Αφηρημένο

Ιστορικό

Μετάσταση στην περιφερειακή λεμφαδένες μέσω των λεμφικών αγγείων διαδραματίζει βασικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου. Όγκων λεμφαγγειογένεση είναι γνωστό για την προώθηση της λεμφικής μετάσταση, και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα C (VEGF-C) είναι ένα κρίσιμο ενεργοποιητής της λεμφαγγειογένεσης όγκου κατά την διάρκεια της διαδικασίας της μετάστασης. Έχουμε ήδη εντοπιστεί periostin ως invasion- και την αγγειογένεση προώθηση παράγοντα στο κεφάλι και ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα τραχήλου (HNSCC). Σε αυτή τη μελέτη, ανακαλύψαμε ένα νέο ρόλο για periostin στη λεμφαγγειογένεση όγκου.

Μέθοδοι και Ευρήματα

Periostin υπερέκφραση ρυθμίζεται προς τα πάνω την έκφραση του VEGF-C mRNA σε κύτταρα HNSCC. Με τη χρήση ρυθμισμένων μέσων από κύτταρα HNSCC periostin υπερεκφράζουν, εξετάσαμε σχηματισμός σωλήνα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα. Προσαρμοσμένα μέσα από κύτταρα periostin-υπερεκφράζουν προωθείται σχηματισμό σωλήνα. Να γνωρίζουν τη συσχέτιση μεταξύ periostin και VEGF-C, συγκρίναμε Periostin έκφραση με την έκφραση του VEGF-C σε 54 περιπτώσεις HNSCC με ανοσοϊστοχημεία. Periostin έκφραση συσχετίστηκε καλά με την έκφραση VEGF-C σε περιπτώσεις HNSCC. Επιπλέον, η συσχέτιση ανάμεσα στην έκκριση periostin και VEGF-C παρατηρήθηκε σε ορό από ασθενείς HNSCC. Είναι ενδιαφέρον, periostin ίδια προωθείται σχηματισμός σωλήνα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα ανεξάρτητα του VEGF-C. Periostin-προωθείται λεμφαγγειογένεση επιτεύχθηκε με τη μεσολάβηση της Src και Akt δραστηριότητα. Παρατηρήθηκε μάλιστα πιθανή συσχέτιση μεταξύ periostin και του λεμφικού κατάσταση στην periostin υπερεκφράζουν όγκων ξενομοσχεύματος και περιπτώσεις HNSCC.

Συμπεράσματα

Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι periostin η ίδια, καθώς και periostin που προκαλείται ανοδική ρύθμιση του VEGF-C μπορεί να προωθήσει λεμφαγγειογένεση. Προτείνουμε periostin μπορεί να είναι ένας δείκτης για την πρόβλεψη των κακοήθων συμπεριφορές σε HNSCC και πιθανός στόχος για μελλοντική θεραπευτική παρέμβαση για να εμποδίσουν όγκων του λεμφικού εισβολή και λεμφαγγειογένεση σε ασθενείς HNSCC

Παράθεση:. Kudo Υ, Iizuka S, M Yoshida , Nguyen PT, Siriwardena SBSM, Tsunematsu T, et al. (2012) Periostin άμεσα και έμμεσα Προωθεί Όγκων λεμφαγγειογένεση του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου. PLoS ONE 7 (8): e44488. doi: 10.1371 /journal.pone.0044488

Επιμέλεια: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesu », Ιταλία

Ελήφθη: 19, Απριλίου, 2012? Αποδεκτές: 3 Αυγ, 2012? Δημοσιεύθηκε: 30, Αυγούστου 2012

Copyright: © Kudo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις-in-Aid από το Υπουργείο Παιδείας, Επιστημών και Πολιτισμού της Ιαπωνίας (Υ Kudo και Τ Takata), ένα Research Fellowship για Νέους επιστήμονες και την άριστη Νέοι ερευνητές Overseas Επίσκεψη του Προγράμματος από την Ιαπωνία Εταιρείας για το προώθηση της Επιστήμης (Σ Iizuka), και μια επιχορήγηση του Ιδρύματος Kurozumi Memorial (Υ Kudo). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συγγραφέας Masahiro Maeda απασχολείται με ανοσο-Βιολογικών Εργαστηρίων, Co., Ltd. Αυτό δεν μεταβάλλει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Εκατομμύρια άνθρωποι πεθαίνουν κάθε χρόνο από μεταστατικό καρκίνο. Μετάσταση συμβαίνει μέσω του αίματος ή του λεμφικού σκάφη ή απευθείας στους ιστούς και τις κοιλότητες του σώματος. Αν και οι βιοχημικοί μηχανισμοί της μετάστασης είναι ελάχιστα κατανοητή, η διαδικασία πιστεύεται ότι είναι συστηματική και όχι τυχαία [1]. Περιφερειακούς λεμφαδένες είναι συχνά τα πρώτα σημεία εξάπλωσης του, προφανώς λόγω των καρκινικών κυττάρων αποχέτευσης μέσω του προϋπάρχοντος προσαγωγών λεμφαγγείων ή /και νεοσυσταθείσα λεμφικό τριχοειδή αγγεία [2], [3]. Head και ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα αυχένα (HNSCC) είναι ένας από τους πιο κοινούς τύπους καρκίνου στον άνθρωπο, με ετήσια συχνότητα εμφάνισης πάνω από 500.000 περιπτώσεις παγκοσμίως [4]. Η βιβλιογραφία δείχνει ότι ο σημαντικότερος λόγος για το υψηλό ποσοστό θνησιμότητας είναι ότι η νόσος συχνά δεν διαγιγνώσκεται ή θεραπεία μέχρι να φτάσει σε προχωρημένο στάδιο. Παρά την επιθετική, διεπιστημονικές προσεγγίσεις θεραπείας, συμπεριλαμβανομένης της προεγχειρητική ή μετεγχειρητική χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία με επανορθωτική χειρουργική, 5-ετή επιβίωση HNSCC δεν έχει βελτιωθεί σημαντικά κατά τα τελευταία 20 χρόνια [5]. Όπως τα περισσότερα άλλα επιθηλιακών καρκίνων, HNSCC αναπτύσσεται σε μια διαδικασία πολλών σταδίων μέσω της συσσώρευσης των πολλαπλών γενετικών και επιγενετικών αλλαγών. Το πιο σημαντικό προγνωστικός δείκτης για τους ασθενείς HNSCC είναι μετάσταση στους τραχηλικούς λεμφαδένες ή μακρινές [6] όργανα. Έχουμε προηγουμένως καθιερώσει ένα HNSCC κυτταρική σειρά από ένα μεταστατικό λεμφαδένα [7] και χρησιμοποίησε ένα

in vitro δοκιμασία

εισβολή για την απομόνωση ενός πολύ επεμβατική κλώνου από αυτή την κυτταρική γραμμή [8]. Στη συνέχεια συνέκριναν τα μεταγραφικά προφίλ των κυττάρων HNSCC γονέα και το ιδιαίτερα επεμβατική κλώνου με ανάλυση μικροσυστοιχιών και αναγνωρίστηκαν periostin (οστεοβλαστών-ειδικό παράγοντα 2) ως το γονίδιο πλέον εκφράζονται διαφορικά στην επεμβατική κλώνο [9]. Periostin είναι μία εκκρινόμενη πρωτεΐνη η οποία έχει προταθεί για να λειτουργήσει ως μόριο προσκόλλησης κυττάρου για προ-οστεοβλάστες και να συμμετέχουν στην πρόσληψη των οστεοβλαστών, προσκόλληση, και η εξάπλωση [10], [11]. Periostin υπερέκφραση αυξημένη εισβολή και ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη σε κύτταρα HNSCC [9]. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα κύτταρα periostin υπερεκφράζουν ήταν επιθετικά επεμβατική και αυθόρμητα μετάσταση σε τραχηλικούς λεμφαδένες και στον πνεύμονα σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο ποντικού HNSCC [9]. Bao et al. κατέδειξαν επίσης ότι μια κυτταρική γραμμή καρκίνου του παχέος εντέρου με χαμηλό μεταστατικό δυναμικό εμφανίζεται εντυπωσιακά επιταχυνόμενη όγκου μεταστατική ανάπτυξη σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος ζώο μετάστασης όταν τροποποιημένα ώστε να υπερεκφράζουν periostin [12]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η υπερέκφραση periostin μπορεί να είναι κοινή σε διάφορους τύπους καρκίνου και ότι periostin μπορεί να είναι σημαντικό για την εισβολή του όγκου. Periostin έχει προηγουμένως αποδειχθεί ότι διεγείρει την ανάπτυξη των μεταστατικών επάγοντας την αγγειογένεση [12], [13] και ενισχύει υποδοχέα VEGF έκφραση Flk-1 /KDR σε ενδοθηλιακά κύτταρα μέσω ενός ιντεγκρίνης ανβ3-ΡΑΚ μεσολάβηση οδού σηματοδότησης [13]? Επιπλέον, η ανασυνδυασμένη periostin ενισχύει το σχηματισμό τριχοειδών

in vitro

[14]. Σημαντικά, κλινικές μελέτες periostin έκφρασης σε ανθρώπινους καρκίνους έχουν δείξει ότι η αυξημένη έκφραση του periostin συσχετίζεται με τον αριθμό των αιμοφόρων αγγείων του όγκου και με τη μετάσταση [14]. Από την άλλη πλευρά, οι προηγούμενες ανοσοϊστοχημικές μελέτες έδειξαν μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ periostin έκφρασης και της λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες σε περιπτώσεις καρκίνου του [15]. Ωστόσο, δεν υπάρχει καμία μελέτη για το ρόλο των periostin στη λεμφαγγειογένεση όγκου. Στην παρούσα εργασία, παρουσιάζουμε μια νέα δράση periostin: την άμεση και έμμεση προώθηση της λεμφαγγειογένεσης όγκου

Αποτελέσματα

VEGF-C απορυθμίζεται από periostin υπερέκφραση προωθεί το σχηματισμό σωλήνα του λεμφικού ενδοθηλιακών κυττάρων

προηγουμένως ταυτοποιηθεί periostin ως παράγοντας εισβολή προαγωγής με τη σύγκριση των προφίλ γονιδιακής έκφρασης των κυττάρων μητρικών HNSCC (MSCC-1) και ένα εξαιρετικά επεμβατική κλώνος (MSCC-INV1) [9] (Σχήμα 1Α). VEGF-C επίσης ρυθμίζεται αυξητικά στην ιδιαίτερα επεμβατική κλώνου με ανάλυση μικροσυστοιχιών (Σχήμα 1Α). Η αυξημένη έκφραση VEGF-C σε κύτταρα MSCC-INV1 σχέση με το μητρικό κυττάρων παρατηρήθηκε (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, σε προηγούμενη ανάλυση μικροσυστοιχιών μας να συγκρίνουν τα χαρακτηριστικά έκφρασης του γονιδίου μεταξύ ελέγχου και periostin-κύτταρα που υπερεκφράζουν HNSCC, VEGF-C ρυθμίζεται αυξητικά σε κύτταρα που υπερεκφράζουν periostin-[9]. Εδώ έχουμε επιβεβαιώσει ότι η έκτοπη υπερέκφραση του periostin υπερέκφραση του VEGF-C (Εικόνα 1Β). Τόσο periostin και VEGF-C ανιχνεύθηκαν σε ρυθμισμένα μέσα από κύτταρα που υπερεκφράζουν periostin-αλλά όχι έλεγχο κυττάρων (Σχήμα 1Β). VEGF-C είναι γνωστό ότι είναι ένα κρίσιμο ενεργοποιητής λεμφαγγειογένεσης όγκου κατά την διάρκεια της διαδικασίας της μετάστασης. Επομένως, εξετάσαμε σχηματισμός σωλήνα του λεμφικού ενδοθηλιακών κυττάρων με την προσθήκη ρυθμισμένα μέσα από τα κενά κελιά φορέα-επιμολυσμένα κύτταρα ή periostin υπερεκφράζουν σε κύτταρα TR-LE. κύτταρα TR-LE προηγουμένως είχαν καθιερωθεί ως ένα λεμφικό κυτταρική σειρά ενδοθηλιακών απαθανάτισε αρουραίου [16]. Ρυθμισμένα μέσα από κύτταρα που υπερεκφράζουν periostin-αξιοσημείωτα προωθείται σχηματισμός σωλήνα από κύτταρα TR-LE (Σχήμα 1C και 1D).

(Α) Schema δείχνει τη στρατηγική για τον εντοπισμό Periostin και VEGF-C με σύγκριση του προφίλ γονιδιακής έκφρασης μεταξύ η μητρική (κύτταρα MSCC-1) και ένα εξαιρετικά επεμβατική κλώνος (κύτταρα MSCC-INV1). (Β) υψηλότερη έκφραση του VEGF-C mRNA σε κύτταρα των υψηλά διεισδυτική κλώνο MSCC-INV1 και έκφραση VEGF-C σε κύτταρα periostin υπερεκφράζουν. κύτταρα HSC4 χωρίς periostin έκφραση μετήχθησαν χρησιμοποιώντας ένα ρετροϊικό πλασμίδιο που κωδικοποιεί εξα-ιστιδίνης-ετικέτα periostin. Periostin και τα επίπεδα έκφρασης VEGF-C mRNA σε κύτταρα MSCC-1, κύτταρα MSCC-INV1, κενό φορέα-επιμολυσμένα κύτταρα HSC4 (κενό), και periostin-κύτταρα που υπερεκφράζουν HSC4 (His-periostin) εξετάστηκαν με RT-PCR. έκφραση GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Ρυθμισμένα μέσα συλλέχθηκαν από κενό φορέα-επιμολυσμένα κύτταρα HSC4 (άδειο) και periostin-κύτταρα που υπερεκφράζουν HSC4 (His-periostin) μετά από επώαση για 4 ημέρες. Ρυθμισμένα μέσα συμπυκνώθηκαν και αναλύθηκαν με στύπωση western για έκφραση του His-periostin και VEGF-C σε ρυθμισμένα μέσα. (C) προσαρμοσμένα μέσα από κύτταρα που υπερεκφράζουν periostin-προάγει τον σχηματισμό σωλήνα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα. σχηματισμό σωλήνα κυττάρων TR-LE με την προσθήκη προσαρμοσμένα μέσα από κύτταρα periostin-υπερεκφράζουν. κύτταρα TR-LE σπάρθηκαν πάνω σε φρεάτια επικαλυμμένα με Matrigel παρουσία ρυθμισμένων μέσων από κενό φορέα-επιμολυσμένα (CM έλεγχος) ή periostin υπερεκφράζουν (periostin CM) κυττάρων HSC4. Μετά από επώαση για 0-9 ώρες, αξιολογήθηκαν τα μήκη των δομών τύπου σωλήνα που σχηματίζεται. Το σχήμα δείχνει τα κύτταρα μετά από επώαση για 9 ώρες. (Δ) Το γράφημα δείχνει τις βαθμολογίες σωλήνα μετά από 0-9 ώρες επώασης CM έλεγχο ή periostin CM. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Για να αποδειχθεί η επίδραση της έκφρασης periostin επαγόμενη VEGF-C επί του σχηματισμού σωλήνα, χρησιμοποιήσαμε τον υποδοχέα VEGF 3 (VEGFR-3) αναστολέας κινάσης MAZ51, η οποία φέρεται να εμποδίσει τόσο VEGF-C- και VEGF-D-επαγόμενη φωσφορυλίωση του VEGFR-3 σε κύτταρα ΡΑΕ [17]. κύτταρα TR-LE είναι γνωστό ότι εκφράζουν VEGFR-3 [16]. Επιβεβαιώσαμε ότι MAZ51 ανέστειλε σημαντικά VEGF-C που προκαλείται από το σχηματισμό σωλήνα (Σχήμα S2A και S2B). MAZ51 σημαντικά ανέστειλε το σχηματισμό σωλήνων που επάγεται από ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα που υπερεκφράζουν periostin-(Σχήμα S2A και S2B). Παρατηρήθηκε επίσης η αναστολή του σχηματισμού σωλήνα με MAZ51 σε ρυθμισμένο μέσο από τα κενά κελιά φορέα-επιμολυσμένα. Αυτή η αναστολή μπορεί να εξηγηθεί από το VEGF-C έκκριση από τον εαυτό του λεμφικού ενδοθηλιακά κύτταρα. Η ανασταλτική δράση του MAZ51 ήταν χαμηλή σε κύτταρα κατεργασμένα με ρυθμισμένο μέσο από τα κενά κελιά φορέα-επιμολυσμένα (Σχήμα S2C). Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι periostin μπορεί να προωθήσει λεμφαγγειογένεση μέσω ρύθμιση προς τα πάνω του VEGF-C.

Συσχέτιση periostin έκφρασης με VEGF-C και του λεμφικού κατάσταση σε κλινικές περιπτώσεις καρκίνου

Για να προσδιοριστεί η συσχέτιση μεταξύ periostin και VEGF -C επίπεδα έκφρασης σε κλινικές περιπτώσεις καρκίνου, συγκρίναμε periostin έκφρασης με έκφραση VEGF-C σε 54 περιπτώσεις HNSCC με ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Ορίσαμε την ταξινόμηση των periostin και χρώση VEGF-C ως υψηλή (πάνω από 10% των κυττάρων του όγκου που δείχνει ++ ή +++ ένταση) ή χαμηλή (χωρίς χρώση ή λιγότερο από το 10% των κυττάρων του όγκου που δείχνει + ένταση). Για το κριτήριο του 10% θετικά κύτταρα, θεωρήσαμε ότι οι υποθέσεις HNSCC με λιγότερο από το 10% των κυττάρων του όγκου δείχνει αδύναμος /εστιακό ανοσοθετικότητα ήταν ίδια με την περίπτωση HNSCC χωρίς θετική χρώση. Το Σχήμα 2Α δείχνει μια αντιπροσωπευτική περίπτωση υψηλή έκφραση τόσο periostin και VEGF-C. Τόσο Periostin και έκφραση VEGF-C παρατηρήθηκαν σε κυτόπλασμα κυττάρων HNSCC (Εικόνα 2Α). Πράγματι, οι περισσότερες περιπτώσεις με υψηλή έκφραση του periostin ή VEGF-C παρουσίασε ισχυρή και διάχυτη ανοσοθετικότητα όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α και περισσότερες περιπτώσεις με χαμηλή έκφραση του periostin ή VEGF-C δεν έδειξαν ανοσοθετικότητα όπως φαίνεται στο Σχήμα S3A. Μόνο μερικές περιπτώσεις έδειξε την ετερογενή χρώση (Σχήμα S3b). Για την ετερογενή χρώση, αξιολογήσαμε εντελώς τον αριθμό των χρωματισμένων κυττάρων και η ένταση χρώσης τους, ελέγχοντας τουλάχιστον δέκα τομείς, συμπεριλαμβανομένης επιφανειακή, κεντρικό και βαθιά διεισδυτική περιοχές του όγκου. Από τις 54 περιπτώσεις HNSCC, υψηλή έκφραση periostin παρατηρήθηκε σε 39 (72,2%) περιπτώσεις και υψηλή έκφραση του VEGF-C σε 37 (68,5%) περιπτώσεις (Σχήμα 2Β). Τριάντα τρεις από τους 39 (84,6%) περιπτώσεις HNSCC με periostin έκφραση εξέφρασε VEGF-C? Η συσχέτιση αυτή ήταν στατιστικά σημαντική (Ρ & lt? 0.001).

(Α) Ανοσοϊστοχημική χρώση για periostin και VEGF-C σε περιπτώσεις HNSCC. Οι αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις HNSCC (υψηλής και χαμηλής μεγέθυνσης) με periostin και την έκφραση του VEGF-C παρουσιάζεται. μπαρ κλίμακα εμφανίζεται σε κάθε εικόνα. (Β) Διάγραμμα δείχνει την κατάσταση έκφρασης του VEGF-C σε περιπτώσεις HNSCC με υψηλή ή χαμηλή έκφραση του periostin. (C) στον ορό επίπεδο periostin και VEGF-C σε 81 ασθενείς HNSCC εξετάστηκε με ELISA. Ορός επίπεδο periostin και VEGF-C συγκρίθηκε με το στάδιο του όγκου. Γράφημα δείχνει το ποσοστό των periostin ή VEGF-C θετικές περιπτώσεις σε διαφορετικό στάδιο του όγκου (από το στάδιο 1 έως 4). (D) στον ορό επίπεδο periostin και VEGF-C συγκρίθηκε με μετάσταση στους λεμφαδένες. Γράφημα δείχνει το ποσοστό των periostin ή VEGF-C θετικές περιπτώσεις σε περιπτώσεις με ή χωρίς μετάσταση λεμφαδένα (Ε) επίπεδο ορού periostin συγκρίθηκε με το επίπεδο της VEGF-C στον ορό. Γράφημα δείχνει το ποσοστό του VEGF-C θετικές περιπτώσεις σε περιπτώσεις με periostin θετική ή αρνητική.

Η

Καθώς τόσο periostin και VEGF-C εκκρίνονται πρωτεΐνες, εξετάσαμε τα επίπεδα periostin και VEGF-C ορού σε HNSCC ασθενείς με ELISA. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε περιφερικό αίμα που συλλέγεται από 81 ασθενείς με καρκίνο HNSCC. Αυτές οι περιπτώσεις ήταν διαφορετικές από τις περιπτώσεις που χρησιμοποιείται στην ανοσοϊστοχημική μελέτη. Οι κλινικές πληροφορίες, συμπεριλαμβανομένων των λεμφαδένων μεταστάσεων, το στάδιο του όγκου και της ταξινόμησης ΤΝΜ συγκεντρώθηκαν από χειρουργική αρχεία των ασθενών (Πίνακας S2). Σε δείγματα από 5 υγιείς ελέγχους, το επίπεδο ορού periostin ήταν 0 ng /mL και το επίπεδο ορού VEGF-C μικρότερο από 11.0 ng /mL (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Periostin ανιχνεύθηκε σε 11.4 ng /mL σε ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα MSCC-INV1. Βάσει αυτών των αποτελεσμάτων, μια periostin-θετική περίπτωση ορίστηκε ως έχουν επίπεδο periostin ορό & gt? 0 ng /mL και ένα VEGF-C-θετική περίπτωση ως έχουσες έναν ορό VEGF-C επίπεδο ≥12.0 ng /mL. Το ποσοστό των periostin-θετικών περιπτώσεων αυξήθηκε με το στάδιο της εξέλιξης και με λεμφαδένα μετάσταση (σχήμα 2C και 2D). Τα δεδομένα σχετικά με τα επίπεδα των periostin και VEGF-C και τα σχετικά κλινικά δεδομένα σχετικά με τους ασθενείς HNSCC ορό αναφέρονται στον Πίνακα S2. Το ποσοστό του VEGF-C-θετικών περιπτώσεων αυξήθηκε επίσης με το στάδιο της εξέλιξης και με λεμφαδένα μετάσταση (σχήμα 2C και 2D). Είναι ενδιαφέρον, το 32,4% των periostin-θετικών περιπτώσεων, αλλά μόνο το 18,2% των periostin-αρνητικών περιπτώσεων ήταν VEGF-C-θετικό (Σχήμα 2Ε).

Periostin προωθεί άμεσα το σχηματισμό σωλήνα από λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα

Όπως φαίνεται από τα παραπάνω, βρήκαμε ότι η έκφραση periostin συσχετίζονται καλά με την έκφραση του VEGF-C. Periostin έχει προηγουμένως δειχθεί ότι προάγει αγγειογένεση, όπως καταδεικνύεται από διάφορα ευρήματα: (i) periostin ενισχύει υποδοχέα VEGF Flk-1 /έκφραση ΚΟΚ σε ενδοθηλιακά κύτταρα μέσω ενός ιντεγκρίνης ανβ3-ΡΑΚ μεσολάβηση οδού σηματοδότησης [13], (ii) ανασυνδυασμένο periostin ενισχύει τριχοειδή σχηματισμό [12], και (iii) αυξημένη έκφραση των periostin συσχετίζεται με τον αριθμό των αιμοφόρων αγγείων και με μετάσταση σε HNSCC [14]. Από την άλλη πλευρά, κλινικο-παθολογική μελέτες κατέδειξαν ότι periostin ήταν καλά συσχετισμένη με λεμφαδένα μετάσταση σε διάφορους καρκίνους [15]. Αυτά τα ευρήματα μας έκανε να υποθέτουν ότι periostin ενδέχεται να επηρεάσει άμεσα με λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σε παρόμοια με αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε αν periostin μπορεί να προωθήσει άμεσα λεμφαγγειογένεση. Εξετάσαμε την επίδραση της periostin για σχηματισμό αυλών από τα κύτταρα TR-LE. Σε προηγούμενες εκθέσεις, 100 ng /mL ανασυνδυασμένης periostin πρωτεΐνη χρησιμοποιήθηκε για

in vitro

πειράματα [12], [13]. Shao et al. εξετάστηκε έκφραση ΡΙκ1 μετά τη θεραπεία με ανασυνδυασμένη periostin (0, 50, 100 και 250 ng /mL). Όπως 100 ng /mL του periostin αξιοσημείωτα ρυθμισμένη προς τα πάνω έκφραση Flk1, χρησιμοποίησαν 100 ng /mL του periostin στις μελέτες τους. Στην ανάλυσή μας ELISA, ανιχνεύσαμε 11,4 ng /mL του periostin σε ρυθμισμένα μέσα από κύτταρα MSCC-INV1. Επιπλέον, ανιχνεύσαμε από 0 να 15,1 ng /mL του periostin σε ορό από HNSCC ασθενούς (Πίνακας S2). Αν και 100 ng /mL του periostin φαίνεται να είναι υψηλή συγκέντρωση, πιστεύαμε ότι η συγκέντρωση του periostin μπορεί να είναι υψηλότερη στην τοπική περιοχή του όγκου από ό, τι στον ορό. Επιπλέον, βρήκαμε ότι periostin προωθείται σχηματισμός σωλήνα σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο (0, 50, 100 και 200 ​​ng /mL) (σχήμα S4), και την επίδραση 100 ng /ml periostin επί του σχηματισμού σωλήνα είναι αξιοσημείωτη (Σχήμα 3Α -C και σχήμα S4). Αν και 100 ng /ml του periostin φαίνεται να είναι υψηλότερο επίπεδο σε σύγκριση με φυσιολογικό επίπεδο, χρησιμοποιήσαμε 100 ng /ml periostin στις ακόλουθες μελέτες. 100 ng /mL του VEGF-C χρησιμοποιήθηκε ως ένας θετικός έλεγχος για λεμφαγγειογένεση. Σε διάφορες μελέτες, 100 ng /mL του VEGF-C χρησιμοποιήθηκε για

in vitro

πειράματα [18] – [20]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η θεραπεία με ανασυνδυασμένη periostin προωθείται σωλήνα σχηματισμός σε σχέση με την απουσία θεραπείας (Σχήμα 3Α και 3Β). Παραδόξως, η επίδραση της periostin επί του σχηματισμού σωλήνα ήταν όμοια με εκείνη του VEGF-C (Σχήμα 3C). Επιπλέον, η συν-θεραπεία με periostin και VEGF-C σημαντικά προωθείται σχηματισμός σωλήνα (Σχήμα 3D και 3Ε).

(Α) κύτταρα TR-LE σπάρθηκαν πάνω σε φρεάτια επικαλυμμένα με Matrigel παρουσία periostin (100 ή 200 ng /mL) ή VEGF-C (100 ng /mL). Μετά από επώαση για 1-9 ώρες, αξιολογήθηκαν τα μήκη των δομών τύπου σωλήνα που σχηματίζεται. Το σχήμα δείχνει τα κύτταρα μετά από επώαση για 9 ώρες. (Β) Το γράφημα δείχνει τις βαθμολογίες σωλήνα μετά από επώαση για 1-9 ώρες. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. (Γ) Το γράφημα δείχνει τις αναλογίες βαθμολογίας σωλήνα μετά από θεραπεία με VEGF-C ή periostin για 9 ώρες. Η βαθμολογία σωλήνας του ελέγχου ορίστηκε ως 1,0. (D) κύτταρα TR-LE σπάρθηκαν πάνω σε φρεάτια επικαλυμμένα με Matrigel παρουσία periostin (100 ng /mL) και VEGF-C (100 ng /mL). Μετά από επώαση για 1-9 ώρες, αξιολογήθηκαν τα μήκη των δομών τύπου σωλήνα που σχηματίζεται. Το γράφημα δείχνει το σκορ σωλήνα μετά από επώαση για 1-9 ώρες. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. (E) Το γράφημα δείχνει τις αναλογίες βαθμολογίας σωλήνα μετά από θεραπεία με VEGF-C και periostin για 9 ώρες. Η βαθμολογία σωλήνας του ελέγχου ορίστηκε ως 1,0. (F) Periostin προωθεί φωσφορυλίωση της Src και Akt. Τα επίπεδα της ολικής και φωσφορυλιωμένες μορφές της Src, Akt, ΕΚΚ και ΡΑΚ μετά την επεξεργασία των κυττάρων TR-LE με periostin (100 ng /mL) που δείχνεται με κηλίδωση Western. έκφραση β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (G) Τα μήκη των δομών τύπου σωλήνα που αποτελούνται από κύτταρα TR-LE επωάστηκαν για 1-9 ώρες με ανασυνδυασμένη periostin (100 ng /mL) με ή χωρίς SU6656 (400 nm) αξιολογήθηκαν. Το άνω γράφημα δείχνει τις βαθμολογίες σωλήνα μετά από επώαση για 1-9 ώρες. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. Το κάτω διάγραμμα δείχνει την αναλογία βαθμολογία σωλήνα. Η βαθμολογία σωλήνας του ελέγχου ορίστηκε ως 1,0. (H) Τα μήκη των δομών τύπου σωλήνα που αποτελούνται από κύτταρα TR-LE επωάστηκαν για 1-9 ώρες με ανασυνδυασμένη periostin (100 ng /mL) με ή χωρίς LY294002 (10 μΜ) αξιολογήθηκαν. Το άνω γράφημα δείχνει τις βαθμολογίες σωλήνα μετά από επώαση για 1-9 ώρες. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. Το κάτω διάγραμμα δείχνει την αναλογία βαθμολογία σωλήνα. Το σκορ σωλήνας ελέγχου ορίστηκε ως 1.0.

Η

Ερευνήσαμε πως periostin προωθεί λεμφαγγειογένεση χρησιμοποιώντας στύπωμα Western με φωσφορυλίωση-ειδικά αντισώματα για τον προσδιορισμό των επιπέδων δραστικότητας των μορίων σηματοδότησης κυττάρου, όπως Src, Akt, ERK και ΡΑΚ, σε periostin επεξεργασμένα κύτταρα TR-LE. Src και Akt αλλά όχι ERK και ΡΑΚ ενεργοποιήθηκαν με ανασυνδυασμένη periostin κατεργασία (Σχήμα 3F). Για να επιβεβαιώσετε το ρόλο της Src και Akt σε periostin προωθούνται λεμφαγγειογένεση, χρησιμοποιήσαμε SU6656 να αναστέλλει τη δράση Src και LY294002 να αναστέλλει Akt δραστηριότητα. Αυτοί οι αναστολείς κινάσης ανέστειλαν τον σχηματισμό σωλήνα periostin επαγόμενη από κύτταρα TR-LE (Σχήμα 3G και 3Η), γεγονός που υποδηλώνει ότι periostin επαγόμενη λεμφαγγειογένεση μπορεί να διαμεσολαβείται από Src και Akt δραστηριότητα.

Στη συνέχεια, εξετάσαμε την επίδραση της periostin επί του πολλαπλασιασμού και της μετανάστευσης των κυττάρων TR-LE. Η ανασυνδυασμένη periostin προωθείται ελαφρά μόνο την ανάπτυξη των κυττάρων (Σχήμα 4Α), αλλά σε μεγάλο βαθμό προωθείται μετανάστευση (Σχήμα 4Β). Εστιακή adherens, τα οποία είναι συμπλέγματα ιντεγκρινών με συσσώρευση πολλαπλών κυτταροσκελετικών πρωτεϊνών και γύρω από τις κυτταροπλασματικές περιοχές ιντεγκρινών σηματοδότησης, έχουν σημαντικές επιπτώσεις για τη μετανάστευση των κυττάρων και σηματοδότησης. Επομένως, εξετάσαμε την επίδραση της periostin επί του σχηματισμού συμφύσεων. Εμείς seeded θρυψίνη κύτταρα TR-LE σε καλυπτρίδες επικαλυμμένες με PBS ή ανασυνδυασμένη periostin και χρωματίστηκαν για εστιακές συμφύσεις με αντι-βινκουλίνης αντισώματος και για το F-ακτίνης με φαλλοειδίνη. κύτταρα TR-LE αποτελεσματικά επισυνάπτεται και γρήγορα ανακτηθεί η μορφολογία τους σε periostin επικαλυμμένα με καλυπτρίδες σε σύγκριση με PBS-επικάλυψη καλυπτρίδες (Σχήμα 4C). Αξιοσημείωτα, τα κύτταρα TR-LE σχηματίζονται πολυάριθμα βινκουλίνης περιέχει εστιακές συμφύσεις στις periostin επικαλυμμένα αλλά όχι με PBS επικαλυμμένα καλυπτρίδες (Σχήμα 4C). Ενίσχυση του σχηματισμού σωλήνα με periostin μπορεί να επηρεαστεί από την προώθηση της μετανάστευσης και την αύξηση της εστίασης συμφύσεις.

(Α) Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων TR-LE μετά ανασυνδυασμένου periostin θεραπεία. Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 24-φρεατίων φιμπρονεκτίνη-επικαλύπτεται σε 1,5 × 10

4 /φρεάτιο. Μετά από προ-επώαση στους 33 ° C για 24 ώρες, η θερμοκρασία άλλαξε και ανασυνδυασμένη periostin (100 ng /mL) προστέθηκε στο μέσο. Τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν και μετρήθηκαν 0, 2, 4, ή 6 ημέρες μετά την προσθήκη του ανασυνδυασμένου periostin. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. (Β) Η επίδραση των periostin στην κυτταρική μετανάστευση των κυττάρων TR-LE. Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε φίλτρα προ-επικαλυμμένα με 10 μg της φιμπρονεκτίνης. Το κάτω διαμέρισμα περιείχε 0.5 mL μέσου χωρίς ορό με ή χωρίς 100 ng /ml ανασυνδυασμένης periostin. Μετά από επώαση για 4 ώρες, τα κύτταρα που είχαν μεταναστεύσει στα κάτω επιφάνειες των φίλτρων έγιναν ορατές με χρώση αιματοξυλίνης και μετρήθηκαν. Η δοκιμασία επαναλήφθηκε 3 φορές. Το σχήμα δείχνει τα κύτταρα που είχαν μεταναστεύσει στην κάτω επιφάνεια του φίλτρου (άνω πάνελ). Η γραφική παράσταση δείχνει τον αριθμό των κυττάρων επί των κάτω επιφανειών των φίλτρων, με ή χωρίς periostin (100 ng /mL) (κάτω πίνακας). κύτταρα (C) TR-LE σπάρθηκαν σε καλυπτρίδες επικαλυμμένες με PBS ή ανασυνδυασμένη periostin (200 ng /mL) και αφέθηκαν να προσκολληθούν για 60, 120, 180, ή 240 λεπτά. Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με Alexa Fluor 488 αντίσωμα-φαλλοειδίνη και αντι-βινκουλίνης-FITC αντίσωμα. DNA οπτικοποιήθηκε με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλης χρώσης (ϋΑΡΙ).

Η

έκφραση Periostin συσχετίζεται καλά με τον αριθμό των λεμφικών ενδοθηλιακών κυττάρων σε κλινικά δείγματα καρκίνου του

Για γνωρίζουν το ρόλο του periostin σε λεμφαγγειογένεση όγκου

in vivo

, επιβεβαιώσαμε τη συσχέτιση μεταξύ periostin έκφρασης και ο αριθμός των λεμφαγγείων σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος όγκου σε γυμνούς ποντικούς. Έχουμε προηγουμένως εγχυθεί ελέγχου ή periostin-κύτταρα που υπερεκφράζουν HNSCC υποδορίως σε γυμνά ποντίκια και διαπίστωσαν ότι τα μεταμοσχευμένα κύτταρα periostin υπερεκφράζουν παράγεται συγκριτικά μεγαλύτερο όγκο του όγκου μετά από 28 ημέρες από ό, τι άδειο φορέα-επιμολυσμένα κύτταρα [9] (Σχήμα S5). Χρησιμοποιήσαμε αυτές τις ιστούς όγκων (10 ελέγχου και 10 όγκους periostin υπερεκφράζουν) για να μετρούν τον αριθμό των λεμφαγγείων που εκφράζουν LYVE-1, η οποία παρατηρήθηκε ειδικά στα λεμφαγγεία τόσο ελέγχου και όγκους periostin υπερεκφράζουν (Σχήμα 5Α και Σχήμα S4). Είναι ενδιαφέρον ότι, ο αριθμός των λεμφικών αγγείων ήταν σημαντικά υψηλότερη σε όγκους periostin υπερεκφράζουν (36,3 ± 11,1) σε σύγκριση με τους όγκους ελέγχου (14,95 ± 2,0) (Σχήμα 5Β).

(Α) Periostin υπερεκφράζουν (periostin) και κενό φορέα-επιμολυσμένα (έλεγχος) HSC2 κύτταρα (1 χ 10

7 κύτταρα) ήταν μεμονωμένα ενίεται υποδορίως σε 2 θέσεις σε κάθε μία από 5 γυμνών ποντικών. Μετά από 1 μήνα, οι όγκοι αποκόπηκαν και χρωματίστηκαν με ένα LYVE-1 αντίσωμα αντι-ποντικού που αναγνωρίζει λεμφαγγείων. Οι αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις των ανοσοϊστοχημική χρώση για LYVE-1 στον έλεγχο και όγκους periostin-υπερεκφράζουν δείξει. Βέλος δείχνει LYVE-1 θετικό λεμφαγγείων. (Β) Οι LYVE-1 θετική λεμφαγγείων στον έλεγχο και όγκους periostin-υπερεκφράζουν μετρήθηκαν. Το γράφημα δείχνει τις μέσες αριθμούς των λεμφαγγείων στον έλεγχο και όγκους periostin-υπερεκφράζουν. Οι μπάρες δείχνουν τις μέσες τιμές και SDS.

Η

Τέλος, εξετάσαμε τη συσχέτιση μεταξύ periostin έκφρασης και του λεμφικού κατάσταση σε περιπτώσεις HNSCC με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας το αντίσωμα D2-40. Το αντίσωμα D2-40 αναγνωρίζονται ειδικά λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα αλλά όχι τα αιμοφόρα αγγεία (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). σκάφη λεμφικού ήταν άνισα κατανεμημένη σε όλη τους όγκους. Μετρήσαμε τον αριθμό των λεμφαγγείων στην ενδοογκική (εντός του όγκου) και περιογκική (εντός 1 mm από τα επεμβατική μπροστά) περιοχές. περιπτώσεις HNSCC με periostin έκφραση έτειναν να έχουν υψηλότερους αριθμούς των λεμφαγγείων τόσο στην ενδοογκική και περινεοπλαστικές περιοχές (Σχήμα 6Α και 6Β), αλλά αυτή η συσχέτιση δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Όπως ήταν αναμενόμενο, D2-40 ανοσοχρώση υπογράμμισε την παρουσία του λεμφικού εισβολής. Από 54 περιπτώσεις HNSCC, 27 (50%) παρουσίασαν λεμφική εισβολή σκάφος από τα καρκινικά κύτταρα. Εντυπωσιακά, periostin έκφραση παρατηρήθηκε σε 25 από 27 περιπτώσεις HNSCC με λεμφική εισβολή (Σχήμα 6C). Periostin έκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με λεμφική εισβολή (

P

& lt? 0.001).

(Α) Periostin και D2-40 επίπεδα έκφρασης εξετάστηκαν με ανοσοϊστοχημική χρώση των δειγμάτων περίπτωση HNSCC. Μια αντιπροσωπευτική περίπτωση της periostin και D2-40 έκφραση σε HNSCC εμφανίζεται. Βέλος δείχνει D2-40 θετική λεμφαγγείων. (Β) Το γράφημα δείχνει τη σύγκριση μεταξύ του μέσου όρου των αριθμών των λεμφικών αγγείων στο εντός όγκων, και το σύνολο των περιοχών σε περιπτώσεις HNSCC με υψηλή ή χαμηλή έκφραση του periostin. (Γ) Το γράφημα δείχνει την κατάσταση του λεμφικού εισβολή σε περιπτώσεις HNSCC με υψηλή ή χαμηλή έκφραση του periostin.

Η

Συζήτηση

Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για HNSCC, ένα από τα οι πιο κοινές μορφές καρκίνου, είναι χαμηλή, οφείλεται σε μεγάλο βαθμό η τάση ορισμένων όγκων να διανέμει μέσω των λεμφαγγείων. Πράγματι, η συμμετοχή των λεμφαδένων είναι ένα από τα ισχυρότερα φτωχών προγνωστικούς δείκτες. Πρόσφατες μελέτες χρησιμοποιώντας ζωικά μοντέλα δείχνουν ότι συμπαγείς όγκοι μπορούν να προκαλέσουν λεμφαγγειογένεση που μπορεί με τη σειρά της προάγει την εξάπλωση του όγκου [21]. Επιπλέον, λεμφαγγειογένεση μπορεί να συμβεί πλησίον ή εντός των καρκίνων και συσχετίζεται με μετάσταση λεμφαδένα [22], [23]. Έχουμε προηγουμένως δείξει ότι ο αριθμός των λεμφικών αγγείων στα δύο ενδοογκική και περινεοπλαστικές περιοχές ήταν καλά σχετίζεται με αυξημένη τάση για μετάσταση κομβικό σε HNSCC [24]. Ενώ λεμφαγγειογένεση σε πρωτογενείς όγκους είναι γνωστό για να προβλέψει κομβικό μετάσταση, ο μηχανισμός παραμένει ασαφής.

Έχουμε ήδη εντοπιστεί periostin ως παράγοντας εισβολή-προώθηση με τη σύγκριση των προφίλ γονιδιακής έκφρασης της μητρικής και ιδιαίτερα της εισβολής κύτταρα του κλώνου HNSCC [9] . Periostin, αρχικά ονομαζόταν οστεοβλαστών-ειδικό παράγοντα-2 (Osf2), εντοπίστηκε για πρώτη φορά στα οστά, όπου εμπλέκεται στη ρύθμιση της προσκόλλησης και διαφοροποίηση [10] των οστεοβλαστών, [25]. Αθροιστική απόδειξη δείχνει ότι η υψηλή έκφραση του periostin παρατηρείται συχνά σε διάφορους καρκίνους και συσχετίζεται καλά με κακοήθη συμπεριφορά [15]. Πρόσφατα, periostin έχει αποκαλυφθεί για την τόνωση της μεταστατικής ανάπτυξης με διέγερση αγγειογένεσης [13], [14]. Periostin εκκρίνονται από κύτταρα όγκου δρα με παρακρινή τρόπο για να αυξήσει την επιβίωση των ενδοθηλιακών κυττάρων και προκαλεί νεοαγγειοποίηση, σύμφωνα με την αντίληψη ότι αυξημένη επιβίωση ενδοογκική ενδοθηλιακών κυττάρων είναι κρίσιμη για την επιτυχή αγγειογένεση όγκου [26] – [28]. προηγούμενη ανάλυση μικροσυστοιχιών μας γονέα και άκρως μεταστατικών κυττάρων HNSCC κλώνου διαπιστώθηκε ότι ο VEGF-C ρυθμίζεται αυξητικά στα υψηλά διεισδυτική κυττάρων [9] (Σχήμα 1Α και 1Β). Πράγματι, η υπερέκφραση periostin προκάλεσε την προς τα άνω ρύθμιση της έκφρασης του VEGF-C σε κύτταρα HNSCC, και VEGF-C πρωτείνη εκκρίθηκε από periostin υπερεκφράζουν HNSCC κύτταρα (Εικόνα 1Β). VEGF-C, η αρχική Flt-4 /VEGFR-3 συνδέτη [29], [30], είναι ένα μέλος της οικογένειας VEGF του παράγοντες ανάπτυξης πολυπεπτιδίων, η οποία περιλαμβάνει VEGF-A, -Β, -C, -D και ο VEGFs ιός ψευδοευλογιάς Orf [31], [32]. Με βάση το προφίλ έκφρασης του και την σύνδεση του με Flt-4, VEGF-C έχει ενοχοποιηθεί για την ανάπτυξη του λεμφικού συστήματος [33], [34]. Επιπλέον, η διαγονιδιακή υπερέκφραση του VEGF-C κάτω από τον προαγωγό κεράτινης 14 επάγει διόγκωση λεμφαδένων σκάφος στο δέρμα [35], και ανασυνδυασμένη VEGF-C διεγείρει τη λεμφαγγειογένεση στη χοριοαλλαντοϊκή μεμβράνη πουλερικού [36]. Η ενεργοποίηση του VEGF-C /Flt-4 άξονά σε λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα μπορούν να διευκολύνουν μετάσταση αυξάνοντας τον σχηματισμό λεμφικών αγγείων εντός και γύρω από τους όγκους [37]. Το VEGF-C /Flt-4 άξονά επομένως εκφράζεται όχι μόνο από λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα, αλλά και από μια ποικιλία ανθρώπινων κυττάρων όγκου. Όπως περιμέναμε, προσαρμοσμένα μέσα από κύτταρα HNSCC periostin υπερεκφράζουν προωθείται σχηματισμός σωλήνα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα. Επιπλέον, ο αναστολέας της κινάσης VEGFR-3 ανέστειλε το σχηματισμό σωλήνων που επάγεται από ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα periostin υπερεκφράζουν, υποδηλώνοντας ότι periostin-προωθείται λεμφαγγειογένεση μπορεί να προκαλείται εν μέρει από την αυξημένη έκκριση του VEGF-C από τα καρκινικά κύτταρα (Σχήμα S2B). Με τη χρήση κλινικών δειγμάτων, αποδείξαμε ότι periostin έκφραση συσχετίζεται καλά με την έκφραση VEGF-C σε περιπτώσεις HNSCC με ανοσοϊστοχημεία και αυτό το επίπεδο periostin ορού συσχετίζονται καλά με εκείνη του VEGF-C σε ασθενείς HNSCC (Σχήμα 2Ε). Σε αυτή τη μελέτη, δεν μπορέσαμε να ανιχνεύσει periostin στον ορό από 5 φυσιολογικούς υγιείς εθελοντές. Προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν ότι η άγρια ​​ποικιλία των periostin ορού (0,2 έως 194 ng /mL) ανιχνεύθηκε σε φυσιολογικούς υγιείς εθελοντές [35] – [38]. Έτσι, το επίπεδο της periostin σε φυσιολογικούς υγιείς εθελοντές ορού φαίνεται να είναι αμφιλεγόμενο, και εξακολουθεί να είναι ασαφές κατά πόσον periostin παράγεται από τα φυσιολογικά κύτταρα ή όχι. Στο μέλλον, θα εξετάσουμε το επίπεδο ορού του periostin στο μεγάλο αριθμό φυσιολογικών υγιών εθελοντών. Ωστόσο, όλες οι εκθέσεις συμπεριλαμβανομένης της παρούσας μελέτης έδειξαν ότι παρατηρήθηκε αυξημένο επίπεδο periostin σε ασθενείς με καρκίνο [38] – [41]. Είναι σημαντικό ότι, το επίπεδο του periostin και VEGF-C ορού συσχετίζεται καλά με την εξέλιξη του όγκου συμπεριλαμβανομένης της μετάστασης λεμφαδένα.