Αφηρημένο

Ιστορικό

Δεν υπάρχουν επικυρωμένοι βιοδείκτες που συσχετίζονται με την πρόγνωση του πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDA ). Η

CD24

και αδενωματώδη πολυποδίαση coli (

APC

) γονίδια είναι σημαντικές στην κακοήθη μετασχηματισμό των γαστρεντερικών κυττάρων. Αυτή η μελέτη εξέτασε

APC

και

CD24

γενετικών πολυμορφισμών και τις πιθανές επιπτώσεις τους στην επιβίωση των ασθενών με PDA.

Μέθοδοι

Η κλινική και παθολογική δεδομένων καθώς και και δείγματα αίματος για την εκχύλιση του DNA λήφθηκαν για 73 ασθενείς με PDA. Real-time PCR αξιολογούνται γενετικές παραλλαγές του

APC

(Ι1307Κ και E1317Q), και τέσσερα διαφορετικά πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) στο

CD24

γονίδιο: C170T (rs52812045), TG1527del (rs3838646) , A1626G (rs1058881) και A1056G (rs1058818).

Αποτελέσματα

Η διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 64 (41 – 90) έτη. Τριάντα ένας ασθενείς (42,5%) ήταν λειτουργική, 16 (22%) είχαν τοπικά προχωρημένη νόσο και 26 (35,5%) είχαν διαδοθεί μεταστατικό καρκίνο. Το ποσοστό θνησιμότητας κακοήθεια που σχετίζονται ήταν 84%. Η διάμεση επιβίωση ήταν 14 μήνες (11,25 – 16,74). Επιβίωση ήταν παρόμοια για άγριου τύπου (WT), ετερόζυγα και ομόζυγα παραλλαγές των

APC

ή

CD24

γονίδια. Οι τρεις πιο συχνές

CD24

συνδυασμούς SNP ήταν: ετεροζυγώτη για A1626G και WT για το υπόλοιπο από τα αλληλόμορφα (14% των ασθενών), ετεροζυγώτη για C170T, A1626G, A1056G και WT για το υπόλοιπο (14% των ασθενών ), και ετεροζυγώτη για C170T, A1056G και WT για το υπόλοιπο (10% των ασθενών). Όλοι οι ασθενείς ήταν APC WT. Οι δύο πρώτες ομάδες ήταν σημαντικά νεότεροι κατά τη διάγνωση από την τρίτη ομάδα.

Συμπεράσματα

Ειδικά πολυμορφισμούς στο

APC

και

CD24

γονίδια μπορούν να παίξουν ένα ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος. Συσχέτιση με την επιβίωση απαιτεί μια μεγαλύτερη ομάδα

Παράθεση:. Shamai S, Nabiochtchikov Ι, Kraus S, Zigdon S, D Kazanov, Itzhak-Klutch M, et al. (2015)

CD24

και

APC

γενετικών πολυμορφισμών σε καρκίνους του παγκρέατος ως πιθανούς βιοδείκτες για την κλινική έκβαση. PLoS ONE 10 (9): e0134469. doi: 10.1371 /journal.pone.0134469

Επιμέλεια: Jonathan R. Brody, Πανεπιστήμιο Τόμας Τζέφερσον, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 8 Μαρ του 2015? Αποδεκτές: 10 Ιουλ 2015? Δημοσιεύθηκε: 22 Σεπτεμβρίου 2015

Copyright: © 2015 Shamai et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:.. Χρηματοδοτείται από την εσωτερική νομαρχιακό ταμείων

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDA) είναι γνωστή για την υψηλή θνησιμότητα και μελαγχολική πρόγνωση. Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών είναι & lt? 6%. Στις ΗΠΑ το 2015, εκτιμάται ότι περίπου 48.960 νέοι ασθενείς θα πρέπει να διαγνωστεί, και 40.560 ασθενείς θα πεθάνουν από την ασθένειά τους. [1]. PDA προκαλείται ως αποτέλεσμα των μεταλλάξεων στον καρκίνο που σχετίζεται με τα γονίδια, η πλειοψηφία των οποίων είναι σποραδικές, και μόνο περίπου το 15% είναι βλαστικής σειράς μεταλλάξεων. Σποραδικές μεταλλάξεις επηρεάζουν αρκετά βασικά γονίδια. Μια πρώιμη έναρξη μετάλλαξη εμφανίζεται στο

K-Ras

ογκογονίδιο στο 90% των περιπτώσεων. Άλλοι επηρεάζονται συνήθως γονίδια είναι γονίδια καταστολής όγκων, όπως

TP53

,

CDKN2A

και

Smad4

, με νέες υποψηφίων οδηγών του παγκρέατος καρκινογένεση εντοπίστηκαν πρόσφατα (

KDM6A

και

PREX2

) [2]. Μεταλλάξεις σε μέτρια διεισδυτικά γονίδια ευαισθησίας, όπως

BRCA2

,

CDKN2A

, και

MLH1

, αντιπροσωπεύουν & lt? 5% των καρκίνων του παγκρέατος, γεγονός που υποδηλώνει ότι ένα μεγάλο μέρος του κληρονομούμενου κίνδυνο για την ασθένεια αυτή μπορεί να οφείλεται σε χαμηλή διεισδυτικότητα κοινή γενετικές παραλλαγές [3]. Η χημειοθεραπεία έχει μικρή επιτυχία στην υποτροπιάζουσα ή διαδίδονται καρκίνο του παγκρέατος. Τα καλύτερα θεραπευτικά αποτελέσματα έχουν επιτευχθεί με ένα συνδυασμό τριών διαφορετικών χημειοθεραπευτικών παραγόντων, αποδίδοντας ένα μέση επιβίωση λιγότερο από ένα [4] χρόνια. Τα στοιχεία αυτά υπογραμμίζουν την ανάγκη για περαιτέρω έρευνα και κατανόηση των μοριακών οδών που οδηγούν αυτήν την κακοήθεια.

CD24 είναι μια βλεννίνη-όπως πρωτεΐνη μεμβράνης, δένεται από γλυκοσυλοφωσφατιδυλοϊνοσιτόλης (GPI), και ο πυρήνας πρωτεΐνη αποτελείται από 27-31 αμινοξέα. Εκφράζεται κυρίως σε αιμοποιητικά κύτταρα, ως επί το πλείστον προδρόμους Β-κυττάρων, τα κύτταρα του κεντρικού νευρικού συστήματος και των επιθηλιακών κυττάρων [5-7]. Λειτουργεί ως ένα μόριο προσκόλλησης, σύνδεση προς Ρ-σελεκτίνη σε αιμοπετάλια και ενδοθηλιακά κύτταρα, καθώς και για την L1 πρωτεΐνη που εκφράζεται επί λεμφοειδών και νευρικών κυττάρων [5]. Η

CD24

γονίδιο έχει αρκετές γενετικές παραλλαγές, που προκύπτουν από πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs). Αυτές περιλαμβάνουν 170

C → Τ, έναν πολυμορφισμό που οδηγεί σε υποκατάσταση αμινοξέος από αλανίνη σε βαλίνη, σε μια θέση συνδεδεμένη με μεμβράνη που συνδέει μέσω της άγκυρας GPI [8-9]. Οι τρεις επιπλέον SNPs που βρίσκεται στο 3′-αμετάφραστη περιοχή, και περιλαμβάνουν 1626

A → G, 1056

A → G και 1527

tgde, η οποία μπορεί να επηρεάσει

CD24

mRNA σταθερότητα .

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι CD24 είναι ένας δείκτης για μια ποικιλία καρκινικών βλαστικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παγκρέατος [10]. Αλλαγές στην έκφραση CD24 σε κυτταρικές σειρές καρκίνου μπορεί να αλλάξει την κυτταρική ιδιότητες και την ανάπτυξη του όγκου. Είχαμε προηγουμένως δείξει ότι η θεραπεία των κυτταρικών σειρών του παγκρέατος και του παχέος εντέρου με αντι-CD24 μονοκλωνικά αντισώματα (MAbs) ή CD24 ρύθμιση προς τα κάτω, χρησιμοποιώντας μικρές φουρκέτα (sh) RNA πολλαπλασιασμός ανέστειλαν αποτελεσματικά κυττάρων

in vitro

και καθυστερημένος ογκογονικότητα σε γυμνούς ξενομοσχεύτηκε ποντικούς [11]. Ο ρόλος του

CD24

στο PDA είναι ακόμα ασαφής. Έχει συνδεθεί με κακή διαφοροποίηση, αλλά όχι για την επιβίωση [12]

Το ογκοκατασταλτικό γονίδιο,

APC

(αδενωματώδη πολυποδίαση coli), έχει ερευνηθεί εκτενώς και να συνδέεται με ορθοκολικό καρκίνο ανάπτυξη [ ,,,0],13,14]. Laken et al. ανέφεραν βλαστικής γραμμής παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη που προκάλεσε την υποκατάσταση του Τ σε Α στο νουκλεοτίδιο 3977, που οδηγεί στην εισαγωγή της λυσίνης (Κ) αντί του ισολευκίνη (Ι) στο κωδικόνιο 1307 (Ι1307Κ). Αυτό πιστεύεται ότι προκαλούν αστάθεια, συμβάλλοντας έτσι πιθανόν να κακοήθη μετασχηματισμό [15]. Ένα άλλο πολυμορφισμό, ο

APC

E1317Q παραλλαγή, είναι μία υποκατάσταση του γλουταμικού οξέος (Ε) για γλουταμίνη (Q) στο κωδικόνιο 1317 (E1317Q). Αυτό προκύπτει από το G σε υποκατάσταση C στο νουκλεοτίδιο 4006 και μπορεί να συνδεθεί με την ανάπτυξη του καρκίνου [16].

Ο ρόλος των

APC

το PDA δεν είναι σαφής. Έχει δειχθεί ότι οι όγκοι του παγκρέατος απέτυχε να αναπτυχθεί μετά την απενεργοποίηση του υπό όρους

APC

στο πάγκρεας, υποδηλώνοντας ότι

APC

απαιτείται για ογκογένεση στο πάγκρεας [17]. Μια προηγούμενη μελέτη που εξέτασε

APC

E1317Q και I1307 στο PDA βρέθηκε καμία συσχέτιση σε μια ομάδα 58 ασθενών [16]. Η παρούσα μελέτη στοχεύει να διερευνήσει την πιθανή συσχέτιση μεταξύ της κλινικής πορείας των PDA και γενετικές αλλαγές στο

CD24

και

APC

γονίδια.

Υλικά και Μέθοδοι

οι συμμετέχοντες

νεοδιαγνωσθέντες ασθενείς με PDA που έλαβαν στο Τμήμα Ογκολογίας στο Τελ Αβίβ Sourasky Ιατρικό Κέντρο, Τελ Αβίβ, Ισραήλ, μεταξύ 2000-2014, οι προοπτικά προσληφθεί για τη μελέτη. Μετά την απόκτηση γραπτή συγκατάθεση, ελήφθησαν δείγματα αίματος για ανάλυση και προσδιορισμό του γονότυπου του

CD24

και

APC

SNPs. αρχεία του ασθενούς ήταν αναδρομικά εμφανίσεις, και συλλέχθηκαν κλινικά και παθολογικά στοιχεία, συμπεριλαμβανομένων των δημογραφικών στοιχείων, το στάδιο της νόσου, η θεραπεία, η ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία και την επιβίωση. Η δίκη εγκρίθηκε από το τοπικό συμβούλιο Institutional Review (IRB, Sourasky ιατρικό κέντρο Helsinky επιτροπή) και το Ισραηλινό Υπουργείο Υγείας (Helsinky αριθμός έγκρισης 02-130, ισραηλινό υπουργείο εφαρμογής υγείας 919.990.171).

Γενετική Ανάλυση

μεθόδους προσδιορισμού.

το αίμα συλλέχθηκε σε σωληνάρια που περιέχουν EDTA. Λευκοκύτταρα περιφερικού αίματος (PBLs) απομονώθηκαν από δείγματα ολικού αίματος με τη συλλογή λευκών παλτά buffy που λαμβάνεται μετά από φυγοκέντρηση αίματος για 3 λεπτά στους 4 ° C στις 3000 rpm και απόρριψη του υπερκειμένου πλάσματος.

DNA Extraction

Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από PBLs με τυποποιημένες μεθόδους όπως περιγράφεται από τους Miller et al. [18].

προσδιορισμό των διαφόρων

CD24

πολυμορφισμοί

Σε πραγματικό χρόνο PCR (qPCR) χρησιμοποιήθηκε για να γονότυπο rs8734 (C170T), rs3838646 (TG1527del), rs1058881 (A1626G), και rs1058818 (A1056G)

CD24

πολυμορφισμούς χρησιμοποιώντας Προσαρμοσμένο TaqMan SNP Γονοτυπικές Αναλύσεις προσχεδιασμένα από την Applied Biosystems (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), σύμφωνα με τις τεχνικές διαδικασίες που συνιστώνται από τον κατασκευαστή. Τα αντιδραστήρια δοκιμασίας για SNP γονοτυποποίηση από τους προσδιορισμούς-by-design αποτελούνταν από ένα 40Χ μείγμα μη επισημασμένου εκκινητές PCR και ανιχνευτές TaqMan MGB (FAM και VIC χρωστικής-επισημασμένο). Αυτές οι δοκιμασίες έχουν σχεδιαστεί για την γονοτυποποίηση των συγκεκριμένων SNPs. Οι ακόλουθες αλληλουχίες εκκινητών χρησιμοποιήθηκαν:

Για τον πολυμορφισμό rs8734: πρόσθιος εκκινητής, GGTTGGCCCCAAATCCA? αντίστροφο εκκινητή, GACCACGAAGAGACTGGCTGTT? αλληλόμορφο 1 (VIC), CACCAAGGCGGCT? αλληλόμορφο 2 (FAM), CACCAAGGTGGCTG

Για τον πολυμορφισμό rs1058818:. πρόσθιο εκκινητή, AGCTAAACGGATTCCAAAGAGTAGAA? αντίστροφο εκκινητή, TGGGCGACAAAGTGAGACTGT? αλληλόμορφο 1 (VIC), TGCATTGACCACGACT? αλληλόμορφο 2 (FAM), TGCATTGACCGCGAC

Για τους rs3838646 και rs1058881 πολυμορφισμοί:.. Δοκιμασία ID AH0JB89 και Δοκιμασία ID AH1SAFH, αντίστοιχα (Applied Biosystems)

Οι προϋποθέσεις για την ενίσχυση PCR ήταν πανομοιότυπες. Οι αντιδράσεις PCR διεξήχθησαν σε ένα όγκο 10 μΐ που περιέχει 20 ng γενωμικού DNA και παρασκευάζονται χρησιμοποιώντας συστατικά TaqMan καθολική PCR Master Mix (Applied Biosystems), το οποίο περιείχε τα νουκλεοτίδια, ρυθμιστικό, ουρακίλη-Ν-γλυκοζυλάση, AmpliTaq, και μια παθητική χρωστική αναφοράς (ROX). Το μίγμα της αντίδρασης περιείχε 5.0μl του TaqMan καθολική PCR Master Mix, 2.75μl του H

2O, 0.25μl των συστατικών δοκιμασίας (σετ εκκινητών και ανιχνευτή ειδικό για κάθε πολυμορφισμό), και 2.0 μΐ του DNA από κάθε δείγμα. Ένα βήμα One Plus Real-Time PCR System (Applied Biosystems) χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση των πειραμάτων qPCR χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρωτόκολλο ποδηλασία. Το ποδήλατο ξεκίνησε από προθέρμανση στους 600 ° C για 30 δευτερόλεπτα και 950 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 40 κύκλους των 920 ° C για 15 δευτερόλεπτα, 600 ° C για 1 λεπτό και 600 ° C για 30 δευτερόλεπτα. Η StepOne v2.2 (Applied Biosystems) προγράμματος χρησιμοποιήθηκε για να ερμηνεύσει τα αποτελέσματα της αντίδρασης, χρησιμοποιώντας τη γραφική αναπαράσταση των εκπομπών φθοροφόρου VIC και FAM σε σχέση με συστατική εκπομπές ROX.

Η αξιολόγηση της Ι1307Κ Πολυμορφισμός κατά τη

APC

Gene

Γονιδιωματικό DNA ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας πρόσθιο εκκινητή (5 ‘-GAAATAGGATGTAATCAGACG – 3’) και αντίστροφο εκκινητή (5 ‘-AGTCTGCTGGATTTGGTTCTA – 3’). Για πραγματικό χρόνο PCR, ένας εκκινητής αισθητήρας σχεδιάστηκε σύμφωνα με την άγριου τύπου (WT) αλληλόμορφο και κατάντη σε αυτό ως ένα εκκινητή άγκυρα. Για την ανίχνευση του ειδικού πολυμορφικού νουκλεοτιδίου (Τ /Α στη θέση 3977 της SEQ ID ΝΟ: 7), ο εκκινητής άγκυρα ήταν: LC-Red 640- TTTGCAGGGTATTAGCAGAATCTGCTTCCTGTG-ph (SEQ ID ΝΟ: 9) και ο εκκινητής αισθητήρας ήταν: CCAATCTTTTCTTTTTTTTCTGC -FL (SEQ ID ΝΟ: 10)

η αξιολόγηση της E1317Q Πολυμορφισμός κατά τη

APC

Gene

Γονιδιωματικό DNA ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας έναν πρόσθιο εκκινητή (5′-. GAAATAGGATGTAATCAGACG- 3 ‘) και αντίστροφο εκκινητή (5′-CACCACTTTTGGAGGGAGA- 3’). Εκκινητές και ανίχνευση του ειδικού πολυμορφικού νουκλεοτιδίου (G /C στη θέση 4006 της SEQ ID ΝΟ: 7) ήταν με πραγματικού χρόνου PCR χρησιμοποιώντας τον εκκινητή άγκυρα: TGCTGTGACACTGCTGGAACTTCGC-FL (SEQ ID ΝΟ: 11) και εκκινητή αισθητήρα (ph-LC -Red705-CACAGGATCTTGAGCTGACCTAG (SEQ ID ΝΟ: 12).

στατιστική Ανάλυση

οι περιγραφικές στατιστικές τιμές για όλες τις μεταβλητές υπολογίστηκαν για ολόκληρο τον πληθυσμό της μελέτης Αυτές περιλάμβαναν τα μεσαία, το εύρος, τη συχνότητα και τη σχετική. συχνότητες ανάλογα με την περίπτωση, σύμφωνα με τον τύπο μεταβλητής. οι σχετικές συχνότητες του κάθε γονιδίου μετάθεσης (συνδυασμός) υπολογίστηκαν και οι τρεις πιο συχνές μεταθέσεις αναλύθηκαν περαιτέρω. Περιγραφική στατιστική υπολογίστηκαν για κάθε ομάδα μετάθεση. οι διαφορές στις κατηγορικές μεταβλητές μεταξύ των διαφόρων ομάδων μετάθεση ήταν αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Chi-τετράγωνο τεστ ανεξαρτησίας. οι διαφορές στα δημογραφικά ποσοτικών μεταβλητών αναλύθηκαν με μη παραμετρική ANOVA με τη δοκιμή Kruskal-Wallis (για omnibus δοκιμές) και περαιτέρω με το τεστ rank-sum Wilcoxon αν συγκρίσεις ζευγάρι ήταν υποδεικνύεται από την πρώτη. Οι διαφορές στις καμπύλες επιβίωσης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Log-rank. Ένα

σ

-τιμή & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Κατά περίπτωση, οι δοκιμές ήταν δύο όψεων και προσαρμόζεται για πολλαπλές συγκρίσεις. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 22 (IBM Corporation Inc., USA).

Μια ανάλυση δύναμη για τη δοκιμή Σύνδεση Η κατάταξη βασίζεται Ona 2 όψεων άλφα επίπεδο του 0,05. Ο λόγος γονότυπους βασίστηκε σε προηγούμενες μελέτες, (19,20). ομάδα Wt ελήφθη ως αναφορά, με μια υποτιθέμενη επιβίωση 12 μηνών για την μελέτη πληθυσμού (ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος) και σε σύγκριση με μη-wt γονότυπους. Ισχύς για συμμετρική διαφορά στην επιβίωση (δηλαδή βάρος εξίσου πιθανό να είναι καλύτερα ή χειρότερα από ομάδα σύγκρισης) υπολογίστηκε, με δεδομένη την διερευνητική φύση αυτής της μελέτης, με κλινικά σημαντική διαφορά ορίζεται ως 4 μήνες (S1 Data)

αποτελέσματα

κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών

τα αρχεία των 73 ασθενών PDA που είχαν υποβληθεί σε θεραπεία σε ίδρυμα μας μεταξύ 2000-2014 ήταν διαθέσιμα για τόσο γενετικοί όσο και κλινικές εκτιμήσεις (Πίνακας 1). Θα περιλαμβάνονται 38 (52%) άνδρες και 35 (48%) γυναίκες με μέση ηλικία 64 έτη (41-90). Δέκα ασθενείς (14%) είχαν προηγούμενη κακοήθεια χωρίς επαναλαμβανόμενο μοτίβο. Κατά τη διάγνωση, 31 (42,5%) ασθενείς ήταν λειτουργική, 16 (21,9%) είχαν τοπικώς προχωρημένο ανεγχείρητο νόσο, και 26 (35,6%) είχαν μεταστατικό καρκίνο. Τριάντα τέσσερις ασθενείς υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση με θεραπευτική πρόθεση: 22 είχε την διαδικασία Whipple, εννέα είχαν περιφερική παγκρεατεκτομή και τρία είχε συνολικά παγκρεατεκτομή. Είκοσι-έξι ασθενείς (76,5%) είχαν R0 εκτομή και οκτώ ασθενείς (23,5%) είχαν R1 εκτομή. Από τους τριάντα τέσσερις ασθενείς που χειρουργήθηκαν, δεκαεπτά (50%) δεν είχε καμία συμμετοχή λεμφαδένων, ενώ δεκαεπτά (50%) είχαν παθολογικά λεμφαδένες [διάμεσος: 1, εύρος (1-13)]. Δεκατρείς από τους 16 ασθενείς (81%), οι οποίοι είχαν τοπικώς προχωρημένο ανεγχείρητο νόσο έλαβαν εισαγωγική χημειοθεραπεία, συνήθως γεμσιταβίνη και σισπλατίνη, και εννέα έλαβαν ακτινοθεραπεία, με ταυτόχρονη εβδομαδιαία σισπλατίνη. Κατά τη στιγμή της τελευταίας αξιολόγησης, 13 της κλάσης 73 ασθενών (17,8%) παρέμειναν απαλλαγμένες από τη νόσο, 56 (76,7%) είχαν διαδοθεί ασθένεια, και 4 (5,5%) χάθηκαν κατά την παρακολούθηση.

Οι ασθενείς που είχαν μεταστατική νόσο έλαβαν μέση μιας γραμμής θεραπείας (εύρος 0-5). Η πιο συνηθισμένη πρώτη επιλογή θεραπείας ήταν γεμσιταβίνη με βάση το δίπολο (16/56, 28%), μια κλινική δοκιμή (14/56, 25%) ή την καλύτερη υποστηρικτική φροντίδα μόνη της (16/56, 28%). Μεταξύ των σαράντα ασθενείς που έλαβαν χημειοθεραπεία, το ποσοστό ανταπόκρισης στην πρώτη γραμμή ήταν 22% (εννέα ασθενείς), ενώ το 30% (δώδεκα ασθενείς) είχαν σταθερή νόσο, το 35% (δεκατέσσερις ασθενείς) είχαν εξέλιξη της νόσου, και 12,5% (πέντε ασθενείς ) είχε ελλείποντα στοιχεία. Η διάμεση συνολική επιβίωση για όλη την ομάδα ήταν 14 μήνες (11,25 – 16,74). Επιτέλους παρακολούθησης, 61 ασθενείς (83,6%) πέθαναν από τη νόσο τους, τρεις (4%) πέθαναν από άσχετους λόγους, τρεις (4%) ήταν ζωντανοί με τη νόσο, καθώς και πέντε (6,8%) ήταν ζωντανοί χωρίς εξέλιξη της νόσου. Μόνο ένας ασθενής χάθηκε κατά την παρακολούθηση. Η διάμεση παρακολούθηση ήταν 85,7 μήνες (16,8 έως 158,4).

Τα πλήρη κλινικά χαρακτηριστικά ανάλογα με τις διαφορετικές SNPs που παρουσιάζονται (S2 δεδομένα για APC Ι1307Κ, S3 δεδομένα για APC E1317Q, S4 δεδομένα για CD24 C170T, S5 Τα στοιχεία για το CD24 Tgdel, S6 στοιχεία για CD24 A1056G, S7 στοιχεία για CD24 A1626G).

APC

Επίπτωση και επιβίωση δεδομένων

Το

APC

Ι1307Κ και πολυμορφισμοί E1317Q εντοπίστηκαν σε 11 (15%) και ένα (1,5%) των ασθενών, αντιστοίχως. Όλοι οι φορείς σε αυτή την ομάδα ήταν ετεροζυγώτες του

APC

πολυμορφισμούς. Δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά στην επιβίωση μεταξύ των μεταφορέων των διαφόρων

APC

πολυμορφισμών και μη φορείς. Η διάμεση επιβίωση των ασθενών με WT

APC

Ι1307Κ ήταν 14 μήνες, σε αντίθεση με ένα διάμεσο οκτώ μήνες στην ομάδα ετεροζυγώτη (Σχήμα 1). Ωστόσο, η διαφορά δεν ήταν σημαντική (

σ

= 0,528). Μόνο ένας ασθενής ήταν ετεροζυγώτες για το

APC

E1317Q πολυμορφισμός, αποκλείοντας την ανίχνευση μιας διαφοράς επιβίωσης. Είναι ενδιαφέρον, ότι ο ασθενής επέζησε για πολύ περισσότερο από ό, τι το μέσο, ​​δηλαδή, 28 μήνες.

Η

CD24

συχνότητα και την επιβίωση των δεδομένων.

CD24

πολυμορφισμός 170

C → T εντοπίστηκε σε 29 (39,7%) των ασθενών ετεροζυγωτών και τέσσερα (5,5%) ομοζυγώτες ασθενείς. Το 1527

tgdel

CD24

παραλλαγή ήταν παρούσα σε επτά (9,6%) των ασθενών ετεροζυγωτών και ένα (1,4%) ομοζυγώτες ασθενή.

CD24

πολυμορφισμού 1056

A → G εντοπίστηκε σε 50 ασθενείς, 34 (46,6%) από τους οποίους ήταν ετεροζυγώτες και 16 (21,9%) ήταν ομοζυγώτες. Το τελευταίο

CD24

παραλλαγή, 1626

A → G, ήταν παρούσα σε 52 (71,2%) των ασθενών ετεροζυγωτών και δύο (2,7%) ομοζυγώτες ασθενείς (Πίνακας 2). Δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά στην επιβίωση μεταξύ των μεταφορέων των διαφόρων

CD24

πολυμορφισμών και μη φορείς.

Η

Η διάμεση συνολική επιβίωση (MOS) του

CD24

πολυμορφισμός 170

C → T ετεροζυγώτες και ομοζυγώτες ήταν 13 και 14 μηνών, αντίστοιχα, σε σύγκριση με 14 μήνες για την ομάδα WT (

σ

= 0,722, σχήμα 2Α). Οι Mos του 1527

tgdel παραλλαγή ήταν 13 μήνες για την ομάδα WT, 21 μήνες για τις ετεροζυγώτες ασθενείς, και 42 μήνες για το μεμονωμένο ασθενή ομοζυγώτες (

σ

= 0,494, σχήμα 2Β). Οι 34 ασθενείς που ήταν ετεροζυγώτες για

CD24

1056

A → G πολυμορφισμό είχε MOS 12 μηνών, σε αντίθεση με 15 μήνες στην ομάδα WT και 16 μηνών για τους ασθενείς ομοζυγώτες (

p

= 0,685, σχ 2C). Η τελευταία ομάδα που πρόκειται να ελεγχθεί, εκείνοι με το 1626

A → παραλλαγή G, επίσης απέτυχε να δείξει τυχόν διαφορές επιβίωσης σε σύγκριση με το MOS των 15, 13 και 16 μήνες σε WT, ετεροζυγώτες και ομοζυγώτες ασθενείς, αντίστοιχα (

σ

= 0,834, σχήμα 2D).

Α. Για

CD24

170

C → T πολυμορφισμού. B Για

CD24

1527

tgdel πολυμορφισμό. C Για

CD24

1056

A → G πολυμορφισμό. D Για

CD24

1626

A → G πολυμορφισμό.

Η

Γενετική Μεταθέσεις

Έχουμε εντοπίσει τρεις γονότυπους που υποτροπίασε στην ομάδα μας με υψηλή συχνότητα. Γονότυπο 1 (10/73 ασθενείς, το 14% του πληθυσμού) ήταν WT σε όλες τις έξι πολυμορφισμοί δοκιμάστηκαν, με την εξαίρεση του

CD24

1626

A → G ετεροζυγωτία. Γονότυπο 2 (10/73 ασθενείς, 14%) ήταν WT τόσο

APC

παραλλαγές και

CD24

1527

tgdel, και ετεροζυγώτη για τα υπόλοιπα τρία

CD24

πολυμορφισμούς. Η τρίτη ομάδα, γονότυπος 3 (9/73 ασθενείς, 10%) ήταν ετεροζυγώτες για το

CD24

170

C → T και 1056

A → πολυμορφισμούς G και WT για το υπόλοιπο. Δεν υπήρχε στατιστική διαφορά στην επιβίωση μεταξύ των ασθενών με τις τρεις διαφορετικές γονότυπους και την υπόλοιπη ομάδα (

σ

= 0,440). Κατά τη στιγμή της διάγνωσης, η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 73 64 χρόνια, και δεν υπήρχε καμία στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των διαφόρων

APC

και

CD24

πολυμορφισμοί μεταξύ τους. Ωστόσο, κατά την αξιολόγηση των τριών κυρίαρχο γονότυπους, η ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 58,5 χρόνια για γονότυπο 1, 60 έτη για γονότυπο 2, και 74 ετών για γονότυπο 3, η οποία ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με την υπόλοιπη ομάδα (

p

= 0.041, Εικόνα 3). Σύγκριση των πρόσθετων κλινικών χαρακτηριστικών, όπως η απόκριση σε χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής (

σ

= 0,27), ο χρόνος μέχρι την εξέλιξη της νόσου (

σ

= 0,536) και του βαθμού του όγκου (

p

= 0,782) αποκάλυψε ότι καμία δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο ομάδων.

Ηλικία διαφορές μεταξύ των ασθενών με τρία κυρίαρχα γονότυπους και η υπόλοιπη ομάδα.

η

Συζήτηση

η έκτοπη έκφραση του CD24 σε κύτταρα όγκου αυξάνει τον πολλαπλασιασμό, προωθεί όγκου κυτταρικής προσκόλλησης στην φιμπρονεκτίνη, λαμινίνη και κολλαγόνο Ι, IV (καθώς και Ρ-σελεκτίνη), και συμβάλλει στη μεγαλύτερη κινητικότητα των κυττάρων και διεισδυτικότητα [5, 21]. Οι πρόοδοι στην πρόσφατη έρευνα έχουν συνδέσει CD24 με την εξέλιξη και την κακοήθεια των πολλών επιθηλιακών και αιμοποιητικών όγκων. Υψηλή έκφραση αυτής της πρωτεΐνης έχει αναφερθεί ως ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης κακή επιβίωση στον καρκίνο του πνεύμονα [22-23]. Κυτταροπλασματική χρώση για CD24 πρωτεΐνη ήταν απούσα σε φυσιολογικό επιθήλιο στον καρκίνο των ωοθηκών, και υπάρχουν σε αδενοκαρκίνωμα των ωοθηκών, και η υπερέκφραση της ήταν ανεξάρτητα συνδέεται με μια χειρότερη επιβίωση [24-25]. Η ίδια συσχέτιση καταδείχθηκε στο μητρικό [26] και καρκίνων του προστάτη [27-28].

CD24 έχει ένα σημαντικό ρόλο στην ογκογόνο γαστρεντερικών όγκων. υπερέκφραση της ήταν ανεξάρτητα συνδέεται με κακή πρόγνωση σε καρκίνο του οισοφάγου [29-30]. Θετική ανοσοϊστοχημική χρώση για κυτταροπλασματικό CD24 είχε σχέση με περισσότερα εκ των προτέρων στάσης σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου [31]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι βλεννογόνο του παχέος εντέρου έχει αυξημένη έκφραση του CD24, ακόμη και σε πρώιμο στάδιο του κακοήθους μετασχηματισμού [21]. CD24 υπερέκφραση συσχετίστηκε με μειωμένη επιβίωση στον καρκίνο του παχέος εντέρου [32]. Sagiv et al. κατέδειξαν ένα ρόλο του CD24 στην καρκινογόνο διαδικασία σε καρκίνο του παγκρέατος [33]. Στη μελέτη τους, τα ανθρώπινα παγκρεατικά κύτταρα Colo357 αδενοκαρκινώματος υποβλήθηκαν σε επεξεργασία

in vitro

με αντι-CD24 MAb, που είχε ως αποτέλεσμα τη διακοπή της ανάπτυξης των κυττάρων σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο, ενώ τα κύτταρα αρνητικά για έκφραση CD24 δεν επηρεάστηκαν παρομοίως. Αντι-CD24 mAbs ήταν επίσης αποτελεσματική στη μείωση της ανάπτυξης του όγκου του BxPC3 παγκρεατικού ξενομοσχεύματα καρκίνου σε ποντικούς [34]. Παγκρέατος και του αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία

in vitro

με shRNA φέρεται να ρυθμίζεται προς τα κάτω

CD24

έκφρασης και είχαν μειωμένη ανάπτυξη των κυττάρων και την κινητικότητα [11]. Η παρούσα μελέτη επιδιώκεται η σύνδεση μεταξύ τεσσάρων διαφορετικών

CD24

SNPs, δύο

APC

γενετικές παραλλαγές, και την κλινική πορεία του καρκίνου του παγκρέατος. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση σχετικά με την έρευνα αυτών των ενώσεων. Δεν υπήρχε διαφορά στην επιβίωση των ετερόζυγων και ομόζυγων ασθενείς, πιθανώς λόγω του σχετικά μικρού μεγέθους της ομάδας. Επιπλέον, η ηλικία κατά τη διάγνωση, την ανταπόκριση στη θεραπεία, και ο χρόνος μέχρι την εξέλιξη της νόσου φάνηκε επίσης να μην έχουν προγνωστική αξία σε αυτή τη ρύθμιση.

Η συχνότητα των τεσσάρων διαφορετικών

CD24

SNPs σε πληθυσμό ασθενών μας ήταν παρόμοια με τη συχνότητά του μεταξύ των υγιών ατόμων που περιγράφονται από την ομάδα μας σε προηγούμενες εργασίες [19], με τη μόνη σημαντική εξαίρεση έχουν βρεθεί στη συχνότητα εμφάνισης

CD24

1626

A → G: 29% των υγιών μαρτύρων στην εν λόγω μελέτη ήταν ετεροζυγώτες, σε σύγκριση με το 71,2% των ασθενών PDA στην τρέχουσα εργασία.

Είχαμε διερευνήθηκε η συχνότητα εμφάνισης

APC

πολυμορφισμούς Ι1307Κ και E1317Q σε υγιή άτομα σε το παρελθόν [20]. Η συχνότητα εμφάνισης της παραλλαγής E1317Q ήταν 1,2% (δώδεκα άτομα έξω από 1.000 σε διαλογή), το οποίο είναι παρόμοιο με το παρόν αποτέλεσμα μας από 1,4% σε ασθενείς PDA. Η παραλλαγή Ι1307Κ, ωστόσο, ταυτοποιήθηκε σε μόνο 5,3% υγιή άτομα, σε σύγκριση με 15% στους ασθενείς PDA.

Είναι ενδιαφέρον ότι, από πολλές διαφορετικές μεταθέσεις γονότυπο, τρία ξεχώρισε ως κυρίαρχο σε 14%, 14 % και 10% των ασθενών. Δύο από τους τρεις γονότυπους, ετεροζυγωτίας στο

CD24

1626

A → G (WT με το υπόλοιπο), και ετεροζυγωτία για

CD24

170

C → T, 1626

A → G, 1527

tgdel (WT με το υπόλοιπο) διαγνώστηκαν σε σημαντικά μικρότερη ηλικία από ό, τι στην υπόλοιπη ομάδα (διάμεση τιμή των 58,5 και 60 ετών, σε σύγκριση με 64 χρόνια, αντίστοιχα). Ο τρίτος γονότυπος, το ένα με ετεροζυγωτίας στο

CD24

170

C → T και 1056

A → G και WT για το υπόλοιπο, διαγνώστηκε σε πολύ μεγαλύτερη ηλικία (74 ετών).

Συμπέρασμα

Παρά το γεγονός ότι ήμασταν σε θέση να ανιχνεύσουν οποιαδήποτε επίδραση του

APC

και

CD24

γονίδια για την επιβίωση σε ασθενείς με PDA, τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ χρήζουν περαιτέρω μελέτη σχετικά με το ρόλο τους στην παγκρέατος καρκινογένεση και πρόγνωση, καθώς και σε μια μεγαλύτερη ομάδα.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 δεδομένων. Στατιστικούς υπολογισμούς, μαζί με πραγματικά μεγέθη δείγματος ανά SNP

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s001

(ΔΕΘ)

S2 δεδομένων. το στάδιο του όγκου, το βαθμό και τη θέση για την APC Ι1307Κ πολυμορφισμός

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s002

(ΔΕΘ)

S3 δεδομένων. το στάδιο του όγκου, το βαθμό και τη θέση για την APC E1317Q πολυμορφισμός

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s003

(ΔΕΘ)

S4 δεδομένων. το στάδιο του όγκου, το βαθμό και τη θέση για το CD24 C170T πολυμορφισμός

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s004

(ΔΕΘ)

S5 δεδομένων. το στάδιο του όγκου, το βαθμό και τη θέση για το CD24 Tgdel πολυμορφισμός

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s005

(ΔΕΘ)

S6 δεδομένων. Όγκου στάδιο, το βαθμό και τη θέση για το CD24 A1056G πολυμορφισμός

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s006

(ΔΕΘ)

S7 δεδομένων. Όγκου στάδιο, το βαθμό και τη θέση για το CD24 A1626G πολυμορφισμός

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134469.s007

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Esther Eshkol είναι ευχαρίστησε για τη συντακτική βοήθεια.