Αφηρημένο

Sensory νευρώνες παρέχουν σημαντική πληροφόρηση για τα συστήματα κινητήρα μοτίβο ροών. Στο καρκινοειδές stomatogastric νευρικό σύστημα (STNS), η ανατροφοδότηση από τον πρόσθιο γαστρικό υποδοχέα (AGR), ένα νευρώνα υποδοχέα των μυών, διαμορφώνει τη δράση των κυκλωμάτων κινητήρα στην stomatogastric γάγγλιο (STG) μέσω polysynaptic οδών που περιλαμβάνουν πρόσθια γάγγλια. Το soma AGR βρίσκεται στο ραχιαίο κοιλιακό νεύρων πίσω από την STG και έχει σκεφτεί ότι άξονα της περνά μέσα από το STG χωρίς να κάνει επαφές. Χρησιμοποιώντας ομοεστιακό μικροσκόπιο υψηλής ανάλυσης με νευρώνες βαφής γεμάτο, δείχνουμε εδώ ότι AGR από το καβούρι

borealis Καρκίνος

έχει επίσης τοπικές προβλέψεις εντός της STG και ότι αυτές οι προβλέψεις αποτελούν περιοχές επαφής υποψήφιος με κινητικών νευρώνων STG ή με φθίνουσα ίνες εισόδου από άλλα γάγγλια. Έχουμε αναπτύξει και να αξιοποιήσει μια νέα μέθοδο συγκάλυψης που μας επιτρέπει να δυνητικά χωριστές προσυναπτική και μετασυναπτική χρώση των συνοπτικών δεικτών. Οι διαδικασίες AGR στην STG δείχνουν διαφορετικότητα ως προς το σχήμα, τον αριθμό των υποκαταστημάτων και διακλάδωσης δομή. Ο αριθμός των προεξοχών AGR στο STG κυμαίνεται από ένα έως τρία απλά να πολλαπλασιάσει διακλαδισμένης διεργασίες. Οι προβολές έρχονται σε στενή επαφή με γαστρικό κινητικών νευρώνων και φθίνουσα νευρώνων και μπορεί επίσης να συνδέεται ηλεκτρικά με άλλους νευρώνες του STNS. Έτσι, εκτός από την καλά περιγραφεί οδούς μακράς βρόχου, είναι πιθανό ότι AGR εμπλέκεται στη ρύθμιση ολοκλήρωση και πρότυπο άμεσα στο STG.

Παράθεση: Goeritz ML, Bowers MR, Slepian Β, Marder E (2013) Neuropilar προβλέψεις του πρόσθιου γαστρική Receptor Neuron στην Stomatogastric γάγγλιο του Καβούρι Ιωνά,

Καρκίνος Borealis

. PLoS ONE 8 (12): e79306. doi: 10.1371 /journal.pone.0079306

Συντάκτης: Melissa J. Coleman, Claremont Colleges, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 4 του Μαρτίου 2013? Αποδεκτές: 20 Σεπτέμβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 3 Δεκ 2013

Copyright: © 2013 Goeritz et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Υποστηρίζεται από Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας χορηγούν NS 17.813 με 32 στην Εύα Marder. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

αισθητηριακές πληροφορίες από τους μυϊκούς υποδοχείς διαμορφώνει δραστηριότητα κινητικού νευρώνα σε μονο- και disynaptic ( «μικρής θηλιάς») τέντωμα ή αντίσταση αντανακλαστικά. Επιπλέον, οι περισσότεροι αντανακλαστικό οδοί έχουν polysynaptic ( «long-loop») συστατικά που είναι ζωτικής σημασίας για την προσαρμογή αντανακλαστικά σε διαφορετικές καταστάσεις συμπεριφοράς. Στην πραγματικότητα, φάση-ειδικά αισθητήρια ανατροφοδότηση στα σπονδυλωτά και ασπόνδυλα κινητήρα νευρώνες κατά τη διάρκεια της ρυθμικής κινητικής δραστηριότητας μπορεί να προκαλέσει αντανακλαστικά να ανατρέψει ή να γίνει μια συνιστώσα του ρυθμού δημιουργίας δικτύων ίδιοι [1-7].

Οι υποκείμενοι μηχανισμοί της αισθητηριακής ολοκλήρωσης κατά τη διάρκεια αντανακλαστικό τροποποίηση δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Ωστόσο, πολλές λειτουργικές πλευρές της ολοκλήρωσης ανάδρασης, όπως προσυναπτική αναστολή και αντιδρομικά αιχμηρό, μπορεί να συνδεθεί με τις δομές του κινητήρα ή αισθητήριων νευρώνων [8]. Εξετάζοντας τη μορφολογία ενός νευρώνα λεπτομερώς ανοίγει την πόρτα σε ενδιαφέρουσες ερωτήσεις. Πώς μεταβλητή είναι οι δομές που προσδιορίζονται νευρώνων σε όλη μεμονωμένων ζώων; Ποιες παράμετροι πρέπει να διατηρηθεί για να διατηρηθεί η συνεπής λειτουργία μέσα σε ένα δίκτυο; Αυτές οι ερωτήσεις είναι ιδιαίτερα δύσκολο να αντιμετωπιστούν σε μεγάλα δίκτυα στα οποία αναγνώρισης τύπο κυττάρου είναι ασαφής και επιδεινώνεται από την περίπλοκη διακλάδωση δομές.

Υπάρχει ένα μεγάλο σώμα της στοιχεία για την ξεχωριστή τους κανόνες που διέπουν τις πτυχές της μορφολογίας των κυττάρων κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του δικτύου. Η κατανομή των προσελκύσεως και απωθητικό μορίων και των αντίστοιχων υποδοχέων του αναπτυσσόμενου νωτιαίου μυελού μπορεί να προσδιορίσει τη θέση του soma, νευραξονική αύξηση καθοδήγηση κώνου, και διέλευση μέσης γραμμής του άξονα [9-13]. Το σχήμα και η θέση του ίδιου νευρώνα όμως συχνά διαφέρουν από ζώο σε ζώο, όπως φαίνεται στο καρκινοειδές stomatogastric γάγγλιο (STG), όπου μόνο μερικά χαρακτηριστικά της μορφολογίας των νευρώνων μοιρασμένες σε όλη ζώα [14-16]. Για την καλύτερη κατανόηση αυτών των πτυχών της μορφολογίας των νευρώνων, εδώ εξετάζουμε μια αισθητηριακή νευρώνα στον STG που εμπλέκεται σε ένα πλούσιο σύνολο των αντανακλαστικών οδών, αλλά έχει μια σχετικά απλή δομή διακλάδωσης.

Ρυθμικά ενεργά δίκτυα στα νευρικά συστήματα stomatogastric κίνησης (STNS) έλεγχο των καρκινοειδών μυς του στομάχου. Κατά τη διάρκεια της γαστρικής δραστηριότητα μύλο, παράταση και ανάκληση των δοντιών στομάχι ελέγχεται από τον συντονισμό του γαστρικού δικτύου μύλο [17]. Όπως και σε αστακούς και καραβίδες, η πρόσθια γαστρική Receptor (AGR) στο

C. borealis

έχει μια διπολική soma που βρίσκεται στο στο ραχιαίο κοιλιακό νεύρο (DVN) ή, λιγότερο συχνά, στο οπίσθιο μέρος της STG και σχέδια για το ραχιαίο γαστρικό νεύρο (DGN) [18]. Διμερείς δενδρίτες του έργου σε δύο γαστρική μύλο 1 (

GM 1

) μύες όπου οι αιχμές που ξεκίνησε κοντά στο

GM 1

μύες [19]. Τα έργα άξονα AGR σε ένα δρόμο μήκους βρόχου μέσω της STG και κάνει διεγερτικές και ανασταλτικές συνδέσεις στον πρόσθιο ζεύγη commissural γάγγλια (γρανάζια) με νευρώνων προβολής που ανατροφοδοτούν στα κυκλώματα μοτέρ STG [17,20-24].

Το ενιαίο AGR είναι ένας υποδοχέας μυϊκή δύναμη στις

GM 1

μυς. Ο νευρώνας AGR ενσωματώνει ιδιοδεκτική πληροφορίες και από τις δύο πλευρές του ζώου, αλλά και λειτουργεί παρόμοια με ένα Interneuron επηρεάζοντας γαστρικά και πυλωρικό δραστηριότητα του δικτύου, ανεξάρτητα από τις ιδιότητες υποδοχέα αυτής [25]. Πολλαπλές δενδριτικά και αξονική ζώνες έναρξη ακίδα ανταποκρίνονται σε διαφορετικά νευροτροποποιητές [21,24-27]. Επιπλέον, νευροπεπτίδια εναλλαγή AGR βολής μεταξύ της λειτουργίας τονωτικό αιχμηρό ή λειτουργία έκρηξη, που το καθένα ενεργοποιήσετε μια διαφορετική γαστρικό μοτίβο κινητήρα [28]. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι οι ενέργειες του AGR επηρεάζεται από άλλους αισθητικούς νευρώνες (Barriere et al., 2008) και ότι οι επιπτώσεις της AGR ψησίματος εξαρτάται από το πότε είναι ενεργός κατά τη διάρκεια της γαστρικής ρυθμούς μύλο (Smarandache et al., 2008).

Μέχρι στιγμής, όλες αυτές οι φυσιολογικές δράσεις για γαστρικά και πυλωρική δραστηριότητα του δικτύου έχουν αποδοθεί στη μακρά βρόχου polysynaptic αντανακλαστικό μονοπάτι μέσα από τα πρόσθια γρανάζια. Καμία λεπτομερής μελέτη της μορφολογίας AGR εντός της STG να υφίσταται και, μέχρι στιγμής, οι προβλέψεις για το STG neuropil δεν έχουν περιγραφεί. Παρέχουμε τώρα ανατομικές περιγραφές των προβλέψεων AGR στο neuropil STG.

Μέθοδοι

Ζώα και ανατομές

Ενηλίκων Ιωνάς καβούρια (

borealis Καρκίνου

) ελήφθησαν από την Εμπορική Αστακός (Boston, MA). Όλα τα ζώα διατηρήθηκαν σε τεχνητό θαλασσινό νερό δεξαμενές στους 10-13 ° C σε ένα /σκότους 12 ωρών φωτός 12 ωρών χωρίς τροφή. Καβούρια αναισθητοποιήθηκαν σε πάγο για 30 λεπτά. Ανατομές διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29] με παγωμένο φυσιολογικό αλατούχο διάλυμα που αποτελείται από: 440 mM NaCl, 11 mM KCl, 26 mM MgCl

2, 13 mM ΟαΟ

2, 11 mM βάση Trizma, 5 mM μηλεϊνικό οξύ, pH 7.45.

Ηλεκτροφυσιολογίας

Η STNS καρφώθηκε κάτω σε μια Sylgard επικαλυμμένο πιάτο. Το STG ήταν desheathed και ενδοκυτταρική ηχογραφήσεις από την σώματα και neuropil έγιναν με γυάλινα μικροηλεκτρόδια 12-40 ΜΩ γεμίζουν με 0,6 KSO

4 και 20 mM KCl, ενισχυμένο με headstages 1x ΕΣ και Axoclamp 2Α και 2Β ενισχυτές (Molecular Devices) . Εξωκυτταρική δραστηριότητα καταγράφηκε με ηλεκτρόδια από ανοξείδωτο χάλυβα πείρο που τοποθετήθηκαν σε φρεάτια βαζελίνη στα νεύρα κινητήρα και ενισχύεται και φιλτράρεται με ένα διαφορικό ενισχυτή (ΑΜ-συστήματα). Για την αναγνώριση των κινητικών νευρώνων, ενδοκυτταρική ηχογραφήσεις soma αντιστοιχήθηκαν με εξωκυττάρια ηχογραφήσεις από την κατάλληλη κινητικών νεύρων. Κατά τη διάρκεια της εγγραφής, η STNS συνεχώς εμβαπτίζονται με απλή ψύξη (9-13 ° C) φυσιολογικού ορού

κυττάρων γεμίζει

σώματα ή νευραξόνων γέμισαν είτε με:.

α. 2% Lucifer Yellow CH καλίου άλας (LY? Sigma, αριθμός καταλόγου L0144) σε φιλτραρισμένο νερό,

b. 4% τετραμεθυλοροδαμίνης-δεξτράνη 3kDa, λυσίνη επιδιορθώνεται (ΕΚΕ? Molecular Probes, αριθμός καταλόγου D3308) σε 0,2% ΚΑο,

c. 4% neurobiotin ιχνηθέτη (Vector Laboratories) σε 50 mM Tris ρυθμιστικό και 0.5 Μ KCl, ή

d. 10 mM Alexa Fluor 568- ή 594-υδραζιδίου άλας νατρίου σε 200mM ΚΟΙ (Molecular Probes, αριθμοί καταλόγου A10441 και A10442).

Η

Για όλους τους ανιχνευτές, οι άκρες των ηλεκτροδίων γυαλιού χαμηλής αντίστασης (3-16 ΜΩ) έχουν ως λιθογόμωση με τριχοειδή δράση για 10 λεπτά. Για TMR, το πίσω μέρος των ηλεκτροδίων ήταν γεμάτο με 2Μ ΚΑο, αφήνοντας ένα μικρό κενό μεταξύ του ΚΑΟ και του TMR στην άκρη. Lucifer Κίτρινο και Alexa Fluor-υδραζίδια ένεση για 20-50 λεπτά με αρνητικούς παλμούς -3 έως -11 nA 0,5 s διάρκειας 0,1-1 Hz έως ότου οι λεπτές διεργασίες neuropil του κυττάρου ήταν ορατά με μικροσκόπιο φθορισμού (Leica MF165 FC). TMR και Neurobiotin ένεση για τουλάχιστον 50 λεπτά, χρησιμοποιώντας 3 nA θετική παλμών ρεύματος (neurobiotin) ή 4-13 nA θετική παλμών ρεύματος (ΕΚΕ) της τάξης του 0,5 s διάρκειας 1 Hz. Εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά, τα παρασκευάσματα μονιμοποιήθηκαν με 3,5% παραφορμαλδεΰδη σε φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (PBS? 440 mM NaCl, 11 mM ΚΟΙ, 10 mM Na

2HPO

4, 2 mM ΚΗ

2 ΡΟ

4 , ρΗ 7.4) για 40 έως 90 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου μέσα σε 3 ώρες μετά το γέμισμα με LY, neurobiotin και TMR και μέσα σε 30 λεπτά μετά την πλήρωση με Alexa Fluor-υδραζίδια. Παρασκευάσματα πλύθηκαν με 0.01 Μ PBS-T (0,1-0,3% Triton Χ-100 σε PBS) και αποθηκεύτηκαν για 0-7 ημέρες στους 4 ° C πριν από την επεξεργασία.

ενίσχυση Dye

Το σήμα LY ενισχύθηκε με την προσθήκη ενός αντι-LY πολύκλωνο αντίσωμα κουνελιού (1: 500? Molecular Probes) και την κατάλληλη Alexa Fluor-συζευγμένο δευτερεύον αντίσωμα αντι-κουνελιού ( 1: 500? Molecular Probes) κατά τη διάρκεια της ανοσοϊστοχημική επεξεργασία. Neurobiotin οπτικοποιήθηκε με την προσθήκη στρεπταβιδίνης συζευγμένης με βαφές Alexa Fluor. (1: 500? Molecular Probes) στο μίγμα δευτερεύον αντίσωμα (βλέπε επόμενο τμήμα)

Ανοσοϊστοχημεία

Χρησιμοποιήσαμε ένα μονοκλωνικό αντίσωμα αρουραίου έναντι ουσίας Ρ αντίσωμα για την επισήμανση

borealis Cancer

ταχυκινίνης σχετίζεται πεπτίδιο (CabTRP? Accurate Chemical and Scientific, Westbury, ΝΥ, # NC1 /34HL, αραίωση 1: 300) [30,31], ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι της πρωτεΐνης Drosophila συναψίνη GST-σύντηξης (SYNORF1, [32]? Developmental Studies Hybridom Τράπεζα (Univ Iowa), # 5F10., 1: 500 αραίωση), και ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι Lucifer Yellow (Molecular Probes, αριθμός καταλόγου α-5750 , αραίωση 1: 1000). ειδικότητα του αντισώματος για συναψίνη-όπως και CabTRP-όπως ανοσοσήμανση στο

C. borealis

είχε προηγουμένως αποδειχθεί [30,31,33]. Αντιοροί αραιώθηκαν σε 0,01 Μ PBS-T στην κατάλληλη συγκέντρωση και εφαρμόζεται μια νύχτα σε θερμοκρασία δωματίου, που ακολουθείται από 6×10 λεπτά πλύσεις με PBS-T

Για δευτερεύουσα ανίχνευση, Alexa Fluor -. Συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας πολύκλωνα αντισώματα κατά ποντικού ή IgG κουνελιού (αλυσίδες Η + L, υψηλή διασταυρούμενη απορροφάται? Molecular Probes) χρησιμοποιήθηκαν για να απεικονίσει ανοσοαντιδραστικότητα. Τα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν σε συγκέντρωση 1: 500 σε ΡΒδ-Τ για 2-3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Παρασκευάσματα στη συνέχεια πλύθηκαν 4×15 λεπτά σε PBS. ΕΠΙΠ στη συνέχεια τοποθετείται σε προ-καθαρίζονται διαφάνειες (25x75x1mm, SuperFrost, VWR) σε Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, CA), με διάμετρο 9mm, αποστάτες 0,12 χιλιοστά βάθος σιλικόνη στεγανοποίησης (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, ΠΠ) βάσει # 1.5 καλυπτρίδες (Fisher Scientific).

Στατιστικά

μήκη διαδικασία AGR αναλύθηκαν στο Excel (Microsoft). Σημασία ελέγχθηκε με t-tests σε SigmaPlot. Σφάλματα είναι τυπική απόκλιση.

απόκτησης και επεξεργασίας εικόνας

Δάπεδο με στοίβες από ομοεστιακό εικόνες συλλέχθηκαν με ένα μικροσκόπιο SP5 Clem χρησιμοποιώντας Leica Application Suite Σύνθετη φθορισμού (LAS AF) λογισμικού. Για πολλαπλές ετικέτες, διαδοχική απεικόνιση και ρυθμίσεις στενό εκπομπών χρησιμοποιήθηκαν για την πρόληψη διασταυρούμενης ομιλίας. Ομοεστιακή εικόνες αποκτήθηκαν ως πλακίδια με στόχο 63x γλυκερίνης (Leica HCX PL APO 63x /1.3 Glyc CORR CS (21 ° C) σε 2048×2048 ή 1024×1024 ανάλυση σε 0,12 έως 1,01 μm βήματα και στη συνέχεια ευθυγραμμίζονται και ραμμένες με ένα GUI-based εργαλείο MATLAB , γραμμένο από τον Ted Brookings. στοίβες Image μετατράπηκαν σε .ims αρχεία με Imaris 7,0-7,4 (Bitplane) φιλτράρεται και κάτω δειγματοληψία στο ένα τρίτο του ψηφίσματος του διαστάσεις x και y. Η Imaris Φέτα και να ξεπεράσει μονάδες χρησιμοποιήθηκαν για τη ρύθμιση αντίθεση και τη φωτεινότητα και να εμφανίσετε στοίβες ως προβλέψεις μέγιστο έντασης είτε ως προβολές λειτουργία μείγμα. υποκατηγορίες του z-στοίβες παρουσιάστηκαν στις προβλέψεις κατάσταση μείγμα με μειωμένη αδιαφάνεια για τη βελτίωση της απεικόνισης των κυττάρων γεμίσματα και διανομής πρωτεϊνών ταυτόχρονα. νήματος και τον όγκο αναπαραστάσεις των κυττάρων γεμίζει έγιναν με τη μονάδα Imaris πυρακτώσεως σε χειροκίνητη λειτουργία για να καθορίσει τα μήκη υποκατάστημα και τον όγκο υποκατάστημα.

Διαχωρισμός των συναψίνη μοιάζει με την επισήμανση εντός και γύρω συμπληρώθηκε διαδικασίες

συναψίνη-όπως ανοσοαντιδραστική επισήμανση εντός συμπληρώθηκε διεργασίες απομονώθηκε από το συνολικό σήμα συναψίνη-όπως με τη χρήση επιφάνεια ανακατασκευές του γεμάτου κυττάρου ως μάσκα. Οι επιφανειακές ανακατασκευές έγιναν με το δομοστοιχείο Surface Imaris χρησιμοποιώντας μια χειροκίνητα κατώφλι για την ένταση να γίνει διάκριση μεταξύ φόντου και κυττάρων πλήρωσης. Η επικάλυψη της ανακατασκευασμένης μάσκα επιφάνεια των κυττάρων και την ανοσοδραστική σήμα συναψίνη-όπως είχε αποθηκευτεί ως νέο κανάλι σήμα ( «συναψίνη-μέσα»). Για να τραβήξετε συναψίνη-σαν σήμανση δίπλα στο γεμάτο κύτταρο, αυτή η διαδικασία επαναλήφθηκε με μία νέα μάσκα επιφάνεια του πληρωμένου κυττάρου, αυτή τη φορά που δημιουργείται με τη χρήση ενός χαμηλότερο όριο της έντασης, καταλαμβάνοντας την «λάμψη» γύρω από την επιφάνεια του κυττάρου. Αυτό οδήγησε σε μια μάσκα που υπερεκτιμήσει τον όγκο του κυττάρου και μας επέτρεψε να απομονώσουμε συναψίνη-όπως σήμανση στην περιοχή του γεμάτου κυττάρου αφαιρώντας το «συναψίνη-εντός» σήμα από αυτό το νέο κανάλι σήματος, χρησιμοποιώντας το «Κανάλι Αριθμητική «λειτουργία Imaris.

είναι σημαντικό να επισημανθεί ότι ένα υψηλό ποσοστό δειγματοληψίας κατά τη διάρκεια της απόκτησης εικόνας, ιδανική διπλάσια ανάλυση του χρησιμοποιούμενου στόχου (Nyquist ποσοστό), είναι ζωτικής σημασίας να αποφευχθεί η απώλεια κατά τη διάρκεια της μετέπειτα φιλτράρισμα και να επιτρέψει επαρκώς ανακατασκευές ακριβή επιφάνεια.

Αποτελέσματα

έργα AGR στη συναπτική neuropil

χρησιμοποιείται χρωστική γεμίζει για τον εντοπισμό της νευράξονα AGR και τις προβλέψεις της στο STG. Η θέση της μέσης γραμμής διπολικής AGR στο STNS έχει περιγραφεί προηγουμένως (Combes et al., 1995) (Σχήμα 1). Η θέση του soma σε διάφορα παρασκευάσματα είναι κάπως μεταβλητή, καθώς η soma μπορεί να βρεθεί όσο 500 μm οπίσθια προς το STG στο ραχιαίο κοιλιακή νεύρο (DVN) ή μπορεί να φανεί κοιλιακά παρακάτω κυτταρικά σώματα στην οπίσθια περιοχή του STG, αρκετά κοντά στο neuropil STG.

Η

Βρήκαμε προεξοχές AGR από τον κεντρικό άξονα στην neuropil κάθε STG που εξετάστηκαν (Ν = 29) (Σχήμα 2). Συνεστιακή απεικόνιση αποκάλυψε προβλέψεις AGR με διαφορετικό μήκος και διακλάδωσης μοτίβο στο STG. Ο αριθμός των προεξοχών AGR στο neuropil STG κυμαινόταν από ένα έως τρία και η μορφολογία τους ήταν αξιοσημείωτα διαφορετικές, που κυμαίνονται από ελάχιστα μέχρι πολύπλοκα διακλαδισμένο (Σχήμα 2). Από τις 29 βαφής γεμάτο νευρώνες AGR, 17 είχαν μία διαδικασία διακλάδωσης από τον κεντρικό άξονα στο neuropil STG, 10 είχαν δύο διαδικασίες, και σε δύο σκευάσματα, τρεις προβολές στο STG είχαν δει. Κοινά χαρακτηριστικά που παρατηρήθηκαν σε όλη πολλά γεμίσματα κυττάρων AGR ήταν σε σχήμα γάντζου υποκαταστήματα στο πρόσθιο μέρος του γαγγλίου (Εικόνα 2Α) (Ν = 13 από 23 AGRs), υποκαταστήματα που έληξε το νύχι-όπως διαδικασιών (Εικόνα 2Β) (Ν = 8 από 23 AGRs), και βολβώδη διόγκωση των διαδικασιών AGR (Εικόνα 2Β) (Ν = 18 από 23 AGRs).

διακεκομμένες γραμμές περιγράφουν την περιοχή neuropil του γαγγλίου σε όλα τα μέρη του σχήματος. Α1. Όγκος-rendered θέα LY χρωστική συμπληρώθηκε AGR με ενιαία προβολή, διακλάδωση περαιτέρω σε τέσσερις υπο-κλάδους της neuropil STG. Το soma AGR βρίσκεται στο

STN

έξω από την κάτω αριστερή γωνία του πλαισίου. Λειτουργία μείγμα προβολής των 8 συγχωνεύθηκε συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 84 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.067μm x 0.067μm x 0.378μm). μπαρ κλίμακα είναι 30 μm. Α2 παρουσιάζει close-up της περιοχής στο κουτί στην Α1, που δείχνει το διευρυμένο άκρο της προεξοχής AGR στα STG. μπαρ κλίμακα είναι 5 μm. Β1. Όγκος-rendered θέα LY χρωστική συμπληρώθηκε AGR με ενιαία προβολή, διακλάδωση περαιτέρω σε δύο σύντομες υποκαταστήματα στην neuropil STG. Το soma AGR βρίσκεται στο

STN

έξω από την κάτω αριστερή γωνία του πλαισίου. Λειτουργία μείγμα προβολής των 4 συγχωνεύεται συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 226 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.174μm x 0.174μm x 0.294μm). μπαρ κλίμακα είναι 30 μm. Β2 δείχνει ένα όγκο-rendered επιφάνεια προβολής της περιοχής στο κουτί στην Β1 από μια διαφορετική οπτική γωνία, τονίζοντας το μεγάλο μπαλόνι-όπως διαπλάτυνση (όχι το soma) της αξονικής προβολής AGR. μπαρ κλίμακα είναι 10 μm. Γ Τόμος-rendered θέα LY χρωστική συμπληρώθηκε AGR με ενιαία προβολή, διακλάδωση περαιτέρω σε δύο υπο-κλάδους της neuropil STG. Το soma AGR βρίσκεται στο

STN

έξω από την κάτω αριστερή γωνία του πλαισίου. Λειτουργία μείγμα προβολής των 5 συγχωνεύονται συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 169 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.068μm x 0.068μm x 0.462μm). μπαρ κλίμακα είναι 30 μm. Δ Τόμος-rendered θέα LY χρωστική συμπληρώθηκε AGR με δύο απλές προβλέψεις του neuropil STG. Το soma AGR βρίσκεται στο

STN

έξω από την κάτω αριστερή γωνία του πλαισίου. Λειτουργία μείγμα προβολής των 18 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 115 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.183μm x 0.183μm x 0.504μm). μπαρ κλίμακα είναι 30 μm. Ε Όγκος-rendered θέα LY χρωστική συμπληρώθηκε AGR με δύο προβολές, κάθε διακλάδωση περαιτέρω σε δύο ή τρία υποκαταστήματα στην neuropil STG. Το soma AGR βρίσκεται στο

STN

έξω από την κάτω αριστερή γωνία του πλαισίου. Λειτουργία μείγμα προβολής των 10 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 264 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.179μm x 0.179μm χ 0.38μm), κοιλιακή άποψη του ίδιου του παρασκευάσματος, όπως το σχήμα 3. μπαρ κλίμακας είναι 30 μm. ΣΤ Όγκος-rendered θέα LY χρωστική συμπληρώθηκε AGR με τρεις προβολές, ένας από αυτούς διακλάδωσης περαιτέρω σε δύο υπο-κλάδους της neuropil. Το soma AGR βρίσκεται στο

STN

έξω από την κάτω αριστερή γωνία του πλαισίου. Λειτουργία μείγμα προβολής των 9 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 229 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.168μm x 0.168μm x 0.252μm). μπαρ κλίμακα είναι 50 μm.

Η

Μετρήσαμε τα διακλάδωσης χαρακτηριστικά σε 17 AGRs που απεικονίστηκαν σε υψηλή ανάλυση (Πίνακας 1). Σε παρασκευάσματα με μία μόνο διακλάδωση AGR από τον κεντρικό άξονα, η διαδικασία διακλαδισμένο κατά μέσο όρο 3 φορές. Το μήκος του ποικίλει σε όλη την προετοιμασία και κατά μέσο όρο 240 ± 136 μm (τυπική απόκλιση) (Σχήμα 2Α-C). Ο αριθμός των τερματικών τμημάτων ήταν 1,7 ± 0,8. AGR διεργασίες με δύο προεξοχές στο neuropil έτεινε να είναι μικρότερη κατά μέσο όρο (176 ± 95,4 μm για την πρώτη, ρ = 0,014, και 109 ± 94.41 μm για το δεύτερο σκέλος), με ελαφρώς πιο επιμέρους υπο-διακλαδώσεις (2,5 ± 1,3 τερματικό τμήματα), αλλά λόγω της μεγάλης διακύμανσης των αριθμών υποκατάστημα, η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (p = 0,160) (Σχήμα 2D-F). Επίσης δεν υπήρχε σημαντική διατήρηση του συνολικού μήκους προεξοχής όταν κανονικοποιούνται για το μήκος neuropil (μέσο μήκος neuropil = 544 ± 81,1 μm, Ν = 17) και σε σύγκριση ο αθροίζονται μήκος υποκατάστημα σε παρασκευάσματα με μία ή δύο μεθόδους (p = 0.69) (Πίνακας 1). Ωστόσο, σε παρασκευάσματα με δύο προεξοχές στο neuropil, όπως φαίνεται στο Σχήμα 2 D και Ε, το πιο οπίσθια (πιο κοντά στο soma AGR) διαδικασία ήταν σημαντικά μικρότερη από τη πρόσθια προεξοχή (89 ± 73 μm έναντι 168 ± 99 μm, αντίστοιχα , p = 0,003).

Αριθμός υποκαταστημάτων

Ν

1

ου μήκους υποκατάστημα

1

ου μήκους υποκατάστημα, κανονικοποιημένη για το μέγεθος neuropil

2

ου υποκαταστήματος μήκος

2

ου μήκους υποκατάστημα, κανονικοποιημένη για το μέγεθος neuropil

3

ου υποκατάστημα μήκος

3

ου μήκους υποκατάστημα, κανονικοποιημένη για το μέγεθος neuropil

μήκος Σύνολο υποκατάστημα

συνολικό μήκος υποκατάστημα, κανονικοποιημένη για το μέγεθος neuropil

18240 ± 136,2235 ± 118,3 —- 241 ± 136,2235 ± 118,32 7109 ± 94.189 ± 73.3176 ± 95.4168 ± 98,6 έως -286 ± 94.8258 ± 85,93 2175 ± 219,2169 ± 202.372 ± 31.877 ± 18.160 ± 56.660 ± 48.6307 ± 103.306 ± 89.7Table 1. AGR διακλάδωση χαρακτηριστικά.

CSV Λήψη CSV

Ένα άλλο εντυπωσιακό ανατομικό χαρακτηριστικό ήταν ο εντοπισμός των κλάδων AGR όσον αφορά την αρχιτεκτονική γάγγλιο. Η somata STG βρίσκονται σε ένα σύμπλεγμα γύρω από το neuropil στην οπίσθια περιοχή του γαγγλίου. Αυτοί οι νευρώνες στείλει ένα πρωτεύον νευριτών προς το κέντρο του γαγγλίου (χοντρό neuropil), όπου διακλαδίζεται σε αυξητικά μικρότερα διαδικασίες και ένα ή περισσότερα άξονες που αφήνουν το γάγγλιο μέσω του συνδεδεμένου νεύρα. Οι μικρότερες διεργασίες των νευρώνων STG βρίσκεται στο-μεταξύ του κέντρου του γαγγλίου και τα κυτταρικά σώματα στο εξωτερικό, όπου σχηματίζουν το πρόστιμο ή συναπτική neuropil, ένα κέλυφος-όπως δομή γύρω από το χοντρό neuropil που αποτελεί το εσωτερικό του γαγγλίου (Σχήμα 3) [34]. Το πρόστιμο neuropil είναι η περιοχή όπου λαμβάνουν χώρα [35] συναπτική αλληλεπιδράσεις. Μπορεί να σημανθούν με αντισώματα έναντι προσυναπτική πρωτεΐνες όπως συναψίνη (synorf) [14,32,33,36]. Βρήκαμε ότι ο νευράξονας AGR ήταν μερικές φορές εκτός κέντρου προς τα δεξιά ή τα αριστερά, αλλά πάντα έτρεξε στην πιο κοιλιακή πλευρά του STG (n = 27) (Σχήμα 3AB). Από εκεί, το AGR προβάλλεται ραχιαία μέσα από το χονδροειδές neuropil στο κέντρο της STG και εντός της ραχιαίας πρόστιμο neuropil (Σχήμα 3Β).

Α1. Όγκος-rendered άποψη της ράχης του LY βαφής γεμάτο AGR (πράσινο), προβλέπεται κατά μήκος του ραχιαίο-κοιλιακό άξονα. Α2. Πλευρική, μέγιστη προβολή ένταση της ίδιας γάγγλιο. Β1. Διπλή επισήμανση με αντίσωμα αντι-συναψίνη (μωβ) αποκαλύπτει τη συναπτική neuropil στο STG. Β2. Πλευρική προεξοχή του αντι-συναψίνη επισημασμένο γάγγλιο δείχνει την κοιλιακά βρίσκεται νευράξονα AGR και τις προβλέψεις ραχιαία του στο συναπτική neuropil. λειτουργία Blend (Α1, Β1 και Β2) και τη μέγιστη ένταση (Α2) τις προβλέψεις του 10 συγχωνεύθηκε συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 264 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.179μm x 0.179μm χ 0.38μm). μπαρ κλίμακα είναι 50 μm.

Η

Εντοπισμός των χώρων υποψήφιος επαφής μεταξύ AGR άλλα κύτταρα

Θα ήθελα να ξέρω αν οι προβλέψεις AGR ήρθε σε στενή επαφή με άλλους νευρώνες STG. Για το λόγο αυτό πραγματοποιήσαμε διπλή γεμίσματα του AGR και άλλων κυττάρων STG, εστιάζοντας σε νευρώνες που αποτελούν μέρος του γαστρικού δικτύου ελαιοτριβείο, όπου AGR διέγερση έχει τις εντονότερες συνέπειες για τη δραστηριότητα του δικτύου

in vivo

και

in vitro

[24,25,37,38].

Διπλή γεμίσματα της ΓΔ νευρώνα και AGR σε τρία σκευάσματα αποκάλυψε αρκετές περιοχές της φαινομενικής στενή επαφή στο επίπεδο του ψηφίσματος είναι διαθέσιμη με το συνεστιακό μικροσκόπιο (Εικόνα 4Α) . Πραγματοποιήσαμε επιφάνεια ανακατασκευές ένα από αυτά τα ζευγάρια να αποκτήσουν μια καλύτερη εικόνα από τις προφανείς περιοχές επαφής. Το πιο εντυπωσιακό σημείο υποψήφιο επαφής δεν ήταν στη συναπτική (πρόστιμο) neuropil, αλλά στο χοντρό neuropil στο κέντρο του γαγγλίου, όπου ένα μεγάλο διαδικασία διάμετρο ΓΔ παρατηρήθηκε φαινομενικά τυλιγμένο γύρω από μια προβολή AGR. Επιπλέον, μια άλλη περιοχή επαφής υποψήφιο της AGR με μια πολύ λεπτή διαδικασία ΓΔ παρατηρήθηκε στη συναπτική neuropil (Εικόνα 4Α). Άλλα κύτταρα που ήρθαν σε στενή επαφή με AGR κάθε φορά που εκτελείται διπλό γεμίσματα ήταν τουλάχιστον ένα από τα τέσσερα γαστρικού νευρώνες μύλο (GM) (n = 3) και το ενιαίο πλευρικό γαστρικό νευρώνα (LG) (n = 5). Πιο κοντά επιθεώρηση ενός διπλού πλήρωσης του νευρώνα GM και AGR σε δύο παρασκευάσματα έδειξαν μία μόνο υποψήφια τοποθεσία της φαινομενικής επαφής μεταξύ δύο διαδικασιών (Σχήμα 4Β), φαίνεται καθαρά σε μία επιφάνεια ανοικοδόμησης του χώρου επαφής στο ένθετο στο σχήμα 4Β2. Στην ίδια προετοιμασία, πολύ λεπτές διεργασίες (~ διαμέτρου 1 μm) της GM νευρώνα τυλιγμένο επίσης γύρω από τον άξονα AGR (Σχήμα 4Β3). Εικόνα 4C δείχνει ένα διπλό πλήρωσης της AGR και LG με τις περιοχές υποψήφιο επαφή με τις μεγαλύτερες διαδικασίες στο χοντρό neuropil. Παρόμοια sites επαφή υποψήφιος παρατηρήθηκαν στην neuropil πέντε γάγγλια με την LG και AGR διπλό γεμίσματα.

Α1. Διπλό πλήρωσης της ΓΔ νευρώνα με TMR (κίτρινο) και το νευρώνα AGR με LY (μπλε) δείχνει περιοχές επαφής υποψήφιος στο neuropil. Πλευρική προεξοχή λειτουργία μείγμα από 18 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 133 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.177μm x 0.177μm x 1.007μm). μπαρ κλίμακα είναι 40μm. Α2. Ανακατασκευάστηκε οπτικοποίηση της επιφάνειας του χώρου υποψηφίου επαφή DG-AGR στο χοντρό neuropil, ανακατασκευάστηκε από τα ίδια δεδομένα που ως Α1. μπαρ κλίμακα είναι 10 μm. Β1. Διπλό πλήρωσης μιας GM νευρώνα με neurobiotin (πράσινο) και ο νευρώνας AGR με Alexa Fluor 594-υδραζιδίου (ματζέντα). Λειτουργία μείγμα προβολής των 18 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 185 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.088μm x 0.088μm x 0.504μm), αφαιρεθεί το υπόβαθρο. μπαρ κλίμακα είναι 50 μm. Β2. Close-up του site υποψήφιος επαφής στο χοντρό neuropil. μπαρ κλίμακα είναι 5 μm. Μια ανακατασκευάστηκε απεικόνιση της επιφάνειας της περιοχής επαφής (ένθετο στο Β2) επιτρέπει μια σαφέστερη άποψη. Β3. Close-up του site υποψήφιος επαφή μεταξύ πρόστιμο διαδικασίες neuropil της GM και του άξονα AGR. μπαρ κλίμακα είναι 10 μm. Γ Double συμπληρώστε το LG νευρώνα με LY (πράσινο) και το νευρώνα AGR με Alexa Fluor 594-υδραζιδίου (κόκκινο) δείχνει εμφανή θέση επαφής μεταξύ του LG πρωτογενή έκφυση και μια διαδικασία AGR. Λειτουργία μείγμα προβολής των 8 συγχωνεύθηκε συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 155 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.177μm x 0.177μm x 0.336μm), αφαιρεθεί το υπόβαθρο. μπαρ κλίμακα είναι 30 μm.

Η

Φθίνουσα ίνες προβολής

Περίπου 25 ζεύγη φθίνουσα έργου νευρώνων από τα γρανάζια και την OG μέσω του stomatogastric νεύρο

STN

στο STG [39], όπου η απελευθέρωση διαμορφωτή από τους τερματικούς σταθμούς τους διαμορφώνει τη δραστηριότητα του στομάχου και του πυλωρού νευρώνες [40-43]. Σε τέσσερις παρασκευάσματα, όταν γεμίζουν με AGR Lucifer Yellow για μια εκτεταμένη χρονική περίοδο (2-3 ώρες), βρήκαμε αδύναμη εξάπλωση χρωστικής από AGR σε διαδικασίες που ήταν παρόμοιες σε σχήμα με περιγράφεται νευρώνων προβολής (Σχήμα 5Α). Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν επαναλάβαμε το πείραμα με neurobiotin, ένα μόριο που περνά μέσα από διασταυρώσεις χάσμα στο καρκινοειδές νευρικό σύστημα, δεν είδαμε καμία σύζευξη σε άλλα κύτταρα. Θέλαμε να γνωρίζουμε εάν οι διεργασίες βαφής σε συνδυασμό με το STG ήταν οι προβλέψεις της τροποποιητικής commissural Neuron 1 (MCN1), ένα ζευγάρι των ρυθμιστικών κυττάρων στον οδοντωτό που ενεργοποιούνται και ρυθμίζονται από τη δραστηριότητα AGR μέσω των οδών μακράς βρόχο μέσω του

STN

και γρανάζια, και προκαλούν μια γαστρική μύλο ρυθμό [37,42-44]. MCN1 περιέχει τρία πεπτίδια ρυθμιστική στις προβλέψεις της στην STG? ένας από αυτούς είναι ένας ταχυκινίνη όπως πεπτίδιο, CabTRP1a. Όπως MCN1 είναι η μόνη πηγή του ταχυκινίνη όπως πεπτιδίου στο STG, οι δύο MCN1 προβλέψεις του STG μπορούν να επισημαίνονται ειδικά με ένα αντίσωμα αντι-Ρ ουσίας, η οποία αναγνωρίζει την ταχυκινίνη όπως πεπτίδια σε πολλές διαφορετικές είδη [30,31]. Πραγματοποιήσαμε ανοσοσήμανση των CabTRP να απεικονίσει τερματικά MCN1 σε τρεις γάγγλια με βαφή-εξάπλωση από το AGR να

διεργασίες STN

. Σε ένα από αυτά τα παρασκευάσματα, μία χρωστική-συζευγμένο

STN

διαδικασία επισημαίνονται θετικά για CabTRP και ως εκ τούτου ήταν πιθανό MCN1. Στις άλλες δύο παρασκευάσματα, οι δύο προεξοχές MCN1 δεν συμπίπτουν με την διαδικασία βαφής-συζευγμένο στο STN (Σχήμα 5Β). Ωστόσο, όταν θα πραγματοποιηθεί διπλή επισήμανση των AGR και CabTRP σε γάγγλια χωρίς βαφή-εξάπλωση, βρήκαμε με συνέπεια τουλάχιστον έναν από τους κλάδους AGR πολύ κοντά ή τυλιγμένο γύρω από έναν άξονα MCN1 πριν arborized στο neuropil (Σχήμα 5C-D) ( N = 7 από 7).

Α. Μακροπρόθεσμη (2 ώρες) LY βαφής-γέμισμα του νευρώνα AGR (ματζέντα) αποκάλυψε βαφής σε συνδυασμό ινών φθίνουσα STN. B. Διπλή επισήμανση για CabTRP στο ίδιο παρασκεύασμα δείχνει ότι η χρωστική-σε συνδυασμό ίνες STN δεν ήταν MCN1 προβλέψεις. Α και Β είναι μείγμα προβολές λειτουργία του 12 συγχωνεύθηκε συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 200 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.187μm x 0.187μm x 0.504μm). μπαρ κλίμακα είναι 50 μm. διεργασίες C. AGR (LY βαφής γεμάτο, ματζέντα) είναι σε στενή παράθεση με τις προβολές από τους νευρώνες MCN1 που σημάνθηκαν με ένα αντίσωμα αντι-Ρ ουσίας (πράσινο). Λειτουργία μείγμα προβολής των 12 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, που δείχνει μια 47μm χοντρό μεσαίο τμήμα του γαγγλίου (127 210 οπτικών φέτες, απέκτησε σε ανάλυση της 0.187μm x 0.187μm x 0.713μm). μπαρ κλίμακα είναι 50 μm. Δ Ένα κοντινό πλάνο του neuropil δείχνει ένα νύχι-όπως τελείωμα της βαφής γεμάτο AGR προβολής LY (ματζέντα) σε στενή επαφή με πρόστιμο διαδικασίες MCN1 (πράσινο), και δύο διαφορετικές τερματικούς σταθμούς AGR σε προφανή επαφή με μεγαλύτερης διαμέτρου MCN1 διεργασίες (βέλη). Λειτουργία μείγμα προβολής των 24μm χοντρό μεσαίο τμήμα στο ίδιο παρασκεύασμα όπως 4Β, περιστρέφεται 180 ° γύρω από το ραχιαίο-κοιλιακό άξονα (66 210 οπτικών φέτες, απέκτησε σε ανάλυση της 0.187μm x 0.187μm x 0.713μm). μπαρ κλίμακα είναι 15 μm.

Η

Τέλος, πραγματοποιήσαμε διπλή ηχογραφήσεις του AGR και αγνώστων διεργασίες στο stomatogastric νεύρο (STN) (Σχήμα 6). Καταγράψαμε 1-5

STN

άξονες ανά γάγγλιο. Στην πλειονότητα των γαγγλίων όταν και οι δύο κύτταρα παρακολουθήθηκαν ενδοκυτταρικά, βρήκαμε κανένα

STN

διεργασίες που είχαν ηλεκτρικά συζευγμένο με AGR (Ν = 7). Ωστόσο, σε μία περίπτωση ηλεκτρική σύζευξη σε τρέχουσες ένεση είτε σε AGR ή αγνώστων διαδικασία STN θεωρήθηκε και το

STN

διαδικασία ήταν γεμάτες με χρωστική. Το ένθετο στο Σχήμα 6Α δείχνει μια επιφάνεια ανακατασκευή του χώρου στενή επαφή μεταξύ AGR και αυτή η φθίνουσα αγνώστων

STN

διαδικασία του προστίμου neuropil. Δυστυχώς, δεν ήμασταν σε θέση να βρείτε στη συνέχεια, ρεκόρ από, ή συμπληρώστε το ίδιο

STN

προβολής σε άλλα γάγγλια.

Διπλή πλήρωσης των αγνώστων διαδικασία STN με LY (πράσινο) και το νευρώνα AGR με Alexa Fluor 594-υδραζιδίου (ματζέντα) δείχνει στενή παράθεση των διεργασιών σε μια μεγάλη περιοχή στο neuropil STG. Ανακατασκευασμένη απεικόνιση επιφάνεια 9 συγχωνεύθηκαν συνεστιακής στοίβες εικόνα, το καθένα αποτελούμενο από 229 οπτικές φέτες (που αποκτήθηκαν σε ανάλυση της 0.168μm x 0.168μm x 0.252μm). μπαρ κλίμακα είναι 50 μm. Ένθετο δείχνει γκρο πλαν, εγκλωβιστούμε περιοχή, αποκαλύπτοντας προφανή περιοχές επαφής μεταξύ των τερματικών προβολής AGR και πρόστιμο διαδικασίες της αγνώστων νευρώνα προβολής.

Η

Υποθετικές χημικές συνάψεις του AGR στην STG

Εξετάσαμε επόμενο προσεκτικά την κατανομή του δυναμικού συνάψεις σε AGR κύτταρο γεμίζει. Χρησιμοποιήσαμε ανακατασκευές επιφάνεια για το διαχωρισμό συναψίνη-όπως ανοσοαντιδραστικότητα στο AGR από το σήμα στο υπόλοιπο της συναπτικής neuropil (βλέπε τμήμα μεθόδων). Εικόνα 7Α δείχνει το απομονωμένο σήμα συναψίνη επικαλύπτεται με το γέμισμα των κυττάρων AGR.