Αφηρημένο

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι μια ανοσολογική αντιδραστική κακοήθεια με ένα πολύπλοκο ανοσοποιητικό κατασταλτική δίκτυο που αμβλύνει την επιτυχή ανοσοποιητικό εξάλειψης. Αυτό το μικροπεριβάλλον του κατασταλτικού μπορεί να προκαλείται από την πρόσληψη ή την επαγωγή των CD4

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Tregs). Η μελέτη μας προσπάθησε να διερευνήσει τη σύνδεση των όγκων που διηθούν CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs, και άλλοι ανοσολογικοί παράγοντες, με την κλινική έκβαση σε ασθενείς με ορώδες ωοθηκικό καρκίνο. Πραγματοποιήσαμε ανοσοφθορισμό και ποσοτικοποίηση της ενδοεπιθηλιακής διηθούν όγκο τριπλή θετικά Tregs (CD4

+ CD25

+ FoxP3

+), καθώς και CD4

+ CD25

+ FoxP3

-, CD3

+ και CD8

+ Τ κυττάρων σε δείγματα όγκων από 52 ασθενείς με υψηλό στάδιο ορώδης καρκίνωμα των ωοθηκών. Τριάντα ένας από τους ασθενείς είχαν καλή επιβίωση (δηλαδή & gt? 60 μήνες) και 21 είχαν φτωχή επιβίωση του & lt? 18 μήνες. Σύνολο μετρήσεις κυττάρων, καθώς και οι αναλογίες των κυττάρων συγκρίθηκαν μεταξύ των δύο αυτών ομάδων έκβαση. Ο συνολικός αριθμός των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs, CD4

+ CD25

+ FoxP3

-, CD3

+ και CD8

+ κύτταρα δεν διαφέρουν σημαντικά μεταξύ των ομάδων. Ωστόσο, τα υψηλότερα ποσοστά των CD8

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg, CD8

+ /CD4

+ και CD8 /CD4

+ CD25

+ Foxp3

– κύτταρα παρατηρήθηκαν στην καλή ομάδα έκβαση σε σύγκριση με τους ασθενείς με κακή έκβαση. Αυτά τα δεδομένα δείχνουν για πρώτη φορά ότι οι αναλογίες των CD8

+ για δύο CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs και CD4

+ CD25

+ FoxP3

– τα Τ κύτταρα που συνδέονται με την πορεία της νόσου στον καρκίνο των ωοθηκών. Ο σύλλογος είναι εμφανής σε αναλογίες και όχι απόλυτο αριθμό των Τ-κυττάρων προτείνει ότι η αναλογία τελεστή /καταστολέα μπορεί να είναι μια πιο σημαντικός δείκτης της έκβασης από καταμέτρηση μεμονωμένων κυττάρων. Έτσι, οι στρατηγικές ανοσοθεραπεία που τροποποιούν την αναλογία των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs ή CD4

+ CD25

+ FoxP3

– Τ κύτταρα με CD8

+ τελεστές κύτταρα μπορεί να είναι χρήσιμη στη βελτίωση των αποτελεσμάτων στον καρκίνο των ωοθηκών

Παράθεση:. Preston CC, Maurer MJ, Oberg aL, Visscher DW, Καλλή KR, Hartmann LC, et al. (2013) Οι λόγοι των CD8

+ Τ κύτταρα με CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ και FoxP3

– Τ κύτταρα συσχετίζεται με φτωχού κλινικού αποτελέσματος στην Ανθρώπινη υδαρής καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 8 (11): e80063. doi: 10.1371 /journal.pone.0080063

Επιμέλεια: Muriel Moser, Université Libre de Bruxelles, Βέλγιο

Ελήφθη: 14 Αυγούστου, 2013? Αποδεκτές: 8 Οκτώβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 14 Νοεμ 2013

Copyright: © 2013 Preston et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις σε KLK, ELG, LCH: P50-CA116201, R01-CA122443, και οι χρηματοδότες P50-CA136393.The δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών έχει το υψηλότερο ποσοστό θνησιμότητας από καρκίνους αποκλειστικά για γυναίκες. Παρά τις πολλές θεραπευτικές προσπάθειες χρησιμοποιώντας νέες χημειοθεραπείες, το ποσοστό ίασης δεν έχει βελτιωθεί σημαντικά σε δεκαετίες [1-3]. Είναι γνωστό ότι τα κλινικά αποτελέσματα στον καρκίνο των ωοθηκών είναι αρκετά ετερογενής και δεν προβλέπεται εύκολα με πρότυπες κλινικές και παθολογικές χαρακτηριστικά (π.χ., τάξη, ιστολογία όγκων) [4-6]. Αυτό υποδηλώνει ότι μπορεί να υπάρχουν άλλα μικροπεριβάλλον του όγκου ή ξενιστή χαρακτηριστικά με ένα κυρίαρχο ρόλο στην επιβίωση. Τα τελευταία χρόνια, υπήρξε ενδιαφέρον για την κατανόηση του ρόλου της ανοσολογικής απάντησης του ασθενούς σε καρκίνο της ωοθήκης, καθώς η νόσος πιστεύεται ότι είναι ένα φυσικώς ανοσοδραστικά κακοήθειας με ένα σύμπλοκο κατασταλτική δίκτυο που αμβλύνει αποτελεσματικά επιτυχής ανοσολογική εξάλειψης. Κατά την τελευταία δεκαετία, οι μελέτες έχουν δείξει την σημασία του ανοσοποιητικού συστήματος σε επηρεάζουν έκβαση των ασθενών. Αξίζει να σημειωθεί ότι, Zhang και οι συνεργάτες του δημοσίευσαν μια μελέτη που έδειξε ότι η πλειοψηφία των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών είχαν διηθούν όγκο CD3

+ Τ κύτταρα και ότι η διείσδυση συσχετιζόταν θετικά με την επιβίωση [7]. Η παρουσία των Τ κυττάρων ήταν ιδιαίτερα επωφελής για εκείνα τα άτομα που έδειξαν μια πλήρη κλινική απόκριση σε χειρουργική επέμβαση και χημειοθεραπεία στην οποία η πενταετής επιβίωση ήταν 74% σε σύγκριση με 12% για εκείνους που δεν έχουν Τ κύτταρα. Μεταγενέστερες μελέτες έχουν τελειοποιηθεί κατανόηση της ενδονεοπλαστική Τ κύτταρα, όπως το έργο από τους Sato et al., Που έδειξε ασθενείς που είχαν υψηλά επίπεδα διηθητικών κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα (CTL) είχαν μια διάμεση επιβίωση των 55 μηνών έναντι εκείνων με λίγους ή καμία CTL που είχαν μια επιβίωση 26 μηνών [8]. Ένα μοναδικό χαρακτηριστικό των συμβατικών θεραπευτικών στρατηγικών για τον καρκίνο των ωοθηκών είναι ότι η λειτουργία των Τ κυττάρων ταχέως ανακτάται εξής συμβατική χημειοθεραπεία [9]. Τα αντιγόνα με τα οποία οι ασθενείς είναι φυσικά ανταποκρίνονται τώρα συστηματικά μελετηθεί [10,11]. Συλλογικά, αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η ανοσία κατά του όγκου που προκαλείται έναντι καρκίνων και επηρεάζει την κλινική πορεία της νόσου των ωοθηκών. Ωστόσο, είναι πλέον προφανές ότι η ανοσία κατά των όγκων αντισταθμίζεται από μια ανοσοκατασταλτική μικροπεριβάλλον [7,12-15].

Ένα από τα κυτταρικών παραγόντων που μπορεί να μεσολαβήσει αυτό ανοσοκαταστολή στο μικροπεριβάλλον του όγκου είναι ο πληθυσμός ρυθμιστικών κυττάρων Τ (Treg). Έρευνα σχετικά με Tregs έχει προχωρήσει με ταχείς ρυθμούς, ειδικά σε αυτό το πλαίσιο του καρκίνου. Tregs είναι μια ετερογενής CD4

+ υποπληθυσμό των κυττάρων Τ του οποίου η κύρια λειτουργία είναι το ανοσοποιητικό ρύθμιση αναστέλλοντας τη λειτουργία των ενεργοποιημένων Τ κυττάρων. CD4

+ Tregs μπορούν να χωριστούν σε δύο βασικές υποκατηγορίες: φυσικά Tregs με CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ φαινότυπο και προκαλείται από Tregs με μεταβλητή έκφραση CD25 [12]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι το πλαίσιο forkhead Ρ3 (FoxP3) είναι ένας κεντρικός παράγοντας μεταγραφής που ρυθμίζει την ανάπτυξη και τη λειτουργία των CD4

+ Tregs [16,17]. Επιπλέον, μελέτες έχουν δείξει επίσης ότι η έκφραση του CD25, ενός συστατικού του υποδοχέα της IL-2 υψηλής συγγένειας, είναι απαραίτητη για την επιβίωση Treg, η οποία εξαρτάται από την IL-2 [18,19] υψηλά. Κατά την τελευταία δεκαετία έχουν γίνει πολλές μελέτες που συνδέουν Tregs με την επιβίωση σε πολλούς τύπους καρκίνου. Στον καρκίνο των ωοθηκών, Curiel και οι συνεργάτες του έδειξαν αρχικά μια ισχυρή συσχέτιση των CD4

+ CD25

+ Τ κυττάρων με κακή επιβίωση [14]. Αξίζει να σημειωθεί ότι το συγκεκριμένο ρόλο της τριπλής χρωματισμένο CD4

δεν εκτιμήθηκε + CD25

+ FoxP3

+ Τ κύτταρα. Λίγα χρόνια αργότερα, Sato και οι συνεργάτες του κατάφεραν να δουν οποιαδήποτε άμεση σύνδεση των CD25

+ FoxP3

+ Τ κύτταρα στον καρκίνο των ωοθηκών, αλλά έκανε δείχνουν ότι η χαμηλή συνολική CD8

+ μετράει Τ κυττάρων και η CD8

+ /CD25

+ FoxP3

+ Τ sup συνδέθηκαν με φτωχότερη επιβίωση, και πάλι σε έναν πληθυσμό με διαφορετικά ιστολογίες [8]. Σε μια ακόμη πιο πρόσφατη μελέτη, Milne και οι συνεργάτες του έδειξαν, σε υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνο των ωοθηκών, ότι η καταμέτρηση των κυττάρων ενδοεπιθηλιακής μεμονωμένα χρωματίστηκαν για FoxP3

+ συσχετίστηκε με σημαντικά βελτιωμένη επιβίωση [20]. Ωστόσο, η μελέτη τους δεν προσδιορίζουν συγκεκριμένα τον τύπο κυττάρου που εκφράζει Foxp3. Δεδομένου ότι άλλα κύτταρα εκτός από τα κύτταρα Τ εκφράζουν FoxP3 (π.χ., καρκινικά κύτταρα και Β κύτταρα), η σημασία αυτής της εργασίας, ενώ ενδιαφέρουσα, παραμένει ασαφές [21,22]. Επιπλέον, δεδομένου ότι και οι δύο CD8

+ και CD4

+, ρυθμιστικά και

in vitro

ενεργοποιημένα Τ κύτταρα είναι γνωστό ότι εκφράζουν FoxP3, η συγκεκριμένη ταυτότητα του κυτταρικού τύπου που εμπλέκονται στην τροποποίηση της επιβίωσης είναι άγνωστη. Ωστόσο, πιο πρόσφατα, Kryczek και οι συνεργάτες του έδειξαν ότι σε πρωτογενείς όγκους ή αυτοάνοσες αλλοιώσεις, FoxP3 και CD25 είναι ένα πολύ συγκεκριμένο και αξιόπιστο σύνολο δεικτών για την πρωτογενή ανθρώπινα CD4

+ Tregs [23].

Ο κύριος στόχος της μελέτης μας ήταν να εξετάσει τη σχέση της διηθούν όγκο CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs και άλλων Τ κυττάρων με την κλινική έκβαση σε ασθενείς με επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών, δεδομένου Αυτή η προσέγγιση της τριπλής χρώσης δεν έχει γίνει σε όγκους των ωοθηκών για το καλύτερο της γνώσης μας. Συγκεκριμένα, μελετήσαμε μια μοναδική ομάδα, που περιορίζεται σε ασθενείς με προχωρημένο στάδιο ορώδες καρκίνο των ωοθηκών (η πιο κοινή και πιο θανατηφόρα ιστολογία), που αποτελείται από δύο υποομάδες των ασθενών με πολύ διαφορετικές κλινικές εκβάσεις, ένα με πολύ κακή επιβίωση (& lt? 18 μήνες) και το άλλο από ασθενείς με πολύ καλύτερη επιβίωση (& gt? 60 μήνες).

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς και κλινικά χαρακτηριστικά

η μελέτη εγκρίθηκε από την κλινική Μάγιο επιτροπή δεοντολογίας και όλοι οι ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση για την έρευνα χρήση των δειγμάτων. υπολογισμοί ρεύματος έγιναν μέσω προσομοίωσης για να εκτιμηθεί ο αριθμός των δειγμάτων που απαιτούνται για να ανιχνευθεί μια σημαντική διαφορά επιβίωσης σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. Πενήντα-δύο ασθενείς, οι οποίοι επιλέγονται από διαφορετικές ομάδες αποτέλεσμα με κακή έκβαση (& lt? 18 μηνών επιβίωσης) και την καλή έκβαση (& gt? 60 μηνών επιβίωσης), υπό τον όρο 82,5% της ισχύος σε μια άλφα 0,05 για να ανιχνεύσει μια συνολική αναλογία κινδύνου επιβίωση των 1,65 μεταξύ διχοτομική CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg ομίλων σε όλους τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. Αυτό μεταφράζεται σε τουλάχιστον 80% ισχύ για να ανιχνεύσει ένα μέγεθος επίδρασης (αλλαγή στον αριθμό ή αναλογία CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs) 0,8 κατά την αξιολόγηση Tregs μεταξύ των δύο διαφορετικών ομάδων έκβασης με τη φτωχή έκβαση (

n

= 21) και καλή έκβαση (

n

= 31) με μια δοκιμή Kruskall Wallace, όπως εκτελείται σε αυτή τη μελέτη. Όλα τα δείγματα που επιλέγονται από τους ασθενείς με άριστα debulked, υψηλής στάδιο, ορώδες ωοθηκικό, σάλπιγγα ή πρωτογενή περιτοναϊκή καρκίνωμα.

χρώσης και ανοσοφθορισμού ανάλυση των δειγμάτων ιστού

Όλα τα κατεψυγμένα τεμάχια δείγματος, προηγουμένως ενσωματωμένα σε Tissue-Tek OCT (Sakura Finetek, Torrance, CA), οι υποβλήθηκαν σε κρυοτομή (5 μm), σταθεροποιήθηκαν σε ακετόνη για 10 λεπτά, ξηραίνεται στον αέρα επί 1 ώρα και αποθήκευση στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Πριν τη χρώση, όλα τα πλακίδια αποκλείστηκαν για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (25 ° C) με το τετράγωνο πρωτεΐνη χωρίς ορό (Dako, Carpinteria, CA) και στη συνέχεια πλύθηκε με αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS). Η χρώση πραγματοποιήθηκε με επώαση των πλακών σε θερμοκρασία δωματίου (25 ° C) σε υγρό σκοτάδι θαλάμων για 2 ώρες με πρωτογενή αντισώματα αραιωμένα σε αντιδραστήριο αραιωτικό αντισώματος (Dako, Carpinteria, CA). Πολυκλωνικός αντι-ανθρώπινο FoxP3 (Abcam, Cambridge, ΜΑ) χρησιμοποιήθηκε σε μια αραίωση 1:75, μονοκλωνικό ποντικού αντι-ανθρώπινο CD4 (Abcam, Cambridge, ΜΑ) σε 1: 100, μονοκλωνικά αρουραίου αντι-ανθρώπινου CD25 (Abd Serotec, Raleigh, NC) στα 1: 100, μονοκλωνικό ποντικού αντι-ανθρώπινο CD8 (BD Pharmingen, San Diego, CA) σε 1: 100, και μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-ανθρώπινου CD3 (BD ​​Pharmingen, San Diego, CA) σε 1:50. Μετά κηλίδωση με πρωτεύοντα αντισώματα, τα πλακίδια στη συνέχεια πλύθηκαν για 15 λεπτά με PBS και επωάστηκαν για 1 ώρα σε ένα υγρό σκοτεινό θάλαμο με δευτερογενή αντισώματα (Alexa fluor 405, 488 και 594 συζευγμένο, Invitrogen, Life Technologies, Grand Island, ΝΥ) σε ένα αραίωση 1: 500. Αντισώματα για Foxp3, CD4 και CD25 χρησιμοποιήθηκαν για την τριπλή χρώση των Tregs ενώ τα αντισώματα για CD3 και CD8 χρησιμοποιήθηκαν ως ενιαίο λεκέδες. Μεμονωμένα χρωματισμένο κύτταρα επίσης αντίθετα με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλιο (ϋΑΡΙ, 100 ng /ml) για 30 λεπτά. Ανθρώπινα αμυγδαλής ιστός χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος και αρνητικοί έλεγχοι έγιναν με παραλείποντας το πρωτογενές αντίσωμα και χρησιμοποιώντας χειριστήρια ισοτύπου για κάθε αντίσωμα.

συνεστιακή μικροσκοπία και κυτταρικές ποσοτικοποίηση

Τα βαμμένα πλακίδια αξιολογήθηκαν σε LSM 510 συνεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης με λέιζερ (Carl Zeiss MicroImaging, Inc., Oberkochen, Germany). Ενδοεπιθηλιακή χρωματισμένα κύτταρα αξιολογήθηκαν για μεγάλης ισχύος μεγέθυνση σαρώνονται τα πεδία τυχαίων επιθηλιακών τμήματα αποφεύγοντας στρωματικά περιοχές. Τα σαρωμένα πεδία απόσταση για να αποφεύγονται οι αλληλεπικαλύψεις και λεύκανση και να καλύψει ολόκληρο το τμήμα του όγκου. Είκοσι τυχαία πεδία (300 μm

2) ψηφιακά φωτογραφήθηκε για κάθε δείγμα ασθενούς. Ποσοτικοποίηση των θετικών κυττάρων πραγματοποιήθηκε με το χέρι από τους παρατηρητές τυφλωμένο σε όλες τις κλινικές πληροφορίες. Ένα υποσύνολο τυχαία επιλεγμένα δείγματα εξετάστηκαν από μια δευτερεύουσα παρατηρητή. Οι συνολικές μετρήσεις κυττάρων από κάθε πεδίο καταγράφηκαν είτε στην τριπλή χρώση (CD4, CD25 και Foxp3) ή μεμονωμένων χρωματισμένο (CD8 ή CD3) δείγματα.

Όταν τα δείγματα όγκων εξετάστηκαν χονδροειδώς υπό συνεστιακή μικροσκοπία, ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα παρατηρήθηκαν τόσο στο στρώμα και το επιθήλιο. Έτσι, ιδιαίτερη προσοχή δόθηκε στην ίδρυση των πεδίων καταμέτρηση αποκλειστικά εντός των επιθηλιακών περιοχές. Οι ακόλουθες κύτταρα ποσοτικοποιούνται στην τριπλή βάφονται δειγμάτων και χρησιμοποιούνται στην ανάλυση: CD4

+ CD25

+ FoxP3

+, CD4

+ CD25

+ FoxP3

-, CD4

+ CD25

-FOXP3

-, CD4

+ CD25

-FOXP3

+, CD4

-CD25

+ FoxP3

+, CD8

+ DAPI

+ και CD3

+ DAPI

+. Ενδοεπιθηλιακή διηθούν όγκο Tregs ορίστηκαν ως CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ κυττάρων, με CD4 (κόκκινο σήμα) και CD25 (πράσινο σήμα) λεκέδες ανιχνεύεται στις περιοχές του κυτταροπλάσματος και μεμβράνη δίνοντας ένα πορτοκάλι ή /και κίτρινο μοτίβο και FoxP3 (μπλε σήμα) ανιχνεύεται ως ενδο-πυρηνικά και τυπικά διακεκομμένη μοτίβο λεκέ. Η κύρια αξιολόγηση των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg ποσοτικοποίησης ήταν η συνολική Treg υπολογίζει σε όλες τις 20 φωτογραφίες από ένα δείγμα όγκου. Αυτό έγινε σε αντίθεση με προηγούμενες μελέτες, οι οποίες γενικά ποσοτικά Tregs χρησιμοποιώντας χρήστη εντοπίστηκαν τομείς εστίασης της διείσδυσης [8,14]. Δοκιμάσαμε την εγκυρότητα αυτών των προτέρων προσεγγίσεις χρησιμοποιώντας επίσης δευτεροβάθμια μετρήσεις για κάθε όγκο, δηλαδή το υψηλότερο ενιαίο καταμέτρηση εικόνα από ένα δείγμα όγκου (MAX1) και του αθροίσματος των τριών υψηλότερων μετρήσεις από ένα δείγμα όγκου (MAX3).

διηθούν όγκο απομόνωσης λεμφοκυττάρων

Σε περαιτέρω έρευνα, ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα (TILs) συλλέχθηκαν από έξι όγκους των ωοθηκών και απομονώθηκαν με ασυνεχή κλίση Ficoll όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Εν συντομία, τα λεμφοκύτταρα διαχωρίστηκαν από τα κύτταρα του όγκου με φυγοκέντρηση του κυτταρικού εναιωρήματος σε ένα δύο στρώμα Ficoll κλίση, 100% στρώμα στον πυθμένα και 75% στρώμα στην κορυφή. Τα απομονωμένα TILs στη συνέχεια χρωματίστηκαν για ανάλυση με κυτταρομετρία ροής όπως περιγράφεται παρακάτω.

Η κυτταρομετρία ροής

κυτταρική επιφάνεια και χρώση ενδοκυτταρικής σήμανσης εκτελέστηκε σε απομονωμένες TILs (1 Χ 10

6) όπως περιγράφεται προηγουμένως [25]. Δύο ομάδες πειραμάτων διεξήχθησαν? στο πρώτο σετ un-διεγερμένα κύτταρα βάφτηκαν με τα ακόλουθα συζευγμένα αντισώματα: CD3-PE-Cy7, CD4-Pacific Blue, CD8-Alexa Fluor 700, CD1c-APC, BDCA2-FITC και CD68-PerCP-Cy5.5. Στο δεύτερο, εμείς που βάφονται un-διεγερμένα και διεγερμένα κύτταρα για CD4-Ειρηνικού μπλε, CD25-PE, FoxP3-Alexa Fluor 647 και TGF-β-ΡΕ-Cy7. Πριν από την κηλίδωση TILs διεγέρθηκαν με επώαση με 5 μg /ml κονκαναβαλίνης-Α (Con-Α, Sigma-Aldrich, St Louis, ΜΟ) και 0.7μL /ml BD GolgiStop ™ (BD Bioscience, San Jose, CA) για 8 ώρες, στη συνέχεια πλένονται, μετρήθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα FACS (PBS με 1 mM /L ΕϋΤΑ και 3% αλβουμίνη βόειου ορού). χρώση Foxp3 και κυτοκίνης διεξήχθη σύμφωνα με ενδοκυτταρική πρωτόκολλο χρώσης του κατασκευαστή (eBioscience, San Diego, CA). Κατάλληλα αντισώματα ισοτύπου χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Όλα τα αντισώματα αγοράστηκαν από BD Bioscience (San Jose, CA) εκτός από τις ακόλουθες αντισώματα: ΤΟΡ-β-ΡΕ-Cy7 και CD3-PE-Cy7 ήταν από eBioscience (San Diego, CA), BDCA2-FITC από τη Miltenyi Biotec (Auburn , CA) και CD68-PerCP-Cy5.5 αποκτήθηκε από BioLegend (San Diego, CA). Τα δείγματα τρέχουν σε FACS σάρωση II και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας FlowJo 10.0.5.

Δεδομένα ανάλυσης

Οι κατανομές των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg μετράει μεταξύ των ασθενών με καλή και κακή έκβαση εξετάστηκαν γραφικά και σε σύγκριση με τη χρήση Wilcoxon τεστ rank-sum (Mann-Whitney

U

δοκιμή). Αναλογίες υπολογίστηκαν ως ο αριθμός των CD8

+ κύτταρα διαιρούνται με τον αριθμό των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs για ένα δεδομένο ασθενή. Οι μετρήσεις κυττάρων συνοψίζονται ως διάμεση τιμή και διατεταρτημοριακό εύρος (IQR). Για συγκρίσεις κατά ζεύγη των κυτταρομετρία ροής δεδομένων, χρησιμοποιήθηκε δοκιμασία Τ ένα αντιστοιχισμένο του Student. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε σε p-τιμή ≤ 0,05.

Κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών

Πενήντα δύο δείγματα όγκων που πληρούν τα κριτήρια της μελέτης επιλέχθηκαν

Αποτελέσματα

από την τράπεζα ιστών. Τα χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον πίνακα 1. Η μέση ηλικία των ασθενών στη μελέτη ήταν 65 έτη (εύρος, 37-86 ετών). Όλοι οι ασθενείς είχαν διαγνωστεί με προχωρημένο στάδιο (71% στάδιο III, 29% το στάδιο IV) της νόσου, είχαν άριστα debulked, και είχαν όγκους με ορώδες μορφολογία. Διάμεση επιβίωση στην κακή ομάδα έκβαση ήταν 12,4 μήνες (εύρος 3,0 έως 16,7) και η διάμεση επιβίωση στην καλή ομάδα αποτέλεσμα δεν έχει ακόμη επιτευχθεί με 73,8 μήνες διάμεση παρακολούθηση (εύρος 60,1 έως 116,8).

Η καλό αποτέλεσμα

κακή έκβαση

Η (

n

= 31) (

n

= 21) P-valueAge σε DiagnosisMedian62.069.00.0059Range (37,0 – 80,0) (50,0 έως 86,0) StageIII23 (74,2%) 14 (66,7%) 0.56IV8 (25,8%) 7 (33,3%) GradeLow3 (9,7%) 0 (0,0%) 0.20High28 (90,3%) 21 (100 %) Vital StatusAlive24 (77,4%) 0 (0,0%) NADead7 (22,6%) 21 (100,0%) Πρώτη Γραμμή ChemotherapyPlatinum2 (6,5%) 1 (4,8%) και 0.20Platinum Taxane27 (87,1%) 15 (71,4%) Other2 (6,5%) 5 (23,8%) Πίνακας 1. Χαρακτηριστικά των ασθενών

καλή έκβαση & gt.? 60 μήνες επιβίωσης, η κακή έκβαση & lt? επιβίωση 18 μηνών? Όλες οι περιπτώσεις ήταν σοβαρή παράλειψη καρκίνων και βέλτιστα cytoreduced. CSV Λήψη CSV

Καταμέτρηση ενδοεπιθηλιακής ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ

ενδοεπιθηλιακή διείσδυση κυττάρων (CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs, CD4

+, CD8

+, CD3

+, CD4

+ CD25

+ FoxP3

– και CD4

+ CD25

-FOXP3

+) έχουν ποσοτικοποιηθεί και αναλύθηκαν σε όλους τους τομείς. Εκπρόσωπος σαρωθεί πεδία που διηθούν όγκο θεωρούμενων CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs καθώς και CD4

+ CD25

+ FoxP3

– παρουσιάζονται στο Σχήμα 1Α. Το σχήμα 1Β δείχνει αντιπροσωπευτικά CD8

+ και CD3

διείσδυση + Τ κυττάρων. Ανάλυση αποκάλυψε μια μικρή αλλά στατιστικά σημαντική γραμμική συσχέτιση μεταξύ των μετρήσεων των CD3

+ Τ κύτταρα και CD4

+ ή CD8

+ Τ κυττάρων (Σχήμα 1C).

(Α) Φωτογραφία του CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs σε δείγματα όγκων των ωοθηκών. Επάνω αριστερά του πίνακα δείχνει την έκφραση CD4 (κόκκινο σήμα), πάνω δεξιά πάνελ δείχνει την έκφραση CD25 (πράσινο σήμα), κάτω αριστερά πίνακας δείχνει την έκφραση Foxp3 (μπλε σήμα) και κάτω δεξιά οθόνη δείχνει τα συνδυασμένα σήματα με βέλη που δείχνουν να τριπλασιάσει χρωματισμένο CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs. Σε αυτήν την εικόνα Tregs παρατηρούνται σε στενή επαφή με CD4

+ CD25

+ FoxP3

– κύτταρα. (Β) Η φωτογραφία της ενδοεπιθηλιακής διηθητικών CD8

+ κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (αριστερό πάνελ) και CD3

+ λεμφοκυττάρων (δεξί πάνελ) στον καρκίνο των ωοθηκών. Αυτό το αντιπροσωπευτικό σάρωσης δείχνει την έκφραση CD8 και CD3 (κόκκινο σήμα = CD8 ή CD3, μπλε σήμα = DAPI) στη μάζα του όγκου των ωοθηκών. (C) οικόπεδο Συσχέτιση σύγκριση CD3 μετράει είτε CD8 (γεμάτα σύμβολα) και ο αριθμός των CD4 (ανοικτά σύμβολα). Τα σύμβολα αντιπροσωπεύουν το άθροισμα των πεδίων 20 μετρήθηκαν για ένα μοναδικό ασθενή. Όλοι οι ασθενείς εκπροσωπούνται. Οι γραμμές ένθετο είναι το προϊόν της γραμμικής ανάλυσης παλινδρόμησης. (D) δείχνει τη συνολική μέση τιμή (± SEM,

n

= 52) CD3

+, CD4

+, και CD8

+ Τ αριθμό των κυττάρων (άθροισμα των 20 πεδίων) για όλους ασθενείς. (Ε) οικόπεδο Συσχέτιση συγκρίνοντας το συνολικό Treg (δηλαδή CD4

+ CD25

+ Foxp3

+) μετράει με το άθροισμα των μέγιστων 3 (MAX3) πεδία ή τον μέγιστο αριθμό τομέα (MAX1). Τα σύμβολα αντιπροσωπεύουν το άθροισμα των πεδίων 20 μετρήθηκαν για ένα μοναδικό ασθενή. Όλοι οι ασθενείς εκπροσωπούνται. Οι γραμμές και κύριο θέμα είναι τουλάχιστον σειρές τετραγώνων.

Η

Δεδομένου ότι πριν από τις μελέτες που εξετάστηκαν και που απαριθμούνται μη τυχαία Τ κυττάρων εμπλουτισμένο τομείς, εξετάσαμε την εγκυρότητα αυτής της προσέγγισης με την εκτίμηση της συσχέτισης μεταξύ του συνόλου των CD4

+ CD25

+ Foxp3

+ καταμέτρηση Treg σε όλα τα 20 πεδία και τις μετρήσεις MAX1 και MAX3. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 1D, υπήρχαν πολύ ισχυρές στατιστικά σημαντικές συσχετίσεις, υποδηλώνοντας ότι οι προηγούμενες προσεγγίσεις για την απαρίθμηση διηθητικά Τ κύτταρα είναι σε μεγάλο βαθμό ισχύει.

απαριθμήσεις Τ κυττάρου δεν σχετίζεται άμεσα με την κλινική έκβαση σε ορώδες καρκίνο των ωοθηκών του ανθρώπου

Οι αρχικές αναλύσεις που επικεντρώθηκε στην συσχέτιση του αριθμού των κυττάρων με ομάδες αποτέλεσμα. Σε αντίθεση με την προηγούμενη εργασία, ενδοεπιθηλιακή CD3

+ Τ κύτταρα δεν παρατηρήθηκαν σε σημαντικά διαφορετικά επίπεδα σε ασθενείς με καλό αποτέλεσμα (διάμεση τιμή 154 κύτταρα (άθροισμα 20 πεδία), IQR 89 έως 297) σε σύγκριση με τους ασθενείς με κακή έκβαση (διάμεση 179, IQR 73-333, Πίνακας 2). Ομοίως, οι ποσότητες που διηθούν CD4

+ (370, IQR 249-461 στην καλή ομάδα έναντι 377, IQR 264-524 στην κακή ομάδα) και CD8

+ Τ κύτταρα (115, IQR 53-180 στην καλή ομάδα εναντίον 48, IQR 17-180 στην κακή ομάδα) δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των καλών και των φτωχών ομάδων έκβασης.

Η καλό αποτέλεσμα (n = 31)

κακή έκβαση (n = 21)

Η διάμεση

IQR

Median

IQR

P- αξία

κυττάρων Counts

1CD3

+15489-29717973-3330.881CD4

+370249-461377264-5240.514CD8

+11553-1804817-1800.271CD4

+CD25

+FOXP3

+10155-16110992-1460.444CD4

+CD25

+FOXP3

-14890-187147105-2310.251Ratios

2CD8

+/CD3

+0.580.34-0.910.430.20-0.700.198CD4

+/CD3

+2.061.33-3.431.731.32-3.670.985CD8

+/CD4

+0.270.20-0.440.130.07-0.370.050CD3

+/CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ 1.720.95-2.681.380.79-2.490.695CD3

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

-1.310.71- 2.061.240.72-1.640.490CD8

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ 0.980.49-1.790.320.25-1.020.027CD8

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

-0.650.43-1.190.460.13-0.770.048CD4

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ 2.912.59-4.313.042.39-3.460.332CD4

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

-2.501.94-3.192.161.80-2.640.351Table 2. Οι συγκρίσεις των επιπέδων των κυττάρων Τ ή αναλογίες.

1Sum των κυττάρων μετρήσεις του συνόλου των 20 πεδίων,

2Ratio του αθροίσματος όλων των 20 πεδίων? IQR, διατεταρτημοριακό εύρος? στατιστικά σημαντικές αλλαγές εμφανίζονται με έντονους χαρακτήρες. CSV Λήψη CSV

Χρησιμοποιώντας τους δείκτες CD25 και Foxp3, CD4

+ Τ κύτταρα θα μπορούσαν να χωριστούν σε τέσσερις ομάδες. Οι δύο μεγάλες ομάδες ήταν CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs (~ 33,2% μεταξύ όλων των ασθενών) και CD4

+ CD25

+ FoxP3

– Τ κύτταρα (~ 43.1 %). Οι δύο άλλες μικρές ομάδες ήταν η CD4

+ CD25

-FOXP3

+ Τ κύτταρα (~ 14,4%) και CD4

+ CD25

-FOXP3

– Τ κύτταρα (~ 9,3 %). Είδαμε καμία διαφορά στα επίπεδα των CD4

+ CD25

+ FoxP3

– Τ κύτταρα μεταξύ των ομάδων έκβασης των ασθενών. Τα διάμεσα επίπεδα ήταν 148 κύτταρα (IQR 90-187) στην καλή ομάδα έκβαση και 147 (IQR 105-231) στην κακή ομάδα έκβαση (Πίνακας 2). Ομοίως, οι μέσες μετρήσεις των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs στους ασθενείς με καλό αποτέλεσμα δεν ήταν διαφορετικό σε σύγκριση με τους ασθενείς με κακή έκβαση. Όλα τα δείγματα όγκων έδειξε CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg διήθηση με ένα συνδυασμένο εύρος 14-350 κύτταρα. Το ποσοστό των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs μεταξύ του συνολικού ενδοεπιθηλιακή CD4

+ διηθητικά κύτταρα ήταν 31 ± 10% στην καλή ομάδα έκβαση σε σύγκριση με το 34 ± 11% στην κακή έκβαση ομάδα των ασθενών (p = 0,319).

Μια αξιοσημείωτη παρατήρηση από αυτές τις συγκρίσεις είναι ότι το

μετράει + Τ κυττάρων CD4 ήταν υψηλότερες από ό, τι το CD3

+ μετράει όταν αναμενόταν ισοδυναμίας. (Σχήματα 2Α). Ένας πιθανός λόγος για την έλλειψη συσχετισμού θα μπορούσε να είναι ότι οι CD4 και CD8 αντισώματα χρώση μίγμα αμφοτέρων λεμφοειδών και μυελοειδών κυττάρων, δεδομένου ότι έχει αναφερθεί προηγουμένως ότι και οι δύο δείκτες μπορούν να εκφράζονται σε διάφορα υποσύνολα λευκοκυττάρων συμπεριλαμβανομένων λεμφοειδών και μυελοειδών. Εναλλακτικά, θα μπορούσε να CD3 ρυθμίζεται προς τα κάτω σε Τ κύτταρα οφείλεται σε χρόνια διέγερση στο μικροπεριβάλλον του όγκου [26,27]. Λαμβάνοντας υπόψη αυτά τα προβλήματα, καθαρίστηκε ενδοδιηθητικά όγκου μονοπύρηνα κύτταρα από τρεις ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, βάφονται αυτών με διάφορες λεμφοειδή και μυελοειδή δείκτες και εκτελείται ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Χρώση αποκάλυψε ότι 26 ± 3% (η = 3, SEM) και 34 ± 4% του CD4

+ και CD8

+ κύτταρα, αντίστοιχα, είναι CD3 αρνητικά (Σχήματα 2Β-C). Η ανάλυση των CD11c

+, BDCA2

+, και CD68

+ κυττάρων προτείνει ότι μυελοειδή DC, πλασματοκυτταροειδή DC και μακροφάγα μαζί αποτελούν λιγότερο από ένα σύνολο 5% καθενός από τα CD4

+ και CD8

+ κυττάρων σε όγκους των ωοθηκών (σχήματα 2D-G).

(ΑΒ) Μπαρ γραφήματα που παρουσιάζουν τη μέση τιμή (± SEM,

n

= 3) επίπεδα CD3-CD4

+ ή CD8

+, αντίστοιχα, ως ποσοστό του συνολικού CD4

+ ή CD8

+ Τ κύτταρα, αντίστοιχα. (C) που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά 4 οικόπεδα διπλή χρώμα dot χρώση είτε CD4-ή CD8 κυττάρων-gated. Οι ειδικότητες αντισωμάτων σημειώνεται με τον άξονα. (Δ) Ορατή είναι η μέση τιμή (± SEM,

n

= 3) επίπεδα CD11c

+, BDCA2

+ και CD68

+ κύτταρα ως σύνολο CD4

+ ή CD8

+ κύτταρα (Χ-άξονας).

Η

αναλογίες των Τ κυττάρων συσχετίζονται με την κλινική έκβαση σε ορώδες καρκίνο των ωοθηκών ανθρώπινο

Βλέποντας δεν συσχετίσεις μεταξύ του απόλυτου αριθμού των CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs και την κλινική έκβαση, εστιάσαμε στις αναλογίες όπως είχε περιγραφεί προηγουμένως [8,28]. Το μεσαίο CD8

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ λόγος Treg βρέθηκε σημαντικά υψηλότερη στους ασθενείς με καλό αποτέλεσμα σε σύγκριση με τους ασθενείς με κακή έκβαση (0,98 έναντι 0,32, p = 0,027 , Πίνακας 2, Σχήμα 3Α). Σε αντίθεση, η μέση CD3

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg και CD4

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg αναλογίες δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων. Ύστερα από περαιτέρω εξέταση, απροσδόκητα διαπιστώσαμε επίσης ότι οι καλές ασθενείς έκβαση είχαν διάμεσο CD8

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

– αναλογία που ήταν σημαντικά υψηλότερη στην καλή ομάδα (0.65) ως σε σύγκριση με την κακή ομάδα (0.46, ρ = 0.048) (Πίνακας 2, Εικόνα 3Β). Όταν η CD8

+ /CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Treg και CD4

+ CD25

+ FoxP3

– αναλογίες θεωρήθηκαν μαζί (δηλαδή όλα τα CD4

+ CD25

+) και όπως φαίνεται στο Σχήμα 3C, οι αναλογίες μεταξύ των δύο ομάδων παρέμεινε σημαντικά διαφορετική. Καθώς η ηλικία βρέθηκε να είναι ελαφρώς διαφορετική μεταξύ των δύο ομάδων, διαπιστώσαμε ότι η συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των κυττάρων κατάσταση και ομάδα παρέμεινε συνεπής μετά την προσαρμογή ως προς την ηλικία σε ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) Διάγραμμα που δείχνει την κατανομή των CD4

+ Τ κυττάρων σε σχέση με το CD25 και χρώση Foxp3 σε όλους τους ασθενείς. (BD) Κερδοφόρα οικόπεδα dot των λόγων των CD8

+ Τ κυττάρων μετράει για Tregs (CD4

+ CD25

+ FoxP3

+) (Β), CD4

+ CD25

+ Foxp3

– Τ κύτταρα (C), ή σε συνδυασμό CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ και CD4

+ CD25

+ FoxP3

– Τ κύτταρα (D) τόσο για το καλό αποτέλεσμα και φτωχές ομάδες αποτέλεσμα.

η

Κατά τη σύγκριση των δεικτών που υπολογίζονται από τις τρεις μεγάλες κηλίδες (CD3, CD4, και CD8), μόνο το μεσαίο CD8

+ /CD4

+ αναλογίες Τ κυττάρου, οι οποίες ήταν 0,27 και 0,13 αντίστοιχα για την καλή και φτωχές ομάδες αποτέλεσμα, ήταν στατιστικά σημαντικά διαφορετικές (ρ = 0,050), το οποίο είναι σύμφωνο με τις σημαντικές αναλογίες του CD8

+ Τ κυττάρων προς είτε το CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs ή το CD4

+ CD25

+ FoxP3

– που περιγράφεται παραπάνω. Κανένα άλλο αναλογίες (π.χ. CD8

+ /CD3

+ Τ κυττάρων και CD4

+ /CD3

αναλογίες + Τ κυττάρων) διέφεραν σημαντικά μεταξύ των καλών και των φτωχών ομάδων έκβασης (Πίνακας 2).

Τέλος, έχοντας δει ότι τόσο FoxP3

+ και FoxP3

– CD4

+ Τ κύτταρα που σχετίζονται με αποτέλεσμα, όταν εξετάζονται ως αναλογία με CD8

+ Τ κύτταρα, έχουμε σκεφτεί ότι αυτά τα κύτταρα ήταν Tregs ικανά να παράγουν το ανοσοποιητικό ρυθμιστική κυτοκίνη, ΤΟΡ-β. Για να ελεγχθεί αυτό, καθαρίστηκε λευκοκύτταρα που διηθούν όγκο (ΤΙΤ) και διεγέρθηκαν στη συνέχεια απευθείας

ex vivo

με ConA, που ακολουθείται από χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, TILs προέρχονται CD4

+ CD25

+ Τ κύτταρα ήταν ένα μίγμα από Foxp3

+ και FoxP3

– Τ κύτταρα. Εν απουσία της διέγερσης, ένα κλάσμα (12 ± 4%, η = 3, ± SEM) των καθαρισμένων κυττάρων Τ διατηρείται έκφραση του Foxp3. Κατά τη διέγερση, το ποσοστό των CD4

+ CD25

+ Τ κυττάρων που εκφράζουν FoxP3 αυξήθηκε σε 42 ± 9% του συνολικού CD4

+ CD25

+ Τ κύτταρα. Εν απουσία της διέγερσης, 5 ± 3% των CD4

+ CD25

+ Τ κύτταρα που παράγονται ΤΟΡ-β και μετά τη διέγερση, αυτό αυξήθηκε σε 34 ± 9% (ρ = 0,04, Σχήμα 4Β).

(Α) Παρουσιάζονται οι δύο τελείες οικόπεδα καθαρού όγκου διηθούν CD4

+ Τ κύτταρα που διεγείρονται με ConA ή μέσα μόνο. Τα κύτταρα περίφραξη σε CD4 και CD25. (Β) διαγράμματα Bar που δείχνει την μέση τιμή (± SEM,

n

= 3 μοναδικά δείγματα ασθενών) ποσοστό FoxP3

+ και TGF-β κύτταρα Τ, μεταξύ του συνόλου των CD4

+ CD25

+ Τ κύτταρα διεγερμένα με ConA είτε ή μέσο μόνο. τιμή Ρ λαμβάνεται με ένα αντιστοιχισμένο τεστ Τ του Student.

Η

Συζήτηση

Η κατανόηση του παθολογικό ρόλο των Tregs που έχουν την ικανότητα να καταστέλλουν ενεργοποιημένα Τ κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου των ωοθηκών είναι σημαντική για την ανάπτυξη νέα ανοσο-θεραπείες που βασίζονται και τον καθορισμό της πρόγνωσης των ασθενών. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε για πρώτη φορά ότι CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Tregs συνδέονται με την έκβαση συγκεκριμένα στο ορώδες καρκίνο των ωοθηκών, αλλά μόνο στο πλαίσιο των CD8

+ Τ κύτταρα . Το γεγονός ότι η επίδραση των Tregs είναι ανιχνεύσιμη μόνο όταν αξιολογήθηκε ως μία αναλογία με κυτταροτοξικά CD8

+ Τ κύτταρα είναι σύμφωνη με το υπόδειγμα που δυνητικά καταστροφικές ογκοειδικό ανοσοαποκρίσεις αντισταθμίζεται στο μικροπεριβάλλον του όγκου από την ισχυρή ανοσοκαταστολή [29] . Αυτό θα σήμαινε ότι οι στρατηγικές που στοχεύουν στην εξάντληση των Tregs και την ταυτόχρονη διέγερση του εμβολίου δραστικά Τ κύτταρα θα είναι αποτελεσματική στην εξάλειψη των καρκίνων των ωοθηκών και βελτίωση της επιβίωσης [30]. Αρκετά φάρμακα που είναι γνωστό ότι είναι χρήσιμα ως παράγοντες όπως κυκλοφωσφαμίδη, αντι-CD25 αντίσωμα, ή denileukin diftitox Treg-εξάντλησης είναι διαθέσιμες για θεραπεία συνδυασμού με νέο εμβόλιο ή θετή προσεγγίσεις κυτταρικής θεραπείας T [31,32]. Εναλλακτικά, Quezada και οι συνεργάτες του δείχνουν ότι το σημείο ελέγχου αντι-CTLA-4 δέσμευση σε συνδυασμό με θεραπεία εμβόλιο θα μπορούσε επίσης να είναι αποτελεσματικό στην τροποποίηση της ισορροπίας χωρίς την εξάλειψη των Tregs, γεγονός που υποδηλώνει μια πιθανή χρήση για την πρόσφατα εγκεκριμένη αντι-ανθρώπινο αντίσωμα CTLA-4 σε καρκίνο των ωοθηκών [ ,,,0],33,34].

μας

ex vivo

πειράματα έδειξαν ότι ένα χαμηλό ποσοστό των μη διεγερμένα CD4

+ CD25

+ Τ κύτταρα διατηρούνται έκφραση Foxp3, το οποίο αργότερα αυξήθηκε κατά δραστηριοποίηση. Αυτή η χαμηλότερη συχνότητα του Foxp3

+ Τ κύτταρα, σε σχέση με τα αποτελέσματα χρώσης ανοσοφθορισμού, μπορεί να αντανακλά προς τα κάτω ρύθμιση του Foxp3, σε συνέπεια με τις παρατηρήσεις ότι η έκφραση του ανθρώπου FoxP3 ρυθμίζεται από ενεργοποίηση των Τ κυττάρων και όχι αναπτυξιακά προγραμματισμένος όπως είναι σε ποντικού Tregs [ ,,,0],35]. Κατά συνέπεια, η έκφραση του Foxp3 σε Τ κύτταρα μετά από ενεργοποίηση έχει οδηγήσει σε κάποια αντιπαράθεση σχετικά με το αν είναι ένα FoxP3 Treg-ειδικό δείκτη στον άνθρωπο. Πράγματι, μερικές μελέτες έχουν δείξει ότι η FoxP3 έκφραση προκαλείται σε ενεργοποιημένα Τ κύτταρα χωρίς ρυθμιστικές δραστηριότητες, οι οποίες θα μπορούσαν να οδηγήσουν κάποιον να σκεφτεί ότι κάποια από τα CD4

+ CD25

+ FoxP3

+ Τ κύτταρα στον καρκίνο των ωοθηκών μπορεί να μην είναι ρυθμιστική. Σε αντίθεση, άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι τα ενεργοποιημένα Τ κύτταρα που ρυθμίζουν FoxP3 πράγματι να μεταφέρουν κατασταλτική δραστηριότητα σε ένα κύτταρο-επαφή ή εξαρτώμενο κυτοκίνης τρόπο (δηλαδή, IL-10 και ΤΟΡ-β) [36,37].