Αφηρημένο

Poly (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης-1 (PARP -1) και τελομεράσης, καθώς και οδούς απόκριση βλάβης του DNA είναι στόχοι για την ανάπτυξη αντικαρκινικών φαρμάκων, και ειδικοί αναστολείς βρίσκονται υπό κλινική έρευνα. Ο σκοπός αυτής της εργασίας είναι η αξιολόγηση αντικαρκινική δραστηριότητες του ανθρακινόνης προερχόμενων τρικυκλικές και τετρακυκλικές μικρά μόρια και τις σχέσεις δομής-δραστικότητας τους με PARP-1 αναστολή σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και NSCLC υπερεκφράζουν Oct4 και Nanog κλώνος, ο οποίος δείχνουν υψηλή έκφραση της PARP-1 και μεγαλύτερη αντίσταση στο αντικαρκινικό φάρμακο. Εφαρμόσαμε βιβλιοθήκη επιλεγμένων ενώσεων μας σε 60 ανθρώπινες κυτταρικές σειρές του καρκίνου του NCI (NCI-60), προκειμένου να δημιουργήσει συστηματικά δεδομένα προφίλ. Με βάση την ανάλυση μας, είναι η υπόθεση ότι αυτά τα φάρμακα μπορεί να είναι, άμεσα και έμμεσα, στοχεύουν συστατικά για να επάγει μιτοχονδριακό μετάβαση διαπερατότητα και την απελευθέρωση των προ-αποπτωτικών παραγόντων ως πιθανούς αντι-NSCLC ή PARP υποψηφίων αναστολέα. Συνολικά, το πιο ενεργό NSC747854 έδειξε κυτταροτοξικότητα και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο ανασταλτικής της PARP, έτσι προκύπτει ως μια πολλά υποσχόμενη δομή για αντικαρκινική θεραπεία χωρίς σημαντική αρνητική επίδραση σε φυσιολογικά κύτταρα. Οι μελέτες μας παρουσιάζουν στοιχεία που πρέπει να λαμβάνονται υπόψη διατήρηση των τελομερών στις προσπάθειες όχι μόνο να ξεπεράσει την αντίσταση των ναρκωτικών, αλλά και για τη βελτιστοποίηση της χρήσης των θεραπευτικών τελομερών που βασίζεται. Αυτά τα ευρήματα θα έχει μεγάλη αξία για τη διευκόλυνση της δομής με βάση το σχεδιασμό επιλεκτικών αναστολέων PARP, σε γενικές γραμμές, και οι αναστολείς της τελομεράσης, ειδικότερα. Μαζί, τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ επεκτείνουν εικόνα μας στους αναστολείς PARP και να υποστηρίξει το προβάδισμα βελτιστοποίηση της δομής των σχετικών μικρών μορίων για τη θεραπεία του ανθρώπινου καρκίνου πόρων απαιτητικές

Παράθεση:. Lee YR, Yu DS, Liang YC, Huang KF , Chou SJ, ο Τσεν TC, et al. (2013) Νέες προσεγγίσεις του ΡΑΚΡ-1 αναστολέων σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα και του καρκίνου Stem κύτταρα που μοιάζουν με κάποια επιλεγμένα ανθρακινόνη-Προερχόμενο μικρά μόρια. PLoS ONE 8 (2): e56284. doi: 10.1371 /journal.pone.0056284

Επιμέλεια: Ferenc Gallyas, Πανεπιστήμιο του Πετς Ιατρική Σχολή, την Ουγγαρία

Ελήφθη: 18 Ιουνίου του 2012? Αποδεκτές: 12 Ιαν 2013? Δημοσιεύθηκε: 25 Φλεβάρη, 2013

Copyright: © 2013 Lee et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η παρούσα μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Επιχορηγήσεις Επιστημονικό Συμβούλιο NSC99-2113-M-016-001, NSC100-2113-M-016-001 και NSC 97-3111-B-075-001-my3 αντίστοιχα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή οι καρκίνοι

Lung γενικά κατηγοριοποιούνται ως καρκινώματα μικρών κυττάρων του πνεύμονα (SCLC) και μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), οι οποίες περαιτέρω υποδιαιρούνται σε αδενοκαρκίνωμα (AC), πλακώδες καρκίνωμα (SCC), και μεγάλων κυττάρων καρκίνωμα (LCC) [1], [2]. Καρκινικά βλαστικά κύτταρα είναι μικρές δεξαμενές για αυτοσυντηρούμενη κυττάρων με την αποκλειστική ικανότητα για αυτο-ανανέωση και τη συντήρηση του όγκου [3]. Παρά το γεγονός ότι νέοι παράγοντες χημειοθεραπείας και ακτινοθεραπείας έχουν βελτιώσει την επιβίωση και την ποιότητα ζωής των ασθενών, η μακροπρόθεσμη επιβίωση των ασθενών με πνευμονική AC παραμένει μη ικανοποιητική. Η χημειοθεραπεία κατά την τελευταία δεκαετία έχει χρησιμοποιηθεί κυρίως για την ανακούφιση παρά τη μείωση της θνησιμότητας? εξακολουθεί να υπάρχει επείγουσα ανάγκη για περαιτέρω αναζήτηση των νέων μικρών μορίων για νέους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες.

PARP, η οποία παίζει ρόλο στην επιδιόρθωση των μονόκλωνο DNA (ssDNA) διαλείμματα, έχει μια σειρά από διακριτές βιοχημικές δραστηριότητες οι οποίες έχουν έναν ελκυστικό στόχο για το σχεδιασμό των αντικαρκινικών παραγόντων [4] – [6]. Κατά την τελευταία δεκαετία, έχουν πολλά μικρά μόρια με αναστολή της οικογένειας PARP έχουν συντεθεί και ορισμένα από αυτά δοκιμάζονται σήμερα σε κλινικές δοκιμές ως θεραπείες καρκίνου [7] – [9]. Παρόλο που έχουν μελετηθεί για τη χρησιμότητά τους στην ανίχνευση βλαβών στο DNA και επιδιόρθωση, ο βαθμός στον οποίο έλεγχο PARP άλλες ειδικές αναπτυξιακή διαδικασία δεν είναι σαφής. Η ανάπτυξη ειδικών, ισχυρών, αποτελεσματικών και ασφαλών αναστολείς PARP έχει καταστεί μια περιοχή ενεργού έρευνας και πολύ πρόσφατη δημοσίευση στον τομέα PARP. Για το λόγο αυτό, αναστολή της δράσεως PARP, ιδιαίτερα PARP-1, με μικρά μόρια μειώνει την επισκευή των διαλειμμάτων ssDNA, και είναι πιθανό να είναι χρήσιμες για τη θεραπεία καρκίνων, το άγχος, φλεγμονώδεις αποκρίσεις και των καρδιαγγειακών παθήσεων [7], [8]. Οι κλινικές δοκιμές οι οποίες είναι τώρα σε εξέλιξη εξέταση της ασφάλειας και της αποτελεσματικότητας των αναστολέων PARP-1 ως αντι-καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του μαστού, της μήτρας, και των ωοθηκών [9]. Επιπλέον, οι λειτουργίες της PARP στις απαντήσεις βλάβη του DNA και την προστασία των τελομερών μπορεί να επικαλύπτονται με το τελομεράσης [10]. Μια προηγούμενη έκθεση προτείνει ότι η τελομεράση και PARP παίζει ένα ρόλο στην χρωμόσωμα αστάθεια και βλάβη του DNA [11]. Σε πολλές περιπτώσεις, η αποτελεσματικότητα των αναστολέων μπορεί να οφείλεται στη συνθετική θνησιμότητα μεταξύ αναστολής PARP και γενετικής βλάβης στα κύτταρα όγκου [12] – [14].

3-αμινοβενζαμίδιο (3-ΑΒ) είναι μια πρώτη γενιά PARP-1 αναστολέα [15], [16], αλλά δεν έχει τα αναγκαία εκλεκτικότητα και ισχύ για να είναι χρήσιμα σε κλινικές ή ως ερευνητικό εργαλείο [9], [17]. Επιπλέον, νικοτιναμίδιο, το μικρότερο προϊόν διάσπασης του NAD

+ εξασκεί επίσης ανασταλτική επίδραση επί της PARP-1 [18]. Veliparib (ΑΒΤ-888) είναι επίσης μία νέα και εν δυνάμει αντικαρκινικό φάρμακο δρα ως αναστολέας PARP-1 [19]. Olaparib (AZD2281) έχει δείξει ελπιδοφόρα κλινική αποτελεσματικότητα σε μη τυχαιοποιημένη δοκιμές φάσης II σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με BRCA1 ή BRCA2 ανεπάρκεια [20]. Iniparib (BSI-201) είναι αξιόλογη δια απλή δομή της, αλλά σκοτώνει φυσιολογικών και νεοπλασματικών κυττάρων σε υψηλές συγκεντρώσεις και δεν θα πρέπει να θεωρούνται ως αναστολέας PARP [21]. Άλλα φάρμακα όπως ΙΝΟ-1001, CEP-8933 /CEP-9722 και τα παράγωγα φαινανθρένιο σχετίζονται PJ-34 έχουν επίσης αξιολογηθεί σε κλινικές δοκιμές μέχρι σήμερα [22]. PJ-34 ήταν επίσης η πιο ισχυρή ένωση στον τομέα αυτό [23]. Παρέχουμε PARP 1-δραστηριότητες ορισμένων επιλεγμένων ενώσεων, καθώς και μια σε βάθος έρευνα των εγγράφων μας, δημοσιευμένα ή αδημοσίευτα τα τελευταία χρόνια που έχουν προσφέρει νέες γνώσεις σχετικά με την αναστολή της PARP-1 στον πυρήνα (Σχήμα 1) [ ,,,0],24] – [33].

η

προς υποστήριξη της προαναφερθείσας υπόθεσης, μελέτες έχουν δείξει ότι η ρ53-ανεπαρκή κύτταρα καρκίνου του μαστού σε επεξεργασία με ένα ΡΑΚΡ-1 αναστολέα χάνουν αντοχή στην δοξορουβικίνη, ένα κλινικά δραστικό αντιβιοτικό κατά του όγκου ανθρακυκλίνης ότι προωθεί την απόπτωση [34]. Επιπλέον, η μελέτη δείχνουν ότι φαινανθρένια σχετίζονται PARP-1 αναστολείς έχουν ισχυρά κυτταροπροστατευτικά αποτελέσματα

in vitro

και

in vivo

[35] Μελέτη .Another έδειξε ότι η συγκέντρωση Η σισπλατίνη μπορεί να μειωθεί, αφού ακολούθησε με επεξεργασία με αναστολέα PARP-1, PJ-34, για να ληφθεί το ίδιο κυτταροτοξική δράση [36]. Όπως συζητήθηκε στο άρθρο, που στοχεύουν το μονοπάτι βάση επισκευή εκτομή με ισχυρούς PARP-1 αναστολείς αποδεικνύεται ότι είναι γόνιμη διαδρομή για την ανάπτυξη νέων παραγόντων που μπορεί να έχουν δραστικότητα όχι μόνο ως χημείο- ή ραδιο-ενισχυτικά μέσα, αλλά και ως ενεργό παράγοντα σε επιδιόρθωση του DNA με ανεπάρκεια κληρονόμησε καρκίνων [37]. Σε αυτή τη μελέτη, επισημαίνουμε τις αναδυόμενες πληροφορίες σχετικά με την αναστολή της PARP-1 σε ανθρακινόνης προερχόμενα εκβάσεις παράγωγα, αλληλεπίδραση του με αντικαρκινική δράση ενάντια στην πλήρη ομάδα ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών και την αναστολή αυτών των παραγώγων κατόπιν PARP-1. Αυτές και άλλες σχετικές κλινικές ανακαλύψεις έχουν μετακινηθεί ΡΑΚΡ-1 από ενδιαφέροντα θέματα των μοριακές αναλύσεις στο προσκήνιο ως κλινική στόχοι για τη θεραπεία του καρκίνου. Στην προσέγγισή μας σε αυτή την έρευνα, ερευνήσαμε ανακαλύφθηκαν πρόσφατα αναστολείς PARP, τα κατάλληλα τροποποιημένο ανθρακινόνη που προέρχονται από μικρά μόρια, για να καθορίσει τις επιπτώσεις τους στην βιωσιμότητα των κυττάρων, ανάλυση κηλίδος western, τα καρκινικά κύτταρα και η αναστολή τους PARP-1.

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Αντιπολλαπλασιαστική αξιολόγηση των επιλεγμένων μικρών μορίων

Μια προηγούμενη έκθεση πρότεινε ότι ρεΐνης θα μπορούσε να προκαλέσει απόπτωση σε ανθρώπινα κύτταρα προμυελοκυτταρικής λευχαιμίας (HL-60), που χαρακτηρίζεται από την ενεργοποίηση της κασπάσης, διάσπαση PARP, και του κατακερματισμού του DNA [38]. Όπως έχουμε έρθει να κατανοήσουν τις σχέσεις μεταξύ της επιγενετική κατάσταση των τελομερών, PARP και μικρών μορίων θα ανοίξει νέους δρόμους για την κατανόηση της ανάπτυξης νέων φαρμάκων για τη θεραπεία του καρκίνου. Κατανόηση του τρόπου δράσης της ανθρακινόνης με βάση αντικαρκινικών φαρμάκων έχει αυξηθεί τα τελευταία χρόνια, αλλά εξακολουθεί να παραμένει ατελής. Τα τελευταία χρόνια, έχουμε επίσης αξιοποιηθεί μια σειρά από οικογένειες των τελομερών στόχευση της ανθρακινόνης με βάση το φαρμακοφόρο να δημιουργήσει διαρθρωτικές καινοτομία και τη διαφορετικότητα για βιολογικά σχετικές μελέτες τους. Αποδείχθηκε ότι οι επίπεδες ανθρακινόνες προσδένονται στο άκρο της δομής G-τετραπλών μέσω π-π αλληλεπιδράσεις στοίβαγμα με κατάλοιπα γουανίνης [39] – [43]. Αποδείχθηκε επίσης ότι οι αμιδο-ανθρακινόνες αντιπροσωπεύουν ένα από τα καλύτερα μικρά μόρια να διαμορφώνει DNA δίπολα και τετραπλά επιλεκτικότητα [44], [45].

Οι επτά ανθρακινόνης που προέρχονται από μικρά μόρια (NSC746364, NSC746365, NSC746366, NSC747515, NSC747854, NSC749235, και NSC749232) (Σχήμα 2) αξιολογούνται στην παρούσα επιλέχθηκαν επειδή εμφάνισαν σημαντική κυτταροτοξικότητα, τα οποία προκαλούν δράση έναντι 60 φατνώματος του πλήρους NCI των ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών που προέρχονται από κυτταρικούς τύπους εννέα καρκίνος: NSCLC, καρκίνου του παχέος εντέρου, του μαστού καρκίνος, καρκίνος των ωοθηκών, λευχαιμία, καρκίνο του νεφρού, το μελάνωμα, ο καρκίνος του προστάτη, και του καρκίνου του ΚΝΣ. Υπάρχει επιπλέον απόδειξη ότι αυτά τα δοσοεξαρτώμενη ανέστειλε πολλαπλασιασμοί σε όλες τις κυτταρικές σειρές 60 καρκίνος, η κυτταροτοξικότητα, και PARP-1 προήλθαν από τα πειράματα φαίνονται σε αυτή τη μελέτη. Επιπλέον, όλες αυτές οι επτά ενώσεις επιλέχθηκαν για περαιτέρω αξιολόγηση σε πέντε διαλογής επίπεδο δόσης. Σε αυτή τη μελέτη όλα δείχνουν καλή δραστικότητα με ΓΕ

50, TGI και LC

50 σε κυτταρικές σειρές NSCLC, αντίστοιχα. Με βάση την ανάλυση του NCI τους, είναι η υπόθεση ότι αυτά τα φάρμακα μπορεί να έχουν δυνατότητα να είναι αντικαρκινικά υποψηφίων φαρμάκων. Προς το σκοπό αυτό, επιλέξαμε NSCLC ως πρωταρχικός στόχος μας. Ακόμη NSC747854 είναι πιο ευαίσθητο στο στήθος, η νεφρική και των ωοθηκών καρκίνους της οθόνης γραμμή 60 κυττάρων NCI (Εικόνα 3). Με την αξιοποίηση των πρόσφατων διαρθρωτικών διορατικότητα στις κυτταρικές σειρές NSCLC από το Πρόγραμμα Ανίχνευσης Ναρκωτικών NCI, αναλύσαμε την GI

50, TGI, και LC

50, καθώς και ανασταλτική δραστηριότητα PARP και το IC

50 στον καρκίνο του πνεύμονα που υπερεκφράζουν Oct4, Nanog κλώνος (Α3), του πνεύμονα καρκινική κυτταρική γραμμή (Α549) και η κανονική κυτταρική γραμμή ινωδοβλάστου (HEL299), αντίστοιχα. προηγούμενο αποτέλεσμα μας πρότεινε ότι η Α549 που υπερεκφράζουν Oct4 και Nanog κλώνος είναι περισσότερο ανθεκτικά στο αντικαρκινικό φάρμακο, σισπλατίνη, σε σύγκριση με το γονικό κύτταρο Α549 [46].

Η

α) Μία δομή του NSC747854. β) Η αντικαρκινική δράση του NSC747854 σε NCI-60 κυτταρικές γραμμές καρκίνου που υποβλήθηκε στην ΝΟΙ Developmental Therapeutics Program (National Institutes of Health), προκειμένου να εξεταστεί η επίδρασή της σε ένα πάνελ από 60 καρκινικές κυτταρικές σειρές που προέρχονται από διάφορους ιστούς και όργανα. Η GI

50 σε λογαριθμική κλίμακα υπολογίστηκαν και παρουσιάζονται στο γράφημα μπαρ. Η μεσαία γραμμή αντιπροσωπεύει την μέση συγκέντρωση αναστολής της ανάπτυξης 50% για NSC747854 (

δηλαδή

6,92 μΜ).

Η

Οι εξελίξεις έρευνα κάλυψε γίνονται στις ομάδες μας και με την προϋπόθεση συζητήσεις σχετικά με κάποια επιλεγμένα ανθρακινόνη προέρχεται μικρά μόρια τα οποία σε διάφορες κλάσεις καλύπτουν τις σχέσεις δομής-δραστικότητας (SAR), βιολογικές δραστηριότητες και πληροφορίες σχετικά με βιοχημικές οδούς. Ωστόσο, όταν αρχικά αποκαλύφθηκαν τα ενδιαφέροντα προφίλ της αναστολής ανάπτυξης κυττάρου όγκου, κυτταροτοξικότητα, τελομεράση ανασταλτική δράση και ανασταλτική δραστηριότητα ΡΑΚΡ, διαπιστώθηκε ότι ένας μοριακός στόχος θα πρέπει να εκκαθαριστούν: Αυτές οι μικρές αναστολείς των τελομερών στοχευμένη μόριο σχεδιασμένο ζητουμένη αντικαρκινική δράση και PARP αναστολή μέσω άγνωστων μηχανισμών δράσης. Σε αυτή τη μελέτη, περιγράφουμε τις διεπιστημονικές αποδεικτικά στοιχεία, προσεγγίσεις και τα πειράματα που αναλαμβάνονται για τη διαλεύκανση SARS στην ανασταλτική δραστηριότητα PARP διαφόρων ανθρακινόνης που προέρχονται από ενώσεις ως πιθανοί στόχοι αντικαρκινικών. Το μοριακό προσέγγιση, η απόδειξη της αντικαρκινική δραστικότητα και δραστικότητα τελομεράσης έχει επίσης ληφθεί και να συζητηθούν. Όπως συνοψίζεται στον Πίνακα 1, οι επτά συνθετικά μικρά μόρια μελετήθηκαν για αντιπολλαπλασιαστική δραστικότητα έναντι ανθρώπινων κυτταρικών σειρών NSCLC στο Πρόγραμμα Screen Drug NCI. Ένα κοινό δομικό χαρακτηριστικό των αναστολέων ΡΑΚΡ-1 είναι η παρουσία μιας ομάδας καρβοξαμιδίου που συνδέεται με ένα πολυ-κυκλικό σκελετό. Το άτομο οξυγόνου από την ομάδα καρβονυλίου μπορούν να δρα ως δέκτης δεσμού υδρογόνου, και το άτομο υδρογόνου από τις λειτουργίες ομάδας αμιδίου ως δότης δεσμού υδρογόνου στην αλληλεπίδραση δεσμού υδρογόνου με PARP-1 [45]. Έχει αναφερθεί πρόσφατα ότι ένα πρόσφατα καλαμπόκι σχήματος υδρόφοβη υπο-θέση αναδύεται από τη δραστική θέση της PARP-1 όταν ΡΑΚΡ-1 σύμπλοκο συνδυάζεται με τους αναστολείς PARP-1 [47]. Οι περισσότερες από τις επιλεγμένες ενώσεις δοκιμής προστέθηκαν στις γραμμές NSCLC? ίσως να ήταν στο μικρο-μοριακή επίπεδο. Όλες οι επτά επιλεγμένων ενώσεων σχεδόν παρουσίασαν αξιοσημείωτες αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις στα κύτταρα Α549, με ΓΕ

50 τιμές στο χαμηλό εύρος (Πίνακας 2). Σε συνδυασμό με τις μελέτες, που σχεδίαζε να χρησιμοποιήσει αυτά τα επτά ενώσεις για την περαιτέρω διερεύνηση της

in vitro

PARP-1 δοκιμασία αναστολής. Η κατανόηση των οδών κυτταρικού θανάτου για την επιλεκτική θανάτωση των χημειο-ανθεκτικά όγκους NSCLC θα οδηγήσει σε πιο αποτελεσματικές στρατηγικές. Μέχρι στιγμής, δεν υπάρχουν χημειοθεραπευτικούς παράγοντες έχουν αναπτυχθεί που εκμεταλλεύονται PARP-1 υπερ-ενεργοποίησης για θεραπεία NSCLC. Επομένως, έχει προταθεί ότι η αναστολή της PARP-1 μπορεί να αυξήσει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας προκαλούν βλάβη στο DNA αντικαρκινικά. Όπως σημειώνεται σε αυτές σύντροφος μικρά μόρια, NSC747854 είναι χημικά και βιολογικά νέα μοναδικό μηχανισμό δράσης της και

in vitro

μοτίβο δραστηριότητας. Σε αυτή την έρευνα, παρουσιάζουμε στοιχεία ότι NSC747854 διαθέτουν μια σειρά από φαρμακολογικά επιθυμητές ιδιότητες που έχει μια διαφορετική μορφή πολλαπλών καταγραφής της δραστηριότητας και μοναδικά μηχανισμούς δράσης στην οθόνη γραμμές 60 κυττάρων του ΝΚΜ (Σχήμα 3).

Η

In vitro κυτταροτοξικότητα

αξιολόγηση

για την περαιτέρω και λεπτομερή αξιολόγηση αυτών των επτά ενώσεων, χρησιμοποιούμε δοκιμασία ΜΤΤ κατά κύτταρα Α549 να συγκρίνει αυτές τις ενώσεις με 3-ΑΒ και PJ-34 τα οποία είναι τα δεδομένα φαίνεται στο Σχήμα 4. Το IC

50 τεσσάρων ενώσεων (NSC746364, NSC746365, NSC746366 και NSC749232) ήσαν μεταξύ 1 και 10 μΜ σε κύτταρα Α549. Είναι ενδιαφέρον ότι η κυτταροτοξικότητα των επτά ενώσεων στην κυτταρική γραμμή A3 ήταν καλύτερη από ό, τι ήταν στο Α549 κυτταρική γραμμή. Σε γενικές γραμμές, τα δύο από τα δύο φάρμακα, 3-ΑΒ και PJ-34, δείχνουν χειρότερα κυτταροτοξικότητα από τις επιλεγμένες ενώσεις (Πίνακας 3). Σε σύγκριση με την κυτταρική γραμμή Α549, ανακαλύψαμε ότι τα ποσά του ΡΑΚΡ-1 έκφρασης αυξήθηκε σημαντικά στην κυτταρική γραμμή Α3 στο Σχήμα 6Α. Έτσι, πήραμε την κυτταρική σειρά Α3 να είναι κυτταρική σειρά που βασίζεται σε πλατφόρμα διαλογής φαρμάκων μας. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα κύτταρα A3 έως έξι ενώσεις (εκτός NSC746364) ήταν περισσότερο ευαίσθητα από τα κύτταρα Α549. Αυτό το ενδιαφέρον φαινόμενο εμφανίστηκε επίσης σε αναστολείς PARP-1 (3-ΑΒ και PJ-34) (Πίνακας 3). Βάση για μια σειρά υποθέσεων αυτού του είδους την έρευνα, ελπίζαμε ότι η ανάπτυξη νέων φαρμάκων υπόσχεται όχι μόνο να παρέχουν καλή κυτταροτοξικότητα, αλλά υπόσχεται επίσης να οδηγήσει σε καμία σημαντική επίδραση σε φυσιολογικά κύτταρα. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιήσαμε HEL299 κύτταρα ως φυσιολογικές κυτταρικές σειρές μας? υποβάλλαμε σε αγωγή αυτή την φυσιολογική κυτταρική σειρά με επτά ενώσεις και δύο αναστολείς PARP-1, προκειμένου να δοκιμαστεί η κυτταροτοξικότητα αυτών των επιλεγμένων ενώσεων και δύο αναστολείς PARP-1 κατόπιν φυσιολογικά κύτταρα. Το IC

50 δεδομένα των αναλύσεων ΜΤΤ από αυτές τις ενώσεις δείχνονται στο Σχήμα 5. Τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα του επτά ενώσεις ήταν ελαφρώς καλύτερα σε Oct-4- και Nanog-υπερεκφράζεται Α549 κλώνος (Α3) και τα καρκινικά κύτταρα από ό, τι στα φυσιολογικά κύτταρα. προηγούμενη μελέτη μας απέδειξε Oct-4- και Nanog-υπερεκφράζεται κλώνος Α549 (κλώνος # 3? Α3), και αυτό A3 adenocarcinomal κυτταρική γραμμή παρουσίασε τις ιδιότητες του καρκίνου βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν και επιθηλιακά μεσεγχυματικά δια-καθώς και μεταστατική ικανότητα [46 ], [48]. Τα αποτελέσματα της στύπωμα Western κατέδειξε ότι αυτή η κυτταρική γραμμή Α3 εντόνως εκφρασμένων PARP-1, αλλά όχι σε γονικά το Α549 και τα κύτταρα HEL299 (Σχήμα. 6Β). Είναι σημαντικό ότι, πλέον, A3-Α549 κυτταρική γραμμή παρουσιάζει ενδογενώς τα υψηλά επίπεδα έκφρασης του CD133 (δείκτης του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων) και ABCB1 καθώς ABCG5 (γονίδια ανθεκτικά σε φάρμακο), σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα Α549 [46], [48]. Σε αυτή τη μελέτη, τα αποτελέσματα του δυτικού στυπώματος κατέδειξε ότι αυτή η κυτταρική γραμμή Α3 εντόνως εκφρασμένων PARP-1, αλλά όχι σε γονικά το Α549 και τα κύτταρα HEL299 (Σχήμα 6). Στο Σχήμα 6c, τα στοιχεία έδειξαν ότι ο κλώνος Α3 μπορούν να σχηματίσουν σημαντικά τα ογκο-σφαίρες στο μέσο χωρίς ορό με bFGF και EGF (10 ng /ml). Επιπλέον, τα αποτελέσματα του σχηματισμού σφαίρας και κυτταρική ανάλυση βιωσιμότητας έδειξαν ότι οι ενώσεις του NSC747854, NSC749232, και NSC749235 σε επεξεργασία A3 κλώνο μπορεί να εμποδίσει αποτελεσματικά το σχηματισμό σφαίρα και αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων in vitro (Σχήμα 6D και 6Ε). Αξίζει να σημειωθεί ότι, με τη χρήση ποσοτικής RT-PCR, αποδείξαμε ότι οι ενώσεις του NSC747854, NSC749232 και NSC749235 μπορούν να αναστείλουν τα επίπεδα έκφρασης της PARP-1 σε κύτταρα κατεργασμένα Α3 (Σχήμα 6F). Μετά Α3, Α549 και κύτταρα HEL299 υποβλήθηκαν σε αγωγή με ενώσεις, συγκρίναμε το ποσοστό επιβίωσης αντίστοιχα μεταξύ της Α549 κυτταρικής γραμμής και την κυτταρική γραμμή HEL299 με τη χρήση ενός μη ζευγαρωμένου με δύο tailed t-test που NSC749232 είχαν σημαντική διαφορά. Σε σύγκριση με την κυτταρική γραμμή Α3, NSC747854, NSC749232 και NSC749235 είχαν σημαντικά διαφορετικό ποσοστό επιβίωσης για την κυτταρική σειρά HEL299. Αισθητά, 3-ΑΒ και PJ-34 θα είναι επίσης σχετικά επιβλαβής για φυσιολογικό κυτταρική γραμμή ινωδοβλάστου (HEL299) σε αυτή τη μελέτη. Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι NSC747854 δεν επηρεάζει την ανάπτυξη και την γενική μεταγραφή των φυσιολογικών κυττάρων. Επιπλέον, NSC747854 και άλλα επιλεγμένα ανθρακινόνης που προέρχονται από τα μικρά μόρια είναι γενικά πιο ισχυρό από 3-ΑΒ και PJ-34. Ήταν η πρώτη αναφερθεί ότι τα ανάλογα ανθρακινόνης είναι ισχυροί αναστολείς PARP ανθρώπινα. Μαζί, τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ επεκτείνουν διορατικότητα μας στα αναστολείς PARP και υποστηρίζουν το προβάδισμα βελτιστοποίηση των δομικά συγγενών μικρών μορίων για θεραπεία ανθρώπινου καρκίνου πόρων απαιτητικές. Το IC

50 δεδομένα των αναλύσεων ΜΤΤ από αυτές τις ενώσεις δείχνονται στο Σχήμα 5.

τιμές βιωσιμότητας κυττάρων που εκφράζονται σε σχέση με αυτά τα φρεάτια στα οποία διάφορες ενώσεις δεν προστέθηκαν (τιμή ελέγχου 100%). Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει ένα μέσες τιμές ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Οι τιμές αντιπροσωπεύουν κατά μέσο όρο τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

α) Σε σύγκριση με το έκφραση μιας πρωτεΐνης housekeeping β-τουμπουλίνης, η έκταση της PARP-1 σε κύτταρα Α3 υπολογίζεται ότι είναι περισσότερο από ό, τι σε Α549 και HEL299 κύτταρα. β) Η μορφολογία των κυττάρων A3 καλλιεργήθηκαν σε 10% ορό μέσο περιείχε. γ) Σύμφωνα με ελεύθερο ορού με bFGF και EGF (10 ng /ml) ο πολιτισμός, ο σχηματισμός σφαίρα όγκου (βέλη) των κυττάρων Α3 παρατηρήθηκε (bar = 60 μm). Οι ενώσεις του NSC747854, NSC749232, και NSC749235 μειώθηκε δ) η βιωσιμότητα των κυττάρων, ε) εμποδίζουν το σχηματισμό σφαίρα, και στ) αναστέλλουν τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της Parp1 σε κατεργασμένα κύτταρα Α3. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει ένα μέσες τιμές ± SD από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Επίσης, η τρέχουσα εργασία δείχνει ότι το IC

50 αυτών των επιλεγμένων επτά ενώσεις εναντίον δύο καρκινικών κυττάρων ήσαν μικρότερη από εκείνη του αναστολέα PARP-1. Οι περισσότερες από αυτές τις επιλεγμένες ενώσεις στερούνται τοξικότητας προς τα φυσιολογικά ινοβλάστες. Για να διαλευκανθεί το SAR και

in vitro

αντικαρκινική δράση, θα συσχετιστεί προφίλ τους δραστηριότητα (GI

50, TGI και LC

50) στο σύστημα ελέγχου, καθώς και τις επιπτώσεις τους στην κυτταρική πολλαπλασιασμούς, κυτταροτοξικότητα και PARP-1 ανασταλτικά αποτελέσματα.

PARP ανασταλτική αξιολόγηση των επιλεγμένων μικρών μορίων

Μέχρι σήμερα, ένας αριθμός οικογενειών των ενώσεων έχουν αναπτυχθεί και δραστηριότητα PARP τους και κυτταροτοξικότητα έχουν μελετηθεί εκτενώς. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι αντικαρκινικές δυνατότητες της ανθρακινόνης προερχόμενων μικρών μορίων έναντι κυττάρων που βασίζονται, τουλάχιστον εν μέρει, να αποδοθεί αντικαρκινικές επιδράσεις του και ανασταλτική δραστηριότητα ΡΑΚΡ. Τα μοναδικά προφίλ μοριακό χαρακτηρισμό, κυτταροτοξικότητα και η δραστηριότητα της τελομεράσης απαιτούν περαιτέρω διερεύνηση και υποδεικνύουν μια πιθανή νέο μηχανισμό αντικαρκινική δράση που εμπλέκονται. Μικρά μόρια που ρυθμίζουν PARP-1 ανασταλτική θα παρέχει πιθανόν νέες γνώσεις σχετικά με τη ρύθμιση αυτού του κλειδιού αναπτυξιακό μονοπάτι και τελικά παρέχουν πεδίο μας με δυνητικούς νέους φαρμακολογικούς παράγοντες, όπως αντικαρκινικά φάρμακα. Παρά το γεγονός ότι πολλά προγράμματα ανακάλυψη φαρμάκων διαλογή για νέες PARP-1 αναστολείς μικρού-μορίου, δεν υπάρχει κατάλληλο υποψήφιος έχει ακόμη βρεθεί να κατέχουν αρκετά ισχυροί και ειδικοί αναστολείς. Ως αποτέλεσμα, βρήκαμε ότι η δοσο-εξαρτώμενη δυναμικό PARP-1 αναστολέας NSC747854 ήταν η μόνη ένωση που ακολούθησαν όλα τα κριτήρια που αναφέρονται παραπάνω.

Χρησιμοποιήσαμε πλάκα 96 φρεατίων ιστόνης επικαλυμμένα αντιμετωπίζονται με επτά υποθετικό PARP- 1 αναστολείς ή γνωστούς αναστολείς PARP-1 (3-ΑΒ), και στη συνέχεια προστέθηκε το ένζυμο PARP σε κάθε φρεάτιο. ενζύμου PARP καταλύει την εξαρτώμενη από ΝΑϋ προσθήκης πολυ (ΑΟΡ-ριβόζη) προς ιστόνης, και αραιώνεται STRP-HRP μπορούσε να συνδεθεί με PARylation ιστόνης. Τα TAC-Sapphire ™ απέδωσε μπλε κάτω από την ύπαρξη HRP. Προκειμένου να αξιολογηθεί το δυναμικό συστηματικά αντικαρκινική δράση, οι ενώσεις ελέγχθηκαν ως προς την κυτταροτοξικότητα τους

in vitro

κατά 60 ανθρώπινες γραμμές καρκίνου στην οθόνη αντικαρκινικό φάρμακο NCI καθώς και για τις καμπύλες δόσης-απόκρισης και δράση της τελομεράσης. Η ανάπτυξη των κυττάρων αναλύθηκε με τη δοκιμασία ΜΤΤ, με τις διαφορές μεταξύ των καμπυλών δόσης-απόκρισης αναλύονται μη παραμετρικά. Η δραστικότητα τελομεράσης ανιχνεύεται από μία τροποποιημένη εκδοχή του βασίζεται σε PCR δοκιμασία και TRAP ποσοτικού προσδιορισμού [31]. NSC746364, NSC746365 και NSC746366 είναι δομικά 2,7- παράγωγα diamidoanthraquinone? NSC747515, NSC747854 και NSC749235 είναι 1,2-heteroannelated παράγωγα ανθρακινόνης, NSC749232 είναι ένα ασύμμετρο παράγωγο 1,2-diamidoanthraquinone, σε σύγκριση με άλλες κλινικά αντικαρκινικά φάρμακα και έχουν επιδείξει ένα μοναδικό κυτταροτοξικότητα στην κυτταρική γραμμή υψηλής εκφράζεται ΡΑΚΡ-1, A3 . Δεδομένου PARP είναι ένα σημαντικό συστατικό των καρκίνων, μας ενδιαφέρει για την εξέταση των επιδράσεων αυτών των ενώσεων επί της δραστικότητας της PARP, έτσι αποκάλυψε ένα δυνητικό αναστολέα PARP μέσω διαφόρων προσεγγίσεων δοκιμής. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 7, 3-ΑΒ, η ανασταλτική δράση PARP συμπεριφέρθηκε με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Τα ανασταλτικά αποτελέσματα PARP επτά ενώσεων αποκάλυψε ότι NSC746364, NSC746366 και NSC749232 αναστέλλουν τη λειτουργία του ενζύμου PARP αύξηση μαζί με την αύξηση συγκέντρωσης σε 0.1 και 1 μΜ. Ωστόσο, ανασταλτικά αποτελέσματα PARP είχε καμία διαφορά στα 1 και 10 μΜ. Όπως περιγράφεται παραπάνω, NSC746364, NSC746366 και NSC749232 δείχνουν εξάρτηση από τη δόση μόνο σε χαμηλές συγκεντρώσεις. NSC746364 και NSC746366 έδειξε PARP ανασταλτική δράση της 56% και 47%, αντίστοιχα. NSC747515 είχε παρόμοια ανασταλτική δράση PARP σε 0.1, 1 και 10 μΜ. NSC747854 είχε δοσοεξαρτώμενη ανασταλτική ήθη PARP σε τρεις διαφορετικές συγκεντρώσεις, και έφθασε το μέγιστο ανασταλτικό αποτέλεσμα του 86% στα 10 μΜ (Πίνακας 4). Φαρμακοδυναμικές μελέτες του αναστολέα PARP-1, όπως 3-ΑΒ, έδειξε δοσο-εξαρτώμενη αναστολή της δραστικότητας της PARP σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος. Προς το σκοπό αυτό, NSC747854 έδειξε το μέγιστο ανασταλτικό αποτέλεσμα σε ένα εξαρτώμενο από την δόση ανασταλτικό τρόπο PARP. Ως εκ τούτου, NSC747854 μπορεί να είναι ο πιο ισχυρός υποψήφιος αναστολέας PARP που ακολούθησαν όλα τα κριτήρια που αναφέρονται παραπάνω. Στην παρούσα έρευνα, συνεχίσαμε να εστιάσουμε την προσοχή μας σχετικά με το ρόλο των NSC747854 και να κατανοήσει τη βάση του φαρμακοφόρου επιλεκτικότητα. Από την ιδιαίτερη σημείωση είναι η σημαντική διαφορά σε σχέση με αυτές επιλεγμένων ενώσεων, σε σύγκριση με εκείνη των 3-ΑΒ και PJ-34. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι περισσότερες από αυτές τις επιλεγμένες ενώσεις περιέχουν ένα μοναδικό αμίνη με ένα έως τρεις χαρακτηριστικές ομάδες συνδετήρα χώρο άνθρακα το οποίο θα μπορούσε να προσφέρει μια δομική βάση για τις διαφορές στην δραστικότητα μεταξύ αυτών και άλλων αναστολέων της PARP-1. Από γενική άποψη δομής-δραστικότητας, τρικυκλικά επίπεδες ανθρακινόνης απέδειξαν ότι οι δομικές παραλλαγές θα μπορούσε να οδηγήσει σε σημαντικές αλλαγές στην ειδικότητα και την ισχύ σε σχέση με αντικαρκινική δράση. Ένα ηλεκτρόνιο-πλούσιο αρωματικό σύστημα δακτυλίου, συμπεριλαμβανομένου ενός καρβοξαμιδίου ομάδα, θα πρέπει να έχει τουλάχιστον ένα άτομο υδρογόνου επί του αζώτου αμίδης [47]. Το τμήμα του αμιδινίου είναι γνωστό ότι συμβάλλουν στη σταθεροποίηση του στοιχείου αναγνώρισης DNA μέσω ηλεκτροστατικών και υδρογόνο αλληλεπιδράσεις σύνδεσης [49]. Ως εκ τούτου, οι δεσμοί υδρογόνου που χρησιμοποιούνται συχνά σαν στοιχεία αναγνώρισης λόγω κατευθυντικότητα τους και επίσης λόγω του ότι είναι ελκυστική παραγόντων στη βιολογική δράση (Σχήμα 1) [50]. Πολλές κατηγορίες φαρμάκων έχουν ουσιαστική καμπυλότητα, υψηλής συγγένειας DNA, σύνδεση προς τον ελάσσονα αύλακα ή μεγάλων αυλάκι, παρεμβολή με ένζυμα DNA που σχετίζεται (π.χ. τελομεράσης), και πολυ (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης, PARP. Οι δεσμευτικές συγγένειες και εξειδικεύσεις παρατήρησε δείχνουν ότι η ενσωμάτωση μιας ποικιλίας χαρακτηριστικών ομάδων θα οδηγήσει σε ουσίες που αλληλεπιδρούν με τους στόχους PARP. Η προσέγγιση αυτή επεκτείνει σε μεγάλο βαθμό τη χρησιμότητα των υποκαταστατών και των συναφών φαρμακοφόρο για την κατασκευή των φαρμάκων εν γένει. Ως εκ τούτου, είναι επιθυμητό να σχεδιάσουμε αναστολείς PARP σύμφωνα με διάφορες παραμέτρους αντικαρκινικά. Ήταν η πρώτη αναφερθεί ότι τα ανάλογα ανθρακινόνης είναι ισχυροί αναστολείς PARP ανθρώπινα.

3-ΑΒ είχαν δοσοεξαρτώμενο ανασταλτικές επιδράσεις PARP, και η πιο προφανής δοσοεξαρτώμενη PARP ανασταλτική επίδραση στα επτά υποψηφίους αναστολέας PARP ήταν NSC747854. Σε 0.1 και 1 μΜ, PARP ανασταλτική επίδραση της NSC746364, NSC746366 και NSC749232 αυξήθηκε μαζί με τη συγκέντρωση αυξάνεται, αλλά σε 1 και 10 μΜ, PARP ανασταλτική επίδραση δεν είχε καμία σημαντική διαφορά.

Η

Μετά την δείχνει ελπιδοφόρα αποτελέσματα σε πολλές προκλινικές μελέτες, δύο βενζο [c] παράγωγα φαινανθριδίνη: dihydronitidine (DHN), nitidine (NTD) έχουν δειχθεί εκλεκτική κυτταροτοξικότητα [51], [52]. PJ-34, ήταν η πιο πολλά υποσχόμενη μικρό μόριο και επίσης εμπόδισε αποτελεσματικά την ανάπτυξη των κυττάρων MDA-231 και καρκινικά κύτταρα πνεύμονα Η1299 χωρίς να επάγουν ανιχνεύσιμα τοξικά αποτελέσματα στα φυσιολογικά ανθρώπινα κύτταρα πολλαπλασιασμού [23]. Θα μπορούσε να γνωρίζει ότι τα παράγωγα φαινανθρενο σχετίζονται διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στον τομέα των αναστολέων PARP και επιλέγει ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα. Συμπερασματικά, τα δεδομένα σε αυτό το άρθρο αναφέρει ότι οι ενώσεις εμφανίζουν ισχυρή και απόκλιση

in vitro

δραστικότητα έναντι κυττάρων NSCLC και ιδιαίτερα PARP-1 υψηλής εκφράζεται καρκινικά κύτταρα συγκριτικά με φυσιολογικά κύτταρα ινοβλαστών κατά τη διάρκεια αυτών των πειραμάτων. Με βάση αυτά τα φαρμακολογικά επιθυμητές ιδιότητες και το ευρύ φάσμα

in vitro

δείκτης της δραστηριότητας (GI

50, TGI, και LC

50) αναφέρονται, NSC747854 υφίσταται σήμερα πιο λεπτομερής προκλινικές φαρμακολογία και τοξικολογικές μελέτες μέσω εργαστηριακών μας. Συλλογικά, οι μελέτες αυτές δείχνουν ότι η ανθρακινόνη προερχόμενο μικρά μόρια μπορούν να επάγουν φαρμακολογικές και βιοχημικές λειτουργίες του ΡΑΚΡ-1 αναστολής. Τα δεδομένα μας εκτείνεται σαφώς τα βιολογικά αποδεικτικά στοιχεία που χρησιμοποιούνται από τις επτά επιλεγμένων ενώσεων. Σε ό, τι γνωρίζουμε, ανθρακινόνες δεν έχουν ποτέ αναφερθεί ότι προκαλεί PARP-1 αναστολή. Στο σύνολό τους, οι μελέτες μας υποστηρίζουν το συμπέρασμα ότι οι δοκιμαστεί μόρια NSC747854 μοιράζονται έναν κοινό στόχο στο τελομεράσης και PARP που μπορεί να είναι ένα μυθιστόρημα λιγότερο τοξικά τροπικότητα της θεραπείας του καρκίνου. χρήση PARP-1 αναστολέα στη θεραπεία του καρκίνου είναι ένα θέμα υψηλού προφίλ σήμερα. High-εκφράζεται PARP-1 είναι μια εισαγωγή-ανθεκτικό μηχανισμό. Στη μελέτη μας, ανακαλύψαμε ότι υπάρχει ένα υψηλό PARP-1 έκφραση στην κυτταρική σειρά Α3, η οποία θα μπορούσε επίσης να αξιοποιηθεί για τη διαλογή φαρμάκων αναστολέων PARP-1. Ως μέρος της συνεχιζόμενης αναζήτησης για νέους, ισχυρούς και κύτταρο-διαπερατό αναστολείς αυτού του ενζύμου, επίσης διερευνηθεί επιπλέον ανθρακινόνης προερχόμενο ανάλογα της NSC747854. Προκαταρκτικές μηχανιστικές μελέτες, συμπεριλαμβανομένης της επίδρασης επί της PARP-1 οδούς αναστολής και κυτταροτοξικότητα, έγιναν έτσι πραγματοποιείται με σκοπό να αποκαλύψει μια πιο λεπτομερή εικόνα των πιθανών στόχων. Περαιτέρω αξιολόγηση θα αναφερθεί στο εγγύς μέλλον.

Υλικά και Μέθοδοι

Σχεδιασμός και σύνθεση των χημικών ενώσεων

Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν κάποιες από τις δυνατότητες των νέων μικρών μορίων ως αντικαρκινικά παράγοντες [17] – [26]. Οι λεπτομέρειες της σύνθεσης και χημικών χαρακτηριστικών των NSC746364, NSC746365, NSC746366, NSC747515, NSC747854, NSC749235 και NSC749232 έχουν περιγραφεί προηγουμένως σε ξεχωριστή έκθεση και έτσι έχουν κάποια νέα συνθετικά παράγωγα από το εργαστήριο μας. Ενώσεις όπως αυτές που περιγράφονται εδώ, οι οποίες αλληλεπιδρούν επιλεκτικά με NCI Developmental Therapeutics Program του

in vitro

60 κυτταρικές γραμμές διαλογή και αναστέλλουν τελομεράσης, είναι πιθανώς χρήσιμα ως αναστολείς του πολλαπλασιασμού των κυττάρων που απαιτούν τελομεράσης για να διατηρήσει το μήκος των τελομερών για τη συνεχή ανάπτυξης.

Αξιολόγηση της ανθρακινόνης που προέρχονται από μικρά μόρια κατά NCI-60 καρκινικών κυτταρικών σειρών του πίνακα in vitro και περίληψη της προκαταρκτικής μελέτης

Ως προκαταρκτικό έλεγχο, επτά επιλεγμένες ενώσεις υποβλήθηκαν στο National Cancer Institute (NCI) κυτταρικές σειρές διαλογή για την αξιολόγηση της αντικαρκινικής δραστικότητας τους [53]. Από την ανάλυση των δεδομένων, προκύπτει ότι μπορεί να ταυτοποιηθεί το 95% περίπου των δραστικών από την οθόνη γραμμές 60 κυττάρων. Οι αναλυτικές μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για τη γράμμωση των 60 κυττάρων έχουν περιγραφεί αλλού [54] – [59]. Εν συντομία, κυτταρικά επίπεδα πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν μετά από 48 ώρες έκθεσης στο φάρμακο με SRB χρωματομετρία. Μέσα από τη χρήση ενός στοιχείου ελέγχου χρόνο μηδέν κυττάρων, η ανάπτυξη των κυττάρων μπορεί να προσδιοριστεί για κάθε κυτταρική γραμμή επιτρέποντας έτσι οι υπολογισμοί της GI

50, TGI, και LC

50. Σύγκριση με πλάκες που δεν έχουν εκτεθεί στο φάρμακο επιτρέπει τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης και των χρόνων της έκθεσης παρέχουν GI

50, TGI, και LC

50. Αυτά τα δεδομένα στη συνέχεια απεικονίζονται ως γραφήματα μέση γραμμή και ως καμπύλες δόσης-απόκρισης. Με αυτά τα κριτήρια, επτά ενώσεις που αναφέρθηκαν από ενώσεις τράπεζά μας ήταν όλοι ενεργά και προωθούνται για αξιολόγηση στην πλήρη πίνακα των 60 ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών. Το πάνελ είναι οργανωμένη σε εννέα υποπίνακες που αντιπροσωπεύουν διαφορετικές ιστολογία:. Λευχαιμία, μελάνωμα, και καρκίνο του πνεύμονα, του παχέος εντέρου, του νεφρού, των ωοθηκών, του μαστού, του προστάτη και του κεντρικού νευρικού συστήματος

Κυτταρική καλλιέργεια

μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα Α549 κύτταρα και Oct-4- και Nanog-υπερεκφράζεται κλώνος Α549 (κλώνος # 3? Α3), παρουσίασε τις ιδιότητες των καρκινικών βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν, καθώς και επιθηλιακά-μεσεγχυματικά transdifferentiation, σύμφωνα με την προηγούμενη μελέτη μας [46].