Αφηρημένο

Ιστορικό

νεουρεγκιουλίνη-1 (NRG1) είναι ένα υποθετικό γονίδιο ευαισθησίας σχιζοφρένεια που εμπλέκονται σε μεγάλο βαθμό στην ανάπτυξη του κεντρικού νευρικού συστήματος, καθώς και την εισβολή καρκίνου και μετάσταση. Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο Β λεμφοβλαστική κυττάρων, που προηγουμένως αποδειχθεί απομείωση NRG1α μεσολάβηση της μετανάστευσης σε κύτταρα που προέρχονται από ασθενείς με σχιζοφρένεια, καθώς και επιδράσεις των αλληλομόρφων κινδύνου NRG1 και κατεχολ-O-μεθυλοτρανσφεράσης (COMT), ένα δεύτερο γονίδιο εμπλέκεται τόσο στην ευαισθησία της σχιζοφρένειας και στον καρκίνο.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Εδώ, εξετάζουμε την κυτταρική προσκόλληση, μια απαραίτητη διαδικασία συστατικό της κυτταρικής κινητικότητας, χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία προσκόλλησης κυττάρου ιντεγκρίνη μεσολάβηση βασίζεται σε μια αλληλεπίδραση μεταξύ ICAM- 1 και η ιντεγκρίνη ετεροδιμερές CD11a /CD18 εκφράζεται επί λεμφοβλάστες. Σε δοκιμασία μας, NRG1α προκαλεί λεμφοβλάστες να αναλάβει διάφορα επίπεδα πρόσφυσης που χαρακτηρίζεται από το χρόνο που εξαρτάται από διακυμάνσεις στη σταθερότητα της σύνδεσης. Το μέγιστο εύρος της διαφοράς στην πρόσφυση πάνω από εξήντα λεπτά συσχετίζεται έντονα με NRG1α που προκαλείται από τη μετανάστευση (r

2 = 0,61). NRG1α επαγόμενη μεταβολή πρόσφυσης φράσσεται από erbB2, ΡΙ3Κ, και αναστολείς Akt, αλλά όχι από PLC, ROCK, MLCK, ή ΜΕΚ αναστολείς, που εμπλέκουν τη erbB2 /ΡΙ3Κ /Akt1 μονοπάτι σηματοδότησης σε NRG1 διεγερμένα, διαμεσολαβούμενη από ιντεγκρίνη προσκόλλησης κυττάρου. Σε κυτταρικές σειρές από 20 ασθενείς με σχιζοφρένεια και 20 φυσιολογικούς ελέγχους, κύτταρα από ασθενείς παρουσιάζουν σημαντική έλλειψη στην περιοχή από NRG1α επαγόμενη προσκόλληση (p = 0,0002). Σε αντίθεση, η απόκριση των κυττάρων προερχόμενων από ασθενή σε φορβόλη μυριστικό οξικό είναι άριστης. Ο γονότυπος της COMT Val108 /158Met καταδεικνύει μια ισχυρή τάση προς την πρόβλεψη του εύρους της NRG1α που προκαλείται απόκριση πρόσφυσης με ομοζυγώτες κίνδυνο αφού μειώθηκε μεταβολή στην κυτταρική πρόσφυση ακόμα και σε φυσιολογικά άτομα (p = 0,063).

Συμπέρασμα /Σημασία

Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι ένας μηχανισμός της γενετικής σύνδεσης NRG1 με σχιζοφρένεια μπορεί να περιλαμβάνει τη μοριακή βιολογία της κυτταρικής προσκόλλησης

Παράθεση:. Kanakry CG, Li Ζ, Nakai Υ, Sei Υ, Weinberger DR ( 2007) νεουρεγκιουλίνη-1 ρυθμίζει την κυτταρική προσκόλληση μέσω ErbB2 /Φωσφοϊνοσιτίδης-3 κινάσης /Akt μονοπάτι που εξαρτάται από: Πιθανές Επιπτώσεις για τη σχιζοφρένεια και τον καρκίνο. PLoS ONE 2 (12): e1369. doi: 10.1371 /journal.pone.0001369

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Schahram Akbarian, Πανεπιστήμιο της Μασαχουσέτης Ιατρική Σχολή, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12, Νοέμ του 2007? Αποδεκτές: 5η Δεκεμβρίου 2007? Δημοσιεύθηκε: 26, Δεκέμβρη, 2007

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της δήλωσης Creative Commons Public Domain που ορίζει ότι, μόλις τοποθετηθεί στο δημόσιο τομέα, το έργο αυτό μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο σκοπό

χρηματοδότηση:. το εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα του Εθνικού Ινστιτούτου Ψυχικής Υγείας, NIH, εφόσον το μεγαλύτερο μέρος της χρηματοδότησης, καθώς και το εργαστήριο χώρος με τον οποίο διεξήχθησαν τα πειράματα αυτά. Το Ιατρικό Ινστιτούτο Howard Hughes-ΝΙΗ Έρευνα Υποτρόφων Προγράμματος προβλέπεται επίσης η χρηματοδότηση που στήριξαν αυτό το ερευνητικό έργο. Ούτε χορηγός συμμετείχε στο σχεδιασμό ή τη διεξαγωγή της ίδιας της έρευνας, τη συλλογή, ανάλυση ή ερμηνεία των δεδομένων, ή στην παρασκευή ή την αναθεώρηση της προκύπτουσας χειρόγραφο

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

η κυρίαρχη τρέχουσα προβολή της παθογένεσης της σχιζοφρένειας προϋποθέτει ότι είναι μια νευροαναπτυξιακή διαταραχή που σχετίζεται με γενετικούς παράγοντες που επηρεάζουν την ανάπτυξη του εγκεφάλου και την πλαστικότητα. [1] Μεταξύ των σταθερά αυξανόμενος αριθμός των υποθετικών γονιδίων ευαισθησίας σχιζοφρένεια είναι νεουρεγκιουλίνη-1 (NRG1), που για πρώτη φορά βρέθηκε να σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο για σχιζοφρένεια στην ισλανδική πληθυσμού [2] και επιβεβαιώθηκε στη συνέχεια σε αρκετές μελέτες άλλους πληθυσμούς. [3] υπάρχει NRG1 σε πολλαπλές ισομορφές, οι οποίες περιέχουν ένα επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (EGF) τομέα που μπορεί να σηματοδοτήσει μέσω erbB2, erbB3, ή υποδοχείς erbB4. [4] υφίστανται περισσότεροι ισομορφές NRG1 ως διαμεμβρανικές πρωτεΐνες που πιστεύεται ότι διασπάται πρωτεολυτικώς, επιτρέποντας στον εξωκυτταρικό, EGF τομέας να συνδέονται με τους υποδοχείς erbB. [5] NRG1 εμπλέκεται σε πολλούς βασικούς νευροαναπτυξιακή λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένων νευρωνικών μετανάστευση, συναπτική διαμόρφωση και ανάπτυξη ολιγοδενδροκυττάρων. [4], [6] Δεδομένου ότι αυτές οι λειτουργίες και οι άλλοι ρυθμίζονται από NRG1 είναι τουλάχιστον θεωρητικά σχετίζεται με υποτιθέμενο νευροαναπτυξιακές προέλευση σχιζοφρένεια, η NRG1 είναι βιολογικά αληθοφανής γονίδιο ευαισθησίας σχιζοφρένεια. Παρ ‘όλα αυτά, ο συγκεκριμένος μηχανισμός βιολογική της γενετικής σύνδεσης της με σχιζοφρένεια και ο ρόλος του στην παθογένεση της νόσου είναι άγνωστη.

Η χρήση του λεμφοβλαστών Β ως ένα μοντέλο για τη μελέτη κυτταρικών βασικών μοριακών μηχανισμών και της γενετικής ενώσεις ενός αριθμού ανθρώπινων ασθενειών , συμπεριλαμβανομένων των νευροψυχιατρικών διαταραχών, γίνεται ολοένα και πιο διαδεδομένη. [7], [8], [9] Η εφαρμογή αυτού του μοντέλου να διερευνήσει την κυτταρική μετανάστευση φαίνεται ιδιαίτερα κατάλληλη δεδομένου ότι η νευρωνική και άνοσα κύτταρα μοιράζονται πολλές κοινές μοριακής και κυτταρικής χαρακτηριστικά σημαντικά για την κυτταρική κινητικότητα . [10], [11], [12] Έτσι, μοριακό χαρακτηρισμό και γενετικών ενώσεων της κινητικότητας των κυττάρων σε κύτταρα αιματοποιητικής προέλευσης μπορεί να παρέχει ενόραση σε νευρωνικές κυτταρικές διεργασίες. Σε πρόσφατη εργασία χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο Β κύτταρο λεμφοβλαστών, δείξαμε ότι λεμφοβλάστες Β εκφράζουν erbB2 και erbB3 υποδοχείς, και ότι τα σήματα NRG1α μέσω αυτών των υποδοχέων μέσω των οδών ΡΙ3Κ /Akt και PLC για την προώθηση της χημειοτακτικής μετανάστευσης. [7] Βρήκαμε επίσης ότι γενετική παραλλαγή τόσο σε NRG1 και COMT προηγουμένως σχετίζονται με τη σχιζοφρένεια προέβλεψε την μεταναστευτική απόκριση αυτών των κυττάρων σε NRG1, υποδηλώνοντας μια πιθανή κυτταρικός μηχανισμός για την γενετική συσχέτιση με τη διαταραχή. Σε αυτή τη μελέτη, εξετάζουμε κυτταρικής προσκόλλησης, μια διαδικασία θεμελιώδους συνιστώσας που εμπλέκονται στην κυτταρική κινητικότητα. Για να γίνει αυτό, έχουμε αναπτύξει μία δοκιμασία προσκόλλησης κυττάρου ιντεγκρίνη μεσολάβηση σε πλάκες 96 φρεατίων με βάση την αλληλεπίδραση μεταξύ ανασυνδυασμένο ανθρώπινο ICAM-1 και του CD11a /CD18 ιντεγρίνης ετεροδιμερούς υποδοχέα που εκφράζεται επί λεμφοβλάστες.

Οι ιντεγκρίνες είναι μια κατηγορία υποδοχέων κυτταρικής επιφάνειας που παίζουν σημαντικό ρόλο σε μια μεγάλη σειρά κυτταρικών και φυσιολογικών διεργασιών, που κυμαίνονται από εμβρυϊκή ανάπτυξη να ανοσίας σε μετάσταση όγκου. [13], [14] Οι ιντεγκρίνες αποτελούν ετεροδιμερείς, διαμεμβράνης υποδοχείς που αποτελούνται από μια υπομονάδα α μη ομοιοπολικά συνδέεται με μια υπομονάδα β. Οι ιντεγκρίνες μεσολαβούν σηματοδότησης αμφίδρομα, συμβάλλοντας στην ένταξη ενδοκυτταρικές διεργασίες με το εξωκυτταρικό περιβάλλον. Προσάρτηση των ιντεγκρινών να πρωτεϊνών εξωκυτταρικής μήτρας ή αντίθετους παρόν σε άλλα κύτταρα ενεργοποιεί λεγόμενη «outside-in» σηματοδότηση που προωθεί μια ποικιλία κυτταρικών διεργασιών, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης της κυτταρικής επιβίωσης, τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση. [15] Εν τω μεταξύ, χημειοκίνης και άλλες χημικές διέγερση των κυττάρων μπορούν να διαμορφώσουν την συγκολλητικότητα των ιντεγκρινών, προωθώντας λεγόμενη «μέσα-έξω» σηματοδότηση. [16], [17], [18], [19]

οι ιντεγκρίνες έχουν επίσης εμπλακεί ως παίζουν βασικές λειτουργίες στη μεσολάβηση της νευρωνικής μετανάστευσης [20] και το σχηματισμό συνάψεων και τη συντήρηση. Αυτοί παίζουν κρίσιμους ρόλους σε μια σειρά από νευροαναπτυξιακή διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της προσκόλλησης των νευρωνικών προδρόμων κυττάρων, μετανάστευση αλυσίδα, διαφοροποίηση και πολλαπλασιασμό? [21], [22] ρύθμιση των νευρογλοιακών αλληλεπιδράσεων και την προώθηση της σωστής φλοιώδους οργάνωσης στρωτή νευρωνικά-ακτινική μέσω αλληλεπιδράσεων με ρεελίνη ? [23] σωστή μετανάστευση των οπτικών καλυμμάτων νευροβλαστών σε συγκεκριμένες στρώσεις? [24] σωστή ανάπτυξη νευρικής ακρολοφίας? [25] νευρικών κώνου ανάπτυξης filopodial διαμόρφωσης? [26] ολιγοδενδροκυττάρων επιβίωση? [27] και την κατεύθυνση των νευρομυϊκών συνάψεων και τη μετανάστευση των κυττάρων Schwann προς την περιφέρεια. [28] Μεταξύ άλλων τους ρόλους τους στην συνάψεων βιολογία είναι προαγωγή της συναπτικής ωρίμανση, [29] μεσολάβηση της συναπτικής πλαστικότητας, [30], [31] και κρίσιμη εμπλοκή σε επαγωγή LTP [32] και της σταθεροποίησης [33], [34], καθώς και χωρικής μνήμης. [32]

Επειδή NRG1 και ιντεγκρίνες συγκλίνουν σε διάφορες αναπτυξιακές διαδικασίες που συνδέονται με την νευρωνική μετανάστευση και σύναψη στο βιολογία και δεδομένης της προηγούμενης ευρήματά μας που σχετίζονται με NRG1 μεσολάβηση κυτταρική μετανάστευση, ερευνήσαμε οι επιδράσεις της ενεργοποίησης NRG1 λεμφοβλαστών σε διαμεσολαβούμενη από ιντεγκρίνη προσκόλλησης κυττάρου. Αναφέρουμε ότι NRG1α επάγει διαφορετικά επίπεδα κυτταρικής προσκόλλησης που χαρακτηρίζεται από εξαρτώμενη από τον χρόνο διακυμάνσεις στην σταθερότητα της σύνδεσης, όπως μετράται με μία ανίχνευση νέα προσκόλλησης. Το μέγιστο εύρος αυτής της παραλλαγής σε πρόσφυση με το χρόνο (εδώ εφεξής συντετμημένο ως MRVA) συσχετίζεται ιδιαίτερα με την αποτελεσματικότητα των NRG1α επαγόμενη μετανάστευση των κυττάρων, υποδεικνύοντας ότι το μέτρο MRVA έχει βιολογική συνάφεια, τουλάχιστον σε αυτά τα κύτταρα. NRG1α που προκαλείται MRVA εξαρτάται από erbB2 /PI3K /Akt της σηματοδότησης. Επιπλέον, η MRVA επάγεται από NRG1α είναι σημαντικά χαμηλότερη σε λεμφοβλάστες Β που προέρχονται από ασθενείς με σχιζοφρένεια σε σύγκριση με εκείνα που προέρχονται από φυσιολογικούς ελέγχους. Τέλος, μια ενιαία πολυμορφισμός νουκλεοτιδίου εντός COMT, ένα γονίδιο εμπλέκεται στην ευαισθησία τόσο στην σχιζοφρένεια και να μεταστατικό καρκίνο, καταδεικνύει μια ισχυρή τάση προς την πρόβλεψη της MRVA ενός δεδομένου κυτταρικής γραμμής, ακόμη και σε φυσιολογικά άτομα. Συνολικά, οι μελέτες μας δείχνουν ότι η σηματοδότηση NRG1 ενεργοποιεί μηχανήματα προσκόλληση σε μια διαδικασία που είναι εξασθενημένη σε κύτταρα που προέρχονται από ασθενείς με σχιζοφρένεια. Εάν αυτά τα ευρήματα στα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος διατηρούνται σε διαδικασίες νευρωνικών κυττάρων, που θα υποστήριζαν ότι ένας μηχανισμός της γενετικής σύνδεσης NRG1 με σχιζοφρένεια περιλαμβάνει τη μοριακή βιολογία της κυτταρικής προσκόλλησης.

Αποτελέσματα

λεμφοβλάστες εκφράζουν ιντεγκρίνες ομοιογενώς

λεμφοκύτταρα εκφράζουν κυρίως το ετεροδιμερές CD11a /CD18 ιντεγρίνης (α

L /β

2, η οποία είναι επίσης γνωστή ως λευκοκυττάρων λειτουργία που σχετίζεται με αντιγόνο-1 ή LFA-1). [35] Χρησιμοποιήσαμε κυτταρομετρία ροής για την ανάλυση βασικής γραμμής έκφραση ιντεγκρίνης και να συγκρίνουν την έκφραση μεταξύ κυτταρικές σειρές που προέρχονται από ασθενείς με σχιζοφρένεια έναντι φυσιολογικούς μάρτυρες. Όλες οι δοκιμαζόμενες κυτταρικές γραμμές εξέφρασαν CD11a (διορθωμένο διάμεσος φθορισμός, 14.018 ± 0.968) και CD18 (14.336 ± 1.019), εκτός από μία κυτταρική σειρά που προέρχεται από ασθενή. Αυτή η κυτταρική γραμμή αποκλείσθηκε από όλες τις περαιτέρω δοκιμές και στατιστικές συγκρίσεις. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των κυτταρικών σειρών που προέρχονται από ασθενείς ή ελέγχους στον έκφραση είτε CD11a (ασθενείς (n = 23), 13,479 ± 1,364? έλεγχοι (n = 35), 14,790 ± 1,303? p = 0,5046) ή CD18 (ασθενείς (n = 23), 14,215 ± 1,633? έλεγχοι (n = 35), 14,832 ± 1,291? p = 0,7667). Συσχέτιση CD11a με έκφραση CD18 (γραμμική παλινδρόμηση (n = 58), r = 0,806? R του Fisher έως z, ρ & lt? 0,0001) ήταν σύμφωνο με το συμπέρασμα ότι CD11a και CD18 κυρίως σχηματίζονταν ετεροδιμερή με το άλλο. Έτσι, αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι κυτταρικές σειρές λεμφοβλαστών μας εκφράζουν οι ιντεγκρίνες CD11a /CD18 και ότι διαφορική γραμμή βάσης έκφραση αυτών των ιντεγκρινών δεν είναι ένας σημαντικός παράγοντας σε διαφορές στην μετανάστευση [7] ή πρόσφυσης (βλέπε παρακάτω) του λεμφοβλάστες ασθενών προέλευσης.

NRG1α προκαλεί χρονικά μεταβαλλόμενες κυτταρική προσκόλληση

Τα αρχικά πειράματα με ανάλυση προσκόλλησης μας πρότεινε ότι πρόσφυση είχε ένα χρόνο εξάρτηση. Έτσι, τα πειράματα χρονικής πορείας διεξήχθησαν στο οποίο λεμφοβλάστες εκτέθηκαν σε NRG1α ή οξική μυριστική φορβόλη (ΡΜΑ) σε πλάκες ICAM-επικαλυμμένες είτε για 15, 30, 45, ή 60 λεπτά, και στη συνέχεια οι πλάκες πλένονται προς απομάκρυνση των κυττάρων που δεν ήταν σταθερά προσκολλημένα. PMA χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος καθώς προάγει προσκόλληση κυττάρου με απευθείας ενεργοποίηση PKC. Για κάθε κυτταρική γραμμή, τα κύτταρα υποβλήθηκαν για τον ίδιο χρόνο έκθεσης στις πλάκες ICAM-επικαλυμμένες απουσία NRG1α ή ΡΜΑ. Μεταβολή στα στοιχεία προσάρτησης πρώτων NRG1 (Σχήμα S1) και στην αναλογία NRG /όχημα πάροδο του χρόνου (Σχήμα 1, Σχήμα S1, Εικόνα S2, και το Σχήμα S3) έδειξε ότι NRG1α διεγερμένα κύτταρα ως ένας πληθυσμός κυμαίνονταν μεταξύ μελών του σχετικώς πιο σταθερή και ασθενέστερη συνημμένο σε σύγκριση με την αρχική τιμή πρόσφυσης έλεγχο. Προκειμένου να ποσοτικοποιηθεί η παρατηρηθείσα μεταβολή στην κυτταρική προσκόλληση, ορίσαμε το NRG1 επαγόμενη μέγιστο εύρος των ποικίλων προσκόλλησης (MRVA) ως το μέγιστο λόγο NRG /όχημα μείον την ελάχιστη αναλογία /όχημα NRG από τα τέσσερα χρονικά σημεία (Σχήμα 1).

σε απάντηση NRG1α διέγερση πάροδο του χρόνου, τα κύτταρα ενός δεδομένου κυτταρικής σειράς ως πληθυσμός παρουσιάζει διακυμάνσεις μεταξύ των κρατών της σχετικής απόσπαση και καταστάσεις της σχετικής κατάσχεσης. Προκειμένου να δοκιμαστεί η αξιοπιστία αυτών των σχεδίων, δέκα κυτταρικές γραμμές σε δύο ξεχωριστές ημέρες δοκιμάστηκαν χρησιμοποιώντας προσδιορισμό προσκόλλησης μας. Τα δύο αντιπροσωπευτικά παραδείγματα που παρουσιάζονται. Ενώ η χρονική στιγμή της σκαμπανεβάσματα κυμάνθηκε μεταξύ τρεξίματα, το μέγιστο εύρος των ποικίλων πρόσφυσης (MRVA) ήταν εντυπωσιακά συνεπής (p = 0,016). Υπολογισμός της MRVA για κάθε διαδρομή από κάθε κυτταρική σειρά φαίνεται.

Η

Το μέγιστο εύρος των ποικίλων πρόσφυσης (MRVA) εμφανίζεται χαρακτηριστικό της κάθε κυτταρικής σειράς

Για να αντιμετωπίσει περαιτέρω την αξιοπιστία της αυτά τα πρότυπα, πραγματοποιήσαμε επανειλημμένες δοκιμασίες προσκόλλησης σε δέκα κυτταρικές σειρές σε δύο ξεχωριστές ημέρες. Αυτές οι δέκα γραμμές επιλέχθηκαν για να παρέχουν ένα φάσμα τιμών MRVA στις δύο ασθενών και έλεγχος κυτταρικές γραμμές, συμπεριλαμβανομένων των υψηλής, μέσης, και χαμηλά επίπεδα μεταβλητότητας. Σαφής μοτίβα ποικίλης πρόσφυσης την πάροδο του χρόνου παρατηρήθηκαν τις δύο ημέρες, και αν και το πραγματικό πρότυπο κυμαινόταν μεταξύ επαναλαμβανόμενων τρέχει από την άποψη των ειδικών φορές που ορίζεται το φάσμα της πρόσφυσης, το εύρος των αποκρίσεων προσκόλλησης που παρατηρείται (δηλαδή το μέτρο MRVA) ήταν πολύ επαναλήψιμη (Spearman rank συσχέτιση (n = 10), rho = 0,806, p = 0,016) (Εικόνα 1).

Η MRVA της NRG1α που προκαλείται από προσκόλληση κυττάρου προβλέπει NRG1α που προκαλείται από τη μετανάστευση

Η MRVA συσχετίζεται θετικά και εξαιρετικά σημαντικά με το βαθμό της χημειοτακτικής μετανάστευσης σε απάντηση NRG1α (γραμμική παλινδρόμηση (n = 37), r

2 = 0,6065? r του Fisher έως z, ρ & lt? 0.0001) (Σχήμα 2), με τη χρήση δεδομένων για τη μετανάστευση εμείς έχουν αναφερθεί στο παρελθόν στις ίδιες κυτταρικές σειρές. [7] (τρεις κυτταρικές γραμμές που χρησιμοποιήθηκαν για τις μελέτες προσκόλλησης δεν διέθετε δεδομένων για τη μετανάστευση και έτσι δεν συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη σύγκριση.) Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το μέτρο MRVA έχει ευρύτερη βιολογική σημασία, τουλάχιστον σε αυτά τα κύτταρα. Αν και συσχετισμός δεν υποδεικνύει την αιτιώδη συνάφεια, ένα διαφορετικό συγκολλητικό κατάσταση είναι βιολογικά εύλογο και απαραίτητο μηχανισμό για τη μετανάστευση των κυττάρων.

στοιχεία πρόσφυσης συγκρίθηκαν με τα διαθέσιμα στοιχεία που έχουν συγκεντρωθεί ένα χρόνο πριν από NRG1α που προκαλείται από τη μετανάστευση των ίδιων κυτταρικών σειρών.

η

ο καθορισμός των μέτρων έκβασης

Λόγω της αξιοπιστίας της MRVA μέσα σε μια κυτταρική γραμμή και εμφανή βιολογική σημασία του, το MRVA ιδρύθηκε στο σημείο αυτό ως το πρωταρχικό εξαρτάται μέτρησης για όλες τις μελλοντικές πειράματα πρόσφυση. Επιπλέον, αρκετές άλλες εξαρτώμενες μέτρα που ορίζεται και χρησιμοποιείται για τη μελέτη των επιπτώσεων της σηματοδότησης αναστολέων μονοπατιού. Δύο άλλα μέτρα εμβέλεια ορίστηκαν ως εξής: 1) Το ICAM-μόνο MRVA, η οποία υπολογίζεται από μόνα τα κύτταρα ελέγχου (μέγιστη μείον την ελάχιστη από τις τέσσερις χρονικά σημεία) και αντιπροσωπεύει τα αποτελέσματα της ενδογενούς σηματοδότησης ή /και την παρουσία του ίδιου ICAM σε διαμορφώνοντας ποικίλες προσκόλληση πάροδο του χρόνου, και 2) PMA /όχημα MRVA, η οποία υπολογίζεται αναλόγως προς NRG /όχημα MRVA και αντιπροσωπεύει τη μεταβολή της κυτταρικής πρόσφυσης την πάροδο του χρόνου σε απόκριση στο ΡΜΑ διέγερση. Ένα μέτρο της καθαρής βασικής γραμμής προσκόλλησης επίσης καθορίστηκε ως ακολούθως: Μέση επίδραση ICAM, η οποία είναι ο μέσος όρος των τεσσάρων τιμών φθορισμού ICAM και αντιπροσωπεύει τη συνολική «κολλητικότητα» ή συγγενής κατάσταση προσκόλλησης των κυττάρων ελέγχου κατά την έναρξη. Σε περιπτώσεις όπου ένας αναστολέας που ασκείται επιπτώσεις τόσο βασική γραμμή και χημικά επαγόμενη προσκόλληση, η μέση NRG και μέσες τιμές φθορισμού PMA αναλύθηκαν για τη διάκριση επιδράσεις στην αριθμητή έναντι του παρονομαστή της μέσης NRG /οχήματος ή μέση αναλογία ΡΜΑ /οχήματος.

NRG1α μεσολαβεί επιπτώσεις της στην κυτταρική προσκόλληση μέσω erbB2 σηματοδότησης

Έχουμε στο παρελθόν έχουν δείξει ότι NRG1α μεσολάβηση της μετανάστευσης των λεμφοβλαστών εξαρτάται από τη σηματοδότηση erbB2? Έτσι, ελέγξαμε εάν η διέγερση erbB2 συμμετείχε στο μηχανισμό της NRG1α επαγόμενη προσκόλληση κυττάρου με κατεργασία κυττάρων με τον εκλεκτικό αναστολέα AG825 erbB2. AG825 παρουσίασαν σημαντική δοσο-εξαρτώμενη επίδραση στην ύγρανση του MRVA του NRG1α επαγόμενη προσκόλληση (ANOVA, F (3,4) = 23.358, ρ & lt? 0,0001). (Σχήματα 3)

Χορήγηση AG825 σε DMSO όχημα (n = 5) προκάλεσε μια ισχυρή, εξαρτώμενη από τη δόση μείωση της MRVA επάγεται από NRG1α. Σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, ** παριστά π & lt? 0.01 και **** παριστά π & lt? 0,0001. Σε σύγκριση με την χαμηλή δόση, + αντιπροσωπεύει p & lt? 0.05 και +++ αντιπροσωπεύει p & lt?. 0.001

Η

σηματοδότηση PI3K είναι απαραίτητη για τη διαμεσολάβηση NRG1α που προκαλείται από διάφορους κυτταρική προσκόλληση

Για να αντιμετωπιστεί η ρόλος της ΡΙ3Κ σηματοδότησης στην NRG1α επαγόμενη επίδραση πρόσφυσης, μελετήσαμε την μη αναστρέψιμο αναστολέα ΡΙ3Κ βορτμαννίνη. Οι δόσεις που χρησιμοποιήθηκαν ήταν όλα καλά κάτω από τις συγκεντρώσεις στις οποίες γουορτμανίνη αντιδρά σταυρωτά με ΜΑΡΚ, μυοσίνης ελαφριάς αλυσίδας κινάσης (MLCK), ή φωσφοϊνοσιτιδίου-4 σηματοδότηση κινάσης σε μια προσπάθεια να στοχεύουν συγκεκριμένα σηματοδότηση ΡΙ3Κ. Ουορτμανίνη παρουσίασαν σημαντική, δοσοεξαρτώμενη, μειωτική επίδραση στην NRG /MRVA οχήματος (ANOVA, F (3,4) = 17.208, p & lt? 0,0001). (Σχήμα 4) χωρίς συνέπειες για την έναρξη ή PMA-επαγόμενη προσκόλληση

Wortmannin σε DMSO όχημα (n = 5) παρουσίασαν μια ισχυρή, εξαρτώμενη από τη δόση, μειωτική επίδραση στο μέτρο /MRVA όχημα NRG. Σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, * παριστά π & lt? 0,05, ** παριστά π & lt? 0,01, και **** παριστά π & lt? 0,0001. Σε σύγκριση με την χαμηλή δόση, + αντιπροσωπεύει p & lt? 0.05 και ++ αντιπροσωπεύει p & lt?. 0.01

Η

Akt μιμείται αναστολή αναστολή PI3K και αμβλύνει την NRG1α που προκαλείται από την προσκόλληση αποτέλεσμα

Η Akt αναστολέα Χ αναστέλλει επιλεκτικά την φωσφορυλίωση της Akt με ελάχιστες επιπτώσεις στο PI3K, ΡϋΚ1, ή σηματοδότησης SGK1. Τα αποτελέσματα αυτού του φαρμάκου αντικατοπτρίζεται τα αποτελέσματα της αναστολής της ΡΙ3Κ με εξαρτώμενο από τη δόση, σημαντική μείωση της NRG MRVA /φορέα (ANOVA, F (3,4) = 4.709, p = 0,0214) (Σχήμα 5α) και χωρίς επιδράσεις στο ICAM- μόνα τους ή MRVA PMA /οχήματος. Σε αντίθεση με την αναστολή της ΡΙ3Κ, η αναστολή Akt σχετίστηκε με σημαντική μείωση της μέσης προσκόλλησης ICAM-μόνο (ANOVA, F (3,4) = 6.711, p = 0,0086) (Σχήμα 5β). Ωστόσο, αυτή η μείωση παρατηρήθηκε μόνο στην υψηλότερη δόση (ρ = 0,0033). Αυτό το ίδιο φαινόμενο παρατηρήθηκε επίσης σε σημαντική μείωση των πρώτων τιμές φθορισμού NRG στην υψηλή δόση μόνο (ANOVA, F (3,4) = 11.639, p = 0,0007), χωρίς προφανή τάση στις άλλες δόσεις. Λαμβάνοντας υπόψη αυτό το κοινό επίδραση στη μέση ICAM-μόνο και σημαίνει NRG προσκόλληση αποκλειστικά στην υψηλή δόση, μπορεί να αντιπροσωπεύουν μια διασταυρούμενη αντίδραση του αναστολέα σε υψηλές συγκεντρώσεις με άλλο σηματοδοτικό μονοπάτι σημαντική για τη διατήρηση μια κόλλα κατάσταση.

Διοίκηση της Akt αναστολέα Χ στο όχημα νερό (n = 5) προκάλεσε μια δοσο-εξαρτώμενη μείωση της /MRVA όχημα NRG (Α). Σε αντίθεση με αναστολή PI3K, αναστολή Akt συσχετίστηκε με στατιστικά σημαντική μείωση της μέσης ICAM (Β) και η μέση NRG (δεν απεικονίζεται) πρώτες τιμές φθορισμού στην υψηλή δόση μόνο με καμία τάση σε χαμηλότερες δόσεις. Σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, * παριστά π & lt? 0,05 και ** παριστά π & lt? 0,01. Σε σύγκριση με την χαμηλή δόση, + αντιπροσωπεύει p & lt? 0.05 και ++ αντιπροσωπεύει p & lt?. 0.01

Η

Rho κινάση δεν είναι απαραίτητη για τα NRG1- ή PMA-αποτελέσματα που προκαλούνται από την προσκόλληση

Από Rho είναι επίσης προς τα κάτω του ΡΙ3Κ και έχει εμπλακεί σε μηχανισμούς κυτταρικής προσκόλλησης, [36], [37], ήταν σημαντικό να διερευνηθεί εάν Rho παίζει ένα ρόλο στην NRG1 επαγόμενη προσκόλληση κυττάρου. Ωστόσο, δεν υπάρχουν κύτταρο διαπερατό, ειδικοί αναστολείς Rho διαθέσιμες, έτσι ώστε η Rho-πρωτεΐνης που συνδέεται με κινάση (ROCK) αναστολέας Rho κινάσης IV αναστολέα χρησιμοποιήθηκε. Αυτός ο αναστολέας ROCK δεν είχαν σημαντικά αποτελέσματα σε οποιαδήποτε από τις παραμέτρους που εξετάστηκαν προσκόλληση, και έτσι σηματοδότηση ROCK δεν φαίνεται να παίζει κανένα σημαντικό ρόλο στην διαμόρφωση της βασικής γραμμής, NRG1 επαγόμενη, ή που προκαλείται από ΡΜΑ ποικίλες προσκόλληση.

ΜΕΚ σηματοδότηση είναι δεν είναι απαραίτητο για την επίδραση

NRG1 επαγόμενη προσκόλληση κυττάρου

Ο εκλεκτικός PD98059 αναστολέα ΜΕΚ δεν είχε καμία επίδραση σε οποιαδήποτε από τις παραμέτρους πρόσφυσης σε οποιαδήποτε δόση (δεν φαίνεται). Αυτό υποδηλώνει ότι ακόμη και οι ΜΕΚ που εμπλέκονται σε αυτές τις διαδικασίες, δεν είναι απαραίτητη για την έναρξη προσκόλλησης ή NRG1- ή PMA-προσκόλληση.

σηματοδότηση φωσφολιπάσης C είναι απαραίτητη για τη διατήρηση μιας κόλλας κατάσταση γενικά

Όπως ΡΙ3Κ, ο U73122 αναστολέας PLC προκάλεσε επίσης σημαντική μείωση του NRG1α επαγόμενη MRVA (ANOVA, F (3,4) = 4.186, p = 0,0304) (σχήμα 6α), αλλά το αποτέλεσμα αυτού του αναστολέα φάνηκε να είναι μια συνολική μείωση της προσκόλλησης των κυττάρων γενικά, και όχι ένας NRG1 /erbB2-εξαρτώμενη επίδραση. Τόσο η αρχική τιμή μεταβλητότητας (ICAM-alone MRVA) (ANOVA, F (3,4) = 8.883, p = 0,0023) και μέση προσκόλληση (μέση ICAM-alone) (ANOVA, F (3,4) = 4.915, p = 0,0186 ) μειώθηκε μετά από έκθεση σε U73122 (Σχήματα 6b και C, αντίστοιχα). Ωστόσο, η μεταβολή στη μέση ICAM-alone ήταν σημαντική μόνο στην υψηλότερη δόση (ρ = 0,0155) (Σχήμα 6c). Ομοίως, οι πρώτες μέσες τιμές φθορισμού NRG και ΡΜΑ είχαν σημαντικές μειώσεις μόνο στην υψηλότερη δόση (NRG: ANOVA, F (3,4) = 8.672, p = 0,0025? ΡΜΑ: ANOVA, F (3,4) = 4.736, p = 0,0210). Είναι σημαντικό να σημειωθεί, ωστόσο, ότι ούτε η μέση NRG /όχημα (Σχήμα 6d), ούτε η μέση PMA /όχημα (Σχήμα 6e) αναλογίες ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δόσεων, υποδεικνύοντας ότι η αναστολή PLC επηρεάζει κοινή κυτταρικής σηματοδότησης μέσω αυτών των οδών προς ένα παρόμοιο βαθμό ανεξάρτητη από την διεγερτικό παράγοντα. Ως εκ τούτου, αν και ο αναστολέας PLC άσκησαν σημαντική επίδραση στη μείωση της NRG /όχημα MRVA, αυτό πιθανόν οφείλεται στην μείωση της συνολικής προσκόλλησης και ασφυκτικά το εύρος του δυναμικού απόκρισης, αντί να ειδική αναστολή ενός NRG1 /erbB2 εξαρτώμενη οδό.

Ενώ η U73122 αναστολέας PLC σε όχημα αιθανόλης (n = 5) προκάλεσε μια σημαντική μείωση NRG /MRVA όχημα (α) και μια τάση μείωσης PMA /MRVA όχημα (δεν φαίνεται), το εξασκείται μια πολύ ισχυρότερη επίδραση στην απόσβεση βασική γραμμή MRVA λόγω της παρουσίας του ICAM και ενδογενών σηματοδότηση μόνο (Β). Επιπλέον, σε υψηλή δόση, προκάλεσε μια σημαντική μείωση στην αρχική προσκόλληση ICAM (C) και στη μέση NRG και την προσάρτηση PMA (τιμές πρώτων φθορισμού) (δεν φαίνεται). Ωστόσο, σημαίνει NRG /οχήματος (D) και η μέση PMA /οχήματος (Ε) δεν μεταβλήθηκαν σημαντικά. Σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, * παριστά π & lt? 0,05 και ** παριστά π & lt? 0,01. Σε σύγκριση με την χαμηλή δόση, ++ αντιπροσωπεύει p & lt? 0.01 και +++ αντιπροσωπεύει p & lt?. 0.001

Η

κινάσης μυοσίνης ελαφριάς αλυσίδας (MLCK) σηματοδότηση είναι σημαντική για την έναρξη πρόσφυση

Δεδομένου η γνωστή σημασία του MLCK στην προώθηση συνημμένο, ο αναστολέας MLCK ML-7 χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει τις επιπτώσεις της σε διάφορες παραμέτρους προσκόλληση μας. Όπως ήταν αναμενόμενο, η κύρια επίδραση της αναστολής MLCK ήταν μια δοσοεξαρτώμενη μείωση στη μέση ICAM-alone προσάρτησης (ANOVA, F (3,4) = 17.601, ρ & lt? 0.0001) (Σχήμα 7α). Ωστόσο, δεν υπήρξαν αλλαγές στις πρώτες τιμές φθορισμού της PMA (ANOVA, F (3,4) = 0.381, p = 0.7686) (Σχήμα 7β) ή NRG (ANOVA, F (3,4) = 0,322, p = 0,8095 ) (Σχήμα 7γ). Δεν υπάρχουν σημαντικές επιπτώσεις σε οποιαδήποτε από τις τρεις παραμέτρους MRVA παρατηρήθηκαν. Είναι επίσης σημαντικό να τονιστεί ότι τα αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν από PLC έναντι αναστολή MLCK δεν ήταν ταυτόσημα. παρεμπόδιση PLC προκάλεσε μειώσεις στις πρώτες τιμές φθορισμού NRG και PMA, γεγονός που υποδηλώνει την ευρεία σημασία του για πολλαπλά κοινά μονοπάτια πρόσφυσης. Σε αντίθεση, η αναστολή MLCK φάνηκε να ασκούν μία δράση περιορίζεται με την αρχική τιμή προσκόλλησης ICAM χωρίς αποτελέσματα επί των πρώτων μέσων τιμών φθορισμού NRG ή ΡΜΑ.

Η χορήγηση του αναστολέα MLCK ML-7 σε DMSO όχημα (n = 5) προκάλεσε μια σημαντική μείωση στην αρχική προσκόλληση στη μέση και υψηλές δόσεις (Α). Αν και αυτό συσχετίστηκε με αυξήσεις στη μέση NRG /οχήματος και σημαίνει PMA /οχήματος (δεν φαίνεται), τα αποτελέσματα αυτά ήταν απλώς μια συνέπεια των μειώσεων στον παρονομαστή καθώς και οι δύο πρώτων PMA (Β) και NRG (C) τιμές φθορισμού παρέμειναν αμετάβλητες. Σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, ** παριστά π & lt? 0,01 και *** παριστά π & lt? 0.001. Σε σύγκριση με την χαμηλή δόση, +++ αντιπροσωπεύει p & lt? 0.001 και ++++ αντιπροσωπεύει p & lt? 0,0001

Η

NRG1α που προκαλείται από διάφορους πρόσφυση είναι βρεγμένο με λεμφοβλάστες που προέρχονται από ασθενείς με σχιζοφρένεια

Δεδομένου προηγούμενη παρατήρησή μας ότι ο ασθενής που προέρχονται από λεμφοβλάστες παρουσίασαν λιγότερο ισχυρή μεταναστευτική απόκριση σε NRG1α και το σημερινό συσχετισμό μεταξύ των μέτρων μετανάστευση και την προσκόλληση μας, είχαμε προβλέψει ότι θα υπάρξει επίσης μια διαφορά MRVA μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. Πράγματι, η NRG /όχημα MRVA ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε λεμφοβλάστες προερχόμενους από ασθενείς σε σύγκριση με εκείνα που προέρχονται από φυσιολογικούς μάρτυρες (ασθενείς (n = 20), 0,520 ± 0,045? Έλεγχοι (n = 20), 0,780 ± 0,044? Ρ = 0.0002) ( Σχήμα 8α και γ). Σε αντίθεση, η απόκριση ΡΜΑ ήταν παρόμοια μεταξύ των ομάδων, υποδεικνύοντας ότι οι λεμφοβλάστες ασθενής προερχόμενα ακόμη διατήρησαν την ικανότητα να διαμεσολαβεί ισχυρή προσκόλληση κυττάρου, αλλά δεν ήταν σε θέση να το κάνουν καταλλήλως σε απόκριση προς NRG1α. Μια σειρά πειραμάτων δόσης-απόκρισης ΡΜΑ διεξήχθησαν για να αποκλείσει την πιθανότητα ότι η έλλειψη των διαφορών μεταξύ των ομάδων ήταν δοσο-ευαίσθητο φαινόμενο? Αυτές οι δοκιμές έδειξαν σχεδόν ταυτόσημες κυματομορφές σε όλα τα υποκείμενα σε όλες τις προσδιορίστηκαν συγκεντρώσεις (Σχήμα S2), υποδηλώνοντας περαιτέρω ότι η απόκριση ΡΜΑ ήταν φυσιολογική στις κυτταρικές γραμμές που λαμβάνονται από ασθενή. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι ΡΜΑ επάγει επίσης διαφορετικά επίπεδα προσκόλλησης στον προσδιορισμό μας, παρόμοια αλλά πιο ακραία από εκείνη του NRG1α. Τόσο το μέτρο MRVA του που προκαλείται από ΡΜΑ προσκόλλησης (ασθενείς (n = 20), 1,561 ± 0,217? Έλεγχοι (n = 20), 1,356 ± 0,121? Ρ = 0.4124) (Σχήμα 8β) και η μέση PMA /όχημα (ασθενείς (n = 20), 2,083 ± 0,120? έλεγχοι (n = 20), 1,980 ± 0,085? ρ = 0,4840) δεν διέφερε μεταξύ των κυττάρων που λαμβάνονται από ασθενή και ελέγχου που προέρχονται από. Δεν υπήρχε διαφορά στη μέση προσκόλληση μεταξύ κυττάρων ICAM προερχόμενων από ασθενή και ελέγχου που προέρχονται από το μη διεγερμένο ICAM-alone κατάσταση.

Η NRG /όχημα MRVA ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε λεμφοβλάστες προερχόμενους από ασθενείς σε σύγκριση με εκείνα που προέρχονται από την κανονική μάρτυρες (Α). PMA /όχημα MRVA ήταν παρόμοια μεταξύ ελέγχου που προέρχονται από κυτταρικές γραμμές (Β) που λαμβάνονται από ασθενή και. Η σχετική ανεπάρκεια σε κύτταρα που λαμβάνονται από ασθενή δεν φάνηκε να απομονωθεί για προσκόλληση ή απόσπασης, αλλά ήταν ενδεικτικό μιας συνολικής πιο στενόχωρα απόκριση με λιγότερη διακύμανση από τη βασική γραμμή προσκόλληση σε απόκριση σε NRG1α (C). *** Αντιπροσωπεύει p & lt?. 0.001

Η

COMT γονότυπο προβλέπει το εύρος της διακύμανσης στην NRG1α που προκαλείται από την προσκόλληση

Με δεδομένη τη σχέση των πολυμορφισμών μονού νουκλεοτιδίου σε COMT (val108 /158met, rs4680 ) και NRG1 (rs6994992) για να NRG1α που προκαλείται από τη μετανάστευση των κυττάρων που είχε καθοριστεί προηγουμένως, [7], επιδιώξαμε να καθορίσει εάν NRG1α που προκαλείται από την προσκόλληση των κυττάρων έδειξε επίσης τέτοιες ενώσεις. Η παρουσία του αλληλόμορφου COMT val κίνδυνος που σχετίζεται με τη σχιζοφρένεια παρουσίασαν ισχυρή τάση προς την πρόβλεψη της μικρότερης NRG1α επαγόμενη MRVA σε ολόκληρο το δείγμα με παρόμοια αποτελέσματα και στις δύο ομάδες (μη ζευγαρωμένο t-test, ρ = 0.0632) (Σχήμα 9α). ANOVA πραγματοποιήθηκε με διαγνωστική ομάδα και τον γονότυπο, ως ανεξάρτητοι παράγοντες δεν αποκάλυψαν γονότυπο από αλληλεπιδράσεις διάγνωση είτε για το γονίδιο. Επιπλέον, δεν υπήρξε καμία επίδραση του COMT γονότυπου επί προκαλείται από ΡΜΑ MRVA (μη ζευγαρωμένο t-test, ρ = 0.8727). Λόγω της χαμηλής συχνότητας ανηλίκου αλληλόμορφο στο rs6994992 NRG1, η μελέτη μας ήταν underpowered να δοκιμάσει για μια συσχέτιση με αυτόν τον SNP.

COMT, ένα υποθετικό γονίδιο ευαισθησίας τόσο για τη σχιζοφρένεια και μεταστατικό καρκίνο, στο παρελθόν ήταν που φαίνεται να έχουν επιπτώσεις γονότυπο για τη μετανάστευση των κυττάρων με το γονότυπο κινδύνου rs4680 V /V δείχνει την πιο εξασθενημένη μετανάστευσης. Σε δεδομένα πρόσφυση μας (n = 40), υπήρχε μια ισχυρή τάση (p = 0,0632) προς μειώθηκε NRG1α που προκαλείται MRVA της ομοζυγώτες κινδύνου σε σύγκριση με ομοζυγώτες μη κινδύνου (δεν ετεροζυγώτες κυτταρικές σειρές διατηρούνται).

Η

Συζήτηση

Έχουμε παρουσιάσει μια σειρά από μελέτες που παρέχουν αποδείξεις ότι NRG1α ενεργοποίηση των λεμφοβλαστών Β προκαλεί μια χρονικά μεταβαλλόμενες απάντηση κυτταρική προσκόλληση που διαμεσολαβείται από το erbB2 /PI3K /Akt1 οδού και το οποίο δεν είναι φυσιολογικό στα κύτταρα που προέρχονται από ασθενείς με σχιζοφρένεια και επηρεάζονται από την COMT Val /συναντήθηκαν γονότυπο. Για τις γνώσεις μας, αυτά είναι τα πρώτα στοιχεία δείχνουν ότι NRG1α επάγει προσκόλληση σε λεμφοβλάστες Β σε μία δοκιμασία κυτταρικής προσκόλλησης, αποκαλύπτοντας εξαρτώμενη από τον χρόνο διακυμάνσεις των καθαρών πρόσφυση. Στις μελέτες μας, η MRVA αυτού NRG1α επαγόμενης απόκρισης προσκόλληση έχει προφανή βιολογική σημασία το ότι προβλέπει τόσο το βαθμό της απόκρισης κυτταρικής μετανάστευσης για NRG1α καθώς και οι διαφορές μεταξύ των περιπτώσεων σχιζοφρένειας και φυσιολογικά άτομα ελέγχου. Με τη σειρά του, ο ίδιος ο MRVA μπορεί να προβλεφθεί από ένα μόνο πολυμορφισμό νουκλεοτιδίου εντός COMT, το οποίο εμπλέκεται επίσης στην μεταστατικό καρκίνο. Ενώ εξωγενές NRG1α αυξάνει την κυτταρική επιφάνεια έκφραση του CD18 ιντεγρίνης (Σχήμα S4), η σταθερή φύση αυτού του αποτελέσματος πάροδο του χρόνου υποδεικνύει ότι αυτή η αυξημένη έκφραση επιφανείας δεν είναι άμεσα υπεύθυνη για διαμεσολάβηση της χρονικά μεταβαλλόμενες απόκριση πρόσφυσης. Μάλλον, αυτό NRG1α επαγόμενη απόκριση προσκόλληση εξαρτάται από σηματοδότηση μέσω μονοπατιών erbB2, ΡΙ3Κ, και Akt. PLC και MLCK σηματοδότηση παίζουν επίσης ρόλο στην πρόσφυση, αλλά δεν ασκούν NRG1α-ειδικές επιδράσεις.

Μεθοδολογικές εκτιμήσεις

Καθώς η χρονο-εξαρτώμενη μεταβολή στην κυτταρική προσκόλληση σε απόκριση προς NRG1 είναι η κρίσιμη φαινόμενο επί των οποίων η εργασία που αναφέρεται εδώ είναι βασισμένη, είναι σημαντικό να επικυρώνει ότι αυτή η παραλλαγή αντιπροσωπεύει μια πραγματική βιολογική δράση και δεν είναι απλώς «θόρυβο». Πράγματι, θα μπορούσε να υποστηριχθεί ότι, δεδομένου ότι το μέτρο μας βασίζεται σε ένα πληθυσμό κυττάρων που πιθανόν είναι δεν ομοιογενής σε σχέση με καταστάσεις συνημμένο, φάσεις του κυτταρικού κύκλου, και άλλα βιολογικά φαινόμενα, η MRVA είναι πιο πιθανό τυχαία από όχι. Έχουμε εκτελέσει μια σειρά από λεπτομερή πειράματα που δείχνουν με πειστικό τρόπο και με συνέπεια ότι αυτό το διαφορετικό πρόσφυση δεν είναι τυχαία: συγκεκριμένα, 1) ιδιαίτερη χρονική πρότυπα σύνδεση και αποσύνδεση, ενώ δεν είναι εγγενείς στον ίδιο το μη διεγερμένο κύτταρο, φαίνεται να είναι σχετικά συντηρημένες όταν τα κύτταρα από το ίδια κυτταρική γραμμή κάτω από τις ίδιες συνθήκες, ταυτόχρονα υποβάλλονται σε συγκεκριμένα ερεθίσματα που αλλάζουν κατάσταση προσάρτησή τους (Σχήμα S2)? 2) ο MRVA είναι εξαιρετικά αξιόπιστος εντός μιας κυτταρικής γραμμής που μελετήθηκαν επανειλημμένα σε διαφορετικές ημέρες (Σχήμα 1)? 3) Η MRVA επηρεάζεται σε έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο από διάφορες σχετικές αναστολείς οδού σηματοδότησης (Σχήματα 3-7)? 4) Η MRVA επάγεται από NRG1 προβλέπει άλλα φαινόμενα NRG1 που σχετίζονται με αυτά τα κύτταρα, π.χ.