Abstract

γλυοξαλάσης Ι (GLO1), ένα ένζυμο methylglyoxal αποτοξίνωσης, εμπλέκεται στην εξέλιξη των ανθρώπινων κακοηθειών. Ο ρόλος των GLO1 στο γαστρικό ανάπτυξη ή την πρόοδο του καρκίνου είναι παρόν ασαφές. Η έκφραση του GLO1 προσδιορίστηκε σε πρωτογενή γαστρικού δείγματα καρκίνου χρησιμοποιώντας ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, ανοσοϊστοχημεία (IHC), και αναλύσεις western αποτύπωση. έκφραση GLO1 ήταν υψηλότερη σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς, σε σύγκριση με εκείνη σε παρακείμενες noncancerous ιστούς. Αυξημένα έκφραση GLO1 συσχετίστηκε σημαντικά με γαστρικό εισβολή τοίχο, λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, και παθολογικές στάδιο, γεγονός που υποδηλώνει μια νέα ρόλος του GLO1 σε γαστρικό ανάπτυξη και την εξέλιξη του καρκίνου. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών των κατώτερων ομάδων έκφρασης GLO1 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη των υψηλότερων ομάδες έκφρασης (log rank

P

= 0,0373) σε πειράματα IHC. Υπερ-έκφραση του GLO1 σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου αυξάνει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και διεισδυτικότητα. Αντίθετα, προς τα κάτω ρύθμιση των GLO1 με shRNA οδήγησε σε σημαντική μείωση των δυνατοτήτων της μετανάστευσης και της εισβολής. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν έντονα ότι η υψηλή έκφραση του GLO1 σε γαστρικό καρκίνο ενισχύει την ικανότητα μετάστασης των καρκινικών κυττάρων

in vitro

και

in vivo

, και υποστηρίζουν την αποτελεσματικότητα της ως δυνητικού δείκτη για την ανίχνευση και την πρόγνωση του καρκίνου του στομάχου

Παράθεση:. Cheng WL, Tsai MM, Tsai CY, Huang YH, Chen CY, Τσι HC, et al. (2012) γλυοξαλάσης-Ι είναι ένα μυθιστόρημα πρόγνωση παράγοντας που σχετίζεται με γαστρικός καρκίνος Εξέλιξη. PLoS ONE 7 (3): e34352. doi: 10.1371 /journal.pone.0034352

Επιμέλεια: DunFa Peng, Πανεπιστήμιο Vanderbilt Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8η, Δεκεμβρίου 2011? Αποδεκτές: 27 Φεβ 2012? Δημοσιεύθηκε: 29 Μαρ 2012

Copyright: © 2012 Cheng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Πανεπιστήμιο του Chang-Gung, Taoyuan, Ταϊβάν (NMRPD 150311, NMRPD170441-42, CMRPG 640042-43, CMRPG 670.291 – 93) και το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Δημοκρατίας της Κίνας (NSC 95 έως 2.314-B-182 -027, 97-2314-Β-182-009-MY2, 99 με 2.314-B-182-022). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι η τέταρτη πιο κοινή μορφή καρκίνου και η δεύτερη μεγαλύτερη αιτία θνησιμότητας του καρκίνου που σχετίζονται με όλο τον κόσμο [1]. Η κακοήθεια είναι η έκτη κύρια αιτία των θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο στην Ταϊβάν [2]. Η σωστή διαλογή μπορεί να διευκολύνουν την ανίχνευση καρκίνου του στομάχου πριν από την ανάπτυξη των συμπτωμάτων σε ένα σκληρυνόμενο στάδιο [3]. Προσδιορισμός των προφίλ έκφρασης των βασικών μορίων στις διάφορες οδούς που εμπλέκονται στην εξέλιξη του καρκίνου του γαστρικού μπορεί να βοηθήσει στη διάγνωση, την πρόγνωση και την πρόβλεψη της εξέλιξης του όγκου.

Tumor εισβολή και μετάσταση είναι ζωτικής σημασίας βήματα για τον προσδιορισμό της επιθετικής φαινότυπο ανθρώπινων καρκίνων και αποτελούν τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο σχετίζονται [4]. Υψηλή έκφραση των παραγόντων σχετικά με τη μετανάστευση, όπως κυκλοοξυγενάσης 2 (COX-2) [5], αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) [6], CXC χημειοκίνη συνδέτη (CXCL) -8 [7], χημειοκίνης (CXC μοτίβο) των υποδοχέων (CXCR) -2, και CXCL-1 [8], συνδέονται με γαστρικό εξέλιξη του καρκίνου. Αρκετές δυναμικό ογκογόνο οδούς (πολλαπλασιασμός /βλαστικών κυττάρων, ΝΡ-κΒ, και Wnt /β-κατενίνης) απελευθερωμένη στην πλειονότητα των γαστρικών καρκίνων [9]. Έτσι, η περαιτέρω αποσαφήνιση των ακριβών μοριακών γεγονότων που οδηγούν σε γαστρικό εξέλιξης του καρκίνου και την ταυτοποίηση των πολύτιμων διαγνωστικούς ή προγνωστικούς δείκτες και νέες θεραπευτικές στρατηγικές θα είναι σημαντικής κλινικής αξίας.

γλυοξαλάσης Ι (ονομάζεται επίσης GLO1) αποτελεί βασική συνιστώσα σε οδούς που οδηγούν στην αποτοξίνωση του Methylglyoxal (MG), μία από τις πλευρικές προϊόντων της γλυκόλυσης [10], [11], [12]. GLO1 έκφραση είναι αυξημένη σε αρκετούς ανθρώπινους καρκίνους του παχέος εντέρου, του μαστού, του προστάτη, και μελανώματος [13], [14], [15], [16], [17]. Πρόσφατες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η υπερ-έκφραση του GLO1 σχετίζεται με την εξέλιξη του καρκίνου και της αντίστασης στα φάρμακα [17]. Από τα προηγούμενα δεδομένα μας, GLO1 αυξητική ρύθμιση παρατηρήθηκε στα γαστρικά δείγματα καρκίνου χρησιμοποιώντας cDNA μικροσυστοιχιών [18]. Ωστόσο, ο ειδικός ρόλος των GLO1 κατά τη διάρκεια της γαστρικής ογκογένεσης και η κλινική σημασία του παραμένει να καθοριστεί.

Τα πειράματά μας δείχνουν σαφώς ότι GLO1 είναι συχνά υπερεκφράζεται σε καρκίνο του στομάχου και συνδέεται με τη μετάσταση του καρκίνου. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η έκφραση του GLO1 είναι σημαντικά υψηλότερη σε προχωρημένα στάδια του καρκίνου του στομάχου. Επιπλέον, οι μεταβολές της έκφρασης GLO1 σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου επηρεάζει τη μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή ικανότητες.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Ιατρική Ηθική και ανθρώπινη κλινική δοκιμή Επιτροπής του Chang Gung Memorial Hospital (IRB ΟΧΙ. 95-0472B). Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς

Θέματα

Οι 114 ασθενείς (64 άνδρες και 50 γυναίκες? Διάμεση ηλικία, 66 ετών? Εύρος 28 έως 86 ετών). Διαγνωστεί με καρκίνο του στομάχου κατά τη Chang Gung Memorial Hospital 2000-2005 είχαν εγγραφεί στη μελέτη αυτή. Όλοι οι ασθενείς έλαβαν χειρουργική για πρωτογενή καρκίνο του στομάχου χωρίς προηγούμενη χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία. Κάθε ασθενής υποβλήθηκε σε γαστρική εκτομή (35 ασθενείς υποβλήθηκαν σε ολική γαστρεκτομή και 79 μερική γαστρεκτομή).

κλινικοπαθολογοανατομικές μελέτες

διαχωρισμένοι δείγματα που εξετάστηκαν παθολογικά με βάση τα κριτήρια των Ιαπώνων γενικούς κανόνες για Γαστρικό Μελέτης του Καρκίνου [19] και η αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC) σύστημα (pTNM) ταξινόμησης [20]. Κλινικοπαθολογικών παραμέτρων περιλαμβάνονται η ηλικία του ασθενούς και το φύλο, την τοποθεσία και το μέγεθος του όγκου, το ακαθάριστο (Borrmann του) τον τύπο του όγκου, την εισβολή τοίχο, το περιθώριο εκτομή, ιστολογικό τύπο, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, αγγειακή εισβολή, λεμφική εισβολή, και περινευρικό εισβολή. Μετά την απαλλαγή, όλοι οι ασθενείς είχαν περιοδικές επισκέψεις παρακολούθησης στα εξωτερικά ιατρεία του Chang Gung Memorial Hospital μέχρι το θάνατο ή την έναρξη της προετοιμασίας αυτού του άρθρου.

Σε πραγματικό χρόνο ποσοτικής αλυσιδωτής πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής αντίδραση (qRT-PCR )

qRT-PCR διεξήχθη όπως περιγράφεται σε προηγούμενη έκθεση [21]. Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν: ανθρώπινη

GLO1

qRT-PCR (προς τα εμπρός εναρκτήρας, 5′-TGAGGATAAAAATGACATCCCTA- AAGA-3 ‘, και αντίστροφος εκκινητής, 5′-TGTGTCAGCTCAAGTGTAGCTTTC-3′), ανθρώπινο 18S rRNA qRT-PCR (εμπρόσθιος εκκινητής, 5’-CGAGCCGCCTGGATACC-3 ‘, και αντίστροφος εκκινητής, 5′-CCTCAGTT CCGAAAACCAACAA-3’).

Παραγωγή αντι-GLO1 αντίσωμα

Το cDNA που κωδικοποιεί πλήρους μήκους

GLO1

κλωνοποιήθηκε σε pGEX-4Τ1. Προϊόντα λύσης από

Ε. coli στέλεχος BL21

καθαρίστηκαν με σφαιρίδια γλουταθειόνης-αγαρόζης (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ). Οι διαλυτές πρωτεΐνες καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας χρωματογραφία με σφαιρίδια γλουταθειόνης-αγαρόζης, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, γαλακτωματοποιήθηκε με ανοσοενισχυτικό, και χρησιμοποιήθηκε για να ανοσοποιήσει κουνέλια. Πολυκλωνικά αντισώματα παρήχθησαν και καθαρισμένο με συγγένεια, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Η ιδιαιτερότητα των in-house GLO1 επικυρώθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση western blot (Σχήμα S1).

ανοσοκηλίδας ανάλυση

λύματα ολόκληρων κυττάρων, τα πυρηνικά εκχυλίσματα, και τα μέσα ενημέρωσης υπό όρους παρασκευάστηκαν από ανθρώπινο ιστό ή σταθερό GLO1 knockdown κυτταρικές γραμμές. Κηλίδωση Western πραγματοποιήθηκε με την χρησιμοποίηση μονοκλωνικών αντισωμάτων κατά της ανθρώπινης HIF-1α (Abcam, San Francisco, CA), ρ65 (Epitomic, Burlingame, CA), ή ρ50 (Millipore, Billerica, ΜΑ) ή πολυκλωνικά αντισώματα κατά της ανθρώπινης GLO1 (in-house, αραίωση, 1:500), CXCL1 (PeproTech Inc., Rocky Hill, NJ), CXCL8 (R &?.. D Systems Inc., Minneapolis, MN), VEGF (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

φορμαλίνη σταθερών και εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστοί εξετάστηκαν με IHC χρησιμοποιώντας το πολυκλωνικό αντίσωμα εναντίον ανθρώπινου GLO1 παράγονται εσωτερικά (αραίωση, 1:3000) και το σύμπλοκο αβιδίνης-βιοτίνης (ABC ) μέθοδος, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23], [24]. Οι συγκρίσεις έγιναν μεταξύ της έντασης της χρώσης των καρκινικών κυττάρων και καλοήθεις επιφανειακό επιθήλιο, τα οποία τοποθετήθηκαν στην ίδια διαφάνεια. Για ημι-ποσοτική ανάλυση της GLO-1 ανοσολογική αντίδραση, ένα Histoscore (H) -scoring σύστημα χρησιμοποιήθηκε [25]. Εν συντομία, η αρνητική ομάδα αποτελούνταν από τα καρκινικά κύτταρα με καμία ανιχνεύσιμη (-) ή μόνο ίχνη χρώση για GLO-1 (1). Η θετική ομάδα αποτελούνταν από τα καρκινικά κύτταρα με μέτρια (2) ή υψηλά επίπεδα (3) της GLO-1 ανοσολογική αντίδραση. Το H-βαθμολόγησης υπολογίστηκε ο μέσος όρος και από δύο ανεξάρτητους παθολόγους, τυφλωμένο στην αρχική βαθμολογία για κάθε ασθενή. Τα αποτελέσματα βαθμολογήθηκαν με πολλαπλασιασμό του ποσοστού των θετικών κυττάρων (Ρ) από την ένταση (Ι), σύμφωνα με τον τύπο: H = P × Ι. Για παράδειγμα, ένα τμήμα στο οποίο το 10% του ιστού είχαν βαθμολογία χρώση 1, 60% βαθμολογία 2, και το 30% μία βαθμολογία 3, H = (10 χ 1) + (60 χ 2) + (30 × 3) = 220.

Ίδρυση GLO1 υπερ-έκφραση σε κυτταρική σειρά SC-M1

χρησιμοποιήθηκε η κυτταρική σειρά SC-M1 εκφράζουν χαμηλότερο επίπεδο GLO1. Η επιμόλυνση

GLO1

cDNA διεξήχθη με αντιδραστήριο Lipofectamine (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ). Μετά από επώαση για 24 ώρες, τα κύτταρα μεταφέρθηκαν σε μέσο που περιέχει G418 για την επιλογή, και στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν σε πολλαπλασιασμό, μετανάστευση, και προσδιορισμούς εισβολής.

Καθιέρωση GLO1 knockdown σε κυτταρικές γραμμές TSGH και AGS

δύο ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, AGS, και TSGH, χρησιμοποιήθηκαν. Οι μικρές αλληλουχίες RNA φουρκέτας (shRNA) που στοχεύουν

GLO1

(TRCN0000118630 ​​και TRCN0000118631) αγοράστηκαν από την παρεμβολή Πυρήνας Εθνικού Μηχανισμού RNA (Ινστιτούτο Μοριακής Βιολογίας, Academia Sinica, Ταϊβάν). Η ειδική καταστολή της GLO1 επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος western.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δοκιμασία

Κύτταρα (1 χ 10

4) αναπτύχθηκαν σε μια πλάκα 6 cm στους 37 ° C υπό 5 % CO

2. Σε κάθε χρονικό σημείο, ο ρυθμός ανάπτυξης των κυττάρων προσδιορίστηκε με μέτρηση των κυττάρων. Τα αποτελέσματα δίδονται ως πολλαπλάσια μεταβολή σε σχέση με κάθε τιμή ελέγχου.

In vitro

δοκιμασία της μετανάστευσης και επεμβατική δραστηριότητα

Η επίδραση της εξάντλησης GLO1 ή υπερ-έκφραση σε η μετανάστευση και επεμβατική δραστηριότητα των κυτταρικών γραμμών γαστρικού καρκίνου αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μία ταχεία

in vitro

δοκιμασία (τεχνική Transwell), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

προετοιμασία του RNA και ανάλυση μικροσυστοιχιών

Ο GLO1-σιγήσει κλώνος TSGH (KG2) και κυττάρων ελέγχου κλώνος (C1) ξεπλύθηκαν σύντομα με παγωμένο PBS και λύθηκαν σε αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen) για εξαγωγή RNA. της έκφρασης των γονιδίων μεταξύ των κυττάρων KG2 και Γ1 αναλύθηκαν με το ανθρώπινο U133A GeneChip (Affymetrix, Santa Clara, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή [27].

Η στατιστική ανάλυση

Οι εκφράσεις GLO1 της κάθε υποομάδα clinicopatholgoical παραμέτρων στον πίνακα 1 εκφράζονται ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση (SD) της βαθμολογίας IHC των ασθενών σε αυτή την υποομάδα. Η δοκιμασία Kolmogorov-Smirnov είναι ένα μη παραμετρικό τεστ για να συγκρίνουν τα δείγματα με μια κατανομή πιθανότητας αναφοράς. Ανάλογα με την περίπτωση, ο Mann-Whitney U ή ακριβές τεστ του Fisher εφαρμόστηκε για τις συγκρίσεις μεταξύ των δύο ομάδων, ενώ chi-square test Kruskal-Wallis ή Pearson χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνετε περισσότερα από δύο ομάδες. Η σχέση μεταξύ των δεδομένων που λαμβάνονται από τις δύο διαφορετικές εξετάσεις αναλύθηκε με τη μέθοδο συσχέτισης του Spearman του. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν μέχρι τη στιγμή της προετοιμασίας χειρόγραφο ή θανάτου. Ειδική για τον καρκίνο αποτέλεσμα την επιβίωση προσδιορίστηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier για όλους τους ασθενείς, εκτός από εκείνους που έχασαν τη ζωή τους από χειρουργικές επιπλοκές. Η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθεί η προγνωστική σημασία των μεμονωμένων μεταβλητών στην επιβίωση. Η Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων που απασχολούνται σε πολυπαραγοντική ανάλυση για τον προσδιορισμό των ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες της επιβίωσης.

P

τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές

Η

Τα αποτελέσματα

επίπεδα GLO1 mRNA και η πρωτεΐνη υπερεκφράζεται σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου

Χρησιμοποιώντας cDNA μικροσυστοιχίας, έχουμε εντοπίσει αρκετές ρυθμίζεται αυξητικά γονίδια από γαστρικό ιστούς, σε σύγκριση με παρακείμενες nontumorous ιστούς [18]. Μεταξύ αυτών των γονιδίων, εστιάσαμε στην

GLO1

ως μοριακός στόχος για καρκίνο του στομάχου. Η έκφραση του GLO1 μετρήθηκε σε καρκινικούς ιστούς, και σε σύγκριση με εκείνη σε συμφωνημένα nontumorous γαστρικό βλεννογόνο, με χρήση qRT-PCR (n = 89) (Πίνακας 2) ή IHC (n = 114) (Πίνακας 1). Δεδομένα από πειράματα qRT-PCR αποκάλυψε GLO1 υπερέκφραση (≥1.5 φορές) σε 51 (57,3%) του γαστρικού καρκινικών ιστών, σε σύγκριση με noncancerous ιστούς. Η μέση GLO1 έκφραση σε ιστούς όγκων ήταν 2,87 φορές ότι σε noncancerous ιστούς. Τα αποτελέσματά μας επιβεβαίωσαν μια σημαντική αύξηση στην έκφραση GLO1 σε ιστούς όγκων (

P

= 0,005, ένα δείγμα Kolmogorov-Smirnov test).

Η

Η έκφραση της πρωτεΐνης GLO1 σε ζεύγη δειγμάτων ήταν ακόμη αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western. Σχήμα 1Α παρουσιάζει την έκφραση GLO1 σε οκτώ ασθενείς αντιπρόσωπο. Ίσες ποσότητες ολικών πρωτεϊνών βάφονται με Coomassie blue μετά SDS-PAGE χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος φόρτωσης. Όλοι οι ιστοί του καρκίνου από γαστρικό καρκίνο δείγματα (G1 στην G8) εμφανίζεται υπερέκφραση GLO1, σε σύγκριση με συμφωνημένα noncancerous παρακείμενο βλεννογόνο (Εικ. 1Α).

Η υπερέκφραση της GLO1 πρωτεΐνης σε γαστρικό καρκίνωμα. (Α) Western στύπωμα καταδεικνύοντας την παρουσία GLO1 πρωτεΐνης σε καρκινικούς ιστούς. GLO1 πρωτεΐνες υπερεκφράζονται στους περισσότερους ιστούς όγκου (Τ), σε σύγκριση με συμφωνημένα noncancerous παρακείμενο βλεννογόνο (Ν). Όλοι οι ιστοί του καρκίνου από γαστρικό καρκίνο δείγματα (G1 στην G8) εμφανίζεται προς τα πάνω ρύθμιση της GLO1, σε σύγκριση με συμφωνημένα noncancerous παρακείμενο βλεννογόνο. Μια ισοδύναμη ποσότητα (30 μα) πρωτεΐνης φορτώθηκε για κάθε δείγμα και υποβλήθηκαν σε 12% SDS-PAGE, που ακολουθήθηκε από χρώση με Coomassie blue ως μάρτυρας φόρτωσης. Κουνέλι πολυκλωνικό αντίσωμα κατά της ανθρώπινης GLO1 παράγονται in-house χρησιμοποιήθηκε. (Β) Panels Α, C, E, και ζ απεικονίζουν noncancerous βλεννογόνο, ενώ πάνελ b, d, f και h απεικονίζουν γαστρικού καρκινικούς ιστούς. Θετική χρώση για GLO1 υποδεικνύεται ως ένα σκούρο-καφέ χρώμα. έκφραση GLO1 παρατηρήθηκε κυρίως σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα και σπάνια σε στρωματικά κύτταρα. μπαρ κλίμακας αντιπροσωπεύει 100 μm.

Η

Ανοσοβαφή αποδεικνύει GLO1 πρωτεΐνη υπερ-έκφραση σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς

Για να καθορίσει περαιτέρω εάν GLO1 ρύθμιση προς τα άνω συσχετίζεται με την κλινική εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου, IHC διεξήχθη σε παραφίνη σταθερό γαστρικό καρκινικούς ιστούς και συμφωνημένα noncancerous βλεννογόνο των 114 ασθενών. Τέσσερα ζεύγη αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις (a /b, c /d, e /f και g /h) που φαίνεται στο Σχήμα 1Β. δεδομένα IHC για noncancerous ομολόγους βλεννογόνο (a, c, e, και ζ) και καρκινικούς ιστούς (b, d, f και h) συγκρίθηκαν κατά ζεύγη. Σκούρο καφέ ανοσοχρώση ήταν ως επί το πλείστον επικρατεί στα καρκινικά κύτταρα, ενώ τα επίπεδα της χρώσης ήταν χαμηλότερη σε στρωματικά κύτταρα ή ινοβλάστες του γαστρικού καρκινικούς ιστούς. Ισχυρή χρώση για GLO1 ήταν συχνά παρατηρείται σε προχωρημένο γαστρικό κύτταρα όγκου, σε αντίθεση με ασθενή ή καθόλου χρώση σε φυσιολογικά γαστρικά επιθηλιακά κύτταρα (Σχ. 1Β, άνω πίνακας). Χρώση ήταν πιο έντονη στις προχωρημένο γαστρικό καρκίνο στάδια [σταδίου ΙΙΙ στο Σχ. 1Β (f, h)], σε σύγκριση με τα στάδια Ι [Σχ. 1Β (β)] και II [Σχ. 1Β (δ)]. Μεταξύ των 114 ασθενών που αναλύθηκαν, η μέση βαθμολογία IHC σε ιστούς όγκων ήταν 139,8 ± 62,8, η οποία ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη (36,7 ± 40,4) σε αντιστοίχιση παρακείμενο βλεννογόνο (n = 87) (

P

& lt? 0.001 , Wilcoxon signed-rank test). Περαιτέρω, ζεύγη σύγκριση της ανοσοδραστικότητας για GLO1 (n = 87) αποκάλυψε ότι τα IHC βαθμολογίες των καρκινικών ιστών ήταν υψηλότερες από εκείνες των nontumorous ομολόγων σε 77 (88,5%) ασθενείς, ίση σε τρεις ασθενείς (3,4%), και χαμηλότερο σε επτά ασθενείς (8,0%).

έκφραση GLO1 και κλινικές συσχετίσεις

GLO1 έκφραση σε καρκινικό ιστό δεν συσχετίστηκε σημαντικά με την ηλικία, την τοποθεσία του όγκου ή ιστολογικό τύπο (πίνακες 1 και 2). Υψηλότερα επίπεδα GLO1 ήταν εμφανής στις ομάδες Τ3 /Τ4, όπου η επιφάνεια του χορίου του γαστρικού τοιχώματος εισέβαλαν από τον καρκίνο, σε σύγκριση με εκείνη σε ομάδες /T2 T1 όπου δεν υπάρχει εισβολή ήταν εμφανής (

P

= 0,015 για qRT – PCR και

P

= 0,001 για IHC? σχήμα 2Α? πίνακες 1 και 2).. Η έκφραση του GLO1 ήταν σημαντικά αυξημένη, με μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0,001 για qRT-PCR και

P

& lt? 0,001 για IHC? Εικ. 2Β? Πίνακες 1 και 2) . Υψηλότερες έκφραση ήταν εμφανής σε ασθενείς με λεμφικό εισβολή (

P

= 0.001 και

P

= 0,016 για qRT-PCR και IHC αντίστοιχα? Πίνακες 1 και 2) και περινευρικό εισβολή (

P

= 0,024 για qRT-PCR, Πίνακας 2). Αυξημένη έκφραση GLO1 δεν συσχετίστηκε με αγγειακή εισβολή ή απομακρυσμένη μετάσταση, συμπεριλαμβανομένων περιτοναϊκή σπορά ή μετάσταση ήπατος, και στα δύο πειράματα qRT-PCR και IHC. Η έκφραση του GLO1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς με πιο προχωρημένα στάδια παθολογική (III /IV) του γαστρικού καρκίνου, σε σύγκριση με εκείνα στις προηγούμενες παθολογικές στάδια (Ι /ΙΙ) (

P

= 0.001 και

P

& lt? 0,001 για qRT-PCR και IHC, αντιστοίχως) (Σχήμα 2C?. Οι πίνακες 1 και 2)

(Α) διάγραμμα διασποράς ανάλογα με το βάθος της εισβολής τοιχώματος (

P

= 0,001, T1 /T2 vs. T3 /T4). (Β) οικόπεδο διασποράς σύμφωνα με μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

& lt? 0.001, N0 έναντι Ν1-3). οικόπεδο (Γ) διασποράς σύμφωνα με παθολογικό στάδιο (

P

& lt? 0.001, στάδια I /II σε σχέση με τα στάδια III /IV). Καμπύλες επιβίωσης (D) Kaplan-Meir των δύο ομάδων των ασθενών με γαστρικό καρκίνο ορίζεται από μια έκφραση GLO1 αξίας επίπεδο αποκοπής των 90, η οποία συστάθηκε βάσει του IHC βαθμολόγησης. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών των κατώτερων ομάδων έκφρασης (n = 24) ήταν σημαντικά καλύτερη από εκείνη των υψηλότερων ομάδες έκφρασης (n = 90? 69,6% έναντι 43,3%? Log rank

P

= 0,0373) .

Η

επιβίωση αποτελέσματα

Η μέση διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης για 52 επιζώντες ήταν 70,4 μήνες (εύρος, 28 – 119 μήνες). Τέσσερις ασθενείς πέθαναν από μετεγχειρητικές επιπλοκές και έξι από άλλες αιτίες. Πενήντα-δύο ασθενείς πέθαναν εξαιτίας του γαστρικού εξέλιξης του καρκίνου. Το συνολικό σωρευτικό ποσοστό πενταετούς επιβίωσης των 114 ασθενών ήταν 49,3% μετά από γαστρεκτομή. Για να προσδιοριστεί η επίδραση της έκφρασης GLO1 στην έκβαση της επιβίωσης, ο ασθενής χωρίστηκε σε δύο ομάδες, υψηλότερη και χαμηλότερη εκφράσεις, ανάλογα με την τιμή αποκοπής που θα καταδεικνύουν μια σημαντική διαφορά (log rank

P

& lt? 0,05) σε ποσοστά επιβίωσης μεταξύ 2 ομάδων. Η διάμεση τιμή (= 140), ανώτερο τεταρτημόριο (= 180 ή 75

ο εκατοστημόριο), και χαμηλότερο τεταρτημόριο (= 90 ή 25

ο εκατοστημόριο) της IHC βαθμολογίες των ασθενών μας είχαν αρχικά δοκιμάστηκε για τον προσδιορισμό των τιμών αποκοπής. Μεταξύ αυτών, μόνο το κάτω τεταρτημόριο θα μπορούσαν να δείχνουν μια σημαντική διαφορά στην έκβαση επιβίωσης. Σύκο. 2D απεικονίζει τις αθροιστικές καμπύλες επιβίωσης των ασθενών στις χαμηλότερες και υψηλότερες ομάδες GLO1 έκφραση, χωρίζονται ανάλογα με αποκοπή σκορ IHC των 90. Το ποσοστό επιβίωσης 5-ετών των ομάδων έκφρασης κάτω GLO1 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη των υψηλότερων ομάδων έκφρασης ( 69,6% έναντι 43,3%? log rank

P

= 0,0373) σε πειράματα IHC. Μονοπαραγοντική ανάλυση αποκαλύπτεται μια σειρά σημαντικών προγνωστικών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένου του καθεστώτος της μετάστασης λεμφαδένα, απομακρυσμένη μετάσταση, περιτοναϊκή σπορά, αγγειακή εισβολή, λεμφικό εισβολή, το βάθος της εισβολής, παθολογική στάδιο, μετάσταση ήπατος και περινευρικό εισβολή, εκτός από GLO1 έκφρασης. Άλλες σημαντικές παράμετροι ήταν ιστολογικό τύπο, το μέγεθος του όγκου, και το ακαθάριστο τύπου (Πίνακας 1). Περαιτέρω, στην πολυπαραγοντική ανάλυση, οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες που επηρεάζουν την επιβίωση των ασθενών συμπεριελάμβανε λεμφαδένα μετάσταση (σχετικός κίνδυνος = 5,954, 95% CI = 1,183 έως 29,977,

P

= 0,031) και μακρινή μετάσταση (σχετικός κίνδυνος = 2.464, 95% CI = 1,030 – 5,896,

P

= 0,043).

Υπερ-έκφραση της GLO1 στο SC-M1 ενισχύει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή των δραστηριοτήτων.

Για να προσδιοριστούν τα αποτελέσματα της υπερ-έκφραση του

GLO1

σε κύτταρα SC-Μ1, κυτταρικό πολλαπλασιασμό, μετανάστευση, και οι δραστηριότητες εισβολή προσδιορίστηκαν. Μετά από δύο εβδομάδες μετασκευής, ιδρύθηκε σταθερή έκφραση του GLO1 πρωτεΐνης. Το Σχήμα 3Α δείχνει 2,36 φορές και 2,29 φορές υψηλότερη έκφραση GLO1, αντίστοιχα. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε με μέτρηση των κυττάρων και υποδεικνύεται ως πτυχή του ελέγχου για μέχρι πέντε ημέρες.

GLO1

κύτταρα που υπερεκφράζουν εμφάνισαν σημαντικά (

P

& lt? 0,01) υψηλότερες ταχύτητες πολλαπλασιασμού (1.86- 2.06 ή-φορές) από εκείνα που επιμολύνθηκαν με φορέα μάρτυρα την ημέρα 5 (σχήμα 3Β).. Επιπλέον,

GLO1

κύτταρα που υπερεκφράζουν εμφανίζεται σημαντικά (

P

& lt? 0,01) υψηλότερα ποσοστά μετανάστευσης (5.53- ή 4,57 φορές) και επεμβατική ικανότητες (3.7- ή 3,47 φορές) από τους ομολόγους ελέγχου (Σχ. 3C και D). Εικόνες πυκνότητα των κυττάρων δείχθηκαν για δύο ελέγχου και δύο υπερεκφράζουν κυτταρικές γραμμές (αριστερά πάνελ στα Σχ. 3C και D).

Δύο SC-Μ1-GLO1 υπερέκφραση κλώνοι (OG1 και OG2), και ιδρύθηκαν δύο κυτταρικές σειρές ελέγχου (C1, C2). (Α) Εκφραση GLO1 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος. (Β) Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων, (Γ) Μετανάστευση, και (Δ) ικανότητες εισβολή προσδιορίστηκαν όπως περιγράφεται στο «Υλικά και Μέθοδοι». Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως πτυχώσεις από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν σε διπλότυπο. Οι αλλαγές αναδίπλωσης (Β-D), και οι διαφορές που εξετάστηκαν με τη μέθοδο Mann-Whitney U να συγκρίνει τις τιμές με τον έλεγχο φορέα. **

P

& lt?. 0.05

Η

Down-έκφραση GLO1 σε TSGH ή AGS κύτταρα μειώνει τη μετανάστευση κυττάρων και εισβολή δραστηριότητες

Τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν την υψηλή έκφραση του GLO1 σε προχωρημένο γαστρικό καρκίνο, συγκριτικά με μη καρκινικό γαστρικό βλεννογόνο. Για να καθοριστεί εάν η έκφραση GLO1 συσχετίζεται με τη διεισδυτικότητα του γαστρικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, εκτιμήθηκαν τα αποτελέσματα της εξάντλησης GLO1 χρησιμοποιώντας μικρή φουρκέτα (sh) RNA πλασμίδια σχετικά με τις δραστηριότητες των κυττάρων του όγκου εισβολή TSGH ή AGS κύτταρα. ShRNA φορείς έκφρασης που κωδικοποιεί την αλληλουχία αντινόημα GLO1 επιμολύνθηκαν σε κυτταρικές σειρές TSGH και AGS που εκφράζουν υψηλά επίπεδα ενδογενούς GLO1. έκφραση GLO1 ήταν σημαντικά κατασταλεί σε TSGH-KG1, -KG2 (0.32- 0.14 και φορές) και AGS-KS1, -KS2 (0.26- 0.21 και φορές) υποσειρές, αντίστοιχα, σε σύγκριση με εκείνη σε κύτταρα επιμολυσμένα με τους φορείς ελέγχου ( C1, C2? Τα Σχ. 4Α και Β). KG1 και KG2 GLO1 εξαντλημένο κύτταρα εμφάνισαν σημαντικά (

P

& lt? 0,05) μειωμένα ποσοστά μετανάστευσης (0.16- ή 0.044 φορές, αντίστοιχα) και τις ικανότητες εισβολής (0.43- ή 0,29 φορές αντίστοιχα) από ό, τι τον φορέα ελέγχου επιμολυσμένα κύτταρα (Σχ. 4C και D). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με κύτταρα AGS-KS (KS1 και KS2) (Σχ. 4Ε και F). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι συλλογικά GLO1 ρυθμίζει θετικά την μετανάστευση και την εισβολή των ικανοτήτων των γαστρικών καρκινικών κυττάρων.

Δύο TSGH-GLO1-σιγήσει κλώνους (KG1 και KG2), δύο AGS-GLO1-σιγήσει κλώνους (KS1 και KS2) sublines και κυτταρικές γραμμές ελέγχου (TSGH-C1 και C2-? AGS-C1 και C2) ιδρύθηκαν. (Α, Β) Έκφραση GLO1 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος. Η μετανάστευση κυττάρων (C, E) και εισβολή (D, F) ικανότητες προσδιορίστηκαν όπως περιγράφεται στο «Υλικά και Μέθοδοι». Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως πτυχώσεις από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν σε διπλότυπο. Οι αλλαγές φορές (C-F), και οι διαφορές που εξετάστηκαν με τη μέθοδο Mann-Whitney U να συγκρίνει τις τιμές με τον έλεγχο φορέα. **

P

& lt?. 0.05

Η

Down-έκφραση GLO1 προκαλεί μειωμένη έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται στη μετάσταση που σχετίζονται με οδούς

Για να εξακριβωθεί αν το GLO1 πρωτεΐνη επηρεάζει τα γονίδια που σχετίζονται με μετάσταση, συγκρίναμε το γονιδίωμα-ευρεία έκφραση KG2 και Γ1. Επελέγησαν Αρκετά γονίδια ρυθμίζεται προς τα πάνω (≥1.5 φορές) στο C1, σε σύγκριση με KG2,. MetaCore ™ ανάλυση [28] έδειξε ότι οι κορυφαίες μοριακές οδοί μεταβάλλονται σε KG κλώνους ήταν adhesion_cytokines και μονοπάτια πρόσφυση. Πρωτεΐνες [όπως μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας (ΜΜΡ), CXCL8, και CXCL1] που συμμετέχουν στην εν λόγω οδοί ρυθμισμένα προς τα κάτω επάνω GLO1 σίγηση. Μεταξύ των οδών που σχετίζονται με κυτοκίνη, υψηλή έκφραση του VEGF, CXCL8, CXCR2, και CXCL1 συνδέονται με τη μετάσταση και την εξέλιξη του καρκίνου [8], [29]. Προηγουμένως, Daniel J.

et al.

[30] ανέφεραν ότι η υπερ-έκφραση του GLO1 θα μπορούσε να ενισχύσει στρωματικών κυττάρων που προέρχονται από παράγοντα-1 (SDF-1), CXCR4 και η έκφραση VEGF σε υποξικά καλλιέργεια ενδοθηλιακών προγονικών κυττάρων σε υψηλή γλυκόζη. Ως εκ τούτου, αναλύσαμε επίσης την έκφραση του VEGF σε KG σταθερές γραμμές.

περαιτέρω επικυρώνονται τα πρότυπα έκφρασης των πρωτεϊνών σε VEGF ή πορείες κυτοκίνη συνδέονται μέσω ανάλυσης στυπώματος Western. Τα επίπεδα των γονιδίων στόχων, συμπεριλαμβανομένων CXCL1, CXCL8, CXCR2, και VEGF, ήταν σημαντικά ανέστειλε σε σταθερές κυτταρικές σειρές TSGH-KG (KG1 και KG2), σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου φορέα-επιμολυσμένα (Εικ. 5Α). Επιπλέον, τα επίπεδα του ΝΡ-κΒ και HIF1-α, καλά γνωστούς παράγοντες μεταγραφής των προ-αγγειογόνων αυξητικών παραγόντων (όπως CXCL8, CXCL1, και VEGF) [31], μειώθηκαν στους πυρήνες των σταθερών κυτταρικών σειρών TSGH-KG , σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχ. 5Α). ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9, τα βασικά ένζυμα για την αποικοδόμηση κολλαγόνου τύπου IV, πιστεύεται ότι παίζουν κρίσιμο ρόλο στην εισβολή και μετάσταση όγκου [32]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η εξάντληση των GLO1 οδήγησε σε σημαντική καταστολή των ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 δραστηριότητες (Εικ. 5Β). Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι GLO1 ρυθμίζει την ενεργοποίηση των μονοπατιών σηματοδότησης μετάστασης που σχετίζονται σε γαστρικό καρκινικά κύτταρα. Με βάση αυτά τα ευρήματα, προτείνουμε ότι GLO1 μεσολαβεί γαστρικού μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολή τουλάχιστον μερικώς διαμεσολαβούνται μέσω της ενεργοποίησης του CXCL1, CXCL8, και VEGF.

(Α) HIF-1α, NF-kB, VEGF, CXCL8 , επίπεδα πρωτεΐνης CXCL1, και CXCR2 σε κύτταρα επιμολυσμένα με TSGH GLO1 shRNA (KG1 και KG2) και έλεγχο shRNA (C1 και C2). Η γέλη χρωματίστηκε με Coomassie blue (CB), που χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης μέσων υπό όρους. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος για συνολικά κυτταρολύματα, και λαμίνη A /C για πυρηνικές πρωτεΐνες. (Β) Νοκ ντάουν της GLO1 κατέστειλε την ενεργοποίηση του ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9. Υπό όρους μέσων από C1, C2, KG1 και τα κύτταρα KG2 συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε ζυμογραφία ζελατίνης. (C) Τμήματα του μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη και εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστοί από τρία ανθρώπινο γαστρικό ιστούς όγκων ανοσοχρωματίστηκαν με αντι-GLO1 (α και β), αντι-CXCL1 (c και d) ή αντι-CXCR2 αντισώματα (Ε και F). Συνέκφραση GLO1, CXCL1, και CXCR2 πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικούς ιστούς (b, d, και f). Noncancerous γαστρικό βλεννογόνο με αρνητική ή χαμηλότερη έκφραση του GLO1, CXCL1 και πρωτεΐνες CXCR2 (α, γ, και ε). μπαρ κλίμακας αντιπροσωπεύει 200 ​​μm.

Η

IHC δείχνει συν-έκφραση της GLO1 με πρωτεΐνες CXCL1 και CXCR2 και υπερέκφραση του στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς

Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η αλληλεπίδραση υποδοχέα κυτοκίνης και VEGF οι οδοί επικοινωνίας που σχετίζονται με χαρακτηριστικά κακοήθειας σε καρκίνο του στομάχου [8], [33]. Προηγουμένως, η ομάδα μας έδειξε σημαντική συσχέτιση του CXCR2 και CXCL1 υπερέκφραση (n = 116) με γαστρικό εξέλιξη του καρκίνου [8]. Συνέπεια, στην ανάλυση IHC, μια θετική σημαντική συσχέτιση βρέθηκε μόνο μεταξύ των βαθμολογιών των GLO1 και CXCL1 ή CXCR2 σε καρκινικούς ιστούς (συντελεστής συσχέτισης του Spearman = 0,238 και 0,293?

P

= 0,013 και

P

= 0,003, αντίστοιχα). Επιπλέον, ανοσοχρώση των διαδοχικών τμημάτων αποκάλυψε σημαντική έκφραση των πρωτεϊνών GLO1, CXCL1, και CXCR2 σε επιθηλιακά κύτταρα όγκου [Σχ. 5C (β), (δ), και (στ)], σε αντίθεση με χαμηλή ή καθόλου έκφραση σε ιστούς noncancerous [Σχ. 5C (α), (γ) και (ε)].

Συζήτηση

Καθώς η δεύτερη πιο συχνή αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με γαστρικό καρκίνο παραμένει ένα δύσκολο ασθένεια. Δεδομένα από την παρούσα μελέτη έδειξε ότι προς τα πάνω ρύθμιση του GLO1 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς συνδέεται σημαντικά με την εξέλιξη του όγκου και προχωρημένα στάδια της νόσου. Να συμπίπτει, οι ασθενείς με χαμηλότερα επίπεδα GLO1 είχαν καλύτερη πρόγνωση της νόσου. Επιπλέον, qRT-PCR και IHC πειράματα αποκαλύπτεται μία συσχέτιση αυξημένης έκφρασης GLO1 με τοπικά την εξέλιξη του όγκου και των λεμφαδένων εισβολή. Παρατηρήσαμε μια αξιοσημείωτη μείωση των μετάσταση και εισβολή ικανότητες GLO1 ελλειμματικών κυττάρων, η ταυτόχρονη με μειωμένα επίπεδα αρκετών μετάστασης-σχετιζόμενους παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των VEGF, CXCL1, CXCL8, MMPs, και CXCR2. Στη μελέτη IHC, μια θετική σημαντική συσχέτιση μεταξύ GLO1 και πρότυπα έκφρασης CXCL1 παρατηρήθηκε σε εκτομή δείγματα γαστρικού καρκίνου. Επιπλέον, αυξημένα GLO1 και ταυτόχρονη CXCL1 υπερέκφραση σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου συσχετίζονταν σημαντικά με την επιβίωση. Τα αποτελέσματά μας παρέχουν άμεσα αποδεικτικά στοιχεία που υποστηρίζουν τη συμμετοχή των GLO1 στο γαστρικό εξέλιξης του καρκίνου και τη δύναμη μέσω της εναλλαγής των οδών κατάντη μετανάστευση και την εισβολή του.

Υψηλή έκφραση GLO1 έχει συνδεθεί με αρκετές καρκίνους [16], [17] . Πρόσφατες μελέτες έχουν προτείνει έναν ζωτικής σημασίας ρόλο του GLO1 σε διάφορους τύπους καρκίνου στην απομάκρυνση του μεθυλγλυοξάλης (MG), η οποία θεωρείται καρκινοστατική, με αποτέλεσμα την ανάπτυξη αναστολέων GLO1 ως παράγοντες κατά του όγκου [34], [35]. Έτσι, η υψηλή έκφραση του GLO1 εμπλέκεται στην αντίσταση καρκινικών κυττάρων σε απόπτωση που επάγεται από παράγοντες κατά του όγκου [36]. Sakamoto

et al.

[36] πρότεινε ότι GLO1 δεν είναι μόνο ένας όγκος, αλλά επίσης ένας δείκτης αντοχής φαρμάκου. Σταθερά, τα GLO1 knockdown-κλώνοι ήταν ευαίσθητα σε διάφορους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, όπως η καμπτοθεκίνη, ετοποσίδη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Κλινικά, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι GLO1 εκφράζεται έντονα σε καρκίνο του στομάχου και σημαντική συσχέτιση με την εξέλιξη του όγκου και προχωρημένα στάδια της νόσου.

γλυκολυτικό μεταβολές στα καρκινικά κύτταρα αντιπροσωπεύουν ένα μεταβολικό προσαρμογή σε υποξικές όγκων μέσω της δράσης του υποξία επαγόμενη παράγοντα μεταγραφής (HIF-1) [37], [38]. Επιπλέον, οι παράγοντες μεταγραφής, HIF1-α και ΝΡ-κΒ, παίζουν κρίσιμους ρόλους σε διάφορες διαδικασίες, όπως η φλεγμονή, η μικροβιακή θανάτωση και την πρόοδο του καρκίνου [39]. Tumor υποξία φαίνεται να συνδέεται στενά με πολλαπλασιασμό του όγκου, κακοήθη εξέλιξη, και την αντίσταση στη θεραπεία. Η οδός του HIF-1α σαφώς εμπλέκονται στην καρκινογένεση του γαστρικού καρκίνου [39]. Επιπλέον, ανοσοϊστοχημική έκφραση του HIF-1α γονιδίων στόχων (GLUT1, VEGF, CA9, iNOS) σχετίζεται με γαστρικό εξέλιξης του όγκου [40]. Μεταξύ των ογκογόνο μονοπάτια, ΝΡ-κΒ σηματοδότηση είναι αυξημένα σε ένα σημαντικό ποσοστό των γαστρικών καρκίνων [9]. Επιπλέον, αρκετές γραμμές του crosstalk στήριξης αποδείξεων μεταξύ του NF-κΒ και μονοπάτια σηματοδότησης HIF-1α [41]. Στα πειράματά μας, τα επίπεδα τόσο HIF-1α και NF-κΒ μειώθηκαν σε πυρήνες κατόπιν GLO1 σίγηση σε γαστρικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές, μαζί με κατάντη γονιδίων στόχων (VEGF, CXCL1, CXCL8, MMPs).

μας