Αφηρημένο

Ιστορικό

Μια κοινή πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP), rs3802842, βρίσκεται στο 11q23, ταυτίστηκε με μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος-ευρεία (GWAS) να σχετίζεται σημαντικά με τον κίνδυνο του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC)? Ωστόσο, τα αποτελέσματα των παρακάτω μελέτες αντιγραφής δεν ήταν πάντα συγκλίνουσες. Έτσι, μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων και μία μετα-ανάλυση έγιναν για να διακρίνουμε με σαφήνεια το αποτέλεσμα αυτής της παραλλαγής σε CRC.

Τρόπος και Ευρήματα

Εμείς καθορίζεται τις γονότυπους του rs3802842 στο 641 άσχετες κινεζικά ασθενείς με CRC και 1037 χωρίς καρκίνο ελέγχους. Επιπλέον, διεξήχθη μια μετα-ανάλυση που περιλαμβάνει την τρέχουσα και προηγουμένως δημοσιευμένων μελετών. Στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας, σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ του πολυμορφισμού και τον κίνδυνο CRC παρατηρήθηκαν σε όλες τις γενετικές μοντέλα, με ένα πρόσθετο ή να είναι 1,45 (95% CI = 1,26 – 1,67). Η μετα-ανάλυση των 38.534 περιπτώσεις και 39.446 έλεγχοι επιβεβαίωσαν περαιτέρω τις σημαντικές ενώσεις σε όλες τις γενετικές μοντέλα, αλλά με εμφανείς μεταξύ μελετών ετερογένεια. Παρ ‘όλα αυτά, η εθνικότητα, το είδος της μελέτης και κατά πόσον τα θέματα που θίγονται από το σύνδρομο Lynch θα μπορούσε συνθετικά αντιπροσώπευαν την ετερογένεια. Εκτός αυτού, η σωρευτική και αναλύσεις ευαισθησίας έδειξε την ισχυρή σταθερότητα των αποτελεσμάτων.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματα από τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας και μετα-ανάλυση που παρέχονται πειστικά στοιχεία που rs3802842 συνεισέφερε σημαντικά στην CRC κίνδυνο .

Παράθεση: Ζου L, Zhong R, Lou J, Lu Χ, Wang Q, Yang Y, et al. (2012) Η αναπαραγωγή Μελέτη στα κινεζικά Πληθυσμός και μετα-ανάλυση Υποστηρίζει Καταστατικού της 11q23 Locus με καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 7 (9): e45461. doi: 10.1371 /journal.pone.0045461

Επιμέλεια: Xiao-Ping Miao, Tongji Medical College, Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας, η Κίνα

Ελήφθη: 14 Ιούν 2012? Αποδεκτές: 22 Αυγ 2012? Δημοσιεύθηκε: 18 Σεπ, 2012

Copyright: © Ζου et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (31072238, 31172441, 81170650). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC), ως μία από τις πιο κοινές κακοήθειες, αντιπροσώπευε κατ ‘εκτίμηση 1.230.000 νέες περιπτώσεις και 680.000 θανάτους παγκοσμίως το 2008 [1]. Στις Ηνωμένες Πολιτείες, CRC ήταν η δεύτερη πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο, με συχνότητα 51,6 και θνησιμότητας των 19,7 ανά 100.000 πληθυσμού το 2008 [2]. Στην Κίνα, επιδημιολογικές μελέτες δείχνουν ότι η συχνότητα εμφάνισης της CRC έχει αυξηθεί ραγδαία, ιδίως στις αστικές περιοχές. Ο αριθμός των ατόμων που έχουν προσβληθεί αυξάνεται όσο το 4,2% κάθε χρόνο 1973 – 1993 στη Σαγκάη, η οποία ήταν ακόμα υψηλότερη από τον παγκόσμιο επίπεδο (2%) [3]. Επιπλέον, τα δεδομένα από 56 μητρώα καρκίνου στην Κίνα έδειξε ότι τα ποσοστά εμφάνισης και θνησιμότητας των CRC κατετάγη αντίστοιχα το τρίτο (31,4 /100.000) και πέμπτο (14,8 /100.000) μεταξύ των καρκίνων που επηρεάζονται οι άνδρες και οι γυναίκες το 2008 [4]. Μεταξύ των παραγόντων κινδύνου για την ασθένεια, κληρονόμησε ευαισθησία παίζει ένα ρόλο στην ανάπτυξη του CRC, η οποία είναι υπεύθυνη για περίπου το 35% της διακύμανσης στο CRC κινδύνου [5]. Ωστόσο, υψηλής διεισδυτικότητας μεταλλάξεις βλαστικής σειράς αντιπροσωπεύουν μόνο το 6% των CRC περιπτώσεων [6], γεγονός που υποδηλώνει ότι το υπόλοιπο κληρονομιά είναι πιθανό να είναι μια συνέπεια των πολλών κοινών παραλλαγές με χαμηλή διεισδυτικότητα.

Γονιδίωμα-ευρύ μελέτες σύνδεσης ( GWAS), εφαρμόζεται αποτελεσματικά στον εντοπισμό κοινών γενετικών παραλλαγών για πολύπλοκες ασθένειες, χωρίς προηγούμενη γνώση της λειτουργίας των γονιδίων, έχουν μέχρι στιγμής αποκαλύφθηκαν πολλαπλές μυθιστόρημα πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) με ευαισθησία CRC [7] – [12]. Μεταξύ αυτών των SNPs, rs3802842 (11q23.1), που βρίσκεται στην περιοχή ιντρονίου του

C11orf93

, ήταν αρχικά προσδιορίζονται σε ένα σύνολο GWA του 3004 περιπτώσεις και 3094 ελέγχους και 8 σετ αντιγραφή 14453 περιπτώσεις και 13259 ελέγχων [7 ]. Pittman AM et al. επικυρώνονται αμέσως το θετικό εύρημα στα δεδομένα συγκέντρωσης από 8 ανεξάρτητες σειρές ασθενών-μαρτύρων που περιλαμβάνουν συνολικά 10.638 περιπτώσεις και 10.457 ελέγχους [13]. Εκτός αυτού, rs3802842 είναι η πρώτη θέση αναφερθεί ότι παρουσιάζουν μια διαφορά πληθυσμού μεταξύ της Ιαπωνίας και του Καυκάσου πληθυσμούς [7]. Αν και υπάρχουν πολλά στατιστικά στοιχεία της παρούσας SNP για CRC, τα αποτελέσματα από τις μελέτες αντιγραφής δεν είναι πάντα σύμφωνη [14] – [16], η οποία είναι πιθανόν να οφείλεται στο λεγόμενο «κατάρα του νικητή» φαινόμενο ότι οι αρχικές μελέτες υπερεκτιμούν γενικά το αποτέλεσμα μεγέθη, μελέτες αναπαραγωγής είναι πιθανό να underpowered και τόσο πιο πιθανό να αποτύχει, εάν οι υπολογισμοί του μεγέθους του δείγματος με βάση τις υπερεκτίμησης των μεγεθών επίδρασης [17]. Επιπλέον, η μέτρια επίδραση αυτής της παραλλαγής μπορεί να είναι επίσης ένας από τους σημαντικούς λόγους για την αποτυχία της αντιγραφής. Παρ ‘όλα αυτά, μετα-ανάλυση είναι μια ισχυρή τεχνική για να διευκρινιστούν τα αντιφατικά ευρήματα σε μελέτες γενετική συσχέτιση με την αύξηση του μεγέθους του δείγματος [18]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, αν και οι σχετικές επιμέρους παραλλαγές εντοπίζονται μέσω GWAS παρέχουν μόνο μέτρια κινδύνους για CRC, ο πληθυσμός που αναλογεί αναλογίες κινδύνου έχουν θεωρηθεί ότι είναι σημαντική λόγω των σημαντικών έλασσον αλληλόμορφο συχνότητες [19]. Έτσι, πραγματοποίησε μια μελέτη αναπαραγωγής για να εξετάσει τη σχέση μεταξύ rs3802842 και τον κίνδυνο CRC σε ένα κινεζικό πληθυσμό, χρησιμοποιώντας ένα σχέδιο-μαρτύρων, μετά από αυτό, μια μετα-ανάλυση που συνδυάζει τις τρέχουσες και προηγουμένως δημοσιευμένες μελέτες σχετικά με rs3802842 περαιτέρω εκτελείται για να παρέχει μια πιο ακριβή εκτίμηση αυτής της σύνδεσης. Στη συνέχεια, ο πληθυσμός που αναλογεί κινδύνου (PAR) υπολογίστηκε προκειμένου να αξιολογηθεί η επίδραση του rs3802842 για CRC εμφάνιση στο γενικό πληθυσμό.

Υλικά και Μέθοδοι

Πληθυσμός μελέτης

συνολικά 641 περιπτώσεις CRC είχαν νοσηλευόμενους διαδοχικά εγγραφεί μέσω της Tongji νοσοκομείο της Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας μεταξύ 2009 και 2011, η οποία είναι μια κορυφαία ολοκληρωμένη νοσοκομειακή απορρόφηση πλειοψηφία των ασθενών με καρκίνο στο Wuhan και σε κοντινή απόσταση περιοχή. Όλες οι περιπτώσεις είχαν πρόσφατα διαγνωστεί και ιστοπαθολογικά επιβεβαίωσε χωρίς καμία επεξεργασία πριν από τη συλλογή δειγμάτων αίματος. Και 1037 χωρίς καρκίνο έλεγχοι επιλέχθηκαν τυχαία μεταξύ των ατόμων που συμμετείχαν σε προγράμματα check-up για την υγεία στο ίδιο νοσοκομείο την ίδια χρονική περίοδο, όπως είχαν εγγραφεί οι περιπτώσεις. Η υγεία check up των προγραμμάτων και κυρίως συμμετέχουν οι κάτοικοι που ζουν σε Wuhan και σε κοντινή απόσταση περιοχή. Τα κριτήρια επιλογής για τους ελέγχους δεν ήταν ατομικό ιστορικό καρκίνου και η συχνότητα ταιριάζει με CRC περιπτώσεις το φύλο και την ηλικία (± 5 έτη). Εάν ένα άτομο είχε υποψίες ότι έχουν CRC μέσω της υγείας check up προγράμματα και, στη συνέχεια ιστοπαθολογικά επιβεβαίωσε, αυτός /αυτή επιλέχθηκε ως μια υπόθεση, ότι καμία περίπτωση διαπιστώθηκε από τον έλεγχο της υγείας των προγραμμάτων σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων. Όλα τα θέματα που είχαν σχέση εθνοτικών Κινέζων Χαν. Κατά την πρόσληψη, επιδημιολογικά δεδομένα που συλλέχθηκαν από προσωπική συνέντευξη ή μια ανασκόπηση των ιατρικών αρχείων, και 5-ml περιφερικού φλεβικού αίματος από κάθε συμμετέχοντα. Οι συμμετέχοντες παρέχεται γραπτή συγκατάθεση τους να συμμετάσχουν σε αυτή τη μελέτη και η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Ηθική επιτροπή Tongji Νοσοκομείο Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας.

Γονοτυπικές

Το γονιδιακό DNA εξήχθη από 5- δείγμα αίματος ml χρησιμοποιώντας το RelaxGene αίματος Σύστημα DP319-02 (Tiangen, Πεκίνο, Κίνα) σε σχέση με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η rs3802842 ήταν ο γονότυπος χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία TaqMan SNP Γονοτυπικές (Applied Biosystems, Fostercity, CA) σε Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Fostercity, CA) 7900HT. Για να εξασφαλισθεί ο έλεγχος της ποιότητας, 5% αντιγραφεί δείγματα επιλέχθηκαν τυχαία για να εκτιμηθεί η επαναληψιμότητα, με ένα ποσοστό συμφωνία του 100%.

Στατιστική Ανάλυση

Απόκλιση των συχνοτήτων γονοτύπου σε ελέγχους από εκείνες που αναμένονται στο πλαίσιο Hardy-Weinberg ισορροπία υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την καλοσύνη-of-fit

χ

2

δοκιμή. Οι διαφορές σε δημογραφικές μεταβλητές και κατανομή των γονοτύπων μεταξύ ασθενών και μαρτύρων εξετάστηκαν από

χ

2

δοκιμή ή

t

δοκιμή, όταν κρίνεται σκόπιμο. Η συσχέτιση μεταξύ rs3802842 και του κινδύνου CRC υπολογίστηκε ως ποσοστό πιθανοτήτων (OR) με διάστημα εμπιστοσύνης 95% (95% CI), η οποία υπολογίζεται από την άνευ όρων πολυπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση με προσαρμογή για το φύλο και την ηλικία. ΕΑΠ και το 95% ΚΠ ως τις μετρήσεις του μεγέθους αποτελέσματος υπολογίστηκαν εκ νέου για το αλληλόμορφο C σε σχέση με τα Α, γονότυποι AC έναντι ΑΑ και CC έναντι ΑΑ. Προκειμένου να αποφευχθεί η υπόθεση των γενετικών μοντέλων, κυρίαρχη, υπολειπόμενο και προσθετικό μοντέλα αναλύθηκαν επίσης. Για την προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις, εφαρμόστηκε η μέθοδος Bonferroni. Επιπλέον, στρωματοποιημένη αναλύσεις θέση του όγκου και της διαφοροποίησης του όγκου διεξήχθησαν για να αξιολογηθεί περαιτέρω ο ρόλος των rs3802842 σε CRC. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν στο SPSS 18.0 και όλα

P

τιμές είναι δίπλευρη με σημαντικό επίπεδο στο 0,05.

Μετα-ανάλυση των rs3802842, σε συνεργασία με CRC Κίνδυνος

για να εξασφαλιστεί η αυστηρότητα αυτού του ρεύματος μετα-ανάλυση, σχεδιάσαμε και ανέφερε ότι σύμφωνα με τα στοιχεία που Προτεινόμενα Πληροφόρησης για συστηματικές ανασκοπήσεις και μετα-αναλύσεις (PRISMA) δήλωση (https://www.prisma-statement.org) και η Λίστα ελέγχου φαίνεται στο πίνακα ελέγχου S1.

Ψάξαμε PubMed, EMBASE και ISI Web of Science βάσεων δεδομένων για μελέτες που δημοσιεύθηκαν σε οποιαδήποτε γλώσσα μέχρι Απρίλη του 2012 με τη χρήση των όρων αναζήτησης

rs3802842

,

C11orf53

, ή

11q23.1

σε συνδυασμό με

καρκίνο του παχέος εντέρου

,

παχέος νεοπλασία

,

ορθοκολικού αδενώματος

,

καρκίνο του παχέος εντέρου

ή

ορθού καρκίνου

. Για να επεκτείνετε την κάλυψη των αναζητήσεων μας, πραγματοποιήσαμε περαιτέρω αναζητήσεις στη βάση δεδομένων κινεζική Βιοϊατρική (ΜΟΕ) [20] με βάση την παραπάνω στρατηγική αναζήτησης. Οι αναφορές του αφαιρεθέντος άρθρα και σχόλια, επίσης ελέγχθηκαν για πρόσθετες μελέτες. Ψάχνοντας έγινε εις διπλούν από δύο ανεξάρτητους κριτές (L. Ζου και R. Zhong). Τα ακόλουθα κριτήρια εφαρμόστηκαν για την επιλογή της βιβλιογραφίας: (1) μελέτη ασθενών-μαρτύρων αξιολόγηση της συσχέτισης μεταξύ rs3802842 και του κινδύνου CRC? (2) παρουσίαση του αργού /προσαρμοστεί Ή με 95% CI ή επαρκή στοιχεία για τον υπολογισμό του αργού /προσαρμοστεί Ή με 95% CI? (3) μελέτες των ανθρώπων. Όταν υπήρχαν πολλαπλές δημοσιευμένες αναφορές από τον ίδιο τον πληθυσμό της μελέτης, το ένα με πλήρη σχεδιασμό ή μεγαλύτερο μέγεθος του δείγματος ήταν τελικά επιλεγεί. Αν περισσότερες από μία εθνοτική πληθυσμού που περιλαμβάνονται σε μία έκθεση, κάθε πληθυσμός θεωρήθηκε ξεχωριστά. Όλα τα δεδομένα που εξήχθησαν ανεξάρτητα από δύο αναθεωρητές (L. Ζου και R. Zhong) και οποιαδήποτε διαφωνία επιδικάστηκε από το ένα τρίτο συγγραφέα (Q. Wang). Για κάθε μελέτη, που συνοψίζονται πρώτου συγγραφέα, το έτος δημοσίευσης, γεωγραφική θέση, την εθνικότητα του πληθυσμού της μελέτης, είδος μελέτης, η μέθοδος προσδιορισμού του γονότυπου, ο αριθμός των περιπτώσεων και ελέγχων, αρσενικό /θηλυκό ρυθμό, μέση ηλικία, το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου, η πηγή της ομάδας ελέγχου και οι συχνότητες των γονοτύπων σε περιπτώσεις και τους ελέγχους. Το αλληλόμορφο C σε σχέση με τα Α, γονότυποι AC έναντι ΑΑ και CC έναντι ΑΑ ήταν όλα υπολογίζονται και κυρίαρχη, υπολειπόμενο και πρόσθετο μοντέλα, επίσης, υποτίθεται για rs3802842, αντίστοιχα. Η διόρθωση Bonferroni εφαρμόστηκε επίσης για την εξουδετέρωση του προβλήματος των πολλαπλών συγκρίσεων. Η ετερογένεια μεταξύ των μελετών αξιολογήθηκε με

χ

2

βάση Cochran του

Q

στατιστική (ετερογένεια θεωρήθηκε σημαντική σε

P

& lt? 0.10). Η

2

Στατιστική στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η ετερογένεια ποσοτικά (

2

& lt? 30%, δεν υπάρχει μεταξύ μελετών ετερογένεια ή οριακή μεταξύ μελετών ετερογένεια?

2 =

30% -75%, ήπια ετερογένεια?

2

& gt? 75%, αξιοσημείωτη ετερογένεια) [21]. Ένα σταθερό ενέργειες μοντέλο, χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Mantel-Haenszel, εκδόθηκε προκειμένου να υπολογιστεί η συγκεντρωτική ή όταν δεν ανιχνεύθηκε σημαντική ετερογένεια [22]? Αλλιώς, μια τυχαία εφέ μοντέλο, χρησιμοποιώντας Dersimonian και η μέθοδος Laird, εφαρμόστηκε [23]. Συνολικά μετα-ανάλυση για rs3802842 είχε αρχικά εκτελεστεί. Στη συνέχεια πραγματοποιήσαμε στρωματοποίηση αναλύει εάν επιτρέπεται δεδομένων (ο αριθμός των μελετών που λαμβάνονται σε κάθε υποομάδα είναι όχι λιγότερο από 3), σύμφωνα με την εθνικότητα (Ευρώπης, της Ασίας και της Αφρικής), το είδος της μελέτης (GWAS και μελέτες αναπαραγωγής), θέση του όγκου (του παχέος εντέρου και του ορθού καρκίνους) και αν τα θέματα που θίγονται από το σύνδρομο Lynch. Επιπλέον, ανάλυση ευαισθησίας διεξήχθη, στην οποία οι συγκεντρωτικές ΙΑΠ υπολογίστηκαν μετά παράλειψη της κάθε μελέτης με τη σειρά του [24]. Αθροιστική μετα-ανάλυση εφαρμόστηκε επίσης μέσω ποικιλία των μελετών με το χρόνο δημοσίευσης [25]. Μια εκτίμηση των πιθανών προκατάληψη δημοσίευση εκτελέστηκε με δοκιμή Egger [26]. Αν υπήρχε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του πολυμορφισμού και CRC κινδύνου που εντοπίστηκαν στο συνολικό μετα-ανάλυση για κάθε γενετικό μοντέλο, αναλύσεις βιοπληροφορική περαιτέρω διενεργείται με την πρόβλεψη της λειτουργίας του rs3802842 χρησιμοποιώντας τρία ολοκληρωμένα εργαλεία βιοπληροφορικής «Info SNP» (http: //manticore.niehs.nih.gov/snpfunc.htm), «FastSNP» (https://fastsnp.ibms.sinica.edu.tw/pages/input_CandidateGeneSearch.jsp) και «F-SNP» (http: //compbio. cs.queensu.ca/F-SNP/). Για να εξεταστεί η συμβολή αυτού του πολυμορφισμού στην εμφάνιση CRC σε γενικό πληθυσμό, ο PAR υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: Pr (RR-1) /[1 + Pr (RR-1)], όπου το

Pr

, η αναλογία των ατόμων ελέγχου που εκτίθενται σε αλληλόμορφο του ενδιαφέροντος, μπορεί να υπολογιστεί με ελάσσονα συχνότητα αλληλίου (MAF) που αναφέρθηκαν σε βάση δεδομένων dbSNP και ο σχετικός κίνδυνος (RR) υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τα κοινά ή παράγονται από την μετα-ανάλυση [27] . Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με Stata 11,0 λογισμικό και

P

τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρούνται στατιστικά σημαντικές για όλες τις δοκιμές εκτός από

Q

δοκιμή για ετερογένεια

Αποτελέσματα.

Αποτελέσματα μελέτη ασθενών-μαρτύρων

χαρακτηριστικά του πληθυσμού.

Τα χαρακτηριστικά των περιπτώσεων και των ελέγχων που αναφέρονται στον πίνακα 1. Δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των περιπτώσεων και των ελέγχων για το φύλο και την ηλικία . Τα αρσενικά ήταν 59,9% μεταξύ των περιπτώσεων σε σύγκριση με 59,1% στους ελέγχους (

P

= 0,748). Η μέση ηλικία (± τυπική απόκλιση) ήταν 56,31 (± 12,59) έτη για τις περιπτώσεις και 57,24 (± 10,86) έτη για τους ελέγχους (

P

= 0,119). Από τις περιπτώσεις, 250 είχαν καρκίνο του παχέος εντέρου και 391 είχαν καρκίνο του ορθού. Για τη διαφοροποίηση του όγκου, 80, 445 και 116 περιπτώσεις ταξινομήθηκαν ως κακή, μέτρια και καλά διαφοροποιημένα αντίστοιχα.

Η

Σύλλογος ανάλυση.

Τα στοιχεία γονότυπο του rs3802842 για τις περιπτώσεις και τους ελέγχους παρουσιάζονται στον πίνακα 2. Η κατανομή γονότυπων σε ελέγχους συμμορφωθεί με την ισορροπία Hardy-Weinberg (

P

= 0,323). Οι συχνότητες γονοτύπου για αυτό το πολυμορφισμό στην ομάδα περίπτωση διέφεραν από εκείνες στην ομάδα ελέγχου (

P

= 0.000). Στο πολυπαραγοντικό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης με προσαρμογή για την ηλικία και το φύλο, τα άτομα που έφεραν το αλληλόμορφο C, AC ή CC γονότυπο είχαν σημαντικά αυξημένους κινδύνους του CRC σε σύγκριση με εκείνες που το Α αλληλόμορφο ή ΑΑ γονότυπο (C έναντι Α: OR = 1,44, 95% CI = 1,25 – 1,66? AC έναντι ΑΑ: OR = 1,76, 95% CI = 1,40 – 2,21? CC έναντι ΑΑ: OR = 1.99, 95% CI = 1,48 – 2,67). Ομοίως, σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ αυτού του πολυμορφισμού και τον κίνδυνο CRC βρέθηκαν σε κυρίαρχη, υπολειπόμενο και πρόσθετο μοντέλα (κυρίαρχο μοντέλο: OR = 1.82, 95% CI = 1,46 – 2,26? Υπολειπόμενο μοντέλο: OR = 1.41, 95% CI = 1,09 – 1,82? προσθετικό μοντέλο: OR = 1.45, 95% CI = 1,26 – 1,67). Η συσχέτιση μεταξύ rs3802842 και του κινδύνου CRC για όλες τις συγκρίσεις και τη γενετική μοντέλα παρέμεινε σημαντική μετά από διόρθωση για πολλαπλές δοκιμές.

Η

Στη συνέχεια, στρωματοποιημένη δεδομένων σύμφωνα με τις παθολογικοί παράγοντες (Πίνακας 2). Ο πολυμορφισμός συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου σε όλα τα γενετικά μοντέλα εκτός από το υπολειπόμενο μοντέλο. Παρατηρήθηκαν επίσης σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ του πολυμορφισμού και του καρκίνου του ορθού για όλες τις γενετικές μοντέλα. Ωστόσο, η προσαρμογή για πολλαπλές δοκιμές οδήγησε σε null-σημαντική συσχέτιση στο υπολειπόμενο πρότυπο για παχέος εντέρου ή του καρκίνου του ορθού. Όσον αφορά τη διαφοροποίηση του όγκου, η παραλλαγή σε όλες τις γενετικές μοντέλα που παρουσιάζονται σημαντικά αυξημένα κίνδυνο CRC με ελάχιστα ή επιβραδύνθηκε διαφοροποιούνται. Για καλά διαφοροποιημένο καρκίνο, εκτός από το υπολειπόμενο μοντέλο, ανιχνεύθηκαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ του πολυμορφισμού και του κινδύνου CRC. Μετά τη διόρθωση για πολλαπλές δοκιμές, η ένωση παρατηρήθηκε να είναι μηδενική σημαντική στο υπολειπόμενο πρότυπο για κακώς, εποπτεύονται ή καλά διαφοροποιημένο καρκίνο.

Τα αποτελέσματα της μετα-ανάλυσης

χαρακτηριστικά Μελέτη.

Εικόνα S1 δείχνει τις διαδικασίες αναζήτησης βιβλιογραφίας και επιλογής σπουδών. Μετά από ολοκληρωμένη έρευνα, εντοπίστηκαν και εξετάστηκαν για την ανάκτηση, εκ των οποίων, 15 δημοσιεύσεις πληρούσαν τα κριτήρια ένταξης 31 δυνητικά σχετικές δημοσιεύσεις. Ωστόσο, οι δημοσιεύσεις που αναφέρονται αντίστοιχα από Hutter CM et al. [28], Mates ΣΤΟΝ et al. [29], Niittymäki I et al. [30], και SJ Lubbe et al. [31] εξαιρέθηκαν από τα υποθέσεων σε μεγάλο βαθμό επικαλύπτονται με τα δείγματα των προηγούμενων μελετών. Ως εκ τούτου, 11 δημοσιεύσεις, συν την τρέχουσα μελέτη περιλαμβάνει 32 μελέτες ασθενών-μαρτύρων των 38.534 περιπτώσεις και 39.446 έλεγχοι συνέβαλαν τα στοιχεία για αυτή την μετα-ανάλυση [7], [13] – [16], [32] – [37]. Μεταξύ αυτών, οι δημοσιεύσεις που αναφέρονται αντίστοιχα από Kupfer SS et al. [15] και Αυτός J et al. [16] παρέχονται μόνο προσαρμοσμένη πρόσθετο ΕΑΠ, έτσι ήταν απλώς συμπεριληφθεί στη συγκεντρωτική ανάλυση για προσθετικό μοντέλο. Εκτός αυτού, υπήρχε μόνο ένας αλληλομόρφων ή λαμβάνονται στη δημοσίευση από Middeldorp Α et al. [32], ως εκ τούτου, η μελέτη απλώς συμμετείχε στη συγκεντρωτική ανάλυση για το μοντέλο αλληλομόρφων. Επιπλέον, 3 μελέτες που περιλαμβάνονται κάποιες ασθενείς με σύνδρομο Lynch [32], [33], [35]. Ο Πίνακας 3 δείχνει τα χαρακτηριστικά των περιλαμβάνονται μελέτες.

Η

Συνολικά μετα-ανάλυση των rs3802842 στο σχετίζονται με CRC.

Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4, σημαντικές ενδείξεις ετερογένειας ανιχνεύθηκε σε όλα γενετικών μοντέλων (όλα

P

για ετερογένεια & lt? 0.10), ως εκ τούτου, ΕΑΠ για όλες τις γενετικές μοντέλα συγκεντρώθηκαν κάτω από τυχαίες ενέργειες μοντέλο. Σε σύγκριση με το Α αλληλόμορφο, το αλληλόμορφο C παρέχει μια συγκεντρωτική Ή 1,15 (95% CI = 1.11 – 1.19) στο μοντέλο αλληλομόρφων. Γονοτυπική ΕΑΠ του εναλλασσόμενου ρεύματος έναντι ΑΑ και CC έναντι ΑΑ ήταν 1,18 (95% CI = 01.12 – 01.24) και 1,31 (95% CI = 1,20-1,42), αντίστοιχα. Ομοίως, σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ αυτού του πολυμορφισμού και τον κίνδυνο CRC βρέθηκαν σε κυρίαρχη, υπολειπόμενο και πρόσθετο μοντέλα (κυρίαρχο μοντέλο: OR = 1.20, 95% CI = 1,15-1,26? Υπολειπόμενο μοντέλο: OR = 1.20, 95% CI = 01.12 έως 01.29? προσθετικό μοντέλο: OR = 1.15, 95% CI = 01.11 – 01.19). Το πρόσθετο ή και το αντίστοιχο 95% CI δεν άλλαξε μετά από τόσο αργό και προσαρμόζονται ΕΑΠ συνδυάστηκαν (OR = 1,15, 95% CI = 1.11 – 1.19). Τα θετικά αποτελέσματα που παρέμεινε σημαντική μετά ρυθμίζεται από πολλαπλές δοκιμές.

Η

Στρωματοποιημένη ανάλυση.

Η στρωματοποιημένη ανάλυση πρώτον διεξήχθη από την εθνικότητα (Πίνακας 4). Λόγω της λιγότερο από 3 μελέτες όσον αφορά τις αφρικανικές, τα συγκεκριμένα δεδομένα για rs3802842 κατανεμήθηκαν σε δύο υποομάδες μόνο: ευρωπαϊκές και ασιατικές. Μετά διαστρωμάτωση από την εθνικότητα, τη σημαντική μεταξύ μελετών ετερογένεια μειώνεται αποτελεσματικά στην ευρωπαϊκή, ενώ η ετερογένεια στις ασιατικές ακόμα εντοπιστεί. Σε ευρωπαϊκό πληθυσμό, ο πολυμορφισμός παρουσίασε αυξηθεί σημαντικά τους κινδύνους της CRC σε όλες τις γενετικές μοντέλα. Στις ασιατικές πληθυσμού, όλες οι γενετικές τα μοντέλα εκτός από το υπολειπόμενο πρότυπο εμφάνισαν σημαντικές συσχετίσεις με CRC κίνδυνο. Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση βρέθηκε για το γονότυπο AC έναντι ΑΑ, CC έναντι ΑΑ, κυρίαρχο μοντέλο και υπολειπόμενο μοντέλο, όταν η διόρθωση Bonferroni εκτελέστηκε. Τα δεδομένα περαιτέρω ανά τύπο μελέτη GWAS και μελέτες αναπαραγωγής (Πίνακας 4). Ετερογένεια για όλες τις γενετικές μοντέλα δεν ανιχνεύθηκε στην υποομάδα των GWAS, ωστόσο, υπήρξε σημαντική ετερογένεια στην υποομάδα των μελετών αναπαραγωγής. Στατιστικώς σημαντικά ευρήματα για όλες τις γενετικές παρατηρήθηκαν είτε στο GWAS ή στις μελέτες αναπαραγωγής. Τα δεδομένα επιπροσθέτως στρωματοποιημένη σε υποομάδα των υποκειμένων που επηρεάζονται ή δεν επηρεάζονται από το σύνδρομο Lynch (Πίνακας 4). Όλα τα συγκεντρωτικά ΕΑΠ εκτός από το αλληλομόρφων Ή δεν θα μπορούσε να εκπονηθούν στα θέματα που θίγονται από το σύνδρομο Lynch, λόγω περιορισμένου αριθμού μελετών. Σημαντική συσχέτιση μεταξύ της παραλλαγής και του κινδύνου CRC παρατηρήθηκε χωρίς ετερογένεια στο μοντέλο αλληλομόρφων. Από την άποψη των ατόμων που δεν επηρεάζονται από το σύνδρομο Lynch, υπήρχαν αποδεικτικά στοιχεία ετερογένειας σε όλες τις γενετικές μοντέλα και σημαντικές ενώσεις του CRC κινδύνου με τον πολυμορφισμό βρέθηκαν. Η στρωματοποιημένη ανάλυση από το site του όγκου δεν θα μπορούσε να πραγματοποιηθεί λόγω έλλειψης στοιχείων.

Ανάλυση ευαισθησίας.

Από σημαντικά μεταξύ-ετερογένεια για το σύνολο των μετα-αναλύσεις παρατηρήθηκε σε όλες τις γενετικές μοντέλα, εμείς εκτελούνται αναλύσεις ευαισθησίας σε μια προσπάθεια να αξιολογήσει τις επιπτώσεις της κάθε μελέτης σχετικά με την συγκεντρωτική ή κάτω από τυχαίες ενέργειες μοντέλο. Όπως φαίνεται στον Πίνακα S1, S2, S3, S4, S5, S6, όλα τα αποτελέσματα δεν μεταβλήθηκαν σημαντικά και δεν τραβάει διαφορετικό συμπέρασμα, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα αποτελέσματά μας ήταν ισχυρή.

Αθροιστική μετα-ανάλυση.

οι σωρευτικές μετα-αναλύσεις διεξήχθησαν επίσης σε όλες τις γενετικές μοντέλα μέσω ποικιλία από μελέτες σε χρονολογική σειρά. Όπως φαίνεται στο σχήμα S2, τα οικόπεδα κατέστησε σαφές ότι αν και οι μελέτες που μείωσε το 95% CI για τις συνοπτικές εκτιμήσεις, δεν αλλάζουν τις κλίσεις προς σημαντικές συσχετίσεις.

προκατάληψη Δημοσίευση.

τα αποτελέσματα των δοκιμών Egger ανέφερε ότι υπάρχουν ενδείξεις για μεροληψία δημοσίευσης παρατηρήθηκε σε όλες τις γενετικές μοντέλα (όλα

P

& gt? 0,05)..

Η ανάλυση βιοπληροφορικής και PAR του rs3802842

Όλα τα τρία εργαλείων βιοπληροφορικής conformably προέβλεψε ότι το SNP μπορεί να αλλάξει θέσεις

C11orf93

δεσμεύει τον παράγοντα μεταγραφής. Προκειμένου να αξιολογηθεί το ποσοστό της συχνότητας εμφάνισης της ασθένειας στον πληθυσμό που οφείλεται στην έκθεση, ο PAR υπολογίστηκε. Η MAF του rs3802842 (C αλληλόμορφο) ήταν 31,3% και η συγκεντρωτική ή της συνολικής μετα-ανάλυση σε προσθετικό μοντέλο ήταν 1.15, οπότε η PAR για το C αλληλόμορφο εκτιμάται ότι είναι 4,5%.

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη έδειξε τη σύνδεση μεταξύ rs3802842 και αυξημένο κίνδυνο CRC σε ένα κινεζικό πληθυσμό. Στη συνέχεια, η ακόλουθη μετα-ανάλυση βασίζεται σε 32 μελέτες ασθενών-μαρτύρων των 38.534 περιπτώσεις και 39.446 έλεγχοι πρότεινε, επίσης, ότι το SNP ήταν σημαντικά σχετίζεται με CRC κινδύνου, με ένα πρόσθετο ή είναι 1,15. Κατά συνέπεια, PAR η οποία λαμβάνει υπόψη τόσο το μέγεθος της συχνότητας αλληλόμορφου κίνδυνο και τον κίνδυνο στον γενικό πληθυσμό ήταν 4,5%. Σωρευτική ανάλυση σε χρονολογική σειρά επιβεβαίωσε περαιτέρω τα θετικά ευρήματα, που παρουσιάζουν ότι το αποτέλεσμα αυτής της παραλλαγής σταδιακά σημαντική με πιο ακριβή εκτίμηση. Επιπλέον, αναλύσεις ευαισθησίας έδειξε την σταθερότητα του αποτελέσματος. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη μετα-ανάλυση επιδιώκει να αποσαφηνίσει τη σχέση μεταξύ rs3802842 και του κινδύνου CRC και τα αποτελέσματα υπογραμμίζουν έντονα το ρόλο αυτού του πολυμορφισμού στην ευαισθησία CRC.

rs3802842 βρίσκεται στο 11q23 και υπάρχουν τέσσερα ORFs (

LOC120376

,

FLJ45803

,

C11orf53

και

POU2AF1

) και ένα SNP (rs12296076) αναγνωρίζονται ως πολυμορφική δεσμευτικού στόχου ιστοσελίδα για miRNAs σε υψηλή ανισορροπία σύνδεσης γύρω rs3802842 μέσα σε ένα εύρος από 100 kb [7]. Επιπλέον, rs3802842 είναι κοντά τους παράγοντες μεταγραφής γονιδίων που κωδικοποιεί ΠΟΥ [7]. Έτσι, μπορεί να φανεί ότι η περιοχή όπου βρίσκεται rs3802842 προσθέτει αναμφίβολα δυσκολία και την πολυπλοκότητα να διακρίνουν το ρόλο αυτού του πολυμορφισμού σε CRC. Λίγα είναι γνωστά για τη λειτουργία του rs3802842, αλλά αναλύσεις βιοπληροφορική μας έδειξε ότι ήταν πιθανό να αλλάξει τον παράγοντα μεταγραφής τοποθεσίες της δέσμευσης

C11orf93

και επηρέασε περαιτέρω την έκφραση του γονιδίου, ενώ η λειτουργία του

C11orf93

παραμένει άπιαστο. Εκτός αυτού, αν και ο σημαντικός ρόλος της περιοχής 11q23 στην παθογένεση της CRC έχει επιβεβαιωθεί [38], Pittman ΑΜ et al. συναχθεί το συμπέρασμα ότι η πιθανή αλλαγή αλληλουχία γονιδιώματος που προκαλείται από rs3802842 μπορεί να επηρεάσει την έκφραση των γονιδίων χαρτογράφησης έξω από 11q23.1 μέσω

cis

– ή

trans

– κανονιστικό [13]. Εναλλακτικά, οι περισσότερες από τις παραλλαγές που προσδιορίζονται από GWAS δεν μπορεί να είναι

per se

συνάφεια αλλά συνεπάγεται την πιθανότητα να είναι σε σύνδεση με τις «πραγματικές» παραλλαγές συνάφειας [19], έτσι ώστε να είναι δυνατό ότι ο πολυμορφισμός είναι σε ανισορροπία σύνδεσης με την «πραγματική» αιτιώδη τόπους που είναι μέχρι σήμερα μη χαρακτηρισμένα. Ωστόσο, τα επιτεύγματα του προστίμου-χαρτογράφηση των παραλλαγών που προκάλεσαν τα σήματα GWAS που έχουν αφιερωθεί σε μεγάλο βαθμό στην κοινή ασθένεια θεωρία κοινή παραλλαγή παραμένουν περιορισμένες, ένας λόγος για αυτό μπορεί να είναι ότι μια σειρά από σπάνιες παραλλαγές που δεν αναγνωρίζονται από το λογαριασμό GWAS για πολύ του υπόλοιπου κληρονομικότητα των ασθενειών, αντανακλώντας το σημαντικό ρόλο των σπάνιων παραλλαγών του κινδύνου εμφάνισης της νόσου [39]. Επιπλέον, η κατανόηση της βιολογικής λειτουργίας των τόπων κινδύνου, με έμφαση στις μη-κωδικοποίησης παραλλαγές, είναι η μεγαλύτερη πρόκληση στην εποχή μετα-GWAS [40].

Μετά την πρώτη GWAS σε σχέση με rs3802842, πολλαπλές αντιγραφής μελέτες πραγματοποιήθηκαν διαδοχικά με αντιφατικά αποτελέσματα. μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας βρήκε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του πολυμορφισμού και τον κίνδυνο CRC σε όλες τις γενετικές μοντέλα, τα οποία ήταν σύμφωνη με την GWAS και ορισμένες μελέτες αναπαραγωγής [7], [13], [34]. Στρωματοποιημένη αναλύσεις από το site του όγκου ή της διαφοροποίησης έδειξε παρόμοια αποτελέσματα, αλλά όχι στατιστικά σημαντική στο υπολειπόμενο μοντέλο, το οποίο μπορεί να οφείλεται στο μέγεθος του δείγματος ή μοτίβο κληρονομικότητας. Παρά τις θετικές διαπιστώσεις επιβεβαιώνονται σε μας μετα-ανάλυση, προφανής μεταξύ μελετών δεν μπορεί να αγνοηθεί ετερογένεια? ως εκ τούτου, στρωματοποιημένη αναλύσεις διεξήχθησαν για να ανακαλύπτω την πηγή της ετερογένειας. Όταν στρωματοποιημένη κατά εθνικότητα, ετερογένεια ήταν πολύ μειωμένη σε ευρωπαϊκό, αλλά όχι σε χώρες της Ασίας, πράγμα που σημαίνει ότι μπορεί να υπάρχουν ποικίλες τρόπους δράσης και διαφορετικές συχνότητες αλληλόμορφο rs3802842 μεταξύ των δύο πληθυσμών. Εκτός αυτού, σημειώθηκε ότι Tenesa Α et al. παρατηρήθηκαν σημαντικά διαφορετικές αλληλόμορφες επιδράσεις του rs3802842 μεταξύ της ιαπωνικής και Ευρωπαίων και περαιτέρω ανακάλυψαν ότι η διαφορά πληθυσμός ήταν site-specific, δηλαδή, η ιαπωνική πληθυσμός έδειξε την παραλλαγή σχετίζεται μόνο με την αύξηση του κινδύνου καρκίνου του ορθού, αλλά δεν συνδέονται με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου, που ανιχνεύθηκε σε ευρωπαϊκό πληθυσμό [7]. Ωστόσο, αν του παχέος εντέρου ή του ορθού κίνδυνο καρκίνου σχετιζόταν με τον πολυμορφισμό στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας, γεγονός που υποδηλώνει ότι παρά την ίδια εθνικότητα η κινεζική και η ιαπωνική οι δύο ανήκουν σε αυτά, οι δύο πληθυσμοί μπορεί να διαφέρουν στα αίτια της CRC σε κάποιο βαθμό. Όσον αφορά το είδος της μελέτης, η ετερογένεια εξαφανίστηκε σε μελέτες GWS, αλλά εξακολουθεί να παραμένει σε μελέτες αναπαραγωγής, η οποία προέκυψε από τις διαφορετικές μεθόδους προσδιορισμού του γονότυπου. Μετά διαστρωμάτωση από το εάν οι ασθενείς που επηρεάζονται από το σύνδρομο Lynch, ετερογένεια σχεδόν αφαιρεθεί στην υποομάδα των ατόμων που επηρεάζονται από το σύνδρομο Lynch, αλλά δεν άλλαξε στην άλλη υποομάδα, αντανακλώντας φυσικά τα διαφορετικά χαρακτηριστικά των υποκειμένων της έρευνας. Στο σύνολό τους, την εθνικότητα, τον τύπο της μελέτης και κατά πόσον τα θέματα που θίγονται από το σύνδρομο Lynch ήταν πιθανό να είναι οι πηγές της ετερογένειας σε αυτό το μετα-ανάλυση.

Παρά το σαφές ενισχύσει αυτής της μελέτης που διεξήγαγε μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων και μετα-ανάλυση την ίδια στιγμή να τεκμηριώσει τη σχέση μεταξύ rs3802842 και του κινδύνου CRC, ορισμένοι περιορισμοί θα πρέπει να αναγνωριστεί. Πρώτον, το μέγεθος του δείγματος της μελέτης ασθενών-μαρτύρων μας ήταν σχετικά μικρό. Δεύτερον, εμείς απλώς εκτελούνται βιοπληροφορική ανάλυση και όχι λειτουργικά πειράματα, οπότε αν αυτή η παραλλαγή είναι αιτιώδης παρέμεινε αβέβαιη. Τρίτον, CRC είναι μια πολύπλοκη ασθένεια που σχετίζεται με περιβαλλοντικούς και γενετικούς παράγοντες. Ωστόσο, σε αυτή τη μελέτη, ελήφθη μόνο γενετικός παράγοντας υπόψη οποία περιορίζεται να διερευνήσει την αλληλεπίδραση γονιδίων-περιβάλλοντος.

Εν κατακλείδι, η μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας και η ακόλουθη μετα-ανάλυσης που προβλέπονται πειστικά στοιχεία για τη γενετική συμμετοχή του rs3802842 πολυμορφισμού της ευαισθησίας CRC. Ωστόσο, είναι αναγκαία για την εκτέλεση πρόστιμο-χαρτογράφηση των 11q23 περιοχής και λειτουργικά πειράματα για τον εντοπισμό αιτιώδους τόπους.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1. διάγραμμα

ροής της διαδικασίας επιλογής σπουδών.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

Δάσος οικόπεδα των σωρευτικών μετα-ανάλυση των rs3802842, σε συνεργασία με καρκίνο του παχέος εντέρου από τις δημοσιευμένες χρόνο κάτω από διαφορετικές γενετικές μοντέλα. (Α) το C έναντι Α? (Β) η AC έναντι ΑΑ? (Γ) η CC έναντι ΑΑ? (D) το κυρίαρχο μοντέλο? (Ε) το υπολειπόμενο μοντέλο? . (F) το μοντέλο πρόσθετο

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s002

(ΔΕΘ)

Πίνακα S1.

Ανάλυση ευαισθησίας του μοντέλου αλληλομόρφων.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s003

(DOCX)

Πίνακας S2.

Ανάλυση ευαισθησίας της γονοτυπική μοντέλο της AC έναντι ΑΑ.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s004

(DOCX)

Πίνακα S3.

Ανάλυση ευαισθησίας της γονοτυπική μοντέλο CC έναντι ΑΑ.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s005

(DOCX)

Πίνακας S4.

Ανάλυση ευαισθησίας του κυρίαρχου μοντέλου.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s006

(DOCX)

Πίνακας S5.

Ανάλυση ευαισθησίας των υπολειπόμενων μοντέλο.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s007

(DOCX)

Πίνακας S6.

Ανάλυση ευαισθησίας του μοντέλου προσθέτου.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s008

(DOCX)

Λίστα ελέγχου S1.

τη λίστα ελέγχου PRISMA 2009.

doi: 10.1371 /journal.pone.0045461.s009

(DOC)