Αφηρημένο

καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι μία από τις τρεις κύριες αιτίες για τη θνησιμότητα από καρκίνο. CRC σκοτώνει πάνω από 600.000 ανθρώπους ετησίως σε όλο τον κόσμο. Η πιο κοινή αιτία θανάτου από CRC είναι η μετάσταση σε απομακρυσμένα όργανα. Ωστόσο, βιοδείκτες για CRC μετάσταση παραμένουν ασαφή. Συγκρίναμε πρωτογενών και μεταστατικών κυτταρικών σειρών CRC για προφίλ της αγγειογένεσης πρωτεΐνες τους και ενδοκυτταρική σηματοδότηση προφίλ για τον εντοπισμό νέων βιοδεικτών για CRC μετάσταση. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήσαμε πρωτογενείς και μεταστατικούς κυτταρικές σειρές CRC ως πρότυπο σύστημα και φυσιολογική ανθρώπινη κυτταρική γραμμή κόλου ως έλεγχος. Η αγγειογένεση προφίλ δύο ισογονιδιακές κυτταρικές σειρές CRC, SW480 και SW620, και ΗΤ-29 και Τ84 αποκάλυψε ότι ο VEGF ρυθμίζεται αυξητικά στις δύο SW620 και Τ84 ενώ πήξης παράγοντα III, IGFBP-3, DPP IV, PDGF ΑΑ /AB, ενδοθηλίνη Ι και CXCL16 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω ειδικά σε μεταστατικές κυτταρικές γραμμές. Επιπλέον, βρήκαμε ότι ΤΙΜΡ-1, αμφιρεγουλίνη, ενδοστατίνη, αγγειογενίνη ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε SW620 ενώ ρυθμίζεται προς τα κάτω σε Τ84. Αγγειογενίνη ήταν προς τα κάτω σε Τ84 και GM-CSF επίσης προς τα κάτω σε SW620. Για να προκληθεί μετάσταση κυττάρων CRC, υποβάλλαμε σε αγωγή κυττάρων με προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες IL-6. Κατά IL-6 θεραπεία, επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση προκλήθηκε σε κύτταρα CRC. Όταν DLD-1 και κύτταρα ΗΤ-29 υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-6? Akt, STAT3, AMPKα και Bad επίπεδα φωσφορυλίωσης αυξήθηκαν. Είναι ενδιαφέρον, SW620 έδειξε το ίδιο μοτίβο ενεργοποίησης σήματος με IL-6 θεραπεία της ΗΤ-29 και DLD-1. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η Akt, STAT3, AMPKα και Bad ενεργοποίηση μπορεί να είναι βιοδείκτες για τον μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου. IL-6 θεραπεία μείωσε συγκεκριμένα επίπεδα φωσφορυλίωσης του EGFR, HER2 υποδοχέα, Ινσουλίνη R και IGF-1 R σε υποδοχέα τυροσίνης κινάσης μελέτη συστοιχία με ΗΤ-29. Στο σύνολό τους, έχουμε εντοπίσει νέων βιολογικών δεικτών για μεταστατικό CRC μέσω της αγγειογένεσης αντισώματος συστοιχία και ενδοκυτταρική μελέτες σειρά σηματοδότησης. Παρούσα μελέτη δείχνει ότι τα εν λόγω νέα βιοδείκτες μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοδείκτες CRC πρόγνωση, και ως πιθανοί στόχοι για τη μεταστατική θεραπεία CRC

Παράθεση:. Chung S, Dwabe S, Elshimali Υ, Sukhija Η, ArOH C, Vadgama ΚΕ (2015) Προσδιορισμός των νέων βιολογικών δεικτών για το μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου Χρησιμοποιώντας αγγειογένεση-αντισώματος Array και ενδοκυτταρική σηματοδότηση Array. PLoS ONE 10 (8): e0134948. doi: 10.1371 /journal.pone.0134948

Επιμέλεια: Νατάσα Κυπριανού, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 5 Νοεμβρίου 2014? Αποδεκτές: 15 Ιουλ, 2015? Δημοσιεύθηκε: 10, Αυγούστου 2015

Copyright: © 2015 Chung et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (NIH, NCI, NIMHD, NCATS) Επιχορηγήσεις ΚΕ Vadgama: U54 CA143931, U54MD007598, UL1TR000124. Σ Steven Chung είναι ένας διανοούμενος που υποστηρίζεται από την Κλινική Έρευνα Εκπαίδευση και Σταδιοδρομία από την NIMHD 5MD007610, πιλοτικά βραβείο από U54MD007598 και την υποστήριξη της επαγγελματικής εξέλιξης από U54CA143931

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα .

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες και η δεύτερη στις γυναίκες σε όλο τον κόσμο, αντιπροσωπεύοντας περίπου 608.000 θανάτους παγκοσμίως [1]. Παρά τη σημαντική βελτίωση των θεραπευτικών μεθόδων, πάνω από το 50% των ασθενών με CRC αναπτύσσεται τελικά υποτροπή της νόσου και των μεταστάσεων που οδηγεί στο θάνατο μέσα σε 5 χρόνια από τη διάγνωση [2]. Μετάσταση εμφανίζεται σε μια φάση της εξέλιξης του όγκου με μεταστατικό παραλλαγή κύτταρα που κατέχουν επεμβατικές δραστηριότητες που χαρακτηρίζεται από αυξημένη κυτταρική μετανάστευση, εισβολή ιστού και αποικισμός οργάνου. Μέχρι σήμερα, οι μηχανισμοί που προκαλούν CRC μετάσταση δεν είναι πλήρως κατανοητοί.

Καρκίνος ειδικών βιοδεικτών παίζουν σημαντικό ρόλο στη ανίχνευση του καρκίνου, πρόγνωση, πρόληψη και θεραπεία. Κατά τη διάρκεια των τελευταίων τεσσάρων δεκαετιών, έχουν γίνει σημαντικές προσπάθειες για να χαρακτηρίσει χρήσιμο βιοδεικτών για CRC [3-5]. Ωστόσο, δεν υπάρχουν πολύτιμα βιοδείκτες για CRC μετάσταση. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό για την ταυτοποίηση νέων βιοδεικτών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την πρόβλεψη της μεταστατικό δυναμικό του CRC, χρησιμεύουν ως δείκτες πρόγνωσης και χρησιμεύουν ως κυτταρικοί στόχοι για τη στοχευμένη-θεραπεία επί CRC. Στην παρούσα μελέτη μας, έχουμε χρησιμοποιήσει τις συστοιχίες αντισωμάτων που σχετίζονται με αγγειογένεση με πρωτοπαθή και μεταστατικό κυτταρικές σειρές CRC για τον εντοπισμό και χαρακτηρισμό των νέων βιολογικών δεικτών που σχετίζονται με ορθοκολικό μετάσταση του καρκίνου.

Η αγγειογένεση και την ανάπτυξη των μεταστάσεων είναι άρρηκτα συνδεδεμένα. Πειραματικά δεδομένα υποδεικνύουν ότι οι μεταστάσεις των όγκων επηρεάζεται από διαλυτούς παράγοντες που εκκρίνονται από τον αρχικό όγκο [6-8]. Στο παρόν, ερευνήσαμε τα προφίλ έκφρασης πρωτεϊνών που σχετίζονται με αγγειογένεση για τον εντοπισμό μεταστάσεων συγκεκριμένο σύνολο γονιδίων αγγειογένεση. Αρχικά, μελετήσαμε δύο ισογονιδιακές ορθοκολικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές SW480 και SW620. Η κύρια κυτταρική σειρά καρκίνου SW480 προέρχεται από καρκίνωμα του παχέος εντέρου σταδίου Β ενός Dukes ‘που λαμβάνεται από ένα 50 ετών άνδρα ασθενή και την μεταστατική παραλλαγή SW620 προήλθε από όγκο του ίδιου ασθενούς μετάσταση στον λεμφαδένα [9]. Δεδομένου ότι η παραλλαγή από γενετικό υπόβαθρο μπορεί να αποφευχθεί σε μεγάλο βαθμό για τις δύο αυτές κυτταρικές γραμμές, αποτελούν ένα μοναδικό μοντέλο για τη μελέτη του παχέος μετάσταση καρκίνου. Μελετήσαμε περαιτέρω ένα άλλο ζεύγος των πρωτογενών και μεταστατικών καρκινικών κυτταρικών γραμμών, ΗΤ-29 και Τ84. Τ84 προήλθε από τα κύτταρα CRC που είχαν μετάσταση στον πνεύμονα [10].

Αρκετές προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες που απελευθερώνονται από την έμφυτη και προσαρμοστική ανοσοκύτταρα έχουν δειχθεί ότι ρυθμίζουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και να συμβάλλουν στην προαγωγή και μετάσταση όγκου . Μεταξύ αυτών, η ιντερλευκίνη-6 (IL-6) παίρνει ένα κεντρικό στάδιο στην ανάπτυξη του ανθρώπινου καρκίνου και μετάσταση. Μια αυξημένη έκφραση της IL-6 έχει συνδεθεί με μια δυσμενή πρόγνωση σε ασθενείς με διάφορους τύπους καρκίνων συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παχέος [11]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει αυξημένη έκφραση της IL-6 σε ασθενείς με CRC, όπου τα επίπεδα IL-6 είναι αυξημένα σε ορό των ασθενών και στην ίδια ιστό του όγκου [12-13]. IL-6 έκφραση συσχετίστηκε με το στάδιο του όγκου, το μέγεθος, τη μετάσταση και επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου [14]. Με βάση αυτές τις παρατηρήσεις, θα αντιμετωπίζονται καρκίνο του παχέος εντέρου κυττάρων με IL-6 για να τους πείσει να γίνει πιο επεμβατικές και μεταστατικό. Παρακολουθήσαμε αλλαγές στα επιθηλιακά-μεσεγχυματικά φαινότυπο μετάβαση, τα βλαστικά δείκτη κυττάρων Oct-4 και τον οδηγό EMT STAT3 (μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3) φωσφορυλίωση σε απόκριση στην IL-6 σε θεραπεία με δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Η μελέτη μας παρέχει περαιτέρω στοιχεία για CRC μετάσταση παθοφυσιολογία, και το πιο σημαντικό, η ανακάλυψη νέων βιολογικών δεικτών και πιθανοί στόχοι φάρμακο για μεταστατικό θεραπεία CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Γραμμές Cancer Cell και κυτταροκινών

SW480, SW620, ΗΤ-29, RKO, DLD-1 κυτταρικές γραμμές CRC Τ84 και αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA, USA). Φυσιολογική ανθρώπινη κυτταρική σειρά παχέος εντέρου FHC (CRL-1831) αγοράστηκε επίσης από την ATCC. Αυτά διατηρήθηκαν σε μονοστρωματική καλλιέργεια σε DMEM /F12 (τροποποιημένο μέσο Eagle του Dulbecco) με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 2,5% L-Γλουταμίνη και 0,5% πενικιλίνη /στρεπτομυκίνη σε όλη αυτή τη μελέτη. IL-6 αγοράστηκε από την Sigma (αριθμός καταλόγου: I3268, Sigma, St Louis, ΜΟ). IL-6 προστέθηκε μέσα κυτταρικής καλλιέργειας σε 1, 5, 10 μονάδες ανά ml, όπως απαιτείται. Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα της IL-6 που απαιτείται για να προκληθεί ημι-μέγιστος πολλαπλασιασμός των Τ-κυττάρων 1165

in vitro

.

Antibody Array που σχετίζονται με αγγειογένεση

Ανθρώπινο η αγγειογένεση Array Kit αγοράστηκε από την R & amp? συστήματα D (αριθμός καταλόγου ARY007, Minneapolis, MN, USA). 1 χ 107 κύτταρα ξεπλύθηκαν με 1Χ PBS και διαλυτοποιήθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα 1Χ λύσης παρέχονται στο κιτ. Η μεμβράνη αγγειογένεση αντίσωμα τοποθετήθηκε στην 4-καλά πολλαπλών πιάτο. 2 ml του αποκλεισμού συστοιχίας ρυθμιστικού προστέθηκε πάνω σε κάθε μεμβράνη. Η μεμβράνη επωάστηκε για 1 ώρα σε ένα λίκνισμα πλατφόρμα. Μετά την επώαση, το ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού απομακρύνθηκε. Η μεμβράνη αντίσωμα στη συνέχεια πλύθηκε δύο φορές με το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης συστοιχία 1Χ και 1,5 ml των κυτταρολυμάτων τοποθετήθηκαν επί της μεμβράνης. Η μεμβράνη επωάστηκε για όλη τη νύχτα σε 4 βαθμούς Κελσίου σε έναν τροχιακό αναδευτήρα. Η μεμβράνη στη συνέχεια πλύθηκε με 20 mL ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης 1X συστοιχία και συνεχίστηκε η επώαση επί τροχιακού αναδευτήρα επί 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. 2 ml διαλύματος στρεπταβιδίνης-ΗΚΡ προστέθηκε επί της μεμβράνης. Είναι επωάστηκε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου σε τροχιακό αναδευτήρα. Στη συνέχεια, τρεις εκπλύσεις διεξήχθησαν με ρυθμιστικό 1Χ συστοιχία πλύσης. Η μεμβράνη πλύθηκε και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Lumi Glo και υπεροξείδιο. Το Bio-rad Σύστημα Gel Τεκμηρίωσης (Bio-Rad, αριθμός καταλόγου 170 – 8195, Hercules, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για να λάβουν λεπτομερείς εικόνες του πίνακα χρησιμοποιώντας το One λογισμικού Ποσότητα χρησιμοποιώντας τη λειτουργία Chemi Doc XRS. Για την ποσοτικοποίηση των συστοιχιών, χρησιμοποιήσαμε το Image J λογισμικού. Όλες οι συστοιχίες μετρήθηκαν τρεις φορές και παρουσιάζονται με τυπικές αποκλίσεις

ενδοκυτταρική σηματοδότηση Arrays

PathScan ενδοκυτταρική σηματοδότηση Kit Array αγοράστηκε από την Cell Signaling Technology (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ?. Catalog # 7323). Για ΗΤ-29 και DLD-1, IL-6 ήταν προεπεξεργασία και λύματα κυττάρων παρασκευάστηκαν. Ολόκληρα λύματα πρωτεΐνη παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που παρέχεται στο κιτ. 100 μΙ από κάθε λύματα τοποθετήθηκαν επάνω στο παράθυρο μεμβράνη της διάταξης-slide αντισώματος. Το slide επεξεργασία λύμα επωάστηκε για όλη τη νύχτα στους 4 ° C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Το slide στη συνέχεια πλύθηκε με 100 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος 1Χ συστοιχία πλύσης και επωάστηκαν για το τροχιακό αναδευτήρα επί 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτή η διαδικασία επαναλήφθηκε τρεις ακόμη φορές. 75 μΙ Κοκτέιλ 1Χ Ανίχνευσης αντισώματος προστέθηκε σε κάθε ένα από τα 16 φρεάτια και καλύπτεται με μια ταινία σφράγισης που παρέχεται στο κιτ. Είναι επωάστηκε για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου σε τροχιακό αναδευτήρα. Στη συνέχεια, τρεις φορές από πλύσεις διεξήχθησαν και το πλακίδιο επωάζεται επί 30 λεπτά με 75 μΙ 1Χ HRP-συνδεδεμένη στρεπταβιδίνη. Το slide πλύθηκε και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Lumi Glo και υπεροξείδιο. Το Bio-rad Σύστημα Gel Documentation χρησιμοποιήθηκε για να λάβει λεπτομερείς εικόνες της συστοιχίας χρησιμοποιώντας το λογισμικό Quantity One χρησιμοποιώντας τη λειτουργία XRS ChemiDoc.

συστοιχίες κινάσης τυροσίνης υποδοχέα Activated

Τα καρκινικά κύτταρα πλύθηκαν με PBS που περιέχει 100 μmol /L Na

3νο

4 και διαλυτοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης. 300 μα συνολικής πρωτεΐνης επωάστηκαν με Human Phospho-RTK Arrays (R &? D Systems, αριθμός καταλόγου ARY001B, και Minneapolis, ΜΝ, USA). Εν συντομία, συστοιχίες επωάστηκαν με προϊόντα λύσης ολόκληρων κυττάρων όλη τη νύκτα στους 4 ° C με ανατάραξη και πλύθηκαν με το παρεχόμενο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης. Συστοιχίες στη συνέχεια επωάστηκαν με αντι-φωσφοτυροσίνης HRP-αντισώματα για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου σε συσκευή ανακίνησης κουνιστή πλατφόρμα πριν από την επώαση με ένα αντιδραστήριο χημειοφωταύγειας και έκθεση φιλμ. Οι συστοιχίες σαρώθηκαν με το σύστημα Bio-Rad Μοριακής Imager Gel Doc XR.

κηλίδας Western αναλύσεις

μονόφυλλο καλλιέργειες των αντίστοιχων κυτταρικών σειρών σε συρροή 80-90% λύθηκαν χρησιμοποιώντας 100 μλ ρυθμιστικό RIPA (Thomas Scientific). Τρις-γλυκίνης (Bio-Rad) πήγματα φορτώθηκαν με 50-100 μα των προϊόντων λύσης. Μετά την εκτέλεση ηλεκτροφόρηση πηκτής, η πηκτή μεταφέρθηκε σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης για 2 ώρες. Η μεμβράνη μπλοκαρίστηκε για 1 ώρα σε 5% BSA ή 5% αποβουτυρωμένο γάλα σε 4 ° C. Η μεμβράνη στη συνέχεια πλύθηκε 3 φορές με 1xTTBS και επωάστηκαν για μία νύχτα με το πρωτογενές αντίσωμα στους 4 ° C. Πρωτογενή αντισώματα παράγοντα πήξης III, IGFBP-3, DPP IV, ΡϋΟΡ-Α, ενδοθηλίνης Ι, CXCL16, ΤΙΜΡ-1, αμφιρεγουλίνη, ενδοστατίνη, αγγειογενίνη και GM-CSF αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Πρωτογενή αντισώματα για STAT3, pSTAT3, E-cadherin, βιμεντίνη, Oct-4, VEGF και β-ακτίνης αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology (Danvers, ΜΑ). Μετά την επώαση με τα δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση (HRP), οι ζώνες πρωτεΐνης εμφανίσθηκαν με τα αντιδραστήρια χημειοφωταύγειας. Οι εικόνες κηλίδος ελήφθησαν με τη χρήση του Bio-Rad σύστημα doc XR μοριακό εικονοληψίας γέλη. Western πυκνότητα πρωτεϊνική ζώνη κηλίδα μετρήθηκε με λογισμικό Image J και παρουσιάζονται μετά κανονικοποιήθηκαν από το σπίτι κρατώντας πρωτεΐνη β-ακτίνης. Κανονική FHC (CRL-1831) των κυττάρων του παχέος εντέρου γραμμή χρησιμοποιήθηκε ως σημείο αναφοράς για τη σύγκριση της έκφρασης της πρωτεΐνης με τη μέτρηση της έντασης μπάντα ως 1,0.

Αποτελέσματα

Οι πρωτεΐνες υπογραφή Ειδικά αγγειογένεση ρυθμίζεται προς τα κάτω στο μεταστατικό CRC κυτταρικές γραμμές SW620 και Τ84

Πρώτα απ ‘όλα, εμείς επιλέξαμε δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου του παχέος εντέρου ισογονιδιακές SW480 και SW620 και πρωτοβάθμιας κυτταρική σειρά ΗΤ29 και μεταστατική κυτταρική σειρά Τ84 για να εξετάσει τα προφίλ έκφρασης πρωτεΐνης αγγειογένεσης. Ως μάρτυρας, φυσιολογικό κύτταρο κόλον γραμμή FHC (CRL-1831) προφίλ αναλύθηκε παράλληλα. Χρησιμοποιήσαμε kit ανθρώπινη συστοιχία αγγειογένεση (R &? Συστήματα D, Minneapolis, ΜΝ) και παρακολουθήθηκε τα προφίλ έκφρασης πρωτεΐνης που σχετίζεται με αγγειογένεση. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν από τα καρκινικά κύτταρα κόλου και φυσιολογικών κυττάρων του παχέος εντέρου, αντίστοιχα. Κάθε προϊόν λύσης τοποθετήθηκε επί της μεμβράνης συστοιχίας, επωάστηκαν όλη τη νύκτα και ανιχνεύθηκε για τα επίπεδα έκφρασης των 55 πρωτεϊνών που σχετίζονται με την ανθρώπινη αγγειογένεση. Η συντεταγμένη 55 πρωτεΐνες του πίνακα αγγειογένεσης παρουσιάζονται στον Πίνακα S1. Τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης μετρήθηκαν από το λογισμικό Image J και παρουσιάζονται ως η μέση πυκνότητα pixel ομαλοποιηθούν οι θετικοί έλεγχοι. Βρήκαμε έξι πρωτεΐνες αγγειογένεσης ήταν ειδικά κατιούσα ρύθμιση και στις δύο μεταστατικό SW620 και Τ84 κύτταρα: παράγοντας πήξης III, IGFBP-3, DPP IV, PDGF-AA /ΑΒ, ενδοθηλίνη Ι και CXCL16 (Πίνακας 1 και Εικ S1). Αντιθέτως, VEGF (αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας) έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά σαφώς σε SW620 (14 πτυχώσεις) και Τ84 (36 πτυχώσεις), αντίστοιχα. Επιπλέον, βρήκαμε ότι ΤΙΜΡ-1, αμφιρεγουλίνη, ενδοστατίνη είχαν αυξορρυθμίζεται SW620 ενώ προς τα κάτω σε Τ84. Αγγειογενίνη ήταν προς τα κάτω σε Τ84 και GM-CSF προς τα κάτω σε SW620. Οι κυτταρικές λειτουργίες των πρωτεϊνών αυτών που σχετίζονται με αγγειογένεση παρουσιάστηκαν στον πίνακα 2. Όλα μαζί, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι υπάρχει ένα γονίδιο υπογραφή αγγειογένεσης καθορίζει ειδικά στα μεταστατικά κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου.

συστοιχίες αγγειογένεση πραγματοποιήθηκαν με FHC, SW480, SW620, ΗΤ29 και κυτταρικών σειρών Τ84. κηλίδες Array ελήφθησαν και αναλύθηκαν με Image J λογισμικού. επίπεδα έκφρασης παρουσιάστηκαν ως μέση πυκνότητα pixel ομαλοποιηθεί από τις θετικές αναφορές σημείο.

Η

υπάρχει γονίδιο υπογραφή Κοινής αγγειογένεση στο μεταστατικό CRC κυτταρικές σειρές SW620 και Τ84

Για την αναγνώριση τα κοινά γονίδια της αγγειογένεσης ειδικά για μεταστατικό CRC, έχουμε ευθυγραμμιστεί συστοιχίες αντισωμάτων από την πρωτοβάθμια SW480 και μεταστατικό SW620 και Τ84 μαζί. Εμείς αιτιολογημένη εάν υπάρχει μια καθολική υπογραφή μετάστασης στην αγγειογένεση, θα πρέπει να δείξει το ίδιο μοτίβο έκφρασης ακόμη και από τις διαφορετικές μεταστατικές κυτταρικές γραμμές CRC. Ισογενή πρωτογενούς SW480 επιλέχθηκε ως κυτταρική γραμμή αναφοράς. SW480 και δύο μεταστατικές κυτταρικές σειρές SW620 και συγκρίσεις σειρά Τ84 αποκάλυψε τις διαφορές έκφραση της πρωτεΐνης αγγειογένεση. Βρήκαμε CXCL16, GM-CSF, ενδοστατίνη, ενδοθηλίνη-1, IGFBP-3 και PDGF /ΑΒ, ΒΒ επίπεδα έκφρασης ήταν σαφώς μειωμένος σε μεταστατικούς SW620 και Τ84 κύτταρα.

τεχνική Western blot επιβεβαίωσαν τα δεδομένα συστοιχία αγγειογένεση

Για να επαληθεύσετε τα στοιχεία array αγγειογένεση, εκτελέσαμε κηλίδες Western των ταυτοποιημένων πρωτεϊνών και μετρήθηκαν τα επίπεδα έκφρασης σε φυσιολογικό και του παχέος εντέρου κύτταρα. Σε συμφωνία με τα δεδομένα πίνακα, παράγοντας πήξης III, IGFBP-3, DPP IV, ΡϋΟΡ-Α, ενδοθηλίνης Ι και CXCL16 ήταν ειδικά προς τα κάτω σε τόσο SW620 και Τ84 (Σχήμα 1). Φυσιολογικό κύτταρο κόλον γραμμή FHC χρησιμοποιήθηκε ως κύτταρο αναφοράς και μετρήθηκε ως 1,0 φορές. Βρήκαμε τα έξι πρωτεΐνες υπερεκφράζεται σε πρωτογενείς κυτταρικές σειρές SW480 και ΗΤ29 σε σύγκριση με FHC, στη συνέχεια, προς τα κάτω σε μεταστατικές κυτταρικές γραμμές SW620 και Τ84. Ένα άλλο σύνολο των πρωτεϊνών αγγειογένεσης, ΤΙΜΡ-1, αμφιρεγουλίνη, ενδοστατίνη ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε SW620 ενώ προς τα κάτω σε Τ84 (Σχήμα 2). Αυτό μπορεί να αντικατοπτρίζει το γεγονός ότι οι πρωτεΐνες λειτουργούν στην εξειδίκευση οργάνου όπως SW620 μεταστάσεις σε λεμφαδένες, ενώ Τ84 μεταστάσεις στον πνεύμονα. Αγγειογενίνη ρυθμίζεται αυξητικά σε ΗΤ29 και προς τα κάτω σε Τ84. Τέλος, GM-CSF ρυθμίζεται αυξητικά σε SW480, ενώ προς τα κάτω σε SW620. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι αυτά τα γονίδια αγγειογένεση υπογραφή αντιπροσωπεύουν το μετάσταση CRC και μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως νέος παράγοντας πρόγνωση καθώς και κυτταρικούς στόχους για θεραπεία CRC.

Western αναλύσεις έγιναν με την κανονική κυτταρική γραμμή και πρωτογενές και μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές. πρωτεΐνες αγγειογένεση που προσδιορίζονται από τη μελέτη συστοιχία, παράγοντας πήξης III, IGFBP-3, DPP IV, ΡϋΟΡ-Α, ενδοθηλίνης Ι και CXCL16 έτρεξαν στο πήκτωμα και αναλύθηκαν. Οι ζώνες πρωτεΐνης μετρήθηκαν για ένταση και ποσοτικά χρησιμοποιώντας φυσιολογικό κύτταρο κόλον FHC ως αναφορά.

Η

Ανοσοκηλίδωση διεξήχθη για το VEGF ειδικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου και ΤΙΜΡ-1, αμφιρεγουλίνη, ενδοστατίνη, αγγειογενίνη και GM -CSF. επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης μετρήθηκαν και κανονικοποιήθηκαν από την κανονική έκφραση των κυττάρων του παχέος εντέρου FHC.

Η

κυτοκίνης IL-6 που προκαλείται από θεραπεία επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης και Oct-4 έκφραση από ανθρώπινα πρωτογενή κυτταρικές σειρές CRC

Από τη στιγμή που προσδιορίζεται η αγγειογένεση υπογραφή για τις καθιερωμένες μεταστατικό CRC κύτταρα, έχουμε δίπλα επιθυμούσε να βρείτε τις κυτταρικές ανταποκρίνεται αλλαγές στην IL-6 θεραπεία. IL-6 θεωρείται ως ένας σημαντικός όγκος προώθηση παράγοντας σε διάφορους τύπους καρκίνων συμπεριλαμβανομένου του λεμφώματος, μελανώματος, καθώς και του μαστού, των ωοθηκών, του παγκρέατος, του προστάτη και του παχέος εντέρου. Το πιο σημαντικό, πρόσφατες μελέτες ανέφεραν ότι ανθρώπινους όγκους έγινε πιο επεμβατική και μεταστατική τόσο αυτοκρινείς και παρακρινείς IL-6 σηματοδότηση [26]. Ελέγξαμε την υπόθεση μας ότι η IL-6 μπορεί να επάγει θεραπεία οι πρωτογενείς κυτταρικές σειρές CRC πιο επεμβατικές και επιθετική μέσω της διαδικασίας (ΕΜΤ) επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης. Πρωτογενείς κυτταρικές σειρές CRC ΗΤ-29 και DLD-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-6 σε μία κλίση από 1 ~ 10 μονάδες /ml για 72 ώρες. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και εφαρμόστηκαν σε αναλύσεις στυπωμάτων western για την παρακολούθηση των επιπέδων έκφρασης EMT βιοδείκτη. Παρακολουθήσαμε επίσης ενεργοποίηση STAT3 ταυτόχρονα αφού STAT3 είναι γνωστό ότι φωσφορυλιώνεται από JAK (Janus κινάση) που ενεργοποιείται από την IL-6 προκάλεσε μεταγωγής σήματος [27]. Τέλος, εξετάσαμε την έκφραση του δείκτη εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων Oct-4. Οκτ-4 είναι ένα από τα πιο κρίσιμους παράγοντες μεταγραφής για ογκογένεση. Oct-4 έκφραση συνδέεται επίσης με τα γνωρίσματα του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων, καθώς και η εισβολή όγκου.

STAT3 φωσφορυλιώθηκε κατά IL-6 θεραπεία με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο και στις δύο γραμμές ΗΤ-29 και DLD-1 κυττάρων ( Σχήμα 3). έκφραση pSTAT3 ενισχύθηκε από την IL-6 θεραπεία 1 μονάδα /ml κατάσταση, ενώ τα συνολικά επίπεδα έκφρασης STAT3 παρέμεινε η ίδια. Αυτό είναι σύμφωνο με το IL-6 προκάλεσε JAK μεσολάβηση μονοπάτι φωσφορυλίωσης STAT3. Για EMT φαινότυπο, πρότυπο έκφρασης ΕΜΤ βιοδεικτών Ε-καδερίνης μειώθηκε ενώ μεσεγχυματικά έκφραση βιμεντίνη δείκτη ανυψώθηκε επάνω σε IL-6 θεραπεία (Εικ 3Α και 3Β). Τέλος, Oct-4 έκφραση προκλήθηκε σε ΗΤ-29 και DLD-1 κυττάρων με το IL-6 (5υ /ml) και IL-6 (10 U /ml) θεραπείες, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν ότι η IL-6 προκαλεί διαδικασία ΕΜΤ σε ανθρώπινα κύτταρα CRC. Επιπλέον, η ταυτόχρονη έκφραση των Oct-4 και pSTAT3 με τα δεδομένα της IL-6 θεραπεία προτείνουν υπάρχουν οι άξονα IL6-JAK-STAT3-Οκτ-4 σηματοδότηση στα κύτταρα CRC και συμβάλλει στην μετάσταση όγκου και εισβολής. Σε συμφωνία με τη μελέτη μας, Chang και οι συνεργάτες έδειξαν πρόσφατα τα αυξημένα επίπεδα της IL-6 που βρίσκονται στην αιχμή των χωροκατακτητικών ανθρώπινων όγκων του μαστού [28]. Βρήκαν τα αυξημένα επίπεδα της IL-6 στο μπροστινό άκρο του όγκου και συσχετίζεται θετικά με προχωρημένο στάδιο, υποδηλώνοντας μια μηχανιστική σύνδεση μεταξύ της παραγωγής των κυττάρων του όγκου της IL-6 και εισβολή.

Για να διερευνηθεί ΕΜΤ και STAT3 ενεργοποίηση ανθρώπινων κύτταρα CRC, κυτοκίνη IL-6 υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε ένα επίπεδο βαθμίδα 0, 1, 5 και 10 U /ml. Α: ΗΤ-29 υποβλήθηκε σε επεξεργασία με μια βαθμίδα IL-6, στη συνέχεια, παρατηρήθηκε φωσφορυλίωση STAT3 και φαινότυπο EMT. Ένα άλλο σημαντικό δείκτη βλαστικών κυττάρων Oct-4 έκφραση επίσης ελέγχεται. Β:. Κύτταρα DLD-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-6 και υποβάλλεται στις δυτικές αναλύσεις

Η

Μεταστατικό CRC κυτταρική γραμμή SW620 και IL-6 θεραπεία της ΗΤ-29 και DLD-1 έδειξαν την ίδια ενδοκυτταρική σηματοδότησης μοτίβο ενεργοποίησης

Από το φαινότυπο της IL-6 θεραπεία που προκαλείται από EMT, ενεργοποίηση STAT3 και Οκτώβριος-4 ενεργοποίηση, έχουμε δίπλα θέλησε να καθορίσει ποια είναι ενδοκυτταρικά μονοπάτια σηματοδότησης ενεργοποιούνται κατά την IL-6 θεραπεία. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήσαμε κιτ PathScan ενδοκυτταρική σηματοδότηση Array (Cell Signaling Technology, αριθμός καταλόγου 7323) και εκτελείται η ανάλυση γεννήτρια, όπως περιγράφεται στις Μεθόδους. Οι συντεταγμένες της ενδοκυτταρικής σηματοδότησης συστοιχίας παρουσιάστηκε επίσης (S2 πίνακα). Πρώτα απ ‘όλα, ερευνήσαμε τις δυο ισογονιδιακές κυτταρικές σειρές SW480 και SW620 και συνέκρινε την ενεργοποίηση σηματοδότησης. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και επωάστηκαν πάνω στην ενδοκυτταρική διάρκεια της νύχτας μεμβράνη συστοιχία σηματοδότησης. Την επόμενη ημέρα, μεμβράνη αντίσωμα επωάστηκε με 1Χ HRP-συνδεδεμένη στρεπταβιδίνη και οπτικοποιούνται με Lumi Glo και υπεροξείδιο. Εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας σύστημα τεκμηρίωσης τζελ Bio-rad. Όπως φαίνεται στο σχήμα 4, τα επίπεδα φωσφορυλίωσης της STAT3, Akt, AMPKα και BAD ήταν αυξημένα σε σύγκριση με SW620 πρωτογενή SW480 (σχήμα 4Α). Οι ίδιες πρωτεΐνες φωσφορυλιώθηκαν σε πολύ μέτρια επίπεδα σε SW480. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η STAT3, Akt, AMPKα και μονοπάτια BAD σηματοδότησης ενισχύθηκαν σε μεταστατικές κυτταρικές σειρές CRC.

Για την παρακολούθηση της ενδοκυτταρικής σηματοδότησης, σημαντική ενεργοποίηση συστατικό σηματοδότησης παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας συστοιχίες αντισωμάτων. A: Δύο ισογονιδιακές κυτταρικές σειρές CRC, SW480 και SW620, αναλύθηκαν για την ενεργοποίηση σηματοδότησης. τα επίπεδα φωσφορυλίωσης της STAT3, Akt, AMPKα και BAD πρωτεΐνες αυξημένα σε SW620 σε σύγκριση με SW480 κύτταρα. Β: ΗΤ-29 υποβλήθηκε σε επεξεργασία με IL-6 και υποβλήθηκε σε ενδοκυτταρική μελέτη συστοιχία σηματοδότησης. Είναι ενδιαφέρον, το ίδιο σύνολο πρωτεΐνη STAT3, Akt, AMPKα και κακά επίπεδα φωσφορυλίωσης ήταν όλα αυξήθηκαν κατά IL-6 θεραπεία. C: κύτταρα DLD-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-6 και παρατηρήθηκαν για την ενεργοποίηση συνιστώσα σηματοδότησης. DLD-1 έδειξε επίσης την STAT3, Akt, AMPKα και BAD ενίσχυση φωσφορυλίωση κατά της IL-6 διέγερση.

Η

Είμαστε δίπλα ήθελε να μάθει αν τα ίδια συστατικά σηματοδότησης ενεργοποιήθηκαν κατά της IL-6 θεραπεία για την πρωτογενή κυτταρικές σειρές CRC. Έτσι, αντιμετωπίζονται ΗΤ-29 και DLD-1 με IL-6 στο 10 U /ml δοσολογία και εξέτασε τα ενδοκυτταρικά μονοπάτια σηματοδότησης χρησιμοποιώντας τις ίδιες συστοιχίες αντισωμάτων. Είναι ενδιαφέρον ότι, το IL-6 κατεργασία ΗΤ-29 και DLD-1 έδειξε επίσης STAT3, Akt, AMPKα και ενεργοποίηση BAD σηματοδότηση στις συστοιχίες αντισωμάτων (Εικόνα 4Β και 4C). Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι υπάρχει κοινή υπογραφή ενεργοποίηση σε ανθρώπινα κύτταρα CRC σηματοδότησης, και η υπογραφή μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης πρόγνωση ή στόχοι για τη θεραπεία CRC σε ένα κλινικό περιβάλλον.

Υποδοχέα Κινάσης Τυροσίνης Array αποκάλυψε επίπεδα φωσφορυλίωσης EGFR, HER2, ινσουλίνη R και IGF1R μειώθηκαν κατά IL-6 θεραπεία της ΗΤ-29

Εμείς διερευνηθεί περαιτέρω ο καρκίνος κυτταρική απόκριση σε IL-6 θεραπεία. Από τη στιγμή που εξέτασε την ενδοκυτταρική σηματοδότηση και βρήκε την ενεργοποίηση της υπογραφής, επεκτείναμε τη μελέτη μας με την ενεργοποίηση της κινάσης τυροσίνης του υποδοχέα. Για το σκοπό αυτό, έχουμε χρησιμοποιήσει το φώσφορο-τυροσίνη συστοιχία ανθρώπινης κινάσης (R &? D Systems, αριθμός καταλόγου ARY001B) κιτ και αναλύθηκαν IL-6 επιδράσεις στα ανθρώπινα κύτταρα CRC. ΗΤ-29 κύτταρα κατεργάστηκαν με IL-6 (10 U /ml) και υποβάλλονται σε λύση με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που παρέχεται. ~ 300 μg ολικών πρωτεϊνών τοποθετήθηκαν στην μεμβράνη συστοιχία ανθρώπινο φωσφόρου RTK και επωάζονται όλη τη νύκτα. Η μεμβράνη αντίσωμα επωάστηκε με δευτερογενές αντίσωμα και οι θετικές κηλίδες πρωτεΐνης ανιχνεύθηκαν με χημειοφωταύγεια. Οι συντεταγμένες αυτής της ανθρώπινης σειρά φωσφόρου-RTK παρουσιάστηκε επίσης (S3 Πίνακας). Βρήκαμε ότι EGFR και HER2 υποδοχέων ήταν ταυτόχρονα φωσφορυλιωμένες σε ΗΤ-29 (Σχήμα 5Α). υποδοχέα ινσουλίνης και IGF υποδοχέα 1Κ επίσης φωσφορυλιώνεται σε ΗΤ-29. Ωστόσο, κατά την IL-6 θεραπεία, τα επίπεδα φωσφορυλίωσης του EGFR, HER2 υποδοχέα, ινσουλίνη R και IGF υποδοχείς 1R ήταν σαφώς μειώθηκαν (Σχήμα 5Β). Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η IL-6 που προκαλείται από τη διαδικασία EMT συνδέεται με ρύθμιση προς τα κάτω των πολλών φωσφορυλιωμένη υποδοχέων τυροσινικής κινάσης.

Ερευνήσαμε την τυροσίνης φωσφορυλίωσης της κινάσης με IL-6 θεραπεία σε ΗΤ-29. Α: Ακατέργαστο ελέγχου συστοιχίας ΗΤ-29 έδειξε την φωσφορυλιωμένη EGFR, HER2, Ινσουλίνη R και των υποδοχέων IGF-1 R. Β:. Όταν αντιμετωπίζεται ΗΤ-29 με IL-6, την φωσφορυλίωση του EGFR, HER2, Ινσουλίνη R και IGF-1 R καταργήθηκε

Η

Ερευνήσαμε επίσης SW480 κυττάρων μη επεξεργασμένων και επεξεργασμένων με IL-6 , SW620 και κύτταρα Τ84 για τα προφίλ RTK (Σχήμα 6). Ωστόσο, σε αυτές τις κυτταρικές σειρές, οι κινάσες τυροσίνης υποδοχέα δεν ενεργοποιήθηκαν. Αυτό είναι πιθανό να οφείλεται στην ορθοκολικού ειδικότητα γραμμή καρκινικών κυττάρων. Οι αναλύσεις των κυτταρικών σειρών περισσότερα καρκίνο μένει να φανεί.

Ερευνήσαμε την τυροσίνης φωσφορυλίωσης της κινάσης με IL-6 θεραπεία σε SW480. Τα ανεπεξέργαστα SW480 ελέγχου και IL-6 σε επεξεργασία συστοιχίες SW480 δεν έδειξαν ενεργοποίηση RTK. Επιπλέον, μεταστατικό καρκίνο κυτταρική σειρά SW620 και Τ84 δεν δείχνουν την ενεργοποίηση RTK, είτε.

Η

Συζήτηση

Η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC) είναι από μετάσταση των όγκων. Σχεδόν το 50% των ασθενών με CRC αναπτύσσεται τελικά υποτροπή της νόσου και των μεταστάσεων που οδηγεί στο θάνατο μέσα σε 5 χρόνια από τη διάγνωση. Μετάσταση συμβαίνει σε μια φάση της εξέλιξης του όγκου με μεταστατικό παραλλαγή κύτταρα που έχουν επεμβατικές δραστηριότητες που χαρακτηρίζονται από αυξημένη κυτταρική μετανάστευση, την εισβολή των ιστών, και του εποικισμού όργανο.

Στην παρούσα μελέτη μας, υποθέσαμε ότι θα μπορούσε να υπάρχει ένα σύνολο γονιδίων υπογραφή η οποία ενεργοποιούνται επιλεκτικά (ή αδρανοποιημένο) σε μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο. Δοκιμάσαμε αυτή την υπόθεση ερευνώντας μεταστατικό και πρωτογενείς κυτταρικές σειρές CRC για συγκεκριμένες μορφές έκφρασης της αγγειογένεσης τους σε πρωτεΐνες. Η μελέτη μας εντόπισε ένα νέο γονίδιο υποσύνολο ειδικά για μεταστατικά κύτταρα CRC. Αρχικά αναλύσαμε τις καθιερωμένες κυτταρικές σειρές CRC, ακολουθούμενη από επεξεργασία με IL-6 κυτοκίνης να διεγείρει μεταστατική φαινότυπο σε ανθρώπινα κύτταρα CRC. IL-6 προκάλεσε ταυτόχρονη ενεργοποίηση STAT3 και EMT εκφράσεις βιοδεικτών. Διερεύνηση των ενδοκυτταρική σηματοδότηση και τυροσίνης κινάσης συστοιχίες αποκάλυψε περισσότερα ενεργοποίηση νέο γονίδιο υπογραφή σε αυτά τα CRC κύτταρα. Συνολικά, η μελέτη μας προσδιορίζονται νέων βιολογικών δεικτών για μεταστατικό CRC που μπορεί να χρησιμοποιηθεί όχι μόνο ως παράγοντας πρόγνωση (ες), αλλά και ως νέων στόχων για τους μεταστατικούς CRCs.

Λεμφικού μετάσταση είναι μια σημαντική ανησυχία στην CRC. Εμείς επιλέξαμε δύο ισογονιδιακές κυτταρικές σειρές CRC SW480 και SW620, και αποκάλυψε την αγγειογένεση ειδικές πρωτεΐνες που ρυθμίζεται προς τα πάνω και προς τα κάτω σε λεμφαδένες μεταστατικά κύτταρα SW620. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν εξετάσαμε πνεύμονα-μεταστατικό CRC Τ84 κυτταρική γραμμή, βρήκαμε ορισμένα αγγειογένεσης πρωτεΐνες μειωτικά τόσο SW620 και Τ84, ενώ άλλες πρωτεΐνες μειωτικά συγκεκριμένα είτε SW620 ή Τ84. Κοινώς μειωτικά πρωτεΐνες? CXCL16, GM-CSF, ενδοθηλίνη-1, ενδοστατίνη, IGFBP-3 και PDGF-ΑΒ /ΒΒ μπορεί να αποτελεί μια καθολική υπογραφή μετάστασης σε CRC. Εν τω μεταξύ, SW620 ειδική πρωτεΐνη, για παράδειγμα παράγοντα πήξεως III, μπορεί να είναι ένας λεμφαδένας που κατευθύνεται παράγοντα αγγειογένεσης. Ομοίως, ειδικές πρωτεΐνες Τ84, π.χ. αγγειογενίνη και αμφιρεγουλίνη, είναι πιθανό οι πνεύμονες, ειδικά πρωτεϊνών μεταστατικών αγγειογένεση. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι σε πρωτογενή καρκινικά κύτταρα κόλου, οι PDGFs εκφράζονται ενώ στα μεταστατικά καρκινικά κύτταρα κόλου, η έκφραση του PDGF μπορεί να ρυθμίζεται προς τα κάτω. Ωστόσο, η στρωματική PDGF σηματοδότηση για μεταστατικό καρκίνο κύτταρα μπορεί να υπερεκφράζεται σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Μένει να δούμε αν αυτή είναι η περίπτωση σε κλινικά δείγματα ορθοκολικών όγκων.

επιθηλιακά μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), μια διαδικασία δια-χαρακτηρίζονται από μειωμένη επιθηλιακά δείκτες όπως Ε-καδερίνης και αυξημένη δείκτες μεσεγχυματικών όπως βιμεντίνης έχουν ενοχοποιηθεί ότι παίζουν ένα ρόλο στην οποία μετασχηματισμένα επιθηλιακά κύτταρα αποκτούν την ικανότητα να εισβάλλουν, να αντισταθούν απόπτωση και μετάσταση [29]. Συγκεκριμένα, η διαδικασία EMT οδηγεί συχνά στην έκφραση των χαρακτηριστικών του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων [30]. Έχουμε επεξεργασμένα κύτταρα CRC με κυτοκίνη IL-6 και προκάλεσε φαινότυπο EMT ταυτόχρονα με pSTAT3 και Οκτώβριος-4 έκφρασης. Τόσο αυτοκρινείς και παρακρινείς IL-6 που προκαλείται από σηματοδότηση της επιθετικότητας του όγκου. Τα δεδομένα μας συνάδουν με τα κλινικά δεδομένα στα οποία η IL-6 παίζει έναν ρόλο στην ογκογένεση και μετάσταση (28). Επιπλέον, έχουμε δείξει τις συγκεκριμένες ενδοκυτταρικά συστατικά σηματοδότησης που ενεργοποιούνται από την IL-6, STAT3, Akt, AMPKα και BAD. Τέλος, ανακαλύψαμε ότι οι (EGFR, HER2) δραστηριότητες ειδικά κινάσης τυροσίνης υποδοχέα μειωτικά από την IL-6 σε ανθρώπινα κύτταρα CRC ΗΤ-29. Περαιτέρω μελέτες προσανατολισμένη προς την ανάπτυξη των κοκτέιλ αναστολέα για αυτούς τους νέους βιοδείκτες CRC σε μια κλινική εφαρμογή. Εν ολίγοις, η μελέτη μας εντόπισε μια πιθανή οδό για στοχευμένη-θεραπεία για CRC χρήση των νέων βιοδεικτών για μεταστατικό CRC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. προφίλ έκφρασης πρωτεΐνης σχετίζονται με την αγγειογένεση του FHC, SW480, SW620, ΗΤ-29 και Τ84.

Primary και μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές SW480, SW620, ΗΤ29 και Τ84 αναλύθηκαν για προφίλ έκφρασης πρωτεΐνης αγγειογένεση. SW480 εξέφρασε παράγοντα πήξης ΙΙΙ, CXCL16, GM-CSF, ενδοθηλίνης 1, ενδοστατίνη, IGFBP-3, PDGF-ΑΒ /ΒΒ σαφώς, ενώ δεν εκφράζουν VEGF. SW620 εκφράζεται VEGF ενώ ρυθμίζεται προς τα κάτω παράγοντας πήξης III, CXCL16, GM-CSF, ενδοθηλίνη 1, ενδοστατίνη, IGFBP-3, PDGF-ΑΒ /ΒΒ εκφράσεις. Παράλληλα, ορθοκολικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές ΗΤ-29 και Τ84 αναλύθηκαν για προφίλ έκφρασης πρωτεΐνης αγγειογένεση. Σε ΗΤ-29. DPP IV, ΤΙΜΡ-1, αγγειογενίνη, ενδοθηλίνη, αμφιρεγουλίνη και PDGF /ΑΒ, ΒΒ πρωτεΐνες εκφράστηκαν ενώ VEGF δεν εκφράζεται σε ΗΤ-29. Σε Τ84, VEGF εκφράστηκε ενώ DPP IV, TIMP-1, αγγειογενίνη, ενδοθηλίνης, αμφιρεγουλίνη και PDGF /ΑΒ, τα επίπεδα έκφρασης BB μειώθηκαν

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134948.s001

(JPG)

S2 Εικ. Ανθρώπινα ευθυγράμμιση σειρά της αγγειογένεσης για τη μετάσταση υπογραφή.

Στον εντοπισμό κοινών πρωτεϊνών που ρυθμίζεται προς τα πάνω ή προς τα κάτω ρυθμισμένη επιλεκτικά σε μεταστατικές κυτταρικές σειρές CRC, δύο μεταστατικές κυτταρικές σειρές CRC, SW620 και Τ84, συστοιχίες αγγειογένεση τους ήταν ευθυγραμμισμένο με το πρωτογενές κυτταρική σειρά SW480. Πρωτογενής κυτταρική γραμμή SW480 CRC χρησιμοποιήθηκε ως κυτταρική σειρά αναφοράς, υποβλήθηκε συστοιχία SW620 κυττάρων λέμφο-μεταστατικό. Παράλληλα, πνεύμονα-μεταστατικό σειρά Τ84 ήταν ευθυγραμμισμένα. VEGF ρυθμίζεται αυξητικά στα δύο κύτταρα SW620 και Τ84. Αντιθέτως, CXCL16, GM-CSF, ενδοστατίνη, ενδοθηλίνη-1, IGFBP-3 και PDGF /ΑΒ, τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης ΒΒ μειώθηκαν και στις δύο κύτταρα SW620 και Τ84

DOI:. 10.1371 /journal.pone.0134948.