Αφηρημένο

Εισαγωγή

Τα microRNAs παίζουν σημαντικό ρόλο σε πολλές ανθρώπινες κακοήθειες? Μέχρι στιγμής, η έκφρασή τους μένει να μελετηθεί σε ανώτερου ουροποιητικού καρκίνο ουροφόρων (UUTUC).

Υλικά και Μέθοδοι

Η έκφραση των έντεκα microRNAs (miR-10a, miR-21, ΜΙΚ 96, miR-135, miR-141, miR-182, miR-200b, miR-205, miR-429, miR-520b, miR-1244) στο παρελθόν φαίνεται να ρυθμίζεται προς τα πάνω σε ουροφόρων καρκίνου της ουροδόχου κύστης μελετήθηκαν στο αντίστοιχο φυσιολογικό και καρκινικό δείγματα ιστών από ασθενείς που υποβάλλονται σε nephroureterectomy για UUTUC. Απορυθμίζεται microRNAs στη συνέχεια μετρήθηκαν σε δείγματα ορού των ασθενών με UUTUC και σε ασθενείς με μη-κακοήθεις ουρολογικών παθήσεων για την αξιολόγηση των δυνατοτήτων τους ως μη επεμβατική βιοδεικτών για UUTUC.

Αποτελέσματα

έκφραση microRNA επιτρέπεται η διαφοροποίηση της φυσιολογικού και καρκινικού ιστού: miR-21, miR-96, miR-135, miR-141, miR-182, miR-205, miR-429 και miR-520b ήταν σημαντικά υπερεκφράζεται. Επιπλέον, miR-205 ρυθμίζεται αυξητικά σε φτωχά διαφοροποιημένα UUTUC. Η ανάλυση των κυκλοφορούντων RNA στον ορό έδειξε αύξηση του miR-141 σε ασθενείς με UUTUC? χειριστής δέκτης χαρακτηριστική ανάλυση έδειξε μια περιοχή κάτω από την καμπύλη των 0.726 για miR-141 ως διαγνωστικό βιοδείκτη. Επιπλέον, παρατηρήσαμε χαμηλότερα επίπεδα του miR-10a και miR-135 σε ασθενείς UUTUC.

Συμπεράσματα

έκφραση microRNA μεταβάλλεται σε UUTUC. Η ανάλυση των κυκλοφορούντων miR-141 μπορεί να είναι χρήσιμη για τον εντοπισμό ασθενών με UUTUC

Παράθεση:. Kriebel S, D Schmidt, Holdenrieder S, D Goltz, Kristiansen G, Moritz R, et al. (2015) Ανάλυση των ιστών και ορού microRNA Έκφραση σε ασθενείς με ανώτερου ουροποιητικού Καρκίνου ουροθηλιακά. PLoS ONE 10 (1): e0117284. doi: 10.1371 /journal.pone.0117284

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Γιώργος Γάκης, Πανεπιστήμιο Eberhard-Karls, Γερμανία

Ελήφθη: 13 Απριλίου του 2014? Αποδεκτές: 20 του Δεκ 2014? Δημοσιεύθηκε: 28η Ιανουαρίου 2015

Copyright: © 2015 Kriebel et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η συλλογή των δειγμάτων ορού και ιστών στο Universitätsklinikum Βόννης διεξήχθη στο πλαίσιο της πρωτοβουλίας Βιοτράπεζα στο Centrum für integrierte Onkologie (CIO) Köln Bonn ( https://www.cio-koelnbonn.de/mediziner/biobank/), η οποία υποστηρίζεται οικονομικά από την Deutsche Krebshilfe. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ουροθηλιακά καρκίνωμα είναι μία από τις πιο κοινές ανθρώπινες κακοήθειες [1]? περίπου 5-10% αυτών των ουροφόρων καρκινωμάτων βρίσκονται στο ανώτερο ουροποιητικό σύστημα (UUTUC, pyelocaliceal κοιλότητες και ουρητήρα). Αν και η αιτιολογία της UUTUC και καρκίνου της ουροδόχου κύστης είναι παρόμοια, η φυσική ιστορία της UUTUC διαφέρει από τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης: UUTUC είναι συχνά επεμβατικές κατά τη διάγνωση, και ως εκ τούτου η πρόγνωση είναι φτωχότερη. Αρκετοί προγνωστικοί παράγοντες (δηλαδή το στάδιο, βαθμός, λεμφαδένων εισβολή, lymphovascular εισβολή, τη θέση του όγκου) έχουν ταυτοποιηθεί [2]. Ακόμα, η πρόβλεψη της κλινικής πορείας ενός συγκεκριμένου ασθενούς παραμένει δύσκολη, καθώς όλες οι ανωτέρω αναφερθέντες παράγοντες μπορεί να καθοριστεί μόνο μετεγχειρητικά. Η αναγνώριση μιας προεγχειρητικής δείκτη, δηλαδή ένα βιοδείκτη ορού, θα ήταν χρήσιμο να καταστεί δυνατή η καλύτερη διαστρωμάτωση κινδύνου [3].

Τα microRNAs είναι μικρά, μη-κωδικοποίησης μόρια RNA, τα οποία τροποποιούν την έκφραση πολλών γονιδίων του ανθρώπου και ως εκ τούτου ρυθμίζουν σημαντικές κυτταρικές λειτουργίες όπως τον κυτταρικό κύκλο, την ανάπτυξη, την απόπτωση και διαφοροποίηση [4]. Έκφραση προφίλ μελέτες έδειξαν έκφραση microRNA όγκου-ειδικά. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε διαφορετικό προφίλ έκφρασης microRNA σε φυσιολογικό νεφρικό ιστό, UUTUC και καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων, ωστόσο, δεν ήταν UUTUC σύγκριση με το φυσιολογικό ιστό urothelial [5]. Λόγω της ομοιότητας των UUTUC και ουροθηλιακά καρκίνος της ουροδόχου κύστης, είναι πιθανό ότι η έκφραση microRNA ομοίως μεταβάλλεται. Τα microRNAs είναι ανιχνεύσιμα σε μια ποικιλία από σωματικά υγρά συμπεριλαμβανομένων του ορού [6]. Η σταθερότητα έναντι της υποβάθμισης από ΡΝάσες και εξωτερικές επιδράσεις (pH-αλλοίωση, αποθήκευσης, ψύξης /απόψυξης) πληροί τις προϋποθέσεις που κυκλοφορούν microRNAs ως μη επεμβατική βιοδείκτες [7,8]. Κατά συνέπεια, έχουν microRNAs ορού διερευνηθεί σε πολλές κακοήθειες (π.χ. καρκίνος της ουροδόχου κύστης [9], του καρκίνου του νεφρού [10], του καρκίνου του προστάτη [11], ο καρκίνος των όρχεων [12]).

Προκειμένου να διερευνηθεί η ρόλος των microRNAs ως μη επεμβατική βιοδεικτών σε ασθενείς με UUTUC, την έκφραση των έντεκα microRNAs (miR-10a, miR-21, miR-96, miR-135, miR-141, miR-182, miR-200b, miR-205 , miR-429, miR-520b, miR-1244) νωρίτερα δειχθεί ότι ρυθμίζεται προς τα πάνω σε ουροθηλιακό καρκίνο της ουροδόχου κύστης [13-20], αναλύθηκε [11] σε αντίστοιχο φυσιολογικό ουρητήρα και UUTUC ιστού. Στη συνέχεια, ερευνήσαμε τα επίπεδα αυτών των microRNAs στόχο με την υψηλότερη ρύθμιση προς τα άνω του ορού σε ασθενείς με UUTUC και σε ασθενείς με μη-κακοήθεις ουρολογικών παθήσεων, να εξερευνήσουν διαγνωστικό /προγνωστικό δυναμικό τους.

Υλικά και Μέθοδοι

2.1. Δείγμα συλλογή

Γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε άτομο και η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας (αριθμός έγκρισης: 036/08 και 049/13). Η συλλογή των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε από το 2005-2012 (ιστού) και 2008-2013 (ορός). Οι κλινικές-παθολογικές παραμέτρους της σειράς ασθενών της μελέτης παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

2.2. δείγματα ιστού

επίπεδα

microRNA σε δείγματα καρκινικού ιστού από 47 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε nephroureterectomy στο Τμήμα Ουρολογίας του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου της Βόννης ερευνήθηκαν. Ιστολογικά φυσιολογικό ουρητήρα ιστού ήταν διαθέσιμα από 36 ασθενείς αυτούς. Τα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε φορμόλη, ενσωματωμένα σε παραφίνη και αρχειοθετούνται στο Ινστιτούτο Παθολογίας του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου της Βόννης.

Χρησιμοποιώντας ένα μικροτόμου, 5 έως 10 τμήματα (20μm) παρήχθησαν από κάθε μπλοκ παραφίνης. Οι τομές βυθίστηκαν σε θερμαινόμενο νερό και τοποθετήθηκαν πάνω σε πλάκες μικροσκοπίου. Μετά από ξήρανση επί 24 ώρες, τα δείγματα αποπαραφινοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ξυλόλη και αραίωση σειρά αιθανόλης. Με βάση χρωματισμένο τμημάτων αιματοξυλίνη-ηωσίνη, επί του οποίου όγκου και φυσιολογικού ιστού χαρακτηρίστηκαν προηγουμένως, ένα μακρο-ανατομή έγινε, διαχωρισμό του όγκου και των παρακείμενων δείγματα φυσιολογικό ουροφόρων ιστών (& gt? 1 cm μεταξύ τους)

. Ολικό RNA εκχυλίστηκε στη συνέχεια με τη χρήση του RecoverAll Σύνολο Nucleic Acid κιτ απομόνωσης (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), όπως συνιστάται από τον κατασκευαστή. Ο τελικός όγκος έκλουσης ήταν 50 μL. Ποσότητα και η καθαρότητα του RNA προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το φασματοφωτόμετρο NanoDrop 2000 (PeqLab, Erlangen, Germany). Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το miScript II RT Kit (Qiagen, Hilden, Germany) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, καθώς με 400 ng RNA (αραιωμένο σε ένα συνολικό όγκο 12 μL). cDNA τελικά αραιώνεται σε συγκέντρωση 5 ng /μL σε HiSpec-Buffer.

2.3. δείγματα ορού

προοπτικά συλλέγονται δείγματα αίματος στα ουρολογικά τμήματα του Πανεπιστημίου Νοσοκομεία Βόννης (n = 10) και Μίνστερ (n = 34). Τα δείγματα ορού χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις τυποποιημένες διαδικασίες λειτουργίας των πρωτοβουλιών Βιοτράπεζας. Ως μάρτυρας, ένας αντίστοιχης ηλικίας κοόρτη 34 ατόμων με μη κακοήθεις ασθένειες (καλοήθης υπερπλασία του προστάτη, στένωση ουρήθρας, ακράτεια, ακράτεια πέτρες) που υποβάλλονται σε ελάσσονες ουρολογικές εργασίες χρησιμοποιήθηκε. Φλεβικό αίμα λήφθηκε σε σωλήνες ορού S-Monovette Gel με ενεργοποιητή πήξεως (Sarstedt, Nümbrecht, Γερμανία) πριν από το χειρουργείο. Μετά από ένα ελάχιστο 60 λεπτών, ο ορός πηχτή φυγοκεντρήθηκε (10 λεπτά, 2500 g), διαχωρίζεται και αποθηκεύεται σε κρυοσωλήνες στους -80 ° C μέχρι τη χρήση.

Ολικό RNA απομονώθηκε από 400 μL ορό χρησιμοποιώντας την mirVana PARIS Kit (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), μετά την προσθήκη 25 fmol του συνθετικού miRNA cel-miR-39 (Qiagen, Hilden, Germany) η οποία επιτρέπει την ποσοτικοποίηση της αποτελεσματικότητας απομόνωση RNA. Η εκχύλιση διεξήχθη σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, καθώς. Ο τελικός όγκος έκλουσης ήταν 50 μλ. Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το miScript II RT Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Πριν από την PCR πραγματικού χρόνου, μια προενίσχυση έγινε προκειμένου να αποκτήσουν επαρκές υλικό (miScript προενισχυτή PCR Kit, Qiagen, Hilden, Γερμανία), ως προκαταρκτικές δοκιμές έδειξαν ότι τα επίπεδα microRNA ορού ήταν πολύ χαμηλή για άμεση ποσοτικοποίηση. Η προενίσχυση πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, καθώς, χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες συνθήκες κύκλου: στάδιο αρχική ενεργοποίηση (95 ° C, 15 λεπτά), 2-βήμα ποδηλασία (μετουσίωση 94 ° C για 30 δευτερόλεπτα, ανόπτηση και επέκταση στους 60 ° C για 3 λεπτά) με 12 κύκλους.

2.4. Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Όλα τα πειράματα PCR διεξήχθησαν εις τριπλούν με 10 μλ καθένα σε ABIPrism 7900HT (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) σε 384 φρεατίων χρησιμοποιώντας το miScript SYBR Green PCR Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Όλες οι PCR εκκινητές αγοράστηκαν από την Qiagen. Κάθε εκτέλεση περιελάμβαναν την κυτταρική σειρά RT112 ως θετικός έλεγχος, καθώς και νερό, μη-RT, ρυθμιστικό ΤΕ και γενωμικό DNA ως αρνητικοί μάρτυρες (προενισχύεται για ορό PCR-τρεξίματα). Μια σειριακή αραίωση RT112 μας επέτρεψε να μετρήσει την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης PCR του κάθε ΡΟΚ-run. Η PCR διεξήχθη σύμφωνα με το ακόλουθο πρωτόκολλο: 1.Hot Έναρξη (95 ° C, 15 λεπτά), 2.Denaturation (94 ° C, 15 δευτερόλεπτα), 3.Annealing (55 ° C, 30 δευτερόλεπτα), 4.Extension (70 ° C, 30 δευτερόλεπτα). Κάθε τρέξιμο αποτελούνταν από 40 κύκλους του βήματος 2 έως 4. ανάλυση καμπύλης τήξης επιβεβαίωσε την εξειδίκευση των προϊόντων PCR. επίπεδα microRNA σε δείγματα με τιμές Cq & gt? 35 θεωρήθηκαν ως μηδέν? ακραίες τιμές με διαφορά Cq στο τριπλούν & gt? 1 αποκλείστηκαν. δεδομένα PCR αναλύθηκαν με SDS Σχετική Ποσοτικοποίηση v2.4 Λογισμικό (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) και QBase + v2.5 (Biogazelle, Zwijnaarde, Βέλγιο). Τα ατομικά στοιχεία έκφραση microRNA που προβλέπονται στο S1 πίνακα (μελέτη των ιστών) και S2 πίνακα (μελέτη ορού).

έκφραση microRNA στον ιστό, ομαλοποιήθηκε κατά RNU1-4, SNORD43 και SNORD48. έκφραση microRNA στον ορό, ομαλοποιήθηκε κατά RNU1-4 και SNORD43, όπως SNORD48 δεν θα μπορούσε αξιόπιστα να μετρηθεί στον ορό. Η καταλληλότητα αυτών των RNA ως γονίδιο αναφοράς καταδείχθηκε νωρίτερα [21].

2.5. Στατιστική ανάλυση

Ο έλεγχος Mann-Whitney-U και το Kruskal-Wallis τεστ χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση των διαφορών μεταξύ ασθενών με καρκίνο και των υγιών μαρτύρων και να συνδέσει την έκφραση microRNA με κλινικές-παθολογικές παράμετροι, όπως είναι κατάλληλο. Δέκτης Operator Curve (ROC) αναλύσεις διεξήχθησαν για να προσδιοριστεί η ευαισθησία και η ειδικότητα του microRNAs ως διαγνωστικοί βιοδείκτες? ο δείκτης Youden χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό του βέλτιστου ορίου. Η στατιστική σημαντικότητα συνήφθη στο ρ & lt? 0,05, και τη διόρθωση Bonferroni για πολλαπλές δοκιμές υπόθεση έγινε (πειράματα ιστού p & lt? 0,0045, τα πειράματα του ορού p & lt? 0.0063). Ανεξέλεγκτη αμφίδρομη ανάλυση ιεραρχικής σύμπλεγμα με Ευκλείδεια απόσταση διεξήχθη για να ταξινομήσει όγκου και φυσιολογικών δειγμάτων ουροθηλιακό ιστού. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS Statistics V21 (IBM, Σικάγο, Ιλινόις, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

Αποτελέσματα

3.1 Ανάλυση της έκφρασης microRNA στο ανώτερο ουροποιητικό ιστό καρκίνο ουροφόρων οδών

microRNA έκφραση δεν έχει διερευνηθεί σε UUTUC ιστό μέχρι τώρα. έτσι Προσδιορίσαμε την έκφραση του έντεκα microRNAs νωρίτερα φαίνεται να υπερεκφράζεται σε ουροθηλιακό καρκίνο της ουροδόχου κύστης σε 47 δείγματα ιστού UUTUC και 36 αντίστοιχα δείγματα του ιστολογικά φυσιολογικό ουρητήρων. Παρατηρήσαμε μια σημαντική υπερέκφραση του miR-21, miR-96, miR-135, miR-141, miR-182, miR-205, miR-429, miR-520b (όλα τα P & lt? 0.001) σε UUTUC? η microRNAs miR-10a (p = 0,012) και miR-200b (p = 0,006) έδειξαν μια ξεχωριστή τάση προς τα πάνω ρύθμιση, ενώ miR-1244 (p = 0.600) ήταν παρόμοια σε φυσιολογικούς και κακοήθεις ιστούς. miR-205 (p = 0.002) ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε αδιαφοροποίητη UUTUC (G3 εναντίον G2 /G1). Βλέπε Εικ. 1.

Η log2 φορές αλλαγή χρησιμοποιήθηκε για την κατασκευή του heatmap που υποδεικνύει ότι ένα προφίλ έκφραση microRNA επιτρέπει τη διαφοροποίηση της κανονικής ουρητήρα και ιστό καρκινώματος ουροφόρων. Τα δείγματα από φυσιολογικά ουροφόρων ιστών κωδικοποιημένες με «Ν», τα δείγματα καρκίνου με «Τ». Τα διαγράμματα Boxplot δείχνουν τα σχετικά επίπεδα του κάθε στόχου microRNA.

Η

3.2 Ανάλυση των κυκλοφορούντων microRNAs ορού σε ασθενείς άνω καρκίνο του ουροποιητικού συστήματος

Στη συνέχεια ερευνήσαμε τα επίπεδα των υποψηφίων microRNAs εντοπίστηκαν κατά τη διάρκεια των ιστών του ορού προφίλ: δείγματα ορού ασθενών με UUTUC (n = 44) σε σύγκριση με ασθενείς με μη κακοήθεις ουρολογικών παθήσεων (n = 34) σε επεξεργασία σε δύο τριτοταγείς κλινικές παραπομπής ερευνήθηκαν. Τα επίπεδα έκφρασης microRNA στον ορό εμφανίζεται στην Εικ. 2. miR-141 που κυκλοφορεί σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα (p & lt? 0.001) στον ορό των ασθενών UUTUC από ό, τι στην ομάδα ελέγχου (μέση τιμή 1,30 έναντι 0,69). ROC ανάλυση κατέδειξε μια AUC των 0.726 (95% διάστημα εμπιστοσύνης 0,609 έως 0,843) για το miR-141 ως διαγνωστικοί βιοδείκτη? βλέπε Σχ. 3 και Πίνακας 2. miR-200b (p = 0,041), miR-205 (p = 0,008), miR-425 (p = 0,025), miR-96 (0.013) έδειξε μια τάση προς υψηλότερα επίπεδα σε ασθενείς με καρκίνο, αλλά η p-value ήταν & gt? 0,0065 οποία ορίζεται ως επίπεδο σημαντικότητας μετά από διόρθωση για πολλαπλές έλεγχο υποθέσεων. miR-182 (p = 0,083), miR-21 (p = 0.532) και miR-135 (p = 0,261) ήταν παρόμοια σε ασθενείς UUTUC και τους ελέγχους.

Το τεστ Mann-Whitney-U χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τις διαφορές μεταξύ των ομάδων.

Η

Η

Στη συνέχεια, θα συσχετίζονται τα επίπεδα microRNA ορού με κλινικές-παθολογικές παραμέτρους. Ορός miR-10a (p = 0,003) μειώθηκε σε διηθητικό UUTUC (PTA /ρΤ1: 1.79 εναντίον pT2-4: 0,79). miR-135 έδειξε επίσης μια τάση προς χαμηλότερα επίπεδα σε ασθενείς με καρκίνο με διηθητικό όγκων (2,18 έναντι 0,96? p = 0,040). Δεν παρατηρήσαμε μια συσχέτιση με την ηλικία, το φύλο, μετάσταση ή τη διαβάθμιση (όλα τα p & gt? 0,05). Και τα κυκλοφορούντα επίπεδα microRNA

Συζήτηση

Το ενδιαφέρον για τα microRNA αυξήθηκε δραματικά κατά τη διάρκεια των τελευταίων ετών, και ιστού και προφίλ έκφρασης ογκοειδικό έχουν χαρακτηριστεί. Λαμβάνοντας υπόψη τις ομοιότητες των ουροφόρων καρκίνου της ουροδόχου κύστης και του ανώτερου ουροποιητικού συστήματος, πραγματοποιήσαμε μια βιβλιογραφική έρευνα για τον εντοπισμό ενός συνόλου απορρύθμισης του microRNAs στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης [13-19] που παρουσιάζουν ενδιαφέρον για το προφίλ έκφρασης σε δείγματα ιστού και ορού UUTUC. Πολύ πρόσφατα, ιστός προφίλ έκφρασης microRNA σε UUTUC έχουν δημοσιευθεί [5,22]: ωστόσο, ο αριθμός των δειγμάτων UUTUC (n = 5) ήταν πολύ μικρό και δεν σύγκριση με το φυσιολογικό ιστό urothelial [5], ή η μελέτη περιορίστηκε σε κακοήθη δειγμάτων [22].

παρατηρήθηκε για πρώτη φορά ότι τα προφίλ microRNAs έκφρασης επιτρέπεται διακριτικό καρκινικά και φυσιολογικά ουρητήρα δείγματα /νεφρικής πυέλου με υψηλή ακρίβεια. Ειδικά miR-21, miR-96, miR-135, miR-141, miR-182, miR-205, miR-429 και miR-520b ήταν ευδιάκριτα υπερεκφράζεται σε UUTUC. Είναι ενδιαφέρον, αυτό ταυτίζεται εν μέρει με το προφίλ έκφρασης microRNA νωρίτερα εγκατεστημένος σε μελέτη για τον καρκίνο του προστάτη, στην οποία miR-205, miR-96 και miR-182 είχαν βρεθεί ιδιαίτερα ρυθμίζονται [23]. Θα μπορούσαμε, επίσης, να επιβεβαιώσει την παρόμοια μοριακή καρκινογένεση των ουροφόρων καρκίνου της ουροδόχου κύστης και του ανώτερου ουροποιητικού συστήματος ως προς τα πάνω ρύθμιση πολλών microRNAs νωρίτερα προσδιορίζονται ως oncomirs στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης παρατηρήθηκαν επίσης σε UUTUC [13-19]. Πρόσφατα, Zaravinos et al. [20] διερευνήθηκε η έκφραση microRNA στο φυσιολογικό νεφρικό ιστό και νεφρικών όγκων (νεφροκυτταρικό καρκίνωμα και UUTUC): 21 microRNAs ήταν ειδικά απελευθερωθεί στο UUTUC (5 microRNAs ρυθμίζεται προς τα πάνω και 16 microRNAs μειωτικά-το προφίλ UUTUC ήταν διαφορετικό από το στόχο μας microRNAs)? miR-10a, miR-200b και miR-205 ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε σχέση με νεφρικό ιστό. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η έλλειψη κανονικής ουροθηλιακά ιστού όπως ενδείκνυται έλεγχος περιορίζει την πληροφοριακή αξία (ουροδόχου κύστης ειδική έκφραση δεν ελέγχεται) [20].

Στη συνέχεια ερευνήσαμε τα επίπεδα αυτών των microRNAs ορού σε δύο κέντρο -cohort των ασθενών με UUTUC και μη κακοήθεις νόσους. Παρατηρήσαμε σημαντική αύξηση του miR-141 σε ασθενείς UUTUC: μέσα επίπεδα ήταν σχεδόν διπλάσια σε σύγκριση με τους ελέγχους? αρκετές άλλες υποψήφιες χώρες (miR-200b, miR-205, miR-425 και miR-96) έδειξε επίσης μια τάση για αυξημένα επίπεδα σε ασθενείς UUTUC. Οι αναλύσεις έδειξαν ότι ROC miR-141 επιτρέπεται να διακρίνουν τους ασθενείς UUTUC και τους ελέγχους με την AUC του 0.726 (ευαισθησία 71% και ειδικότητα 74%) δείχνει ότι κυκλοφορούν miR-141 είναι ένα κατάλληλο διαγνωστικό βιοδείκτη. Στο καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη περιγραφή ενός βιοδείκτη νουκλεϊκού οξέος στο αίμα των ασθενών με UUTUC. Σε μια προηγούμενη μελέτη σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης ουροθηλιακό, μια σημαντική αύξηση του miR-141 στον ορό των ασθενών με καρκίνο δεν παρατηρήθηκε, αν και μία τάση προς υψηλότερα επίπεδα miR-141 σε σύγκριση με τον έλεγχο υποκείμενα θα μπορούσε να θεωρηθεί [9]. Στάδιο και βαθμό θα μπορούσε να εξηγήσει αυτή τη διαφορά: τα επίπεδα miR-141 υψηλής ορού παρατηρήθηκαν σε πολλές μελέτες σε προχωρημένα στάδια [24,25] ή σε ασθενείς με υποτροπή μετά από χειρουργική επέμβαση [25-27]? Ωστόσο, miR-141 δεν συσχετιζόταν με οποιοδήποτε προγνωστικό παράμετρος στη μελέτη μας για UUTUC. Το εύρημα της αυξημένης ουρικής επίπεδα miR-141 σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης υποστηρίζει την ιδέα του miR-141 ως διαγνωστικό εργαλείο [28]. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι τα κυκλοφορούντα επίπεδα miR-141 αυξημένα σε πολλαπλές οντότητες όγκου συμπεριλαμβανομένου καρκίνου του προστάτη [25], καρκίνος του παχέος εντέρου [29] και του καρκίνου του τραχήλου [30]. Μία υπερέκφραση του miR-141 εμπλέκεται στην KEAP1 ρυθμιζόμενη αντίσταση σισπλατίνη [31], και έτσι miR-141 μετρήσεις θα μπορούσαν να είναι χρήσιμες για την παρακολούθηση των ασθενών που υποβάλλονται σε χημειοθεραπεία για σισπλατίνη μεταστατικό UUTUC. Η TarBase 6.0 [32], μια βάση δεδομένων με τα πειραματικά επικυρωμένη αλληλεπιδράσεις microRNA γονιδίων, δείχνει ότι το miR-141 ρυθμίζει διάφορα γονίδια (για παράδειγμα PTEN [33], ERBB2IP [34], HOXB5 [34], E2F3 [33], η κυκλίνη D1 [33]) που εμπλέκονται στην καρκινογένεση ουροφόρων (επερωτήσεων:. 03/06/2014)

Τα επίπεδα των ιστών miR-205 επίσης συσχετίζεται με αδιαφοροποίητα UUTUC και miR-10a και miR-135 μειώθηκαν στον ορό των ασθενών με διηθητικό UUTUC. Βαθμός του όγκου και το στάδιο συνήθως συσχετίζονται με καρκίνο ουροθηλιακά, και ως εκ τούτου θα περίμενε κανείς σημαντικές συσχετίσεις με το στάδιο (miR-205) ή Βαθμός (miR-10a, miR-135), αντίστοιχα. Διάφορες εξηγήσεις είναι δυνατόν:

(i)

ορισμένες βιολογικές διεργασίες επιφέρει μεταβολές microRNA σε μεταγενέστερα στάδια της καρκινογένεσης? (

ii

) τρεις (από τις δέκα) σε ασθενείς με μη-μυϊκή διεισδυτικής νόσου είχε G3 όγκους, και με αυτόν τον τρόπο να περιορίσει τη συσχέτιση του σταδίου και του βαθμού? και (

iii

) ένα εύρημα κατά τύχη δεν μπορεί να αποκλειστεί. Έτσι, η ανάλυση των microRNAs μπορεί να είναι χρήσιμη για προγνωστικούς σκοπούς, αν και οι μελλοντικές μελέτες για επιβεβαίωση αποτελεσμάτων μας. Αξιοσημείωτα, miR-205 [35] και miR-10a [36] σχετίστηκαν με το χρόνο επιβίωσης σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Η πρόσφατη έκθεση του Izquierdo et al. υποδεικνύει ότι miR-149 επίπεδα σε ιστό όγκου είναι προγνωστικά ειδική για τον καρκίνο επιβίωση σε ασθενείς με UUTUC [22]? μια ανάλυση αυτού του microRNA στον ορό σε μια μελλοντική μελέτη θα ήταν ενδιαφέρον. Ωστόσο, miR-149 δεν ήταν ανιχνεύσιμη στον ορό του ασθενούς ούτε έναν με τον καρκίνο του προστάτη, ούτε ένα υγιές άτομο, ακόμη και αν ένα βήμα προ-ενίσχυσης χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με Mitchell et al. [37], καταλήγοντας στο συμπέρασμα ότι τα επίπεδα miR-149 σε δείγματα αίματος μπορεί να είναι πολύ χαμηλή για να ανιχνεύσει

Ένα νέο βιοδείκτη πρέπει να αποδείξει τον εαυτό της έναντι ιδρύθηκε δείκτες.? κυτταρολογική εξέταση ούρων σε ασθενείς πάσχει από κακή ευαισθησία [38], ακόμη και σε ασθενείς με υψηλού βαθμού UUTUC. Η συμπερίληψη του συνδετικού δεικτών (τεστ BTA stat [39] ή FISH [40]) προσεγγίσεις μπορεί να αυξήσει σημαντικά τη διαγνωστική πληροφορία, αλλά ο καρκίνος χαμηλού βαθμού είναι δύσκολο να ανιχνευθούν. Η απόδοση του ορού miR-141 φαίνεται να είναι κάπως χαμηλότερη σε σύγκριση με ουρική δείκτες (ευαισθησία 71%, ειδικότητα 74%), αλλά παρόμοια ποσοστά ανίχνευσης στους μυς-επεμβατική και μη μυών επεμβατική UUTUC δικαιολογούν μελλοντική έρευνα να διερευνήσει την αξία του.

Μερικοί περιορισμοί θα πρέπει να αναγνωριστεί: συγκρίναμε την έκφραση microRNA σε καρκινικά και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό. Αν και ο φυσιολογικός ιστός ήταν ιστολογικά φυσιολογικό και βρίσκεται 1 cm τουλάχιστον μακριά από τον όγκο, το λεγόμενο «φαινόμενο πεδίο» θα μπορούσε να προκαλέσει μοριακές αλλαγές σε αυτόν τον ιστό ελέγχου. Ωστόσο, η σύγκριση των κακοήθων και φυσιολογικό ιστό από τους ίδιους ασθενείς ελαχιστοποιεί την επίδραση των διαφορών έκφρασης διατομική microRNA. Το μέγεθος του δείγματος στη μελέτη μας ήταν μόνο μέτρια (47 καρκίνου έναντι 36 φυσιολογικούς ιστούς? Και 44 UUTUC έναντι 34 τον έλεγχο δειγμάτων ορού), αλλά η σχετική σπανιότητα των UUTUC σε σύγκριση με τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης ή νεφροκυτταρικό καρκίνωμα κάνει την ανάλυση των μεγάλων ομάδες δύσκολη .

Συμπεράσματα

έκφραση microRNA είναι απορυθμίζεται σε UUTUC ιστό? Αυτές οι αλλαγές οδηγούν σε μεταβολή της προφίλ microRNA στην κυκλοφορία των ασθενών. Η ανίχνευση αυξημένων επιπέδων miR-141 επιτρέπει την αναγνώριση των ασθενών με UUTUC? εάν μελλοντικές μελέτες επιβεβαιώνουν αυτό το εύρημα, η μέτρηση των microRNAs στον ορό μπορεί να βοηθήσει τους κλινικούς γιατρούς για τη διαχείριση αυτών των ασθενών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. Περίληψη των επιπέδων έκφρασης microRNA ιστού σε ασθενείς με καρκίνο του ανώτερου ουροφόρων ουροποιητικού

doi:. 10.1371 /journal.pone.0117284.s001

(XLSX)

S2 πίνακα. Περίληψη των επιπέδων έκφρασης microRNA στον ορό ασθενών με καρκίνο του ανώτερου ουροφόρων ουροποιητικού

doi:. 10.1371 /journal.pone.0117284.s002

(XLSX)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Jennifer Bräunig για την κρίσιμη ανάγνωση του χειρογράφου.