Αφηρημένο

Ιστορικό

Αν και πρώιμου σταδίου καρκίνο του πνεύμονα μη μικρών κυττάρων (NSCLC) θεωρείται δυνητικά ιάσιμη ασθένεια μετά από πλήρη εκτομή, οι ασθενείς έχουν ένα ευρύ φάσμα της επιβίωσης, σύμφωνα με στάδιο (ΙΒ, II, IIIA). Μέσα σε κάθε στάδιο, τα προφίλ της γονιδιακής έκφρασης μπορεί να προσδιορίσει τους ασθενείς με υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής. Υποθέσαμε ότι η αλλοιωμένη έκφραση του mRNA σε εννέα γονίδια θα μπορούσαν να βοηθήσουν στην πρόβλεψη της έκβασης της νόσου: Επισκευή εκτομή cross-συμπλήρωση 1 (ERCC1), μυελοειδή δακτύλου ψευδαργύρου 1 (MZF1) και Twist1 (που ρυθμίζουν την έκφραση Ν-cadherin), ριβονουκλεοτιδίου υπομονάδα αναγωγάσης M1 (RRM1 ), θειορεδοξίνη-1 (TRX1), τυροσυλο-DNA φωσφοδιεστεράσης (Tdp1), πυρηνικό παράγοντα των ενεργοποιημένων Τ κυττάρων (NFAT), BRCA1, και το ανθρώπινο ομόλογο της μαγιάς ιδρυόμενη ανεμπόδιστη από βενζιμιδαζόλη (BubR1).

Μεθοδολογία και ΚΥΡΙΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Πραγματοποιήσαμε πραγματικό χρόνο αλυσιδωτής αντίδρασης ποσοτικής πολυμεράσης (RT-QPCR) σε κατεψυγμένα δείγματα καρκίνου του πνεύμονα ιστών από 126 ασθενείς με ΜΜΚΠ λάβει προηγούμενη χημειοθεραπεία, οι οποίοι είχαν υποβληθεί σε χειρουργική εκτομή και αξιολόγησε τη συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων και την επιβίωση. Για την επικύρωση, χρησιμοποιήσαμε παραφίνη-ενσωματωμένες δείγματα από 58 άλλους ασθενείς με NSCLC. Μια ισχυρή μεταξύ των γονιδίων συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ των επιπέδων έκφρασης όλων των γονιδίων, εκτός ΕΚΚΖΣ. Ένα Cox μοντέλο αναλογικού κινδύνου έδειξε ότι μαζί με το στάδιο της νόσου, την έκφραση γονιδίων BRCA1 mRNA συσχετίζεται σημαντικά με τη συνολική επιβίωση (Αναλογία κινδύνου [HR], 1,98 [95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI), 1,11 – 6]? P = 0.02). Στην ανεξάρτητη ομάδα των 58 ασθενών, η έκφραση BRCA1 mRNA επίσης συσχετίστηκε σημαντικά με την επιβίωση (HR, 2.4 [95% CI, 1,01 – 5,92]? P = 0.04).

Συμπεράσματα

Η υπερέκφραση του BRCA1 mRNA συσχετίστηκε ισχυρώς με κακή επιβίωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ, και την επικύρωση του ευρήματος αυτού σε ένα ανεξάρτητο σύνολο δεδομένων ενισχυθεί περαιτέρω αυτή τη συσχέτιση. Δεδομένου ότι η έκφραση του mRNA BRCA1 έχει προηγουμένως συνδεθεί με διαφορετική ευαισθησία στη σισπλατίνη και των μικροσωληνίσκων φάρμακα, έκφραση γονιδίων BRCA1 mRNA μπορεί να παρέχει πρόσθετες πληροφορίες για την προσαρμογή επικουρική μικροσωληναρίων χημειοθεραπεία με βάση, ιδίως σε στάδιο ΙΒ, όπου δεν έχει αποδειχθεί σαφώς ο ρόλος των επικουρική χημειοθεραπεία.

Παράθεση: Rosell R, Skrzypski Μ, Jassem Ε, Τάρον Μ, Bartolucci R, Sanchez JJ, et al. (2007) BRCA 1: Ένα μυθιστόρημα προγνωστικός παράγοντας σε χειρουργικά μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 2 (11): E1129. doi: 10.1371 /journal.pone.0001129

Ακαδημαϊκό Εκδότης: William Pao, Memorial Sloan-Kettering,, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Ιούνη 2007? Δεκτές: 1 Αύγ 2007? Δημοσιεύθηκε: 7 Νοεμβρίου του 2007

Copyright: © 2007 Rosell et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η έρευνα που αναφέρονται εδώ χρηματοδοτήθηκε από το ισπανικό πνεύμονα Ομάδα Καρκίνου και του Ιατρικού Πανεπιστημίου του Γκντανσκ. Χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από το Υπουργείο Υγείας ισπανική χορηγήσει FIS 05/1621. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το 2006 στην Ευρώπη, υπήρχαν περίπου 386.300 περιπτώσεις καρκίνου του πνεύμονα, με σημαντικά μεγαλύτερη συχνότητα στους άνδρες παρά στις γυναίκες [1]. Μεταξύ εντελώς εκτομή καρκίνου του πνεύμονα μη-μικρών κυττάρων (NSCLC) ασθενείς, το 40% του σταδίου Ι, 66% του σταδίου ΙΙ και το 75% των ασθενών IIIA στάδιο πεθαίνουν εντός πέντε ετών από την εκτομή [2], και το όφελος της συμπληρωματικής χημειοθεραπείας έχει δεν έχει αποδειχθεί σε στάδιο ΙΒ. Στην τυχαιοποιημένη δοκιμή ANITA, 5-ετή επιβίωση για τους ασθενείς με νόσο σταδίου ΙΒ ήταν 62% στην ομάδα χημειοθεραπείας και 64% στην ομάδα ελέγχου? αντίστοιχα ποσοστά ήταν 52% και 39% για τους ασθενείς σταδίου ΙΙ και 42% και 26% για το στάδιο ΙΙΙΑ [3]. Εκτός από το στάδιο της νόσου, αρκετές μελέτες έχουν εξετάσει τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης σε NSCLC, εντοπίζοντας μοριακό υποτύπους συνδέεται με έκβαση των ασθενών [4], [5], [6], [7]. Οι υπογραφές έκφραση του γονιδίου που κυμαίνονται από πέντε έως 64 γονίδια έχουν εντοπιστεί [6], [7], και οι συγκρίσεις ανάμεσα σε μελέτες έχουν αποκαλύψει σημαντικές, αν και ατελές, η συμφωνία των μοντέλων πρόβλεψης αποτελέσματος [4]. Επιπλέον, η ικανότητα να ερμηνεύσει την έννοια των μεμονωμένων γονιδίων σε αυτές τις υπογραφές παραμένει μια πρόκληση [8]. Οι υπογραφές γονιδιακή έκφραση ταυτοποιημένα γονίδια σχετίζονται κυρίως με τον καρκίνο της μετάστασης [6], αλλά δεν περιγράφουν γονίδια που εμπλέκονται σε οδούς επιδιόρθωσης του DNA.

Προκλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι μια ανεπάρκεια σε οποιαδήποτε από τις πάνω από 30 γονίδια που εμπλέκονται στη νουκλεοτιδίων εκτομή επισκευή (NER) οδός προσδίδει την ένδειξη υπερευαισθησίας σε σισπλατίνη [9]. Υποθέτοντας ότι τα αυξημένα επίπεδα των γονιδίων NER θα μπορούσε να είναι όχι μόνο έξυπνη, αλλά και προγνωστικοί δείκτες, επιλέξαμε να εξετάσει τα ακόλουθα γονίδια, με βάση τις προηγούμενες εκθέσεις του προγνωστική αξία τους: Επισκευή εκτομή cross-συμπλήρωση 1 (ERCC1) [10], το BRCA1 [11 ], ανθρώπινο ομόλογο της μαγιάς ιδρυόμενη ανεμπόδιστη από βενζιμιδαζόλη (BubR1) [12], [13], [14], μυελοειδή δακτύλου ψευδαργύρου 1 (MZF1) [15], [16], [17], ριβονουκλεοτιδική υπομονάδα αναγωγάσης M1 (RRM1 ) [18], [19], [20], θειορεδοξίνη-1 (TRX1) [21], [22], τυροσυλ-DNA φωσφοδιεστεράσης (Tdp1) [23], [24], [25]. Επιπλέον, εξετάσαμε Twist [26], [27] και πυρηνικού παράγοντα των ενεργοποιημένων Τ κυττάρων (NFAT) [28], [29], οι οποίες συμμετέχουν στη διαδικασία εισβολής-μετάσταση. (Περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τα εννέα γονίδια που εξετάστηκαν μπορούν να βρεθούν στο S1 κειμένου.)

Κανένα από αυτά τα εννέα γονίδια έχουν εντοπιστεί σε προφίλ γονιδιακής έκφρασης που συνδέονται με NSCLC έκβαση των ασθενών [4], [5], [6] , [7], με την εξαίρεση του TRX1, η οποία πιστοποιήθηκε με πρωτεομική ανάλυση και συνδέεται με κακή επιβίωση [21]. Για να ρίξει φως σχετικά με την προγνωστική αξία αυτών των γονιδίων, εξετάσαμε την έκφραση τους με PCR πραγματικού χρόνου ποσοτική ανάστροφης μεταγραφάσης (RT-PCR) σε 126 πλήρως εκτομή ασθενείς με NSCLC που δεν λαμβάνουν επικουρική χημειοθεραπεία και συσχετίζονται τα αποτελέσματα με την επιβίωση.

Μέθοδοι

ασθενείς

δείγματα NSCLC ελήφθησαν από 126 διαδοχικούς ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική εκτομή πνευμονικού στο Ιατρικό Πανεπιστήμιο του Γκντανσκ (Gdansk, Πολωνία) μεταξύ του 2000 και του 2004, μετά από λήψη έγκρισης από την επιτροπή δεοντολογίας του Ιατρικού Πανεπιστημίου του Γκντανσκ και υπέγραψε συγκατάθεση των ασθενών. Οι ασθενείς ήταν 98 άνδρες και 28 γυναίκες, με την ηλικία κατά τη διάγνωση από 37 έως 77 ετών (μέση ηλικία, 64 ετών). Εβδομήντα ένας ασθενείς είχα στάδιο της νόσου, 33 σταδίου ΙΙ, και 22 στάδιο ΙΙΙΑ. Είκοσι επτά ασθενείς είχε κακώς διαφοροποιημένο, 74 μετρίως διαφοροποιημένων και 9 καλά διαφοροποιημένο NSCLC? οι υπόλοιποι 16 ασθενείς ήταν απροσδιόριστη. Ογδόντα ασθενείς ήταν καπνιστές, 39 πρώην καπνιστές, και οι υπόλοιπες επτά ποτέ καπνιστές. Εκατόν είκοσι δύο ασθενείς υποβλήθηκαν σε επίσημη πνευμονική λοβεκτομή ή περισσότερο, με την συστηματική σύστοιχη μεσοθωρακίου λεμφαδένων? οι τέσσερις εναπομείναντες ασθενείς υποβλήθηκαν τμηματεκτομή λόγω της κακής πνευμονικής αποθεματικό. Στάδια προσδιορίστηκαν μετά από παθολογικές αξιολόγηση της εκτομή δειγμάτων σύμφωνα με το Διεθνές Σύστημα Σταδιοποίηση καρκίνου του πνεύμονα [30] (Πίνακας S1). Κανένας από τους ασθενείς έλαβαν επικουρική χημειοθεραπεία.

Εμείς επικύρωσε την προγνωστική αξία BRCA 1 σε 58 ασθενείς σταδίου ΙΒ-IIB NSCLC οι οποίοι είχαν υποβληθεί σε χειρουργική εκτομή στο Azienda Ospedaliera Σάντα Μαρία (Terni, Ιταλία) στο διάστημα μεταξύ Φεβρουαρίου 1997 και Δεκ 2003 , αφού λάβει την έγκριση από την επιτροπή δεοντολογίας της Azienda Ospedaliera Σάντα Μαρία και υπέγραψε συγκατάθεση των ασθενών. Τα χαρακτηριστικά των ασθενών φαίνονται στον Πίνακα S1.

Η γονιδιακή έκφραση ανάλυση

δείγματα όγκων από τους 126 ασθενείς ελήφθησαν κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης, όπως μπλοκ 1cm3 και καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο. Οι ιστοί φυλάχθηκαν σε -80 ° C έως ότου το συνολικό RNA εκχυλίζεται με AllPrep κιτ (Qiagen, Valencia, CA). Μόνο δείγματα όγκων που περιέχουν περισσότερο από 60% του ιστού του όγκου σε μικροσκοπικό τμήμα ήταν επιλέξιμα για περαιτέρω επεξεργασία. Η συγκέντρωση του RNA εκτιμήθηκε σε νανο-drop ™ και η ποιότητα του λαμβανόμενου RNA εξετάστηκε σε πηκτή αγαρόζης. Πρώτου κλώνου cDNA συνετέθη από 1 μα ολικού RNA με τη χρήση της υψηλής χωρητικότητας cDNA Archive Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA). Τα εννέα γονίδια που εξετάστηκαν φαίνονται στον Πίνακα 1. Οι ποσοτικοί RT-PCR αντιδράσεις του κάθε γονιδίου έγιναν με ΑΒΙ PRISM 7900 ΗΤ Σύστημα Ανίχνευσης Αλληλουχίας (Applied Biosystems).

Η

τιμές έκφρασης σε σχέση γονίδιο υπολογίστηκαν με η μέθοδος ΔΔCt χρησιμοποιώντας το Σύστημα ανίχνευσης αλληλουχίας (SDS) 2,1 λογισμικό (Applied Biosystems). Η μέθοδος ΔΔCt δίνει την ποσότητα του γονιδίου στόχου κανονικοποιήθηκαν προς ένα ενδογενές γονίδιο αναφοράς (ριβοσωμικού 18S RNA) και σε σχέση με ένα δείγμα βαθμονομητή (αναφοράς για όλα τα δείγματα?. Εμπορικώς διαθέσιμα φυσιολογικού πνεύμονα και ανθρώπινου ήπατος RNA (Stratagene, La Jolla, CA) Εκκινητές για τις εννέα γονίδια καταγράφονται στον πίνακα S2.

ERCC1, έκφραση RRM1 και το γονίδιο BRCA 1 αξιολογήθηκε σε σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένα σε παραφίνη χειρουργικά δείγματα από τις 58 ασθενείς στην ομάδα τεκμηρίωσης. Χρησιμοποιώντας την τεχνική λέιζερ σύλληψη μικροδιατομής ( Palm μικρολέιζερ, Oberlensheim, Γερμανία) εξασφάλισε τουλάχιστον 80% του ιστού του όγκου. Μετά την αποπαραφινοποίηση δείγμα πρότυπο ιστού χρησιμοποιώντας ξυλόλιο και αλκοόλες, τα δείγματα υποβλήθηκαν σε λύση σε ένα τρις-χλωρίδιο, EDTA, δωδεκυλθειικό νάτριο (SDS) και πρωτεϊνάση Κ που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα. RNA στη συνέχεια εκχυλίζεται με φαινόλη-χλωροφόρμιο-ισοαμυλική αλκοόλη ακολουθούμενη από καθίζηση με ισοπροπανόλη με την παρουσία γλυκογόνου και οξικό νάτριο. RNA επαναιωρήθηκε σε DEPC ύδωρ (Ambion Inc, Austin ΤΧ, USA) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ϋΝΑση Ι (Ambion Inc) προς να αποφευχθεί η μόλυνση του DNA. cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας M-MLV ένζυμο retrotranscriptase. cDNA πρότυπο προστέθηκε σε Taqman καθολική Master Mix (Applied Biosystems) σε ένα 12,5 μΙ αντίδραση με ειδικούς εκκινητές και ανιχνευτής για κάθε γονίδιο. Οι ομάδες εναρκτήρα και διερευνητή ήταν ταυτόσημες με εκείνες που χρησιμοποιούνται στα κατεψυγμένα δείγματα? το ενδογενές γονίδιο αναφοράς ήταν β-ακτίνης. Ποσοτικοποίηση της έκφρασης γονιδίου διεξήχθη χρησιμοποιώντας το ΑΒΙ Prism 7900HT Σύστημα Ανίχνευσης Αλληλουχίας (Applied Biosystems).

Στατιστικές αναλύσεις

μέσες τιμές και τα εύρη προήλθαν για ποσοτικές μεταβλητές και γονιδιακή έκφραση mRNA. Ποιοτικές μεταβλητές συνοψίστηκαν μέσω της απόλυτης συχνότητες και ποσοστά. Το τεστ Kruskal-Wallis χρησιμοποιήθηκε για να ελέγξει για ομαλότητα. Οι διαφορές στα διάμεσα επίπεδα έκφρασης του mRNA μεταξύ ιστολογικών τύπων αξιολογήθηκαν με την δοκιμή U των Mann-Whitney. Συντελεστής βαθμό συσχέτισης Spearman του (rho) χρησιμοποιήθηκε για να μετρήσει τις συσχετίσεις μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων. Κάναμε μια

a priori

απόφαση για την ταξινόμηση των επιπέδων γονιδιακής έκφρασης mRNA ως υψηλή ή χαμηλή, με τη μέθοδο της ελάχιστης τιμής P τροποποιήθηκε από Lausen και Schumacher [31]. Η μέθοδος Bonferroni χρησιμοποιήθηκε για τη διόρθωση της επίδρασης των πολλαπλών συγκρίσεων, και εμπειρικές τιμές Ρ για κάθε γονίδιο επιβεβαιώθηκαν μέσω 5.000 δοκιμές μετάθεση. Όταν βρέθηκε κανένα βέλτιστο σημείο αποκοπής, χρησιμοποιήσαμε το δείγμα διάμεσο για την ανάλυση του χρόνου για υποτροπή και η επιβίωση. Χρόνος μέχρι την υποτροπή και η επιβίωση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας εκτιμήσεις Kaplan-Meier και οι διαφορές μεταξύ των καμπυλών εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Για να επιλέξετε ένα κατάλληλο υποσύνολο των γονιδίων για σύνδεση σε οποιαδήποτε κλινική μεταβλητή (ιστολογία, το στάδιο και βαθμό), πραγματοποιήσαμε μια προς τα εμπρός και προς τα πίσω ανάλυση παλινδρόμησης Cox. Για όλους τους υπολογισμούς, οι δοκιμές που πραγματοποιήθηκαν ήταν δύο όψεων, σημαντικότητας ορίστηκε στο 5%, και η δύναμη ήταν 80%. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου για τις Κοινωνικές Επιστήμες (SPSS) για την έκδοση των Windows 14 (SPSS Inc, Chicago, IL) και S-Plus 6.1 για Windows.

Αποτελέσματα

Οι μέσες τιμές των κάθε γονίδιο για ολόκληρη την ομάδα των δειγμάτων φαίνονται στον πίνακα S3. Η γονιδιακή ενίσχυση δεν ήταν επιτυχής σε μια μειοψηφία των δειγμάτων για κάθε μεταγραφή που αναλύθηκαν. Υπήρχαν σημαντικές διαφορές στην έκφραση σύμφωνα με την ιστολογία για όλα τα γονίδια με εξαίρεση NFAT, με υψηλότερα επίπεδα παρατηρήθηκαν σε καρκινώματα πλακωδών κυττάρων σε σχέση με αδενοκαρκινώματα (Πίνακας 2). Δεν υπήρχαν διαφορές στην γονιδιακή έκφραση σύμφωνα με το στάδιο (Πίνακας S4). Μια ισχυρή συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των διαφορετικών γονιδίων, για παράδειγμα, μεταξύ των επιπέδων του TRX και RRM1 (rho = 0.52? Ρ = 0.0003) και μεταξύ ERCC1 και BRCA1 (rho = 0,62? Ρ = 0.0001) (Πίνακας 3)

Η

Με μια διάμεση παρακολούθηση 29,7 μηνών (εύρος, 1,7 έως 65,9 μήνες), η συνολική εκδήλωση-free και μέση επιβίωση δεν έχουν επιτευχθεί. Όταν εκδήλωση-free και μέση επιβίωση αναλύθηκε σύμφωνα με τα επίπεδα έκφρασης των εννέα γονιδίων, TRX και BRCA1 έδειξαν σημαντικές διαφορές. Επιβίωση χωρίς συμβάντα για 21 ασθενείς με χαμηλά επίπεδα TRX δεν έχει επιτευχθεί, ενώ ήταν 32 μήνες (95% CI,) για τις υπόλοιπες 93 ασθενείς με υψηλά επίπεδα (P = 0,02). Για 77 ασθενείς με χαμηλά επίπεδα BRCA1, ελεύθερη συμβαμάτων επιβίωση δεν έχει επιτευχθεί, ενώ ήταν 22 μήνες (95% CI, 14,9 έως 29 μήνες) για τα άτομα με υψηλά επίπεδα (P = 0,04) (Πίνακας S5, Σχ. 1 ). Οι καμπύλες επιβίωσης άνευ-γεγονότος σύμφωνα με την έκφραση των άλλων επτά γονίδια φαίνεται στην Εικόνα S1. Η διάμεση επιβίωση για τους 24 ασθενείς με χαμηλά επίπεδα TRX δεν έχει επιτευχθεί, ενώ ήταν 39 μήνες για τις υπόλοιπες 101 ασθενείς με υψηλά επίπεδα (P = 0,03). Για 83 ασθενείς με χαμηλά επίπεδα BRCA1, η διάμεση επιβίωση δεν έχει επιτευχθεί, ενώ ήταν 29 μήνες (95% CI, 22,2 έως 35,7 μήνες) για τα άτομα με υψηλά επίπεδα (Ρ = 0,04) (Πίνακας 4, Εικ. 1). Οι καμπύλες διάμεση επιβίωση ανάλογα με την έκφραση των άλλων επτά γονίδια φαίνεται στην Εικόνα S2. Ωστόσο, όταν εξετάστηκαν ασθενείς μόνο στάδιο Ι, ελεύθερη συμβαμάτων επιβίωση ήταν σημαντικά διαφορετική ανάλογα με τα επίπεδα έκφρασης των MZF1 και BRCA 1 (Πίνακας S6, Εικ. S3), και η διάμεση επιβίωση ήταν σημαντικά διαφορετική ανάλογα με τα επίπεδα έκφρασης του ERCC1, MZF1, Twist και BRCA1 (Πίνακας S7, Σχ. S4).

Event-free (Α, Β) και η διάμεση (C, D) σύμφωνα με την επιβίωση έκφραση του TRX (A, C) και BRCA 1 (B, D) .

Η

Το αναλογικών κινδύνων κατά Cox μοντέλο επιλεγμένες παθολογικές στάδιο ΙΙΙΑ και έκφραση γονιδίων BRCA1 ως ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση. Η αναλογία κινδύνου (HR) ήταν 7,91 (95% CI, 2,27 έως 27,54? P = 0,001) για τη φάση ΙΙΙΑ και 1,98 (95% CI, 1,11 έως 6)? P = 0,02) για την έκφραση γονιδίων BRCA1 (Πίνακας S8).

Εκκαθάριση των BRCA1

Η διάμεση παρακολούθηση 58 ασθενείς στην ομάδα επικύρωση ήταν 40 μήνες. Σύμφωνα με το μοντέλο αναλογικού κινδύνου του Cox, η HR για ασθενείς με υψηλά επίπεδα BRCA1 ήταν 2,4 (95% CI, 1,01 – 5,92? P = 0.04). Δεν υπήρχαν ασθενείς σταδίου ΙΙΙΑ σε αυτή την ομάδα.

Συζήτηση

Gene έχουν υπογραφές έκφρασης έχει αποδειχθεί για να προβλέψει το αποτέλεσμα σε εκτομή σταδίου Ι NSCLC [5], [6], ωστόσο, η χρήση του μικροσυστοιχίες είναι περιορισμένη λόγω της ανάγκης για φρέσκο ​​κατεψυγμένο ιστό. RT-QPCR που περιλαμβάνουν μικρό αριθμό γονιδίων προσφέρει μια πρακτική εναλλακτική λύση, που επιτρέπει την ακριβή και αναπαραγώγιμη ποσοτικοποίηση των αποτελεσμάτων για το RNA που λαμβάνεται από μικρές ποσότητες δειγμάτων ενσωματωμένες σε παραφίνη. Τα αποτελέσματα της RT-QPCR πραγματοποιήθηκε σε πέντε [7] και οκτώ [32] γονίδια συσχετίζεται με τα αποτελέσματα της NSCLC [7] και αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα [32] ασθενείς. Εξετάσαμε την έκφραση των ERCC1, BRCA1, BubR1, MZF1, RRM1, TRX1 και Tdp1, εμπλέκονται σε μονοπάτια επιδιόρθωσης του DNA, και της Twist και NFAT, που σχετίζονται με το σχηματισμό μεταστάσεων. Στο πολυπαραγοντικό μοντέλο, μόνο BRCA1 και το στάδιο IIIA ταυτοποιήθηκαν ως ανεξάρτητος προγνωστικός μεταβλητές. Σε μια ανεξάρτητη επικύρωση ομάδα των 58 ασθενών σταδίου ΙΒ-IIB NSCLC, BRCA1 επιβεβαιώθηκε ως το μόνο ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη.

Οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι είχαν υψηλή έκφραση γονιδίων BRCA1 είχαν σημαντικά χειρότερη επιβίωση και πρέπει να είναι υποψήφιοι για επικουρική χημειοθεραπεία.

In vitro

μελέτες έχουν δείξει ότι μπορεί να ρυθμίσει BRCA1 διαφορική ευαισθησία σε διάφορες κατηγορίες παραγόντων χημειοθεραπείας [33]. Η απουσία του BRCA1 οδηγεί σε υψηλή ευαισθησία στη σισπλατίνη, ενώ η παρουσία του αυξάνει την ευαισθησία να μικροσωληναρίων παραγόντων [33]. Ως εκ τούτου, πιστεύουμε ότι οι ασθενείς με τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης θα πρέπει να λαμβάνουν μικροσωληναρίων, μη-με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία. Έχουμε πραγματοποιήσει μια πιλοτική μελέτη εξατομικευμένων επικουρική χημειοθεραπεία με βάση τα επίπεδα BRCA1 mRNA σε 88 πλήρως εκτομή σταδίου ΙΙ-ΙΙΙΑ ασθενείς με NSCLC, όπου τα άτομα με τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης λάβει επικουρική docetaxel και εκείνους με τα χαμηλότερα επίπεδα έλαβαν σισπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση. Η ενδιάμεση ανάλυση δείχνει ότι η ελεύθερη συμβαμάτων επιβίωση είναι παρόμοια και στις δύο ομάδες. Τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν προηγούμενα ευρήματα μας σε ασθενείς σταδίου ΙΙ-ΙΙΙΑ που έλαβαν εισαγωγική γεμσιταμπίνη /σισπλατίνη, όπου τα άτομα με τα υψηλότερα επίπεδα BRCA1 είχε μια θλιβερή επιβίωση 12 μηνών [11].

Δεν υπάρχουν διαφορές στα επίπεδα έκφρασης της οποιασδήποτε από τα εννέα γονίδια παρατηρήθηκαν ανάλογα με το στάδιο ή όγκου μεγέθους (& lt? 4 vs & gt? 4 εκατοστά). Ωστόσο, όλα τα εννέα γονίδια που εξετάστηκαν, μόνο BRCA1 έδειξαν μια τάση που επηρεάζουν την επιβίωση ανάλογα με το μέγεθος του όγκου. Στο στάδιο Ι NSCLC ασθενών, η επιβίωση έχει αντιστρόφως ανάλογη με το μέγεθος του όγκου [34]. Στην παρούσα μελέτη, η ανάλυση έδειξε μονοπαραγοντική επιβίωση ότι εκτός από BRCA1, ERCC1 και MZF1 επηρέασε σημαντικά την επιβίωση στο στάδιο Ι (Πίνακας S7, Σχ. S4). Τα ευρήματα αυτά υπογραμμίζουν το δυναμικό ρόλο των ERCC1 και MZF1, οι οποίες σε μεγάλο βαθμό με BRCA1, τόσο ισχυρή προγνωστικοί δείκτες στη φάση Ι NSCLC. Όχι απροσδόκητα, ωστόσο, λαμβάνοντας υπόψη την υψηλή συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης αυτών των τριών γονιδίων (Πίνακας 3), όταν όλα τα τρία γονίδια συνενώθηκαν, δεν παρατηρήθηκε καμία περαιτέρω βελτίωση έναντι της προγνωστική αξία της μόνος BRCA1.

Αν και η μηχανισμοί μέσω των οποίων μερικά από τα εννέα γονίδια που εξετάστηκαν επηρεάζουν την πρόγνωση των ασθενών δεν είναι πολύ σαφής, η υπερέκφραση του ERCC1 και RRM1 φαίνεται να ογκογονίδιο με γνώμονα [35], [36], [37], [38], [39]. BRCA1 μεθυλίωση και κατάργηση του BRCA1 mRNA έχει βρεθεί σε σποραδικούς καρκίνους του μαστού [40], αλλά πολύ σπάνια σε NSCLC [41]. Σε ορισμένες σποραδικούς καρκίνους του μαστού, η κακή έκβαση που συνδέεται με BRCA1 μεθυλίωση και χαμηλά επίπεδα έκφρασης θα μπορούσε να εξηγηθεί με ενίσχυση MYC [42].

Άλλες μελέτες, με τη χρήση του μονοκλωνικού αντισώματος 8F1 [43] έχουν αναφέρει ότι η παρουσία της πρωτεΐνης ERCC1 είναι ένας προγνωστικός δείκτης επιβίωσης στις αρχές του NSCLC και προγνωστικός δείκτης της έκβασης επικουρική σισπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση? Ωστόσο, σε μια προηγούμενη μελέτη σε καρκίνο του στομάχου [44], δεν ήταν σαφές αν η κακή κλινική ανταπόκριση των ασθενών των οποίων οι όγκοι είχαν επίπεδα mRNA υψηλά προεπεξεργασία των ERCC1 προέκυψε από την αντίσταση των καρκινικών κυττάρων με σισπλατίνη βασίζεται σε χημειοθεραπεία ή από μια πιο επιθετική βιολογία του όγκου. Επιπλέον, σε ERCC1-θετικά φυσιολογικών ανθρώπινων ινοβλαστών και κυττάρων από ασθενείς με κληρονομικές μεταλλάξεις στο ERCC1, ERCC1 δεν είναι το κύριο αντιγόνο που αναγνωρίζεται από το αντίσωμα 8F1 για ανοσοχρώση [45]. Επιπλέον, σε μια άλλη μελέτη, η κατάσταση της πρωτεΐνης ERCC1 δεν συσχετίζεται με την επιβίωση σε στάδιο IV NSCLC [46], ενώ σε μια δοκιμή εξατομικευμένων σισπλατίνης με βάση την έκφραση ERCC1 mRNA, το ποσοστό ανταπόκρισης ήταν 39% στην ομάδα ελέγχου και 50% στην προσαρμοσμένη βραχίονα (P = 0,02) [47].

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας δείχνει ότι, πρώτον, το BRCA1 είναι στενά συνδεδεμένη με ERCC1, RRM1 και άλλα γονίδια, όπως MZF1, αλλά ξεχωρίζει ως το πιο σημαντικό προγνωστικός δείκτης της υποτροπής . Υποθέτουμε ότι οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα BRCA1 θα ωφεληθούν από μικροσωληναρίων-based-αλλά όχι σισπλατίνη βασίζεται-χημειοθεραπεία. Δεύτερον, τα υψηλά επίπεδα αυτών των μεταγραφών παρέχουν υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής, σε αντίθεση με ό, τι έχει αναφερθεί από άλλους ερευνητές, η οποία υπογραμμίζει την ανάγκη για περαιτέρω έρευνα σε αυτόν τον τομέα για τη διαλεύκανση της πρόβλεψης ρόλο αυτών των γονιδίων NER σχετίζονται και να προσαρμόσετε σωστά θεραπεία (Εικ. S5). Παρά το γεγονός ότι ο πληθυσμός στη μελέτη μας ήταν λοξή σε άνδρες καπνιστές με καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων, τα αποτελέσματά μας δικαιολογούν περαιτέρω έρευνα για να επιβεβαιωθεί η εφαρμογή τους σε άλλες ιστολογικές υποομάδες των NSCLC, προκειμένου να ρίξουν περισσότερο φως σε αυτά τα θέματα, σχεδιάζουμε να εξετάσει BRCA1, ERCC1 , MZF1 και RRM1 έκφραση σε 200 δείγματα όγκων από τη μελέτη ANITA [3] και σε 620 ασθενείς που συμπεριελήφθησαν στη μελέτη ισπανική πνεύμονα Ομάδα Καρκίνου natch της εισαγωγική vs επικουρική χημειοθεραπεία vs μόνη χειρουργική επέμβαση.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

επιβίωση χωρίς συμβάντα σύμφωνα με την έκφραση των ERCC1 (Α), MZF1 (Β), Twist (C), RRM1 (D), Tdp1 (Ε), ΕΚΚΖΣ (F), και BubR1 (G)

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s001

(0,09 MB ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

διάμεση επιβίωση σύμφωνα με την έκφραση του ERCC1 (Α), MZF1 (Β), Twist (C), RRM1 (D), Tdp1 (Ε), NFAT (F), και BubR1 (G)

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s002

(0,09 MB ΔΕΘ)

Εικόνα S3.

Event χωρίς καμπύλες επιβίωσης για τους ασθενείς σταδίου Ι σύμφωνα με τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων των εννέα γονίδια που εξετάστηκαν

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s003

(0,10 MB ΔΕΘ)

Εικόνα S4.

διάμεση καμπύλες επιβίωσης για τους ασθενείς σταδίου Ι σύμφωνα με τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων των εννέα γονίδια που εξετάστηκαν

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s004

(0,10 MB ΔΕΘ)

Εικόνα S5.

αντιφατικά ευρήματα που οδηγούν σε αντίθεση με τις στρατηγικές της προσαρμογής επικουρική χημειοθεραπεία. Olaussen et al (NEJM 2006? 355: 983-991) αναφέρουν ότι η έλλειψη ERCC1protein συνεπάγεται υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής και μια μεγαλύτερη ευαισθησία σε σισπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση. (Cisplatin ευαισθησίας βασίζεται στην έλλειψη έκφρασης ERCC1 έχει αποδειχθεί σε προκλινικές και κλινικές μελέτες.) Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι ένα υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής συνδέεται με υψηλά επίπεδα αρκετών μεταγραφές, συμπεριλαμβανομένων των ERCC1. Αυτοί οι ασθενείς θα μπορούσαν να είναι ανθεκτικά σε σισπλατίνη και ευαίσθητα σε ταξάνες ή άλλα μικροσωληναρίων φάρμακα

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s005

(0,13 MB ΔΕΘ)

Πίνακα S1.

χαρακτηριστικά του ασθενούς για την κύρια ομάδα (Ν = 126) και για την ομάδα επικύρωσης (Ν = 58)

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s006

(0,04 MB DOC)

Πίνακας S2.

Εκκινητές και ανιχνευτές για τις εννέα γονίδια που εξετάστηκαν

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s007

(0,03 MB DOC)

Πίνακα S3.

τιμές Σχετική έκφραση γονιδίων

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s008

(0,03 MB DOC)

Πίνακας S4. έκφραση

Gene σύμφωνα με το στάδιο της νόσου

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s009

(0,04 MB DOC)

Πίνακας S5.

επιβίωση χωρίς συμβάντα ανάλογα με τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s010

(0,06 MB DOC)

Πίνακας S6.

επιβίωση χωρίς συμβάντα σε ασθενείς σταδίου Ι σύμφωνα με τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s011

(0,06 MB DOC)

Πίνακας S7.

διάμεση επιβίωση για τους ασθενείς σταδίου Ι σύμφωνα με τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s012

(0,06 MB DOC)

Πίνακας S8. μοντέλο

πολυπαραγοντική Cox για την επιβίωση, που δείχνει ένα μεγαλύτερο κίνδυνο θανάτου για τους ασθενείς με υψηλά επίπεδα των γονιδίων BRCA1 και για εκείνους με το στάδιο IIIA νόσο

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s013

(0,03 MB DOC )

Κείμενο S1.

Περαιτέρω λεπτομέρειες σχετικά με τα εννέα γονίδια που εξετάστηκαν

doi: 10.1371 /journal.pone.0001129.s014

(0,09 MB DOC)