Αφηρημένο

Ιστορικό

Η συχνότητα των θηλώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς (PTC) έχει αυξηθεί σταθερά κατά τη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών, καθώς και τα ποσοστά υποτροπής. Έχει προταθεί ότι η στοχοθετημένη αφαιρετική φυσικοθεραπεία θα μπορούσε να είναι ένας θεραπευτικός τροπικότητα στον καρκίνο του θυρεοειδούς. Στοχευμένες βιο-συγγένειας λειτουργοποιημένα Πολύτοιχες νανοσωλήνες άνθρακα (BioNanofluid) δρουν τοπικά, για να μετατρέψει αποτελεσματικά την εξωτερική ενεργειακή φως για τη θέρμανση έτσι συγκεκριμένα σκοτώνει τα καρκινικά κύτταρα. Αυτό μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη νέα καρκίνου θεραπευτική τροπικότητα, προχωρεί πέρα ​​από τις συμβατικές εκτομή με λέιζερ και άλλες προσεγγίσεις νανοσωματιδίων.

επιλέχθηκε Μέθοδοι

θυρεοειδούς Ορμόνη Receptor (TSHR) ως στόχος για τα κύτταρα PTC, λόγω στην ευρεία έκφραση. Είτε TSHR αντισώματα ή Thyrogen ή καθαρισμένη TSH (θυρεοτροπίνη) έχουν χημικά συζευγμένο με λειτουργοποιημένα Bionanofluid μας. Ένα σύστημα λέιζερ διόδου (532 nm) χρησιμοποιήθηκε για να φωτίσει μια κυτταρική γραμμή PTC για ρυθμίσετε χρόνους έκθεσης. Ο κυτταρικός θάνατος εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας Trypan μπλε χρώση.

Αποτελέσματα

TSHR στόχευση BioNanofluids ήταν ικανά επιλεκτικά εκτομής BCPAP, ένα TSHR-θετική κυτταρική γραμμή PTC, ενώ δεν TSHR-null NSC-34 κύτταρα . Διαπιστώσαμε ότι ένα 2: 1 BCPAP κυττάρων: α-TSHR-BioNanofluid αναλογία συζυγούς και μία έκθεση 30 δευτερολέπτων λέιζερ σκότωσε περίπου το 60% των κυττάρων BCPAP, ενώ το 65% και & gt? 70% των κυττάρων είχαν αφαιρεθεί χρησιμοποιώντας Thyrotropin- και Thyrogen- BioNanofluid συζυγή, αντίστοιχα. Επιπλέον, ελάχιστη μη στοχευμένη δολοφονία παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας επιλεκτική ελέγχους.

Συμπέρασμα

Ένα BioNanofluid πλατφόρμα προσφέρει μια πιθανή θεραπευτική διαδρομή για θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς έχει διερευνηθεί, με μας

in vitro

αποτελέσματα προτείνοντας την ανάπτυξη ενός ισχυρού και ταχεία μέθοδος επιλεκτική θανάτωση καρκινικών κυττάρων. Ως εκ τούτου, η θεραπεία BioNanofluid τονίζει την ανάγκη νέας τεχνολογίας για τη θεραπεία ασθενών με τοπική υποτροπή και μεταστατική νόσο που παρακολουθούν είτε εκ νέου λειτουργική εξερευνήσεις λαιμό, επαναλαμβανόμενη χορήγηση ραδιενεργού ιωδίου και ως έσχατη λύση εξωτερική ακτινοβολία ή χημειοθεραπεία, με λιγότερες παρενέργειες και βελτίωση της ποιότητας ζωής

Παράθεση:. Dotan Ι, Roche PJR, Παλιούρας Μ, Mitmaker EJ, Trifiro ΜΑ (2016) Μηχανική Multi-Walled νανοσωλήνων άνθρακα Θεραπευτικές Bionanofluids επιλεκτικά κύτταρα-στόχοι θηλώδες καρκίνο του θυρεοειδούς. PLoS ONE 11 (2): e0149723. doi: 10.1371 /journal.pone.0149723

Επιμέλεια: Valentin Cena, Universidad de Castilla-La Mancha, Ισπανία

Ελήφθη: 18 Ιουνίου 2015? Αποδεκτές: 4 του Φλεβάρη του 2016? Δημοσιεύθηκε: 22 Φεβρουαρίου 2016

Copyright: © 2016 Dotan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. ID έλαβε την υποστήριξη μισθού από το Ισραήλ Καρκίνο Ταμείο Έρευνας (ICRF)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς (ID, PJRR, MP, EJM, και MAT) θα ήθελε να γνωστοποιήσει προς τον εκδότη και αναθεωρητές ότι είναι επίσης εφευρέτες σχετικά με την ακόλουθη αίτηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας: BIONANOFLUID για χρήση ως ΑΝΤΙΘΕΣΗ, απεικόνιση, την απολύμανση και /ή το γραφείο ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΟ Ευρεσιτεχνίας AGENT-ΗΠΑ PCT- CA2014 /051.094 για το έργο που παρουσιάζονται εδώ και σε άλλες εξελίξεις μετά τις θεραπευτικές εξελίξεις. Αυτή η αίτηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας δεν έρχεται σε σύγκρουση με την πολιτική ανοιχτών δεδομένων του περιοδικού σχετικά με δεδομένα που βρίσκονται σε αυτό το χειρόγραφο ή την αίτηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας. Δεν υπάρχουν περαιτέρω διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα στην ανάπτυξη, ή διατίθενται στην αγορά προϊόντα να δηλώσει. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Κατά την τελευταία δεκαετία υπήρξε μια σημαντική αύξηση στη συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του θυρεοειδούς [1]. Αυτό το πρότυπο εξηγείται εν μέρει από την αύξηση στην ανίχνευση των μικρών οζιδίων που βρέθηκαν τυχαία στην απεικόνιση λαιμό, αλλά μια πιο δυσοίωνη τάση είναι η αυξανόμενη επικράτηση των μεγαλύτερων θυρεοειδούς (& gt? 4 εκατοστά) όγκους μαζί με λανθάνουσες μεταστάσεις στους λεμφαδένες [2]. Θηλώδες καρκίνωμα του θυρεοειδούς (PTC) μόνη της αντιπροσωπεύει το ~ 80% των καρκινωμάτων του θυρεοειδούς [3, 4]. Παρά το πολύ υψηλό ποσοστό επιβίωσης 10 χρόνια από άνω του 90% [3], τοπική υποτροπή παρατηρείται σε ποσοστό μέχρι 20% των περιπτώσεων, οδηγώντας σε διαγνωστικές και θεραπευτικές προκλήσεις [4]. Επιπλέον, η επιθετική παραλλαγές της PTC, όπως ψηλός-κυττάρων, στήλες-κυττάρων, νησιωτικές, δοκιδώδους και διάχυτη παραλλαγές σκληρυντική, αν και σπάνια, είναι η αύξηση της συχνότητας εμφάνισης. Αυτοί οι τύποι συχνά απαιτούν επιθετικές θεραπείες που συνδέονται με πολλές ανεπιθύμητες ενέργειες [5, 6].

Το στήριγμα της πρωτοβάθμιας επεξεργασίας PTC είναι ολική θυρεοειδεκτομή [3, 7, 8], που συνήθως ακολουθείται από ραδιενεργό ιώδιο εκτομή (RAI) στο ενδιάμεσο και οι ασθενείς υψηλού κινδύνου [3, 7-10], και η θεραπεία δια βίου λεβοθυροξίνης. Αν και προφυλακτική κεντρική ανατομή λεμφαδένες στο λαιμό κόμβο (PCND) παραμένει αμφιλεγόμενη, θεραπευτική λέμφου ανατομές κόμβος είναι συνήθως εκτελούνται [2, 11]. Για επαναλαμβανόμενες /προχωρημένο PTC, χειρουργική αφαίρεση είναι η καλύτερη επιλογή. Ωστόσο, η πλήρης βιοχημική ύφεση με αρνητικά επίπεδα θυρεοσφαιρίνης επιτυγχάνεται μόνο στο 27% των ασθενών (συχνά μετά από πολλαπλές παρεμβάσεις) [12], με ποσοστό επιβίωσης 20 ετών τόσο χαμηλά όσο το 36% [13]. Ο σημαντικός αριθμός των ασθενών που δεν είναι υποψήφιοι για χειρουργική επέμβαση μπορεί να υπόκειται σε επικουρική επιλογές θεραπείας, όπως η θεραπεία με εξωτερική ακτινοβολία (EBRT), που προδιαθέτουν σε μη αναστρέψιμη νοσηρότητα [7, 14-18]. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να βρούμε πιο ακριβείς και στοχευμένες θεραπευτικές επιλογές που θα επιτύχουν παρόμοια αποτελέσματα για πρωτογενή νόσο, και τη βελτίωση της κλινικά οφέλη για υποτροπιάζουσα νόσο, ενώ ταυτόχρονα ελαχιστοποιεί τη νοσηρότητα.

Δυστυχώς υπάρχουν εγγενείς περιορισμοί με τις τρέχουσες οπλοστάσιο μας στρατηγικών για την εξάλειψη της επανεμφάνισης των όγκων και υπάρχει ανάγκη να ανακαλύψουν νέες τεχνικές, όταν πρόκειται για υποτροπή της νόσου. Νανοϊατρική αναφέρεται στη χρήση της νανοτεχνολογίας στον τομέα της υγείας, και συνήθως χρησιμοποιεί υλικά που αναπτύσσονται σε νανοκλίμακα διαστάσεις και έχει ήδη αποδειχθεί ότι είναι εξαιρετικά αποτελεσματικό ως μια πλατφόρμα για την παράδοση του είτε φυσικής ενέργειας ή φάρμακα, καθώς επίσης και σε εφαρμογές απεικόνισης [19] . Ως εκ τούτου, η έννοια των νανοσωματιδίων με βάση θεραπευτικών του καρκίνου είναι να παρακάμψει τα θέματα με τα συμβατικά φαρμακοκινητική του φαρμάκου και την αντίσταση, ενώ περιορισμό των ζημιών, συστηματικά ή σε κανονικό γειτονικό ιστό. Επεκτείνεται επίσης να περιλαμβάνουν ασθενείς οι οποίοι δεν είναι διαθέσιμες με βάση τις συμβατικές μεθόδους. Με βάση τις τρέχουσες χημειοθεραπευτικά, αυξημένη επιλεκτική πίεση μέσω της εφαρμογής των χημειοθεραπευτικών παραγόντων οδηγεί σε αυξήσεις στην αντοχή των όγκων [20-22]. Επιπλέον, συμβατικά φυσικά θεραπείες που χρησιμοποιούνται για να αφαιρέσει τον ιστό, όπως η ακτινοβολία ή υψηλή ένταση λέιζερ θεραπείες, επίσης να βλάψει υγιείς ιστούς. Τα νανοσωματίδια που χρησιμοποιούνται ως φυσικοί παράγοντες που είναι ικανοί να ενισχύουν ή μετατροπή της ενέργειας εισόδου, να επάγει κυτταρική βλάβη σε επιλεκτική κλίμακα. Αυτή είναι η μοναδική φωτονικών ιδιοτήτων τους και plasmonic συμπεριφορά, κυρίως νανοσωλήνων άνθρακα, όπου τα σωματίδια αυτά απορροφούν το φως πολύ αποτελεσματικά και μέσω της plasmonic συντονισμού μετατρέπουν την ενέργεια της απορρόφησης του σε υπερβολική παραγωγή θερμότητας σε αυτό επιφάνεια [23, 24].

νανοσωματίδια Bio-συγγένειας, που περιγράφονται εδώ ως BioNanofluid, θα πρέπει να είναι σε θέση να: 1) αποδοτικά μετατρέπουν το φως σε θερμική ενέργεια, 2) εύκολα να τροποποιηθούν με συνδετήρες ή /και βιομόρια να προσδίδουν εξειδίκευση, 3) την αποτροπή μη ειδικής κυτταρικό θάνατο, και 4) έχουν μία κατανομή μεγέθους κάτω από 1 micron για να ενεργοποιήσετε αιμάτωση των ιστών. Η νανοϋλικό που ταιριάζει καλύτερα αυτή την περιγραφή είναι πολλαπλών τοιχωμάτων νανοσωλήνες άνθρακα (MWCNTs), που είναι κυλινδρικές δομές των ομόκεντρων [25, 26] φύλλα γραφενίου. Η στρωματοποίηση του μήκους του σωλήνα graphene και μεγάλο λόγο διαστάσεων δίνει μία σημαντική επιφάνεια για πολλαπλές βιομοριακή συνημμένα, δημιουργώντας σωματίδια πολυ-οδοντωτά, όπου αντισώματα ή άλλα προσδέματα μπορούν να αναγνωρίσουν πολλαπλούς υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας. Πολλαπλών τοιχωμάτων νανοσωλήνες άνθρακα προσφέρουν εξαιρετική τοπική κέρδη της θερμοκρασίας λόγω του υψηλού ικανότητά τους να απορροφούν το φως και το μετατρέπουν σε θερμότητα, ενώ παραμένει άθικτη [27-29]. Η θερμότητα που παράγεται πάνω κλίμακες νανομέτρων με νανοϋλικά επικολλάται στα κύτταρα, θα προκαλέσει επαρκή τοπική υπερθερμία χωρίς θέρμανση μεγαλύτερο μέρος των μη καρκινικών ιστών [30]. Επιπλέον, δεδομένου ότι το ανθρώπινο σώμα είναι διαφανές στην εγγύς υπέρυθρο (NIR), όπως σωματίδια με βραχίονα στόχευσης, μπορεί να προσφέρει ένα τεράστιο ποσό θερμότητας τοπικά όταν εκτίθενται σε φως NIR. NIR διαθέτει ήδη εξαιρετική διείσδυση του ανθρώπου βάθος, αλλά μπορεί να επεκταθεί περαιτέρω με ίνες /ενδοσκοπική προόδους στον τομέα της ιατρικής απεικόνισης που μπορεί να φέρει NIR πηγή φωτός σχεδόν οποιοδήποτε σημείο του σώματος [31].

Ο στόχος αυτής της μελέτης είναι να σχεδιάσει και να προετοιμάσει συζευγμένο BioNanofluids να αφαιρέσει PTC

in vitro

, δημιουργώντας μια στοχευμένη προσέγγιση με την πρόθεση να προκαλέσουν σωματική βλάβη στα καρκινικά κύτταρα σε κυτταρικό επίπεδο. Επιπλέον, η αποτελεσματικότητα ενός νέου στοχευμένη φωτογραφία-θερμική θεραπεία για PTC τη χρήση αυτών των συζευγμένο functionalized πολυ-νανοσωλήνων άνθρακα (BioNanofluid) σε καρκίνο του θυρεοειδούς μοντέλο κυτταρική σειρά θα αξιολογηθούν.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι κυτταρικές σειρές

Το θηλώδες κυτταρική σειρά καρκινώματος του θυρεοειδούς (BCPAP) [32-34] αγοράστηκε από DMSZ (Braunschweig, Γερμανία). Το νευροβλάστωμα-κινητικού νευρώνα υβριδικό ποντίκι NSC-34 [35] κυτταρική σειρά δωρήθηκε από τον Δρ Neil R. Cashman.

καλλιέργειας κυττάρων

BCPAP κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένα με 10 % FBS. NSC-34 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ μέσο συμπληρωμένο με 10% FBS και 20% L-γλουταμίνη. Όλες οι κυτταρικές σειρές επωάστηκαν στους 37 ° C, 5% CO

2 υγραμένου αέρα σε πλαστικές φιάλες καλλιέργειας (VWR, Καναδάς). Μόλις συρρέοντα, τα κύτταρα συλλέχθηκαν με τη χρήση διαλύματος Versene (0,48 mM EDTA σε PBS), φυγοκέντρηση και αραιώνονται σε μέσο σε συγκέντρωση 2,5 έως 3,5 χ 10

5 κύτταρα /ml.

Αντισώματα και χημικών αντιδραστήρια

Anti-TSHR αντισώματα αγοράστηκαν από Novus Biologicals, τον Καναδά, και Acris αντισώματα Inc, ΗΠΑ. Θυρεοτροπίνη (TSH Καθαρίστηκε ανθρώπινη phTSH) αγοράστηκε από Bioworld, ΗΠΑ. Το Thyrogen (Η ανασυνδυασμένη TSH ή ανασυνδυασμένης ανθρώπινης TSH) αγοράστηκε από την Genzyme Canada Inc, Καναδάς. Thiolyated PEG 5000 (πολυαιθυλένιο γλυκόλη, ΜΒ 5000 kD) αγοράστηκε από την Bio Laysan, USA. NHS (

Ν

υδροξυηλεκτριμίδιο) και EDC (αιθυλο-διμεθυλαμινοπροπυλκαρβοδιιμιδίου) αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich, USA.

κηλίδωση Western

BCPAP και NSC-34 κύτταρα συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας 0.05% θρυψίνη και λύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα διάλυμα 1 Χ Reporter Lysis. Για ανάλυση στυπώματος Western, 20 μα ολικής εκκαθαρίζονται κυτταρικό λύμα φορτώθηκε σε πήκτωμα 10% SDS-PAGE. Πρωτογενή αντισώματα αραιώθηκαν 1: 1000 και χρησιμοποιείται υπό πρότειναν τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. Η έκφραση της πρωτεΐνης έγινε ορατή χρησιμοποιώντας κιτ ECL και εκτίθεται σε φιλμ.

Συζευγμένο BioNanofluid προετοιμασία

COOH-ενεργοποιημένα Au-διακοσμημένα MWCNTs ελήφθησαν από το Πανεπιστήμιο McGill του Καναδά, και αραιώνεται με δ

2Η

2O σε μια συγκέντρωση εργασίας 18-20 mg /L πριν από τη σύζευξη, για να εξασφαλιστεί μονο-διασποράς. COOH λειτουργικοποίηση επιτεύχθηκε με επεξεργασία πλάσματος, μία γενική μέθοδος για την προσθήκη λειτουργικών ομάδων σε ελαττώματα δομές γραφενίου [36, 37]. Au διακόσμηση διεξήχθη με παλμικό λέιζερ εκτομής χρησιμοποιώντας ένα Nd: YAG λέιζερ εστιάζεται στην MWCNT στόχου σε μία ροή της τάξης των 1 J /cm

2. Η διαδικασία μπορεί συνήθως να διακοσμήσετε CdSe, Au, Ag, Si, Sn και στις MWCNTs. Το υλικό που δημιουργήθηκε είχε Au-επικάλυψη νησιά (μεταβλητού μεγέθους 1 nm-5 nm όπως παρατηρείται και μετράται από SEM στο Σχήμα 1Α) για την προσάρτηση PEG και εκτίθενται COOH ομάδες όπου Au ήταν απούσα. Συνέπεια των διαλυμάτων παρτίδας αξιολογήθηκε με φασματομετρία UV-vis, χρησιμοποιώντας την κορυφή 260 nm για να προσδιοριστεί συνεπής συγκέντρωση.

A. μικροσκοπία σάρωσης ηλεκτρονίων (SEM) εικόνες COOH-functionalized Au-επισημασμένο προέρχεται bionanofluids θειόλη άνθρακα, σε δύο διαφορετικές μεγεθύνσεις. σωματίδια Au έχουν οριστεί σφαιρικές δομές, τονίζεται από το βέλος. Β EDC-NHS χημεία σύζευξης για τη σύνδεση μορίων βιο-συγγένειας, είτε αντισώματος ή πρωτεΐνης /μιτογόνο προς την θειόλη-ΡΕΟ-CNT. ΡΕΟυλίωση της θειόλης-CNT περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι.

Η

BioNanofluid τροποποιήθηκε χρησιμοποιώντας Θειολωμένη PEG (MW 5000) σε διάστημα 1 ώρας με το -SH ομάδα που σχηματίζει το δεσμό Au-S, σχηματίζοντας το βάση για μη-ειδική πρόληψη απορρόφησης. Το υλικό που δημιουργήθηκε είχε δύο βούρτσες PEG γύρω από τις λεπτές νησιά επιχρυσωμένα και εκτεθειμένες ομάδες COOH όπου ο χρυσός ήταν απούσα. Ένα διάλυμα αποθέματος 150 μΜ thiolyated PEG παρασκευάστηκε σε απεσταγμένο νερό σε ρΗ 4,5. MWCNT [μητρικό διάλυμα 500 μL (1 μg)] επωάστηκε με 200 μι Θειολωμένη PEG5000 150 μΜ διάλυμα στοκ σε τελικό όγκο 700 μL σε θερμοκρασία δωματίου για μία ώρα σε ρΗ 5. Το μίγμα στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε για 10 λεπτά στις 13.000 RPM, το υπερκείμενο απορρίφθηκε και το σφαιρίδιο επαναιωρήθηκε σε 350 μL PBS (ρΗ 7.4). Η θειόλη-PEG-CNT στη συνέχεια συζεύγνυται με το μόριο στόχευσης. Το μίγμα σύζευξης περιλαμβάνονται 350 μL του PEG-BioNanofluid, 90 μL (36,8 mM) NHS, 90 μL (22,1 mM) EDC, και 4 μg ενός από τα ακόλουθα προσδέματα: α-TSHR, θυρεοτροπίνη ή Thyrogen, με ένα τελικό ρΗ 5,5 (βλέπε Σχήμα 1Β). Η σύζευξη αφέθηκε να προχωρήσει για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την ολοκλήρωση της σύζευξης, το μίγμα φυγοκεντρήθηκε για 10 λεπτά σε 13,000 RPM σε θερμοκρασία δωματίου, το υπερκείμενο απομακρύνθηκε και τα σφαιρίδια συζευγμένα BioNanofluid πλύθηκαν (3 φορές) με PBS και μετά επαναιωρήθηκαν σε 300 μL PBS.

Κυττάρων στόχευση και θεραπεία με λέιζερ

100 έως 200 μι συλλεχθεί πρόσφατα κυττάρων (που περιέχει 250,000-350,000 κύτταρα ανά ml) αναμίχθηκαν με 100-200 μλ συζυγή, θειόλη-PEG-CNT /BioNanofluid ή PBS, σύμφωνα με το πείραμα , σε ένα σωλήνα Eppendorf mL 1.5. Τα δείγματα στη συνέχεια επωάστηκαν στους 37 ° C σε μια περιστρεφόμενη σχάρα για 1 ώρα. Τα δείγματα στη συνέχεια πλύθηκαν 3 φορές με PBS για να απομακρυνθεί το μη δεσμευμένο BioNanofluid και εξωγενείς συντρίμμια κυττάρων. Μετά την πλύση, τα κύτταρα χωρίστηκαν σε ποσότητες 25 μL σε 200 μL στείρου eppendorfs, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ένα 532 nm 2,7 W /cm

λέιζερ 2 δύναμη. θεραπείες με λέιζερ πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση μεμονωμένων επωάσεις α-TSHR, θυρεοτροπίνη ή Thyrogen συζευγμένο-BioNanofluid. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν με ένα ελάχιστο 3 επαναλήψεις ανά συγκέντρωση ή την έκθεση λέιζερ ώρα. Πειράματα ελέγχου πραγματοποιήθηκαν με γυμνά IgG-συζευγμένο BioNanofluid, θειόλη-PEG-CNT (χωρίς συνδετήρες) ή με PBS και τα κύτταρα μόνο. Ο σκοπός των ελέγχων ήταν να διερευνηθούν οι επιδράσεις του κάθε χημικών και βιολογικών τροποποιήσεων, μη ειδική απορρόφηση και το χρόνο έκθεσης στο λέιζερ σε κύτταρα, καθώς επίσης και για τον περιορισμό ή την εξάλειψη των δευτερογενών επιδράσεων που θα μπορούσαν να προκαλέσουν θάνατο των κυττάρων έτσι ώστε να συμβαίνει μόνον όταν η λέιζερ αλληλεπιδρά με τους νανοσωλήνες άνθρακα

Αμέσως μετά την έκθεση λέιζερ, Trypan blue προστέθηκε σε ένα 1:. κάταγμα αναλογία κυττάρων 1 όγκος σε κάθε μικροσωλήνα, και το λευκό (live) κύτταρα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας αιμοκυτόμετρο. Μετρά διεξήχθησαν εις τριπλούν και κάθε πείραμα εκτελέστηκε σε 3 διαφορετικές περιπτώσεις. Το ποσοστό της θανάτωσης κυττάρων (ζωντανά κύτταρα που απομένουν) υπολογίστηκε σύμφωνα με την εξίσωση:

BioNanofluid πειράματα σταθερότητας

4 ° C

Τα συζυγή παρασκευάζονται την ημέρα 1, και διατηρούνται. στους 4 ° C μέχρι την ημέρα 21. τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν για μια ολόκληρη εβδομάδα (7 ημέρες 1, 2, 3, 4, 5, 6, και), και στη συνέχεια συνέχισε τις Ημέρες 10, 14 και 21. κύτταρα BCPAP εκτέθηκαν στην 532 nm laser για 30 δευτερόλεπτα σε ένα 2: 1 κύτταρα: BioNanofluid αναλογία. Οι συγκεντρώσεις των συζευγμένων και μη συζευγμένων BioNanofluid μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας το φασματόμετρο UV-VIS, για να εξασφαλιστεί ισοδυναμίας της συγκέντρωσης με τη χρήση ενός διαλύματος ίσων απορρόφησης.

-20 /-80 ° C.

Συζεύγματα που δημιουργήθηκαν την ημέρα 1 δειγματίστηκαν και διατηρήθηκαν στους -20 ° C ή -80 ° C. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν κατά τις ημέρες 1, 5, 7 και στη συνέχεια κάθε εβδομάδα για μέχρι και 6 εβδομάδες. κύτταρα BCPAP εκτέθηκαν στο λέιζερ 532 nm για 30 δευτερόλεπτα σε ένα 2: κύτταρο 1: συζυγούς αναλογία. Ομοίως, οι συγκεντρώσεις των συζευγμένων και μη συζευγμένων BioNanofluid μετρήθηκαν με τη χρήση του UV-VIS φασματόμετρο.

Αποτελέσματα

BioNanofluid χαρακτηριστικά

Η οπτική φυσική των νανοσωλήνων άνθρακα έχουν μελετηθεί και περιγράφεται αλλού [38]. Εν ολίγοις, έχουν τη μεγαλύτερη απορρόφηση συντελεστή των ειδών νανοσωματιδίων και μια ευρυζωνική απορρόφησης που ταιριάζει με τους κανόνες σχεδιασμού. Η στρωματοποίηση του μήκους του σωλήνα graphene είναι στην κλίμακα μικρομέτρων, προσδίδει ένα πολύ μεγάλο λόγο διαστάσεων για πολλαπλές βιομοριακή συνημμένα, δημιουργώντας πολλαπλά οδοντωτά σωματίδια, όπου πολλαπλούς υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας μπορούν να αναγνωριστούν από αντισώματα ή άλλα προσδέματα. Πολλαπλών τοιχωμάτων νανοσωλήνες άνθρακα (MWCNTs) προσφέρουν μια εξαιρετική μέθοδος για την εξαιρετικά εντοπισμένη παραγωγή θερμότητας λόγω της υψηλής ικανότητας τους να απορροφούν το φως και το μετατρέπουν σε θερμότητα, ενώ παραμένει άθικτη [27-29]. Αυτή είναι μια ιδιότητα των υλικών γραφενίου με βάση, καθώς παρουσιάζουν ευρυζωνικών απορρόφηση του φωτός, να είναι σε θέση να απορροφήσει ένα πολύ μεγάλο φάσμα του φωτός χρώματα και είναι σε θέση να μετατρέψει αυτή την ενέργεια με υψηλή απόδοση. Αυτό αποδεικνύεται από το μαύρο χρώμα ότι η νανοσωλήνες άνθρακα έκθεμα. Με απορρόφηση του φωτός, η ενέργεια του φωτονίου προάγει ένα ηλεκτρόνιο σε ένα υψηλότερο επίπεδο ενέργειας από την κατάσταση του εδάφους, η απώλεια αυτής της ενέργειας μπορεί να συμβεί είτε σε ασθενή εκπομπών φώτο-ανακλαστικό και μικρές διεργασίες ενδοσυστημική αλλά το θεμελιώδες μεταφορά ενέργειας στον περιβάλλοντα υλικά άνθρακα είναι υπό την μορφή θερμικής ενέργειας. Έτσι, η θερμότητα που παράγεται πάνω κλίμακες νανομέτρων από βιο-ενεργοποιημένα MWCNTs τοποθετηθεί σε επιλεκτική /στοχευμένες κύτταρα, θα προκαλέσει ταχεία και επαρκής τοπική υπερθερμία χωρίς «θέρμανση χύμα» του κοντινού δυνητικά ευαίσθητο ιστό. Προηγουμένως, έχουν νανοσωματίδια χρυσού με plasmonic ιδιότητες απορρόφησης τους έχουν χρησιμοποιηθεί για να μετατρέψει το φως σε θερμότητα και επάγει κυτταρικό θάνατο σε όγκους [25]. Το μεγάλο φως ροές ή ultra-short διαμορφώσεις παλμό φωτός που απαιτείται για την επίτευξη υψηλών θερμοκρασιών [39] πρέπει παρατεταμένη έκθεση των 5 έως 15 λεπτά [40] και να προκαλέσει επιζήμια ζημιές στα γύρω μη καρκινικά κύτταρα.

Το υλικό της βάσης του BioNanofluid είναι COOH λειτουργοποιημένο Πολύτοιχες νανοσωλήνες άνθρακα (μήκος που κυμαίνεται από 0,25 μm έως 10 μm, με διάμετρο 25-50 nm) με χρυσό (Αυ) είναι αραιά επικαλυμμένες ως πρόσθετη τροποποίηση, παρήχθη μέσω αμιδικών & amp? θειόλη διασυνδέσεις για χημικές και βιολογικές συνδετήρες. Εικόνες COOH-functionalized Au-διακοσμημένα MWCNTs διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας μικροσκοπία σάρωσης ηλεκτρονίων (Σχήμα 1Α).

TSHR στόχευση του BioNanofluid για κυτταρικές γραμμές PTC

υποδοχέα ορμόνης διέγερσης του θυρεοειδούς (TSHR) επιλέχθηκε για εύρωστη έκφραση του τόσο φυσιολογικό όσο και σε διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων [41-44], όπως αποδεικνύεται από μελέτες που δείχνουν καμία ρύθμιση προς τα κάτω της TSH-R σε διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων [45], ενώ άλλοι έδειξαν TSHR είναι υπερ-εκφράζεται σε καρκινώματα του θυρεοειδούς και καλοήθη αδενώματα, σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό του θυρεοειδούς [43]. Η προσκόλληση της TSH με τον υποδοχέα της διεγείρει την ανάπτυξη των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό, βοηθώντας έτσι στην PTC εξέλιξης [46]. Αυτό παρέχει μια εξήγηση ως προς το γιατί η λεβοθυροξίνη συνταγογραφείται σε δόσεις που καταστέλλουν TSH, δηλαδή, για να εμποδίσει την ανάπτυξη των μικρο-μεταστάσεων και /ή απομεινάρι του θυρεοειδούς ιστού μετά συμβατική θεραπεία για τον καρκίνο του θυρεοειδούς. Επιπλέον, η ισχυρή έκφραση της TSHR, είναι πανταχού παρούσα στην thyrocyte, ακόμα χρησιμεύει ως μια σημαντική και επίμονη ρυθμιστή και φυσιολογικό δείκτη στην πρωτοβάθμια και μεταστατική νόσο με την ικανότητα να στοχεύουν τα προϊόντα σύζευξης BioNanofluid για θεραπευτικές δυνατότητες.

Για να εκτιμηθεί το δυναμικό της με στόχο την TSHR, ένα TSHR-θετική κυτταρική γραμμή που εκφράζει PTC (BCPAP) βρέθηκε και επωάζονται με δύο διαφορετικές α-TSHR-BioNanofluid χρησιμοποιώντας TSHR αντισώματα από διάφορους προμηθευτές (Σχήμα 2). Αμφότερα τα αντισώματα προμηθευτή έδειξε παρόμοια και σημαντική κυτταρική σκοτώνει τα ποσοστά των 62 ± 5,6% (Ab # 1 -Acris αντισώματα) και 62 ± 5,1% (Ab # 2 -Novus βιολογικών), με p-τιμές των 0.000148 (Ab # 1)? και 5,74 x10

-5 (Ab # 2), σε σύγκριση με την IgG-BioNanofluids. Τα αντισώματα μόνο, IgG-BioNanofluid, ή μη συζευγμένου θειόλη-PEG-CNTs έδειξε ελάχιστη δυνατότητα θανάτωση κυττάρων

Δύο ειδικά αντισώματα TSHR, αγοράστηκε από διαφορετικές προμήθειες (Ab # 1, Acris Αντισώματα?. Ab # 2, Novus Biologicals ) συζεύχθηκαν σε μας θειόλης-ΡΕΟ-CNTs, μαζί με IgG κουνελιού και ποντικού-θειόλη-PEG-CNT συζυγή ως μη ειδικούς ελέγχους για τη στόχευση κυττάρων θανάτωση κυττάρων BCPAP PTC. Άλλες συνθήκες ελέγχου περιλαμβάνουν PBS, σωματίδια CNT και αντισώματα μόνο. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως% ζωντανά κύτταρα, μετά από θεραπεία με λέιζερ που ακολουθείται με βαφή κυανούν τρυπανίου για να καθορίσει τα νεκρά από ζώντα κύτταρα. α-TSHR-Bionanofluid συζυγών σημαντικά (Ab # 1, p = 0,000148? Ab # 2, p = 5,74 x10

-5) σκοτώθηκαν BCPAP κύτταρα έναντι IgG-bionanofluid συζυγών. Όλα τα άλλα στοιχεία ελέγχου δεν έδειξαν σημαντικές κύτταρα σκοτώνουν τα ποσοστά έναντι IgG-bionanofluids.

Η

BioNanofluid βελτιστοποιήσεις

Για να επιτευχθεί το μέγιστο ποσοστό θανάτωση κυττάρων με ελάχιστο εμφάνισης μη ειδικών κυττάρων θάνατος, προχωρήσαμε στη βελτιστοποίηση των συνθηκών μας να λογοδοτήσει για την κυτταρική συγκέντρωση σε bioNanofluid και το μήκος του χρόνου έκθεσης του συμπλόκου bionanofluid-κυττάρων στο λέιζερ

Αρχικά, αξιολογήσαμε τέσσερις διαφορετικές αναλογίες (4:. 1, 2 : 1, 1: 1 και 1: 2) των κυττάρων σε BioNanofluid συζυγή. A 2: 1 κύτταρο αναλογία BioNanofluid να απέδωσε 58,9% (± 2,3) ποσοστό θανάτωσης κυττάρων με α-TSHR-BioNanofluid, 65,1% (± 2,1) για θυρεοτροπίνη-BioNanofluid, και 72,4% (± 3,52) για Thyrogen-BioNanofluid (σχήμα 3Α ). Επιπλέον, το Thyrogen-BioNanofluid ξεπέρασε τόσο α-TSHR- και θυρεοτροπίνη-BioNanofluid στην αναλογία 2: 1. Η αύξηση της περιεκτικότητας σε BioNanofluid σε 1: 1 ή 1: 2 (κελί: BioNanofluid) αναλογία προκάλεσε 47,1% (± 7,65) και 69,0% (± 4,52) του κυτταρικού θανάτου, αντίστοιχα, των μη στοχευμένων θανάτωση ποσοστά κυττάρων στο CNT νανοσωματίδια μόνος έλεγχος ομάδα. Αυτή η αύξηση του κυτταρικού θανάτου, σε υψηλότερες συγκεντρώσεις μη συζευγμένου νανοσωματιδίων αναφέρεται σε μία αύξηση στην κατακράτηση των σωματιδίων επί του κυττάρου από μη ειδικές ενώσεις κυτταρικής επιφάνειας που επικρατούν σε όλες MWCNT συγκεντρώσεις. Ως εκ τούτου, μία υψηλότερη συγκέντρωση /αναλογία του μη ειδικού ομάδα σωματίδιο κατακράτησης είναι αρκετά πολυάριθμα για να δημιουργήσει ανεπιθύμητες χύμα-θέρμανση με αυτόν τον τρόπο τη θανάτωση κυττάρων. Επιπλέον, η σχετική πρόσθετη κυτταρικό θάνατο των μη-ειδική στόχευση των συζυγών α-TSHR-BioNanofluid στο 1: 1 [56,2% (± 8,70), ρ = 0.1501] ή 1: 2 [61,8 (± 21,2), ρ = 0.681] αναλογία ομάδα δεν ήταν σημαντική.

Συμπεριλαμβάνεται σε αυτές τις πειραματικές συνθήκες είναι, α-THSR-, Thyrogen-, και καθαρισμένο θυρεοτροπίνη-θειόλη-PEG-CNT συζυγών. συνθήκες ελέγχου περιλαμβάνονται PBS και CNT μόνο. A. Προσδιορισμός της βέλτιστης κυττάρων για τη σύζευξη αναλογία BioNanofluid για την επίτευξη συγκεκριμένων μέγιστη στοχευμένη δολοφονία BCPAP κυττάρων. χρόνος έκθεσης λέιζερ ήταν 30 δευτερόλεπτα για όλες τις συνθήκες. Οι λόγοι παρουσιάζονται ως όγκος: αναλογίες όγκου, έτσι για μια αναλογία 1: 1, 100 μί κυττάρων (των 250,000-350,000 κύτταρα ανά ml) αναμίχθηκαν με 100 μι Συζευγμένο-BioNanofluid συγκέντρωσης 2 μg /mL. Β βέλτιστη έκθεση πείραμα προσδιορισμού του χρόνου. κύτταρα BCPAP εκτέθηκαν σε θεραπεία με λέιζερ για 20, 30, και 40 δευτερόλεπτα, σε ένα 2: κύτταρο 1: conjugated- ή μη συζευγμένου-θειόλη-PEG CNT αναλογία

Η

πειράματα Χρόνος έκθεσης πραγματοποιήθηκαν με όλους. συζυγή για να προσδιοριστεί το υψηλότερο ποσοστό θανάτωσης κυττάρων χωρίς απώλεια της ειδικότητας, δηλαδή, τα υψηλά ποσοστά των μη στοχευμένων κυτταρικό θάνατο (Εικόνα 3Β). Σαράντα δεύτερη έκθεση απέδωσε 67,8% (± 4,4) θανάτωση κυττάρου (α-TSHR), 67,8% (± 5,6) (θυρεοτροπίνη) και 80,1% (± 5,1) (Thyrogen). Τριάντα δεύτερη έκθεση απέδωσε 59,4% (± 1,3) θανάτωσή τους (α-TSHR), 64,9% (± 5,8) (θυρεοτροπίνη) και 75,2% (± 3,5) (Thyrogen). Είκοσι δεύτερη έκθεση απέδωσε 48,5% (± 4,75) (α-TSHR), 52,9% (± 6,8) (θυρεοτροπίνη) και 65,8% (± 7,5) (Thyrogen). Παρά το γεγονός ότι τα υψηλότερα ποσοστά θανάτωση κυττάρων επιτεύχθηκαν με μεγαλύτερους χρόνους έκθεσης (40 sec & gt? 30 δευτερόλεπτα & gt? 20 sec), μη στοχευμένη δολοφονία στην ομάδα ελέγχου BioNanofluid με το δεύτερο χρόνο έκθεσης 40 ήταν 32,7% (± 11,6), γεγονός που αντικατοπτρίζει και πάλι το το ζήτημα της αντιμετώπισης μη ειδικής θανάτωσης κυττάρων μέσω της εκ νέου διερεύνηση της PEG-τροποποίηση. Ως εκ τούτου, για δεύτερη φορά 30 της έκθεσης αντιστοιχούσε στον υψηλότερο ποσοστό συγκεκριμένων θανάτωση κυττάρων. Ωστόσο, όταν η έκθεση λέιζερ αυξήθηκε κατά ένα δεύτερο διάστημα δέκα, προκάλεσε περίπου 2,5 φορές την ποσότητα (12% κυτταρικό θάνατο στα 30 δευτερόλεπτα έναντι 33% κυτταρικό θάνατο σε 40 δευτερόλεπτα έκθεσης λέιζερ) της μη ειδικής κυτταρικό θάνατο στον ΟΗΕ ομάδα ελέγχου συζευγμένο CNT. Αυτό αντανακλά το σημείο καμπής μεταξύ νανο-κλίμακα παράδοση της θερμοκρασίας και του χρόνου που χρειάζεται για BioNanofluid σε αρκετά μεγαλύτερο μέρος της θερμότητας ένα κυτταρικό εναιώρημα. Προηγούμενες μελέτες έχουν εξετάσει την επίδραση της ισχύος του λέιζερ και ο χρόνος έκθεσης που απαιτείται για τη μεταφορά αρκετή ενέργεια που οδηγεί σε καταστροφή των κυττάρων. Για παράδειγμα, μια μελέτη κατεργασμένα κύτταρα Daudi με χρόνους έκθεσης των 7 λεπτών και έδωσε περισσότερο από 90% κυτταρικό θάνατο [47]. Άλλες μελέτες θεραπεία του καρκίνου του μαστού, καρκίνος του παχέος εντέρου, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και κυτταρικές σειρές Daudi για 3 λεπτά ή περισσότερο [48-50]. Αν και ορισμένες από τις προαναφερθείσες μελέτες χρησιμοποίησαν νανοσωλήνες μονού τοιχώματος του άνθρακα (SWCNT) με καθορισμένα χαρακτηριστικά φωτοθερμικών, βρήκαμε ότι ακόμη και με μια μικρή αύξηση της τάξης του 10 δευτερόλεπτα, η χρήση των MWCNT αποδειχθεί πιο παράπλευρες απώλειες. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι η τεχνική και σωματιδίων προετοιμασία του MWCNT που χρησιμοποιείται για αυτό το πείραμα δείχνουν μεγαλύτερη αποτελεσματικότητα στη φωτογραφία-θερμική μεταφορά θερμότητας σε ένα κύτταρο-ειδικό τρόπο.

TSHR στοχευμένες BioNanofluid εκλεκτικότητα και ειδικότητα

για την εκτίμηση τόσο της επιλεκτικότητας και εξειδίκευση του TSHR στοχευμένες BioNanofluid, επιλέξαμε για την εκτέλεση των πειραμάτων κυττάρων κατάλυσης ταυτόχρονα τόσο σε TSHR θετική και TSHR αρνητική κυτταρική σειρά. Όπως BCPAP είναι ένα θετικό TSHR κυτταρική σειρά που εκφράζει, βρήκαμε ότι ο κινητήρας ποντίκι νευρώνα κυτταρική γραμμή NSC-34 είναι μηδενική για έκφραση TSHR (Σχήμα 4Α). Ως εκ τούτου, θα δοκιμαστεί με α-TSHR-, Thyrotropin- και Thyrogen-BioNanofluids εναντίον τόσο BCPAP και NSC-34 κύτταρα (Σχήμα 4Β). Χρησιμοποιώντας ένα 2: 1 κύτταρο: BioNanofluid αναλογία και 30 δευτερολέπτων, βρήκαμε ότι η επιλεκτική στόχευση μας TSHR μπορεί ειδικά και σημαντικά διακρίσεις μεταξύ TSHR εκφράζουν και μη κυτταρικές σειρές που εκφράζουν

Α.. TSHR έκφραση BCPAP και NSC-34 κυττάρων προσδιορίστηκε με ανάλυση κηλίδος Western, χρησιμοποιώντας ειδικό αντίσωμα TSHR. BCPAP ήταν θετικά για έκφραση TSHR, ενώ NSC-34 κύτταρα ήταν μηδενική. Β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Β BCPAP και NSC-34 κυττάρων επωάστηκαν α-THSR-, Thyrogen-, και καθαρισμένο θυρεοτροπίνη-θειόλη-ΡΕΟ-CNT συζυγή. συνθήκες ελέγχου περιελάμβαναν IgG-θειολ-PEG-CNTs, PBS και CNT μόνο. Όλες οι συνθήκες διεξήχθησαν σε 2: 1 κύτταρο: bionanofluid αναλογία και δεύτερη έκθεση λέιζερ 30. Τα κύτταρα BCPAP έδειξε ~ 60% σε ~ 73% των κυττάρων σκοτώνοντας με όλα τα TSHR στοχευμένες bionanofluid συζεύξεις, ενώ ελάχιστη θάνατος κυττάρων παρατηρήθηκε με τις έλεγχο άλλων προϋποθέσεων. Η κυτταρική σειρά NSC-34 έδειξε αμελητέο κυτταρικό θάνατο σε όλες τις συνθήκες.

Η

BioNanofluid σταθερότητα

Τα πειράματα διεξήχθησαν για την αξιολόγηση της δραστηριότητας των TSHR στοχευμένες BioNanofluids, από την αξιολόγηση της σταθερότητας τους στο πλαίσιο συνθήκες παρατεταμένης αποθήκευσης. Μια παρτίδα α-TSHR-BioNanofluid δημιουργήθηκε και διατηρημένο στους 4 ° C για 21 ημέρες, ή -20 ° C και -80 ° C για 6 εβδομάδες. Η παρτίδα των α-TSHR-BioNanofluid αποθηκεύονται στους 4 ° C αξιολογήθηκε για την δράση τους για την εκτομή κύτταρα BCPAP καθημερινά επί μία περίοδο 1 εβδομάδας, και στη συνέχεια επαναλαμβάνεται τις ημέρες 10, 14 και 21 (Σχήμα 5Α). α-TSHR-BioNanofluid άρχισε να χάνει την αποτελεσματικότητα από την 5η ημέρα, με την ικανότητά του να αφαιρέσει κύτταρα BCPAP πτώση από 60% έως 40%, ενώ Thyrogen-BioNanofluid συζυγών χάσει την αποτελεσματικότητα κατά την ημέρα 6. Τόσο α-TSHR- και Thyrogen-BioNanofluid φάνηκε να οροπέδιο του ότι είναι 40% αποτελεσματικό μέχρι την ολοκλήρωση του πειράματος, υποδεικνύοντας συνεχίστηκε, αλλά παρεμποδίζεται κυττάρων επιλεκτικότητα. Μπορεί να υποτεθεί ότι η απόδοση θα μειωθεί με την μετουσίωση των πρωτεϊνών προσδεμάτων σε σύντομο χρονικό διάστημα, όταν αποθηκεύονται στους ασταθείς συνθήκες του 4 ° C. Ωστόσο, αν και τίποτα δεν μπορεί να συναχθεί άμεσα ως προς Thyrogen ή δομή α-TSHR, οι συγκεντρώσεις της BioNanofluid αποθηκεύθηκαν στους 4 ° C ήταν σταθερά όπως μετράται από το UV /VIS φασματόμετρο πριν από την ανάμιξη με τα κύτταρα. Όπως συνδετήρα-BioNanofluid UV /VIS απορρόφηση παραμένει σταθερή ανεξάρτητα από το δυναμικό μετουσίωσης, προτείνεται ότι δίνει απορρόφηση της σε συνδυασμό δομής στα 260 nm (απορρόφηση σε αυτό το μήκος κύματος είναι κοινή σε πρωτεΐνες και CNTs) ότι λίγη ή καθόλου απώλεια του συνδέτη ή CNTs λόγω ευθύνη της σύνδεσης αμιδίου ή υποβάθμιση του CNT είναι οι λόγοι για την πτώση της οικονομικής δραστηριότητας (βλ S1 πίνακα).

Α. α-TSHR- και Thyrogen-θειόλη-ΡΕΟ-CNT συζυγή παρασκευάσθηκαν κατά την ημέρα 1 και διατηρήθηκε στους 4 ° C για έως 21 ημέρες. δραστηριότητα Προϊόντα σύζευξης εκτιμήθηκε με θανάτωσης κυττάρων δοκιμασία των κυττάρων BCPAP (όπως περιγράφεται παραπάνω). B. Ομοίως, α-TSHR- και Thyrogen-θειόλη-ΡΕΟ-CNT συζυγή παρασκευάσθηκαν κατά την ημέρα 1 και διατηρήθηκαν στους -20 ° C ή -80 ° C για έως 6 εβδομάδες. δραστηριότητα Προϊόντα σύζευξης εκτιμήθηκε με θανάτωσης κυττάρου δοκιμασία την ημέρα 5, ημέρα 7, και κάθε εβδομάδα για μέχρι και 6 εβδομάδες.

Η

Ένα παρόμοιο πείραμα διεξήχθη επί 6 εβδομάδες με την BioNanofluid αποθηκεύονται στους -20 ° C ή -80 ° C (Σχήμα 5Β). BCPAP πειράματα κύτταρο εκτομή διεξήχθησαν κατά τις ημέρες 1, 5, 7 και σε εβδομαδιαία βάση, για έως 6 εβδομάδες. Τα αποτελέσματα αποκαλύπτουν τη σταθερότητα της δραστηριότητας BioNanofluid και στις δύο συνθήκες -20 ° C και -80 ° C αποθήκευσης, όπως παρατηρείται από τα ποσοστά των κυττάρων κατάλυσης για την α-TSHR-BioNanofluid και διατηρώντας & gt? 60% αποτελεσματικότητα, και η Thyrogen-BioNanofluid διαθέτουν & gt? 65% αποτελεσματικότητα, πάνω από το 6 εβδομάδων του πειράματος. Τα συζευγμένα και un-συζευγμένα MWCNT συγκεντρώσεις μετρήθηκαν εν παραλλήλω για κάθε πείραμα, και όλα έδειξαν σταθερών συγκεντρώσεων.

Συζήτηση

Υπάρχουν εγγενείς περιορισμοί στη θεραπεία του υποτροπιάζοντος καρκίνου του θυρεοειδούς. Παρά το γεγονός ότι η πλειονότητα των περιπτώσεων αντιμετωπίζονται με θυρεοειδεκτομή, ακολουθούμενη από TSH-κατασταλτική θεραπεία με λεβοθυροξίνη και ραδιενεργού ιωδίου σε επιλεγμένες περιπτώσεις? υποτροπιάζοντα καρκίνο του θυρεοειδούς παρουσιάζει μια θεραπευτική πρόκληση. Το παράδειγμα της θεραπείας του καρκίνου του θυρεοειδούς και στην επανάληψη παρέχει το κατάλληλο πλαίσιο για να μελετήσει την εφαρμογή των μοριακά στοχευμένες φυσικούς παράγοντες. Νανο-μεσολάβηση φωτογραφία θερμική θεραπεία κερδίζει έδαφος με τη μορφή στοχευμένων φυσικούς παράγοντες που τη θεραπεία μιας ποικιλίας καρκίνων. Η κρίσιμη πρόκληση για τον καρκίνο του θυρεοειδούς είναι να παραδώσει έναν παράγοντα που στοχεύει όχι μόνο τα καρκινικά κύτταρα, αλλά στοχεύει επίσης φυσιολογικό απομεινάρι κύτταρα του θυρεοειδούς. Σε αυτή τη μελέτη, με στόχο την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας ενός καινοτόμου στοχευμένη φυσική θεραπεία χρησιμοποιώντας πρόσφατα κατασκευασμένο βιο-συγγένεια λειτουργοποιημένα νανοσωλήνες άνθρακα, ή συζυγή BioNanofluid, προκειμένου να αποδείξει

in vitro

, η αποτελεσματικότητα της στόχευσης TSHR και εκτομής