Αφηρημένο

Η καλοήθης υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) και το καρκίνωμα του προστάτη (ΚΓΠ) συνδέονται με τη γήρανση και την παρουσία των ανδρογόνων, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα ανδρογόνα ρυθμίζονται τα γονίδια παίζουν σημαντικό ρόλο σε αυτές τις κοινές ασθένειες. Ανδρογόνων ρύθμιση της ανάπτυξης και της ανάπτυξης του προστάτη εξαρτάται από την παρουσία του ανέπαφου αλληλεπιδράσεων επιθηλιακών-στρωματικών. Περαιτέρω, η προστατική στρώμα εμπλέκεται σε ΒΡΗ. Αυτό υποδηλώνει ότι τα επιθηλιακά κυτταρικές σειρές είναι ανεπαρκή για τον εντοπισμό των ανδρογόνων ρυθμίζονται τα γονίδια που θα μπορούσαν να συμβάλουν στην ΚΥΠ και το καπάκι και τα οποία θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως πιθανή κλινική βιοδείκτες. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε ένα ανθρώπινο μοντέλο ξενομοσχεύματος προστάτη για να ορίσετε ένα προφίλ των γονιδίων που ρυθμίζονται

in vivo

από ανδρογόνα, με έμφαση στον εντοπισμό υποψηφίων βιοδεικτών. Καλοήθης ζώνη μετάβασης (ΤΖ) ιστός ανθρώπινου προστάτη από ρίζα προστατεκτομές μεταμοσχεύθηκε στην τοποθεσία κάψουλα υπο-νεφρική άθικτων ή ευνουχισμένων αρσενικών ποντικών με ανοσοανεπάρκεια, που ακολουθείται από την απομάκρυνση ή την προσθήκη των ανδρογόνων, αντίστοιχα. ανάλυση μικροσυστοιχιών RNA από αυτούς τους ιστούς χρησιμοποιήθηκε για την ταυτοποίηση γονιδίων που ήταν? 1) υψηλή έκφραση σε προστάτη, 2) είχαν σημαντικές αλλαγές την έκφραση σε απόκριση σε ανδρογόνα, και, 3) κωδικοποιούν εξωκυτταρικές πρωτεΐνες. Επελέγησαν συνολικά 95 γονίδια που πληρούν αυτά τα κριτήρια για την ανάλυση και την επικύρωση της έκφρασης σε ιστούς προστάτη ασθενούς χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου. Τα επίπεδα έκφρασης αυτών των γονιδίων μετρήθηκαν σε ομαδοποιήθηκαν RNAs από ανθρώπινους ιστούς προστάτη με κυμαινόμενη σοβαρότητα της ΚΥΠ παθολογικών αλλαγών και το καπάκι ποικίλης σκορ Gleason. Εντοπίστηκαν Ένας αριθμός των ανδρογόνων γονιδίων που ρυθμίζονται. Επιπλέον, ένα υποσύνολο αυτών των γονιδίων υπερ-εκφράζεται σε RNA από κλινικές ιστούς ΒΡΗ, και τα επίπεδα των πολλών βρέθηκαν να συσχετίζονται με την κατάσταση της νόσου. Τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν τη σκοπιμότητα, και ορισμένα από τα προβλήματα, του χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού για να χαρακτηρίσει τα προφίλ έκφρασης των ανδρογόνων ρυθμίζεται από ανέπαφη ανθρώπινων ιστών του προστάτη

Παράθεση:. Αγάπη HD, Booton SE, Boone BE, Breyer JP , Koyama Τ, Revelo MP, et al. (2009) ανδρογόνων ρυθμιζόμενα γονίδια στο ανθρώπινο προστάτη ξενομοσχεύματα σε ποντίκια: Σχέση με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη και του καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 4 (12): e8384. doi: 10.1371 /journal.pone.0008384

Επιμέλεια: Μιχαήλ Β Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 Αυγούστου, 2009? Αποδεκτές: 18 του Νοέμβρη του 2009? Δημοσιεύθηκε: 21 Δεκ 2009

Copyright: © 2009 Αγάπη et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο υποστηρίζεται από το Εθνικό Ινστιτούτο διαβήτη και του πεπτικού και νεφρικά νοσήματα (ΝΙϋϋΚ) MPSA Κοινοπραξία επιχορήγηση UO1-DK63587, Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (NIH) DK067049 επιχορήγηση και τα Vanderbilt μικροσυστοιχιών κοινόχρηστο πόρο, που υποστηρίζεται από το Vanderbilt Ingram Κέντρο Καρκίνου, Ρ30 επιχορήγηση CA68485, και το Vanderbilt Digestive Disease Κέντρο, χορηγούν Ρ30 DK58404, και το Vanderbilt Κέντρο όρασης, να χορηγούν P30 EY08126. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η καλοήθης υπερπλασία του προστάτη (ΚΥΠ) είναι εξαιρετικά συχνή σε γήρανση σε άνδρες, συμβάλλοντας με το πρότυπο της νοσηρότητας γνωστή ως συμπτώματα από το κατώτερο ουροποιητικό σύστημα (LUTS) και με αποτέλεσμα τη σημαντική ετήσια έξοδα της υγειονομικής περίθαλψης [1]. Παρά τη διαθεσιμότητα των ιατρικών και χειρουργικών θεραπειών για την BPH εξακολουθεί να υπάρχει ανεπαρκής κατανόηση των διαδικασιών που εμπλέκονται στην καλοήθη παθολογική ανάπτυξη του ανθρώπινου προστάτη

in vivo

[2]. Οι εν λόγω πληροφορίες θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν για να προβλέψει καλύτερα ποιοι ασθενείς μπορούν να επωφεληθούν από την τρέχουσα ιατρική θεραπεία ή είναι πιο πιθανό να εξελιχθεί σε απαιτεί χειρουργική επέμβαση, καθώς και να ενημερώσει την επιλογή των νέων ιατρικών προσεγγίσεων που στοχεύουν νέες οδούς.

καλοήθη υπερπλασία του προστάτη εμφανίζεται με τους άνδρες είναι η ηλικία, και ανδρογόνα που απαιτούνται για την ανάπτυξη της πάθησης [3], [4]. ΒΡΗ χαρακτηρίζεται παθολογικά από αδενικό και στρωματικά υπερπλασία στη μεταβατική ζώνη του προστάτη (ΤΖ) [5]. Η αφύπνιση του εμβρυϊκού επαγωγικό δυναμικό στον προστάτη στρώμα έχει προταθεί ως αίτιο της ΒΡΗ [3], [5], [6], [7]. Αυτό βασίζεται στην ιδέα ότι η ανάπτυξη του προστάτη αποτελέσματα από την τοπική αλληλεπίδραση των αυξητικών παραγόντων μεταξύ των στοιχείων επιθηλιακών και στρωματικών του οργάνου υπό την επήρεια των όρχεων ανδρογόνων, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα ανδρογόνα ρυθμιζόμενα γονίδια παίζουν σημαντικό ρόλο στην ασθένεια. Αυτή η υπόθεση υποστηρίζεται από σημαντικές πειραματικές ενδείξεις, ιδίως από τα μοντέλα ανασυνδυασμό ιστό [8], [9], [10].

Προστάτη φλεγμονή έχει επίσης εμπλακεί στην παθογένεση της ΒΡΗ [11], [12] , [13], [14]. Η φλεγμονή συσχετίζεται με την σοβαρότητα της ΒΡΗ, και οι Mtops (Medical Therapy του προστάτη Συμπτώματα) μελέτη δείχνει ότι ο κίνδυνος εξέλιξης ΒΡΗ και οξεία κατακράτηση ούρων είναι μεγαλύτερη στους άνδρες με προστάτη φλεγμονής [13], [15]. Αυξημένη φλεγμονή του προστάτη μπορεί επίσης να οδηγήσει στην διάρρηξη των επιθηλιακών δομής και της αρχιτεκτονικής, με αποτέλεσμα την αύξηση των επιπέδων του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) στον ορό.

προστάτη ανάπτυξη, διαφοροποίηση και λειτουργία των ενηλίκων είναι εξαρτάται από την παρουσία ανδρογόνων. Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι η ανάπτυξη του ελέγχου των ανδρογόνων και της διαφοροποίησης μέσω μεσεγχυματικά-επιθηλιακά αλληλεπιδράσεις. Στον ενήλικα προστάτη, οι ανδρογόνα πιστεύεται ότι δρουν μέσω του υποδοχέα στρωματικών ανδρογόνων (AR) για τη διατήρηση της ανάπτυξης ηρεμίας αδένα [16], [17] και μέσω του AR επιθηλιακών να εκμαιεύσει την εκκριτική διαφοροποιημένης λειτουργίας του προστατικού επιθηλίου [18] . Σε αντίθεση με τη φυσιολογική ανάπτυξη-αδράνεια, υπερπλαστική ανάπτυξη του αδενικό επιθήλιο και στρώμα εντός της ζώνης μετάβασης στην ΒΡΗ αντιπροσωπεύει μεταβολές στην ισορροπία μεταξύ της κυτταρικής διαίρεσης και του θανάτου. Καλοήθη υπερπλασία του προστάτη μπορεί έτσι να ανακεφαλαιώσω ανάρμοστα σημαντικά γεγονότα του προστάτη αναπτυξιακή βιολογία. Τα γονίδια μεσεγχυματικά και επιθηλιακά ρυθμίζονται από ανδρογόνα τα οποία είναι σημαντικά σε μη φυσιολογική ανάπτυξη του προστάτη σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη παραμένουν να καθοριστούν πλήρως. Μελέτες χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες cDNA υψηλής απόδοσης με ανδρογόνων που διεγείρεται κυτταρικές γραμμές καρκινώματος είναι απίθανο να είναι σχετικές είτε προστάτη ανάπτυξη ή καλοήθη υπερπλασία του προστάτη. Μετασχηματισμένα επιθηλιακά κύτταρα σε καλλιέργεια έχει μια σημαντικά διαφορετική φαινότυπο, και συνδέονται proteome, από τους

in vivo

ομολόγους. Επιπλέον τέτοιες προσεγγίσεις δεν επιτρέπουν την ταυτόχρονη ανίχνευση των βασικών γονιδίων στρωματικών κυττάρων ή για γονίδια που μπορεί να διαμορφωθεί ως συνέπεια της αποφασιστικής σημασίας αλληλεπιδράσεις επιθηλιακών-στρωματικών.

Περισσότερα βιολογικώς σχετικών μελετών που χρησιμοποιούν ανάλυση cDNA μικροσυστοιχιών των ιστών ΒΡΗ έχουν έχουν αναφερθεί. Luo, et al. ανέλυσε την έκφραση του 6500 ανθρώπινων γονιδίων στον καρκίνο του προστάτη και ιστών ΒΡΗ από ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική προστατεκτομή ή διαουρηθρική εκτομή του προστάτη (TURP) [19], [20]. Ένας αριθμός γονιδίων βρέθηκαν να είναι προς τα πάνω ρυθμισμένη με συνέπεια σε ΒΡΗ σε σύγκριση με κανονικό προστάτη. Αυτές περιλάμβαναν

IGF1

,

IGF2

,

TGFB3

,

ΒΜΡ5

,

ΜΜΡ2

,

COX2

, και

GSTM5

. Ωστόσο, αυτές οι μελέτες χρησιμοποίησαν ιστούς εμπλουτισμένα για επιθηλιακά κύτταρα. Ως αποτέλεσμα, οι αναλύσεις θα μπορούσαν να έχουν χάσει δυνητικά κρίσιμος γονίδια που εκφράζονται κυρίως σε στρωματικά κύτταρα. Αυτές οι μελέτες δεν εξέτασε εάν οποιοδήποτε από τους ασθενείς είχαν υποβληθεί σε προηγούμενη θεραπεία εκτομής ανδρογόνου. Προσεγγίσεις που βασίζονται σε RNA που εξάγεται από τους ιστούς, επίσης, δεν επιτρέπουν την άμεση χειραγώγηση της ορμονικής διέγερσης, περιορίζοντας τη δυνατότητα να ανιχνεύει πιο άμεσα γονίδια που ρυθμίζονται από τα ανδρογόνα, τα οποία θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως προγνωστικοί παράγοντες ανταπόκρισης σε θεραπείες που στοχεύουν ανδρογόνο διέγερση ή νέων στόχων για την εναλλακτική φαρμακευτική θεραπεία σε αυτή τη διαδικασία της νόσου ανδρογόνων οδηγείται.

σε μια άλλη σχετική μελέτη, τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης σε προστάτη στρωματικά κύτταρα από διαφορετικές ζώνες του προστάτη αναλύθηκαν συγκρίνοντας φυσιολογικό και νοσούντων ιστών [21]. Ένας αριθμός γονιδίων βρέθηκαν να εκφράζονται διαφορικά μεταξύ καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη και φυσιολογικό στρώμα μεταβατικής ζώνης (ΤΖ) στρώμα. Ενώ πολλές δυνητικά σημαντικό γονίδια στρωματικά πιστοποιήθηκαν που μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, οι μελέτες αυτές χρησιμοποιήθηκαν απομονωμένα στρωματικά κύτταρα καλλιεργήθηκαν

in vitro

, η οποία θα μπορούσε να οδηγήσει σε αλλοιωμένη πρότυπα γονιδιακής έκφρασης από εκείνους που θα δει

in vivo

.

στην παρούσα μελέτη χρησιμοποιήσαμε ολιγονουκλεοτιδίων μικροσυστοιχίες για να εξετάσει την έκφραση των ανδρογόνων γονιδίων που ρυθμίζονται σε καλοήθη ιστό ανθρώπινου προστάτη αυξάνονται ως ξενομοσχεύματα σε σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια (SCID) [22]. Η προσέγγιση αυτή διατηρεί το βιολογικώς σχετικό αλληλεπιδράσεις του επιθηλίου και στρώματος όπως συμβαίνει

in vivo

και επιτρέπει την άμεση χειραγώγηση των ανδρογόνων, είτε με τον ευνουχισμό ή ορμονική συμπλήρωση του ξενιστή. Το προκύπτον σύνολο δεδομένων στη συνέχεια αναλύθηκε για την αναγνώριση σχετικώς υψηλά εκφραζόμενα γονίδια τα οποία ρυθμίζονται ανδρογόνων. Σε μια προσπάθεια να εντοπίσει πιθανούς βιοδείκτες δεκτικά σε μελλοντικές δοκιμές με βάση το αίμα, δόθηκε έμφαση στην γονίδια των οποίων τα προϊόντα ήταν γνωστά ή προβλέπεται να είναι εξωκυτταρικό. Η έκφραση αυτών των γονιδίων στη συνέχεια αναλύθηκε με χρήση qRT-PCR με πισίνες cDNA που προέρχεται από ιστούς από ασθενείς με ελάχιστη, ήπια, μέτρια και σοβαρή αλλαγές ΒΡΗ παθολογία, ή με καπάκι, για να καθοριστεί εάν η έκφραση συσχετίζεται με την κατάσταση της ασθένειας.

υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

De-εντοπίστηκαν δείγματα ιστών ανθρώπινου προστάτη ελήφθησαν από τον ιστό Vanderbilt Απόκτηση πυρήνα μέσω του Τμήματος Παθολογίας, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα Vanderbilt IRB. Όλοι οι ασθενείς που υπογράφηκε ενημερωμένη συγκατάθεση για την έγκριση της χρήσης των ιστών τους για ερευνητικούς σκοπούς απροσδιόριστη. Όλα τα πειράματα με ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με το νόμο περί προστασίας των ζώων και εγκρίθηκε από την επιτροπή του Vanderbilt ζώων Φροντίδα και Χρήση. φροντίδα των ζώων /πρόνοιας και κτηνιατρική εποπτεία που παρέχονται από τον Vanderbilt Divison της φροντίδας των ζώων.

ιστοπαθολογική ανάλυση και Δείγμα

Για να προσδιοριστεί η σοβαρότητα των αλλαγών παθολογίας ΚΥΠ για τις περιπτώσεις που χρησιμοποιούνται για την εκχύλιση RNA, TZ περιοχές που πλήττονται από αδενικό και στρωματικά υπερπλασία περιγράφηκαν σε ολόκληρα τμήματα mount από ριζική προστατεκτομή (RP) δείγματα που λαμβάνονται μέσω του Τμήματος Παθολογίας, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα Vanderbilt IRB. όγκοι ΤΖ προσδιορίστηκαν με επιπεδομετρία με ένα ψηφιοποιημένο ταμπλέτα γραφικών, με τρόπο πανομοιότυπο με ρουτίνα προσδιορισμού μας του συνολικού όγκου του όγκου σε ρετροϊών [23], [24], [25]. Προτίμηση δόθηκε σε περιπτώσεις με μικρό όγκο περιφερειακή ζώνη (ΡΖ) όγκους, έτσι ώστε οποιαδήποτε συνολική διόγκωση του προστάτη θα είναι λόγω της διεύρυνσης ΤΖ και να μειώσει την πιθανότητα ότι οι ορμονικές μεταβολισμός σημαίνουσα ενδεχομένως να ΒΡΗ θα μεταβληθεί από καρκίνο του προστάτη μεγάλο όγκο [26] . ΚΥΠ κατηγοριοποιήθηκε από 37 περιπτώσεις ως ελάχιστη (min), ήπια, μέτρια, ή σοβαρή, με βάση τα ακόλουθα κριτήρια. Min /έλεγχος: ο όγκος TZ & lt? 4,5 εκατοστά

3, του προστάτη βάρος & lt? 34 g, Δεν οζίδια BPH? Ήπια BPH: όγκος TZ 4,5 έως 8,99 cm

3 ή του προστάτη βάρος 34 έως 44,99 g ή BPH οζίδια? Μέτρια BPH: όγκος TZ 9 έως 16,99 cm

3 ή του προστάτη βάρος 45 έως 59,99 g και BPH οζίδια? Σοβαρή BPH: όγκος TZ ≥17 cm

3 ή του προστάτη βάρος ≥60 g και οζίδια BPH. Προστάτη καρκινικούς ιστούς είχαν ταξινομηθεί ως μετρίως διαφοροποιημένων (Gleason σκορ 5-6) ή κακώς διαφοροποιημένο (Gleason σκορ 8-9). Καταψύχθηκαν φρέσκα πυρήνες ιστού που προμηθεύονται όπως περιγράφεται παρακάτω υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για RNA και ιστολογία [27].

Υπο-Νεφρική ξενομεταμόσχευση της Fresh Ανθρωπίνων TZ Δείγματα και ορμονικές Ablation Στρατηγικές

αποχαρακτηριστούν ιστό ανθρώπινου προστάτη δείγματα ελήφθησαν από τον ιστό Vanderbilt Απόκτηση πυρήνα μέσω του Τμήματος Παθολογίας, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα Vanderbilt IRB. πυρήνες 6 mm διάμετρος που λαμβάνεται διεγχειρητικά από νωπά δείγματα RP είχαν αγοραστεί από τα δεξιά και αριστερά ΤΖ και ΡΖ από τα μέσα προς τη βάση και από τα μέσα προς κορυφή όπως περιγράφεται [27] και ιστολογική ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε κατεψυγμένες τομές διατομών πλήρους πάχους. Πυρήνες προσδιορίστηκε να περιέχει φυσιολογικό ΤΖ ιστού κόπηκαν σε κομμάτια περίπου 2-3 ​​mm σε πάχος και 4-6 κομμάτια κατόπιν ξενο-μεταμόσχευσις κάτω από τις νεφρικές κάψουλες των σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια (SCID) ποντικούς ενήλικα αρσενικά [CB-17 /IcrHsd-SCID ( Harlan, Indianapolis, ΙΝ)]. ΤΖ ιστοί από καθένα από έξι ασθενείς ξενο-μεταμόσχευσις σε σετ των 10 ευνουχισμένα ποντίκια SCID με ορισμένες ομάδες ποντικών που έλαβαν ιστού από δύο διαφορετικούς ασθενείς όταν είναι διαθέσιμα, εμβολιάζονται αμφίπλευρους νεφρούς. Πέντε ποντικοί από κάθε ομάδα δόθηκε υποδόρια εμφυτεύματα που αποτελείται από ένα μήκος 2,5 cm από silastic σωλήνωσης (ID 1,98 mm χ 3,18 OD mm, που Dow Corning, Midland, ΜΙ) το οποίο περιείχε 25 mg τεστοστερόνης (PCCA, Houston, ΤΧ). Τα άκρα του σωλήνα silastic σφραγίστηκαν με σιλικόνη τύπου Α ιατρική κόλλα (Dow Corning). Μια μικρή ποσότητα αραβοσιτελαίου προστέθηκε πριν από την σφράγιση του σωλήνα για να διευκολύνει τη διάλυση του τεστοστερόνης. Μετά επιτρέποντας τα αλλομοσχεύματα να καθιερώσει για ένα μήνα, τα εμφυτεύματα απομακρύνθηκαν από τις τεστοστερόνη συμπληρώνονται ποντίκια, και τα σφαιρίδια 25 mg τεστοστερόνης (που παράγεται με Parr Pellet Press, μοντέλο 2816 με 4,5 χιλιοστά πεθάνει, Parr Instrument Company, Moline, IL) εμφυτεύθηκαν υποδορίως στα ποντίκια που δεν είχαν λάβει τεστοστερόνη. Οι ποντικοί ελέγχου θυσιάστηκαν κατά τη στιγμή της προσθήκης ανδρογόνου ή την αφαίρεση, και τα υπόλοιπα ποντίκια από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν στις 1, 3, 7, και 14 ημέρες μετά ανδρογόνου προσθήκη ή αφαίρεση. Συγκομιδής ξενομοσχεύματα γρήγορα αποσυντίθενται υπό συνθήκες μεγέθυνσης και καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο. Κατεψυγμένα ιστοί αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C.

RNA Εκχύλιση και cDNA μικροσυστοιχίες

εκχύλιση RNA από καταψύχθηκαν ιστούς TZ και συλλέχθηκαν ξενομοσχεύματα διεξήχθη χρησιμοποιώντας μία τροποποίηση προηγουμένως περιγραφείσες μεθόδους [27] , [28]. Εν συντομία, το RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD), ακολουθούμενη από μία δεύτερη απομόνωση RNA χρησιμοποιώντας RNeasy (Qiagen Inc., Valencia, CA) με DNAse θεραπεία. RNA δείγματα αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. της ποιότητας του RNA αναλύθηκε με την Vanderbilt μικροσυστοιχιών κοινόχρηστο πόρο (VMSR) χρησιμοποιώντας φασματοφωτομετρία (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE) και βιοανάλυση (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). RNA δείγματα των ξενομοσχευμάτων υποβλήθηκαν στην VMSR για ενίσχυση (NuGen Systems, Inc., Traverse City, MI) και την επισήμανση, που ακολουθείται από υβριδισμό με μικροσυστοιχίες εκτυπώνονται από το ανθρώπινο Release 2.0 OligoLibrary, (Compugen, San Jose, CA), που περιέχει 28830 μοναδικά γονίδια από ένα σύνολο 29.134 ολίγο. Το RNA αναφοράς που δημιουργήθηκε από τη συγκέντρωση των δειγμάτων RNA από δύο ευνουχισμού και ανδρογόνων αντιμετωπίζονται ιστούς από ποντίκια ελέγχου την ημέρα μηδέν.

Στατιστική Ανάλυση των δεδομένων μικροσυστοιχιών

Λόγω της σημαντικής μεταβολής εγγενής σε μεμονωμένους ασθενείς, η χρόνος μηδέν για κάθε δείγμα ιστού χρησιμοποιείται ως ελέγχου ή δείγματος αναφοράς αντί για ένα πρότυπο δείγμα αναφοράς σε ολόκληρο το πείραμα. Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν με Lowess χρησιμοποιώντας το λογισμικό GeneTraffic (Iobion Πληροφορικής, La Hoya, CA) και εισάγονται GeneSpring (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) για μεταγενέστερη ανάλυση. Αρχικά, εξετάστηκαν μόνο ημέρα 0 και την ημέρα 14 χρονικά σημεία, με γονίδια που είχαν τουλάχιστον μια 1.5-φορές προς τα πάνω ρύθμιση της ημέρας 14 δείγμα vs. ημέρα 0 επιλεγεί, η οποία απέδωσε 5.679 γονίδια /ανιχνευτές. Μια ανάλυση ΑΝΟνΑ χρησιμοποιήθηκε για την ταυτοποίηση των γονιδίων με σημαντικές διαφορές στην έκφραση, με ένα

P

-τιμή αποκοπής 0,05, υποδεικνύοντας 284 αναμένεται ψευδώς θετικά γονίδια. Μια Welch t-test χρησιμοποιήθηκε στη συνέχεια για τον εντοπισμό γονιδίων με σημαντικές διαφορές (

P

-τιμή μικρότερη από 0.05) σε έκφραση μεταξύ των ημερών 0 και 14 κατά μήκος όλων των δειγμάτων ιστού. Αυτή η λίστα στη συνέχεια διηθήθηκε με αξία έκφραση σήματος, διατηρώντας την κορυφή 95% του σήματος δυναμικής περιοχής, αποδίδοντας 784 γονίδια /ανιχνευτές. Αυτή η μέθοδος ανάλυσης έχει ανεξάρτητα πραγματοποιήθηκε τόσο για την ευνουχισμού και συνόλων δεδομένων τεστοστερόνης συμπληρωθούν. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις των δεδομένων των μικροσυστοιχιών εκτελέστηκαν από το VMSR

Προσδιορισμός των Στόχων βιοδεικτών υποψήφια

Πιθανά υποψήφια γονίδια συστηματικά επιλεγεί με επικαλυπτόμενες κριτήρια βιοπληροφορική, που απασχολούν WebGestalt:. 1) ανδρογόνων-ρυθμίζεται (1,5 φορές σε ή

P

≤0.05 στα δεδομένα μικροσυστοιχιών μας), 2) που εκφράζεται σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα στον προστάτη σε σχέση με άλλους ιστούς (

P

≤0.05 από υπεργεωμετρική τεστ), και 3) εξωκυττάριο χώρο ή κυτταρική επιφάνεια (κατηγορίες Gene οντογένεση). Τα κριτήρια αυτά έδωσαν μια σειρά γονιδίων που περιλαμβάνονται στο παρελθόν επικυρωμένων βιοδεικτών, συμπεριλαμβανομένων των

KLK3

,

ACPP

, και

MSMB

. Διάφορα πρόσθετα γονίδια που είναι γνωστό ή υπάρχουν υπόνοιες ότι εμπλέκονται σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη βασίζεται σε προηγούμενες μελέτες είχαν «με το χέρι» περιλαμβάνονται για περαιτέρω μελέτη:

IGF1

,

IGF1R

,

TGFB1

,

TGFB3

,

TGFBR1

, και

TGFBR2

. Ένα σύνολο 84 στόχους γονιδίου (και το

18S rRNA γονιδίου

ελέγχου καθαριότητας) επιλέχθηκαν για την επιβεβαίωση της έκφρασης σε δείγματα ασθενών, αρκετές αξιολογούνται με περιττές ανιχνευτές.

Real-Time qRT-PCR Επιβεβαίωση

ένα TaqMan χαμηλής πυκνότητας κάρτα μικρορροϊκή σειρά, σχήμα 96α (Applied Biosystems, Foster City, CA) σχεδιάστηκε για να προσδιοριστεί υποψήφια γονίδια από τα γονίδια ανάλυσης μικροσυστοιχιών και ελέγχου, για συνολικά 96 στόχους. 1 μg του ολικού RNA μεταγράφηκε ανάστροφα σε cDNA μονής έλικας με χρήση υψηλής χωρητικότητας cDNA Archive Kit (Applied Biosystems). Μετά την σύνθεση cDNA, RNA αποικοδομήθηκε με αλκαλική υδρόλυση, ρυθμισμένο σε ουδέτερο ρΗ, και cDNA καθαρίστηκε με προσρόφηση σε γέλη πυριτίου (κιτ καθαρισμού QIAquick PCR, Qiagen Inc.) και εκλούεται σε 64 μΙ 10 mmol /L Tris HCl (ρΗ 8.5) . ποσότητες cDNA μετρήθηκαν φασματοφωτομετρικά (NanoDrop ND-1000, NanoDrop Technologies). cDNA αραιώθηκε σε 0,25 ng /μl σε 1Χ TaqMan καθολική PCR Master Mix (Applied Biosystems), φορτώνονται στο μικρορροϊκή κάρτα, σφραγίζεται και φυγοκεντρήθηκε. Κάρτες συνέχεια εναλλάσσονται σε ένα σύστημα ανίχνευσης αλληλουχίας ΑΒΙ Prism 7900HT, και τα δεδομένα αναλύθηκαν με SDS 2,1 λογισμικό (Applied Biosystems). Μετά την κανονικοποίηση προς το ενδογενές ελέγχου, 18S rRNA, τα επίπεδα εκφράστηκαν σε σχέση με τον βαθμονομητή πισίνα ελέγχου RNA (πάσο αλλαγή). RNAs που παρασκευάζεται από κάθε κατηγορία των ιστών ΒΡΗ συνενώθηκαν από 5-10 ασθενείς. Έλεγχος RNA συνενώθηκε από ασθενείς χωρίς σημαντική επέκταση ΤΖ. Η ανάλυση περιελάμβανε τέσσερις επαναλήψεις για τις ήπιες και σοβαρές πισίνες καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, καθώς και τα μετρίως διαφοροποιημένων και φτωχά διαφοροποιημένα πισίνες του καρκίνου του προστάτη, και οκτώ επαναλήψεις για τον έλεγχο και μέτρια πισίνες BPH.

ανοσοϊστοχημική χρώση

δείγματα ανθρώπινου ιστού προστάτη από τα ενσωματωμένα σε παραφίνη ολόκληρο μπλοκ mount από τους 43 ασθενείς που αρχικά χαρακτηρίστηκαν για ΒΡΗ παθολογία σοβαρότητα και χρησιμοποιούνται για αντίστοιχες TZ RNA που προέρχεται ελήφθησαν από τον ιστό Vanderbilt πυρήνα προσκτήσεως μέσω του Τμήματος παθολογίας και μικροσυστοιχίες ιστό παρήχθησαν με μία από οι συγγραφείς (MPR). Οι μικροσυστοιχίες περιείχε τρία δείγματα πυρήνα 0,6 χιλιοστών, δύο από την TZ και ένας από PZ μακριά από τον καρκίνο που εμπλέκονται περιοχή. Η χρώση τομών ιστού διεξήχθη χρησιμοποιώντας μία προηγουμένως περιγραφέν πρωτόκολλο [29]. Τμήματα (5 μm) κόπηκαν και τοποθετήθηκαν σε γυάλινες πλάκες φορτισμένη. Μετά αποπαραφίνωση και την επανυδάτωση, τα τμήματα του ιστού υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου με θέρμανση σε φούρνο μικροκυμάτων για 10 λεπτά στο Vector Η-3300 διάλυμα αποκάλυψη αντιγόνου (1:100? Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA). Τα πλακίδια επωάστηκαν στη συνέχεια σε υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% εντός μεθανόλης επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT), που ακολουθείται από μια επώαση 1 ώρας σε 5% ορό κατσίκας σε PBS σε RT. Τα πλακίδια επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C σε 5% ορό κατσίκας σε PBS. Τα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι Timp2 (1:300, SC-21735, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), και κουνέλι πολύκλωνα κατά FGF2 (1:500, sc-79, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) και SMOC1 (1:100, Atlas Αντισώματα, Στοκχόλμη, Σουηδία). Τα πλακίδια πλύθηκαν έπειτα και επωάστηκαν σε βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα (κουνελιού αντι-ποντικού ή αντι-χοίρων κουνέλι, 1:300, ϋΑΚΟ, Carpinteria, CA) σε RT για 60 λεπτά, πλύθηκαν σε PBS εκτενώς, στη συνέχεια επωάστηκαν σε ABC-HRP συγκρότημα (Vector Laboratories) για 30 λεπτά. Τα δεσμευμένα αντισώματα στη συνέχεια κατέστησαν ορατές με επώαση με υγρό τετραϋδροχλωρική 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (ϋΑΚΟ). Τα πλακίδια στη συνέχεια ξεπλύθηκαν εκτεταμένα με νερό της βρύσης, αντίθετα με αιματοξυλίνη, και τοποθετημένα. τομές ιστών Βιτρώ φωτογραφήθηκαν και επεξεργασία χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Zeiss AX10 Imager.M1 και AxioVision έκδοσης 4.6 του λογισμικού.

Οι ανοσοχρωματίστηκε διαφάνειες εξετάστηκαν από έναν παθολόγο (MPR) τυφλωμένοι με την καλοήθη υπερπλασία του προστάτη παθολογία σοβαρότητα της υπόθεσης και τα αποτελέσματα εκφράζονται σε μια ημι-ποσοτικό τρόπο. χρώση Ποσοστό βαθμολογήθηκε σε μία κλίμακα από 0 έως 4, όπου 0 = καθόλου χρώση, 1 = λιγότερο από 25%, 2 = 25% έως 50%, 3 = 50% έως 75%, και 4 = 75% έως 100%. Η ένταση της χρώσης βαθμολογήθηκε σε μια κλίμακα από 1 έως 3, όπου 1 = ήπιο, 2 = μέτριο, 3 = και σήμανση. Για ένα δείγμα που δεν δίδει χρώση, η βαθμολογία ένταση ήταν επίσης 0. Όταν τόσο στρωματικών και επιθηλιακών χρώση ήταν παρούσα, σκορ έγινε χωριστά. Για τον υπολογισμό ενός δείκτη έκφραση της πρωτεΐνης, το ποσοστό σκορ έγινε αθροίζονται με το σκορ ένταση. Τα συνδυασμένα αποτελέσματα απεικονίστηκαν γραφικά για κάθε κατηγορία BPH παθολογία (ελάχιστη, ήπια, μέτρια, σοβαρή αλλαγές ΚΥΠ), και οι δοκιμές Kruskal-Wallis χρησιμοποιήθηκαν για να συγκρίνουν τις συνδυασμένες βαθμολογίες σε διάφορες κατάσταση σοβαρότητας της νόσου.

Αποτελέσματα

ανδρογόνων-Ρυθμιζόμενη προφίλ γονιδιακής έκφρασης στον ανθρώπινο προστάτη μεταβατική ζώνη

Εμείς προφίλ πρότυπα γονιδιακής έκφρασης από ανθρώπινα ξενομοσχεύματα TZ προστάτη, μετά την προσθήκη ή την αφαίρεση της τεστοστερόνης. Το Σχήμα 1 απεικονίζει το γενικό σύστημα που χρησιμοποιείται για τη χειραγώγηση των επιπέδων των ανδρογόνων σε ποντίκια SCID που φέρουν υπο-νεφρική ξενομοσχεύματα προστάτη κάψουλα. Ολικό RNA παρασκευάσθηκε από συγκομίζονται ξενομοσχεύματα με ή χωρίς έκθεση σε τεστοστερόνη για 0, 1, 3, 7, και 14 ημέρες. Μια πισίνα που κατασκευάζεται από ίσες ποσότητες RNA από την ημέρα 0 ευνουχισμού και ακέραια ξενομοσχεύματα ποντικού χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο αναφοράς. Ένα σύνολο 58 υβριδοποιήσεις ολοκληρώθηκαν, η οποία περιελάμβανε δείγματα από έξι ασθενείς. Η αρχική ανάλυση έδειξε ένα υψηλό επίπεδο (μέχρι 10 φορές) από ασθενή σε ασθενή διακύμανση των επιπέδων έκφρασης σε γνωστά γονίδια των ανδρογόνων ρυθμίζονται όπως

KLK3

(PSA). Προκειμένου να καταστεί δυνατή η αναμενόμενη βιολογική μεταβλητότητα μεταξύ των επιμέρους ιστούς των ασθενών, δείγματα RNA που προέρχονται ιστό κάθε ασθενούς εκ νέου με επίκεντρο το χρόνο αυτού του ασθενούς 0 ελέγχους. Για την κύρια ανάλυση, εξετάστηκαν δύο χρονικά σημεία, ημέρες 0 και 14, δίδοντας 5.679 γονίδια με 1,5 φορές ή μεγαλύτερη αύξηση στην έκφραση. Μια ανάλυση ΑΝΟνΑ εκτελέσθηκε επί αυτών των 5.679 γονίδια, με ένα

P

-τιμή αποκοπής 0,05, η οποία προβλέπει 284 ψευδώς θετικά. Γονίδια που είχαν τουλάχιστον 1.5-πλάσια αύξηση ή μείωση της έκφρασης στην ημέρα 14 vs. δείγμα ημέρα 0 στη συνέχεια φιλτράρεται με αξία έκφραση σήματος, διατηρώντας την κορυφή 95% του σήματος δυναμικής περιοχής, αποδίδοντας 784 γονίδια. Τα δεδομένα μικροσυστοιχιών έχουν κατατεθεί στη γονιδιακή έκφραση NCBI του Omnibus [30] και είναι προσβάσιμα μέσω του αριθμού ένταξη GEO Σειρά GSE17862 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE17862) .

TZ ιστούς από έξι ασθενείς ήταν ξενομοσχεύτηκε κάτω από τις νεφρικές κάψουλες ευνουχισμένων αρσενικών ποντικών SCID (10 ποντίκια ανά ασθενή). Πέντε ποντικοί από κάθε ομάδα στη συνέχεια δόθηκε υποδόρια εμφυτεύματα τα οποία περιέχουν 25 mg τεστοστερόνης. Αφού αφεθούν τα ξενομοσχεύματα να διαπιστωθεί για ένα μήνα, τα εμφυτεύματα απομακρύνθηκαν από τους τεστοστερόνης συμπληρώνονται ποντίκια, και 25 mg σφαιρίδια τεστοστερόνης εμφυτεύτηκαν σε ποντίκια που δεν είχαν λάβει τεστοστερόνη. Οι ποντικοί ελέγχου θυσιάστηκαν κατά τη στιγμή της προσθήκης ανδρογόνου ή την αφαίρεση, και τα υπόλοιπα ποντίκια από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν στις 1, 3, 7, και 14 ημέρες.

Η

Genes πάνω ρυθμισμένα με ανδρογόνα σε Ανθρώπινα TZ Ξενομοσχεύματα

ο Πίνακας 1 παραθέτει τα κορυφαία 45 γονίδια που είχαν up-ρυθμίζονται σε απάντηση των ανδρογόνων, κατατάσσονται σύμφωνα με πολλαπλή μεταβολή (κατά φθίνουσα σειρά). Οι τρεις πρώτες γονίδια,

KLK3

(PSA),

MSMB

(βήτα-microseminoprotein), και

TMEPAI

(διαμεμβρανική προστάτη ανδρογόνων που προκαλείται από πρωτεΐνη) ήταν όλα στο παρελθόν γνωστές ότι ρυθμίζεται από ανδρογόνα σε ανθρώπινο προστάτη [31], [32], [33]. Διάφορα άλλα γονίδια που ταυτοποιούνται ως τα πάνω ρυθμισμένα σε ανθρώπινα ξενομοσχεύματα ΤΖ με τεστοστερόνη έχουν επίσης προηγουμένως δειχθεί ότι ρυθμίζεται από ανδρογόνα. Αυτές περιλαμβάνουν

TRPM8

(δυναμικό παροδική υποδοχέα μέλος melastatin 8), ένα υποθετικό προγνωστικός δείκτης και θεραπευτικός στόχος στον καρκίνο του προστάτη [34], [35],

ACPP

(όξινη προστατική φωσφατάση) [36 ],

SCGB1A1

(μητροσφαιρίνης) [37],

NDRG1

(Ν-myc κατάντη ρυθμίζονται γονίδιο 1) [38], και

CREB3L4

(στοιχείο απόκρισης δεσμευτική πρωτεΐνη cAMP 3-σαν 4) [39].

RNASEL

έχει αναφερθεί ως υποψήφιος κληρονομικό γονίδιο του καρκίνου του προστάτη [40]. Άλλα γονίδια εντοπίστηκαν τα οποία έχουν αναφερθεί ως ανδρογόνο-ρυθμίζεται ή να συμμετέχουν σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη ή καρκίνο του προστάτη που περιλαμβάνονται

PTGDS

(συνθετάση της προσταγλανδίνης D2),

FGFBP1

,

KLK11

(καλλικρεΐνη 11),

CXCL5

(χημειοκινών (CXC μοτίβο) συνδέτη 5),

FKBP11

(πρωτεΐνη FK506-δέσμευσης 11) και

TIMP1

( αναστολέας ιστού μεταλλοπρωτεϊνάσης 1).

η

TMEPAI

(ανδρογόνο επαγόμενη πρωτεΐνη διαμεμβράνης του προστάτη) ήταν το πιο εντόνως εκφρασμένο γονίδιο ανδρογόνα ρυθμίζεται εντοπιστεί. Πρόσθετες υψηλής έκφρασης, τα γονίδια των ανδρογόνων-ρυθμίζονται περιλαμβάνονται

KLK3

(PSA),

MSMB

(βήτα-microseminoprotein),

ACPP

(όξινη προστατική φωσφατάση) και

SCGB1A1

(μητροσφαιρίνης).

τα γονίδια ρυθμισμένα προς τα πάνω σε απάντηση ανδρογόνων απόσυρση

ο Πίνακας 2 παραθέτει τα κορυφαία 45 γονίδια που ήταν επάνω-ρυθμίζονται σε απάντηση στην απόσυρση των ανδρογόνων για 14 ημέρες , κατατάσσονται σύμφωνα με πολλαπλή μεταβολή (σε φθίνουσα σειρά). Ένα από τα γονίδια που ταυτοποιούνται,

GLI1

είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε προστάτη ποντικού μετά τον ευνουχισμό [41]. Ένα άλλο γονίδιο που εντοπίστηκαν με αυξημένη έκφραση ήταν

ANNAT1

(αννεξίνη 1), η οποία έχει αναφερθεί ότι μειώνει σε ανδρογόνων τόνωσε τον καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με καλοήθη προστατική επιθήλιο [42].

Η

Ποσοτική RT -PCR ανάλυση Ανθρώπινου προστάτη RNA πισίνες

για να διερευνηθεί περαιτέρω τα επίπεδα έκφρασης του ανδρογόνου ρυθμισμένων γονιδίων ταυτοποιήθηκαν με ανάλυση μικροσυστοιχιών, ποσοτική ανάλυση RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε επιλεγμένους στόχους χρησιμοποιώντας δεξαμενές RNA που προέρχεται από ανθρώπινους ιστούς του προστάτη. Μια σημαντική κλινική ανάγκη είναι να εντοπίσει βιοδείκτες που παρέχουν προγνωστικές πληροφορίες σχετικά με την εξέλιξη της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη ή ότι μπορεί να προβλέψει ανταπόκριση στις θεραπείες, συμπεριλαμβανομένων των αναστολέων της αναγωγάσης 5 άλφα. Οι εκκρινόμενες πρωτεΐνες που μπορεί να μετρηθεί εύκολα στο αίμα είναι ιδιαίτερα ελκυστικά κλινική στόχους. Από τα προφίλ της γονιδιακής έκφρασης σε ορμόνη χειραγωγείται ξενομοσχεύματα TZ, δυναμικό βιοδείκτες συστηματικά επιλεγεί με επικαλυπτόμενες κριτήρια βιοπληροφορική, που απασχολούν WebGestalt. στόχοι Gene επιλέχθηκαν ήταν 1) ανδρογόνο ρυθμίζεται εντός δεδομένα μικροσυστοιχιών μας, 2) που εκφράζεται σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα σε προστάτη σε σχέση με άλλους ιστούς, και 3) είναι γνωστό ή προβλέπεται να εκφράσουν εκκρίνεται ή κυτταρικής επιφάνειας πρωτεΐνες. Τα κριτήρια αυτά έδωσαν ένα σύνολο υποψήφιων γονιδίων (Πίνακας 3) που περιλαμβάνονται ορισμένα παλαιότερα γνωστό βιοδείκτες, συμπεριλαμβανομένων των

KLK3

,

ACPP

, και

MSMB

, περαιτέρω επικύρωση πειραματική προσέγγιση μας . Άλλα γονίδια που παρουσιάζουν ενδιαφέρον πρόσθεσε «με το χέρι» για την ανάλυση RT-PCR ήταν

IGF1

,

IGF1R

,

TGFB1

,

TGFB3

,

TGFBR1

, και

TGFBR2

. Τα επίπεδα έκφρασης αυτών των γονιδίων στόχων μετρήθηκαν σε πισίνες RNA που παρασκευάζεται από ιστούς ΤΖ οριστεί ως έχουσες ήπια, μέτρια και σοβαρή αλλαγές ΒΡΗ, καθώς και μετρίως και ελάχιστα διαφοροποιημένο καρκίνο του προστάτη. RNA για κάθε κατηγορία ΒΡΗ ή του προστάτη ιστούς καρκίνου προέκυψαν από 5-10 δείγματα ασθενών. Έλεγχος RNA συνενώθηκε από δείγματα ΤΖ από ασθενείς χωρίς σημαντική επέκταση ΤΖ από αδενικό και στρωματικά υπερπλασία.

Η

Τα αποτελέσματα των αναλύσεων qRT-PCR παρουσιάζεται στον Πίνακα 4. Τα επίπεδα έκφρασης του RNA προσδιορίστηκαν για 86 γονίδια υποψήφιο βιοδείκτη. Από αυτούς, 72 γονίδια ήταν αποφασισμένο να έχουν μεγαλύτερη από 6-φορές υψηλότερο επίπεδο από ό, τι το κανονικό πισίνα ελέγχου σε τουλάχιστον ένα από τα ΒΡΗ ή του προστάτη πισίνες καρκίνο. Σε σχέση με την πισίνα RNA προστάτη ελέγχου, τα μέσα επίπεδα των ΒΡΗ ή του προστάτη πισίνες καρκίνος RNA με επίπεδα έκφρασης & lt? 1-φορές χαρακτηρίστηκαν ως «χαμηλή», 1- έως 6-πλάσια ορίστηκαν ως «μέτρια», και & gt? 6-πλάσια ορίστηκαν ως «υψηλή». Με βάση αυτά τα κριτήρια, κάθε γονίδιο ανατέθηκε σε μία από τις έξι κατηγορίες (Πίνακας 4). Δεκαπέντε γονίδια ήταν υψηλή και στις δύο ΒΡΗ και καρκίνο του προστάτη, 41 γονίδια ήταν υψηλή σε ΒΡΗ και μέτρια σε καρκίνο του προστάτη, δύο γονίδια ήταν υψηλά σε ΒΡΗ και χαμηλή σε καρκίνο του προστάτη, και πέντε γονίδια ήταν μέτρια σε ΒΡΗ και υψηλή σε καρκίνο του προστάτη. Δεν γονίδια βρέθηκαν ότι ήταν κατατάσσεται ως «χαμηλή» σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη.

Η

Υποψήφιος BPH βιοδεικτών Γονίδια

Ένας αριθμός γονιδίων είχαν επίπεδα έκφρασης στις πισίνες ΚΥΠ που αυξάνεται με τη βαρύτητα της νόσου . Μερικά από τα γονίδια είχαν επίπεδα έκφρασης που ήταν ιδιαίτερα αυξημένα σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, αλλά σχετικά μικρότερη στις πισίνες του καρκίνου του προστάτη. Αυτά τα γονίδια θα πρέπει να αναμένεται να έχει το καλύτερο δυναμικό ως βιοδείκτες υποψήφιος ΒΡΗ, συμπεριλαμβανομένων εξειδίκευση σε σύγκριση με το καρκίνωμα του προστάτη. Εκείνοι που εκφράζεται εξωκυττάρια και με μέσο επίπεδο έκφρασης τουλάχιστον τρεις φορές μεγαλύτερη σε πισίνες BPH RNA από το RNA του καρκίνου του προστάτη πισίνες περιλαμβάνονται:

CDH13

,

CHRNB1

,

COL4A5

,

EFEMP2

,

eMP3

,

F10

(16 φορές),

FGF2

,

FGFBP1

(10 φορές ),

IGF1

,

IGF2

(18 φορές),

LIPG

,

RaRb

,

SGCA

,

SGCD

,

TGFB1

,

TGFB3

(14 φορές),

TGFBR2

και

Timp2

του «υψηλή περιεκτικότητα σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, μέτρια σε καρκίνο του προστάτη »της ομάδας?

SMOC1

(26-φορές) στην «υψηλή περιεκτικότητα σε ΒΡΗ, χαμηλή σε καρκίνο του προστάτη» ομάδα? και

SCGB3A1

(15 φορές) και

SCGB1A1

(14 φορές) στο «μέτρια σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, χαμηλά στον καρκίνο του προστάτη» της ομάδας.

ανοσοϊστοχημική χρώση για την Επιλογή Στόχοι του γονιδίου της Παθολογίας-Χαρακτηρίζεται ΚΥΠ ιστοί

για να προσδιοριστεί αν οι διαφορές στα επίπεδα έκφρασης του RNA που παρατηρήθηκαν σε ιστούς BPH ήταν επίσης παρόντες σε επίπεδο πρωτεΐνης και τον περαιτέρω χαρακτηρισμό της επιθηλιακά και /ή στρωματικών εντοπισμό των πιθανών αυξημένη έκφραση , εκτελέσαμε ανοσοϊστοχημεία (IHC) σε μικροσυστοιχία ΒΡΗ ιστό (TMA). Η συστοιχία περιείχε 129 τομές ιστού από 43 μοναδικά τους ασθενείς, που περιέχει ιστούς ΒΡΗ με παθολογίες που κυμαίνονται από ελάχιστες έως σοβαρή, όπως ορίζεται στο Υλικά και Μέθοδοι.