Abstract

Μία από τις προκλήσεις στην θεραπεία του ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο είναι ότι αυτοί οι όγκοι εμφανίζουν αντοχή στην ακτινοβολία. Τα Τα microRNAs (miRNAs) που συμμετέχουν σε θεμελιώδεις βιολογικές δραστηριότητες, συμπεριλαμβανομένων χημειοαντίσταση και ραδιοαντοχή. Αρκετές ερευνητικές μελέτες έχουν δείξει ότι miRNA έπαιξε σημαντικό ρόλο στην ευαισθητοποίηση κυτταρική απόκριση σε ιοντίζουσα ακτινοβολία (IR). Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι miR-124 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω τόσο στη CRC-κυτταρικές γραμμές που παράγονται και κλινικά δείγματα CRC σε σύγκριση με παρακείμενες μη-όγκου του παχέος ιστούς, MiR-124 θα μπορούσε να ευαισθητοποιηθούν ανθρώπινου ορθοκολικού καρκινικά κύτταρα σε IR

στο vitro

και

in vivo

. Εντοπίσαμε PRRX1, ένα νέο EMT επαγωγέα και ρυθμιστή βλαστική ικανότητα ως νέο άμεσο στόχο του miR-124 με τη χρήση αλγορίθμων πρόβλεψης στόχου και δοκιμασία λουσιφεράσης. PRRX1 νοκ ντάουν θα μπορούσε να ευαισθητοποιήσει κύτταρα CRC σε IR παρόμοια με τα αποτελέσματα που προκαλούνται από miR-124. Η υπερέκφραση του PRRX1 σε σταθερά υπερεκφράζεται-miR-124 κυτταρικές σειρές θα μπορούσε να σώσει τις επιπτώσεις της ενίσχυσης ακτινοευαισθησία ασκήθηκε από miR-124. Λαμβάνοντας αυτές τις παρατηρήσεις υπόψη, εμείς φαίνεται ότι το miR-124 θα μπορούσε να αυξήσει τη ραδιοευαισθησία των κυττάρων CRC μπλοκάροντας την έκφραση της PRRX1, η οποία αναφέρεται miR-124 θα μπορούσε να λειτουργήσει ως ένα μεγάλο θεραπευτικό στόχο για τους ασθενείς CRC

Αιτιολογική αναφορά.: Zhang Υ, Zheng L, Huang J, Γκάο F, Λιν Χ, Εκείνος L, et al. (2014) MiR-124 Radiosensitizes Ανθρωπίνων καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα από Στόχευση PRRX1. PLoS ONE 9 (4): e93917. doi: 10.1371 /journal.pone.0093917

Επιμέλεια: Alfons Navarro, Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης, Ισπανία

Ελήφθη: 3 Γενάρη 2014? Αποδεκτές: 11 Μάρτη 2014? Δημοσιεύθηκε: 4η, Απριλίου 2014

Copyright: © 2014 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Φυσικό Επιστημονικό Ίδρυμα της Κίνας (Grant Νο 81272507). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η τρίτη κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο [1]. Οι περιπτώσεις CRC αντιμετωπίζονται με χειρουργική εκτομή, καθώς είναι η μόνη θεραπευτική τεχνική που είναι διαθέσιμες μέχρι σήμερα. Παρ ‘όλα αυτά, καρκίνο του παχέος εντέρου συνδέεται με την υψηλή θνησιμότητα ως περίπου 30% των ασθενών διαγιγνώσκονται όταν αυτός ο καρκίνος έχει φτάσει σε προχωρημένο στάδιο. Οι ασθενείς αυτοί φιλοξενούν ένα τοπικά προχωρημένο, ανεγχείρητο, μη μεταστατική νόσο που έχει ονομαστεί ως «τοπικά προχωρημένο καρκίνο του παχέος εντέρου.» Αυτές οι ασθενείς έλαβαν θεραπεία με chemoradiation. Παρ ‘όλα αυτά, λόγω των εγγενών ικανότητα του ορθοκολικού καρκίνου για να γίνει στη χημειοθεραπεία και ραδιοανθεκτικά (RR), συνδυασμένη θεραπεία τροπικότητα έχει αποτύχει να βελτιώσει καθολικά αποτελέσματα. Είναι δύσκολο για τη θεραπεία ασθενών με τοπικά προχωρημένο καρκίνο του παχέως εντέρου, επειδή αυτά τα καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν αντοχή σε θεραπεία με ακτινοβολία. Αυτό είναι ένα από τα πιο ενδιαφέροντα θέματα στη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου. Ως εκ τούτου, θα πρέπει να διαλευκανθούν οι μοριακοί μηχανισμοί που διέπουν την ευαισθησία ακτινοβολίας ή την αντίσταση καθώς αυτό θα μας βοηθήσει τελικά στη βελτίωση θεραπευτικά αποτελέσματα.

Προηγούμενες μελέτες έχουν επιβεβαιώσει τη σύνδεση μεταξύ ραδιοαντοχή και την έκφραση των γονιδίων που επάγουν το σημείο ελέγχου βλαβών του DNA απόκρισης και ικανότητα αύξησης επιδιόρθωση του DNA [2] – [4]. Αν και τέτοια ανακαλύψεις έχουν βελτιώσει την κατανόηση των μοριακών μηχανισμών που επηρεάζουν την κυτταρική ραδιοευαισθησία, οι λεπτομερείς μηχανισμοί με τους οποίους ρυθμίζεται η διαδικασία αυτή δεν είναι γνωστή μέχρι σήμερα.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μία κατηγορία των μικρών (

~ 22 νουκλεοτίδια

) μη-κωδικοποίησης μόρια RNA που ρυθμίζουν την έκφραση των γονιδίων μετα-μεταγραφικά. Με τη δέσμευση με μερικώς συμπληρωματικές αλληλουχίες του αγγελιοφόρου RNA (mRNA), τα μόρια mRNA στόχου miRNAs για την αποικοδόμηση και /ή αναστολή της μετάφρασης, μειώνοντας έτσι την έκφραση των πρωτεϊνών [5]. Αρκετές πειραματικές αποδείξεις έχουν δείξει ότι έχουν πολλές ανθρώπινες ασθένειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου έχει προκληθεί λόγω της απορρύθμισης των miRNAs [6]. Μερικά miRNAs ρυθμίζουν την έκφραση των γνωστών ογκογόνων ή γονιδίων καταστολής του όγκου, ενώ άλλα λειτουργούν ως oncomiRNAs ή miRNAs ογκοκατασταλτικού [7]. Αρκετές miRNAs έχουν συσχετιστεί με την επιβίωση του ασθενούς. Αυτά τα miRNAs μπορεί να είναι χρήσιμη στην πρόβλεψη και την τροποποίηση αντικαρκινικές θεραπείες (συμπεριλαμβανομένων των χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία, και ανοσοθεραπεία) [8], [9]. Τον τελευταίο καιρό, έχουμε ανακαλύψει ότι miRNAs έπαιξε σημαντικό ρόλο στην κυτταρική απόκριση σε ιοντίζουσα ακτινοβολία [10] – [13].

MiR-124 είναι ένας εγκέφαλος εμπλουτισμένο miRNA, το οποίο είναι σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται σε πολλούς ανθρώπινους κακοήθεις όγκους, που περιλαμβάνει το γλοιοβλάστωμα, γαστρικό καρκίνωμα, μυελοβλάστωμα, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, και CRC [14] – [22]. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι miR-124 radiosensitizes ανθρώπινα κύτταρα γλοιώματος με τη στόχευση CDK4 [23]. Ωστόσο, η λειτουργία των miR-124 στην ραδιοαντοχή έχει ελάχιστα κατανοητή μέχρι σήμερα.

PRRX1 είναι ένα πρόσφατα εντοπίστηκαν EMT (η επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση) επαγωγέα και βλαστική ικανότητα ρυθμιστή [24], [25], και οι δύο τα οποία συνδέονται στενά με radioresistence [26]. Επιπλέον, άφθονη έκφραση PRRX1 συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση και μετάσταση σε περιπτώσεις CRC. Επιπλέον, άφθονη έκφραση του PRRX1 συσχετίστηκε επίσης με την κακή κλινική έκβαση [27]. Πρόσφατες μελέτες έχουν επίσης δείξει ότι PRRX1 διαδραμάτισε καίριο ρόλο στην αναγέννηση του παγκρέατος και καρκινογένεση [28]. Σε αυτή τη μελέτη, απεικονίζεται ότι miR-124 αύξησε την ευαισθησία στην ακτινοβολία, τόσο σε κύτταρα CRC και ξενομοσχεύματος ανθρώπινου όγκων. Επιπλέον, PRRX1 είναι ένα μυθιστόρημα, άμεσος στόχος του miR-124, που προκαλεί αντίσταση ακτινοβολίας. PRRX1 νοκ ντάουν θα μπορούσε να ευαισθητοποιήσει κύτταρα σε ιοντίζουσα ακτινοβολία. Επιπλέον, η υπερέκφραση του miR-124 θα μπορούσε να προκαλέσει τη διαφοροποίηση των ΕΜΤ και την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με βλαστική ικανότητα-, δύο εκ των οποίων σχετίζονται στενά με radioresistence. Η αποκατάσταση της PRRX1 θα μπορούσε να σώσει τις επιπτώσεις που προκαλούνται από miR-124. Στην παρούσα ερευνητική μελέτη, έχουμε απεικονίζεται ότι miR-124 ευαισθητοποιημένα ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα σε θεραπεία ακτινοβολίας σε κάποιο βαθμό από προς τα κάτω ρύθμιση PRRX1. Αυτά τα ευρήματα έχουν αποκαλυφθεί για πρώτη φορά, αποτυπώνουν με τον τρόπο αυτό τον τρόπο miR-124 διαδραματίζει καίριο ρόλο στην επαγωγή αντίστασης των κυττάρων σε ιονίζουσα ακτινοβολία.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγματα Ασθενών

Κλινικά δείγματα CRC ελήφθησαν από Nanfang Νοσοκομείο, Ιατρική Σχολή Πανεπιστημίου Southern, Guangzhou City, Κίνα. Οι ασθενείς είχαν υποβληθεί σε μέγιστη χειρουργική εκτομή ακολουθούμενη από ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία. Γραπτή πληροφορημένες συγκαταθέσεις ελήφθησαν από τα άτομα που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη. Τα δείγματα ιστών συλλέχθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν αφού λάβει την έγκριση από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Nanfang Νοσοκομείο.

Οι κυτταρικές σειρές και αντιδραστήρια

κυτταρικές σειρές ανθρώπινου CRC, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων SW480, SW620 και LOVO αγοράστηκαν από η American Type Collection Culture (Manassas, VA, USA). HCT-116, LS-174Τ και ΗΤ29 αγοράστηκαν από την Κυτταρική Βιολογία της Σαγκάης, του Πανεπιστημίου της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) που έχει συμπληρωθεί με 10% ορό εμβρύου βοός (Gibco, CA, USA) σε υγρό υγρή ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2 στους 37 ° C . Αννεξίνης V-FITC /7-AAD KIT αγοράστηκε από την Beckman Coulter. Ένα cDNA PRRX1 πλήρους μήκους που στερούνταν εντελώς το 3′-UTR αγοράστηκε από GeneCopeia (Rockville, MD, USA) και υποκλωνοποιήθηκε στον ευκαρυωτικό φορέα έκφρασης pcDNA3.1 (+) (Invitrogen, USA). Η ακολουθία προ-miR-124 ενισχύθηκε και κλωνοποιήθηκε σε pCDH-CMV-MCS-EF1-coGFP κατασκευάσματα (Σύστημα Biosciences, California, USA). Τα σωματίδια του ιού συλλέχθηκαν 48 ώρες μετά την επιμόλυνση pCDH-CMV-miR-124 με το πλασμίδιο pRSV συσκευασία /pREV, ρΟΜν /pVSVG, και pMDLG /pRRE σε κύτταρα 293Τ χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη αντιδραστήριο 2000 (Invitrogen, USA). PRRX1 νοκ ντάουν και ο έλεγχος φακοϊούς αγοράστηκαν από GENECHEM (Σανγκάη, Κίνα). MiR-124 μιμούνται, ένα μη ειδικό έλεγχο Mir, αντι-miR-124, και ένας μη ειδικός έλεγχος αντι-miR αγοράστηκαν από Thermo Scientific Dharmacon (USA).

απομόνωση RNA, αντίστροφη μεταγραφή, και Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Ολικό RNA εξήχθη από κύτταρα χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, USA). Για miR-124, η αντίστροφη μεταγραφή και αντιδράσεις qRT-PCR πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ενός qSYBR-πράσινο που περιέχουν kit PCR (GenePharma, Σαγκάη, Κίνα). U6 snRNA χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενή έλεγχο. Ο πρόδρομος μορφή του miR-124 ενισχύθηκε. Για την ανίχνευση PRRX1 mRNA, cDNA συνετέθη από 1 μα ολικού RNA με τη χρήση της αντίστροφης μεταγραφής κιτ αντίδραση σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Promega, USA). Ανθρώπινη GAPDH ενισχύθηκε παράλληλα ως εσωτερικός έλεγχος. Οι εκκινητές που περιλαμβάνονται στο συμπληρωματικό πίνακα S1. Όλα αυτά τα δείγματα κανονικοποιήθηκαν προς τους εσωτερικούς ελέγχους και πολλαπλές μεταβολές υπολογίστηκαν μέσω σχετικής ποσοτικοποίησης (2-ΔΔCt).

Ανάλυση Western Blot

Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε φθοριούχο πολυβινυλιδένιο (PVDF) (Millipore, USA). Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν σε 5% άπαχο γάλα αποβουτυρωμένο /TBST [20 mM Tris-HCl (ρΗ 7,4), 150 mM NaCl, και 0.1% Tween-20] σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Στη συνέχεια, αυτά ανιχνεύθηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα σε 4 ° C όλη τη νύκτα. Στη συνέχεια, κηλιδώθηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με τη βοήθεια ενός κατάλληλου δευτερεύοντος αντισώματος. Στη συνέχεια, η ενισχυμένη αντιδραστήρια ανίχνευσης χημειοφωταύγειας χρησιμοποιήθηκαν (Amersham Pharmacia Biotech, Η.Π.Α.). Οι πρωτογενείς PRRX1was αντίσωμα αγοράστηκε από Abcam (UK). Caspase-3, Bcl-2, andγ-Η2ΑΧ αγοράστηκαν από Epitomics (UK). E-cadherin, ΖΟ-1, βιμεντίνη, Ν-cadherin αγοράστηκαν από την Becton, Dickinson and Company (ΗΠΑ). GAPDH αγοράστηκε από Boster (Κίνα).

Λουσιφεράσης Δοκιμασία

Το πλήρους μήκους PRRX1 3′-UTR ενισχύθηκε με PCR και κλωνοποιήθηκε καθοδικά του γονιδίου λουσιφεράσης πυγολαμπίδας στο φορέα pGL3 (Promega , ΗΠΑ). Ο φορέας ονομάστηκε άγριου τύπου (wt) 3′-UTR. Η GeneTailor τοπο-Directed Mutagenesis System (Invitrogen, USA) χρησιμοποιήθηκε για την διεξαγωγή θέση-κατευθυνόμενη μεταλλαξιγένεση της θέσης σύνδεσης miR-124 σε PRRX1 3′-UTR: το προκύπτον ονομάστηκε μεταλλάκτης (mt) 3′-UTR. Αυτά τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με πλασμίδια ανταποκριτές και τοποθετήθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων. Μετά από επώαση των κυττάρων για 48 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν με χρήση του συστήματος διπλής λουσιφεράσης δοκιμασία ανταποκριτή (Promega, Madison, WI) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι δραστικότητες της λουσιφεράσης κανονικοποιήθηκαν με δραστικότητα β-γαλακτοσιδάσης. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν.

Δοκιμασία Κλωνογόνος και κυτταρομετρία ροής

Ένας προκαθορισμένος αριθμός κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες καλλιέργειας των 6 φρεατίων. Στη συνέχεια, επωάστηκαν για 24 h, η οποία βοήθησε στο να εγκαταστήσει κάτω αυτά τα κύτταρα. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ένα εύρος δόσεων IR (0, 2, 4, 6 και 8 Gy, Nasatron (Cs-137) ακτινοβολίας). Μετά από επώαση αυτών των κυττάρων σε 37 ° C για 14 ημέρες, πλύθηκαν δύο φορές με PBS και βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες διάλυμα. Ο αριθμός των αποικιών που περιέχουν ≥50 κύτταρα μετρήθηκε υπό μικροσκόπιο χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: αποδοτικότητα σχηματισμού κλώνος Plate = (αριθμός των αποικιών /αριθμός κυττάρων εμβολιάστηκε) × 100%. κλάσματα επιβίωσης (SF) υπολογίστηκαν με κανονικοποίηση προς την αποτελεσματικότητα επιμετάλλωση των κατάλληλων ομάδων ελέγχου. Χρησιμοποιήσαμε GraphPad Prism (GraphPad Software, LaJolla, CA, USA) για να ταιριάζει καμπύλη επιβίωσης των κυττάρων, σύμφωνα με ένα πρότυπο γραμμικό-τετραγωνική μοντέλο (LQ). Στη συνέχεια, λάβαμε τις τιμές του κλάσματος επιβίωσης ενός εύρους δόσεων IR. Υπάρχουν πολλές σημαντικές παράμετροι σε αυτό το μοντέλο, όπως SF2 (κλάσμα επιβίωσης στα 2 Gy), α (μια παράμετρος του διαλείμματα του DNA που προκαλείται από ένα σοκ) και β (μια παράμετρος διαλείμματα του DNA που προκαλείται από δύο σοκ).

Για την ανίχνευση των κυττάρων απόπτωσης, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας 7-AAD και Annexin-V-FITC. Η κυτταρομετρία ροής δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας BD FACS V6.1.3 λογισμικού Diva (BD Biosciences).

Μελέτες σε ζώα

αθυμικά γυμνά ποντίκια (Guangdong Πειραματικό Κέντρο Ζώων) χρησιμοποιήθηκαν για την εμφύτευση του όγκου. Αυτοί οι ποντικοί ήταν ηλικίας περίπου 4 έως 6 εβδομάδες. Όλα τα πειράματα σε ζώα αυστηρά τους κανονισμούς για τη διαχείριση των υποθέσεων Σχετικά με πειραματόζωα, η κινεζική εθνική κατευθυντήρια γραμμή για πειράματα σε ζώα, που εκδόθηκε το 1988. Στη μελέτη αυτή, όλες οι διαδικασίες που αφορούν τα ζώα και τη φροντίδα τους έχουν εγκριθεί και εκτελείται από το Πανεπιστήμιο της Νότιας Ιατρικής του ιδρυματική φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήσης. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με θρυψινοποίηση και πλύθηκαν δύο φορές με ψυχρό μέσο χωρίς ορό. Στη συνέχεια, αυτά τα κύτταρα επανα-εναιωρήθηκαν σε 200 μΙ μέσου χωρίς ορό. Για την ανίχνευση όγκων ξενομοσχεύματος, 5 × 10

6 SW480 κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως στο πίσω μέρος γυμνών ποντικών. Μετά ανιχνεύθηκαν όγκους, το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε με παχύμετρο με βερνιέρο κάθε τρεις ημέρες. Για την αξιολόγηση ραδιοαντοχή όγκου

in vivo

, οι όγκοι ακτινοβολούνται με μία μόνο δόση των 10 Gy IR 11 ημέρες μετά την ένεση. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο (α b2 χ) × 0,5, όπου a και b είναι οι μεγάλες και μικρές διαστάσεις, αντίστοιχα. Τα ποντίκια θανατώθηκαν 35 ημέρες μετά την ένεση. Στη συνέχεια, οι όγκοι αφαιρέθηκαν. Κάθε ομάδα περιείχε 5 ποντικούς. Αυτά που συλλέγονται όγκοι απεικονίστηκαν αμέσως μετά τη θυσία.

Στατιστική Ανάλυση

Όλες οι τιμές εκφράζονται σε μέσες τιμές ± τυπική απόκλιση. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με τη χρήση ANOVA ή t τεστ δύο ουρών Student.

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

MiR-124 συχνά κάτω-ρυθμίζονται σε CRC Γραμμές κυττάρων και ιστών

Μια ομάδα των ανθρώπινων κυτταρικών σειρών CRC αναλύθηκε ποσοτικά για να προσδιοριστεί το επίπεδο έκφρασης του miR-124. Σε σύγκριση με το κανονικό βλεννογόνο του κόλου συγκεντρώθηκαν από τρία υγιή άτομα, το επίπεδο έκφρασης του miR-124 ήταν χαμηλότερη στις έξι κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν CRC. (Fig.1A)

(Α) miR-124 εκφράστηκε σε σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα σε έξι κυτταρικές γραμμές CRC σε σύγκριση με την κανονική βλεννογόνο του κόλου συγκεντρώθηκαν από τρία υγιή άτομα. Το σχήμα είναι αντιπροσωπευτικό από τρία πειράματα με παρόμοια αποτελέσματα **

P

& lt?. 0.01, *

P

& lt? 0,05. (Β) Η έκφραση του miR-124 σε ιστούς CRC και τα συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς ανιχνεύθηκε με qRT-PCR και ομαλοποιήθηκε ως προς εκείνη της U6. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μεμονωμένα δείγματα (Ν = 24) με τη γραμμή που δείχνει το μέσο επίπεδο.

Η

Επίσης, εξετάσαμε το επίπεδο έκφρασης του miR-124 σε δείγματα CRC και τα συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς. Σύμφωνα με τα δεδομένα που λαμβάνονται από κυτταρικές σειρές CRC, το μέσο επίπεδο έκφρασης του miR-124 ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε CRC specimenscampared σε γειτονικούς φυσιολογικούς ιστούς (Σχήμα 1Β)

MiR-124 ευαισθητοποιεί τα κύτταρα του καρκίνου του παχέος εντέρου σε Ακτινοθεραπεία

Η δοκιμασία επιβίωσης αποικίας θεωρείται ως κανονικό πρότυπο για τον προσδιορισμό ραδιοευαισθησία [29]. Έτσι, επιδιώξαμε να διερευνήσει τις επιπτώσεις του miR-124 για την επιβίωση της αποικίας των κυττάρων CRC παρουσία της ιονίζουσας ακτινοβολίας. Τα κλωνογονικού αποτελέσματα της ανάλυσης επιβεβαίωσε ότι η υπερέκφραση του miR-124 ήταν πολύ πιο ευαίσθητα σε IR από τους ομολόγους τους (2Α και συμπληρωματικός Πίνακας S2). Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι η ικανότητα των αντι-απόπτωσης των καρκινικών κυττάρων είναι στενά συνδεδεμένη με ραδιοαντοχή. Επιπλέον, μετρήσαμε IR απόπτωση σε κύτταρα CRC που επιμολύνθηκαν με miR-124 μιμείται ή ελέγχου miR. Βρήκαμε ότι όταν συνδυασμό με IR, η υπερέκφραση του miR-124 ενισχύεται σημαντικά την απόπτωση των κυττάρων σε κύτταρα CRC σε σχέση με τους μάρτυρες (Σχήμα 2Β). Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι η θεραπεία miR-124 μόνο μπορεί να μειώσει Bcl-2, και το αποτέλεσμα ήταν πολύ πιο ισχυρή όταν συνδυάζεται με θεραπεία ακτινοβολίας. Από την άλλη πλευρά, η κασπάση-3 και φωσφορυλίωση ιστόνης Η2ΑΧ (γ-Η2ΑΧ) [30], ένας δείκτης της κυτταρικής απόκρισης σε βλάβη του DNA αυξήθηκε όταν τα κύτταρα είτε σε επεξεργασία με miR-124 μόνο του ή υποβάλλονται σε συνδυασμένη θεραπεία του miR -124 και ακτινοθεραπεία (Fig.2C). Στο σύνολό τους, αυτές οι παρατηρήσεις απεικονίζεται μία συνεργική δράση μεταξύ miR-124 αποκατάσταση και IR.

(Α) LOVO και SW480 κύτταρα σταθερώς υπερ-έκφραση του miR-124 υποβλήθηκαν σε αγωγή με 0, 2, 4, 6, ή 8 Gy του IR. κλάσματα επιβίωσης υπολογίστηκαν όπως περιγράφεται στο Σχήμα 2Α. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως το μέσο SD των τιμών που λαμβάνονται σε 3 ανεξάρτητα πειράματα. Η στατιστική σημασία των διαφορών μεταξύ των ομάδων υπολογίσθηκε με τη χρήση Student t τεστ. * P & lt? 0,05. (Β) Δοκιμασία Απόπτωσης δείχνει διέγερση απόπτωσης μετά miR-124 υπερ-έκφραση, ιδίως συνδυασμό με ακτινοβολία σε miR-124-υπερεκφράζεται κυτταρικές σειρές LOVO και SW480. * P & lt? 0,05. (C) Αντιπροσωπευτική Western Blot για την επίδραση του miR-124 υπερ-έκφραση ή /και ακτινοβολία (4Gy) σχετικά με την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με βλάβη απόπτωση και DNA (κασπάση-3, Bcl-2 andγ-Η2ΑΧ).

PRRX1 Υπάρχει άμεσος στόχος του miR-124

Πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση βιοπληροφορικής, χρησιμοποιώντας TargetScan και Pictar και προέβλεψε ότι το miR-124 μπορούν να στοχεύουν την περιοχή PRRX1 3’ΙΙΤΡ. Πράγματι, υπήρξε τέλεια σύζευξη βάσεων μεταξύ της αλληλουχίας του ώριμου σπόρου miR-124 και του 3’UTR του PRRX1 mRNA, και αυτές οι αλληλουχίες σπόρων συντηρημένες μεταξύ των ειδών (Σχήμα 3Α). Για να προσδιοριστεί αν η 3’UTR του PRRX1 mRNA είναι ένα λειτουργικό στόχος του miR-214 σε κύτταρα CRC, η αλληλουχία στόχος του PRRX1 3’UTR (wt 3’UTR) ή την μεταλλαγμένη αλληλουχία (mt 3’UTR) κλωνοποιήθηκαν σε ένα λουσιφεράσης φορέα αναφοράς (3Ε). Στη συνέχεια, τα κύτταρα ΗΕΚ293 διαμολύνθηκαν με ννί ή mt 3’UTR φορέα και miR-124 μιμείται. Τα αποτελέσματα έδειξαν μια σημαντική μείωση της δραστηριότητας της λουσιφεράσης σε σύγκριση με miRNA ελέγχου (Σχήμα 3Ε, λωρίδες 2 και 3? Ρ & lt? 0,05). Η δραστηριότητα του φορέα mt 3’UTR δεν επηρεάστηκε από την ταυτόχρονη επιμόλυνση με miR-124 (Σχήμα 3Ε, λωρίδες 7 και 8) .Τι περισσότερο, συνεπιμόλυνση με αντι-miR124 και wt φορέα 3’UTR σε κύτταρα ΗΕΚ293 οδήγησε σε μια αύξηση της δραστικότητας λουσιφεράσης (Σχήμα 3Ε, λωρίδες 4 και 5? Ρ & lt? 0,05). έκφραση PRRX1 ανιχνεύθηκε από qRT-PCR και Western Blot μετά τη διαφοροποίηση της έκφρασης του miR-124 (Σχήμα 3Β, 3Γ, 3Δ). Στο σύνολό τους, όλα αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν έντονα ότι PRRX1 είναι ο στόχος του miR-124 σε κύτταρα CRC.

(Α) Οι προβλεπόμενες αλληλουχίες πρόσδεσης για miR-124 μέσα στο ανθρώπινο 3’ΙΙΤΡ PRRX1. Οι ακολουθίες σπόρων τόνισε και υπογράμμισε. (Β), (Γ) και έκφραση PRRX1 (D) προσδιορίστηκε σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα σταθερώς υπερεκφράζεται-miR-124 και κύτταρα επιμολυσμένα με miR-124, αναστολείς ή antimiR-con με πραγματικού χρόνου PCR και ανάλυση κηλίδας Western. ANOVA και Student t τεστ χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η στατιστική σημασία των διαφορών μεταξύ των ομάδων. * P & lt? 0,05. (Ε) λουσιφεράσης προσδιορισμούς δραστηριότητα μέσω μιας αναφοράς λουσιφεράσης με άγριου τύπου ή μεταλλαγμένο ανθρώπινο 3’UTRs PRRX1 διεξήχθησαν μετά συν-επιμόλυνση των miR-124 μιμείται ή αναστολείς σε κύτταρα ΗΕΚ293. Και mt 3’UTR έχει σημαντικά αυξημένη συγκριτικά με wt 3’UTR.The παράσταση ράβδου έδειξε την μέση ± SD σε τρία ανεξάρτητα πειράματα μορφομετατροπής. * P & lt?. 0.05

Η

ιδρύθηκαν PRRX1 Νοκ ντάουν Συνεισφέρει ακτινοευαισθησία στο CRC Γραμμές κυττάρων

σταθερές κυτταρικές σειρές με shRNA -PRRX1. Η έκφραση της πρωτεΐνης PRRX1 σε αυτά τα κύτταρα επιβεβαιώθηκε με ανάλυση στυπώματος Western των προϊόντων λύσης κυττάρου με ειδικά αντισώματα (Σχ. 4Α). δοκιμασία επιβίωσης αποικίας διεξήχθη στη συνέχεια. Διαπιστώθηκε ότι οι PRRX1-σιγήσει, επιζών κλάσματα των κυτταρικών αποικιών μειώθηκε πολύ πιο σημαντικά σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, όταν είχαν ακτινοβοληθεί σε διαφορετικές IR δόσεις (Σχ. 4Β και συμπληρωματικό πίνακα S3). δοκιμασία απόπτωσης έδειξαν ότι PRRX1 σίγηση σε συνδυασμό με ακτινοβολία είχε ως αποτέλεσμα πολύ περισσότερο από ό, τι απόπτωση σε περιπτώσεις όπου χρησιμοποιήθηκε μόνο μία θεραπεία (4Γ), υποδεικνύοντας μία συνεργική δράση. δοκιμασία κηλίδος Western έδειξε ότι όταν συνδυάζονται με ακτινοβολία, PRRX1 σίγηση προκάλεσε μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του επιπέδου Bcl-2 αλλά ένα πάνω ρύθμιση της κασπάσης-3 έκφραση andγ-Η2ΑΧ (Εικ. 4D).

(Α ) απόδοση PRRX1 παρεμβολές Western blot αναλύονται σε LOVO και τα κύτταρα SW480 (Β) την ποσοτικοποίηση του αριθμού που σχηματίζεται από τα κύτταρα CRC τα οποία είχαν σταθερά μολυνθεί με φακοϊών άδειο φορέα (έλεγχος shRNA) και φακοϊούς PRRX1-shRNA (PRRX1 shRNA) ή χωρίς βραδέος ιού λοίμωξη ( μη επεξεργασμένα). (Γ) Η δοκιμασία αννεξίνης-ν της απόπτωσης των κυττάρων PRRX1 knockdown σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου * ρ & lt?. 0.05. (Ε) Αντιπρόσωπος Western Blot για την επίδραση της PRRX1 νοκ ντάουν ή /και η ακτινοβολία (4Gy) για τις εκφράσεις των γονιδίων που σχετίζονται με την απόπτωση (κασπάσης-3, Bcl-2 andγ-H2AX).

Η

αναγκαστική έκφρασης της PRRX1 Επαναφέρει τις επιπτώσεις των miR-124 στην ακτινοευαισθησία

για να διευκρινιστεί εάν η επίδραση του miR-124 στην ακτινοευαισθησία επιτεύχθηκε με τη μεσολάβηση καταστολή των PRRX1, pcDNA3.1-PRRX1 μετασκευάστηκε σε miR-124-υπερεκφράζεται κύτταρα. έκφραση PRRX1 επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western (Σχ.5). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι PRRX1could διασώσει τις επιδράσεις των miR-124. Κλωνογονική δοκιμασία και την κυτταρική απόπτωση πρότεινε ότι η έκτοπη έκφραση της PRRX1 μειωθεί σημαντικά miR-124 που προκαλείται ραδιοευαισθησία (ΕΙΚΟΝΑ 5Β και Συμπληρωματική TableS4, Figure.5C). Η ανάλυση στυπώματος Western επίσης υποδεικνύονται PRRX1 θα μπορούσε να αποκαταστήσει την έκφραση της κασπάσης-3 και Bcl-2, η οποία πυροδοτήθηκε από miR-124 (Σχήμα 5D). Αυτές οι παρατηρήσεις έδειξαν ότι το miR-124 ευαισθητοποιημένα κύτταρα σε IR με προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης του PRRX1.

(Α) έκφραση PRRX1 ανιχνεύθηκε με western blot μετά την επιμόλυνση pcDNA3.1-PRRX1 σε miR-124-υπερεκφράζεται κύτταρα. (Β) Τα κύτταρα που ακολουθείται από κατεργασία όπως περιγράφεται στο Σχήμα 2Α. κλάσματα επιβίωσης υπολογίστηκαν για κάθε ομάδα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD των τιμών που λαμβάνονται σε 3 ανεξάρτητα πειράματα. ANOVA ή Student t τεστ χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η στατιστική σημασία των διαφορών μεταξύ των ομάδων. Η στατιστική σημαντικότητα (*

P

& lt? 0,05) ενδείκνυται vs LV-con και η ομάδα του miR-124. (C) Αντιπρόσωπος Western Blot για την επίδραση της αποκατάστασης PRRX1 ή /και η ακτινοβολία (4Gy) για τις εκφράσεις των γονιδίων που σχετίζονται με την απόπτωση (κασπάσης-3, Bcl-2 andγ-H2AX).

Η

έκτοπη PRRX1 αντιστρέφει την έκφραση της EMT και βλαστική ικανότητα που σχετίζονται με γονίδια σε σταθερά miR-124-υπερεκφράζεται κυτταρικές σειρές

σε πρόσφατη έρευνα μελέτες, διαπιστώθηκε ότι PRRX1 προκαλεί EMT και προάγει τον φαινότυπο βλαστική ικανότητα σε κυτταρικές σειρές CRC [27]. Σε πρόσφατες ερευνητικές μελέτες, έχει αναφερθεί ότι EMT συνδέεται με τον καρκίνο βλαστικά κύτταρα. Επιπλέον, η απώλεια της Ε-καδερίνης και η επακόλουθη EMT προωθείται ραδιοαντοχή σε ανθρώπινα κύτταρα όγκου [31] – [33]. Πρόσφατες μελέτες έχουν συνδέσει το φαινότυπο CSC σε καρκινικά κύτταρα υποβάλλονται σε EMT, το οποίο απεικονίζει την περίπλοκη σχέση μεταξύ EMT και ΚΕΠ [34] – [40]. Αναρωτιόμαστε αν miR-124 φέρνει για τον σκοπό αυτό από ρύθμιση προς τα κάτω PRRX1.Thereafter, εμείς επιμολυσμένα pcDNA3.1-PRRX1 σε miR-124-υπερεκφράζεται κυτταρικές σειρές CRC SW480 και LOVO. Ανάλυση κηλίδας Western έδειξε ότι PRRX1 μπορούσε να αναστρέψει την έκφραση της EMT και γονιδίων βλαστική ικανότητα που σχετίζονται προκαλείται από υπερέκφραση του miR-124 (Σχήμα 6).

κηλίδας Western ανέλυσε τα γονίδια EMT που σχετίζονται όπως E-cadherin, ΖΩ -1, βιμεντίνη και Ν-καντερίνης και γονιδίων που σχετίζονται με βλαστική ικανότητα όπως ABCG2, SOX2 και Oct4 σε miR-124-μορφομετατραπέντα κύτταρα και miR-124-PRRX1 συν-επιμολυσμένα κύτταρα σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Δεδομένα προτεινόμενες υπερ-έκφραση του miR-124 θα μπορούσε να ρυθμίζουν προς τα κάτω βιμεντίνης, Ν-cadherin, ABCG2, SOX2 και Oct4 έκφραση και ρυθμίζουν Ε-καδερίνης, ΖΟ-1 έκφραση, ενώ η υπερ-έκφραση του PRRX1 μπορούσε να διασώσει αυτό το αποτέλεσμα.

In vivo ξενομοσχεύματος όγκου Δοκιμασία ακτινοευαισθησία

για να προσδιορίσετε αν το miR-124 ευαισθητοποιεί όγκους σε IR

in vivo

, εμείς ακτινοβολείται η περιοχή του όγκου μόνο μια φορά χρησιμοποιώντας μια δόση 10 Gy 11 ημέρες μετά την ένεση. Παρά που έλαβαν την ίδια δόση της ακτινοβολίας (d11,10Gy) (Σχήμα 7Α, 7Β), το μέγεθος των ξενομοσχευμάτων που προέρχονται από miR-124-υπερεκφράζεται κύτταρα ήταν πολύ μικρότερη από εκείνη που προέρχεται από κύτταρα κατεργασμένα ελέγχου. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι miR-124 προκάλεσε

in vivo

ευαισθητοποίηση των όγκων στην ακτινοβολία.

(Α) Η υπερέκφραση του miR-124 ευαισθητοποιημένα ξενομοσχεύματα SW480 όγκου IR σε βιολογικό περιβάλλον. Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν με παχύμετρο και ακτινοβολία παραδόθηκε σε όγκους περιοχή στην ενδέκατη ημέρα (IR: 10Gy, d11). (Β) Οι καμπύλες όγκου των ξενομοσχευμάτων που παράγεται από LV-con, LV-miR-124, LV-con + ακτινοβολία, LV-miR-124 + ακτινοβολία. (

σ

& lt? 0,05).

Η

Συζήτηση

Σε CRC κλινική διαχείριση, μια επίκτητη και εγγενή ραδιοαντοχή είναι ένα δύσκολο εμπόδιο. Πρέπει να διεξάγουν περισσότερες ερευνητικές μελέτες για την αντιμετώπιση αυτού του δύσκολου προβλήματος. Η απόκτηση της ραδιοαντοχή είναι μια περίπλοκη διαδικασία, που περιλαμβάνει την υπερέκφραση των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA [41], [42], ανώμαλη ενεργοποίηση των πολλαπλών οδών σηματοδότησης [43] – [45], η αγγειογένεση [46], [47], καρκινικά βλαστικά κύτταρα [48], και αυτοφαγία [49], [50]. Αρκετές προηγούμενες έρευνες έχουν δείξει ότι miRNAs ήταν στενά συνδεδεμένη με ραδιοευαισθησία του όγκου. Αυτό συμβαίνει επειδή miRNAs έχουν την ικανότητα να αυξάνει και να μειώνει ραδιοευαισθησία των όγκων [8], [23], [51] – [54]. Δεδομένου ότι miRNAs έχουν την ικανότητα να ρυθμίζουν πολλαπλές ογκογόνες διαδικασίες όπως ανταπόκριση στη θεραπεία, θα πρέπει να διερευνηθεί ο ρόλος των miRNAs στην αντίσταση ακτινοβολίας. Αντοχή σε IR συνέβαλε προκλήσεις θεραπεία ασθενών έπασχαν από CRC. Έτσι, η κατανόηση των μοριακών μηχανισμών στους οποίους ευαισθησία ακτινοβολίας και αντίσταση παραμένει σημαντικό επιδίωξη.

Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι miR-124 ήταν κατιούσα ρύθμιση και στις δύο CRC κυτταρικές γραμμές που παράγονται και κλινικά δείγματα CRC σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Να αποκτήσουν μια εικόνα για τη λειτουργία του miR-124, εκτελέσαμε

in vitro

πειράματα και μελέτες ανθρώπινου ξενομοσχεύματος. Αυτές οι μελέτες κατέδειξαν ότι η υπερέκφραση του miR-124 θα μπορούσε να ραδιοευαισθητοποιεί κύτταρα CRC και miR-124 που προκαλείται νοκ ντάουν αντίσταση των κυττάρων στην ακτινοβολία.

Εντοπίσαμε PRRX1 ήταν άμεσο στόχο του miR-124 με δοκιμασία λουσιφεράσης. Για να αποκαλυφθεί περαιτέρω τις λειτουργίες του PRRX1 στην κυτταρική ραδιοευαισθησία, κατασκευάσαμε σταθερό PRRX1-knockdown κυτταρικές σειρές LOVO και SW480 και διαπίστωσε ότι επάγεται PRRX1 knockdown ευαισθησία των κυττάρων σε ακτινοβολία με τρόπο που είναι παρόμοια με την επίδραση που προκαλείται από την υπερέκφραση του miR-124. Επιπλέον, PRRX1 πάνω ρύθμιση διασώζονται τα αποτελέσματα του miR-124-υπερέκφραση σε ακτινοευαισθησία των κυττάρων. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η επίδραση του miR-124 επί της ευαισθησίας των κυττάρων σε ακτινοβολία εν μέρει μεσολαβείται από την καταστολή της έκφρασης του PRRX1. Όπως έχει ήδη αναφερθεί, PRRX1 προκαλείται από EMT και την ενίσχυση της αυτο-ανανέωση ιδιότητες. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η προς τα πάνω ρύθμιση του miR-124 αυξάνει την έκφραση των επιθηλιακών δεικτών, όπως Ε-καδερίνης και ΖΟ-1, ενώ ταυτόχρονα μειώνεται η έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών όπως Ν-καντερίνης και βιμεντίνης. Επιπλέον, η αυξητική ρύθμιση του miR-124 οδήγησε σε μια ταυτόχρονη μειορρύθμιση στην έκφραση των βλαστική ικανότητα που σχετίζονται με γονίδια, δηλαδή, ABCG2, SOX2, και Oct4. Επιπλέον, η υπερέκφραση του PRRX1 θα μπορούσε να διασώσει την επίδραση του miR-124 επί ΕΜΤ από γενετικές μεταβολές που προκύπτουν. Τον τελευταίο καιρό, έχει αναφερθεί ότι EMT συνδέθηκε με καρκινικά βλαστικά κύτταρα. Επιπλέον, κύτταρα που υφίστανται EMT έδειξαν μεγαλύτερη ραδιοαντοχή σε ανθρώπινα κύτταρα όγκου [26], [31] – [33] Λαμβάνοντας αυτά παρατηρήσεις λήφθηκαν υπόψη, έχουμε υποθέσει ότι miR-124 θα μπορούσε να ραδιοευαισθητοποιεί κύτταρα CRC με προς τα κάτω ρύθμιση PRRX1, η οποία συνδέεται με EMT και τον καρκίνο βλαστοκύτταρα. Ωστόσο, όλες αυτές οι παρατηρήσεις θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω και να επαληθεύονται μέσω πιο ερευνητικές εργασίες. Ερευνήσαμε το ρόλο του miR-124 στη ρύθμιση ακτινοευαισθησία, η οποία μπορεί να επηρεάσει σημαντικά την βιολογία του καρκίνου και τη θεραπεία του καρκίνου. Με βάση αυτές τις παρατηρήσεις, υποθέσαμε ότι η προς τα κάτω ρύθμιση των PRRX1 αντιστραφεί EMT και ταυτόχρονα αποδυνάμωσε τις ιδιότητες αυτο-ανανέωση των κυττάρων, τα οποία συνδέονται στενά με radioresistence.

Εν κατακλείδι, θα παρέχουν αποδείξεις ότι το miR-124 ευαισθητοποιεί CRC κύτταρα για τη θεραπεία ακτινοβολίας αναστέλλοντας PRRX1. Αυτό δείχνει ότι miR-124 είναι μια ελκυστική προγνωστικός /προγνωστική βιοδεικτών, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί στη διάγνωση περιπτώσεις CRC. Επιπλέον, έχουμε αναπτύξει μια νέα προσέγγιση για την ευαισθητοποίηση ακτινοανθεκτικά καρκίνους στοχεύοντας miR-124.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Αστάρια για το miR-124 και PRRX1 ποσοτικοποίηση

doi:. 10.1371 /journal.pone.0093917.s001

(DOC)

Πίνακας S2. παραμέτρους

ραδιοευαισθησία μετά από υπερέκφραση του miR-124

doi:. 10.1371 /journal.pone.0093917.s002

(DOC)

Πίνακα S3. παραμέτρους

ακτινοευαισθησία μετά PRRX1 νοκ ντάουν

doi:. 10.1371 /journal.pone.0093917.s003

(DOC)

Πίνακας S4. παραμέτρους

ραδιοευαισθησία μετά από υπερέκφραση του PRRX1 στο miR-124-υπερεκφράζεται κυτταρικές σειρές

doi:. 10.1371 /journal.pone.0093917.s004

(DOC)