Αφηρημένο

Στόχοι /Υπόθεση

Σε διαφορετικούς τύπους καρκίνων, σύνθεση ισομορφή του υποδοχέα της ινσουλίνης ή υπόστρωμα υποδοχέα ινσουλίνης (IRS) ισομορφές είναι διαφορετικά σε υγιή ιστό. Αυτό μπορεί να είναι μια μοριακή σύνδεση με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου στο σακχαρώδη διαβήτη και την παχυσαρκία. Δεδομένου ότι αυτό είναι ακόμα ασαφής για τον καρκίνο του προστάτη, ερευνήσαμε σύνθεση ισομορφής IR και την ισορροπία IRS στον καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με καλοήθεις και όγκου παρακείμενο καλοήθη ιστό του προστάτη και έφερε αυτό σε σχέση με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

Μέθοδοι

Μελετήσαμε 23 καλοήθη δείγματα προστάτη από ριζική κυστεκτομή ή καλοήθη προστατική χειρουργική επέμβαση υπερπλασία, 30 δείγματα από καλοήθη ιστό σε άμεση γειτνίαση με προστάτη εστίες καρκίνου και 35 δειγμάτων καρκίνου από διαφορετικούς ασθενείς. επίπεδα έκφρασης RNA για ισομορφές υποδοχέα ινσουλίνης Α και Β, IRS-1, IRS-2, και τον υποδοχέα IGF-1 εκτιμήθηκαν με ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR. Επιπλέον, RNA- και πρωτεΐνης έκφραση του ρυθμιστή του κυτταρικού κύκλου p27

Kip1 ποσοτικά με πραγματικού χρόνου RT-PCR και ανοσοϊστοχημεία.

Αποτελέσματα

υποδοχείς ινσουλίνης ισομορφή Μια αναλογία Β ήταν σημαντικά υψηλότερη σε καρκίνο, καθώς και σε όγκο γειτονικό ιστό καλοήθη προστάτη σε σύγκριση με καθαρά καλοήθη προστάτες (ρ & lt? 0,05). IRS-1 σε λόγους IRS-2 ήταν χαμηλότερα από ό, τι σε κακοήθη σε καλοήθη προστατική ιστό (ρ & lt? 0,05). Αυτές μεταβάλλονται οι αναλογίες τόσο σε καρκίνο και παρακείμενο ιστό συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με μειωμένη p27

περιεχόμενο Kip1 (p & lt? 0,02). Είναι ενδιαφέρον, IGF-1 επίπεδα του υποδοχέα ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ασθενείς με διαβήτη τύπου 2 (p = 0,0019).

Συμπεράσματα /Ερμηνεία

Βρήκαμε σημαντικές διαφορές στην ινσουλίνη καταρράκτη μεταξύ καλοήθους προστατικού ιστού σηματοδότησης και του καρκίνου του προστάτη. Η ιστολογική καλοήθης ιστό δίπλα σε καρκίνο έδειξε σχήματα έκφρασης παρόμοια με τις κακοήθειες. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν έναν ρόλο της ινσουλίνης οδού στον καρκίνο του προστάτη σηματοδότησης και τον περιβάλλοντα ιστό και μπορεί ως εκ τούτου να είναι σχετικές και για τις δύο νέες διαγνωστικές και θεραπευτικές προσεγγίσεις σε αυτήν την κακοήθεια

Παράθεση:. Heni Μ, Hennenlotter J, Scharpf Μ, Lutz SZ, Schwentner C, Todenhöfer Τ, et al. (2012) Insulin Receptor ισομορφές Α και Β, καθώς και Υποδοχέα Ινσουλίνης Υποστρώματα-1 και -2 εκφράζονται διαφορικά στον καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 7 (12): e50953. doi: 10.1371 /journal.pone.0050953

Επιμέλεια: Giorgio Sesti, Universita Magna Graecia-di Catanzaro, Ιταλία

Ελήφθη: 14 του Ιούνη, 2012? Αποδεκτές: 29 Οκτωβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 10 του Δεκέμβρη 2012

Copyright: © 2012 Heni et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση (01GI0925) από το γερμανικό Ομοσπονδιακό Υπουργείο Παιδείας και Έρευνας (BMBF) στο γερμανικό Κέντρο Έρευνας διαβήτη (DZD eV). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

διαβήτη τύπου 2 (T2DM) σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο για αρκετούς τύπους καρκίνου [1] – [3]. Ο κίνδυνος για την πιο διαδεδομένη μορφή καρκίνου στους άνδρες, ο καρκίνος του προστάτη, φαίνεται να μεταβάλλεται από το διαβήτη [4], αλλά αυτό πιστεύεται ότι οφείλεται σε χαμηλότερα επίπεδα τεστοστερόνης σε T2DM [3], [5], [6]. Επιπλέον, ο χρόνος επιβίωσης μετά τη διάγνωση του καρκίνου του προστάτη είναι μικρότερη σε άνδρες με T2DM σύγκριση με τους άνδρες χωρίς [7].

Για πολλούς τύπους καρκίνου, μεταβολές στην ινσουλίνη καταρράκτη σηματοδότησης έχουν αναφερθεί. Αυτό ξεκινά στο επίπεδο του υποδοχέα ινσουλίνης (IR). Αυτός ο υποδοχέας εμφανίζεται σε δύο ισομορφές, ισόμορφο Α που εκφράζεται κυρίως προγεννητικά και ισόμορφο Β που εκφράζεται σε ενήλικες ιστούς διαφοροποιούνται [8]. Ενώ IR ισομορφή Β έχει μια υψηλή συγγένεια για την ινσουλίνη και είναι υπεύθυνη για τις περισσότερες από μεταβολικές επιδράσεις αυτής της ορμόνης, το ισόμορφο Α έχει επιπλέον μια υψηλή συγγένεια για την ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα (IGF) -ΙΙ και συμβάλλει στην πολλαπλασιασμό των κυττάρων. IR ισόμορφο Α παρεκκλίνοντα εκφράζεται σε πολλά καρκινικά κύτταρα [8]. Ενώ η υπερέκφραση του IR στον καρκίνο του προστάτη και υψηλότερη δραστικότητα της αλυσίδας σηματοδότησης καθοδικά έχει αναφερθεί [9] – [11]., Διαμόρφωση ισομορφή σε αυτού του καρκίνου δεν έχει ακόμη μελετηθεί

Οι πρωτεΐνες σύνδεσης στα κατάντη του IR και άλλες κινάσες τυροσίνης υποδοχέα (π.χ. IGF-1 υποδοχέα), υπόστρωμα υποδοχέα ινσουλίνης (IRS) -1 και IRS-2 είναι ζωτικής σημασίας για την επικοινωνία περαιτέρω σήματα από αυτούς τους υποδοχείς [12], [13]. Παρά IRS-1 και την υψηλή ομολογία IRS-2’S, έχουν μη περιττών λειτουργίες σε μεταβολικό έλεγχο και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [14]. Αυτές οι πρωτεΐνες ελλιμενισμού έχουν χαρακτηριστεί καλά σε σχέση με το μεταβολισμό και διαβήτη, αλλά μόνο λίγες μελέτες διερευνήθηκε ρόλους τους σε κακοήθειες [15]. Ο ρόλος αυτών των πρωτεϊνών σε καρκίνο του προστάτη είναι ακόμα ασαφής.

Πρόσφατες μελέτες περιγράφουν μοριακές μεταβολές σε ιστολογικά καλοήθη ιστό του καρκίνου του προστάτη που φέρουν αδένες [9], [16]. Εκτός από το επιστημονικό ενδιαφέρον στη βιολογία του όγκου, η γνώση σχετικά με τις τροποποιήσεις αυτές έχει μεγάλη σημασία για κλινική χρήση, π.χ. κατά τον καθορισμό διάγνωση σε υλικό βιοψίας ή να καθορίσει χειρουργικά όρια.

Στόχοι αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει

(i)

IR σύνθεση ισομορφής και την έκφραση του υποδοχέα IGF-1 και

(ii)

IRS ισορροπία στον καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με καλοήθη ιστό καθώς και σε όγκο παρακείμενο καλοήθη ιστό? και

(iii)

να φέρει αυτά τα αποτελέσματα σε σχέση με την p27

Kip1, ένα καλά περιγράφεται αναστολέας του κυτταρικού κύκλου στον καρκίνο του προστάτη [17].

Μέθοδοι

μελέτησαν δείγματα από 65 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή για καρκίνο του προστάτη (ηλικίας 50-76 [διάμεση τιμή 65] έτη). Προστατικό ιστό από ασθενείς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε ριζική cystoprostatectomy λόγω καρκίνου της ουροδόχου κύστης (n = 13, μέση ηλικία 67 έτη) ή διακυστική /διουρηθρική προστατικού αδενώματος-εκπυρήνιση λόγω υπερπλασίας (n = 10, μέση ηλικία 70 ετών) χωρίς καμία ένδειξη για τον καρκίνο του προστάτη συμπεριλήφθηκαν. Τα κλινικά χαρακτηριστικά δίνονται στον Πίνακα 1. Για όλους τους ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, προεγχειρητική επίπεδα PSA, καθώς και TNM-στάσης και το σκορ Gleason ήταν διαθέσιμα. Για την ανάλυση της βαθμολογίας Gleason, συγκρίναμε τα δείγματα από την ομάδα «καρκίνο του προστάτη», με ένα Gleason σκορ μέχρι 3 + 4 (= 7α? Ν = 11) με τέτοιο έχει ένα σκορ Gleason 4 + 3 = 7β και υψηλότερα (Ν = 24).

Η

Η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας (Πανεπιστήμιο του Tübingen) και όλοι οι συμμετέχοντες ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση.

Για να εξασφαλιστεί η βέλτιστη ποιότητα των ιστών του προστάτη και να αποφευχθεί η καθυστερημένη πάγωμα του φρέσκου ιστού, μία διαδικασία διεξήχθη για να εξασφαλίζεται η άμεση κατάψυξη. Ιστός από κανονικές προστάτες καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο αμέσως μετά τη χειρουργική εκτομή του δείγματος ( «καλοήθης» ομάδα? Ν = 23). Τα δείγματα είχαν εγγραφεί στη μελέτη, αν α) ιστοπαθολογική έργο μέχρι του συνόλου των χειρουργικών δείγματος έδειξε κανένα σημάδι του καρκίνου του προστάτη και β) ένας εκπρόσωπος διαφάνεια από δείγμα ιστού της έδειξε μη κακοήθη ιστολογία προστάτη.

Οι ιστοί από ριζική υπόδειγμα προστατεκτομή (με αποτέλεσμα τα «όγκου παρακείμενους ιστούς του προστάτη» και των «ιστούς καρκίνου του προστάτη»), ελήφθησαν δείγματα ως εξής: αμέσως μετά την εκτομή το δοκίμιο ήταν ψηφιακά ψηλαφείται και κόβεται σε εντοπισμό της υποτιθέμενης περιοχής του όγκου (στην περιοχή του περιφερικού σκληρότητα ). Στη συνέχεια, ένα περιφερικό δείγμα σε μέγεθος από περίπου 5 × 5 × 3 mm αποκόπηκε και διαιρείται κατά μήκος σε 3 ελάσματα, από τα οποία τα δύο εξωτερικά (Ι και III) καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο. Το μεσαίο έλασμα (II) ήταν φορμαλίνη, ενσωματωμένα σε παραφίνη και υποβάλλονται σε επεξεργασία για ιστολογική διαφάνεια. Η κατεργασία της μεσαίας διαφανειών από έναν έμπειρο uropathologist αποφάσισε την υπαγωγή της ομάδας της παράλληλης κατεψυγμένου ιστού: αν δεν υπήρχε σημάδι του καρκίνου του προστάτη στη διαφάνεια, η αντίστοιχη ιστός οδηγήθηκε στην «όγκου παρακείμενο καλοήθη προστάτη tissue’-ομάδα (Ν = 30). Εάν το slide αποκάλυψε ιστός του όγκου κάτω από το 60% της περιοχής, η αντίστοιχη ιστός εξαιρέθηκε από τη μελέτη λόγω των μικτών χαρακτήρων ιστού της. Εάν η αναλογία του όγκου ήταν πάνω από το 60% του ολισθητήρα, η παράλληλη ιστός είχε συμπεριληφθεί στην ανάλυση ως «ιστός προστάτη του καρκίνου» (Ν = 35).

Λόγω αυτής της προσέγγισης, κάθε αναλυόμενο δείγμα προέρχεται από ένα διαφορετικών ασθενών.

τα κατεψυγμένα δείγματα ιστού χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση του RNA, τα αντίστοιχα ιστούς παραφίνης για ανοσοϊστοχημεία. Τα κατεψυγμένα δείγματα λύθηκαν σε RLT χρησιμοποιώντας Tissue Lyser kit (Qiagen). RNA εκχυλίστηκε από RNeasy Mini Kit (Qiagen). PCRs (εις διπλούν) πραγματοποιήθηκαν σε ένα LightCycler 480 (Roche Diagnostics), με Probes Πλοίαρχος και φθορίζοντες ανιχνευτές από το Probe Βιβλιοθήκη καθολική (Roche Diagnostics). Η ακόλουθη πραγματικού χρόνου PCR πρωτόκολλο χρησιμοποιήθηκε [18]:

πρόγραμμα μετουσίωση (95 ° C για 5 λεπτά), ένα πρόγραμμα ενίσχυσης και ποσοτικοποίηση επαναλαμβάνεται 45 φορές (95 ° C για 10 δευτερόλεπτα, 60 ° C για 30 δευτερόλεπτα 72 ° C για τη δεύτερη [απόκτηση φθορισμός] 1), και, τέλος, ένα πρόγραμμα ψύξη στους 4 ° C. Εκκινητές σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό της Roche Probe Σχεδιασμός 2 (Roche Diagnositcs) και αγοράστηκε από την TIB MOLBIOL (Βερολίνο, Γερμανία)

ισομορφή του υποδοχέα της ινσουλίνης Α ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας τους ακόλουθους εκκινητές:. Εμπρός CAT ΤΤΤ TCG TCC CCA GGC, αντίστροφη CCACCGTCACATTCCCAAC. Η ινσουλίνη ισομορφή του υποδοχέα Β ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας εκκινητές: διαβιβάσει ΤΤΤ CGT CCC CAG ΑΑΑ AAC CTC Τ, αντίστροφη CCA CCG TCA CAT TCC ΥΠΑ Γ αμφότερες τις αντιδράσεις που χρησιμοποιούνται 5 ‘6-FAM φωσφοραμιδίτη-ΤΕΕ CCA AGG GAC CTG CGT T-BBQ (4, 4-δις- [2-butyloctyloxy] -ρ-τεταρτοφαινύλιο) ως ανιχνευτή. Ως εσωτερικός έλεγχος, χρησιμοποιήσαμε αυτές τις PCRs για τον υπολογισμό της συμβολής του υποδοχέα ινσουλίνης ισόμορφο Α με τη συνολική περιεκτικότητα υποδοχέα ινσουλίνης τριών ανθρώπινων ιστών: Σε κύτταρα ηπατώματος HepG2, 69% του υποδοχέα ινσουλίνης ήταν ισόμορφο Α, ενώ σε διαφοροποιημένα ανθρώπινα λιποκύτταρα και σε σκελετικό μυ, μόνο το 30% ήταν ισομορφή A. οι τιμές αυτές είναι συγκρίσιμες με τιμές που αναφέρθηκαν για αυτούς τους ιστούς στη βιβλιογραφία [8]. p27

kip1 (CDKN1B) ενισχύθηκε με τους εκκινητές: προς τα εμπρός GAG AGC CAG GAT GTC AGC G, αντίστροφη TTG ΤΤΤ TGA GTA GAA GAA TCG TCG GT. Για την αντίδραση αυτή, 5 ‘6-FAM φωσφοραμιδίτη-CCT ΤΤΑ ΑΤΤ GGG GCT CCG GCT AAC T-μπάρμπεκιου χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής. Οι άλλες αντιδράσεις που χρησιμοποιούνται τυποποιημένες ανιχνευτές Roche και οι παρακάτω εκκινητές: IGF-1 υποδοχέα εμπρός TCA GCG CTG CTG ΑΤΟ TGT, αντίστροφη GGC TCA ΤΟΟ TGA TCT TCT CC? υπόστρωμα υποδοχέα ινσουλίνης (IRS) -1 διαβιβάσει GCC ΤΑΤ GCC AGC ATC AGT ΤΤ, η αντίστροφη TTG CTG ΑΓΓ TCA ΤΤΤ ΑΓΓ TCT TC? IRS-2 προς τα εμπρός TGA CTT CTT GTC CCA CCA CTT, αντίστροφη CAT ΚΔ GGT GAT ΑΑΑ GCC AGA.

Για ανοσοϊστοχημεία, πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν, ενυδατωμένο και βυθίζεται σε διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου 3%. Το αντιγόνο ανάκτηση επιτεύχθηκε με slide βρασμό σε κιτρικό buffer.p27

kip1 πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας κιτ Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Μετά τον αποκλεισμό της ενδογενούς αβιδίνη /βιοτίνη από το διάνυσμα αποκλεισμού κιτ (Vector) και μη ειδική κηλίδωση με επώαση με φυσιολογικό ορό (αλόγου, κιτ ABC) ενός μονοκλωνικού κλώνου ποντικού SX53G8 αντίσωμα (Dako, (Santa Barbara, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε σε αραίωση του 1:150 στους 4 ° C όλη τη νύχτα επώαση. Το δευτερεύον αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή και DAB (Vector) χρησιμοποιήθηκε για την οπτικοποίηση. Όλα τα πλακίδια με αιματοξυλίνη Mayer του. ιστού αμυγδαλής χρησίμευσε ως θετικός έλεγχος. χρώση ποσοτικοποιήθηκε σύμφωνα με ημιποσοτική κλίμακα αναφοράς ανοσοϊστοχημεία κυμαίνονται 0-300 όπως περιγράφεται στο [19].

για στατιστικές αναλύσεις, JMP 9.0 (SAS Institute, Cary, NC, USA) χρησιμοποιήθηκε. Δεν είναι κανονικά κατανεμημένα δεδομένα λογαριθμικά μεταμορφωθεί πριν από την στατιστική ανάλυση. οι διαφορές μεταξύ δύο ομάδων ελέγχθηκαν με t-test του Student. οι διαφορές μεταξύ των πολλαπλών ομάδων ελέγχθηκαν με ANOVA που ακολουθήθηκε από Tukey Kramer δοκιμασίες post-hoc. συσχετίσεις αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης. Αποτελέσματα με p & lt? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

Για να αξιολογηθεί σε σχέση με τα επίπεδα έκφρασης, υπολογίσαμε αναλογίες μεταξύ των δύο IR ισομορφές, μεταξύ κάθε ισομορφή IR και τον υποδοχέα IGF-1, καθώς και. μεταξύ IRS 1 και 2. Συγκρίνοντας καλοήθους ιστού με καρκίνο του προστάτη, IR ισόμορφο Α σε αναλογία Β ήταν σημαντικά διαφορετική υπέρ της ισόμορφο Α σε καρκίνο σε σύγκριση με καλοήθη ιστό (Εικόνα 1 Α). IRS-1 αναλογία IRS-2 για να μετεβλήθη με σχετικά υψηλότερη έκφραση IRS-2 (Σχήμα 1 Β). Και για τις δύο αναλογίες, ιστολογική καλοήθης ιστό δίπλα στον καρκίνο ήταν σημαντικά διαφορετική σε καλοήθη ιστό αλλά όχι σε καρκίνο του προστάτη (Σχήματα 1 Α και Β). Ενώ δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των ομάδων στο IR ισόμορφο Α αναλογία IGF-1 υποδοχέα (Σχήμα 1 C), IR ισομορφή Β αναλογία υποδοχέα IGF-1 για να ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε καρκίνο και παρακείμενο ιστό σε σύγκριση με καλοήθη προστάτη (Σχήμα 1 D) . Όταν επαναλαμβάνοντας τις αναλύσεις στην υποομάδα όλων των ασθενών χωρίς σακχαρώδη διαβήτη, όλες οι διαφορές που αναφέρθηκαν για ολόκληρη την ομάδα παρέμειναν σημαντικές (όλα post-hoc ρ & lt? 0,05, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, σε αυτή την υποομάδα η IR ισομορφή Μία αναλογία υποδοχέα IGF-1 να ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε ιστολογική καλοήθης ιστό δίπλα σε καρκίνο σε σύγκριση με τους άλλους δύο τύπους ιστού (ANOVA p = 0,0099, post-hoc ρ & lt? 0,05).

Bars αντιπροσωπεύουν μέσο + SEM., Ν = 88. Τα δεδομένα ήταν καταγραφής

e

-μεταμορφωμένων πριν από την στατιστική ανάλυση. Όταν η σύγκριση μεταξύ των ομάδων με ANOVA οδήγησε σε στατιστικά σημαντικές διαφορές, Tukey Kramer τεστ post-hoc εκτελέστηκε. Οι στατιστικά σημαντικές αποτελέσματα της δοκιμής αυτής δίδονται στα σχήματα. ισομορφή αναλογία ισομορφή του υποδοχέα Β Α /ινσουλίνη (Α) με τους υποδοχείς ινσουλίνης. ANOVA ρ = 0,0002. (Β) αναλογία IRS-1 /IRS-2. ANOVA p = 0,0426. αναλογία (C) με τους υποδοχείς ινσουλίνης ισόμορφο Α /IGF 1 υποδοχέα. ANOVA p = 0,2. αναλογία υποδοχέα (D) των υποδοχέων της ινσουλίνης ισομορφή Β /IGF 1. ANOVA p = 0,0016. ANOVA – ανάλυση διακύμανσης? IGF – ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα? IR – υποδοχέα ινσουλίνης? IRS – υπόστρωμα υποδοχέα ινσουλίνης? RNA – ριβονουκλεϊκό οξύ? SEM -. Πρότυπο σφάλμα του μέσου όρου

Η

ανοσοϊστοχημεία, έκφραση του ρ27

Kip1 ήταν ομοιογενώς κατανεμημένη κατά μήκος της αδενικό δακτυλίους (Σχήμα 2 Α και Β). Στις περισσότερες δείγματα μια πυρηνική χρώση ήταν παρούσα, ενώ μόνο σε περίπτωση ισχυρή χρώση ανιχνεύθηκε μία πρόσθετη κυτταροπλασματικό κλάσμα. Φλεγμονώδη κύτταρα και τα αιμοφόρα βάφτηκαν θετικά αλλά δεν εξετάστηκαν για ποσοτική αξιολόγηση. Δείγματα ήταν διαθέσιμα για ανοσοϊστοχημεία και χρώση ήταν επιτυχής σε 68 δείγματα. Υπήρξε μια σημαντική αρνητική συσχέτιση της p27

Kip1 με IR ισόμορφο Α σε αναλογία Β (Σχήμα 2 C). Για το IRS-1 αναλογία IRS-2, διαπιστώσαμε μια σημαντική θετική συσχέτιση με pf27

Kip1 (Εικόνα 2 D). Ενώ ρ27

Kip1 συσχετίστηκε θετικά με IR ισομορφή Β IGF-1 αναλογία υποδοχέα (Εικόνα 2 F), καμία συσχέτιση με IR ισόμορφο Α αναλογία υποδοχέα IGF-1 προς βρέθηκε (Εικόνα 2 Ε).

(α) και (Β): Αντιπροσωπευτικές χρώση για ρ27

Kip1, α: ένα δείγμα του καρκίνου του προστάτη με ισχυρή χρώση. Β: ένα δείγμα του καρκίνου του προστάτη με ασθενή χρώση. Bar = 100 μm. (C) – (F): Τα αναλογίες γονιδιακή έκφραση στυπώθηκε κατά τον ποσοτικό προσδιορισμό των ρ27

χρώση Kip1. Γραμμές αντιπροσωπεύει ταιριάζει γραμμή ± Διάστημα Εμπιστοσύνης, Ν = λόγος /ινσουλίνη ισομορφή του υποδοχέα Β 69. (Γ) τους υποδοχείς ινσουλίνης ισομορφή Α. αναλογία (D) IRS-1 /IRS-2. αναλογία (Ε) των υποδοχέων της ινσουλίνης ισομορφή Α /IGF 1 υποδοχέα. αναλογία υποδοχέα (F) των υποδοχέων της ινσουλίνης ισομορφή Β /IGF 1. Τα δεδομένα ήταν καταγραφής

e

-μεταμορφωμένων πριν από την στατιστική ανάλυση. Οι συσχετίσεις αναλύθηκαν με ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης. IRS – υπόστρωμα υποδοχέα της ινσουλίνης? IGF -. Η ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας

Η

Σε 55 δείγματα, έχουμε ποσοτικά επίσης έκφραση της p27

Kip1 (CDKN1B) σε επίπεδο RNA και ανιχνεύτηκε μια θετική συσχέτιση με τα δεδομένα της έκφρασης της πρωτεΐνης ανοσοϊστοχημική ( p = 0,0306). Όπως και με τα δεδομένα πρωτεΐνη, ρ27

Kip1 RNA ήταν σημαντικά αρνητικά συσχετισμένη με την ισομορφή IR A αναλογία Β (p = 0,0069). Για p27

Kip1 RNA, υπήρχε μια τάση προς θετική συσχέτιση με την IRS-1 αναλογία IRS-2 (p = 0,0675), καθώς και μια τάση για θετική συσχέτιση με την IR ισομορφή Α IGF-1 αναλογία υποδοχέα σε (p = 0,0862). Αριθ συσχέτιση με IR ισομορφή Β αναλογία υποδοχέα IGF-1 προς βρέθηκε (ρ = 0,7).

Στα δείγματα καρκίνου του προστάτη, καμία από τις αναλογίες που αναλύθηκαν η έκφραση του mRNA συσχετίστηκε με σκορ Gleason, προεγχειρητική επίπεδα PSA ή οι οποίοι είναι Τ ή Ν-στάδιο (όλα p≥0.2).

Όταν συγκρίναμε τα δείγματα των ασθενών που πάσχουν από διαβήτη τύπου 2 με τέτοιο από ασθενείς χωρίς, εμείς δεν βρήκε διαφορές στην IR ισομορφή Μια αναλογία Β ή σε IRS 1 /IRS 2 αναλογία (p = 1,0 και 0,7, αντίστοιχα). επίπεδα του υποδοχέα IGF-1 ήταν, ωστόσο, σημαντικά χαμηλότερα σε ασθενείς με διαβήτη τύπου 2 (p = 0,0019).

Συζήτηση

Ερευνήσαμε τη σύνθεση των μορίων σημαντική για μεταγωγή σήματος της ινσουλίνης στον καρκίνο του προστάτη σε σύγκριση με καλοήθη ιστό προστάτη. Καλοήθης ιστός είτε προέρχεται από ένα εντελώς καλοήθη προστάτη ή ήταν ιστολογικά καλοήθη ιστό δίπλα στον καρκίνο του προστάτη. Είναι ενδιαφέρον, υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των κακοήθεις και καλοήθεις προστάτη αλλά όχι μεταξύ του όγκου και των παρακείμενων ιστών. Και στις δύο, η αναλογία μεταξύ των ισομορφών IR Α και Β ήταν διαφορετική υπέρ της ισομορφής Α και του IRS-1 αναλογία IRS-2 για να διέφεραν υπέρ της IRS-2. Ενώ το IR ισόμορφο Α στο Β, καθώς και το IRS-1 προς αναλογίες IRS-2 δεν ήταν διαφορετικές σε ασθενείς με διαβήτη τύπου 2, βρήκαμε υποδοχέα IGF-1 πρέπει να μειωθεί σε αυτή την ομάδα ασθενών.

Ως σε πολλές άλλες μορφές καρκίνου [8], βρήκαμε υψηλότερη έκφραση του IR ισόμορφο Α σε σύγκριση με την ισομορφή Β Επομένως βρήκαμε μειωμένα επίπεδα του αναστολέα του κυτταρικού κύκλου ρ27

Kip1 σε δείγματα με υψηλότερα IR ισομορφή A. Τόσο ινσουλίνης και IGF- ΙΙ μπορεί να ενεργοποιήσει αυτήν την ισομορφή? Ωστόσο υπάρχουν διαφορές στην κατάντη σηματοδότηση [20]. Περαιτέρω, ο IGF-ΙΙ συνδέεται με τον υποδοχέα IGF-1 και αυτός ο υποδοχέας επικράτησε επίσης την μεταβολικά δραστική IR ισομορφή Β σε δείγματα καρκίνου του προστάτη μας. Αυτό πάλι σχετίζεται με αλλαγμένη p27 επίπεδα

Kip1. Έτσι, όλα τα συμπεράσματα μας προβλέψει αυξημένη πολλαπλασιαστική δράση της ινσουλίνης και IGF-II στον καρκίνο του προστάτη. Ενδιαφέρον, ειδικά αντισώματα για IR ισόμορφο Α είναι υπό ανάπτυξη για την θεραπεία του καρκίνου [8]. Με βάση τα ευρήματά μας, αυτά τα φάρμακα μπορούν επίσης να προσφέρουν θεραπευτικές επιλογές για τον καρκίνο του προστάτη.

Βρήκαμε τον καρκίνο του προστάτη να υπερεκφράζουν IRS-2 πάνω IRS-1. Είναι ενδιαφέρον ότι, IRS-2 ταυτοποιήθηκε ως θετικός ρυθμιστής της μετάστασης του καρκίνου του μαστού, ενώ IRS-1 μπορεί να είναι ένας καταστολέας της μετάστασης [21], [22]. Ο ρόλος αυτός της IRS-2 στην παθογένεση της μετάστασης φαίνεται να είναι ένα γενικό κύριος που ισχύει για άλλες κακοήθειες, καθώς [15], [21]. Από IRS-2 είναι προς τα κάτω το IR για τις οποίες ο συνδέτης, ινσουλίνη, είναι σημαντικά αυξημένα σε T2DM, τα ευρήματά μας υψηλότερων IRS-2 σε καρκίνο του προστάτη προτείνει αυξημένο κίνδυνο μετάστασης σε άνδρες με διαβήτη. Σύμφωνα με αυτή την υπόθεση, επιβίωσης μετά τη διάγνωση του καρκίνου του προστάτη είναι σημαντικά μικρότερη σε ασθενείς με T2DM σύγκριση με τέτοιο χωρίς [7].

Η σημαντικά χαμηλότερη έκφραση του υποδοχέα IGF-1 σε δείγματα από ασθενείς με σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 είναι πολύ απροσδόκητο για εμάς. Δεν είμαστε ενήμεροι για τυχόν αναφορές σε ένα τέτοιο φαινόμενο στον προστάτη ή άλλο ιστό. Ωστόσο, με βάση τον σχετικά μικρό αριθμό των ασθενών με διαβήτη στη μελέτη μας, δεν θα μπορούσαμε να αναλύσουμε αυτό το εύρημα χωριστά στον καρκίνο του προστάτη έναντι υγιών προστάτη. Φυσικά, αυτό θα πρέπει να διερευνηθεί σε μελλοντικές μελέτες, αφού μειωμένη διαθεσιμότητα του υποδοχέα IGF-1 σε καρκίνο προστάτη σε ασθενείς με διαβήτη τύπου 2 θα μπορούσε να καταστήσει πιο πιθανό να ανταποκριθούν σε ορισμένες ράδιο- ή χημειοθεραπείες [23], [24], αλλά μπορεί καθιστούν ανθεκτικά σε θεραπείες που στοχεύουν άμεσα τον υποδοχέα IGF-1 [24].

Ένα περαιτέρω απροσδόκητο εύρημα της μελέτης μας είναι τα χαρακτηριστικά των ιστολογικά καλοήθη ιστό δίπλα στον καρκίνο του προστάτη. Ακόμη και αν ο ιστός αυτός εμφανίζεται ως φυσιολογικό προστατικό ιστό ιστολογικά, σύνθεση του μορίων σηματοδότησης ινσουλίνης είναι πιο παρόμοιο με καρκίνο από σε υγιή ιστό. Οι συγκρίσιμες παρατηρήσεις έχουν γίνει σε προηγούμενες μελέτες, καθώς και [9], [10]. Τουλάχιστον δύο διαφορετικές εξηγήσεις είναι δυνατές: Η ινσουλίνη σηματοδότηση καταρράκτη σε όλο τον προστάτη θα μπορούσε να αλλάξει πολύ πριν αναπτυχθεί ο καρκίνος με ένα δεύτερο χτύπημα είναι αναγκαία για να προκαλέσει καρκίνο αναδυόμενες. Μια άλλη πιθανή εξήγηση είναι ότι ο καρκίνος τροποποιεί περιβάλλοντα ιστό του και προκαλεί μια κλίση του ιστού της έκφρασης υποτύπου IR /IRS. Παρά το γεγονός ότι ιστολογικά καλοήθη, το παρακείμενο ιστό θα μπορούσε ήδη να μεταβληθεί από τον όγκο και μπορεί τελικά να φιλοξενούν ογκογόνο δυναμικό. Αυτό το φαινόμενο είναι παρούσα σε άλλες κακοήθειες, για παράδειγμα επιγενετικές μεταβολές είναι παρούσες όσο το 4 cm μακριά από τον καρκίνο του μαστού [25]. Εάν η δεύτερη υπόθεση αποδεικνύεται αληθινό σε περαιτέρω μελέτες, θα μπορούσε να έχει σημαντικές επιπτώσεις για την διάγνωση του καρκίνου του προστάτη: ακόμη και αν η εστίαση του καρκίνου θα πρέπει να χαθεί σε μια βιοψία του προστάτη, αλλοιωμένη σύνθεση IR /IRS στο δείγμα θα έδειχνε καρκίνου εντός του οργάνου και προτροπή περαιτέρω ενέργειες.

Ένας περιορισμός της μελέτης μας είναι ότι δεν είχαμε τη μέτρηση ινσουλίνης νηστείας και τα επίπεδα της γλυκόζης νηστείας σε ασθενείς από τους οποίους προέρχονται τα δείγματα ερευνήθηκαν. Σημαντικούς καθοριστικούς παράγοντες αυτών των παραμέτρων, δηλαδή την ηλικία και το δείκτη μάζας σώματος (ΔΜΣ), καθώς ο επιπολασμός του σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 και η χρήση των ναρκωτικών διαβήτη, δεν διέφερε μεταξύ των ομάδων των ασθενών στη μελέτη μας. Ωστόσο, η ινσουλίνη και η γλυκόζη καταδείχθηκαν να ρυθμίζουν σύνθεση IR ισομορφής [8], [26], [27], και περαιτέρω μελέτες θα πρέπει ως εκ τούτου την αντιμετώπιση αυτών των παραμέτρων.

Επιπλέον, θα ήταν πολύ ενδιαφέρον να συγκρίνουμε IR /σύνθεση IRS σχετικά με το επίπεδο της πρωτεΐνης εκτός από το επίπεδο του mRNA. Το διαθέσιμο ποσό των ιστών στη μελέτη μας δεν ήταν αρκετό για επαρκή δυτική κηλίδες. Επιπλέον, είχαμε πρόσβαση σε ένα μόνο δείγμα από κάθε προστάτη. Μελετώντας πολλαπλά δείγματα από ένα μόνο όργανο με διαφορετικές γειτνίαση με την θέση του καρκίνου θα μπορούσε να επιτρέψει λεπτομερείς μελέτες σχετικά με τις πιθανές κλίσεις του IR και IRS σύνθεση ισομορφής από καρκίνο στον περιβάλλοντα ιστό. Τέτοιες αναλύσεις μπορεί να διαλευκάνουν την αιτία για την παρατήρηση μας ομοιότητες μεταξύ καρκίνου του προστάτη και των παρακείμενων ιστών.

Στο σύνολό τους, βρήκαμε σημαντικές διαφορές στην IR καταρράκτη μεταξύ καλοήθους ιστού του προστάτη και του καρκίνου σηματοδότησης. Η ιστολογική καλοήθης ιστό δίπλα σε καρκίνο του προστάτη έδειξαν έκφραση μοτίβα παρόμοια με τα κακοήθειες. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν έναν ρόλο της ινσουλίνης μονοπατιού σηματοδότησης στον καρκίνο του προστάτη και μπορεί ως εκ τούτου να είναι σχετικές και για τις δύο νέες διαγνωστικές, καθώς και θεραπευτικές προσεγγίσεις σε αυτήν την κακοήθεια.

Ευχαριστίες

Με ιδιαίτερη χαρά ανακοινώνουμε την άριστη τεχνική συνδρομή του Γ Haas και L. Nono (Πανεπιστήμιο του Tübingen, Tübingen, Γερμανία).