοεμβρίου του 2013

Copyright: © 2013 Xu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από 100 Talent πρόγραμμα της κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών, Φυσικών Επιστημών Ίδρυμα της Κίνας (91029707, 31170868), Shanghai Φυσικών Επιστημών Ίδρυμα (11ZR1442600), Ίδρυμα Novo Nordisk-CAS Έρευνας, SA-SIBS Πρόγραμμα υποτροφιών, καθώς και επιχορηγήσεις από το Εθνικό Βασικά Προγράμματα για Λοιμωδών Νοσημάτων (2012ZX10002007-003). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Μυκοπλάσματα είναι πλειομορφικά, τοίχος δωρεάν, προκαρυωτικοί οργανισμοί που βρίσκονται είτε επί των ευκαρυωτικών κυτταρικών μεμβρανών ή στο εσωτερικό των κυττάρων, και αυτοί είναι τα μικρότερα οργανισμούς ικανούς αυτο αναδιπλασιασμό [1]. Μέχρι σήμερα, έχουν τουλάχιστον 16 είδη μυκοπλάσματος έχουν απομονωθεί από ανθρώπους [2].

Mycoplasma hyorhinis

(

M.hy

) θεωρήθηκε μη παθογόνος για τον άνθρωπο, δεδομένου ότι συνήθως μολύνει χοίρους που οδηγούν σε ασθένειες της αναπνευστικής οδού και φλεγμονή του θώρακα και των αρθρώσεων [3], [4] . Ωστόσο, συσσωρεύοντας τα στοιχεία δείχνουν ότι

M.hy

λοίμωξης σε ανθρώπους οδηγεί σε κλινικά αποτελέσματα.

M.hy

βρέθηκε στο 56% των γαστρικού καρκινώματος, 55% καρκινώματος του κόλον και 52,6% των βιοψιών πνευμονικού καρκινώματος [5]. Επιπλέον, 36% των ανδρών με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) και 52% των ανδρών με καρκίνο του προστάτη είναι

M.hy

ορο-θετικός. Αυτά τα κλινικά ευρήματα υποδηλώνουν μια πιθανή σύνδεση μεταξύ

M.hy

έκθεση με γαστρικό, του παχέως εντέρου, του πνεύμονα και του προστάτη [5], [6].

Μετά μικροβιακή μόλυνση, πρότυπο ξενιστή υποδοχείς αναγνώρισης ( PRRs) όπως TLRs ανιχνεύει τις παθογόνα και να προκαλέσει τη σύνθεση προ-φλεγμονωδών κυτοκινών όπως προ-IL-1β και pro-IL-18 μέσω ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ. Παράλληλα, μια άλλη ομάδα PRRs συμπεριλαμβανομένης NLRP3 προσλάβει την πρωτεΐνη προσαρμογέα ASC και να οδηγήσει στην ενεργοποίηση της κασπάσης-1, το οποίο είναι ένα ενεργό πρωτεάση η οποία διασπά το πρόδρομο μορφή κυτοκινών συμπεριλαμβανομένων προ-IL-1β και pro-IL-18 σε ώριμα, εκκρινόμενη μορφή [7]. Παθογόνα ή προκλητική παράγοντες προκαλούν εκροή καλίου, βλάβες στα μιτοχόνδρια, απελευθέρωση DNA των μιτοχονδρίων, η παραγωγή ROS, ενδοκυτταρική αύξηση ασβεστίου ή κυτταρική κυκλική μείωση ΑΜΡ στην έμφυτη κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος, τα οποία είναι όλα εμπλέκονται στην κασπάσης-1 ενεργοποίηση [8], [9], [10 ], [11], [12], [13]. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, η NLRP3, ASC και προ-κασπάσης-1 αποτελούν μια μοριακή πλατφόρμα που ονομάζεται inflammasome. Μέχρι τώρα, ένας αριθμός inflammasomes έχουν ταυτοποιηθεί, από αυτά, το inflammasome NLRP3 έχει βρεθεί συνδέεται με την ανάπτυξη του όγκου [14], [15], αν και υπάρχει διαμάχη από διαφορετικά μοντέλα [16], [17]. Παρ ‘όλα αυτά, η IL-1β αναφέρθηκε για την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου των κυττάρων και τη μετάσταση με επαγωγή αρκετές προ-μεταστατικό γονιδίων όπως μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας και των ενδοθηλιακών μορίων προσκόλλησης, όπως επίσης και ο ΤΟΡ-β, χημειοκίνες και αυξητικούς παράγοντες [18]. Σε έναν πληθυσμό Κορέας, ο συνδυασμός του αυξημένου επιπέδου IL-1β βλεννογόνου και ομοζυγωτία για IL-1β -31T πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP) είναι και οι δύο σχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του στομάχου [18]. Επιπλέον, Tu et al. Βρέθηκε ότι το στομάχι-ειδική έκφραση της ανθρώπινης IL-1β σε διαγονιδιακά ποντίκια οδήγησε σε αυθόρμητη γαστρική φλεγμονή και τον καρκίνο [19], υποδηλώνοντας περαιτέρω ότι η IL-1β μπορεί να προάγει την ανθρώπινη γαστρική καρκινογένεση. Σε αντίθεση, η IL-18 ενισχύει τη δράση των κυττάρων ΝΚ, μειώνει την ογκογένεση, προκαλεί απόπτωση και αναστέλλει την αγγειογένεση σε κύτταρα όγκου για να εξασκούν τα αποτελέσματα κατά του όγκου [20], [21]. Επιπλέον, μια ακατάλληλη παραγωγή της IL-18 βρέθηκε να συνεισφέρει στην παθογένεση καρκίνων και μπορεί να επηρεάσει την κλινική έκβαση των ασθενών [22]. IL-18 αναφέρθηκε ότι διεγείρει μήτρα μεταλλοπρωτεάσης-9 παραγωγή, με αποτέλεσμα την αύξηση της μετανάστευσης και της εισβολής σε στεφανιαία αρτηρία λείων μυϊκών κυττάρων και HL-60 κυττάρων μυελοειδούς λευχαιμίας [23], [24]. Αναφέρθηκε επίσης ότι η IL-18 επίπεδα ορού σε γαστρικό καρκίνο ομάδα ασθενών ήταν σημαντικά υψηλότερα από ότι στην ομάδα γαστρικό έλκος ασθενών [25] και η IL-18 μπορεί να αυξήσει τη μετάσταση και το ανοσοποιητικό διαφυγή του καρκίνου του στομάχου μέσω του κάτω ρύθμιση CD70 και διατήρηση του CD44 σε ανθρώπινα γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή NCI-Ν87 και SNU 16 [26]. Είναι επίσης ένας κρίσιμος μεσολαβητής του VEGF-ενισχυμένη μετανάστευση σε ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου SNU-601 [27]. Τα παραπάνω ευρήματα υποδεικνύουν ότι

Mycoplasma hyorhinis

μπορεί να προωθήσει τη μετανάστευση και την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων με την ενεργοποίηση inflammasome.

Μέχρι σήμερα, ένα ευρύ φάσμα μικροβίων, συμπεριλαμβανομένων των ιών, βακτηρίων, μυκήτων και πρωτόζωα έχουν εντοπίστηκαν να ενεργοποιήσετε την NLRP3 inflammasome [28]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι

Mycoplasma pneumoniae

ήταν επίσης σε θέση να επάγει την παραγωγή IL-1β σε ανθρώπινα κύτταρα [29]. Ωστόσο, αν

M.hy

, η οποία είναι ένας σημαντικός παράγοντας σε γαστρικά ανάπτυξη του καρκίνου, όπως αναφέρεται ανωτέρω [5], [30], [31], ενεργοποιεί το inflammasome NLRP3 και εάν αυτή η ενεργοποίηση συμβάλλει στο γαστρικό καρκίνο ανάπτυξη παραμένουν άγνωστα. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι

M.hy

ενεργοποιείται IL-1β έκκρισης σε ένα NLRP3 inflammasome-εξαρτώμενο τρόπο, και το προκύπτον IL-1β επαγόμενη μετανάστευση και εισβολή του γαστρικού καρκίνου κυττάρων.

αποτελέσματα

M.hy

εναύσματα IL-1β και IL-18 Παραγωγή σε ΤΗΡ-1 κύτταρα

Για να διαπιστώσετε εάν

M.hy

προκαλεί IL -1β παραγωγή από έμφυτη ανοσοκύτταρα, παρακολουθήσαμε ώριμης IL-1β επίπεδα σε ανθρώπινη μονοκυτταρική σειρά κυττάρων ΤΗΡ-1 κύτταρα προκλήθηκαν με διαφορετικές ποσότητες

M.hy

. Σε αυτό το πείραμα, μια ισχυρή επαγωγή της IL-1β με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, παρατηρήθηκε (Σχήμα 1Α). Στη συνέχεια, μετρήθηκε η pro-IL-1β mRNA επίπεδα στα κύτταρα και ώριμης IL-1β τα επίπεδα πρωτεΐνης στα υπερκείμενα καλλιέργειας σε διάφορα χρονικά σημεία μετά

M.hy

πρόκληση. Παρατηρήθηκε ότι τα επίπεδα της IL-1β mRNA κορυφώθηκε 3 ώρες μετά την πρόκληση (Σχήμα 1Β) και ώριμης IL-1β (Σχήμα 1 C) και IL-18 (Σχήμα 1 D) τα επίπεδα πρωτεΐνης κορυφώθηκε σε 12 ώρες μετά την πρόκληση. Επιπλέον, ΤΗΡ-1 που προέρχεται μακροφάγα εμφάνισαν επίσης ισχυρή έκκριση της IL-1β, IL-18, καθώς και άλλων φλεγμονωδών κυτοκινών όπως IL-6 και IL-8 (Σχήμα 1 Ε, Εικόνα S1). Για να επιβεβαιώσετε τα παραπάνω ευρήματα σε ΤΗΡ-1 κυτταρική σειρά, εξετάσαμε την IL-1β παραγωγή σε πρωτογενή ανθρώπινα μονοκύτταρα από υγιείς δότες που προκλήθηκαν με

M.hy

, όπου η IL-1β επίσης έντονα επάγεται (Σχήμα 1 F) . Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι το

M.hy

ενεργοποιείται ισχυρή IL-1β και IL-18 έκκριση από ανθρώπινα μυελοειδή κύτταρα.

Α, 5 × 10

4 ΤΗΡ-1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με

M.hy

σε διαφορετικές δόσεις, 12 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. BD, 2 × 10

5 ΤΗΡ-1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με

M.hy

σε συγκέντρωση 6.7 × 10

7 CCU ml, κύτταρα /και τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν σε διάφορα χρονικά σημεία για IL-1β mRNA (Β) και IL-1β (C) καθώς επίσης και IL-18 πρωτεΐνη (Δ) την ανίχνευση σε πραγματικό χρόνο-PCR και ELISA όπως υποδεικνύεται. Ε-Ρ, 5 × 10

4 που προκαλείται από ΡΜΑ μακροφάγα (Ε) και ανθρώπινα πρωτογενή μονοκύτταρα (F) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με

M.hy

, 12 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για κυτοκίνες ELlSA. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± την τυπική απόκλιση (SD) τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *** Αντιπροσωπεύει P & lt? 0.001, ** αντιπροσωπεύει P & lt? 0,01 και * αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

LAMP προέρχονται από

M.hy

είναι υπεύθυνος για την IL-1β επαγωγή μέσω TLR2

στη συνέχεια ερευνήσαμε αν αντιγραφή του

M.hy

απαιτήθηκε για την IL-1β παραγωγή σε μονοκύτταρα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α,

M

.hy

αδρανοποιούνται με θέρμανση ή υπεριώδη (UV) θεραπεία επαγόμενης όσο έκκριση IL-1β από κύτταρα ΤΗΡ-1 ως ζωντανό

M .hy

. Αυτό έδειξε ότι ορισμένα θερμική και UV- ανθεκτικό συστατικό του

M.hy

ήταν υπεύθυνη για την επαγωγή της IL-1β έκκρισης. Lipid-πρωτεΐνη που συνδέεται με μεμβράνη (LAMP) εκφράζεται άφθονα επί της επιφανείας του

M.hy

[32], και την προηγούμενη μελέτη διαπίστωσε ότι λιποπρωτεΐνες μεμβράνη από άλλα είδη μυκοπλάσματος προκαλούμενη IL-1β έκκρισης [33]. Έτσι σκέφτηκαν ότι

M.hy

προέρχεται LAMP (MLAMP) μπορεί να είναι υπεύθυνη για την IL-1β επαγωγή σε κύτταρα ΤΗΡ-1. Εμείς στη συνέχεια εκχυλίζεται LAMP από

M.hy

(Σχήμα 2Β) και δοκίμασαν την ικανότητα του να επάγει MLAMP έκκριση IL-1β σε κύτταρα ΤΗΡ-1. Βρήκαμε ότι MLAMP επαγόμενη σαφώς έκκριση της IL-1β με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, ενώ η υδατική φάση του

M.hy

εκχυλίσματος δεν ήταν σε θέση να το κάνουν (Σχήμα 2C). Για να αποκλειστεί η πιθανή RNA και /ή μόλυνση DNA σε MLAMP, υποβάλλαμε σε αγωγή τους MLAPMs με ΚΝάση και ϋΝάση και διαπίστωσε ότι MLAMP ήταν το κύριο συστατικό για την επαγωγή της IL-1β (Σχήμα S2).

Α, 5 × 10

4 κύτταρα ΤΗΡ-1 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ακτινοβολία θερμότητας ή υπεριώδους αδρανοποιηθεί

M.hy

για 6 ώρες και τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. Β, ολική πρωτεΐνη του

M.hy

, MLAMP εξάγεται από

M.hy

και η υδατική πρωτεΐνη ανιχνεύθηκαν με SDS-PAGE και χρώση αργύρου. C, 5 × 10

4 κύτταρα ΤΗΡ-1 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με MLAMP σε διαφορετικές συγκεντρώσεις και υδατικό, 6 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. D, 5 × 10

4 ΤΗΡ-1 κύτταρα προεπωάστηκαν με τις υποδεικνυόμενες ποσότητες mAb Τ2.5 ή CONT2 (μg /ml) για 0,5 ώρα και προκλήθηκαν με TLR2 συνδέτη P3CSK4 (θετικός έλεγχος), TLR4 συνδέτη LPS (αρνητικός έλεγχος) και

M.hy

σε συγκέντρωση 6.7 × 10

7 CCU /ml, στη συνέχεια επί 6 ώρες, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± την τυπική απόκλιση τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *** Αντιπροσωπεύει P & lt? 0.001, ** αντιπροσωπεύει P & lt? 0,01 και * αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

Έχει αναφερθεί ότι MLAMP δραστηριοποιείται κυρίως NF-κΒ μέσω TLR2 και TLR6 [34], [35]. Ως εκ τούτου, εφαρμόζεται για πρώτη φορά μια Τ2.5 εξουδετέρωσης αντισώματος TLR2 να μπλοκάρουν το σήμα TLR2, με CONT2 χρησιμεύει ως ισοτυπικός έλεγχος [36]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Δ, Τ2.5 μπλοκάρει πλήρως την έκκριση IL-1β διεγείρεται από TLR2 αγωνιστής P3CSK4 αλλά όχι από τον συνδέτη LPS TLR4. Σημαντικά, η IL-1β έκκρισης από

M.hy

μολυσμένα κύτταρα ήταν έντονα μειωμένη κατά Τ2.5, υποδεικνύοντας ότι TLR2 εμπλέκεται σε MLAMP ενεργοποιείται IL-1β έκκρισης σε ανθρώπινα μονοκύτταρα. Είναι ενδιαφέρον, IL-1β έκκριση από

M.hy

μολυσμένα κύτταρα δεν ήταν εντελώς αποκλεισμένη από Τ2.5 (Σχήμα 2D), η οποία πρότεινε ότι TLR2-ανεξάρτητο μονοπάτι σηματοδότησης συμμετείχε επίσης σε MLAMP προκάλεσε IL-1β έκκρισης, η οποία αξίζει περαιτέρω έρευνα στο μέλλον.

M.hy

Προκαλεί IL-1β έκκριση μέσω της ενεργοποίησης του NLRP3 Inflammasome

Για να ελέγξετε αν

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β μέσω inflammasome ενεργοποίησης, πρέπει πρώτα να χρησιμοποιηθούν LPS γεμάτοι ΤΗΡ-1 που προέρχεται μακροφάγα για να ελέγξετε εάν

M.hy

να ενεργοποιήσετε inflammasome όπως ΑΤΡ ή MSU, τα οποία είναι γνωστά ενεργοποιητές inflammasome. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α,

M

.hy

ήταν σε θέση να επάγει IL-1β απελευθέρωση στα πριμοδοτημένα κύτταρα. Στη συνέχεια εξετάστηκε η διάσπαση της κασπάσης-1 και ολιγομερισμού του ASC, δύο σημαντικές ιθύνοντες για την ενεργοποίηση inflammasome. Βρήκαμε ότι

M.hy

προώθησε τη διάσπαση της κασπάσης-1 και ολιγομερισμού του ASC (Εικόνα 3Β), δείχνοντας μια άμεση ενεργοποίηση των inflammasome από

M.hy.

Η

Α, 1 × 10

5 που προκαλείται από ΡΜΑ μακροφάγα ευαισθητοποιήθηκαν με 50 ng /ml LPS, στη συνέχεια κατεργάζεται με

M.hy

, LPS, MSU ή ATP για 5 ώρες, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. Β, Η διάσπαση της κασπάσης-1 και ολιγομερισμό ASC στις inflammasome εμπλουτισμένα και εγκάρσια συνδεδεμένα προϊόντα λύσεως των κυττάρων ΤΗΡ 1 που προέρχεται από τα μακροφάγα που έλαβαν θεραπεία με

M.hy

, LPS και MSU για 6 ώρες. Μονομερή, διμερή και ολιγομερή του ASC είχαν δηλώσει κατά. C, 5 × 10

4 ΤΗΡ-1 υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με κασπάση-1 αναστολέα AC-ΥνΑϋ-CHO και στη συνέχεια προκλήθηκαν με

M.hy

σε συγκέντρωση 6.7 × 10

7 CCU /ml, 12 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. D, επιτυχής σίγηση (knock-down, KD) του ASC και κασπάσης-1 επιβεβαιώθηκε με κηλίδωση Western. Ε, 5 × 10

4 ΤΗΡ-1 αγωνίζομαι, τα κύτταρα της κασπάσης-1 KD και τα κύτταρα ASC KD υποβλήθηκαν σε θεραπεία με

M.hy

σε συγκέντρωση 6.7 × 10

7 CCU /ml, 12 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. F, 5 × 10

4 κύτταρα ΤΗΡ-1 υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με αναστολέα inflammasome NLRP3 γλυβενκλαμίδιο και στη συνέχεια προκλήθηκαν με

M.hy

, 12 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. G, Η επιτυχής αποσιώπηση των NLRP3 πιστοποιήθηκε με κηλίδωση Western. Η, 5 × 10

4 ΤΗΡ-1 αγωνίζομαι και NLRP3 KD κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με

M.hy

σε συγκέντρωση 6.7 × 10

7 CCU /ml, 12 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέγονται για IL-1β ELISA. Ι, Ανοσοκηλίδωση ανάλυση των προ-κασπάσης-1 και ώριμη (P10) μορφή της κασπάσης-1 και ώριμης IL-1β (P17) σε υπερκείμενα και pro-IL-1β (Ρ31) και β-ακτίνης σε κυτταρικά εκχυλίσματα από ΤΗΡ-1 αγωνίζομαι και κασπάσης-1 KD, ASC KD και NLRP3 KD κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με

M.hy

για 6 ώρες. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι οι μέσες ± SD από έναν εκπρόσωπο από τα τρία ανεξάρτητα πειράματα. *** Αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.001 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

Επίσης, ελέγξαμε εάν

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β εξαρτάται από ορισμένα στοιχεία inflammasome. Πρώτον, βρήκαμε ότι το ειδικό κασπάσης-1 αναστολέα AC-ΥνΑϋ-ΟΗΟ μειωμένη έκκριση IL-1β σε κύτταρα ΤΗΡ-1 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 3C). Στη συνέχεια, όταν συγκεκριμένα shRNA χρησιμοποιήθηκε για σίγαση της έκφρασης της κασπάσης-1 και ASC (Σχήμα 3D), την παραγωγή IL-1β ήταν έντονα μειωμένη κατά

M.hy

πρόκληση (Σχήμα 3Ε), υποδεικνύοντας ότι

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β εξαρτιόταν από την κασπάση-1 και ASC.

στη συνέχεια, ελέγξαμε εάν NLRP3 ήταν απαραίτητη για

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β. Πρώτον, βρήκαμε ότι ο αναστολέας NLRP3 γλυβενκλαμίδιο καταστέλλεται

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 3F) [37]. Όταν συγκεκριμένες shRNA χρησιμοποιήθηκε για να φιμώσουν την έκφραση του NLRP3 (Σχήμα 3G), η παραγωγή IL-1β έντονα μειώθηκε κατά

M.hy

πρόκληση (Σχήμα 3Η), υποδεικνύοντας ότι

M.hy

επαγόμενη έκκριση IL-1β εξαρτιόταν από NLRP3. Αυτό επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από ανοσοστύπωση, στην οποία η παραγωγή της κασπάσης-1 ενεργοποίηση και IL-1β ήταν τόσο NLRP3 εξαρτώμενο (Σχήμα 3θ). Επιπλέον, βρήκαμε ακόμη ότι MLAMP ήταν το κύριο συστατικό υπεύθυνο για την ενεργοποίηση inflammasome NLRP3 από

M.hy

(Σχήμα S2C). Επιπλέον, AIM2 inflammasome αναφέρθηκε να ενεργοποιηθεί από το DNA [38], και βρήκαμε ότι

M.hy

DNA που προκαλείται από IL-1β έκκρισης μέσω AIM2 inflammasome (Σχήμα S3A). Είναι ενδιαφέρον,

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β εξαρτάται κυρίως από NLRP3, ενώ AIM2 ήταν μόνο εν μέρει συμμετέχουν (Σχήμα S3A). Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα σαφώς έδειξαν ότι το

M.hy

επαγόμενη έκκριση της IL-1β μέσω της ενεργοποίησης του inflammasome NLRP3 σε ανθρώπινα μονοκύτταρα.

μηχανισμών που διέπουν

M.hy

ενεργοποιείται NLRP3 Inflammasome Ενεργοποίηση

η ενεργοποίηση των NLRP3 inflammasome από μια ποικιλία ερεθισμάτων εξαρτάται από τη δραστηριότητα Καθεψίνης Β, Κ

+ εκροής, εισροή ασβεστίου ή /και την παραγωγή των δραστικών μορφών οξυγόνου (ROS) [11], [ ,,,0],12], [13], [39]. Να διερευνήσει τους μηχανισμούς που διέπουν την IL-1β απελευθέρωση σε απάντηση

M.hy

πρόκληση, εφαρμόστηκε για πρώτη φορά Καθεψίνη Β-ειδικός αναστολέας CA-074 Εγώ και παρατηρείται μια σημαντική εξασθένηση της έκκρισης IL-1β μετά από

Μ .hy

πρόκληση. Σε μια συγκέντρωση 100 μΜ, CA-074 Me εντελώς αποκλεισμένη IL-1β απελευθέρωση (Σχήμα 4Α). Αυτή η αναστολή δεν οφειλόταν σε οποιαδήποτε τοξική επίδραση στα κύτταρα ως IL-8 έκκριση επηρεάζεται από την παρούσα αναστολέα ήταν πολύ ήπια (Σχήμα 4Ε). Σημαντικά, όταν τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με καθεψίνη Κ αναστολέα Ι, η μείωση της έκκρισης της IL-1β δεν ήταν εμφανής σε όλα τα (Σχήμα 4Β και 4F), γεγονός που υποδηλώνει ότι η δράση της καθεψίνης Β που εμπλέκονται ειδικά στην ενεργοποίηση inflammasome NLRP3 κατά τη διάρκεια

M .hy

πρόκληση. Επιπλέον, όταν μπλοκάρει K

+ εκροής με την αύξηση της εξωκυττάριας K

+ συγκέντρωση, IL-1β έκκρισης από κύτταρα ΤΗΡ-1 μετά από

M.hy

πρόκληση ήταν σημαντικά μειωμένη σε ένα δοσο εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 4C). Πάλι, δεν υπήρξε καμία τοξική επίδραση από KCL ως παραγωγή IL-8 από τα ίδια κύτταρα ήταν φυσιολογική (Εικόνα 4G). Για να καταλάβουμε αν εισροή ασβεστίου βοήθησε inflammasome ενεργοποίηση, προσθέσαμε διαφορετικές δόσεις του EGTA στο μέσο κυτταρικής καλλιέργειας και διαπίστωσε ότι η θεραπεία EGTA μπλοκαριστεί

M.hy

επαγόμενη IL-1β έκκρισης με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, και καμία τοξική επίδραση από EGTA παρατηρήθηκε όπως αποδεικνύεται από παραγωγή IL-8 (Σχήμα 4D και 4Η).

5 × 10

4 ΤΗΡ-1 υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με διαφορετικές δόσεις του αναστολέα Καθεψίνης Β CA-074 Me (Α, Ε) ή καθεψίνη Κ Αναστολέας Ι (Β, F), KCL (C, G) ή EGTA (d, Η), στη συνέχεια προκλήθηκαν με

M.hy

σε συγκέντρωση 6.7 × 10

7 CCU /ml, 6 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-8 και IL-1β ELISA συγχρόνως. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι οι μέσες ± SD από έναν εκπρόσωπο από τα τρία ανεξάρτητα πειράματα. *** Αντιπροσωπεύει P & lt? 0.001, ** αντιπροσωπεύει P & lt? 0,01 και * αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

Επίσης, ελέγξαμε εάν

M.hy

προκαλούμενη πρόκληση παραγωγή ROS σε κύτταρα ΤΗΡ-1. Για αυτή τη δοκιμασία, κύτταρα ΤΗΡ-1 φορτώθηκαν αρχικά με το οξειδοαναγωγικό ευαίσθητο φθοροφόρο DCFDA και στη συνέχεια προκλήθηκαν με

M.hy

, ΑΤΡ συμπεριλήφθηκε ως θετικός έλεγχος. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, 16,9% CM-H2DCFDA θετικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν 30 λεπτά μετά

M.hy

θεραπείας σε σύγκριση με 1,6% σε μη επεξεργασμένα κύτταρα. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι ROS μπορεί να συμβάλει στην ενεργοποίηση inflammasome NLRP3 σε απάντηση

M.hy

πρόκληση. Για να επαληθεύσετε αυτή τη δυνατότητα, θα προεπεξεργασία των κυττάρων ΤΗΡ-1 με διφαινυλοϊωδώνιο αναστολέα ROS (DPI) για 30 λεπτά, και στη συνέχεια αμφισβήτησε τα κύτταρα με

M.hy

πριν από τη μέτρηση της IL-1β παραγωγή έξι ώρες αργότερα. Όπως ήταν αναμενόμενο, DPI μειωθεί δραματικά

M.hy

επαγόμενη IL-1β απελευθέρωση (Σχήμα 5Β). Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι ο αναστολέας ROS όπως DPI κατήργησε την αποδέσμευση της IL-1β σε μακροφάγα ποντικού με αναστολή γονιδιακής έκφρασης NLRP3 [40]. Ως εκ τούτου, θα παρακολουθούνται επίσης το επίπεδο του mRNA της προ-IL-1β και NLRP3 υπό θεραπεία DPI. Βρήκαμε ότι DPI μείωσε σημαντικά την έκφραση των προ-IL-1β και NLRP3 (Σχήμα 5C-D), το οποίο ήταν σύμφωνο με το εύρημα από κύτταρα ποντικού [40]. Επιπλέον, εξετάσαμε επίσης την ενεργοποίηση της κασπάσης-1 και βρέθηκε ότι χαμηλές δόσεις (1 ή 10 μΜ) της θεραπείας DPI δεν επηρέασε την ενεργοποίηση της κασπάσης-1, ενώ 100 μΜ DPI ανέστειλε κασπάσης-1 ενεργοποίησης (Σχήμα 5Ε). Αυτό έδειξε ότι σε ανθρώπινα κύτταρα DPI παρενέβαινε με την ενεργοποίηση inflammasome NLRP3 μέσω της αναστολής της NLRP3 μεταγραφής, καθώς και δράση της κασπάσης-1, όταν εφαρμόστηκε υψηλή δόση. Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η δραστηριότητα Καθεψίνης Β, Κ

+ εκροής, Ca

2 + εισροή και ROS όλοι συνέβαλαν με την ενεργοποίηση inflammasome NLRP3 σε απάντηση

M.hy

πρόκληση.

Α, τα επίπεδα των ROS στο

M.hy

επεξεργασμένα κύτταρα ΤΗΡ-1 αναλύθηκαν με την επισήμανση CM-H2DCFDA. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή του ποσοστού του CM-H2DCFDA-θετικά κύτταρα. Β, 5 × 10

4 ΤΗΡ-1 κύτταρα προ-επωάστηκαν με τις υποδεικνυόμενες ποσότητες DPI για 0,5 ώρα και προκλήθηκαν με

M.hy

στη συνέχεια για 6 ώρες, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL- 1β ELISA. 1 × 10

5 κύτταρα ΤΗΡ-1 (C) και ΡΜΑ επάγεται μακροφάγα (D) προ-επωάστηκαν με τις υποδεικνυόμενες ποσότητες DPI για 0,5 ώρα και προκλήθηκαν με

M.hy

(τελική συγκέντρωση, 6,7 × 10

7 CCU /ml) στη συνέχεια για 3 ώρες, τα κύτταρα λύθηκαν και mRNA εκχυλίζονται για σύνθεση cDNA και τέλος για την IL-1β και την έκφραση του γονιδίου NLRP3 με πραγματικού χρόνου PCR. Ε, ανοσοκηλιδώσεως ανάλυση της προ-κασπάσης-1 και ώριμη (P10) μορφή της κασπάσης-1 και ώριμης IL-1β (P17) σε υπερκείμενα και εκχυλίσματα ΤΗΡ 1 που προέρχεται από τα μακροφάγα που έλαβαν θεραπεία με

M.hy

για 6 ώρες μετά την προεπεξεργασία DPI για 0,5 ώρα. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι μέση τιμή ± SD από έναν εκπρόσωπο από τα τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

M.hy

Ενεργοποιεί NLRP3 Inflammasome

in vivo

Η

Όταν μυελού οστών ποντικού που προέρχεται δενδριτικά κύτταρα (BMDCs) μολύνθηκαν με

M.hy

, μία παρατεταμένη διέγερση IL-1β παρατηρήθηκε (Σχήμα 6Α). Περαιτέρω πειράματα σε BMDCs απομονωθεί από αγρίου τύπου (WT) ποντίκια ή ποντίκια ανεπαρκή για κασπάσης-1, ASC ή NLRP3 με

M.hy

πρόκληση επιβεβαίωσε ότι

M.hy

επαγωγή της IL- 1β ήταν NLRP3 inflammasome εξαρτάται (Εικόνα 6Β). Επιπλέον, η συστηματική εμβολιασμό

M.hy

σε WT ποντικούς επαγόμενη IL-1β παραγωγή σε ορό και υγρό περιτοναϊκής πλύσης (PLF), αλλά όχι σε ποντίκια που στερούνται ASC ή NLRP3 (Σχήμα 6C-D). Είναι ενδιαφέρον ότι, το βασικό επίπεδο της IL-1β σε ανεπάρκεια ASC ποντικούς ήταν σαφώς μεγαλύτερη από ότι στην WT ή NLRP3 ανεπαρκή ποντίκια, αλλά πρόκληση με

M.hy

δεν αύξησε περαιτέρω την έκκριση της IL-1β σε τέτοιους ποντικούς (Σχήμα 6C-D). Συλλογικά, τα ευρήματα αυτά επιβεβαίωσαν ότι

M.hy

ενεργοποιείται επίσης NLRP3 inflammasome σε ποντίκια

in vitro

και

in vivo

.

Α, 1 × 10

5 μυελού οστών ποντικού που προέρχεται δενδριτικά κύτταρα (BMDCs) προκλήθηκαν με

M.hy

σε μια τελική συγκέντρωση 5 × 10

7 CCU /ml σε διαφορετικά χρονικά σημεία, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL -1β ELISA. Β, 1 × 10

5 BMDCs απομονωθεί από άγριου τύπου και κασπάσης-1 ανεπάρκεια (knock-out, KO), ASC ΚΟ και NLRP3 ΚΟ του ποντικιού προσβλήθηκαν με

M.hy

σε τελική συγκέντρωση 5 × 10

7 CCU /ml, 24 ώρες αργότερα τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA. C-D, C57BL /6, ASC KO και NLRP3 ΚΟ ποντίκια ενέθηκαν ε.π. με 5 × 10

8 CCU /ml του

M.hy

σε 200 μl PBS. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία 6 ώρες μετά την ένεση και ο ορός ή περιτοναϊκή πλύση υγρού (PLF) συλλέχθηκαν για IL-1β ELISA (C, D). Το πείραμα επαναλήφθηκε τρεις φορές, και τα δεδομένα συνενώθηκαν και έδειξε ως μέση τιμή ± SD. *** Αντιπροσωπεύει P & lt? 0.001 και ** αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.01 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

M.hy

Induced IL-1β Προωθεί όγκου του στομάχου κυττάρων Μετανάστευση και εισβολή

Τα παραπάνω στοιχεία έδειξαν σαφώς ότι

M.hy

ήταν σε θέση να επάγει παραγωγή IL-1β από την έμφυτη κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος μέσω της ενεργοποίησης inflammasome NLRP3. Μελέτες Πρόωρη επιδημία αποκάλυψε ένα πιθανό ρόλο του μυκοπλάσματος στην ανάπτυξη του καρκίνου του στομάχου [5]. Και

Mycoplasma hyorhinis

καταδείχθηκε για την προώθηση της μετανάστευσης κυττάρου όγκου, εισβολή και μετάσταση

in vitro

και

in vivo

[41]. Υποθέσαμε ότι μπορεί να υπάρχει άλλος μηχανισμός για αυτή την προσφορά, η οποία είναι ότι

M.hy

μπορεί να προωθήσει την γαστρική καρκινογένεση ή /και μετάσταση μέσω της προώθησης της IL-1β παραγωγή. Και εμείς επιβεβαίωσε ότι

M.hy

προωθείται γαστρικού μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολής (Σχήμα S5). Δεδομένου ότι

M.hy

αποδείχθηκε να μολύνει το γαστρικό καρκινικά κύτταρα ([41], το Σχήμα S4), είναι έτσι πιθανό ότι

M.hy

μπορεί να προκαλέσει την ενεργοποίηση inflammasome σε καρκινικά κύτταρα απ ‘ευθείας. Ωστόσο, η μη ενεργοποίηση inflammasome ανιχνεύθηκε σε γαστρικό καρκίνο κύτταρα (Σχήμα S6).

επόμενο προσδιορίζεται η επίδραση της ανθρώπινης ανασυνδυασμένης IL-1β (rIL-1β) επί γαστρικού καρκίνου κυτταρική καρκινογένεση σε μια δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, η οποία αποκάλυψε ότι η rIL-1β δεν επηρέασε τον πολλαπλασιασμό γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή MGC-803 (Σχήμα S7). Εφόσον η IL-1β αναφέρθηκε για την προώθηση μετάσταση άλλων όγκων [18], ελέγξαμε τις επιδράσεις της rIL-1β για τη μετανάστευση και την εισβολή του MGC-803 κύτταρα. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η μετανάστευση και εισβολή MGC-803 ενισχύθηκαν με rIL-1β θεραπεία (Σχήμα 7Α και 7C), ενώ η θεραπεία με rIL-18 δεν έδειξε καμία επίδραση (Σχήμα 7Β και 7D). Στη συνέχεια, αντιμετωπίζονται αυτά τα γαστρικά καρκινικά κύτταρα με τα υπερκείμενα καλλιέργειας από το

M.hy

αμφισβητηθεί ΤΗΡ-1 που προέρχεται μακροφάγα ή μακροφάγα με αποσιώπηση του NLRP3, ASC και κασπάσης-1 για τη μετανάστευση και την δοκιμασία εισβολής. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι τα υπερκείμενα καλλιέργειας από το

M.hy

αμφισβήτησε τα μακροφάγα κύτταρα αγωνίζομαι ενισχύεται έντονα τη μετανάστευση και την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων, ενώ τα υπερκείμενα των καλλιεργειών από το NLRP3, ASC ή κασπάσης-1 μακροφάγα νοκ ντάουν δεν το έκανε, πιθανόν λόγω της μειωμένης IL-1β έκκρισης (Σχήμα 8Α και 8C). Αυτή η ενισχυμένη μετανάστευση και εισβολή του MGC-803 κύτταρα καταργήθηκε δια κατεργασίας των κυττάρων με αντι-IL-1β mAb (Σχήμα 8Β και 8Δ). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το

M.hy

που προκαλείται από τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή MGC-803, με την προώθηση της IL-1β έκκριση από μονοκύτταρα. Επιπλέον, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι

M.hy

επαγόμενη ενεργοποίηση inflammasome μπορεί να προωθήσει

M.hy

αντιγραφής (Σχήμα S8), η οποία μπορεί να δημιουργήσει μια θετική ανατροφοδότηση και τελικά οδηγεί σε χρονιότητα της νόσου.

5 × 10

4 MGC-803 κύτταρα κατεργασμένα με υποδεικνυόμενες δόσεις της IL-1β (Α και C) ή IL-18 (Β και D) αναλύθηκαν με τη μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες Transwell. Το ανώτερο είχαν μεταναστεύσει ή εισέβαλε κύτταρα και το χαμηλότερο ήταν κατά μέσο όρο αριθμό των 4 μικροσκοπικά πεδία για κάθε αντίστοιχο πείραμα, αντίστοιχα. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD. *** Αντιπροσωπεύει P & lt? 0.001 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

Α-Β, 5 × 10

4 MGC-803 κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με ΕΣΥ μακροφάγα αγωνίζομαι ως έλεγχος και κοινωνικής δικτύωσης. από

M.hy

αγωγή Casp-1 KD, ASC KD και NLRP3 KD μακροφάγα αναλύθηκαν με τη μετανάστευση Transwell (Α) και την εισβολή (Β) δοκιμασίες. C-D, 5 × 10

4 MGC-803 κύτταρα κατεργασμένα με SNs από

M.hy

κατεργασία ΤΗΡ-1 που προκύπτουν μακροφάγα ή SNs περιέχουν αντι-IL-1β mAb αναλύθηκαν με Transwell μετανάστευση (C ) και εισβολή (D) δοκιμασίες. Τα άνω πλαίσια μετανάστευσαν ή εισβολή κυττάρων και οι κάτω πάνελ είναι κατά μέσο όρο αριθμοί 4 μικροσκοπικά πεδία για κάθε αντίστοιχη πειράματα, αντίστοιχα. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD. *** Αντιπροσωπεύει P & lt? 0.001, ** αντιπροσωπεύει P & lt? 0,01 και * αντιπροσωπεύει P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με έλεγχο στην στατιστική ανάλυση

Η

Συζήτηση

Τα μυκοπλάσματα διακρίνουν τους εαυτούς τους από άλλα βακτήρια από το μικρό μέγεθος, λεπτό γονιδιώματος και η έλλειψη κυτταρικού τοιχώματος. Πολλοί μυκοπλάσματα δημιουργία αποικισμό και τη μόλυνση μέσω προσκόλληση για να φιλοξενήσει τους ιστούς. Επειδή δυναμική αρχιτεκτονική επιφάνειά τους είναι αντιγονικά και λειτουργικά ευέλικτο, μυκοπλάσματα είναι σε θέση να αποφύγει υποδοχής ανοσοποιητικό επίθεση και την προσαρμογή σε πολλούς οικοτόπους και να προκαλέσουν χρόνιες παθήσεις [32]. Δεδομένου ότι η αναγνώριση του

M.hy

από χοίρους το 1962, λίγο έρευνα διεξήχθη σε αυτό το παθογόνο μέχρι που βρέθηκε να σχετίζεται με αρκετούς ανθρώπινους καρκίνους [5], [41], [42], [ ,,,0],43]. Πιο πρόσφατα, οι επιστήμονες διαπίστωσαν ότι

M.hy

πρωτεΐνης ρ37 ήταν υπεύθυνη για την προώθηση των καρκινικών κυττάρων εισβολής και της μετάστασης [30], [44]. Εκτός από αυτό το άμεσο μηχανισμό, αυτό μικρόβιο μπορεί επίσης να προκαλέσει ογκογένεση ή μετάστασης έμμεσα μέσω ενός τοπικού χρόνια φλεγμονώδη διαδικασία. Είναι καλά γνωστό ότι η IL-1β είναι ένα σημαντικό προ-φλεγμονώδης κυτοκίνη που προάγει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου και ενισχύει την διεισδυτικότητα και τη μετάσταση των κυττάρων του μελανώματος Β16 [19], [45]. Η υπερέκφραση της IL-1β βρέθηκε να επάγει γαστρική φλεγμονή και τον καρκίνο σε ποντίκια [19]. Σε αυτή τη μελέτη, ερευνήσαμε εάν η inflammasome NLRP3, η οποία ελέγχει την IL-1β ωρίμανσης, ενεργοποιήθηκε από

M.hy

, και εάν αυτή η ενεργοποίηση μπορεί να συμβάλει στην

M.hy

συνδέονται μετάσταση του γαστρικού . Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το

M.hy

ενεργοποιηθεί το inflammasome NLRP3

in vitro

και

in vivo

, και η προώθηση του γαστρικού μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολή από

Μ .hy

ήταν εξαρτάται από την ενεργοποίηση inflammasome NLRP3. Εκτός NLRP3, βρήκαμε ότι

M.hy

DNA ενεργοποιείται επίσης την inflammasome AIM2, αλλά MLAMP ενεργοποίηση NLRP3 ήταν το κυρίαρχο στοιχείο για την IL-1β επαγωγή από

M.hy.

Η

πρόσφατα αναφέρθηκε ότι ακυλιωμένες λιποπεπτίδιο από θερμικά σκότωσε μυκόπλασμα

Acholeplasma laidlawii

(HKAL) που προκαλείται από IL-1β παραγωγή μέσω NLRP7 inflammasome στα ανθρώπινα κύτταρα, ενώ η συνολική HKAL επαγόμενη έκκριση της IL-1β ήταν μερικώς NLRP3 εξαρτάται [46], υποδεικνύοντας ότι πολλαπλές inflammasomes μπορεί να ενεργοποιηθεί από ορισμένα μυκοπλάσματος. Τα δεδομένα μας δεν απέκλεισε την ενδεχόμενη εμπλοκή NLRP7 στο

M.hy

που προκαλείται από IL-1β παραγωγή, αλλά

M.hy

ενεργοποιείται κυρίως την inflammasome NLRP3, επειδή η έκκριση της IL-1β ήταν σχεδόν πλήρως καταργηθεί στα NLRP3 σιγήσει κύτταρα (Εικόνα 3η και 3θ).

οι πρώτες μελέτες προτείνεται η ROS ενεργοποιηθεί το inflammasome NLRP3 με την ενεργοποίηση της κασπάσης-1 [47]. GCCTATTATTGCTAAAGATAAATATCTTAAGGTATTTTAATATTGGTAATCTATTTTAGAAATTTAATTTAAAAATTAAACTCGGTTATAAAAAAGATCGTTGAAATAATAAATATGAAGTTAATCATATTGTTATTTGCTATTCAGTTTTCAAAGAACTATAATTGAGAACTTAAAGCTCTCAAAACTAGACACGAATCGATTATGTAATAAGTCAATTAAGACTAACGGAAAGCGGAAAAAGAAGGTGATCCGTCCCCACG.