Abstract

Ιστορικό

Πρόσφατες ενδείξεις συνδέει ανώμαλη ενεργοποίηση του Hedgehog (Hh) σηματοδότησης με την παθογένεση πολλών καρκίνων συμπεριλαμβανομένων μυελοβλάστωμα, βασικών κυττάρων, μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, του παγκρέατος, του προστάτη και των ωοθηκών. Η έρευνα αυτή είχε ως σκοπό να καθορίσει εάν η αναστολή αυτής της οδού θα μπορούσε να αναστείλει ορώδες την ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών.

Μεθοδολογία

Αξιοποιήσαμε μια

in vivo

προ-κλινικό μοντέλο του ορώδες καρκίνου των ωοθηκών να χαρακτηρίσει την αντικαρκινική δραστικότητα του Hh αναστολέων μονοπατιού κυκλοπαμίνη και κλινικά εφαρμόσιμη παράγωγο, ΙΡΙ-926. Πρωτογενή ανθρώπινα υδαρής ιστού όγκου ωοθήκης χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία ξενομοσχευμάτων όγκου σε ποντίκια τα οποία στη συνέχεια κατεργάζεται με κυκλοπαμίνη ή ΙΡΙ-926.

Principal Εκτίμηση

Και οι δύο ενώσεις επέδειξαν σημαντική δραστικότητα κατά του όγκου σαν απλούς παράγοντες . Όταν ΙΡΙ-926 χρησιμοποιήθηκε σε συνδυασμό με πακλιταξέλη και καρβοπλατίνη (T /C), δεν συνεργική δράση παρατηρήθηκε, αν και παρατεταμένη θεραπεία με ΙΡΙ-926 μετά την παύση της Τ /Κ συνέχισε να καταστείλει την ανάπτυξη του όγκου. δραστικότητα μονοπατιού Hh αναλύθηκε με RT-PCR για να αξιολογηθούν οι αλλαγές στο

Gli1

επίπεδα μεταγραφής. Μία μόνο δόση του IPI-926 ανέστειλε στρωματικά ποντίκι

Gli1

επίπεδα μεταγραφής σε 24 ώρες με αμετάβλητη ανθρώπινη ενδο-όγκου

Gli1

επίπεδα. Η χρόνια θεραπεία ΙΡΙ-926 για 21 ημέρες, ωστόσο, αναστέλλεται σηματοδότηση Hh τόσο στρωματικά κύτταρα ποντικού και ανθρώπου όγκου. δεδομένα έκφρασης από το μικρο-ανατομή στρώμα στο ορώδες ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών επιβεβαίωσε την παρουσία του

Gli1

μεταγραφή και μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ αυξημένα

Gli1

επίπεδα μεταγραφής και επιδείνωσε την επιβίωση.

συμπεράσματα /Σημασία

θεραπεία IPI-926 αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου ορώδες υποδηλώνει το μονοπάτι σηματοδότησης Hh συμβάλλει στην παθογένεση του καρκίνου των ωοθηκών και μπορεί να κρατήσει την υπόσχεση ως ένα νέο θεραπευτικό στόχο, ιδιαίτερα στην ρύθμιση συντήρησης.

Παράθεση: McCann CK, Growdon WB, Kulkarni-DATAR Κ, Curley MD, Friel AM, Proctor JL, et al. (2011) Αναστολή της Hedgehog Σηματοδοσίας Ανταγωνίζεται υδαρής ωοθηκών ανάπτυξη του καρκίνου σε ένα Δημοτικό μοντέλο ξενομοσχεύματος. PLoS ONE 6 (11): e28077. doi: 10.1371 /journal.pone.0028077

Επιμέλεια: Sandra Orsulic, Cedars-Sinai Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 24, Ιουνίου, 2011? Αποδεκτές: 31 του Οκτωβρίου, 2011? Δημοσιεύθηκε: 29 Νοεμβρίου 2011

Copyright: © 2011 McCann et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα χρηματοδοτήθηκε από επιχορηγήσεις από τον καρκίνο των ωοθηκών Ταμείο Έρευνας (BRR), Advanced Foundation Ιατρικής Έρευνας (BRR), και τις Vincent Memorial ταμεία Ερευνών (BRR). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Jennifer L. Proctor, Hana Σέιχ, Ιγκόρ Deyneko, Jeanne A. Ferguson, και John R. MacDougall είναι υπάλληλοι της Infinity Pharmaceuticals. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Στις Ηνωμένες Πολιτείες, ο καρκίνος των ωοθηκών εκτιμάται ότι πλήττει περίπου 22.000 γυναίκες και να προκαλέσει σχεδόν 14.000 θανάτους ετησίως. Η διά βίου κίνδυνος εμφάνισης καρκίνου των ωοθηκών είναι 1 στις 70 και είναι η πέμπτη πιο θανατηφόρος καρκίνος στις γυναίκες [1]. Οι περισσότεροι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών παρόν με νόσο τελικού σταδίου που αντιμετωπίζεται με χειρουργική debulking και χημειοθεραπεία βασισμένη στο λευκόχρυσο. Παρά το γεγονός ότι το 70-80% των γυναικών επιτευχθεί μια πλήρης κλινική ανταπόκριση, η πλειονότητα αυτών των ασθενών θα αναπτύξουν υποτροπιάζουσα ασθένεια που είναι συχνά στη χημειοθεραπεία. Μυθιστόρημα θεραπεία προσεγγίσεις με τη χρήση συμβατικών κυτταροτοξική θεραπεία σε συνδυασμό με μοριακά στοχευμένες θεραπείες στρέφεται κατά συγκεκριμένων οδών σηματοδότησης που απαιτούνται για την ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου ενδεχομένως κρατήσει την υπόσχεση ως στρατηγικές για τη διαρκή αντιμετώπιση της πρωτοβάθμιας και υποτροπιάζοντα καρκίνο των ωοθηκών [2].

Ο σκαντζόχοιρος (ΗΗ) μονοπατιού μεταγωγής σήματος περιλαμβάνει μία οικογένεια εντόνως διατηρημένη πρωτεΐνες που δρουν κυρίως κατά την διάρκεια της εμβρυογένεσης να ρυθμίσει μοίρα των βλαστικών κυττάρων και οργανογένεση, και να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό, την αναγέννηση και τη διαφοροποίηση των σωματικών ιστών στον ενήλικα [3]. Patched 1 (Ptch1), ένας υποδοχέας μεμβράνης, αναστέλλει κανονικά την πρωτεΐνη της μεμβράνης λειαίνονται (ΠΕΑ) από την ενεργοποίηση Gli1. Η σύνδεση του συνδέτη Hh (Sonic, Indian ή Desert) προς Ptch1 καταργεί κατασταλτικά αποτελέσματά του στην SMO επιτρέποντας την μετατόπιση του Gli1 στον πυρήνα όπου επάγει την έκφραση των γονιδίων στόχων [4], [5]. Η ανώμαλη ενεργοποίηση του μονοπατιού Hh στην ενήλικη ζωή έχει συσχετισθεί με την ανάπτυξη του κακοήθους μετασχηματισμού σε μία ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων [4], [6], [7], [8], [9], [10], [11] , [12]. Επιπλέον, τα κύτταρα του όγκου κίνηση σε μερικές καρκίνους έχουν δειχθεί ότι εξαρτώνται από παρατεταμένη Hh επαγόμενη σηματοδότηση και την επακόλουθη ενεργοποίηση των Gli1 προκύπτουν από συνδέτη υπερέκφραση ή μεταλλακτική ενεργοποίηση του μονοπατιού Hh [6], [13]. θεραπευτικά σχήματα μαζί με ανταγωνιστές Hh μονοπάτι σε συνδυασμό με συμβατικά μοριακό και κυτταροτοξικά θεραπείες έχουν αποδειχθεί

in vitro

και

in vivo δραστικότητα έναντι

πολλαπλασιασμό σε μυελοβλάστωμα, βασικών κυττάρων, του μαστού, μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, του προστάτη και παγκρεατικός καρκίνος μοντέλα [10], [11], [12], [14], [15], [16], [17]. Αυτοί οι ανταγωνιστές είναι σήμερα σε φάσης Ι και κλινικές δοκιμές Φάσης II.

Η ενεργοποίηση της οδού Hh έχει τεκμηριωθεί σε καρκίνο των ωοθηκών ως δυνητικός μηχανισμός που εμπλέκεται σε νεοπλασία. Μεταλλαγμένου γονιδίου και της πρωτεΐνης έκφρασης των μελών μονοπατιού Hh Gli1, ΠΕΑ, Ptch1, Desert hedgehog (Dhh) και Sonic hedgehog (Shh) στον καρκίνο των ωοθηκών έχει αναφερθεί, αν και ο ακριβής επιπολασμός και το σχέδιο μένει να διευκρινιστεί [18], [19 ], [20], [21]. Ενώ πολλές μελέτες προτείνουν ότι το 50-60% των διηθητικών όγκων των ωοθηκών πρόδηλη ενεργοποίηση μονοπατιού Hh, άλλοι ερευνητές έχουν υποστηρίξει ότι ουσιαστική ενεργοποίηση μέσω αλλαγμένη έκφραση πολλαπλών πρωτεϊνών οδού συμβαίνει σε λιγότερο από το 20% των κλινικών δειγμάτων που ελέγχθηκαν [19], [20]. Ενώ μια άμεση συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του Dhh και κλινικό στάδιο, ιστολογικές υποτύπου ή επιβίωση έχει αναφερθεί, δεν είναι επί του παρόντος ασαφής εάν η έκφραση του συνδέτη Dhh σχετίζεται με μειωμένη επιβίωση [20]. Άλλες αναλύσεις των δειγμάτων καρκινώματος των ωοθηκών έχουν δείξει ότι η αυξημένη έκφραση της πρωτεΐνης Gli1 είναι ένας ανεξάρτητος παράγοντας που σχετίζεται με μειωμένη επιβίωση κατά τη ρύθμιση για την ηλικία, το στάδιο, το βαθμό και ιστολογικός τύπος [18].

In vitro

και περιορίζεται

in vivo

μελέτες παρέχουν ενδείξεις ότι μονοπάτι σηματοδότησης Hh παίζει σημαντικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. Shh ανιχνεύτηκε σε έναν αριθμό κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών και προσθήκη ενός μονοκλωνικού αντισώματος εναντίον Shh κατέληξε σε μία εξαρτώμενη από τη δόση μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων [21]. Ομοίως, η θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών καλλιεργημένων κυττάρων με τον αναστολέα κυκλοπαμίνη Smo έχει βρεθεί ότι επάγει τη σύλληψη του κυτταρικού κύκλου σε G1 και να προωθήσει την απόπτωση [20]. Επιπλέον, έκτοπη έκφραση της Gli1 σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών οδήγησε σε αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την κινητικότητα και την επεμβατική ιδιότητες [18]. Ωοθηκών καρκίνωμα κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται ξενομοσχεύματα είναι επίσης ευαίσθητα σε αναστολή Hh οδό όπως η ανάπτυξή τους είναι σημαντικά μειωμένη μετά τη θεραπεία με κυκλοπαμίνη [21]. Η πλειοψηφία των διαθέσιμα στοιχεία δείχνουν ότι ένας ενεργοποιημένος Hh καταρράκτη σηματοδότησης μπορεί να είναι ένα δυναμικό πρόγραμμα οδήγησης της νεοπλασίας σε ένα σημαντικό ποσοστό των επιθηλιακών καρκίνων των ωοθηκών, καθιστώντας την έναν ελκυστικό στόχο για θεραπευτικές αναστολή.

Έχουμε διερευνήσει αυτή τη δυνατότητα με τη χρήση του Hh αναστολέα οδού IPI-926, ένα παράγωγο της κυκλοπαμίνης με αυξημένη από του στόματος βιοδιαθεσιμότητα και μία μεγαλύτερη ημιζωή [22]. IPI-926 ανταγωνίζεται την οδό Hh μέσω της αναστολής ΠΕΑ. IPI-926 προκαλεί μια δοσοεξαρτώμενη μείωση της

Gli1

έκφρασης του mRNA και διαρκή υποχώρηση του όγκου σε ένα μοντέλο ποντικού μυελοβλάστωμα [22]. Αν και ΙΡΙ-926 δεν είχε καμία επίδραση ως μονοθεραπεία σε ένα μοντέλο ποντικού μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα πριν από τη χημειοθεραπεία, τα ζώα που έλαβαν θεραπεία με ΙΡΙ-926 μετά από χημειοθεραπεία εμφάνισαν μια δραματική αναστολή σε όγκο εκ νέου ανάπτυξη [22]. Δεδομένων αυτών των προκλινικών δεδομένων, επιδιώξαμε να καθοριστεί εάν η αναστολή της οδού της Hh με κυκλοπαμίνη ή ΙΡΙ-926 είχε μια επίδραση στην ανάπτυξη των ανθρώπινων θηλώδους ορώδες ξενομοσχεύματα καρκίνου των ωοθηκών που προέρχεται από πρωτογενή ανθρώπινα ιστό που λαμβάνεται κατά το χρόνο της αρχικής χειρουργικής επέμβασης. Στη συνέχεια αξιολογείται η δραστικότητα κατά του όγκου του ΙΡΙ-926 σε μοντέλο ξενομοσχεύματος μας σε συνδυασμό με πακλιταξέλη και καρβοπλατίνη και ως ένα ενιαίο θεραπεία συντήρησης παράγοντα. Τέλος, το αποτέλεσμα μιας απλής δόσης και παρατεταμένη θεραπεία IPI-926 στην δραστικότητα μονοπατιού Hh προσδιορίστηκε σε αμφότερα τα κυτταρικούς πληθυσμούς στρωματικών και όγκου. Τα αποτελέσματα μας υποστηρίζουν την υπόθεση ότι η οδός σηματοδότησης Hh συμβάλλει στην παθογένεση ορώδους καρκίνου των ωοθηκών και η αναστολή αυτής της οδού μπορούν να έχουν θεραπευτικό όφελος.

Υλικά και Μέθοδοι

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση

Μια μικροσυστοιχία ωοθηκών ιστού (T8235725, Biochain, Hayward, CA) που περιλαμβάνει 64 καλοήθων και κακοήθων ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών χρησιμοποιήθηκε για ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης πρωτεΐνης Shh. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη σε ρυθμιστικό ανάκτηση κιτρικού στόχο χρησιμοποιώντας ένα χύτρα ταχύτητας για 40 λεπτά και οι τομές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% και επωάστηκαν σε Ιστορικό σκοπευτής (Biocare, Concord, CA) για να εμποδίσει οποιαδήποτε μη ειδική σύνδεση. Η επώαση των τμημάτων με το αντι-Shh μονοκλωνικό αντίσωμα ab53281 (Abcam, Cambridge, ΜΑ) αραιωμένο 1:2000 σε DaVinci Πράσινη αραιωτικό (Biocare Medical, Concord, CA) πραγματοποιήθηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 90 λεπτά. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με κουνέλι στο πολυμερές σύστημα τρωκτικών (Biocare Medical, Concord, CA) για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πλακίδια στη συνέχεια κατεργάζεται με 3, 3′-διαμινοβενζιδίνη χρωμογόνο (DAB) για 5 λεπτά για την οπτικοποίηση. Οι τομές στη συνέχεια με αιματοξυλίνη, αφυδατώνονται και τοποθετημένα. Σύνολο IgG κουνελιού αντικαταστήσουν τα πρωτογενή αντισώματα χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος.

συλλογή Tumor και διάδοση

in vivo

Η

Η περίσσεια δείγματα ανθρώπινου όγκου ή ασκίτη λήφθηκαν μέσω ενός IRB εγκεκριμένο κεντρικής τραπεζικής υποδομής στο Γενικό Νοσοκομείο της Μασαχουσέτης (MGH). Γραπτή συγκατάθεση λαμβάνεται από όλους τους συμμετέχοντες. Δεν υπήρχαν δείγματα που προέρχονται από ανηλίκους σε αυτή τη μελέτη. Το πρωτόκολλο αποθετήριο ιστού MGH Γυναικολογική (07-049) εξετάστηκε και εγκρίθηκε από την Dana-Farber Κέντρο Harvard Cancer (DFHCC). Επιπλέον, χρησιμοποιήσαμε αρχειοθετημένα δείγματα που προέρχονται από MGH παθολογίας στο πλαίσιο ενός θεσμικού εγκεκριμένο πρωτόκολλο (2008P001695).

αναστολές Ενιαία κυττάρων είτε ενζυμικά επεξεργασμένου ιστού συμπαγούς όγκου ή ασκίτη στη συνέχεια εξαντληθεί από τα συστατικά αιματολογικών όπως περιγράφεται [23]. Ένας καθορισμένος αριθμός κυττάρων αιωρήθηκαν σε PBS:Matrigel® (1:01) και εγχύεται υποδορίως (s.c.) σε ηλικίας 6-8 εβδομάδων θηλυκά ποντίκια NOD /SCID (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ΜΕ). Τα ζώα παρακολουθούνται τακτικά για να καθορίσει τον σχηματισμό όγκων και ευθανασία όταν έγιναν ετοιμοθάνατα ή είχαν υπερβολικό φορτίο όγκου. Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από το Γενικό Νοσοκομείο της Μασαχουσέτης Υπο-επιτροπή για την έρευνα και την φροντίδα των ζώων (αριθμός πρωτοκόλλου 2005N000273). Κάθε προσπάθεια έγινε για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Για να πολλαπλασιάζονται συνεχώς σε ποντίκια, οι όγκοι ξενομοσχεύματος αποκόπηκαν και ενζυματικά σε επεξεργασία σε ένα εναιώρημα μεμονωμένων κυττάρων. Το αιώρημα απεμπλουτισμένου του ποντικού H-2K

d + κύτταρα χρησιμοποιώντας MACS σφαιρίδια (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Γερμανία) και τα υπόλοιπα κύτταρα όγκου προερχόμενα εκ νέου ενέθηκαν υποδορίως σε νέο παραλήπτη NOD ποντίκια /SCID. Όλες οι πρωτογενείς θηλώδους ορώδες ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη είχαν υποβληθεί σε 4-5 περάσματα

in vivo

και η ορώδης ιστολογία του κάθε διατηρήθηκε πάνω από την διαδικασία διαδοχικής μεταμόσχευσης. Τα ζώα στεγάστηκαν και συντηρούνται σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος.

Η θεραπεία των ποντικών με αναστολείς του μονοπατιού Hh

κυκλοπαμίνη.

Ποντίκια που φέρουν συμφωνημένα μεγέθους όγκους (300-600 mm

3) από το ορώδες δείγμα ανθρώπινου καρκίνου των ωοθηκών SOC11 τυχαιοποιήθηκαν σε δύο ομάδες των έξι ποντικών. Κάθε ομάδα έλαβαν είτε 25 mg /kg κυκλοπαμίνη ή φορέας (30% (w /v) 2-υδροξυπροπυλ-β-κυκλοδεξτρίνη (HPBCD) σε ρυθμιστικό φωσφορικού κιτρικού νατρίου 0,1 Μ, ρΗ 3,0) με ημερήσια από του στόματος καθετηριασμό. Η διάρκεια της θεραπείας διευρυμένοι 13 ημέρες. Οι μετρήσεις του όγκου και τα βάρη των ζώων αξιολογήθηκαν κάθε 4 ημέρες. Οι όγκοι μετρήθηκαν εβδομαδιαία με παχύμετρο και ο όγκος του όγκου (mm

3) προσδιορίσθηκε με τη χρήση του τύπου [μήκος (mm) χ πλάτος (mm) χ πλάτος (mm)] /2. βάρη Mouse αξιολογήθηκαν κάθε 4-7 ημέρες για την παρακολούθηση πιθανή τοξικότητα που σχετίζεται με κάθε θεραπεία. Στο τέλος της περιόδου θεραπείας τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία και οι όγκοι συλλέχθηκαν για περαιτέρω ανάλυση

ΙΡΙ-926:.

Είκοσι τέσσερις ποντικούς που φέρουν SOC12, SOC13 ή SOC14 όγκοι ξενομοσχεύματος τυχαιοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες με συμφωνημένα όγκους όγκου (300-600 mm

3). Η πακλιταξέλη /καρβοπλατίνη (T /C) μόνη ομάδα έλαβαν εβδομαδιαίως ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) ένεση 15 mg /kg paclitaxel και 50 mg /kg καρβοπλατίνη και το IPI-926 όχημα 5% (w /v) (HPBCD) που χορηγείται κάθε δεύτερη ημέρα από του στόματος καθετηριασμό. Η μόνη ομάδα ΙΡΙ-926 έλαβε 40 mg /kg ΙΡΙ-926 κάθε δεύτερη ημέρα από του στόματος καθετηριασμό και Cremophor:ethanol (1:01, πακλιταξέλη όχημα) και αλατούχο διάλυμα (καρβοπλατίνη οχήματος) από εβδομαδιαίες ε.π. ένεση. Οι ποντικοί στην Τ /Κ + ΙΡΙ-926 κοόρτης έλαβαν εβδομαδιαίως paclitaxel (15 mg /kg, ε.π.) και καρβοπλατίνη (50 mg /kg, ε.π.) και 40 mg /kg ΙΡΙ-926 (κάθε δεύτερη μέρα, στοματική σίτιση). Η ομάδα ελέγχου έλαβε την πακλιταξέλη, καρβοπλατίνη και IPI-926 οχημάτων στο δοσολογικό σχήμα κατάλληλο για το καθένα. Οι όγκοι νεοπλασίας και τα βάρη ποντικού εκτιμήθηκαν κάθε 4-7 ημέρες, όπως περιγράφεται παραπάνω.

Η τελευταία δόση στην κοόρτη T /C χορηγήθηκε την ημέρα 14. Μετά από 21 ημέρες, τα ποντίκια στον έλεγχο και IPI-926 μόνος ομάδες υποβλήθηκαν σε ευθανασία και οι όγκοι τους συλλέχθηκαν. Τμήματα του κάθε όγκου καταψύχθηκαν για ανάλυση RNA και εγκλείστηκαν σε παραφίνη για ιστολογική ανάλυση.

Μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας T /C, ποντίκια στην T /C μόνο και Τ /Κ + ΙΡΙ-926 ομάδες συνεχίστηκε να λάβουν είτε IPI-926 οχημάτων (T /C μόνη ομάδα) ή 40 mg kg IPI-926 (/C + ομάδα IPI-926 T) /κάθε δεύτερη ημέρα από του στόματος καθετηριασμό. Αυτή η θεραπεία συντήρησης πραγματοποιήθηκε για 18-30 ημέρες. Στο τέλος της περιόδου τήρησης, τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία και οι όγκοι συλλέχθηκαν και επεξεργάστηκαν για RNA και αναλύσεις ιστολογική όπως περιγράφεται παραπάνω.

Οξεία IPI-926 θεραπεία

Ποντίκια που φέρουν ξενομοσχεύματα (300-600 m

3) που προέρχεται από SOC12, SOC13 ή SOC14 υποβλήθηκαν σε θεραπεία είτε με 40 mg kg IPI-926 ή IPI-926 οχημάτων /από του στόματος καθετηριασμό. Μετά από 24 ώρες τα ζώα θανατώθηκαν με ευθανασία. οι όγκοι τους συλλέχθηκαν και τα τμήματα του κάθε καταψύχθηκαν για ανάλυση RNA και ενσωματωμένα σε παραφίνη.

RT-PCR ανάλυση

RNA απομονώθηκε από κατεψυγμένα ιστό όγκου χρησιμοποιώντας το GenElute ™ κιτ εκχύλισης RNA θηλαστικών (Sigma Aldrich, St. Louis, ΜΟ) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Δύο μικρογραμμάρια των απομονωμένων RNA χρησιμοποιήθηκαν για τη σύνθεση cDNA με χρήση του κιτ Invitrogen Superscript ™ Vilo (Invitrogen, Carlsbad, CA). Εκκινητές και ανιχνευτές για ποντίκι

Gli1

αγοράστηκαν από την Applied Biosystems Inc. (Carlsbad, CA, αριθμός καταλόγου Mm00494645_m1). Εκκινητές και ανιχνευτές για την ανθρώπινη

Gli1

σχεδιάστηκαν in-house: προς τα εμπρός: 5′-CTTTCATCAACTCGCGATGC-3 ‘? αντίστροφη: 5’-GCTCATGGTGCCAATGGAG-3 ‘? ανιχνευτής: 5’FAM-CATCTCCAGGAGGCTCCTACGGTCA TTC-TAMRA-3 ‘. Οι εκκινητές σχεδιάστηκαν ώστε να καλύπτουν κόμβους εξονίων-εξόνιο να αποτρέψουν την ανίχνευση του γονιδιωματικού DNA. Τα επίπεδα έκφρασης του ανθρώπου και ποντικού

Gli1

γονιδίων ομαλοποιήθηκαν σε GAPDH και ποσοτικά όπως περιγράφεται από Applied Biosystems Inc.

Εκτός από

Gli1

mRNA, αναλύσαμε

ΕΛΕΡΠΕ

,

SMO

,

και Ptch1

επίπεδα mRNA στα 4 δείγματα ασθενούς που χρησιμοποιείται για να δημιουργήσει μοσχεύματα όγκου για τη δοκιμή της αναστολής της οδού Hhog. Εκκινητές και ανιχνευτές για την ανθρώπινη

ΕΛΕΡΠΕ

(αριθμός καταλόγου Hs00179843_m1),

ΠΕΑ

(αριθμός καταλόγου Hs00170665_m1), και

Ptch1

(αριθμός καταλόγου Hs00970980_m1) αγοράστηκαν από την Applied Biosystems Inc . (Carlsbad, CA).

Τα επίπεδα έκφρασης του ανθρώπινου

ΕΛΕΡΠΕ

,

ΠΕΑ

,

και Ptch1

γονιδίων ομαλοποιήθηκαν σε GAPDH και ποσοτικά όπως περιγράφεται από την Applied Biosystems Inc.

Ανάλυση του

Gli1

έκφραση σε ανθρώπινο στρώματος του όγκου των ωοθηκών

υψηλής ποιότητας τελικού σταδίου ορώδες πρωτογενή δείγματα όγκων των ωοθηκών ελήφθησαν πριν από τη χημειοθεραπεία από 19 ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών που νοσηλεύονται στο νοσοκομείο Brigham και Γυναικών μεταξύ των ετών 1990 και 2000. η κατάταξη προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη Διεθνή Ομοσπονδία των προτύπων Γυναικολογίας και Μαιευτικής. Όλα τα δείγματα και οι αντίστοιχες κλινικές πληροφορίες τους ελήφθησαν υπό IRB-εγκεκριμένα πρωτόκολλα. Μικροανατομίας και RNA απομόνωση διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Εν συντομία, ινοβλάστες από 7 μm κατεψυγμένες τομές μικροτομή χρησιμοποιώντας ένα φωτόμετρο MD microdissecting λέιζερ μικροσκόπιο (Leica, Wetzlar, Germany) και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RLT (Qiagen, Valencia, CA). RNA εκχυλίστηκε και καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy Micro (Qiagen, Valencia, CA). Σύνολο δείγματα RNA ποσοτικοποιήθηκαν και ελέγχονται για την ποιότητα με ένα σύστημα Bioanalyzer 2100 (Agilent, ΡβΙο Alto, CA) και στη συνέχεια ενισχύθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qRT-PCR) διεξήχθη σε 50 ng διπλής ενισχυμένου προϊόντος από τα 19 δείγματα χρησιμοποιώντας αστάρι ορίζει ειδικά για

Gli1

(εμπρός ACCCCCTGGACTCTCTTGAT, αντίστροφη GACACTCATGTTGCCCACAG). Μια iCycler iQ σύστημα πραγματικού χρόνου PCR ανίχνευσης (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) χρησιμοποιήθηκε σε συνδυασμό με το SuperScript III Platinum SYBR Green One-Step qRT-PCR kit (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Στατιστική Ανάλυση

μη-παραμετρικές Wilcoxan δοκιμές κατάταξης ποσό για αταίριαστα δείγματα χρησιμοποιήθηκαν για να συγκρίνουν τα μεγέθη όγκου σε κυκλοπαμίνη και πειράματα θεραπείας IPI-926. t-tests του Student χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της στατιστικής σημαντικότητας των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται κατά την οξεία και παρατεταμένη πείραμα θεραπεία ΙΡΙ-926. Σημαντικότητας ορίστηκε στο p ≤ 0,05. STATA (College Station, TX) χρησιμοποιήθηκε λογισμικό V10. Η ανάλυση επιβίωσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας GraphPad Prism έκδοση 5.00 για Windows (GraphPad Software, San Diego California USA).

Αποτελέσματα

Shh και Gli1 έκφρασης σε ανθρώπινους όγκους των ωοθηκών

Πρόσφατα μελέτες έχουν αναδείξει το ρόλο του μονοπατιού σηματοδότησης Hh στην ανάπτυξη και πρόοδο των συμπαγών όγκων [25]. Εκτιμήσαμε την σχετική έκφραση των μελών μονοπατιού Hh Shh και Gli1 σε ένα υποσύνολο των όγκων των ωοθηκών. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, immuohistochemical ανάλυση της έκφρασης Shh σε μικροσυστοιχία ιστού που περιλαμβάνει καλοήθεις και κακοήθεις όγκους προσδιορίστηκε ότι το 47% των κακοήθων επιθηλιακών αξιολογήθηκαν όγκους των ωοθηκών είχαν ανιχνεύσιμα επίπεδα έκφρασης Shh. Σε σύγκριση, έκφραση Shh ανιχνεύτηκε μόνο σε 1 από 5 μη επιθηλιακών όγκων των ωοθηκών. Όπως αποδεικνύεται από τα παραδείγματα που φαίνονται στο Σχήμα 1Α, τόσο στο επίπεδο της διανομής και της έκφρασης Shh διέφεραν σημαντικά μεταξύ των αναλύονται όγκους. Στη συνέχεια εξετάστηκε η έκφραση του

Gli1

mRNA στα επιμέρους πρωτογενείς θηλώδες ορώδες ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών SoC1-SOC10 (βλέπε Πίνακα S1 για λεπτομέρειες ασθενή) με RT-PCR. Παρατηρήσαμε ένα ευρύ φάσμα των

Gli1

έκφραση mRNA σε όλη την αναλύθηκαν όγκοι (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, αναλύσαμε

ΕΛΕΡΠΕ

,

ΠΕΑ

,

Ptch1

,

και Gli1

επίπεδα mRNA σε επιμέρους δείγματα 4 ασθενούς που χρησιμοποιείται για την παραγωγή του όγκου ξενομοσχεύματα για την ανάλυση της επίδρασης του Hh αναστολής οδού επί της ανάπτυξης των ωοθηκών των όγκων

in vivo

(Σχήμα 2). Σε κάθε μία από τις όγκων,

Gli1

και

ΠΕΑ

ήταν πιο άφθονα εκφράζονται σε σχέση με

Ptch1

. Υπήρξε μικρή για να υπάρχει

ΕΛΕΡΠΕ

mRNA εκφράζεται σε αυτά τα δείγματα. Στο σύνολό τους, αυτά έκφραση αναλύσεις δείχνουν ότι το μονοπάτι σηματοδότησης Hh ενεργοποιείται σε ένα υποσύνολο ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών όπως αναφέρθηκε προηγουμένως.

A. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης Shh εκτελέστηκε σε μια μικροσυστοιχία ιστό που φέρει 64 μεμονωμένες πρωτογενείς όγκους των ωοθηκών να εκτιμήσει τόσο τη συχνότητα και το επίπεδο της έκφρασης Shh στον ανθρώπινο καρκίνο των ωοθηκών. Η χρώση Shh σε μια κακώς διαφοροποιημένα ορώδες κυσταδενοκαρκίνωμα (άνω αριστερό πλαίσιο), ένα πενιχρά διαφοροποιημένο βλεννώδες κυσταδενοκαρκίνωμα (άνω δεξιό πλαίσιο), ένα καλά διαφοροποιημένο κυσταδενοκαρκίνωμα (κάτω αριστερό πλαίσιο), και μια κακώς διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (κάτω δεξιά πάνελ) παρουσιάζεται. Ο πίνακας συνοψίζει τη συχνότητα της χρώσης Shh στις καλοήθεις όγκους και μη-επιθηλιακών και επιθηλιακές κακοήθειες που υπάρχουν στο μικροσυστοιχία όγκου ωοθηκών. Β πραγματικό χρόνο Q-PCR διεξήχθη για ανάλυση του

Gli1

επίπεδα mRNA σε 10 πρωτογενή ανθρώπινα θηλώδους ορώδεις όγκους καρκίνου των ωοθηκών. Εκκινητές ειδικούς για την ανθρώπινη

Gli1

και

GAPDH

χρησιμοποιήθηκαν. Για κάθε δείγμα, το επίπεδο των

Gli1

mRNA σε σχέση με το επίπεδο του

GAPDH

mRNA φαίνεται.

Η

Η έκφραση του

Gli1

,

Ptch1

,

ΕΛΕΡΠΕ

και

ΠΕΑ

αναλύθηκε με RT-qPCR σε 4 πρωτογενείς ορώδες ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών (SOC11-SOC14) ιδρύθηκε ως ξενομοσχεύματα σε ποντίκια NOD /SCID . Εκκινητές ειδικούς για κάθε ανθρώπινο γονίδιο και ανθρώπινο

GADPH

χρησιμοποιήθηκαν. Για κάθε όγκου, τα επίπεδα του κάθε γονιδίου σε σχέση προς

GADPH

mRNA δείχνονται.

Η

Η αναστολή της σηματοδότησης Hh δεσμεύει την ανάπτυξη των ανθρώπινων ξενομοσχευμάτων ορώδες ωοθηκικό όγκο

για να εκτιμηθεί η λειτουργική σημασία του μονοπατιού Hh στην εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών, υποβάλλαμε σε αγωγή ποντικούς που φιλοξενούν τα ανθρώπινα ορώδες ξενομοσχεύματα ωοθηκών όγκου που παράγεται από την ευαίσθητη πλατίνα SOC11 όγκου είτε με τη κυκλοπαμίνη αναστολέα οδού Hh ή όχημα και αξιολογείται τακτικά το αποτέλεσμα της κάθε θεραπείας για όγκος του όγκου. Στα ποντίκια που έλαβαν κυκλοπαμίνη, ανάπτυξη του όγκου εμποδίζεται κατά τη διάρκεια της περιόδου θεραπείας δεκατριών ημερών με αποτέλεσμα μια σημαντικά (ρ & lt? 0.004) μειωμένο όγκο όγκου την ημέρα 13 σε σχέση με αυτή που παρατηρήθηκε στα ζώα που έλαβαν φορέα (Σχήμα 3). Minimal τοξικότητα παρατηρήθηκε σε ζώα που έλαβαν αγωγή με κυκλοπαμίνη χωρίς να παρατηρηθεί στατιστικώς διαφορετικές αλλαγές σε βάρος ποντικού (Σχήμα S1).

Τα ποντίκια που φέρουν ανθρώπινα θηλώδες ορώδες ξενομοσχεύματα όγκου των ωοθηκών από το δείγμα SOC11 τυχαιοποιήθηκαν σε 2 ομάδες με συμφωνημένα όγκοι του όγκου και κατεργάζεται είτε με φορέα είτε με κυκλοπαμίνη. Οι όγκοι των όγκων αξιολογείται τακτικά. Μεταβολή του όγκου του όγκου εμφανίζεται σε σχέση με τον όγκο του όγκου κατά την έναρξη του πειράματος. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα του μέσου (S.E.M). Η σημασία προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα τεστ rank sum Wilcoxon.

Η

Η ανάλυσή μας της κυκλοπαμίνης επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος προτείνει ότι η αναστολή της σηματοδότησης Hh μπορεί να είναι μια αποτελεσματική προσέγγιση για τον έλεγχο της προόδου των όγκων των ωοθηκών. Είμαστε δίπλα διεξάγονται παρόμοια πειράματα χρησιμοποιώντας το πιο χημικά ισχυρός και κλινικά εφαρμόσιμη αναστολέας της οδού Hh IPI-926 προς το παρόν στη φάση Ι /ΙΙ των κλινικών δοκιμών σε συμπαγείς όγκους μη-ωοθηκών. IPI-926 προέρχεται από κυκλοπαμίνη και έχει βελτιωμένες φαρμακευτικές ιδιότητες συμπεριλαμβανομένης υψηλότερης ισχύος, μια μεγαλύτερη ημίσεια ζωή και αυξημένη βιοδιαθεσιμότητα. Ήμασταν ιδιαίτερα ενδιαφέρονται για την εξέταση της πιθανής χρησιμότητας του IPI-926 σε συνδυασμό με το πρότυπο πρώτης γραμμής χημειοθεραπεία. Πραγματοποιήσαμε τρία ξεχωριστά πειράματα χρησιμοποιώντας ανεξάρτητο πρωτογενή ανθρώπινα ορώδεις όγκους των ωοθηκών ξενομοσχεύματος (SOC12, SOC13, και SOC14) για να αναλυθεί η δραστικότητα κατά του όγκου του ΙΡΙ-926 μόνο του ή σε συνδυασμό με πακλιταξέλη και καρβοπλατίνη (T /C). Τα ξενομοσχεύματα όγκου προήλθαν από 2 ασθενείς με ανθεκτική νόσο πλατίνα (SOC12, SOC13) και 1 ασθενής με ευαίσθητο πλατίνα νόσο (SOC14) και τα αποτελέσματα αυτών των αναλύσεων φαίνονται στο Σχήμα 4. Ποντικοί που φέρουν πρωτογενή ανθρώπινα ορώδες ξενομοσχεύματα όγκου ωοθηκών τυχαιοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες θεραπείας που έλαβαν είτε τον έλεγχο του οχήματος, IPI-926 μόνο, T /C μόνο του ή IPI-926 και Τ /Κ. Κατά την αρχική περίοδο θεραπείας (ημέρα 0-21), ο όγκος του όγκου σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με το έκδοχο ελέγχου αυξήθηκε δραματικά (Σχήματα 4Α, 4Β, 4C). Θεραπεία της SOC12, SOC13 και SOC14 ξενομοσχευμάτων με Τ /Ο μόνος είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική μείωση στον όγκο του όγκου (ρ & lt? 0,05? Ρ & lt? 0,007? Ρ & lt? 0.001 αντίστοιχα) σε σχέση με την αγωγή ελέγχου. Όπως κυκλοπαμίνη, ΙΡΙ-926 ως μονοθεραπεία είχε μια στατιστικά σημαντική ανασταλτική επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου σε σχέση με τον έλεγχο του οχήματος τόσο για SOC13 (Σχήμα 4Β, ρ & lt? 0.007) και SOC14 (Σχήμα 4C, ρ & lt? 0,01). Ο συνδυασμός του ΙΡΙ-926 και T /C δεν έδειξαν μεγαλύτερη δραστικότητα κατά του όγκου από T /C μόνη της για όλες τις δοκιμαζόμενες όγκους. Σε αυτές τις αναλύσεις, παρατηρήσαμε καμία σημαντική απώλεια βάρους σε ζώα που υπέστησαν αγωγή με ΙΡΙ-926 ως μονοθεραπεία σε σύγκριση με τα ζώα που έλαβαν φορέα (Σχήμα S2).

Ποντίκια που φέρουν όγκους που προέρχονται από ασθενείς με διάγνωση καρκίνου των ωοθηκών ορώδες τυχαιοποιήθηκαν σε 4 ομάδες (η = 4-6 ζώα ανά ομάδα θεραπείας) με συμφωνημένα όγκοι του όγκου και υποβάλλεται στις υποδεικνυόμενες θεραπευτικές αγωγές. Τρεις ανεξάρτητες θηλώδες ορώδες δείγματα καρκίνου των ωοθηκών, SOC12 (Α), SOC13 (Β) και SOC14 (C) χρησιμοποιήθηκαν ως βιολογικό επαναλήψεις. Κοόρτεις έλαβαν αρχικά θεραπεία με όχημα μόνο (έλεγχος), πακλιταξέλη και καρβοπλατίνη (T /C) μόνο, ΙΡΙ-926 μόνο του ή T /C + ΙΡΙ-926 όπως υποδεικνύεται. Η τελευταία δόση T /C εκδόθηκε την 14η ημέρα (υποδεικνύεται από τη διακεκομμένη γραμμή). Ποσοστό μεταβολής στον όγκο του όγκου αντιπροσωπεύει τη μεταβολή στον όγκο του όγκου σε σχέση με τον όγκο του όγκου κατά την έναρξη του πειράματος. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα του μέσου (S.E.M). Η σημαντικότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα Wilcoxon τεστ rank sum.

Η

Στη συνέχεια εξετάσαμε την αντινεοπλασματική δραστικότητα του IPI-926 μετά τη διακοπή της θεραπείας T /C. Για αυτές τις αναλύσεις, τα εν λόγω ποντίκια που δέχθηκαν είτε T /C μόνο του ή σε συνδυασμό με ΙΡΙ-926 χορηγήθηκαν τους τρίτο και τελευταίο εβδομαδιαία δόση του Τ /C την ημέρα 14 της αγωγής θεραπείας (διακεκομμένη γραμμή, Εικόνα 4). Τα ζώα στη συνέχεια διατηρήθηκαν σε κάθε όχημα (T /C κοόρτη μόνη θεραπεία) ή ΙΡΙ-926 (T /C + ΙΡΙ-926 αγωγή ομάδα) και οι όγκοι του όγκου εκτιμήθηκαν σε τακτά χρονικά διαστήματα. Όπως φαίνεται στα Σχήματα 4Α, 4Β και 4C, η συνεχιζόμενη χορήγηση του ΙΡΙ-926 μετά την ολοκλήρωση της Τ /Κ αγωγή διατηρείται υποχώρηση του όγκου, και σε μία περίπτωση (SOC13, Εικόνα 4Β), είχε ως αποτέλεσμα μια περαιτέρω μείωση στον όγκο του όγκου σε επίπεδα που ήταν σχεδόν ανιχνεύσιμα. Σε αντίθεση, παρατηρήσαμε σταθερά αυξανόμενη ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με όχημα μετά την παύση της χορήγησης T /C. Έτσι, συνέχισαν τη θεραπεία ΙΡΙ-926 είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντική (ρ & lt? 0,02). Διαφορά στον όγκο του όγκου σε σχέση με αυτή που παρατηρήθηκε σε ποντικούς που έλαβαν φορέα και για τα τρία επιμέρους πρωτογενείς όγκους

ΙΡΙ-926 αναστέλλει δραστικότητα μονοπατιού Hh τόσο το στρώμα και όγκου

Πρόσφατα δεδομένα έχουν δείξει ότι η σηματοδότηση Hh στο στρώμα απαιτείται για την ανάπτυξη του όγκου σε μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού παγκρεατικού καρκίνου του παχέος εντέρου και (25). Για να εκτιμηθεί η θέση της δράσης του IPI-926 στο σύστημά μας, αναλύσαμε

Gli1

έκφραση του mRNA τόσο στρώμα του ποντικιού και ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα μετά από οξεία ή παρατεταμένη θεραπεία με IPI-926. Για τις μελέτες οξείας, τα ποντίκια που φέρουν ξενομοσχεύματα που παράγεται από SOC12, SOC13 και SOC14 υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με έκδοχο ή ΙΡΙ-926 για 24 ώρες. Μετά τη συγκομιδή του όγκου, η σχετική έκφραση του ποντικού και ανθρώπου

Gli1

αξιολογήθηκε με RT-PCR χρησιμοποιώντας ειδών-ειδικών εκκινητών. Η οξεία IPI-926 θεραπείας οδήγησε σε ταχεία σημαντική μείωση στο ποντίκι

Gli1

χωρίς αναστολή της ανθρώπινης

Gli1

έκφρασης (Σχήμα 5, άνω φωτογραφία). Αναλύσαμε επίσης στρωματικών όγκων και ειδικές

Gli1

έκφραση στα ξενομοσχεύματα SOC12, SOC13 και SOC14 συλλέχθηκαν από τους ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με είτε όχημα ή ΙΡΙ-926 για 21 ημέρες στις μελέτες φαίνεται στο Σχήμα 4. Όπως στην οξεία ρύθμιση, παρατεταμένη θεραπεία ΙΡΙ-926 οδήγησε σε σημαντική αναστολή του

Gli1

έκφραση mRNA στο στρωματικό (ρ & lt? 0,05) διαμέρισμα (Σχήμα 5, κάτω πίνακας). Σε αντίθεση με ό, τι παρατηρήθηκε επίσης στην οξεία ρύθμιση, μέτρια αναστολή του

Gli1

έκφραση του mRNA παρατηρήθηκε στον όγκο (p & lt? 0,03). Μετά από παρατεταμένη θεραπεία

Gli1

επίπεδα έκφρασης του mRNA σε όγκους ξενομοσχεύματος που προέρχονται από SOC12, SOC13, και SOC14 αναλύθηκαν με πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR μετά την αγωγή των ποντικών με ΙΡΙ-926 για 24 ώρες (άνω πάνελ) ή 21 ημέρες (κάτω πίνακας). Τα σχετικά επίπεδα του ανθρώπου (αριστερό πάνελ) και ποντικού (δεξιά πάνελ)

Gli1

έκφραση mRNA αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας είδος-ειδικών εκκινητών. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα του μέσου (S.E.M). Η σημασία (# p≤0.03, * ρ = 0.05, ** p≤0.001) προσδιορίστηκε με τη χρήση του Student t-test.

Η

Υψηλή

Gli1

έκφραση στο στρώμα του ανθρώπινου θηλώδες ορώδες όγκοι των ωοθηκών συσχετίζεται με κακή επιβίωση

για να επικυρωθεί ότι

Gli1

mRNA εκφράζεται στο στρώμα του ορώδες ανθρώπινων όγκων των ωοθηκών, εξετάσαμε τη σχετική έκφραση

Gli1

στο στρώμα μικροτομή από μια δεύτερη ομάδα των 19 ανθρώπινα πρωτογενή ορώδες όγκους των ωοθηκών (Πίνακας S2). Η μικρο-ανατομή στρώμα αυτών των όγκων έδειξε ένα πλήρες φάσμα των

Gli1

έκφραση mRNA (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι η υψηλή

Gli1

έκφραση του mRNA στο στρώμα συσχετίζεται με ένα επιδεινώθηκε σημαντικά την επιβίωση (Σχήμα 6).

ανάλυση δεδομένων επιβίωσης που λαμβάνονται για

Gli1

έκφραση του mRNA για μικροτομή δείγματα στρώμα των 19 ασθενών που χρησιμοποιούν επικύρωση qRT-PCR. Υψηλότερες

Gli1

mRNA έκφραση συσχετίζεται με μειωμένη επιβίωση (δοκιμασία log-rank, p & lt? 0.015) με διάμεση επιβίωση 26,50 μηνών για τους ασθενείς με χαμηλή

Gli1

έκφραση του mRNA έναντι 16 μηνών για τους ασθενείς ότι είχαν όγκους με υψηλότερες

Gli1

έκφραση του mRNA στο στρώμα.

η

Συζήτηση

Πολλοί ερευνητές έχουν τεκμηριώσει το ρόλο του μονοπατιού σηματοδότησης Hh στην ανάπτυξη και τη συντήρηση των στερεούς όγκους [4], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]. Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η ενεργοποίηση αυτού του μονοπατιού εμπλέκεται στην παθογένεση του καρκίνου των ωοθηκών (18, 20, 21). Στη μελέτη μας, θεραπευτική στόχευση αυτού του μονοπατιού οδήγησε σε αναστολή της ανθρώπινης θηλώδους ανάπτυξη ορώδης όγκου.