Αφηρημένο

Ο καρκίνος του παγκρέατος (PC) παραμένει η τέταρτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο με μια απαράδεκτη επιβίωσης που έχει παραμείνει σχετικά αμετάβλητο κατά τα τελευταία 25 χρόνια. Η παρουσία της απόκρυφης ή κλινικών μεταστάσεις κατά τη στιγμή της διάγνωσης σε συνδυασμό με την έλλειψη αποτελεσματικών χημειοθεραπείες συνιστούν απόλυτη ανάγκη για το σχεδιασμό νέων και στοχευμένες θεραπευτικές παραδοτέα που ευνοεί την κλινική έκβαση. Εδώ, ερευνήσαμε την αντι-ογκογόνο δυναμικό των πολυφαινολών από πέντε διαφορετικές καφέ-φύκια σε ανθρώπινα κύτταρα PC (MiaPaCa-2, Panc-1, BXPC-3 και Panc-3.27). Σύνολο αντι-οξειδωτικό ικανότητα (TAC) ανάλυση σχετικά με κλιμακωτή διαχωρισμούς πολυφαινόλη με την αύξηση της πολικότητας (εξάνιο-DCM-ΕΑ-μεθανόλη) εντοπίστηκαν υψηλά επίπεδα των TAC σε DCM και ΕΑ εξαγωγές σε όλες τις φύκια αξιολογηθεί. All DCM και ΕΑ διαχωρίστηκε πολυφαινόλες προκάλεσε μια δοσο-εξαρτώμενη και παρατεταμένη (ανεξάρτητα του χρόνου) αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της βιωσιμότητας. Περαιτέρω, αυτές οι πολυφαινόλες βαθιά ενισχυμένη βλάβη του DNA (πορτοκαλί ακριδίνης /αιθίδιο βρωμίδιο και κατάτμηση του DNA) σε όλες τις κυτταρικές γραμμές διερευνήθηκαν. Το πιο σημαντικό, δοκιμασία λουσιφεράσης ανταποκριτή αποκάλυψε μια σημαντική αναστολή της ΝΡκΒ μεταγραφής σε κύτταρα κατεργασμένα με πολυφαινόλες. Είναι ενδιαφέρον ότι, η ανάλυση QPCR εντόπισε μια διαφορά ακόμη οριστική ρύθμιση της προ-ογκογόνο EGFR, VEGFA, ΑΚΤ, hTERT, KRAS, Bcl2, FGFα και ΡϋΟΡα μεταγραφή σε κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με DCM και ΕΑ πολυφαινόλες. Ανοσοαποτύπωση επικυρώνει την ανασταλτική δράση των πολυφαινολών φύκια στην φωσφορυλίωση του EGFR, KRAS, AurKβ και Stat3. Μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ενδιάμεση πολικότητα κλάσματα που βασίζονται σε πολυφαινόλες φυκιών μπορεί να ενισχύσει σημαντικά την θανάτωση των καρκινικών κυττάρων και μπορούν να χρησιμεύσουν ως πιθανοί παραδοτέο φάρμακο για θεραπεία PC. Οι περισσότερες μελέτες τεμαχίζοντας τα ενεργά συστατικά σε ισχυρό κλάσματα, μηχανισμοί δράσης και η συνεργική δράση, εάν υπάρχει, δικαιολογείται και είναι σήμερα σε διαδικασία

Παράθεση:. Aravindan S, Delma CR, Thirugnanasambandan SS, Herman TS, Aravindan Ν (2013) Αντι-καρκίνο του παγκρέατος Παραδοτέα από τη θάλασσα: από πρώτο χέρι τα στοιχεία για την αποτελεσματικότητα, μοριακούς στόχους και τον τρόπο δράσης για Πολυσχιδής πολυφαινόλες από πέντε διαφορετικές Brown-φύκια. PLoS ONE 8 (4): e61977. doi: 10.1371 /journal.pone.0061977

Επιμέλεια: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 31 Δεκεμβρίου του 2012? Αποδεκτές: 15 του Μαρτίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 16 Απρίλη του 2013

Copyright: © 2013 Aravindan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς υποστηρίζονται από τα ταμεία της ανάπτυξης της έρευνας από το Τμήμα Ακτινοθεραπευτικής Ογκολογίας στο Πανεπιστήμιο της Οκλαχόμα Κέντρο Επιστημών Υγείας στο Ν Aravindan και, κυβέρνηση της Ινδίας, Τμήμα Επιστήμης και Τεχνολογίας (DBT Κύρωση Παραγγελία Αρ & amp? Ημερομηνία: BT /PR11535 /AAQ /03/431/2008? 17.09.2009) επιχορήγηση (Αξιολόγηση των πολυφαινόλες και τους πολυσακχαρίτες από φαιοφύκη κατά του οξειδωτικού στρες και του καρκίνου εξέλιξη για τα ναρκωτικά Ανάπτυξης) με την Τ Somasundaram. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Παρακαλώ σημειώστε ότι η συν-συγγραφέας Natarajan Aravindan είναι ένα PLoS ONE Συντακτική μέλος του Διοικητικού Συμβουλίου. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλους και καμία από τις πολιτικές PLoS ONE για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος (PC) παραμένει η τέταρτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις οι Ηνωμένες Πολιτείες με αναμενόμενη 43.920 νέες περιπτώσεις το 2012 [1]. Δυστυχώς, τα ποσοστά θνησιμότητας PC παρέμεινε σχετικά αμετάβλητος από το 1975, με ποσοστό επιβίωσης 5 ετών μόνο 5,4% [2]. Η παρουσία της απόκρυφης ή κλινικών μεταστάσεις κατά τη στιγμή της διάγνωσης, μαζί με την έλλειψη αποτελεσματικών χημειοθεραπείες συμβάλλει στην υψηλή θνησιμότητα σε ασθενείς με PC. Για το σκοπό αυτό, η θεραπεία του υπολογιστή, εξαιρετικά βασίζονται στην καλύτερη κατανόηση της γενετικής και της βιολογίας [3], η οποία μπορεί να συνδέεται στενά με την ογκογένεση και το σχηματισμό μεταστάσεων. Επίσης, το PC είναι ένα από τα πιο εγγενώς όγκων ανθεκτικών στα φάρμακα και, αντίσταση στους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες είναι μια σημαντική αιτία της αποτυχίας της θεραπείας σε PC. Παρά την εκτεταμένη έρευνα επί πολλών στοχευμένες θεραπείες με εξαιρετικά αποτελέσματα κατά του όγκου σε προ-κλινικά μοντέλα, η κλινική έρευνα έδειξε ότι και μόνο στοχευμένες θεραπείες και πλέον συνδυασμένες θεραπείες δεν ήταν σε θέση να βελτιώσει την πρόγνωση της ασθένειας αυτής. Είναι αξιοσημείωτο να αναφέρουμε ότι υπάρχουν 1344 εν εξελίξει κλινικές δοκιμές (www.clinical trials.gov πρόσβαση στις 30 Νοεμβρίου, 2012) προς το παρόν, με στόχο πολλών πιθανών μοριακών στόχων με μια σειρά από πολλά υποσχόμενες σωλήνα-line ναρκωτικά παραδοτέα. Παρά, μια τέτοια κολοσσιαία προσπάθεια να μετριάσουν την εξέλιξη της PC και τη διάδοση, σε πραγματικό χρόνο, είμαστε πουθενά κοντά τα αποδεκτά ποσοστά επιβίωσης. Εν μέρει, αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι ο υπολογιστής μπορεί να διαθέτουν διαφορετικά χαρακτηριστικά και στόχοι σε διάφορα στάδια της παθογένεσης, συντήρηση και τη μετάσταση [4]. Περαιτέρω, cross-talk μεταξύ κυτταρικής σηματοδότησης οδών, ένα σημαντικό φαινόμενο στον υπολογιστή, μπορεί να οδηγήσει στην επιβίωση των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση, ακόμη και αν κάποιες πορείες μπλοκαριστεί από στοχευμένη θεραπεία. Ευαισθησία σε θεραπεία μπορεί επίσης να ποικίλει για τα καρκινικά κύτταρα σε διαφορετικά στάδια. Η μοναδική δομή υπολογιστή με άφθονο στρώμα δημιουργεί ένα μικροπεριβάλλον του όγκου με υποξία και χαμηλό ποσοστό αιμάτωση, η οποία εμποδίζει την παράδοση φαρμάκου σε καρκινικά κύτταρα. Ως εκ τούτου, υπάρχει μία ανάγκη για ολέθριο σχεδιασμό νέων και στοχευμένες θεραπευτικές στρατηγικές που μπορούν να βελτιώσουν την κλινική έκβαση για ασθενείς με διάγνωση PC. Ως εκ τούτου, στο παρόν ερευνήσαμε την πιθανή αντι-PC των πολυφαινολών από μια ασυνήθιστη πηγή, θαλάσσια καφέ φύκια.

Macro άλγη (φύκια) είναι σημαντικές πηγές πρωτεϊνών, ιώδιο, βιταμίνες και μέταλλα και ως εκ τούτου έχουν δείξει ότι διαθέτουν χημειο προληπτικά δυναμικά [5]. Περαιτέρω μελέτες έχουν αποδείξει ότι με συνέπεια, οι φύκια έχουν μια υψηλή περιεκτικότητα σε πολυφαινόλες, όπως κατεχίνη, επικατεχίνη, επιγαλλοκατεχίνη galate και γαλλικό οξύ (βλέπε ανασκόπηση [6]). Αυτές πολυφαινολικών ενώσεων έχουν δείξει πολλές υγεία επωφελούνται βιοδραστικότητες όπως αντι-οξειδωτικό, αντικαρκινικές, αντι-ιικές, αντι-φλεγμονώδη, και την ικανότητα να αναστέλλουν τη συσσωμάτωση των αιμοπεταλίων του ανθρώπου 6,7. Επιπλέον μελέτες έχουν δείξει μια θετική συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης διαιτητικής πρόσληψης των φυσικών αντιοξειδωτικών και της μειωμένης στεφανιαίας νόσου, θνησιμότητα από καρκίνο, καθώς και μεγαλύτερο προσδόκιμο ζωής [6], [8]. Μια στενή σχέση μεταξύ αντι-καρκινογόνο δράση και αντιοξειδωτική δράση έχει αναφερθεί σε μοντέλα ποντικών του καρκινώματος με πολυφαινόλες [9] – [12]. Προς το σημείωμα, πρόσφατες έρευνες απέδειξαν με ακρίβεια τα αντι-πολλαπλασιαστική, προ-αποπτωτικών, βλάβης του DNA, αντι-αγγειογενετική, αναστέλλοντας την ανάπτυξη, την διακοπή του κυτταρικού κύκλου και αντι-μεταστατική λειτουργίες των εκχυλισμάτων φυκιών σε έναν αριθμό μοντέλων όγκων συμπεριλαμβανομένου του μελανώματος, ρινοφαρυγγικού, γαστρικό καρκίνωμα, τον καρκίνο του μαστού, κλπ [13] – [18]. Ωστόσο, αυτές οι μελέτες περιορίζονται σε πολυσακχαρίτες και /ή ακατέργαστα εκχυλίσματα, και το όφελος των πολυφαινολών φύκια ή δραστικών συστατικών τους εναντίον του παγκρέατος καρκινογένεση ή /και την πρόοδο της (αν όχι για οποιαδήποτε όγκου) δεν έχει ποτέ διερευνηθεί. Επιπλέον, μια σε βάθος γνώση σχετικά με την επίδραση των πολυφαινολών φύκια σε αυτή τη ρύθμιση, το δυναμικό τους στη ρύθμιση των καρκινικών κυττάρων σηματοδότησης, ο τρόπος δράσης (πιθανών ακόμα οριστική μοριακούς στόχους, εάν υπάρχουν), μένει να reconnoitered. Λόγω του γεγονότος ότι οι πολυφαινόλες στοχεύουν βασικές οδούς σηματοδότησης των κυττάρων, διερευνήθηκε η επίδραση των πολυφαινολών από πέντε διαφορετικές καφέ φύκια στις ρυθμίσεις PC. Αυτή η μελέτη παρέχει από πρώτο χέρι στοιχεία για τις αντιοξειδωτικές, αντι-πολλαπλασιαστική και θανάτωσης κυττάρων δυνατότητες της πολικότητας με βάση εκχυλίσματα αυτών των φυκιών. Επιπλέον, η μελέτη αυτή εντοπίζει επίσης τις δυνατότητες των εξάγεται πολυφαινολών στις μεγάλες μοριακούς στόχους εξέλιξης του όγκου συμπεριλαμβανομένων NFκB, EGFR, KRAS, STAT3, VEGF, ΑΚΤ, τ, FGFA, BCL2 και PDGFA.

Υλικά και Μέθοδοι

Cell Culture

Ανθρώπινο Panc-1 (ATCC-CRL1469), Panc-3.27 (ATCC-CRL2549), BxPC-3 (ATCC-CRL1687), και ΜΙΑ PaCa-2 (ATCC-1420) κύτταρα ελήφθησαν από τον Dr Daniel J. Brackett (Τμήμα χειρουργικής του Πανεπιστημίου της Οκλαχόμα Κέντρο Επιστημών Υγείας, Oklahoma City, OK). Πολιτισμός και συντήρηση των κυττάρων ΜΙΑ PaCa-2 Panc-1, BxPC-3, και εκτελέστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Panc-3,27 κύτταρα διατηρήθηκαν σαν καλλιέργειες μονοστοιβάδας από εβδομαδιαίες σειριακή διέλευση σε πλάκες καλλιέργειας ιστού 100 mm σε υψηλής γλυκόζης μέσο RPMI-1640 με 2 mM L-γλουταμίνη, 10 mM HEPES, 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο, 1.500 mg /L διττανθρακικό νάτριο, 10Units /ml ανθρώπινη ανασυνδυασμένη ινσουλίνη και 15% ορό εμβρύου μόσχου. ΜΟΡ10Α (ATCC-CRL10317), Human αορτικού λείου μυός κύτταρα (HASMC, ATCC-PCS-100-012) και ανθρώπινο λαγόνιας αρτηρίας ενδοθηλιακά κύτταρα (HIAE, ATCC) κύτταρα ελήφθησαν από τον Dr. Mohan Natarajan (Πανεπιστήμιο του Τέξας στο Κέντρο Επιστημών Υγείας στο San Antonio, TX). Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σαν καλλιέργειες μονοστοιβάδας σε Μέσο 199 (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ) συμπληρωμένο με 2 mM L-γλουταμίνη, 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο, 1.500 mg /L διττανθρακικό νάτριο, βιταμίνες ΜΕΜ, μη απαραίτητα αμινοξέα, pen /strep και 10% HIFBS. Για ΜΟΡ10Α το μέσο συμπληρώθηκε με επιπλέον συμπλήρωμα επιθηλίου μαστού Growth (Life Technologies) και η τοξίνη της χολέρας (Sigma). Για πέρασμα και για όλα τα πειράματα, τα κύτταρα αποκολλήθηκαν χρησιμοποιώντας θρυψίνη (0,25%) /EDTA (1%), αιωρούνται εκ νέου σε πλήρες μέσο, ​​μετρήθηκαν ηλεκτρονικά χρησιμοποιώντας Countess αυτοματοποιημένο μετρητή κυττάρων (Carlsbad, CA), και επωάζονται σε 95% αέρα /5% CO2 υγροποιημένο επωαστήρα.

εκχύλιση πολυφαινόλες και κυτταρικές θεραπείες

κύτταρα τοποθετούνται σε πλάκες καλλιέργειας ιστού 100 mm που περιείχαν 6 ml πλήρους μέσου ανάπτυξης αφέθηκαν να αναπτυχθούν έως και 70% έως 80 % συρροή. Πέντε είδη καφέ φύκια,

Dictyota dichotoma

(DD),

Hormophysa triquerta

(HT),

Spatoglossum asperum

(Α.Ε.),

Stoechospermum marginatum

(SM) και

Padina tetrastromatica

(PT) συλλέχθηκαν από την ακτή Mandapam, στον Κόλπο του Μανάρ, Νότια ανατολική ακτή της Ινδίας. Τα φύκια συλλέγονται ως μέρος του Τμήματος Επιστήμης και Τεχνολογίας, κυβέρνηση της Ινδίας υπό την αιγίδα του έργου DBT και, δεδομένου ότι αυτή η συλλογή δεν περιλαμβάνει απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη, δεν απαιτούνται ειδικές άδειες (Τμήμα Δασών, Κυβέρνηση της Ινδίας εξαιρούνται). Προσφάτως συλλέγεται φύκια πλύθηκαν, ξηραίνεται σε κλίβανο και η σκόνη τους χρησιμοποιήθηκε για διαδοχική εκχύλιση των πολυφαινολών σε βαθμίδα (αύξηση) διαλύτες πολικότητας συμπεριλαμβανομένων εξάνιο (H), διχλωρομεθάνιο (DCM), το οξικό αιθύλιο (ΕΑ) και μεθανόλη (Μ). Εν συντομία, 50 g κονιοποιημένου φύκια εμποτισμένο με τρεις όγκους ειδικών διαλύτη αναταράσσεται για 48 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Ο πολτός διηθήθηκε μέσω ηθμού Whatman χαρτί που ακολουθείται από επώαση του υπολείμματος στην επόμενη διαλύτη. Τα προκύπτοντα τέσσερα διηθήματα εντελώς ξηραίνονται σε προζυγισμένα φυγοκεντρικούς σωλήνες μικρο χρησιμοποιώντας SpeedVac (Thermo επιστημονικές, Asheville, NC). Τα αποξηραμένα διηθήματα ζυγίζονται και διαλύονται σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) σε μία τελική συγκέντρωση απόθεμα 100 mg /ml. Για τη θεραπεία των κυττάρων, πολυφαινόλες » stock » λύσεις αραιώνεται περαιτέρω σε απλό κυτταρικής καλλιέργειας (ϋΜΕΜ) μέσο σε ένα » εργάζονται » συγκέντρωση 10 mg /ml. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις (10, 50, 100 μg /ml) των πολυφαινολών και αφέθηκαν να επωαστούν στους 37 ° C για 3 ώρες και 24 ώρες, εκτός αν άλλως αναφέρεται ή στο κείμενο. Η τελική συγκέντρωση του DMSO στο μέσο καλλιέργειας κυττάρων ήταν & lt?. 0,0001%

Συνολική ανάλυση αντιοξειδωτική ικανότητα

Για τον προσδιορισμό της αντιοξειδωτικής ικανότητας του κλάσματος 20 πολυφαινόλη που αποτελείται από 4 χαρακτηριστικό κλασμάτων από κάθε φύκια από το συνολικά 5 φύκια, η συνολική ανάλυση αντιοξειδωτική ικανότητα (TCA) διεξήχθη όπως περιγράφεται από τους Prieto και συνεργάτες [20]. Εν συντομία, δύο τμήματα του κάθε εκχύλιση σε διάφορες συγκεντρώσεις (100, 250, 500 μg /ml και 1 mg /ml) αναμίχθηκε με ένα μέρος αντιδραστηρίου TCA (0.6 Μ θειικού οξέος, 28 mM φωσφορικό νάτριο και 4 mM μολυβδικό αμμώνιο) και επωάστηκαν στους 95 ° C για 90 λεπτά. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 635 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη Synergy II μικρο πλάκας (BioTek Instruments, Inc. Winooski, VT). Γαλλικό οξύ (GA) χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος και συμπεριλήφθηκαν επίσης αρνητικοί έλεγχοι με απλό διαλύτες. Τα κλάσματα που εμφανίζουν υψηλά επίπεδα ολικής αντι-οξειδωτικό χωρητικότητα θα χρησιμοποιηθεί για περαιτέρω ανάλυση (αντι-PC).

Βιωσιμότητας Κυττάρων

Trypan blue δοκιμασία αποκλεισμού χρησιμοποιήθηκε για να προσδιορίσει την αποτελεσματικότητα των πολυφαινολών φύκια στη ρύθμιση της κυτταρικής βιωσιμότητας PC. Mia-PaCa-2, Panc-1, Panc-3.27 και BxPC-3 κύτταρα σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις (10, 20, 50 ή 100 μg /ml) των κλασμάτων διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, ΗΤ-DCM) ή κλάσματα οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-EA, ΗΤ-EA) εξετάστηκαν μετά από 24 ώρες για μεταβολές στην βιωσιμότητα των κυττάρων. Ποσοτική εκτίμηση έγινε με τη χρήση του κοντέσα αυτοματοποιημένο μετρητή κυττάρων όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19] και σε σύγκριση με μη κατεργασμένους μάρτυρες, χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ΑΝΟνΑ με δοκιμή Bonferonii post-hoc (GraphPad PRISM v4.03, GraphPad Prism Software Inc., La Jolla, CA) . AP αξία των & lt? 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική

Η επιβίωση των κυττάρων

Η επιβίωση των κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας CyQUANT κυτταρικού πολλαπλασιασμού Assay Kit (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR, USA) σε Panc-. 1 και ΜΙΑ PaCa-2 κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, ΗΤ-DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-ΕΑ , ΗΤ-EA) κλάσματα ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα κύτταρα (5.000 κύτταρα /φρεάτιο) σπάρθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων με 200 μΙ /φρεάτιο ανάπτυξη μέσο επωάστηκε στους 37 ° C για μία περίοδο 24 h. Για μελέτες κλιμάκωσης δόσης κύτταρα εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις (10, 20, 50 και 100 μg /ml) των πολυφαινολών φύκια και αναλύθηκαν μετά από 3 ώρες. Για μελέτες ανάκτησης εξαρτώμενη από το χρόνο, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 μg /ml των κλασμάτων πολυφαινόλης και εξετάστηκαν μετά από 3, 24, 48 ή 72 ώρες. Μετά τη θεραπεία, το μέσο ανάπτυξης ήταν προσεκτικά και πλήρως απομακρύνθηκε και οι πλάκες διατηρήθηκαν υπό κατάψυξη (-70 ° C) για επιπλέον 24 ώρες. Κατεψυγμένα κύτταρα στη συνέχεια λύθηκαν με CyQUANT® GR ρυθμιστικό χρωστικής /κύτταρο-λύσεως (200 μL /φρεάτιο) σε θερμοκρασία δωματίου, προστατευμένο από το φως για 5 λεπτά και ο φθορισμός (480 nm διέγερση και 520 nm εκπομπή) χρησιμοποιώντας Synergy II αναγνώστη μικροπλάκας ( BioTek). Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν. συμπεριλήφθηκαν αρνητικοί μάρτυρες χωρίς κύτταρα. Ομάδα-wise συγκρίσεις έγιναν με τη χρησιμοποίηση διπλής κατεύθυνσης ΑΝΟνΑ με δοκιμή Bonferonii post-hoc (GraphPad PRISM) και μια τιμή Ρ & lt? 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική. Περαιτέρω, για να προσδιοριστεί αν αυτή η πολυφαινόλης (ες) που κινείται αντι-πολλαπλασιασμό είναι καρκινικών κυττάρων επιλεκτικές και, για να οριοθετηθούν φυσιολογικό κύτταρο κυτταροτοξικότητα τους, εάν υπάρχουν, εξετάσαμε τις επιπτώσεις τους στην πρωτογενή κύτταρα. Για το σκοπό αυτό, ΜΟΡ10Α, HIAE και HASMC κύτταρα επεξεργασμένα με 100 μg /ml του DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-ΕΑ, SA-ΕΑ, SM-ΕΑ, PT- EA ή HT-ΕΑ εξετάστηκαν μετά από 24 ώρες για μεταβολές στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

η πυρηνική μορφολογία με διπλή χρώση

Panc-1, Panc-3.27, BxPC-3 και Mia-ΡΑΟΑ-2 κύτταρα (5 × 10

5 κύτταρα) αναπτύχθηκαν σε 4-φρεατίων (Nunc) που έλαβαν θεραπεία με 100 μg /ml διχλωρομεθανίου (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-EA, ΗΤ-EA) κλάσματα αναλύθηκαν μετά από 24 ώρες για την πυρηνική μορφολογία, όπως περιγράφεται παραπάνω [21].

DNA κατακερματισμός σε αγαρόζη Τζελ

DNA δοκιμασία laddering χρησιμοποιήθηκε για να προσδιορίσει την αποτελεσματικότητα των πολυφαινολών φύκι επαγωγή DNA κατακερματισμό των κυττάρων PC. Εν συντομία, το DNA από Panc-1, Panc-3.27, BxPC-3 και τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-ΕΑ, SA 2 Mia-ΡΑΟΑ- -EA, SM-EA, PT-ΕΑ και HT-ΕΑ για 24 ώρες εκχυλίζεται με DNA stat-60 (Tel-Test Inc., Friendswood, TX, USA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Δείγματα DNA (5 μg) ηλεκτροφορήθηκαν σε 2% πήκτωμα αγαρόζης που περιέχει βρωμιούχο αιθίδιο, ορατό χρησιμοποιώντας ChemiDoc ™ XRS εικονοληψίας (Biorad, Hercules, CA) και ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Ποσότητα-One λογισμικό ανάλυσης εικόνας (Biorad). Ομάδα-σοφός συγκρίσεις έγιναν με ανάλυση διακύμανσης με post-hoc Tukey διόρθωση του. AP αξία των & lt? 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική

Παρασκευή πλασμιδίου, DNA Επιμόλυνση και λουσιφεράσης Δοκιμασία

Οι αλλαγές στην ενεργοποίηση ΝΡκΒ προωθητή σε διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM. -DCM, PT-DCM, ΗΤ-DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-EA, ΗΤ-EA) κλάσματα αντιμετωπίζονται Panc-1, BxPC-3 και τα κύτταρα MiaPaCa-2 ήταν ερευνήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία λουσιφεράσης. Το πλασμίδιο κατασκεύασμα pNFκB-Luc ενισχύθηκε και καθαρίστηκε όπως περιγράφεται σε προηγούμενες μελέτες μας [22], [23]. Κυτταρολύματα από το κελί θεραπεία για 24 ώρες αναλύθηκαν για δραστικότητα λουσιφεράσης σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Biovision Research Products, Mountain View, CA) και την ομάδα σοφό συγκρίσεις έγιναν χρησιμοποιώντας ANOVA με post-hoc διόρθωση κατά Tukey. AP αξία των & lt?. 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική

QPCR

Η μεταγραφική μεταβολές των βασικών μορίων εξέλιξης του όγκου, συμπεριλαμβανομένων,

Bcl2, EGFR, PDGFA, VEGF, ΑΚΤ, τ, KRAS και FGF

σε διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, ΗΤ-DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-EA, HT-ΕΑ ) κλάσματα αγωγή (για 3 h) Panc-1, Panc-3.27, BxPC-3 και MiaPaCa-2 κύτταρα αναλύθηκαν με πραγματικού χρόνου QPCR όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23]. Χρησιμοποιήσαμε β

-ακτίνης

ως θετικός έλεγχος, και ένας αρνητικός έλεγχος χωρίς πρότυπο RNA συμπεριλήφθηκε επίσης. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν, και το

ΔΔ

C

t τιμές υπολογίστηκαν με ομαλοποίηση των επιπέδων γονιδιακής έκφρασης σε β

ακτίνη

, και το σχετικό επίπεδο έκφρασης εκφράστηκε ως μια πτυχή της αλλαγής.

ανοσοαποτύπωσης

Panc-1, BxPC-3 και MiaPaCa-2 κύτταρα που εκτίθενται σε διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT -DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-EA, ΗΤ-EA) κλάσματα αναλύθηκαν μετά από 24 ώρες για τις αλλαγές στην φωσφορυλίωση του EGFR και τα επίπεδα πρωτεΐνης KRAS, STAT3, EGFR και AURKβ. Συνολική πρωτεϊνική εκχύλιση και ανοσοαποτύπωση πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφεται σε προηγούμενες μελέτες μας [23], [24]. Για τη μελέτη αυτή, οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν-μεμβράνες επωάστηκαν είτε με μονοκλωνικό αντι-pEGFR

(Tyr1068) (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, ΜΑ, USA), Kras (Proteintech Group, Inc. Chicago, IL, ΗΠΑ), STAT3 (Santa Cruz Biotechnology, Inc, Santa Cruz, CA, USA) ή ποντίκι μονοκλωνικό EGFR (Santa Cruz), AURKβ αντίσωμα (Proteintech). Οι κηλίδες απογυμνώνεται και reblotted με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-α-τουμπουλίνης αντίσωμα (Santa Cruz) για να προσδιοριστεί ίση φόρτωση των δειγμάτων. πυκνομετρική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Ποσότητα-One (Biorad) και την σχετική ένταση ζώνης απεικονίστηκε γραφικά σε ένα ιστόγραμμα χρησιμοποιώντας PRISM 5 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Ομάδα σοφός συγκρίσεις έγιναν με ανάλυση διακύμανσης με post-hoc Tukey διόρθωση του.

Αποτελέσματα

πολυφαινόλες Φύκια λιμάνι υψηλά επίπεδα των αντιοξειδωτικών

Για τον προσδιορισμό των αντιοξειδωτικές δυνατότητες των πολυφαινολών φύκια , εξετάσαμε την ολική αντιοξειδωτική ικανότητα του εξορυσσόμενου κλάσματα συμπεριλαμβανομένων εξανίου, dichloromethane-, αιθύλιο αιθυλεστέρα και μεθάνιο κλάσματα των πέντε φύκια διερευνηθεί. Γαλλικό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος και ένα πολυσακχαρίτη κλάσμα από αντίστοιχη φύκι εξετάσθηκε επίσης για να παρέχει μια σχετική μεγέθυνση των αντιοξειδωτικών σε πολυφαινόλες. TCA αποκάλυψαν σημαντικά επίπεδα αντιοξειδωτικών σε όλα τα κλάσματα φύκια πολυφαινόλης (Εικ. 1). Δοσοεξαρτώμενη αύξηση στα επίπεδα αντιοξειδωτικών όλων των κλασμάτων ερευνήθηκε επικυρώνει ακριβώς αντιοξειδωτικό διαθεσιμότητα και τη συγκέντρωση. Σχετικά, παρατηρήσαμε πολύ υψηλά επίπεδα των αντιοξειδωτικών σε διχλωρομεθάνιο και οξικό αιθυλεστέρα κλάσματα όλων των φυκιών διερευνήθηκαν (Εικ. 1). Ασυναγώνιστα, πολυφαινόλες που προέρχονται από το

Stoechospermum marginatum

έδειξε στο λιμάνι μέγιστη αντιοξειδωτικά, -3.5 φορές υψηλότερη σε κλάσματα DCM και ΕΑ (Εικ. 1). Λόγω του γεγονότος ότι, τα κλάσματα DCM και ΕΑ περιέχει υψηλά αντιοξειδωτικά σε όλη την καφέ άλγη που εξετάστηκαν, μπορούμε επιλεκτικά χρησιμοποιηθούν αυτά τα δύο κλάσματα από κάθε θάλασσα ζιζάνιο να οριοθετηθούν το δυναμικό αντι-ΡΟ.

Οι πολυφαινόλες εκχυλίστηκαν από πέντε είδη καφέ φύκια,

Dictyota dichotoma

(DD),

Hormophysa triquerta

(HT),

Spatoglossum asperum

(Α.Ε.),

Stoechospermum marginatum

( SM) και

Padina tetrastromatica

(PT) χρησιμοποιώντας βαθμίδα διαλυτών πολικότητα συμπεριλαμβανομένων εξάνιο (H), διχλωρομεθάνιο (DCM), το οξικό αιθύλιο (ΕΑ) και μεθανόλη (Μ). Συνολική ανάλυση αντιοξειδωτικής ικανότητας έγινε με Γαλλικό οξύ (GA) ως θετικός μάρτυρας, απλά διαλύτες ως αρνητικοί μάρτυρες και του κλάσματος πολυσακχαρίτη από τα αντίστοιχα φύκια ως σχετικό μέτρο.

Η

Αντιοξειδωτικές πλούσια σε κλάσματα πολυφαινόλες επιβραδύνει τη βιωσιμότητα των κυττάρων PC

Mia-ΡΑΟΑ-2, Panc 3,27, Panc 1 και BxPC3 κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, ΗΤ-DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-ΕΑ , εξετάστηκαν SA-ΕΑ, SM-ΕΑ, PT-ΕΑ, ΗΤ-EA) κλάσματα (10, 20, 50 ή 100 μg /ml) για μεταβολές στην βιωσιμότητα των κυττάρων με χρήση του προσδιορισμού αποκλεισμό μπλε Τρυπάνης. Όλα τα κλάσματα πολυφαινόλης DCM και ΕΑ έδειξε σημαντική (Ρ & lt? 0.001) αναστολή κυτταρικής βιωσιμότητας στο χαμηλότερο συγκέντρωση 10 μg /ml (Σχήμα 2Α).. Με την αύξηση των συγκεντρώσεων των κλασμάτων πολυφαινόλης, παρατηρήσαμε μια δοσοεξαρτώμενη αναστολή της κυτταρικής βιωσιμότητας σε MiaPaCa-2 κύτταρα που εκτίθενται σε DCM ή κλάσματα ΕΑ (Εικ. 2Α). Σταθερά, 100 μg /ml όλων DCM και ΕΑ κλάσμα (-τα) βιωσιμότητα σημαντικά εσωστρεφή κυττάρων (& gt? 60%) σε κύτταρα BxPC3 (Σχήμα 2Β).. Ωστόσο, ΗΤ-ΕΑ έδειξε σχετικά λιγότερο ανασταλτικό δυναμικό σε αυτή την κυτταρική γραμμή. Όπως-σοφός, παρατηρήσαμε μια συνεπή ανασταλτική απόδοση (~ 50%) όλων των κλασμάτων DCM σε Panc 3.27 κύτταρα (Εικ. 2C). Από την άλλη πλευρά, τα κλάσματα ΕΑ έδειξε μια κλίση σε αποτελεσματικότητα από χαμηλή δραστικότητα με DD-ΕΑ σε ένα μέγιστο δραστηριότητας με HT-ΕΑ σε Panc 3,27 κύτταρα (Σχ. 2C). Σε Panc 1 κύτταρα, τόσο DCM και τα κλάσματα ΕΑ ανέστειλαν αξιοσημείωτα την βιωσιμότητα των κυττάρων (Σχ. 2D). Σχετικά, παρατηρήσαμε μια μέγιστη αναστολή της κυτταρικής βιωσιμότητας με SM-DCM και DD-ΕΑ (& gt? 50%) κλάσματα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι πολυφαινόλες από φύκια δυνητικά αναστέλλουν τη βιωσιμότητα των κυττάρων PC και την περαιτέρω αναγνώριση του «

κυττάρου-τύπου

ανεξάρτητη» την ελάχιστη αποτελεσματική (50%) ανασταλτική δόση σε αυτή τη ρύθμιση.

δόσης συνδέεται ρύθμιση της η βιωσιμότητα των κυττάρων για κάθε κλάσματα πολυφαινόλης συγκρίθηκαν με χωρίς θεραπεία ελέγχους χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ΑΝΟνΑ με δοκιμή Bonferonii post-hoc και μία τιμή Ρ & lt? 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική. οικόπεδα Γραμμή δείχνει σημαντική αναστολή της κυτταρικής βιωσιμότητας στο (Β) BxPC-3, (C) Panc-3.27 και Panc-1 κύτταρα κατεργασμένα με ml κλασμάτων 100 μg /DCM ή ΕΑ (D).

Η

πολυφαινόλες φύκια αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων PC

Επίσης να τεκμηριώσει τη δυνατότητα αναστολής του κυτταρικού-βιωσιμότητα των πλούσιων αντι-οξειδωτικό πολυφαινόλες πράγματι μεταφράζεται με την επακόλουθη ρύθμιση της κυτταρικής επιβίωσης, εξετάσαμε την αντι-πολλαπλασιαστική δυναμικό των κλασμάτων DCM και ΕΑ. Για να επιτευχθεί αυτό, μετρήθηκε η συνολική περιεκτικότητα DNA (που στενά ανάλογος με τον αριθμό των κυττάρων) και η έκταση του πολλαπλασιασμού προσδιορίστηκε με σύγκριση μετρήσεις κυττάρων του φαρμάκου αγωγή MiaPaCa-2 και τα κύτταρα Panc-1 με χωρίς θεραπεία ελέγχους. Σε σύγκριση με τους χωρίς θεραπεία ελέγχους, CyQuant-NF ανάλυση αποκάλυψε μια σημαντική δόσης (10, 20, 50 και 100 μg /ml) εξαρτώμενη αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων τόσο σε MiaPaCa-2 και Panc-1 κύτταρα με κάθε διχλωρομεθάνιο (DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, ΗΤ-DCM) ή οξικό αιθυλεστέρα (DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-EA, ΗΤ-EA) κλάσματα (Σχήμα 3). Ωστόσο, αυτές οι πλούσιες αντι-οξειδωτικό κλάσματα εμφάνισε ένα «τύπου κυττάρου που εξαρτώνται από ‘και /ή« διαλύτης-εξαρτώμενη »μέγεθος της αναστολής του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Προφανώς, όλα τα πέντε κλάσματα DCM (100 μg /ml) σε βάθος (~ 50%) ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό MiaPaCa-2 κυττάρων με μέγιστο (~ 75%) αναστολή που παρατηρήθηκε μετά την αγωγή HT-DCM (Σχ. 3Α). Όπως-σοφός, σε κύτταρα Panc-1, DD-DCM, PT-DCM και κατεργασία HT-DCM σθεναρά (-50%) ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων με μέγιστη αναστολή σε PT-DCM κατεργασμένα κύτταρα (Σχ. 3Β). Το πιο σημαντικό, όλα τα κλάσματα EA παρουσίασε επίσης DCM συγκρίσιμες (-50%) πιθανή αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε MiaPaCa-2 κύτταρα (Σχ. 3C). Προφανώς, θεραπεία PT-ΕΑ εμφανίζεται η μέγιστη αναστολή σε αυτά τα κύτταρα. Αν και, DD-ΕΑ, PT-ΕΑ και ΗΤ-ΕΑ έδειξε ανασταλτικό δυναμικό σε κύτταρα Panc-1, σχετικά (σε αντίθεση με DCM), τα κλάσματα που παράγονται ΕΑ οριακή επίδραση (Σχ. 3D). Δεύτερον, εξετάσαμε αν η πολυφαινόλη φύκια ανέστειλε κύτταρο-επιβίωση είναι παροδική (με χρόνο αποκατάστασης εξαρτάται) ή σε μια μόνιμη επίδραση αιτία. MiaPaCa-2 κύτταρα επεξεργασμένα με 100 μg /ml των κλασμάτων DCM και ΕΑ υποβλήθηκαν σε ανάλυση Cyquant μετά από 3, 24, 48 και 72 ώρες. Σε σύγκριση με δείγματα αναφοράς άνευ αγωγής, πολυφαινόλες φύκια ασκεί μία σημαντική (Ρ & lt? 0.001) αντι-πολλαπλασιασμού στο χαμηλότερο από 3 ώρες (Εικόνα 3Ε).. Το πιο σημαντικό, αυτό DCM και τα κλάσματα ΕΑ επαγόμενη αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων παρέμεινε συνεπής μετά από 24, 48 και 72 ώρες (Σχ. 3Ε). Αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν την αντι-πολλαπλασιαστικού δυναμικού των πολυφαινολών φυκιών σε κύτταρα PC και περαιτέρω σύντομο κατάλογο τα δυνητικά κλάσματα σε αυτή τη ρύθμιση.

Τα κύτταρα εκτίθενται στις πολυφαινόλες φύκια αξιολογήθηκαν για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων 3 ώρες μετά τη θεραπεία. Δόση που σχετίζονται αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων για κάθε κλάσματα πολυφαινόλης συγκρίθηκαν με χωρίς θεραπεία ελέγχους χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ΑΝΟνΑ με δοκιμή Bonferonii post-hoc και μία τιμή Ρ & lt? 0,05 θεωρείται στατιστικά σημαντική. (Ε) Γραμμή οικόπεδα της DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-ΕΑ και HT-ΕΑ εκτεθειμένα κύτταρα MiaPaCa-2 που δείχνει σημαντική και παρατεταμένη (3, 24, 48 και 72 ώρες) αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. (F) Γραμμή οικόπεδα της DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-ΕΑ και HT-ΕΑ εκτεθεί φυσιολογικά ανθρώπινα ΜΟΡ10Α, κύτταρα HASMC και HIAE δείχνει συνεπής επιβίωση των κυττάρων 24 ώρες μετά τη θεραπεία. Σε σύγκριση με δείγματα αναφοράς άνευ αγωγής, όλα τα κλάσματα DCM και EA δεν αποκάλυψε σημαντική αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και οι τρεις κυτταρικές γραμμές διερευνήθηκαν. Ώρα-line στο line-οικόπεδα δείχνει ο φθορισμός μετρήσεις (480 nm διέγερση και 520 nm εκπομπή) συνεχώς μέχρι και 60 λεπτά.

Η

Σε συνέχεια για τον προσδιορισμό του όγκου επιλεκτική δυναμικό των πολυφαινολών φύκια και να οριοθετηθούν κανονική κύτταρο κυτταροτοξικότητα, εάν υπάρχουν, εξετάσαμε τις επιδράσεις αυτών των κλασμάτων για την υγιεινή επιβίωση των κυττάρων. Γι ‘αυτό το ΜΟΡ10Α, HIAE και HASMC κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με 100 μg /ml του DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT-ΕΑ ή ΗΤ-ΕΑ εξετάστηκαν μετά από 24 ώρες για μεταβολές στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Φθορισμού (480 nm διέγερση και 520 nm εκπομπή) μετρήθηκε συνεχώς μέχρι και 60 λεπτά. Σε σύγκριση με μη κατεργασμένους ελέγχους, ανάλυση CyQuant NF δεν αποκάλυψε καμία σημαντική αναστολή της επιβίωσης των κυττάρων σε κύτταρα ΜΟΡ10Α. Όπως-σοφός, παρατηρήσαμε μια συνεπή επιβίωση των κυττάρων τόσο στα κύτταρα HASMC και HIAE αντιμετωπίζονται με DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-EA, SA-EA, SM-ΕΑ, PT-EA ή HT-ΕΑ συνεπάγεται καμία οριστική κυτταροτοξικότητα αυτών των κλασμάτων σε φυσιολογικά κύτταρα.

πολυφαινόλες φύκια ασκεί αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα PC

Για να οριοθετηθούν κατά πόσον το δυναμικό αντι-PC πολυφαινολών φύκια συνεπάγονται αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο και να προσδιορίσει το δυνητικό μέγεθος των διαφόρων κλασμάτων χαρακτηρίζεται, εξετάσαμε τις σχετικές μεταβολές στην κατάτμηση του DNA. Από την αξιολόγηση της απόπτωσης δεν μπορεί να προβληθεί σε ένα μόνο σημείο τερματισμού, θα χρησιμοποιηθεί τόσο ποιοτικά όσο ακριδίνης πορτοκαλί /βρωμιούχο αιθίδιο χρώση και ημι-ποσοτική αγαρόζης κατακερματισμού του DNA τζελ στα κύτταρα MiaPaCa-2 Panc-1, Panc 3.27, BxPC3 και. Σε σύγκριση με μη επεξεργασμένους μάρτυρες, μικροσκοπία φθορισμού αποκάλυψε ότι όλες οι πλούσιες αντιοξειδωτικές κλάσματα πολυφαινόλες συμπεριλαμβανομένων DD-DCM, SA-DCM, SM-DCM, PT-DCM, HT-DCM, DD-EA, SA-EA, SM-EA, PT -EA και ΗΤ-ΕΑ παρουσιάζει αποπτωτικά χαρακτηριστικά (Εικ. 4). Προφανώς, παρατηρήσαμε απόκλιση μεγεθών κατακερματισμού του DNA σε τέσσερις PC κυτταρικές σειρές αντιμετωπίζονται με αυτές τις πολυφαινόλες. Σταθερά, σε σύγκριση με τους μη επεξεργασμένους μάρτυρες, agaorse ανάλυση κατακερματισμού γέλη-DNA έδειξαν στατιστικά σημαντική (Ρ & lt? 0,05) επαγωγή του κατακερματισμού του DNA σε Panc 1, Panc 3.27, BxPC-3 και MiaPaCa-2 κύτταρα επεξεργασμένα με πολυφαινόλες φύκια, εκτός από DD- DCM (Εικ. 5). Συγκριτικά, παρατηρήσαμε μια μέγιστη (& gt? 2 φορές) DNA βλάπτουν επίδραση όλων των πολυφαινολών φύκι Panc-1 και Panc-3,27 κύτταρα. Έκταση του κατακερματισμού του DNA που προκαλείται από αυτές τις πολυφαινόλες αποδεικνύει ότι τα φύκια απασχολούν αποπτωτικών κυττάρων-δολοφονία στο PC

Εισαγωγή:. Υψηλή μικροφωτογραφίες μεγέθυνσης δείχνει χρωματίνης με διόγκωση, πυρηνική συμπύκνωση, και τον κατακερματισμό που δείχνει τυπικά αποπτωτικά χαρακτηριστικά σε κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με φύκια πολυφαινόλες.

Η

δείγματα DNA υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε 2% πηκτή αγαρόζης που περιέχει βρωμιούχο αιθίδιο και ποσοτικά με τη χρήση Ποσότητα-One.

Η

πολυφαινόλες Φύκια αναστέλλει λειτουργική ενεργοποίηση του ΝΡκΒ

Περαιτέρω να διερευνήσει ότι οι πολυφαινόλες φυκιών που επάγεται αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο περιλαμβάνει την αναστολή της προ-επιβίωσης ΝΡκΒ, εξετάσαμε την ρύθμιση της ενεργοποίησης ΝΡκΒ προωθητή με αυτές DCM και ΕΑ κλάσματα σε κύτταρα PC. Για το σκοπό αυτό, η ανθρώπινη Panc-1, BxPC-3 και MiaPaCa-2 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με πλασμίδιο κατασκεύασμα pNFκB-Luc που εκφράζει το γονίδιο αναφοράς λουσιφεράσης σε ένα ΝΡκΒ-εξαρτώμενο τρόπο. Η δέσμευση του ΝΡκΒ στον προαγωγό ενεργοποιεί μεταγραφή, επιτρέποντας το γονίδιο ρεπόρτερ Luc που θα εκφραστεί. Τα επιμολυσμένα κύτταρα εκτέθηκαν σε DCM και τα κλάσματα ΕΑ (ατομικά), και η δοκιμασία λουσιφεράσης εκτελέστηκε μετά από 24 ώρες. Κύτταρα κατεργασμένα με φύκια πολυφαινόλης DCM και τα κλάσματα ΕΑ οδήγησε σε έντονη αναστολή της δραστηριότητας της λουσιφεράσης, υποδεικνύοντας ότι αυτά τα κλάσματα θα μπορούσε να ανακουφίσει ειδικά μεταγραφική ενεργοποίηση του ΝΡκΒ (Εικ. 6). Αν και βρήκαμε οριακές διαφορές μεταξύ των κλασμάτων και κατά μήκος των κυτταρικών γραμμών, σε γενικές γραμμές τα στοιχεία πορτραίτα σαφώς μια αξιοσημείωτη μείωση της δραστηριότητας της λουσιφεράσης πολύ μικρότερο από ό, τι τα βασικά επίπεδα αποδεικνύοντας το δυναμικό τους στην εξασθένηση του ΝΡκΒ μεταγραφή.

Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέχθηκαν σε 24 ώρες μετά τη θεραπεία. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται αντιπροσωπεύουν μέση τιμή και την τυπική απόκλιση (SD) τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Σημαντική μείωση της δραστηριότητας της λουσιφεράσης σε πολυφαινόλες φύκια επεξεργασμένα κύτταρα PC.

Η

πολυφαινόλες Φύκια ρύθμιση του όγκου μόρια εξέλιξη στα κύτταρα PC

Επίσης, για να τεμαχίσει το όφελος των αντι-οξειδωτικών πολυφαινόλες πλούσια σε φύκια