Αφηρημένο

Στο Βαλκανίων και της Ταϊβάν, η σχέση μεταξύ της έκθεσης σε αριστοχολικού οξύ και κίνδυνο ουροθηλιακά νεοπλάσματα είχε συναχθεί από την A & gt? T γενετικό χαρακτηριστικό το

TP53

γονίδιο από κακοήθη κύτταρα. Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να χαρακτηρίσει το

TP53

μεταλλάξεων φάσματος στην ουροφόρων καρκίνους διαδοχικές να Αριστολοχικό Οξύ Νεφροπάθεια στο Βέλγιο. Serial κατεψυγμένες τομές όγκου από γυναίκες ασθενείς (n = 5) εκτέθηκαν σε αριστολοχικό οξύ κατά τη διάρκεια αγωγή απώλειας βάρους εναλλακτικώς χρησιμοποιούνται είτε για ρ53 ανοσοχρώση ή μικροδιατομής λέιζερ. Επελέγησαν περιοχές του ιστού με τουλάχιστον το 60% του ρ53-θετικών πυρήνων για microdissecting τμήματα σύμφωνα με την ρ53-θετικών περιοχών που να ταιριάζουν. Όλες οι περιοχές φαίνεται να είναι καρκίνωμα in situ. Μετά την εκχύλιση του DNA, μεταλλάξεις στα

ΤΡ53

hot spot περιοχή (εξώνια 5-8) ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας φωλιασμένη-PCR και αλληλούχιση. Ψευδώς αρνητικών μαρτύρων συνίστατο στην microdissecting ιστούς φρέσκο ​​κατεψυγμένο όγκου τόσο από έναν ασθενή με το σύνδρομο Li-Fraumeni που έφερε ένα p53 συνταγματική μετάλλαξη, και από το

KRAS

μεταλλαχθεί αδενοκαρκινώματα. Για να αποκλειστεί ψευδώς θετικά αποτελέσματα δυνητικά δημιουργούνται από μικροδιατομής και τα ένθετα-PCR, ένα καρκίνωμα ουροθηλίου φαινακετίνη που σχετίζονται και φυσιολογικών ιστών φρέσκο ​​ουρητήρα (n = 4) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με υψηλής ισχύος λέιζερ. Δεν απροσδόκητα αποτελέσματα που έχει προσδιοριστεί, μοριακή ανάλυση συνεχίστηκε σε κακοήθεις ιστούς, δείχνοντας τουλάχιστον μία μετάλλαξη σε όλα τα (έξι διαφορετικές μεταλλάξεις σε δύο) ασθενείς, με 13/16 εξονικό (ανοησίες, 2? Εσφαλμένου νοήματος, 11) και 3/16 ιντρονικές ( μία θέση συναρμογής) μεταλλάξεις. Είχαν κατανέμεται ως μεταβάσεις (n = 7) ή μεταστροφές (n = 9), με ίσο επικράτηση του Α & gt? T και G & gt? T (3/16 κάθε φορά). Ενώ οι τρέχουσες αποτελέσματα είναι σύμφωνα με τις Α & gt? T επικράτηση ήδη αναφερθεί στα Βαλκάνια και την Ταϊβάν μελέτες, μπορούν επίσης να αποδείξουν ότι οι πολλαπλές μεταλλάξεις στο

TP53

περιοχή hot spot και μια υψηλή συχνότητα της G & gt? T μεταστροφή εμφανίζεται ως συμπληρωματική υπογραφή αντανακλώντας την τοξικότητα ενός αθροιστική δόση του αριστολοχικού οξύ προσλαμβάνεται σε βραχύ χρονικό διάστημα

Παράθεση:. Aydin S, Dekairelle AF, Ambroise J, Durant JF, Heusterspreute Μ, Guiot Y, et al. (2014) Σαφής ανίχνευση πολλαπλών

TP53

μεταλλάξεις γονιδίων σε ΑΑΝ καρκίνος που σχετίζεται με ουροθηλιακά στο Βέλγιο Χρησιμοποιώντας Σύλληψη Laser μικροανατομίας. PLoS ONE 9 (9): e106301. doi: 10.1371 /journal.pone.0106301

Συντάκτης: Robert Hurst, Οκλαχόμα Πανεπιστήμιο Επιστημών Υγείας Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2 Ιούνη 2014? Αποδεκτές: 29 Ιούλη 2014? Δημοσιεύθηκε: 3 Σεπτεμβρίου 2014

Copyright: © 2014 Aydin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και. Η δήλωση ηθική εισήχθη στο πλαίσιο της βελγικής αριθμό μητρώου B40320095694

Χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

Η Αριστολοχικό οξύ Νεφροπάθεια (ΑΑΝ) αναφέρθηκε για πρώτη φορά στις αρχές της δεκαετίας του 1990 σε βελγικά ασθενείς που έχουν αναλάβει μια θεραπευτική αγωγή απώλειας βάρους έχουν μολυνθεί με αριστοχολικού οξύ (ΑΑ) [1], [2] . ΑΑΝ χαρακτηρίζεται από μια ταχέως εξελισσόμενη διάμεσου νεφροπάθεια με σωληναριακή πρωτεϊνουρία και γλυκοζουρία, νωρίς σοβαρή αναιμία, εκτεταμένη hypocellular διάμεση ίνωση μειώνονται από το εξωτερικό προς το εσωτερικό του φλοιού λαβυρίνθου, και την ταχεία ανάπτυξη του ουροποιητικού συστήματος μεταβατικής καρκινώματα κυττάρων σε 40-46% της ασθενείς εντός 2-6 ετών μετά τη διακοπή της έκθεσης [3] – [6]. ΑΑΝ αναγνωρίζεται πλέον ως μια καταστροφική ασθένεια που συμβαίνουν σε όλο τον κόσμο με όσο 100 εκατομμύρια άνθρωποι ενδέχεται να διατρέχουν κίνδυνο έκθεσης ΑΑ [7]. Ενώ ο μηχανισμός της ΑΑ νεφροτοξικότητας μένει να διερευνηθεί σε βάθος, η καρκινογόνος δράση σήμερα αποδίδεται σε γονοτοξικότητας της AL (aristolactam) προσαγωγοί-DNA χαρακτηρίζεται από μια υψηλή συχνότητα της A & gt? T μεταστροφή στο

TP53

ογκοκατασταλτικό γονίδιο όγκων ΑΑ-συναφή. Αυτό έχει τεκμηριωθεί καλά σε πειράματα με ζώα [8], [9] και, αν και δεν με συνέπεια, σε ασθενείς που παρουσιάζουν κλινικά και ιστοπαθολογικά ομοιότητες με τις αρχικές βελγική περιπτώσεις ΑΑΝ [10] – [14]. Ενώ προσαγωγές AL-DNA που αποδεικνύουν την έκθεση ΑΑ έχουν τεκμηριωθεί καλά στους ιστούς των νεφρών από τη βελγική ομάδα [6], [15], [16], η παρουσία της A & gt? T μεταστροφή μάρτυρες της αιτιώδους σχέσης μεταξύ της έκθεσης και της κακοήθειας είχε ακόμη να διερευνώνται. Ο σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν, επομένως, να χαρακτηρίσει το

TP53

μεταλλάξεων φάσματος σε κατεψυγμένα δείγματα των κακοηθών ουροφόρων ιστών από ασθενείς ΑΑΝ βελγική χρησιμοποιώντας καλά επικυρωμένες μεθόδους προσδιορισμού του γονότυπου.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

το 2001, μια μελέτη για την γενετικού πολυμορφισμού των ενζύμων που εμπλέκονται στο μεταβολισμό του αριστολοχικού οξέος μεταξύ των ασθενών ΑΑΝ βελγική εγκρίθηκε από τον καθηγητή JM Maloteaux, Πρόεδρος του Τμήματος Ιατρικής και Επιστημών Υγείας Έρευνας Ηθικής Επιτροπή του Université Catholique de Louvain (Βέλγιο). Μετά την έγκριση της επιτροπής δεοντολογίας, γραπτή συγκατάθεση δόθηκε από κάθε ασθενή από τη βελγική σειρά ΑΑΝ. Αυτά τα δεδομένα της μελέτης παρέμεινε αδημοσίευτη.

Το 2009, μια τροποποίηση της πιλοτικής μελέτης ορίζεται ρητά η τρέχουσα

TP53

έρευνα, η οποία πραγματοποιήθηκε σε δείγματα ιστών από ασθενείς 5 ΑΑΝ αναφέρθηκε σε αυτή τη μελέτη, και έγινε δεκτή ως τέτοια από την Επιτροπή Ερευνών Δεοντολογίας του Université Catholique de Louvain (Βέλγιο) ως συνέχεια της μελέτης που ξεκίνησε το 2001. δείγματα ιστών από ασθενείς 1-5, που ήταν όλα μέρος της αρχικής μελέτης (2001) ήταν ανώνυμα πριν από την ανάλυσης.

Τα δείγματα αίματος ήταν μέρος μιας προηγούμενης μελέτης (αναφορά UCL Επιτροπής Δεοντολογίας έγκριση. 2003/05/03/08) [17]. δείγματα αδενοκαρκινώματος και χειρουργικές ουρητήρα συλλέχθηκαν από ασθενείς ΑΑ-άσχετη ως μέρος της ιατρικής θεραπείας τους και έγιναν ανώνυμα πριν από την ανάλυση. Μετά από γραπτές πληροφορίες, οι ιστοί αδενοκαρκίνωμα ήταν αποθηκευμένα στο UCL Βιολογική βιβλιοθήκη (https://www.centreducancer.be/fr/show/index/section/8/page/34). δείγματα του ουρητήρα μη AA σχετίζονται λαμβάνονται από nephroureterectomies αφαιρεθεί κατά τη στιγμή της μεταμόσχευσης νεφρού χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες σε αυτή τη μελέτη με μια κωδικοποίηση μετά την παθολογική ανάλυση σύμφωνα με τις βελγικές νόμους περί τραπεζικού ιστού (2008).

Το συμπληρωματικό πρόγραμμα -frozen δείγμα κοκκιωδών κυττάρων του όγκου από τον ασθενή Li-Fraumeni ελήφθη από το UCL βιολογική βιβλιοθήκη (το ίδιο όπως παραπάνω). Μετά τη γραπτή συγκατάθεση των γονέων, αυτό το δείγμα ήταν ανώνυμα πριν από τη χρήση.

Προηγούμενη αναφερόμενα στοιχεία περιλαμβάνουν προσαγωγές AL-DNA προσδιορίζονται στο νεφρικό ιστό ασθενών 1, 3, 4, [15], [16], [18 ] και

TP53

αλληλουχίας του γονιδίου που εκτελούνται σε TCC κύστη από τον ασθενή 1 [10].

ασθενών ΑΑΝ

Πέντε ΑΑΝ ασθενείς που αναφέρεται Cliniques Universitaires Saint-Luc (Βρυξέλλες, Βέλγιο) μελετήθηκαν (Πίνακας 1). Όλα ήταν γυναίκες με μέσο όρο ηλικίας 42,8 έτη (εύρος: 27 – 53) στην παρουσίαση. Ένας ασθενής ήταν καπνιστής. Κανένας δεν είχε ιστορικό κατάχρησης αναλγητικών ή τυπικά χαρακτηριστικά του αναλγητικού νεφροπάθειας. Όλοι υποβλήθηκαν σε διμερείς nephroureterectomy είτε κατά το χρόνο της μεταμόσχευσης νεφρού ή μεταγενέστερα για την ανώτερη κακοήθειες του ουροποιητικού συστήματος. Εκτός αυτού, ένας ασθενής υποβλήθηκε επίσης διουρηθρική εκτομές των επαναλαμβανόμενων καρκίνωμα μεταβατικού κυττάρου (TCC) της ουροδόχου κύστης και, τελικά, κυστεκτομή. Η διάγνωση της ΑΑΝ βασίστηκε στα ακόλουθα κριτήρια: πρόσληψη ΑΑ μέσω ενός αγωγή απώλειας βάρους phytochemically αποδειχθεί ως μολυσμένο (ασθενείς 1, 2, 3 και 5), ένα τυπικό νεφρική ιστολογία διάμεσης ίνωσης (οι πέντε ασθενείς), η ταυτοποίηση του AL -DNA προϊόντα προσθήκης στον ιστό του νεφρού (ασθενείς 1, 3 και 4) και την ανάπτυξη του ανώτερου ουροποιητικού συστήματος κακοήθειας (όλα τα πέντε ασθενείς) [15], [16], [18]. Στον ασθενή 4, η πρόσληψη της ΑΑ θα μπορούσε όμως ποτέ να αποδειχθεί επισήμως, καθώς όπως υποστήριξε να έχουν παρακολουθήσει την κλινική απώλεια βάρους πριν από την αγωγή μολυσμένων με ΑΑ (τα λεγόμενα «τύπος 2») εισήχθη [1]. Παρ ‘όλα αυτά, οι πέντε ασθενείς πληρούν τα κριτήρια που προτάθηκε πρόσφατα για μια οριστική διάγνωση της ΑΑΝ [19] στην τρέχουσα σειρά υπόθεσης. Αν και δεν έχει το ΤΡ53

κατάσταση μετάλλαξης, αξίζει να σημειωθεί ότι ο ασθενής 1 είναι n ° 3 σε αναφορές 4, 5, 15 και 16, ασθενής 2 είναι n ° 7 σε αναφορά 5, ασθενής 3 είναι n ° 4 στις αναφορές 15 και 16, το νούμερο 5 στην αναφοράς 5, και ασθενής 4 είναι n ° 2 σε αναφορά 20 και τον αριθμό n ° 8 στο αναφοράς 18, ενώ 5 ασθενής δεν έχει ακόμη αναφερθεί.

η

Χειρουργική δείγματα

επελέγησαν ιστοί από πέντε pelvi-ureterectomies και ένα μονό κυστεκτομή με βάση τη διαθεσιμότητα των κατεψυγμένου υλικού. Καρκίνωμα

in situ

(CIS) και θηλώδες TCC διαγνώστηκαν ανάλογα με την ΠΟΥ κατάταξη 2004 της urothelial όγκων [21], [22]. Μονομερή πολυεστιακή ΚΑΚ αναπτύχθηκε στο δεξιό άνω ουροποιητικού συστήματος (λεκάνη, επάνω, μέσα και κάτω ουρητήρα) σε δύο ασθενείς (ασθενής 1 και 5). Ενώ ουρητήρα CIS εισέβαλαν εστιακά την propria lamina στον ασθενή 1, ανέπτυξε επίσης κύστης θηλώδες TCC. Διμερείς πολυεστιακή ΚΑΚ αναπτύχθηκε στο ανώτερο ουροποιητικό σύστημα των 3 υπόλοιπους ασθενείς. Καθυστέρηση μεταξύ του τέλους της έκθεσης και τη χειρουργική επέμβαση κατά μέσο όρο 44,75 μήνες (εύρος 15 έως 96) σε ασθενείς με 1, 2, 3, 5 και ήταν διαθέσιμος σε ασθενή 4. Στους πρώην τέσσερις ασθενείς, μονομερείς και διμερείς TCC διαγνώστηκαν κατά μέσο όρο 61 μηνών ( εύρος: 27 έως 96) και 41 μήνες (εύρος: 18-64) μετά το τέλος της γνωστής έκθεσης, αντίστοιχα

ανοσοϊστοχημεία p53 (IHC)

cIS ταυτίστηκε με οπτικό μικροσκόπιο σε αιματοξυλίνη ηωσίνη. χρωματισμένο τμήματα από κατεψυγμένα pelvi-ουρητήρα δείγματα. Από σειριακές κατεψυγμένες τομές (7 μm πάχους), τομές n ° 1, N ° 3 και Ν ° 5 χρησιμοποιήθηκαν για ρ53 ανοσοϊστοχημεία (IHC) και διατηρήθηκε όλη τη νύχτα στους 37 ° C ενώ τα τμήματα n ° 2, n ° 4 και n ° 6 χρησιμοποιήθηκαν για μικροδιατομής λέιζερ. Οι τελευταίες τρεις τομές τοποθετήθηκαν σε βιοχημικά πολυαιθυλένιο ναφθαλικό (ΡΕΝ) ολισθαίνει αδρανής μεμβράνη καλύπτεται και διατηρείται στους -20 ° C μέχρι τη χρήση. Για p53 IHC, οι τομές διατηρούνται σε θερμοκρασία 37 ° C στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε φορμαλδεύδη 4% για 3 ώρες. Η ενδογενής υπεροξειδάση παρεμποδίστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% σε απιονισμένο νερό για 30 λεπτά. Τα πλακίδια επωάστηκαν στους 97 ° C για 75 λεπτά και ξεπλένονται σε ένα διάλυμα που περιέχει απιονισμένο νερό και triton 0,05%. Οι τομές στη συνέχεια καλύφθηκαν για 30 λεπτά με 10% φυσιολογικό ορό κατσίκας (NGS) που περιέχει 1% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA), αραιωμένο σε τρις-triton. Αυτά επωάστηκαν όλη τη νύκτα σε θερμοκρασία δωματίου με το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-p53 DO-7 (Biocarta, Europe GmbH) σε αραίωση 1:1000. Μετά από πλύση με τρις-triton 0,05%, τα πλακίδια επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 75 λεπτά με ένα έτοιμο προς χρήση σύστημα αντι-ποντικού EnVision-υπεροξειδάσης (Dako, Glostrup, Denmark) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και με αιματοξυλίνη. Ένα κανονικό ορό κατσίκας χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος.

Η υπερέκφραση της ρ53 ορίστηκε ως πυρηνική χρώση ανεξάρτητα από την ένταση IHC. Εκτεταμένες χρώση ρ53 με IHC έχει προηγουμένως προταθεί να ενισχυθεί ο ρυθμός ανίχνευσης μετάλλαξης του

ΤΡ53

[23]. Συνεπώς, επελέγησαν μόνο περιοχές ιστού που περιέχουν περισσότερο από 60% των θετικών πυρήνων για μικροδιατομή. Ακριβώς ταιριάζουν περιοχές από ακόμη μη επεξεργασμένα σειριακές τομές (n ° 2, Ν ° 4 και n ° 6) υποβλήθηκε σε μικροδιατομής όπως περιγράφεται λεπτομερώς στη συνέχεια.

σύλληψης Laser μικροδιατομής

Μετά την χρώση μπλε τολουϊδίνης, κάθε αόριστης κατεψυγμένα περιοχή του ιστού που ταιριάζουν ακριβώς την περιοχή του ενδιαφέροντος που καθορίζονται σύμφωνα με p53 IHC διαφάνειες απομονώθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα PALM microlaser (Bernried, Γερμανία) εξοπλισμένο με laser παλμικού UV αζώτου (μήκος κύματος: 337 nm? Pulse ενέργειας & gt? 270 μί, παλμό διάρκειας 3nsec , η συχνότητα παλμών 1-30 /sec) και το PALM ρομπότ έκδοση λογισμικού 2.2. Το σύστημα συνδέεται με μία Axiovert 200 μικροσκόπιο και ένα σχέδιο Neofluar 20 × (Zeiss, Oberkochen, Germany). Μικροδιατομή εστίες εκτόξευσε σε ένα καπάκι μικροσωλήνα και καταψύχθηκαν στους -20 ° C μέχρι την εκχύλιση του DNA (Σχήμα 1).

Α-G περιοχή TCC που περιέχουν περισσότερο από 60% ρ53 χρωματισμένων πυρήνων με IHC με αιματοξυλίνη από κατεψυγμένα τμήμα του ουρητήρα (Α). Για λέιζερ συλλαμβάνει μικροδιατομής, ένα τολουϊδίνης μπλε χρωματισμένο περιοχή σε ένα αντιπροσωπευτικό τμήμα κατεψυγμένων αντιστοιχήθηκε (Β), κομμένα (C) και εκτόξευσε (D) στο καπάκι του μικροσωλήνα (Ε). 3′-5’dideoxy ηλεκτροφόρημα αλληλουχίας του τμήματος της ρ53 που δείχνει την αλληλουχία άγριου τύπου (F, βέλος) και A & gt? T μεταστροφής (G, βέλος) που οδηγεί σε παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη E286V στο εξόνιο 8.

Η

DNA εκχύλιση

σε κάθε καπάκι, 10 μΐ ενός διαλύματος που περιέχει EDTA 0,001 Μ (ρΗ 8), Tris HCl 0,02 Μ (ρΗ 8), 0,5% Tween 20, πρωτεϊνάση Κ (2 mg /ml) και συμπεριλήφθηκε υπερκαθαρό νερό. Μετά την ανάμιξη και φυγοκέντρηση, κάθε σωλήνας αντίδρασης επικαλύφθηκε με μία σταγόνα ορυκτελαίου να προληφθεί η εξάτμιση και επωάζεται όλη τη νύκτα στους 55 ° C με συνεχή ανάδευση (600 rpm). Υπερκαθαρό νερό (5 μΐ) προστέθηκε στη συνέχεια στο σωλήνα αντίδρασης για να αυξήσει τον τελικό όγκο του διαλύματος. Μετά από φυγοκέντρηση, το διάλυμα θερμάνθηκε στους 99 ° C για 10 λεπτά για την αδρανοποίηση της πρωτεϊνάσης Κ Τέλος, το εκχύλισμα μεταφέρθηκε σε άλλο μικροσωλήνα.

Nested PCR-

εξώνια 5 έως 8, που αντιστοιχούν στον τομέα δέσμευσης ρ53 DNA, το λεγόμενο «hot spot» για το

ΤΡ53

γονιδιακές μεταλλάξεις [24], ενισχύθηκαν με ένθετη PCR. Για τον πρώτο γύρο PCR, 3 μλ DNA εκχυλίζεται από κάθε μικροδιατομή δείγμα προστέθηκε σε ένα τελικό μείγμα 50 μι PCR συμπεριλαμβανομένων 2,25 mM MgCl

2, 0,2 U /μL Taq Gold πολυμεράσης (Ampli Taq Gold, Applied Biosystems, Roche) , 0.2 mM dNTP και 24:02 /μL εκκινητές (Eurogentec, Λιέγη, Βέλγιο) (Πίνακας 2). Μια αρχική επώαση στους 95 ° C για 4 λεπτά ακολουθήθηκε από 25 κύκλους (95 ° C για 30 δευτερόλεπτα, 60 ° C, εκτός από το εξόνιο 7, όπου η θερμοκρασία ανόπτησης ήταν 55 ° C για 30 δευτερόλεπτα και 72 ° C για 1 min) και μια τελική επιμήκυνση επί 7 λεπτά στους 72 ° C. Ο δεύτερος γύρος της PCR πραγματοποιήθηκε με 2,5 μΙ του πρώτου προϊόντος PCR χρησιμοποιώντας τις ίδιες συνθήκες όπως και για τον πρώτο γύρο, εκτός από το ότι 1,5 mM του MgCl

2 και 0,4 U /μΙ Taq Gold πολυμεράσης χρησιμοποιήθηκαν για το εξόνιο 6. υπερκαθαρού νερού χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος, ενώ το DNA εκχυλίζεται από άσχετα δείγματα αίματος χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος για το

ΤΡ53

ενίσχυσης.

η

Ακολουθία ανάλυση

τα ενισχυμένα προϊόντα καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ Spin PCRapace MSB (Stratec Molecular GmbH, Βερολίνο, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ανάλυση αλληλουχίας διεξήχθη σε έναν αυτοματοποιημένο ΑΒΙ 377 Α συσκευή (Applied Biosystems, Foster City, CA), χρησιμοποιώντας το κιτ Cycle Sequencing Taq Dye Terminator Δεοξυ από τον ίδιο κατασκευαστή και σύμφωνα με τις οδηγίες του. Η

TP53

ακολουθία αναφοράς από Genbank ήταν NC_000017.10.

Η αξιολόγηση των δυνητικών

TP53

-artifactual αλλοιώσεις σε δείγματα ιστών

(α) Για την εκτίμηση η ικανότητα της τρέχουσας διαδικασίας μικροδιατομής για τον εντοπισμό μεταλλάξεων του DNA, τέσσερις Colo-ορθού αδενοκαρκινώματα ερευνηθεί στο παρελθόν για

επιλέχθηκαν KRAS

μετάλλαξη με συνήθεις κλινικές δοκιμές σε FFPE δείγματα ιστών (παραφίνη-ενσωματωμένες φορμόλη-σταθερό). Δύο από αυτούς έφερε μια μετάλλαξη και δύο ήταν άγριου τύπου. Αυτά τα τέσσερα δείγματα επιλέχθηκαν επειδή ένα συμπληρωματικό πρόγραμμα-κατεψυγμένα ομόλογό κρατήθηκε αποθηκεύονται στους -70 ° C στον καρκίνο του ανθρώπου Bio-τράπεζα του Université Catholique de Louvain (https://www.uclouvain.be/416846.html). Laser μικροδιατομής και εκχύλιση του DNA του snap-κατεψυγμένα δείγματα αδενοκαρκινώματος πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας τη διαδικασία που περιγράφεται παραπάνω και τα αποτελέσματα των

KRAS

δοκιμών συγκρίθηκαν. Επιπλέον, μια θραύση κατεψυγμένο δείγμα κοκκιωδών κυττάρων όγκου από ένα 15 ετών νέο κορίτσι με ένα σύνδρομο Li-Fraumeni αναλύθηκε χρησιμοποιώντας την ίδια διαδικασία μικροδιατομή. Ενώ η συνταγματική μετάλλαξη είχαν ήδη εντοπιστεί από FASAY (λειτουργική ανάλυση των διαχωρισμένων αλληλόμορφα σε ζύμη) από το

TP53

mRNA που εξάγεται από τα περιφερικά μονοπύρηνα κύτταρα του ασθενούς [25], το δείγμα όγκου μελετήθηκε για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η ικανότητα της τρέχουσας διαδικασίας μικροδιατομής να προσδιορίσει σωστά αυτό το

TP53

μετάλλαξη σε κατεψυγμένα τμήματα του όγκου.

(β) Είτε snap-κατεψυγμένα τμήματα ιστών θα μπορούσε να επηρεαστεί από ένα λέιζερ που προκαλείται αποτέλεσμα είναι δεν είναι γνωστό και αυτό θα μπορούσε ακόμη και να επιδεινωθεί από επιπλέον παράγοντες παρεμβολής όπως μια επιβλαβή επίδραση της οστεοσύνθεσης, χρώση και /ή ένθετη PCR-διαδικασίες. Για να αποκλειστεί η τεχνολογική προκατάληψη, χειρουργικά δείγματα ουρητήρα συλλέχθηκαν μετά nephroureterectomies (n = 4) που λαμβάνονται από ασθενείς με νεφρική νόσο μεταμοσχευθούν για τερματικό ουραιμία λόγω πολυκυστική νόσος των νεφρών (n = 2), η χρόνια ιδιοπαθής διάμεση νεφρίτιδα σίγουρα άσχετη με ΑΑ κατάποση (n = 1 ), και διαβητική σπειραματοσκλήρυνση (n = 1). Αυτά τα δείγματα αμέσως ενσωματωμένα σε Tissue-Tek και καταψύχθηκαν ταχέως, και ουροθηλίου περιοχές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία ταυτόχρονα με τρεις διαφορετικούς τρόπους. Μικροανατομίας διεξήχθη κάτω από δύο διαφορετικές εντάσεις (μέση χαμηλή UV-ενέργειας: 68? Και υψηλής μέσης UV-ενέργειας: 69.4) και στη συνέχεια σε επεξεργασία όπως αναφέρεται εδώ για τα ΑΑΝ-σε δείγματα ασθενών. Συγκριτικά, επιπλέον σειριακές τομές από το ίδιο δείγμα ουρητήρα υποβλήθηκε σε μια απλή διαφάνεια ξύσιμο όπως διενεργείται

KRAS

συνήθεις δοκιμές μετάλλαξης σε δείγματα ιστών FFPE. εκχύλιση του DNA, την ενίσχυση και

TP53

αλληλουχίας διεξήχθησαν σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται σε αυτό το άρθρο.

(γ) Ως επιπρόσθετος έλεγχος των ΑΑ-άσχετα

TP53

της τεχνητής αλλαγές ενδεχομένως προκαλείται από την τρέχουσα ανάλυση, ένα καρκίνωμα urothelial φαινακετίνη που προκαλείται από το οποίο φέρεται να χαρακτηρίζεται από την απουσία της A & gt? Τ μεταστροφές στο

ΤΡ53

γονίδιο [26] απομακρύνεται από το κάτω ουρητήρα ενός 64 ετών γυναίκα, ενσωματωμένα σε Tissue-Tek, καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο ψυγμένο 2-μεθυλοβουτάνιο (ισοπεντάνιο) και αποθηκεύεται στους -70 ° C. IHC, μικροδιατομής, εξαγωγή DNA και

TP53

αλληλούχιση πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις μεθόδους που περιγράφονται παραπάνω.

Αξιολόγηση της όριο ανίχνευσης για Sanger αλληλούχισης

Για το όριο της μελέτης ανίχνευσης , το DNA εκχυλίζεται από δύο κυτταρικές σειρές Κεφαλής και Τραχήλου πλακωδών κυττάρων Καρκίνωμα (SC173 και SC263, παραχωρήθηκε ευγενικά από τον AC Begg, Ολλανδικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Ολλανδία) που μεταφέρουν διαφορετικές

TP53

μεταλλάξεις και από ένα άγριου τύπου

TP53

κυτταρική σειρά HNSCC (HN30, ευγενώς από τον Μ Flinterman, Κλινική Στοματικής Ιατρικής και Παθολογίας, το Βασιλικό Κολέγιο του Λονδίνου, το Ινστιτούτο βροχή, UK). Χαρακτηρισμός του

TP53

κατάσταση στο παρελθόν ήταν που πραγματοποιήθηκε στο εργαστήριό μας χρησιμοποιώντας FASAY ανάλυση [25]. SC173 φέρει μια παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη στο εξόνιο 5: R175H (ΚΕΔ & gt? CAC). SC263 παρουσιάζει μια ένωση ετερόζυγη αλλαγή περιλαμβάνει μια μετάλλαξη ανοησίες R306X στο εξόνιο 8 (CGA & gt? TGA) και ένα 32-bp απαλοιφή στο εξώνιο 7 (del 704-735) (CTMA εργαστηριακά δεδομένα). DNA από τα δύο

ΤΡ53

μεταλλαγμένα κύτταρα αραιώθηκε σειριακά και εμπλουτίστηκε στο DNA άγριου τύπου κυττάρου για να έχουν 50 έως 1,25% μεταλλαγμένο να αναλογίες DNA άγριου τύπου. Ενίσχυση και ανάλυση αλληλούχισης διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω.

Συγκριτική στατιστική ανάλυση του αριθμού και του τύπου των μεταλλάξεων σε τρέχοντα και προηγούμενα δεδομένα

μοντέλο παλινδρόμησης Poisson Α κατασκευάστηκε για να συγκρίνουν την επικράτηση και τον τύπο ( Α & gt? T και G & gt? Τ) του

ΤΡ53

μεταλλάξεις στη θέση πρόσδεσης p53 μεταξύ ρεύμα (η = 5) και τις προηγούμενες [BEN (n = 11 και n = 97) και της Ταϊβάν (n = 151)] κλινική σειράς [11], [12], [14], και να συγκρίνουν τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης με εκείνες από ασθενείς με ουροθηλιακό κακοήθειες (ουροδόχου κύστης, του ουρητήρα, ανώτερου ουροποιητικού και της νεφρικής πυέλου) (n = 1.111), όπως αναφέρθηκε στο

TP53

βάση δεδομένων του IARC [27]. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα δεδομένα που σχετίζονται με την έκθεση ΑΑ απορρίφθηκαν από το

TP53

IARC αποτελέσματα της βάσης δεδομένων.

Αποτελέσματα

Η αξιολόγηση των δυνητικών τεχνητή

TP53

μεταβολές στη δείγματα ιστού

με τη διαδικασία μικροδιατομής επέτρεψε μια σωστή ταυτοποίηση των γνωστών μεταλλάξεων του DNA χαρακτηρίζεται από προηγούμενες δοκιμές ρουτίνας. Όσον αφορά την ταυτοποίηση των

KRAS

μεταλλάξεις στο συμπληρωματικό πρόγραμμα-κατεψυγμένα αδενοκαρκινώματα, τα αποτελέσματα ήταν απολύτως ταυτόσημα με εκείνα που ελήφθησαν προηγουμένως σε δείγματα FFPE (δηλαδή, την ταυτοποίηση των G12S και G12D μεταλλάξεις στα

KRAS

μεταλλαγμένο ιστούς και κατάσταση άγριου τύπου στα άλλα δύο όγκους). Όσον αφορά την αναγνώριση ενός συνταγματικού g.13380 G & gt? Α, η μετάλλαξη p.R248Q προσδιορίζονται από FASAY δοκιμασία σε περιφερειακά κύτταρα αίματος ενός ασθενούς με σύνδρομο Li-Fraumeni, η μετάλλαξη αυτή βρέθηκε επίσης σε κακοήθη κύτταρα από τον όγκο των κοκκιωδών κυττάρων χρησιμοποιώντας εκχύλιση του DNA, μικροδιατομής, ένθετα-PCR και αλληλούχιση διαδικασίες όπως χρησιμοποιείται στην παρούσα μελέτη.

Αντίθετα, καμία τεχνητή

TP53

αλλοιώσεις βρέθηκαν στα διάφορα ελέγχων που διενεργούνται για να ελέγξετε την εμφάνιση του

TP53

DNA που προκαλείται από βλάβες που σχετίζονται με την εκχύλιση του DNA, μικροδιατομής, ένθετα-PCR και διαδικασίες προσδιορισμού αλληλουχίας. Δεν βρέθηκαν μεταλλάξεις σε τρία από τα τέσσερα δείγματα ουρητήρα χρησιμοποιείται για να δοκιμάσει ένα

TP53

ιατρογενής βλάβη. Η μόνη εξαίρεση ήταν το δείγμα ουρητήρα από ένα διαβητικό ασθενή τύπου 2 με μια G & gt? Μια μετάβαση (g.12455, p.R156H) στο εξόνιο 5 του

TP53

γονίδιο μετά μικροδιατομής υπό υψηλή ισχύ λέιζερ. Δεν βρέθηκαν μεταλλάξεις στην περιοχή πρόσδεσης ρ53 DNA (εξόνια 5 έως 8) κατά την ανάλυση DNA από ένα καρκίνωμα ουροφόρων φαινακετίνη που προκαλείται.

Αξιολόγηση της όριο ανίχνευσης για Sanger αλληλούχισης

Το όριο ανίχνευσης για αλληλούχιση Sanger ταυτοποιήθηκε στο 6,25% του μεταλλαγμένου DNA στην αναλογία άγριου τύπου και με τα δύο

ΤΡ53

μεταλλαγμένες κυτταρικές σειρές, ανεξάρτητα από την μετάλλαξη ή διαγραφή αξιολογηθεί. Σε αυτήν την αναλογία του DNA, η ετερόζυγη A /G κορυφή με διαδοχικές αραιώσεις DNA από SC173 /HN30 μικτό DNA που ήταν ακόμη ορατά, όπως ήταν και η ετερόζυγη Τ και C αιχμής σε συνδυασμό με μια 32-bp απαλοιφή στο εξώνιο 7 με διαδοχικές αραιώσεις DNA από SC263 /HN30 μικτή ΟΝΑ.

Μορφολογία

Όλα p53 θετικές περιοχές αντιστοιχούσε στο θηλώδες TCC ή να ΚΑΚ περιέχουν αναπλαστικό και κύτταρα δυσπλαστικά (Πίνακας 1). Ενδο-ουροθηλιακά και έλασμα φλεγμονή propria, υπερπλασία και αντιδραστική ατυπία απουσίαζαν. Στον ασθενή 2, νεοπλασματικών και των δυσπλαστικών κυττάρων προσκόλληση στην βασική μεμβράνη (προσκόλληση CIS).

γονιδιακές μεταλλάξεις TP53

Συμπεριλαμβανομένων δύο προηγούμενα αποτελέσματα [10], ένα σύνολο 16 εντελώς διαφορετική εξονικό (n = 13) ή εσωνίου (n = 3) μεταλλάξεις του

ΤΡ53

γονίδιο βρέθηκαν σε κακοήθεις ιστούς urothelial από τη βελγική ομάδα ΑΑΝ (Πίνακας 1). Στον ασθενή 1, δύο μεταλλάξεις βρέθηκαν στο ίδιο εξώνιο (εξώνιο 7), ενώ ένα μόνο μετάλλαξη βρέθηκε σε ασθενή 2 (εξόνιο 5) και 3 (ιντρόνιο 7). Οι ασθενείς 4 και 5 έτρεφε 5 διαφορετικές εξονικό και 1 ιντρονικές μεταλλάξεις. Μεταξύ των 13 εξονικές μεταλλάξεις, δύο ήταν ανοησίες (ασθενείς 2 και 5) και μεταλλάξεις εσφαλμένου νοήματος 11 (ασθενείς 1, 4 και 5). Βρίσκονταν στο εξόνιο 5 (3 μεταλλάξεις), το εξόνιο 6 (3 μεταλλάξεις), το εξόνιο 7 (3 μεταλλάξεις) ή εξόνιο 8 (4 μεταλλάξεις). Ένα από τα τρία ιντρονικές μεταλλάξεις (g.12627 A & gt? T, ασθενής 5) βρισκόταν στη θέση αποδέκτη ματίσματος AG. Σε παγκόσμιο επίπεδο, οι μεταλλάξεις που επηρεάζονται ζεύγη A:T (7/16) και ζεύγη G:C (9/16). Υπήρξε μια σχεδόν ίσο αριθμό των μεταβάσεων (7/16) και μεταστροφές (9/16). Μεταβάσεις (7/16) συνέβη πράγματι με παρόμοια συχνότητα σε A:T ζεύγη (3/16) και ζεύγη G:C (4/16). A & gt? G, G & gt? Α και C & gt? T (2/16) σημειώθηκαν με παρόμοια συχνότητα όπως T & gt? C (1/16). Ομοίως, μεταστροφές (9/16) βρέθηκαν σε A:T ζεύγη (4/16) και ζεύγη G:C (5/16) που κατανέμονται ως εξής: GT A &? Τ (3/16), G & gt? T (3/16 ), G & gt? C (2/16) και A & gt? C (1/16)

Συγκριτική στατιστική ανάλυση του αριθμού και του τύπου των μεταλλάξεων στην τρέχουσα και την προηγούμενη

δεδομένων

Το μοντέλο παλινδρόμησης Poisson. έδειξε μια εξαιρετικά σημαντική (ρ & lt? 0.001) σχετική αύξηση του

ΤΡ53

επικράτηση μετάλλαξη στα κωδικόνια ρ53 hotspot από την τρέχουσα κλινική σειρά, σε σύγκριση με τα αποτελέσματα της βάσης δεδομένων IARC (Πίνακας 3). Σε αντίθεση, μία σημαντική σχετική μείωση βρέθηκε τόσο στην BEN (n = 97) [12] και της Ταϊβάν (n = 151) [14] κλινική σειρά σε σύγκριση με το IARC και τρέχουσες κλινικές δεδομένων (Πίνακας 3). Μια μη σημαντική (p & gt? 0,05) σχετική μείωση /αύξηση βρέθηκε στην BEN (n = 11) [11] σε σχέση με το IARC και τις τρέχουσες κλινικά δεδομένα (Πίνακας 3)

Η

Όσον αφορά τον αριθμό των. A & gt? T μεταστροφής ανά ασθενή, μια σημαντική σχετική αύξηση βρέθηκε στην τρέχουσα, τόσο BEN [11], [12], καθώς και τα της Ταϊβάν [14] κλινική σειρά, σε σύγκριση με τα αποτελέσματα της βάσης δεδομένων IARC (Πίνακας 4). Μη σημαντική (p & gt? 0,05). Αποτελέσματα ελήφθησαν όταν συγκρίθηκαν τα προηγούμενα ΑΑΝ και τρέχουσες κλινικές σειρές (Πίνακας 4)

Η

Σε σύγκριση με τα αποτελέσματα της βάσης δεδομένων IARC, μια σημαντική 5,85 αύξηση της G & gt? T επικράτηση βρέθηκε στην τρέχουσα κλινική σειρά (Πίνακας 5). Δεν G & gt? T μεταστροφή βρέθηκε σε τόσο BEN σειρά. Αναφορικά με τη σειρά της Ταϊβάν, υπήρχε μια μη σημαντική σχετική μείωση στο G & gt?. Τ επικράτηση σε σύγκριση με τα στοιχεία του IARC ότι η εν λόγω μείωση ήταν ιδιαίτερα σημαντική σε σύγκριση με τα τρέχοντα αποτελέσματα (Πίνακας 5)

Η

Συζήτηση

Αυτή είναι η πρώτη έκθεση της μετάλλαξης φάσμα της

TP53

ογκοκατασταλτικό γονίδιο σε μια σειρά βελγική ασθενών (n = 5) με τεκμηριωμένη ΑΑΝ και την επακόλουθη ανάπτυξη της TCC στο ανώτερο ουροποιητικό σύστημα σε συνδυασμό με συμμετοχή της ουροδόχου κύστης σε ένα από αυτά. Τέσσερις από αυτούς είχαν ακολουθήσει AA-μολυσμένα δίαιτα απώλειας βάρους και μία αρνήθηκε την έκθεση σε ΑΑ, ενώ παρουσιάζει ένα τυπικό νεφρική ιστολογία της διάμεσης ίνωσης [20] με προσαγωγές AL-DNA [18].

Χρησιμοποιώντας αποκλειστικά κατεψυγμένα δείγματα αποτελεί απόλυτη προϋπόθεση για να επιτραπεί η κατάλληλη σύγκριση με τα υποβαλλόμενα στοιχεία. Εκτός για πέντε από τους 11 ασθενείς για τους οποίους χρησιμοποιήθηκαν φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστούς [11], όλα τα μεγάλα

TP53

γενετικές έρευνες σε υποθέσεις που παρουσιάζουν με ΑΑ που προκαλείται γονοτοξικότητας και ουροφόρων κακοήθειες πράγματι οδήγησε χρησιμοποιώντας φρέσκα κατεψυγμένα ιστούς [11], [12], [14]. Αντιστρόφως, ο στόχος ήταν να αποφύγει τη γνωστή επιβλαβή επίδραση φορμαλίνης στερέωση όσον αφορά την ποιότητα του DNA και χαρακτηρισμός των μεταλλάξεων κατάσταση ιστού [28]. Για να αποδείξει ότι

TP53

μεταλλάξεις δεν προκύπτουν από τεχνολογικές ανακαλύψεις, όταν χρησιμοποιεί το τμήμα κατεψυγμένων, ιδιαίτερη προσοχή δόθηκε στην ενδελεχή διαδικασίες επικύρωσης. Η τρέχουσα

TP53

δοκιμές περιελάμβανε διαδοχικές φάσεις (δηλαδή, σύλληψη λέιζερ μικροανατομή των καρκινικών κυττάρων μετά από τολουϊδίνης μπλε χρώση, εκχύλιση του DNA, την ενίσχυση ένθετα-PCR και αλληλούχιση). Αυτή η μέθοδος δεν παράγει ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Επέτρεψε πράγματι ορθό προσδιορισμό των γνωστών

KRAS

ογκογόνων μεταλλάξεων στο αδενοκαρκινώματα. Επέτρεψε επίσης μια σωστή ταυτοποίηση ενός προηγουμένως χαρακτηρίζεται

TP53

συνταγματική μετάλλαξη που σχετίζεται με το σύνδρομο Li-Fraumeni. Αυτή η μετάλλαξη βρέθηκε σε κύτταρα όγκου ενώ η προηγούμενη χαρακτηρισμός πραγματοποιήθηκε με μία λειτουργική δοκιμασία για περιφερικά μονοπύρηνα κύτταρα.

Ομοίως, η τρέχουσα διαδικασία δεν δημιουργούν ψευδώς θετικά αποτελέσματα κατά την ανάλυση δείγματα φυσιολογικού ουρητήρα συλλέχθηκαν μετά nephroureterectomy σε ασθενείς με ΑΑ-άσχετες ασθένειες ή φαινακετίνη που προκαλείται καρκίνωμα, και λαμβάνοντας τρέχουσα συμβατική του γονότυπου ως χρυσός κανόνας. Αυτό εφαρμόζεται επίσης κατά την εκτέλεση λέιζερ συλλαμβάνει μικροδιατομής με υψηλή ένταση. Η μόνη μετάλλαξη που βρέθηκε ήταν ένα ενιαίο G & gt? Μια μετάβαση (g.12455, p.R156H) στο δείγμα ιστού από ένα διαβητικό ασθενή τύπου 2 χωρίς ιστορικό νεοπλασίας. Ενδιαφέροντος, δεν υπάρχει σημαντική διαφορά στην επικράτηση της G & gt? Ένα μετάβαση μεταξύ του γενικού πληθυσμού και 2 διαβητικούς ασθενείς τύπου [29]. Όπως εκτιμάται από διαδοχικές αραιώσεις του

TP53

μεταλλαγμένο DNA, το όριο ανίχνευσης της τρέχουσας διαδικασίας προσδιορισμού του γονότυπου ήταν 6,25% των μεταλλαγμένων στην αναλογία άγριου τύπου.

Από ενδιαφέρον, όλοι οι ασθενείς από την τρέχουσα σειρά ήταν γυναίκες και το καθένα από αυτά παρουσιάζονται σε ένα τουλάχιστον

TP53

μετάλλαξη σε κακοήθη ουροφόρων ιστούς τους, ενώ μια πιο ισορροπημένη θηλυκό αναλογία ανδρών /βρέθηκε (53% /47%) και σε προηγούμενες μελέτες [11], [14] . Σε προηγούμενες μελέτες, η αναφερόμενη επικράτηση των ασθενών με

TP53

μετάλλαξη hotspot κυμάνθηκε από 100% (11/11 ασθενείς BEN) [11] έως 37% (36/97 BEN όγκοι) [12] ή 47% ( 71/151) Ταϊβάν AA-ασθενών [14]. Λαμβάνοντας υπόψη ότι μόνο ένας ασθενής είχε αναφερθεί με ένα πενταπλούς μετάλλαξη στη βάση δεδομένων IARC, η τρέχουσα παρατήρηση ότι το 40% (2/5) των ασθενών που έτρεφε πολλαπλές

TP53

μεταλλάξεις, το καθένα με έξι ξεχωριστές μεταλλάξεις (πέντε εξονικό και ένα ιντρονικές μεταλλάξεις, μεταξύ των οποίων ένα συναρμογής μετάλλαξη ιστοσελίδα στον ασθενή 5) ήταν εντυπωσιακή και πολύ ασυνήθιστο εύρημα. Είναι επίσης ενδιαφέρον να σημειωθεί ότι αυτή η Quintuple μετάλλαξη βρέθηκε επίσης στη σειρά BEN [12], η οποία είναι μία από τις μέχρι τώρα μεγαλύτερες που αναφέρθηκαν ανθρώπινη σειρά ΑΑ σχετικών

TP53

μεταλλάξεις. Σε σύγκριση με δεδομένα από μη ΑΑ συνδέονται urothelial καρκίνων στη βάση δεδομένων IARC (n = 1.111) και από τη σειρά της Ταϊβάν (n = 151), η τρέχουσα σειρά έδειξε την υψηλότερη σχετική αύξηση του επιπολασμού της μετάλλαξης και G & gt? Τ μεταστροφής στο

TP53

περιοχή hotspot. Ανεξάρτητα από την τρέχουσα ή προηγούμενη AA-series, την επικράτηση της A & gt? T μεταστροφής ήταν σημαντικά και σταθερά υψηλότερες από ό, τι στη βάση δεδομένων του IARC [27]. εύρημα μας επιβεβαιώνει ότι ο αριθμός και το προφίλ του

TP53

μεταλλάξεις ανά ασθενή είναι εξαιρετικά ασυνήθιστο, αντικατοπτρίζοντας πιθανώς μια ξαφνική υψηλής έκθεσης σε τοξικές ουσίες. Είτε αυτές οι πολλαπλές μεταλλάξεις εμφανίστηκαν σε διάφορες κακοήθεις κλώνους δεν αξιολογήθηκε. Ωστόσο, ο αριθμός των διακριτών περιοχών του όγκου που σχετίζονται με αυτό το περίπλοκο μεταλλάξεων φάσμα αντανακλά σίγουρα μεγάλη εντός του όγκου ετερογένεια με πολυ- ή πολυκλωνικού κακοήθη επιθηλιακά κύτταρα ουροδόχου κύστης.

Κοιτάζοντας σε λεπτομέρειες του τύπου της μετάλλαξης hotspot σε αυτή τη μελέτη, το σημείο μεταλλάξεις σε ζεύγη A:T ήταν τόσο συχνές και αυτών που διατρέχουν G:C ζεύγη (7/16 έναντι 9/16, αντίστοιχα). Είχαν κυριαρχείται από μεταστροφές με A & gt? T και G & gt? T αντιπροσωπεύουν το καθένα για 18,7% (3/16) του συνόλου των

TP53

μεταλλάξεις. Είναι ενδιαφέρον, A & gt? T μεταστροφή στην ανθρώπινη AA σχετίζονται ουροφόρων όγκου αναφέρθηκε για πρώτη φορά σε έναν ασθενή του Ηνωμένου Βασιλείου [30], αλλά A & gt? T μεταστροφή στη συνέχεια βρέθηκε συχνά στην περιοχή του p53 hotspot από καρκίνωμα ουροφόρων που συνδέονται με το βαλκανικό ενδημικό νεφροπάθεια (BEN) [ ,,,0],11], [12], καθώς και στην Ταϊβάν [14]. Σε όλες αυτές τις μελέτες, ο πληθυσμός εκτέθηκε σε ΑΑ για πολλά χρόνια, με στοιχεία τόσο υψηλές όσο 66% (33/50) έως 72% (13/18) και 55% (46/84) όλων

ΤΡ53

μεταλλάξεις, αντιστοίχως. Κατά την τρέχουσα σειρά, ένα όγκου με πολλαπλές

TP53

μεταλλάξεις έτρεφε δύο A & gt? Μεταστροφές Τ, ένα χαρακτηριστικό που επίσης συχνά αναφερθεί στην BEN και η σειρά της Ταϊβάν [11], [12], [14].