έχουν

Αφηρημένο

Αρκετές μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος-ευρεία (GWAS) έχουν διενεργηθεί για τον εντοπισμό των κοινών πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) που επηρεάζουν τον κίνδυνο καρκίνου του προστάτη. Υποτέθηκε ότι ορισμένοι καρκίνο του προστάτη που σχετίζεται με SNPs μπορεί να σχετίζονται με τις κλινικές εκβάσεις σε ασθενείς υπό αγωγή για καρκίνο του προστάτη χρησιμοποιώντας θεραπεία στέρηση ανδρογόνου (ADT). Μια ομάδα από 601 ασθενείς που έχουν λάβει ADT για τον καρκίνο του προστάτη ο γονότυπος για 29 SNPs που έχουν συσχετιστεί με τον καρκίνο του προστάτη σε Cancer γενετικών δεικτών Ευαισθησίας GWAS, και εντός των γονιδίων που έχουν ενοχοποιηθεί σε καρκίνο. Προγνωστική σημασία αυτών των SNPs στην εξέλιξη της νόσου, η θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη-ειδικό (PCSM) και από όλες τις αιτίες θνησιμότητας (ACM) μετά από ADT αξιολογήθηκαν με ανάλυση Kaplan-Meier και το μοντέλο παλινδρόμησης Cox. Τρεις SNPs, δηλαδή

CASP3

rs4862396,

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346, βρέθηκαν να συνδέονται στενά με την ACM (

P

≤0.042 ), και

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 ήταν Σημειώνεται επίσης να σχετίζεται σημαντικά με την PCSM (

P

≤0.032) μετά την προσαρμογή για τις γνωστές κλινικοπαθολογική προγνωστικούς παράγοντες. Επιπλέον, οι ασθενείς που φέρουν ένα μεγαλύτερο αριθμό των δυσμενών γονοτύπων στους τόπους που παρουσιάζουν ενδιαφέρον είχε ένα μικρότερο χρονικό διάστημα για να ACM και PCSM κατά τη διάρκεια της ADT (

P

για τάση & lt? 0.001). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι

CASP3

rs4862396,

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση σε ασθενείς μετά από ADT για τον καρκίνο του προστάτη, και η ανάλυση αυτών των SNPs μπορεί να βοηθήσει εντοπισμό των ασθενών που διατρέχουν υψηλότερο κίνδυνο κακής έκβασης

Παράθεση:. Huang SP, Bao ΑΠΟ, ώρα TC, Huang CY, Yu CC, Liu CC, et al. (2012) γενετικές παραλλαγές στο

CASP3

,

ΒΜΡ5

, και

IRS2

γονίδια μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση στον καρκίνο του προστάτη ασθενείς που λαμβάνουν αποστέρησης ανδρογόνων Therapy. PLoS ONE 7 (7): e41219. doi: 10.1371 /journal.pone.0041219

Επιμέλεια: Giuseppe Novelli, Πανεπιστήμιο Tor Vergata της Ρώμης, Ιταλία

Ελήφθη: 17 Απρίλη 2012? Αποδεκτές: 18 Ιούν, 2012? Δημοσιεύθηκε: 23 Ιούλ 2012

Copyright: © 2012 Huang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο υποστηρίχθηκε από τις επιχορηγήσεις NSC NSC-98-2320-Β-039-019-my3, NSC-99-2314-Β-037-018-my3, NSC-100-2314-B-039-009-my3, και η Κίνα Ιατρικό Πανεπιστήμιο χορηγεί CMU99-COL-13. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη, η πιο συχνά διαγιγνώσκεται ο καρκίνος, είναι η δεύτερη συχνότερη αιτία θανάτων από καρκίνο σχετίζονται μεταξύ των ανδρών στις δυτικές χώρες [1], [2]. Από τότε που για πρώτη φορά πάνω από 70 χρόνια πριν, μια θεραπεία αποστέρησης ανδρογόνων (ADT) υπήρξε ο στυλοβάτης της θεραπείας για προχωρημένο καρκίνο του προστάτη με βάση ότι η σηματοδότηση των ανδρογόνων έχει θεωρηθεί η κύρια ογκογόνων οδηγός στην καρκινογένεση του προστάτη. Ο αρχικός ρυθμός απόκρισης του καρκίνου του προστάτη σε ADT έχει αναφερθεί να είναι έως και 80%, ωστόσο, η ασθένεια στους περισσότερους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία έχουν προοδεύσει προς ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC). Δυστυχώς, CRPC εξακολουθεί να είναι ανίατη και η διάμεση επιβίωση για τους ασθενείς με CRPC είναι μόνο 1-2 χρόνια. Παρ ‘όλα αυτά, η κακή κατανόηση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν CRPC μπορεί να είναι το εμπόδιο για την ανάπτυξη αποτελεσματικών θεραπειών.

Γενετικές βιοδείκτες έχει αποδειχθεί ότι έχουν δυνατότητες που επιτρέπουν την εφαρμογή των πιο αποτελεσματικών εξατομικευμένη διάγνωση, πρόγνωση και θεραπεία σε κλινικές. Πρόσφατα, τα εκατομμύρια των πολυμορφισμών απλού νουκλεοτιδίου (SNPs) έχουν ταυτοποιηθεί ότι συνδέονται με τον κίνδυνο του καρκίνου του προστάτη σε αρκετές μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος σε επίπεδο, όπως ο καρκίνος γενετικών δεικτών ευαισθησίας (CGEMS) μελέτη [3] – [14]. Παρ ‘όλα αυτά, η προγνωστική αξία των παραλλαγών σχετίζονται με τον καρκίνο του προστάτη δεν έχει τεκμηριωθεί καλά.

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθεί η προγνωστική σημασία της 29ης SNPs που σχετίζονται με τα γονίδια που εμπλέκονται στην εξέλιξη του καρκίνου και είχε χαμηλή

αξίες P

(

P

& lt? 0,01) σε CGEMS (Πίνακας S1) για την εξέλιξη της νόσου, του προστάτη ειδική θνησιμότητα λόγω καρκίνου (PCSM) και θνησιμότητας από κάθε αιτία (ACM) σε μία ομάδα των 601 ασθενών που έλαβαν θεραπεία με ADT για τον καρκίνο του προστάτη.

Μέθοδοι

στρατολόγηση ασθενών και συλλογής δεδομένων

οι ασθενείς με διάγνωση και παθολογικά επιβεβαίωσε τον καρκίνο του προστάτη ενεργά προσληφθεί από τρία ιατρικά κέντρα σε Ταϊβάν: Kaohsiung Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο και Kaohsiung Γενικού Νοσοκομείου Βετεράνων στη νότια Ταϊβάν, και το Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν Νοσοκομείο στη βόρεια Ταϊβάν. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα και την άδεια για τη διεξαγωγή αυτής της μελέτης δόθηκαν από το Διοικητικό Συμβούλιο αναθεώρηση Θεσμικών από τα τρία νοσοκομεία. Η συλλογή των κλινικών δεδομένων και τα χαρακτηριστικά του ασθενούς, όπως περιγράφεται προηγούμενη μελέτη [15] – [19]. Αναφέρονται στη Μέθοδο S1

γονοτυπικός

Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από το περιφερικό αίμα του κάθε ασθενούς και γονοτυπική διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20] χρησιμοποιώντας Sequenom iPlex υποβοηθούμενης από μήτρα εκρόφησης λέιζερ /ιονισμός-χρόνος πτήσεως (MALDI-TOF) μάζας τεχνολογία φασματομετρία στο Εθνικό Κέντρο για Γονιδιώματος Medicine, Academia Sinica, Ταϊβάν. Εν συντομία, εκκινητές για αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης ειδικής θέσεως (PCR) και αλληλόμορφο-ειδική επέκταση έχουν σχεδιαστεί από MassARRAY AssayDesign 3,0 λογισμικού (Sequenom, San Diego, CA, USA). Για αλληλουχίες εκκινητών, βλέπε πίνακα S2. Τα DNA δείγμα ενισχύθηκαν με εναρκτήρες που πλευρίζουν το στοχευόμενο αλληλουχία, ακολουθούμενη από αποφωσφορυλίωση και επέκταση εκκινητή συγκεκριμένου αλληλόμορφου. Τα προϊόντα επέκτασης καθαρίστηκαν, φορτώθηκαν σε ένα SpectroChip 384 σχήματος, και υποβάλλεται σε φασματομετρία μαζών MALDI-TOF. Τα προκύπτοντα δεδομένα αναλύθηκαν με το λογισμικό Sequenom MassARRAY Typer (Sequenom, San Diego, CA, USA). Το μέσο ποσοστό κλήσεων γονότυπο για αυτά τα SNPs ήταν 99,3% και το ποσοστό αντιστοιχίας ήταν 99,8% μεταξύ των 55 δειγμάτων ποιοτικού ελέγχου τυφλή αναπαραχθεί. Κάθε ένα από τα SNPs ήταν σε ισορροπία Hardy-Weinberg (

P

& gt? 0,01).

Σε πραγματικό χρόνο αντίστροφη μεταγραφή-PCR (real-time RT-PCR)

Οι ανθρώπινες κυτταρικές προστάτη γραμμές, δηλαδή LNCaP, DU 145 και PC-3, αγοράστηκαν από Bioresource Συλλογή και Research Center (Hsinchu, Ταϊβάν) και διατηρήθηκαν σε RPMI 1640 με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 U /ml στρεπτομυκίνη (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) στους 37 ° C σε

2-95% ατμόσφαιρα αέρα υγροποιημένη 5% CO. Ολικό RNA εξήχθη από LNCaP, DU 145 και PC-3 κύτταρα χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Η αντίστροφη μεταγραφή με την υψηλής χωρητικότητας cDNA Reverse Transcription Kit (ΑΒΙ, Foster City, CA, USA) και επιμηκύνσεις PCR με Smart Quant Πράσινο Master Mix (Protech, Ταϊπέι, Ταϊβάν) διεξήχθησαν σε MJ μίνι και MiniOpticon σε πραγματικό χρόνο ανίχνευση PCR συστήματος (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). PCR διεξήχθη ως εξής ακολουθία: αρχική ενεργοποίηση HotStart στους 95 ° C για 15 λεπτά, και 40 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 15 s, ανόπτηση και επέκταση στους 60 ° C για 1 λεπτό. Αστάρι ακολουθίες ήταν:

κασπάσης 3

(

CASP3

), αίσθηση 5′-GACATACTCCTTCCATCAA-3 ‘και αντίθετης φοράς 5′-ATTCATAGCACAGCATCA-3’?

μορφογενετική πρωτεΐνη των οστών 5

(

ΒΜΡ5

), αίσθηση 5′-CCGTCTTCTGCTACATCA-3 ‘και αντίθετης φοράς 5′-ACAACATCCTCACCGATT-3’?

υποδοχέων της ινσουλίνης υπόστρωμα 2

(

IRS2

), αίσθηση 5′-CAGTGTATTGACGCATAT-3 ‘και αντίθετης φοράς 5′-AGCATATTATCATCTGTGTA-3’?

αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης

(

GAPDH

), αίσθηση 5′-TCACCACCATGGAGAAGGC-3 ‘και 5′-αντινόημα GCTAAGCAGTTGGTGGTGCA-3’. Ποσοτικοποίηση του κάθε δείγματος σε σχέση με το δείγμα LNCaP υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας 2

-ΔΔCT μέθοδο [21]. Τα αναμενόμενα μεγέθη και η απουσία μη ειδικής προϊόντα ενίσχυσης επιβεβαιώθηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης και καμπύλης τήξης ανάλυση.

Στατιστική ανάλυση

κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά ασθενούς συνοψίστηκαν ως αριθμός και το ποσοστό των ασθενών, η διάμεση ή διατεταρτημοριακό εύρος (IQR) των τιμών. Οι συνεχείς παράγοντες διαχωρίστηκαν μεταξύ τους κατά τη μέση τιμή για την ομάδα, με την εξαίρεση του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) ναδίρ που διαχωρίστηκαν μεταξύ τους σε 0,2 ng /mL, λόγω της συσχέτισης του με την εξέλιξη της νόσου και PCSM [22], [23]. Τα ετερόζυγα και σπάνια ομόζυγη γενότυποι κατέρρευσε στην ανάλυση εάν η συχνότητα του σπάνιου ομοζυγώτη ήταν πολύ χαμηλό (& lt? 2%), ή εάν τα ομόζυγα και ετερόζυγα γονότυπων είχαν την ίδια κατεύθυνση του αποτελέσματος. Οι ενώσεις των 29 μεμονωμένων SNPs και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά με το χρόνο έως την εξέλιξη, PCSM και ACM αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την ανάλυση Kaplan-Meier με δοκιμασία log-rank. Πολυπαραγοντικές αναλύσεις για να προσδιοριστεί η αλληλεξάρτηση των γονότυπων και άλλους γνωστούς προγνωστικούς παράγοντες, όπως η ηλικία κατά τη διάγνωση, κλινικό στάδιο, το σκορ Gleason, PSA σε ADT έναρξη, ναδίρ PSA και χρόνο για να το PSA ναδίρ, πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του μοντέλου Cox παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων. Καθώς οι 29 SNPs ελέγχθηκαν, τα ποσοστά ψευδώς ανακάλυψη (

q

τιμές) υπολογίστηκαν για να προσδιοριστεί ο βαθμός στον οποίο ελέγχει την ένωση ήταν επιρρεπείς σε ψευδώς θετικά [24].

q

τιμές υπολογίστηκαν με χρήση R

q

πακέτο αξίας (https://genomics.princeton.edu/storeylab/qvalue/) για την παρατηρούμενη κατανομή των

P

τιμές από τη δοκιμασία log-rank για 29 SNPs. Στατιστικό Πακέτο για τη Κοινωνικών Επιστημών έκδοση λογισμικού 16.0.1 (SPSS Inc., Chicago, IL) χρησιμοποιήθηκε για άλλες στατιστικές αναλύσεις. Ένα δύο όψεων

P

αξία των ≤0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Ο πληθυσμός της μελέτης (

Ν

= 601) προέρχεται από μια που περιγράφηκε προηγουμένως ομάδα των ασθενών με καρκίνο του προστάτη που έλαβαν θεραπεία με ADT και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά του παρουσιάζονται στον πίνακα S3. Κλινικά αποτελέσματα μετά από ADT μετρήθηκαν από το χρόνο μέχρι την εξέλιξη της νόσου, PCSM και ACM. Το κλινικό στάδιο κατά τη διάγνωση, ναδίρ PSA και χρόνο για να το PSA ναδίρ κατά τη διάρκεια ADT συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με τις τρεις κλινικές εκβάσεις μετά ADT (

P

≤0.019). Ενώ η ηλικία κατά τη διάγνωση σχετιζόταν μόνο με την ACM (

P

= 0,008), Gleason σκορ κατά τη διάγνωση και το επίπεδο PSA κατά την έναρξη ADT και οι δύο σχετίζονται με το χρόνο για να PCSM και ACM (

P

& lt? 0.001), αλλά όχι με το χρόνο έως την εξέλιξη

Ένα σύνολο των 29 SNPs που σχετίζονται με τα γονίδια που εμπλέκονται στον καρκίνο και είχε χαμηλή

P

τιμές (

P

& lt.? 0.01) σε CGEMS, επιλέχθηκαν. ενώσεις τους με την εξέλιξη της νόσου, PCSM και ACM μετά ADT συνοψίζονται στον Πίνακα S1. πρωτοβάθμια τεστ log-rank μας αποκάλυψε ότι

ΒΜΡ5

rs3734444,

NCOR2

rs10846667,

IRS2

rs7986346 και

MAP2K6

rs1972933 σημαντικά που σχετίζονται με την εξέλιξη της νόσου (ονομαστική

P

≤0.043) με ποσοστό ψευδώς ανακάλυψη (

q

αξία) των 0.085 (Πίνακας 1). Για να αξιολογηθεί η προγνωστική αξία αυτών των SNPs πέρα ​​από τις χρησιμοποιούνται σήμερα κλινικούς παράγοντες, διεξήχθη μια πολυπαραγοντική αναλογικών κινδύνων κατά Cox ανάλυση προσαρμοσμένη ως προς την ηλικία, το κλινικό στάδιο, το σκορ Gleason κατά τη διάγνωση, PSA ναδίρ, χρόνο για να ναδίρ PSA και PSA κατά την έναρξη ADT. Μετά από προσαρμογή για αυτούς παράγοντες πρόβλεψης, δεν παρατηρήθηκε καμία στατιστική συσχέτιση μεταξύ οποιωνδήποτε SNPs και την εξέλιξη της νόσου (

P

≥0.084, Πίνακας 1).

Η

ΒΜΡ5

rs373444,

ΚΧΚα

rs3118536,

IRS2

rs7986346 και

ERG

rs2836370 συνδέθηκαν με PCSM ονομαστικής

P

≤0.043 και

q

≤ 0,209 (Πίνακας 2). Έξι SNPs, δηλαδή

CASP3

rs4862396,

ΒΜΡ5

rs373444,

ΚΧΚα

rs3118536,

BMPR1A

rs11597689,

IRS2

rs7986346 και

ERG

rs2836370, παρουσίασαν επίσης σημαντική επίδραση στην ACM (ονομαστική

P

≤0.037), και όλοι είχαν ένα

q

αξία των ≤0.179 (Πίνακας 3). Μετά την προσαρμογή για την κλινική προγνωστικούς παράγοντες,

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 παρέμεινε στατιστικά σημαντική συσχέτιση τόσο με PCSM (προσαρμοσμένο

P

≤0.032, Πίνακας 2) και ACM (προσαρμοσμένο

P

≤0.034, Πίνακας 3). Μια ισχυρή επίδραση του γονιδίου-δοσολογίας για PCSM κατά τη διάρκεια ADT σημειώθηκε όταν

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 αναλύθηκαν σε συνδυασμό (log-rank

P

& lt? 0.001, Πίνακας 2 και Σχήμα 1Α αριστερά), και οι αναλογίες κινδύνου (HR) αυξήθηκε καθώς ο αριθμός των δυσμενών γονότυπων αυξήθηκε. Επιπλέον, η ένωση του

CASP3

rs4862396 με το χρόνο για να ACM παρέμεινε επίσης σημαντική (προσαρμοσμένο

P

= 0,042, Πίνακας 3), όταν άλλοι παράγοντες κινδύνου περιλαμβάνονται στην πολυπαραγοντική ανάλυση. Εκτιμώμενος χρόνος για να ACM μειώθηκε σταδιακά σε ασθενείς με αύξηση του αριθμού των δυσμενών γονότυπων για

ΒΜΡ5

rs3734444,

IRS2

rs7986346 και

CASP3

rs4862396 (Πίνακας 3 και Σχήμα 1Β αριστερά). Ο κίνδυνος της ACM είναι αυξημένες σε ασθενείς με 1 δυσμενείς γονότυπο (HR 1,43, 95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI] 0,97 – 2,11) και σημαντικά αυξημένη σε ασθενείς με & gt? 1 δυσμενείς γονότυπους (HR 2.48, 95% CI 1,54 – 3,98) σε σύγκριση σε ασθενείς χωρίς δυσμενείς γονότυπους (

P

για τάση & lt? 0.001, Πίνακας 3).

Kaplan-Meier καμπύλες της (Α) χρόνος για να PCSM κατά τη διάρκεια της ADT για ασθενείς με 0, 1, ή 2 δυσμενείς γονότυπους στο 2 γενετικούς τόπους που παρουσιάζουν ενδιαφέρον, και (Β) το χρόνο να ACM κατά τη διάρκεια της ADT για ασθενείς με 0, 1, ή & gt? 1 δυσμενείς γονότυπους στο 3 γενετικούς τόπους που παρουσιάζουν ενδιαφέρον? μετρήθηκε σε όλους τους ασθενείς (αριστερά), σε ασθενείς χωρίς μακρινή μετάσταση (μέση), ή σε ασθενείς με απομακρυσμένες μεταστάσεις (δεξιά). Οι αριθμοί στις παρενθέσεις δείχνουν τον αριθμό των ασθενών.

Η

Η

Δεδομένου ότι οι ασθενείς με μακρινή μετάσταση θεωρούνται υψηλού κινδύνου, οι ασθενείς περαιτέρω κατηγοριοποιημένα βάσει των μεταστατική κατάσταση τους κατά την έναρξη της ADT για την αξιολόγηση η κλινική σημασία αυτών των SNPs. Τα συνδυασμένα γενότυποι έπρεπε ακόμη συνέπειες για PCSM και ACM σε ασθενείς με ή χωρίς μακρινή μετάσταση, αντίστοιχα (

P

≤0.052, Εικόνα 1 μεσαία και δεξιά). Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν ότι οι SNPs θα μπορούσαν να είναι οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί επιβίωση μετά ADT, μαζί με τις τρέχουσες κλινικοπαθολογική προγνωστικούς δείκτες. Ενσωμάτωση αυτών των SNPs με τους γνωστούς προγνωστικούς παράγοντες μπορούν να βελτιώσουν τη διαστρωμάτωση κινδύνου και να βοηθήσει τη λήψη αποφάσεων θεραπείας.

Για να αποκτήσουν μια πρώτη ένδειξη της εν λόγω υποψήφια γονίδια για τον καρκίνο του προστάτη, τα επίπεδα έκφρασης του

CASP3

,

ΒΜΡ5

και

IRS2

σε τρία συνηθέστερα γραμμές ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του προστάτη, δηλαδή LNCaP, DU 145 και PC-3, εξετάσθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR (Σχήμα 2). Έχει καθιερωθεί ότι τα κύτταρα LNCaP εκφράζουν υποδοχέα ανδρογόνων (AR) και ευαίσθητο σε ανδρογόνο με σαφώς λιγότερο επεμβατική δυναμικό [25]. DU 145 και PC-3 κύτταρα, από την άλλη πλευρά, δεν εκφράζουν AR και ανδρογόνων-insensitive με πολύ επιθετική συμπεριφορά [26]. mRNA και για τα τρία γονίδια μπόρεσαν να ανιχνευθούν σε όλες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη.

CASP3

είναι ένας από τους κύριους εκτελεστές της απόπτωσης. Η έκφραση του ενδογενούς

CASP3

μεταγραφές ήταν αντιστρόφως συσχετίζεται με την επιθετικότητα σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη, που δείχνουν ότι ήταν υψηλότερη σε σχέση με LNCaP DU 145 και PC-3. Αυξημένα έκφραση των ΒΜΡ έχει ενοχοποιηθεί σε καρκίνο του προστάτη, ιδιαίτερα στην ασθένεια-ειδικές κόκαλα μετάσταση [27]. Μια θετική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ του μεταστατικού δυναμικού αυτών των κυτταρικών σειρών καρκίνου του προστάτη και

ΒΜΡ5

έκφρασης. Παρά το γεγονός ότι

IRS2

έχει συσχετιστεί θετικά με την επιθετική συμπεριφορά του όγκου [28], έχει επίσης εντοπιστεί ως κύριο γονίδιο στόχο της AR [29]. Η ενδογενής

IRS2

εξέφρασαν υψηλότερα επίπεδα στα κύτταρα LNCaP AR-θετικά από ό, τι στο AR-αρνητικών DU 145 και PC-3 κύτταρα. Όλες αυτές οι ανεξάρτητες γραμμές αποδεικτικών στοιχείων υποστηρίζουν την βιολογική αληθοφάνεια των πρότασή μας ότι οι παραλλαγές του κινδύνου του καρκίνου του προστάτη μπορεί επίσης να επηρεάσει την επιβίωση σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ADT για τον καρκίνο του προστάτη.

Σύνολο RNAs παρασκευάστηκαν από LNCaP, DU 145 και PC-3 κύτταρα, και γονίδιο εκφράσεις αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR. Σχετική έκφραση γονιδίου αντιπροσωπεύει τις φορές αλλαγές στη γονιδιακή έκφραση σε σχέση με κύτταρα LNCaP ορίζεται σε 1,0. Οι αριθμοί στις μπάρες αντιπροσωπεύουν τη διαφορά σε κύκλους όριο μεταξύ των γονιδίων των τόκων και του γονιδίου εσωτερικού ελέγχου. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SE από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη είχε ως σκοπό να διερευνηθεί η επίδραση της προγνωστικής 29 καρκίνο του προστάτη που σχετίζεται με SNPs που επιλέγονται από CGEMS σε ασθενείς που λαμβάνουν ADT για τον καρκίνο του προστάτη. Τα αποτελέσματα μας αποκάλυψαν ότι

CASP3

rs4862396,

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 συσχετίστηκε σημαντικά με τον ACM, και

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 ήταν επίσης σημαντικά που σχετίζονται με PCSM. Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι αυτά τα SNPs ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες μετά την προσαρμογή για τις γνωστές κλινικοπαθολογική προγνωστικούς παράγοντες, όπως η ηλικία, το κλινικό στάδιο, το σκορ Gleason κατά τη διάγνωση, PSA ναδίρ, χρόνο για να ναδίρ PSA και PSA κατά την έναρξη ADT. Πρότεινε ότι

CASP3

rs4862396,

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 μπορεί να είναι χρήσιμοι δείκτες για την πρόβλεψη της επιβίωσης σε ασθενείς που λαμβάνουν ADT για τον καρκίνο του προστάτη. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να διαπιστωθεί αν οι γενετικές παραλλαγές στο

CASP3

,

ΒΜΡ5

και

IRS

γονίδια έχουν προγνωστική συνέπειες για τις κλινικές εκβάσεις των ασθενών με καρκίνο του προστάτη.

CASP3

κωδικοποιεί ένα μέλος της οικογένειας κασπάσης, η οποία είναι υπεύθυνη για την εκτέλεση της απόπτωσης. Μόλις CASP3 ενεργοποιείται πρωτεολυτικά από τις κασπάσες κατά τη διάρκεια της ενάρξεως υποδοχέα θανάτου ή βλάβη του DNA που προκαλείται από απόπτωση, αυτό διασπά ένα μεγάλο σύνολο υποστρωμάτων και έχει ως αποτέλεσμα την αποσυναρμολόγηση του κυττάρου. Αν και οι μοριακοί μηχανισμοί με τους οποίους ο καρκίνος του προστάτη κύτταρα επιβιώνουν υπό ADT είναι άγνωστες, απορύθμιση των πρωτεϊνών επιβίωση /απόπτωση έχει υπόνοιες για να καταστήσει τα καρκινικά κύτταρα λιγότερο επιρρεπείς σε κυτταρικό θάνατο που επάγεται από στέρηση ανδρογόνου [30]. rs4862396 κατοικεί 5-kb κατάντη του

CASP3

γονίδιο. Παρά το γεγονός ότι η λειτουργία προβλέπεται για να μην έχει γίνει γνωστό rs4862396, αρκετές untyped

CASP3

SNPs είναι στενά συνδεδεμένο (

r

2 & gt? 0,9) με rs4862396. Σύμφωνα με την πρόβλεψη της λειτουργίας SNP Πύλης [31], πολλές από τις συνδέονται SNPs είναι σε θέση να μεταβάλλουν θέσεις δέσμευσης για παράγοντες μεταγραφής (δηλ rs7675251 σε ηπατοκυττάρων πυρηνικού παράγοντα 1 θέση σύνδεσης), θέσεις στόχους για microRNAs (δηλαδή rs8549 σε θέση-στόχο του HSA-miR-196α), και η ακολουθία αμινοξέων (δηλαδή rs1049210 που οδηγεί σε E189D). Ως εκ τούτου, η περαιτέρω λεπτομερή χαρτογράφηση του

CASP3

γονίδιο θα μπορούσε να βοηθήσει την αναγνώριση από τους ισχυρότερους δείκτες και να βελτιωθεί η κατανόηση της συμβολής του

CASP3

rs4862396 στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη.

ΒΜΡ5

κωδικοποιεί ένα μέλος της οικογενείας ΒΜΡ το οποίο ανήκει στην αυξητικού παράγοντα μεταμόρφωσης-β υπεροικογένειας. Δεδομένου BMPs είναι ισχυροί ρυθμιστές για ομοιόσταση των οστών και ο καρκίνος του προστάτη είναι πολύ πιθανό να μεταστάσεις στο οστό, υπάρχει ένα αυξανόμενο ενδιαφέρον για τη διερεύνηση των ρόλων των BMPs στην μετάσταση του προστάτη του οστού του καρκίνου. Τα επίπεδα έκφρασης διαφόρων ΒΜΡ στον καρκίνο του προστάτη έχουν συνδεθεί με την απόκτηση οστεογονικών χαρακτηριστικών και της εξέλιξης του όγκου στο οστό [32] – [34]. Επιπλέον, ενισχύσεις του

ΒΜΡ5

γονιδιακούς τόπους φάνηκε να είναι πιο διαδεδομένη σε όγκους με την υψηλότερη βαθμολογία Gleason και συνέβη στο 50% των όγκων του προστάτη, η οποία μπορεί να ευθύνονται για τα μη φυσιολογικά πρότυπα γονιδιακής έκφρασης των ΒΜΡ5 στον καρκίνο του προστάτη [ ,,,0],27]. rs3734444 βρίσκεται στο εξόνιο 1 του

ΒΜΡ5

γονίδιο. Αν και rs3734444 είναι ένα συνώνυμο SNP και δεν επηρεάζει αλληλουχία αμινοξέων, προβλέπεται να αλλάξει θέσεις δέσμευσης για την CP2 παράγοντα μεταγραφής και παράγοντα ενισχυτικό μυοκυττάρων 2Α. Επιπλέον, rs3734444 έχει επίσης προβλεφθεί για να εντοπίσει τις θέσεις δέσμευσης για εξονικές σιγαστήρα μάτισμα και ενισχυτή, οι οποίες παίζουν σημαντικό ρόλο στη συστατική και εναλλακτικό μάτισμα. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι θα μπορούσαν rs3734444, άμεσα ή έμμεσα, μέσω άλλων συνδέονται SNPs, έκφραση επιρροή ΒΜΡ5, η αλληλεπίδραση μεταξύ καρκινικών κυττάρων του προστάτη και μικροπεριβάλλον των οστών, και τελικά εξέλιξη σε μετάσταση στα οστά.

IRS2

κωδικοποιεί ένα μέλος μιας οικογένειας από ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες προσαρμογέα σηματοδότηση που συντονίζουν πολυάριθμα βιολογικά κλειδί εξωκυτταρικά σήματα εντός του κυττάρου, συμπεριλαμβανομένης της ινσουλίνης, ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας 1 (IGF1), ορμόνες, κυτοκίνες και οι ιντεγκρίνες. Μεταβολές στην έκφραση IRS έχουν συνδεθεί με όχι μόνο μεταβολικές ασθένειες, αλλά και πολλούς τύπους καρκίνου [35] – [37]. Κατά δέσμευσης συνδέτη, υποδοχέα ινσουλίνης και ΙΟΡ1 υποδοχέα είναι αυτοφωσφορυλιωμένη και παρούσες θέσεις σύνδεσης για IRSs, τα οποία φωσφορυλιώνονται από την κινάση τυροσίνης υποδοχέα. Η φωσφο-IRSs προσλαμβάνουν και ενεργοποιούν πολλούς μεταγενέστερους οδούς: τα δύο καλύτερα μελετημένα είναι η φωσφατιδυλινοσιτόλη 3-κινάση (PI3K) /φωσφατάση και tensin ομόλογο (PTEN) και τα εξωκυτταρικά μονοπάτια κινάσης σήμα-ρυθμίζεται. Η διαγραφή του

IRS2

έχει βρεθεί ότι καταστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη, του πολλαπλασιασμού και της εισβολής σε

ΡΤΕΝ

+/- ποντίκια με μείωση MYC έκφρασης και τη σύνθεση του DNA [28]. Ενώ ADT ελέγχει την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, συνδέεται επίσης με ένα μοτίβο μεταβολικών αλλαγών, όπως της υπερινσουλιναιμίας [38]. Αυτά τα υψηλά κυκλοφορούντα επίπεδα ινσουλίνης ορού έχει αποδειχθεί ότι δρα απευθείας επί CRPC κύτταρα και να ενισχύσουν

de novo

ανδρογόνων σύνθεση μέσω προς τα πάνω ρύθμιση του IRS2 και διάφορα κατάντη στεροειδογόνα ένζυμα [39]. rs7986346 βρίσκεται στην 15-kb πριν από το

IRS2

γονίδιο είχε προβλεφθεί να μεταβάλει σύνδεση με τις πρωτεΐνες γ από Portal Λειτουργία SNP CCAAT /ενισχυτή. Ως εκ τούτου, rs7986346 μπορεί να ρυθμίζουν την έκφραση IRS2 και επηρεάζουν προστάτη εξέλιξης του καρκίνου για να ευνουχίσει αντίσταση.

Εν κατακλείδι, η μελέτη αυτή ανάβει πολλά μονοπάτια για να επηρεάσουν την επιβίωση μετά από ADT, όπως

CASP3

στην απόπτωση,

ΒΜΡ5

στην ομοιόσταση των οστών και

IRS2

στη στεροειδογένεση, και την επιβίωση των κυττάρων.

CASP3

rs4862396,

ΒΜΡ5

rs3734444 και

IRS2

rs7986346 βρέθηκαν να είναι οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί δείκτες σε ασθενείς που λαμβάνουν ADT για τον καρκίνο του προστάτη. Είναι δείχνουν ότι, εκτός από τα υλικά που χρησιμοποιούνται σήμερα κλινικοπαθολογική προγνωστικούς παράγοντες, δοκιμή από τις τρεις SNPs μπορεί να βοηθήσει στον εντοπισμό των υποομάδες ασθενών που διατρέχουν υψηλότερο κίνδυνο για κακή έκβαση, βοηθώντας έτσι στην προσαρμογή επιμέρους θεραπευτικές παρεμβάσεις για προχωρημένο καρκίνο του προστάτη. Ωστόσο, η μελέτη αυτή εξακολουθεί να περιορίζεται από το μέγεθος του δείγματος στο υποσύνολο αναλύσεις και τις πολλαπλές συγκρίσεις. Επιπλέον, ομοιογενή πληθυσμό Κινέζοι Χαν μας μπορεί να κάνει τα ευρήματά μας λιγότερο γενικά σε άλλες εθνοτικές ομάδες. Περαιτέρω λειτουργικές αναλύσεις και μεγάλες ανεξάρτητες μελέτες και σε άλλες πληθυσμιακές ομάδες είναι απαραίτητες για να αξιολογηθεί η συνάφεια των παρατηρούμενων ενώσεων για την αποτελεσματικότητα της ADT για τον καρκίνο του προστάτη.

Υποστήριξη Μέθοδος Πληροφορίες

S1.

πρόσληψη των ασθενών και τη συλλογή δεδομένων.

doi: 10.1371 /journal.pone.0041219.s001

(DOC)

Πίνακα S1.

γονότυπος SNPs και οι

P

αξίες της σύνδεσής τους με το χρόνο έως την εξέλιξη, PCSM, ACM κατά τη διάρκεια του ADT.

doi: 10.1371 /journal.pone.0041219.s002

(DOC)

Πίνακας S2.

ολιγονουκλεοτίδια που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση γονότυπου.

doi: 10.1371 /journal.pone.0041219.s003

(DOC)

Πίνακα S3.

Διανομή κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικών και των ενώσεών τους με την εξέλιξη της νόσου, PCSM, και ACM σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που λαμβάνουν ADT.

doi: 10.1371 /journal.pone.0041219.s004

(DOC)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν με ευγνωμοσύνη την τεχνική υποστήριξη από το Εθνικό Κέντρο Γονιδιώματος Ιατρικής, Εθνικό Επιστήμης Συμβουλίου (NSC) της Ταϊβάν.