Αφηρημένο

Σκοπός

κασπάση 8 (CASP8) διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην το αποπτωτικό μονοπάτι και παρεκκλίνουσα ρύθμιση αυτής της οδού προκαλεί πολλές ασθένειες συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων. rs3834129 γενετικές παραλλαγές (CTTACT /-) και rs3769821 (T /C) στην περιοχή προαγωγέα του

CASP8

γονίδιο τεκμηριώθηκαν να συνδέονται με πολλαπλούς στερεών καρκίνων και μη-Hodgkin λέμφωμα (NHL), αντίστοιχα, παρά ορισμένων διαμάχες. Έχουμε ως στόχο να διακρίνουμε πιθανή συσχέτιση των δύο αυτών παραλλαγών και rs113686495 (CTGTCATT /-)., Καθώς και τα επίπεδα

CASP8

mRNA και η έκφραση της πρωτεΐνης με καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC) σε Κινέζους Χαν

Μέθοδοι

γονότυπου

CASP8

γενετικές παραλλαγές σε 305 ασθενείς με CRC και 342 υγιή άτομα από την Κουνμίνγκ, νοτιοδυτικά της Κίνας. Τα επίπεδα έκφρασης του

CASP8

mRNA και πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν ποσοτικά σε ζεύγη καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR και κηλίδα western, αντίστοιχα. Συγκρίναμε τις συχνότητες των αλληλόμορφων, γονοτύπων και απλοτύπων μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων. Συσχέτιση του

CASP8

επίπεδα mRNA και η έκφραση της πρωτεΐνης σε ζεύγη καρκινικών και paracancerous φυσιολογικούς ιστούς από ασθενείς με διαφορετικούς γονότυπους και την κλινική έκφραση αξιολογήθηκαν επίσης.

Αποτελέσματα

Δεν υπήρχε συσχέτιση των

CASP8

γενετικές παραλλαγές με CRC στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας. Η

CASP8

επίπεδα έκφρασης του mRNA του γονιδίου σε καρκινικά και paracancerous φυσιολογικούς ιστούς ήταν παρόμοια και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ασθενών με διαφορετικές γονότυπους και κλινικά χαρακτηριστικά. Ωστόσο, βρήκαμε ότι το επίπεδο της πρωτεΐνης CASP8 ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε καρκινικούς ιστούς από ό, τι σε ζεύγη paracancerous φυσιολογικούς ιστούς.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι τρεις

CASP8

γενετικές παραλλαγές μπορεί να δεν πρέπει να συνδέεται με CRC κινδύνου Κινέζων Χαν από την νοτιοδυτική Κίνα. Παρεκκλίνουσα έκφραση της πρωτεΐνης CASP8 μπορεί να παίζει ρόλο στην παθογένεση της CRC

Παράθεση:. Xiao M-S, Chang L, Λι W-L, Du Υ-S, Παν Y, Zhang D-F, et al. (2013) γενετικών πολυμορφισμών του

CASP8

Gene προαγωγός μπορεί να μην είναι συνδέεται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου σε Κινέζους Χαν από την Νοτιοδυτική Κίνα. PLoS ONE 8 (7): e67577. doi: 10.1371 /journal.pone.0067577

Επιμέλεια: Jirong Long, το Πανεπιστήμιο Vanderbilt, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 27 Μάρτη 2013? Αποδεκτές: 20 Μαΐου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 2 Ιούλη, 2013

Copyright: © 2013 Xiao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Πρόγραμμα Top ταλέντα της επαρχίας Γιουνάν (2009CI119), Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (30.925.021) και κινεζική Ακαδημία Επιστημών. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο διαδεδομένες καρκίνους σε όλο τον κόσμο, με ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών 30-65% [1]. Αν και η πλειοψηφία των CRC (σχεδόν 80%) είναι σποραδική [2], [3], περίπου 35% των ασθενών CRC μπορούν να αποδοθούν σε γενετικό υπόβαθρο σύμφωνα με τη μελέτη των μονοζυγωτικών διδύμων [3], υποδηλώνοντας ότι τόσο γενετικοί και περιβαλλοντικοί παράγοντες έχουν κεντρικό ρόλο στην παθογένεση της CRC. Πολλοί άνθρωποι εκτέθηκαν σε περιβαλλοντικούς παράγοντες κινδύνου, όπως το κάπνισμα [4], το πόσιμο [4], ανθυγιεινές διατροφικές συνήθειες και ο τρόπος ζωής [5], [6], αλλά μόνο μερικοί από αυτούς έπασχαν από CRC, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι γενετικές παραλλαγές καθορίζουν εν μέρει την ευαισθησία να CRC.

η απόπτωση, που ονομάζεται επίσης προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο, εμπλέκεται στη διατήρηση της ομοιόστασης των ιστών, την ανάπτυξη και την εξάλειψη των ανεπιθύμητων κυττάρων σε πολυκύτταρους οργανισμούς [7]. Δυσλειτουργία της διαδικασίας αυτής θα οδηγούσε σε ογκογένεση [8]. Ο αποπτωτικός κυτταρικός θάνατος προκαλείται από μια οικογένεια εντόνως διατηρημένη κασπασών (κυστεΐνη-εξαρτώμενη ασπαρτικό-ειδικές πρωτεάσες), το οποίο μπορεί να χωριστεί σε «εκκινητή» κασπάσες και «τελεστή» κασπάσες [9]. Υπάρχουν κυρίως δύο αποπτωτικά μονοπάτια στο ανθρώπινο:. η εξωγενής ή οδός μεσολάβηση υποδοχέα και η εγγενής ή μιτοχονδριακό μονοπάτι, τόσο απασχολούν κασπασών καταρράκτη [10], [11], [12]

κασπάσης 8, που κωδικοποιείται από η

CASP8

γονίδιο (το οποίο βρίσκεται στο χρωμόσωμα 2q33-q34 και έχει 14 εξόνια), λειτουργεί ως κασπάση εκκινητή στην αποπτωτική οδό και μια κρίσιμη άμυνα ενάντια κακοήθη πολλαπλασιασμό και την καρκινογένεση [7], [8] , [11], [13]. Ο πολυμορφισμός Indel, rs3834129 (CTTACT /-, γράφεται ως 6 bp /del στο ακόλουθο κείμενο), στην περιοχή του προαγωγέα του

CASP8

γονίδιο αναφέρθηκε ότι συνδέεται με ευπάθεια σε ένα ευρύ φάσμα καρκίνων συμπεριλαμβανομένων CRC στην κινεζική πληθυσμούς [14]. Αν και αυτή η παραλλαγή στη συνέχεια αναφέρθηκε ότι σχετίζεται με τον κίνδυνο των εργαζομένων του άνθρακα και των καρκίνων της ουροδόχου κύστης στην κινεζική πληθυσμούς [15], [16], η θετική συσχέτιση δεν ήταν επαναληφθεί στις επόμενες μεγάλης κλίμακας μελέτες ασθενών-μαρτύρων σε ευρωπαϊκές και αμερικανικές πληθυσμούς [17 ], [18]. Γονότυποι TC και CC ενός άλλου πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP), rs3769821 (T /C), η οποία επίσης βρίσκεται στην περιοχή του υποκινητή του

CASP8

γονίδιο, βρέθηκε ότι επηρεάζει τη γενετική ευαισθησία στις μη-Hodgkin λέμφωμα (NHL) σε μια συγκεντρωτική ανάλυση των τριών πληθυσμών από τις Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής και την Αυστραλία [19]. Ωστόσο, αυτό το θετικό αποτέλεσμα δεν επιβεβαιώθηκε στην πρόσφατη γενετική ανάλυση μας για την Κινέζων Χαν με NHL και δοκιμασία λουσιφεράσης [20].

Για να διακρίνουμε αν rs3834129 και rs3769821 συμβάλουν στην γενετική προδιάθεση για CRC σε Κινέζους Χαν από την νοτιοδυτική Κίνα, εμείς γονότυπος αυτών των δύο παραλλαγών, μαζί με rs113686495 (CTGTCATT /-, γράφεται ως 8 bp /del στο ακόλουθο κείμενο? που βρίσκεται στα 50 bp καθοδικά του rs3769821). Εμείς περαιτέρω ποσοτικοποιημένη επίπεδο έκφρασης του mRNA της

CASP8

γονιδίου τόσο καρκινικά και paracancerous φυσιολογικούς ιστούς των ασθενών CRC με διαφορετικούς γονότυπους για τον εντοπισμό δυνητικών επίδραση διαφορετικά αλληλόμορφα στη γονιδιακή έκφραση. Επιπλέον, συγκρίναμε τα επίπεδα mRNA σε ασθενείς CRC με διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά. Το επίπεδο της πρωτεΐνης CASP8 μετρήθηκε σε ζεύγη καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous από συνολικά 39 ασθενείς, μπορεί να συγκριθεί με το πρότυπο της έκφρασης mRNA. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το

CASP8

γενετικές παραλλαγές και το επίπεδο έκφρασης του mRNA ήταν απίθανο να σχετίζεται με το CRC στο Κινέζων Χαν. Ωστόσο, βρήκαμε ότι καρκινικούς ιστούς είχαν σημαντικά χαμηλότερο επίπεδο πρωτεΐνης CASP8 από paracancerous φυσιολογικούς ιστούς, γεγονός που υποδηλώνει ότι το δυναμικό μετα-μεταγραφική ρύθμιση αυτού του γονιδίου παίζει ενεργό ρόλο στην ανάπτυξη του CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Kunming Ινστιτούτο Ζωολογίας. Γραπτή ενημέρωσε συναινεί σύμφωνα με τις αρχές της Διακήρυξης του Ελσίνκι ελήφθησαν από κάθε συμμετέχοντα πριν από τη μελέτη.

Πληθυσμός μελέτης και δείγματα ιστών

Οι καρκινικοί ιστοί συλλέχθηκαν από 305 Κινέζων Χαν με CRC. Αυτοί οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στην Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο Κουνμίνγκ Ιατρικό Πανεπιστήμιο από το 2010 έως το 2011. Όλοι οι ασθενείς histopathogically επιβεβαιώθηκε ότι ήταν CRC και δεν έλαβε καμία ιατρική θεραπεία (εκτός από τις 12 ασθενείς) πριν από τη χειρουργική επέμβαση για την αφαίρεση του όγκου. Το στάδιο του καρκίνου που ταξινομούνται σύμφωνα με την 7η έκδοση του Καρκίνου AJCC Σταδιοποίηση Εγχειρίδιο [21]. Ελήφθησαν δείγματα αίματος από 342 υγιή άτομα (συμπεριλαμβανομένων 133 αναφερθεί σε προηγούμενη μελέτη μας [20]). Οι δημογραφικές πληροφορίες και ιστοπαθολογικών χαρακτηριστικών του CRC ασθενείς και υγιείς μάρτυρες φαίνονται στον Πίνακα 1. Συλλέξαμε επίσης paracancerous φυσιολογικούς ιστούς για ορισμένους ασθενείς? αυτό το φυσιολογικό ιστό βρισκόταν σε μια περιοχή πέντε εκατοστά αποτελούν μακριά το όριο του καρκινικού ιστού, και παθολογική εξέταση αυτού του ιστού έδειξε κανένα σημάδι των κακοηθών κυττάρων.

Η

γονοτυποποίηση τη Διοργανώτρια γενετικές παραλλαγές του CASP8 Gene

Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από καρκινικούς ιστούς των ασθενών CRC και δείγματα αίματος υγιών ελέγχων χρησιμοποιώντας πρότυπη μέθοδο φαινόλης /χλωροφορμίου. Ακολουθήσαμε την ίδια προσέγγιση και την κατάσταση που περιγράφεται στην προηγούμενη μελέτη μας για να γονότυπο τις τρεις γενετικές παραλλαγές στο

CASP8

περιοχή του υποκινητή [20]. Εν συντομία, η 6 bp /del και 8 bp /del πολυμορφισμοί προσδιορίστηκαν με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου (PAGE). SNP rs3769821 ήταν γονότυπος με δοκιμασία PCR-RFLP.

Ποσοτική RT-PCR για έκφραση mRNA CASP8

Ολικό RNA απομονώθηκε από ζεύγη καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous 99 ασθενείς CRC που δεν έλαβαν ακτινοθεραπεία και ή /και χημειοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση, χρησιμοποιώντας TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ένα μικρογραμμάριο ολικού RNA χρησιμοποιήθηκε για να συνθέσει cDNA μονής έλικας με χρήση ολιγο (dT) 18-μερές ως εκκινητή και MMLV αντίστροφης μεταγραφάσης (Promega, Madison, WI) σε τελικό όγκο αντίδρασης 25 μL. Εκκινητές CASP8-F (5′-GCAGAGGGAACCTGGTACAT-3 ‘) και CASP8-R (5′-TCATCCTTGTTGCTTACTTCATAG-3’) χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση

CASP8

μεταγραφές mRNA Α (GenBank αριθμός πρόσβασης NM_001228.4), Β (NM_033355.3), C (NM_033356.3), F (NM_001080124.1) και G (NM_001080125.1). Real-time PCR πραγματοποιήθηκε στο σύστημα πραγματικού χρόνου PCR IQ2 (Bio-Rad, Hercules, CA) με την SYBR

Προμίγματα Ex Taq

II (ΤΙΊ ΚΝάσηΗ Plus? TaKaRa, Οτσού, Σίγκα) και την ακόλουθη προϋπόθεση ενίσχυση: μια αρχική μετουσίωση στους 94 ° C για 3 λεπτά, ακολουθούμενη από 35 κύκλους των 94 ° C για 15 s, 50 ° C για 15 s, και 72 ° C για 20 s, και ένα τελικό κύκλο επέκτασης στους 72 ° C για 5 λεπτά. Η

GAPDH

(γλυκεραλδεϋδική 3-φωσφορική αφυδρογονάση) γονίδιο ενισχύθηκε για ομαλοποίηση. Χρησιμοποιήσαμε ζεύγος εκκινητών 5′-CAACTACATGGTTTACATGTTC -3 /5-GCCAGTGGACTCCACGAC-3 ‘και ίδιες παραμέτρους θερμικών κύκλων (εκτός από μια αλλαγή της θερμοκρασίας ανόπτησης στους 55 ° C) με εκείνη του

CASP8

γονιδίου σε ενισχύουν την

GAPDH

γονίδιο. Κάθε δείγμα έγινε σε δύο αντίγραφα.

Ανάλυση Western Blot για CASP8 Πρωτεΐνη

Οι ιστοί πλύθηκαν με ψυχρό ρυθμιστικό διάλυμα ACK για την εξάλειψη των ερυθρών αιμοσφαιρίων και είχαν πουρέ σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που παρέχεται με αναστολείς πρωτεάσης, χρησιμοποιώντας το σφαιρίδιο γουδοχέρι (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ). Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν με τη δοκιμασία BCA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Beyotime, Haimen, Jiangsu) χρησιμοποιώντας αλβουμίνη βόειου ορού ως πρότυπο. Είκοσι πέντε μικρογραμμάρια συνολικής πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν σε 15% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μία μεμβράνη PVDF (Roche Διάγνωση, Indianapolis, ΙΝ). Μετά τον αποκλεισμό με 5% άπαχο γάλα για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, μεμβράνη κηλιδώθηκε με αντισώματα αντι-κασπάση-8 αντίσωμα ποντικού (1:4000, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Η μεμβράνη πλύθηκε με TBST τρεις φορές για 10 λεπτά η κάθε μία, που ακολουθείται από επώαση με δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού IgG (1:10000, ΚΡί, Gaithersburg, MD) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Η μεμβράνη πλύθηκε με TBST όπως περιγράφεται παραπάνω και αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας Immobilon Western HRP (Millipore, Billerica, ΜΑ). Η β-ακτίνη ποσοστώθηκε σε κάθε δείγμα εξής ίδια διαδικασία χρησιμοποιώντας ποντικού αντι-β-ακτίνης αντίσωμα (1:100000, Zhongshan Goden Bridge Biotechnology Co, Ltd, Πεκίνο) για ομαλοποίηση. Η πυκνότητα της κάθε ζώνης πρωτεΐνης υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό J εικόνας (ΝΙΗ, Bethesda, MD).

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του προγράμματος Ε (έκδοση 2.11.1, Βιέννη , Αυστρία) και ένα

P

τιμή μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική. υπολογισμοί εξουσία πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού Quanto [22]. Απόκλιση από την ισορροπία Hardy-Weinberg (HWE) εκτιμήθηκε για κάθε παραλλαγή χρησιμοποιώντας το

χ

2-test (df = 1). Αλληλόμορφο συχνότητες των τριών παραλλαγών μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων συγκρίθηκαν επίσης με τη χρήση του

χ

2-test. Η αξία του κατά ζεύγη D ‘παραλλαγές σε όλη rs3834129, rs3769821 και rs113686495 στις περιπτώσεις και τους ελέγχους προσδιορίστηκαν από Haploview v4.2 [23]. Απλοτύπων και τη συχνότητά τους υπολογίστηκε με βάση την Bayesian μέθοδο χρησιμοποιώντας Φάση 2.1 [24]. Άνευ όρων ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό του λόγου πιθανοτήτων (OR) και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης (CI), για την εκτίμηση πιθανή συσχέτιση των διαφορετικών γονότυπων του rs3834129, rs3769821, και rs113686495 με CRC. Γονότυπους 6 bp /6 bp του rs3834129, rs3769821 ΤΤ, και del /del των rs113686495 και ο κύριος απλότυπος χρησιμοποιήθηκαν ως αναφορά προσαρμοστεί για την ηλικία (≤50 και & gt? 50 ετών) και των δύο φύλων. Αξιόπιστες

t-test

χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η διαφορά των

CASP8

τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων μεταξύ των δύο ομάδων. ANOVA χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνει το μέσο επίπεδο του

CASP8

γονιδιακή έκφραση μεταξύ των ομάδων περισσότερες από δύο.

Αποτελέσματα

Η έλλειψη σύνδεσης μεταξύ Τρεις γενετικές παραλλαγές του CASP8 Ανάδοχος και CRC

το μέγεθός μας δείγματος (305 ασθενείς έναντι 342 ελέγχων) σύμφωνα με συμφωνημένα σχεδιασμό case-control με λειτουργία κληρονομιά log-πρόσθετο είχε επαρκή στατιστική δύναμη για τη μελέτη σύνδεσης. Μεταξύ των τριών παραλλαγών που αναλύθηκαν στον πληθυσμό ελέγχου, ελάσσονα συχνότητα αλληλίου (MAF) κυμάνθηκε από 21,1% έως 26,7%. Λαμβάνοντας υπόψη MAF των 0.211, η στατιστική δύναμη να διακρίνει μια αναλογία πιθανοτήτων (OR) αξίας 1,5 για αλληλόμορφο κινδύνου αναμένεται να είναι 85%, ενώ η δύναμη για MAF των 0.267 αναμένεται να είναι 90%.

Η συχνότητες αλληλόμορφο του rs3834129, rs3769821, και rs113686495 του

CASP8

υποκινητή του γονιδίου σε περίπτωση και έλεγχο ομάδες που παρατίθενται στον πίνακα 2. διανομή γονότυπος όλων αυτών των παραλλαγών δεν παρέκκλινε από HWE. Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων για κάθε αλληλόμορφο του rs3834129, rs3769821, και rs113686495. Σημειώστε ότι υπήρχαν κάποιες μικρές διαφορές μεταξύ των συχνοτήτων των αλληλομόρφων των rs3834129 σε δείγματα μας και τα δείγματα CRC από Sun et al. [14] (Πίνακας 2), η οποία μπορεί να αντανακλά τις περιφερειακές διαφορές. Δεν υπήρχε συσχέτιση ορισμένων γονότυπου των τριών παραλλαγών με CRC (Πίνακας 3).

Η

Από rs3769821 παραλλαγές και rs113686495 ήταν σε ισχυρή ανισορροπία σύνδεσης και στους δύο πληθυσμούς περίπτωση και ελέγχου (Σχήμα 1) , έχουμε υποθέσει απλοτύπων βασίζονται σε παραλλαγές rs3834129 και rs3769821 μόνο και αξιολογούνται πιθανή συσχέτιση μεταξύ απλότυπος και του κινδύνου CRC. Ομοίως, παρατηρήσαμε καμία συσχέτιση απλότυπου με CRC (Πίνακας 4). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι οι γενετικές παραλλαγές στο

CASP8

περιοχή υποκινητή του γονιδίου δεν είχε πιθανότητες να προσδώσει μεγάλο κίνδυνο για CRC σε Κινέζους Χαν από την νοτιοδυτική Κίνα.

Οι αριθμοί μέσα στις πλατείες εμφανίζεται για το D ‘και r

2 αποτελέσματα (x100) για ζεύγη ανισορροπία σύνδεσης (LD) με ένα κόκκινο-σε-λευκό κλίση αντανακλώντας υψηλότερες σε χαμηλότερες βαθμολογίες LD.

η

CASP8 mRNA Έκφραση επίπεδα σε CRC ιστοί και οι αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί είναι παρόμοιες

για να εξεταστεί αν

CASP8

επίπεδα έκφρασης διαφέρουν μεταξύ των ασθενών και εντός συμφωνημένα κανονικά και δείγματα όγκου και στη συνέχεια να αντιμετωπιστεί κατά πόσον υπάρχει συσχέτιση με το γονότυπο , αναλύσαμε την

CASP8

επίπεδο έκφρασης mRNA σε ζεύγη καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous από 99 ασθενείς που δεν έλαβαν θεραπεία πριν από το χειρουργείο. Παρόμοια με αποτέλεσμα γονοτυπική, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά της

CASP8

επίπεδο mRNA είτε καρκινικές ή paracancerous φυσιολογικούς ιστούς σε ασθενείς με διαφορετικούς γονότυπους (Σχήμα 2). Σημειώστε ότι η έκφραση του mRNA σε ιστούς με γονότυπους del /del του rs3834129, CC του rs3769821, και 8 bp /8 bp του rs113686495 έδειξε μια σχετικά χαμηλότερη τιμή από εκείνες των άλλων γονότυπων (Σχήμα 2), και αυτό μπορεί να αποδοθεί σε μικρότερο αριθμό των ασθενών με αυτές τις γονότυπους αν δεν προκλήθηκαν από την cis-ρύθμιση δεδομένου ότι αυτά τα SNPs βρίσκονται στην περιοχή του υποκινητή του

CASP8

γονίδιο.

Μεταξύ των 99 χωρίς θεραπεία ασθενών που μετρήθηκε για το

CASP8

mRNA έκφραση, ένας ασθενής δεν θα πρέπει να θανατωθούν και αποκλείστηκε.

η

για την ανίχνευση πιθανής επίδρασης του

CASP8

γονίδιο για την παθογένεια και τα κλινικά χαρακτηριστικά της CRC, συγκρίναμε η

CASP8

επίπεδα έκφρασης του mRNA σε καρκινικούς ιστούς και paracancerous φυσιολογικούς ιστούς σε όλους τους ασθενείς, αλλά παρατηρήθηκε καμία σημαντική διαφορά (

P

= 0,102? Σχήμα 3α). Ομοίως, η

CASP8

έκφραση mRNA σε καρκινικούς ιστούς από ασθενείς με διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά δεν έδειξε σημαντική διαφορά (σχήματα 3b, c, d, e, f). Καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous από ασθενείς σε διαφορετικά στάδια ανάπτυξης και εξέλιξης του καρκίνου είχε ένα παρόμοιο επίπεδο

CASP8

έκφραση mRNA (Σχήμα 4), αν και καρκινικούς ιστούς από ασθενείς στο στάδιο Τ4 είχαν οριακά σημαντική υψηλότερη έκφραση του mRNA από σε συνδυασμό paracancerous φυσιολογικούς ιστούς (

P

= 0,045? Σχήμα 4γ). Προφανώς, η

CASP8

επίπεδο έκφρασης του mRNA του γονιδίου δεν ήταν στενά συνδεδεμένο με το CRC στους ασθενείς μας.

Η σταδιοποίηση TNM ταξινομήθηκε σύμφωνα με την 7η έκδοση του Καρκίνου AJCC Σταδιοποίηση Εγχειρίδιο [21], και η τοποθεσία και τη διαφοροποίηση των καρκινικών ιστών προσδιορίστηκαν με χειρουργικές και ιστοπαθολογική εξέταση, αντίστοιχα. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά του

CASP8

έκφραση mRNA σε καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous από όλους τους 99 ασθενών (α). Η

CASP8

έκφραση mRNA σε καρκινικούς ιστούς από ασθενείς με διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά δεν έδειξε σημαντική διαφορά (β-ί). Α-παχέος εντέρου, T-παχέος εντέρου, D-παχέος εντέρου και του ορθού σταθεί για αύξουσα παχέος εντέρου, εγκάρσιο κόλον, φθίνουσα παχέος εντέρου και του ορθού, αντίστοιχα.

Η

Η σταδιοποίηση TNM ταξινομήθηκε σύμφωνα με την 7η έκδοση του Καρκίνου AJCC σταδιοποίηση Εγχειρίδιο [21].

η

CASP8 πρωτεΐνη Επίπεδο μειώθηκε σημαντικά σε καρκινικούς ιστούς Συγκρίνοντας με Paired Paracancerous Κανονική ιστοί

Πολλά γονίδια ρυθμίζονται μέσω μιας μετα-μεταγραφικό μηχανισμό, π.χ. αυξορρύθμιση του πλακούντα αυξητικού παράγοντα από αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα στα ενδοθηλιακά κύτταρα [25]. Για να διερευνήσουν κατά πόσον η

CASP8

γονίδιο έχει ένα ρόλο στην ανάπτυξη CRC μέσω μιας μετα-μεταγραφικής ρύθμισης, επιλέξαμε ζεύγη καρκινικών και paracancerous φυσιολογικούς ιστούς από 39 ασθενείς με διαφορετικές

CASP8

γονότυπους υποκινητή, έκφραση του mRNA και ποσοτικά το επίπεδο έκφρασης της πρωτεΐνης (Πίνακας S1). Παρατηρήσαμε ένα σημαντικά χαμηλότερο επίπεδο της CASP8 πρωτεΐνης σε καρκινικούς ιστούς από paracancerous ιστούς (

P

= 0,005), αν και η

CASP8

επίπεδα mRNA σε αυτά τα δείγματα ήταν παρόμοια (

P

= 0,464, Εικόνα 5).

Ο γονότυπος και κλινικές πληροφορίες για αυτούς τους ασθενείς παρατίθενται στον πίνακα S1.

Η

Συζήτηση

κασπάση 8 (

CASP8

) είναι ένα πολύ γνωστό προμηθευτής του σήματος θανάτου στο αποπτωτικό μονοπάτι που εμπλέκονται στη διέγερση του υποδοχέα του θανάτου, διαπερατότητα της εξωτερικής μιτοχονδριακής μεμβράνης και την απελευθέρωση των προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών στο κυτταρόπλασμα από μιτοχόνδρια [26]. Δρα ως κρίσιμο άμυνα ενάντια κακοήθη πολλαπλασιασμό και την καρκινογένεση [7], [10], [27]. Προηγούμενες μελέτες έχουν παρουσιάσει αντικρουόμενα αποτελέσματα σχετικά με τον πιθανό ρόλο των γενετικών παραλλαγών στο

CASP8

περιοχή υποκινητή του γονιδίου σε ογκογένεση [14], [15], [16], [17], [18], [20] [28], [29], [30]. Σε μια πρωτοποριακή μελέτη, η γενετική παραλλαγή (rs3834129) στο

CASP8

περιοχή του υποκινητή συνδέθηκε με ένα ευρύ φάσμα των στερεών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων των πνευμόνων, του οισοφάγου, του στομάχου, του παχέος εντέρου, του τραχήλου της μήτρας και καρκίνου του μαστού στην κινεζική πληθυσμούς επηρεάζοντας το θέση δέσμευσης Sp1 παράγοντα μεταγραφής και το

CASP8

γονιδιακής έκφρασης [14]. Αυτό το αρχικό εύρημα επιβεβαιώθηκε σε επόμενες μελέτες συσχέτισης ασθενών-μαρτύρων σε ανεξάρτητη κινεζική δείγματα με καρκίνο της ουροδόχου κύστης [16] και πνευμονοκονίαση εργαζομένων άνθρακα »[15]. Ωστόσο, αρκετές άλλες αναφορές απέτυχαν να αναπαράγουν τη σχέση μεταξύ αυτού του 6 bp /ντελ πολυμορφισμό και πολλαπλών μορφών καρκίνου σε διαφορετικούς πληθυσμούς [18], [30], [31], [32]. Αυτά τα αντιφατικά αποτελέσματα μπορεί να εξηγηθεί από διαφορετικό γενετικό υπόβαθρο των πληθυσμών στις διάφορες μελέτες [33], καθώς η συχνότητα των 6-bp del αλληλόμορφο ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ της Ασίας και του Καυκάσου πληθυσμού (22,4% έναντι 49,1%) [32], [34 ]. Σε μια πρόσφατη μελέτη, Lan και συνεργάτες [19] στοιχεία που αποδεικνύουν ότι ένα άλλο rs3769821 SNP στο

CASP8

περιοχή του υποκινητή συσχετίστηκε σημαντικά με γενετικό κίνδυνο NHL. Ωστόσο, δεν καταφέραμε να αναπαράγουν αυτό το αποτέλεσμα σε Κινέζων Χαν με NHL και δοκιμασία κυτταρικής λουσιφεράσης δεν έδειξε διαφορά της περιοχής του υποκινητή που περιέχουν διαφορετικά αλληλόμορφα [20]. Μέχρι σήμερα, αν η

CASP8

έκφραση του γονιδίου θα μπορούσε να επηρεάσει την παθογένεια της CRC εξακολουθεί να είναι αμφιλεγόμενη [35], [36], [37]. Υπάρχει μια ανάγκη να επανεκτιμήσουν τη δυνητική επίδραση των παραλλαγών υποκινητή και την έκφραση του

CASP8

γονίδιο για CRC.

Σε αυτή τη μελέτη, αναλύοντας τους ασθενείς CRC από Kunming, επαρχία Γιουνάν, σκοπεύαμε να να απαντήσει κατά πόσον η

CASP8

γονίδιο εμπλέκεται ενεργά στην ανάπτυξη της CRC. Εμείς διαλογή πρώτα τρία γενετικές παραλλαγές στο

CASP8

γονιδιακή περιοχή προαγωγέα, κατά την οποία δύο έχουν αναφερθεί ότι συνδέονται με συμπαγείς όγκους (rs3834129? [14]) και NHL (rs3769821? [19]). Στη συνέχεια ποσοτικά το

CASP8

επίπεδο mRNA σε ζεύγη καρκινικών και φυσιολογικών ιστών paracancerous να διακρίνει περαιτέρω το δυναμικό συσχέτιση μεταξύ του

CASP8

γονότυπους και την έκφραση του mRNA. Βρήκαμε καμία συσχέτιση του

CASP8

υποστηρικτής παραλλαγές με CRC στα δείγματα υπόθεση και ελέγχου (Πίνακες 2 και 3). Επιπλέον, δεν βρήκαμε καμία στατιστικά σημαντική διαφορά του

CASP8

επίπεδο του mRNA σε ασθενείς με διαφορετικούς γονότυπους (Σχήμα 2). Αυτά τα αρνητικά αποτελέσματα ήταν σύμφωνα με τις προηγούμενες δοκιμασία μας λουσιφεράσης [20], στην οποία παρατηρήθηκε καμία διαφορά για φορείς με διαφορετικά αλληλόμορφα στο

CASP8

υποκινητή.

Τα διαθέσιμα κλινικά δεδομένα για τους ασθενείς μας πρόσφερε μια ευκαιρία για την αξιολόγηση της συσχέτισης μεταξύ του

CASP8

γονιδιακή έκφραση και την ανάπτυξη της CRC. Με την ομαδοποίηση των ασθενών σύμφωνα στάδιο του όγκου, την κατάσταση της μετάστασης, και της διαφοροποίησης, βρήκαμε καμία σημαντική διαφορά από το

CASP8

επίπεδα έκφρασης του mRNA μεταξύ καρκινικούς και φυσιολογικούς ιστούς paracancerous και μεταξύ ασθενών με διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά (Σχήματα 3 και 4), γεγονός που υποδηλώνει ότι η

CASP8

έκφραση mRNA δεν μπορεί να παίξει καθοριστικό ρόλο στην CRC. Παρόμοια με το εύρημα μας, Pan et al. [36] Επίσης, δεν εντόπισε καμία σημαντική διαφορά του

CASP8

επίπεδα mRNA σε φυσιολογικό βλεννογόνο, πολύποδες, και CRC. Ωστόσο, σε αντίθεση με δύο προηγουμένως αναφερθείσες μελέτες ότι το

CASP8

έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά κατά τη διάρκεια του παχέος καρκινογένεση [35], [37], δείξαμε ότι το επίπεδο της πρωτεΐνης CASP8 σε καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη των ζευγών paracancerous φυσιολογικούς ιστούς (Εικόνα 5). Η ασυνάρτητη μοτίβο των επιπέδων

CASP8

mRNA και η έκφραση της πρωτεΐνης σε αυτή τη μελέτη πρότεινε ότι μια μετα-μεταγραφική ρύθμιση, όπως η υπερβολική ουβικιτίνης της CASP8 πρωτεΐνης στον ιστό του όγκου ή /και ρύθμισης miRNA, μπορεί να διαδραματίσει καθοριστικό ρόλο στην η ανάπτυξη της CRC. Περαιτέρω χαρακτηρισμός θα πρέπει να γίνεται στο μέλλον να στερεοποιηθεί αυτή η κερδοσκοπία.

Η μελέτη μας είχε αρκετούς περιορισμούς. Πρώτον, το μέγεθος του δείγματος (305 περιπτώσεις και 342 μάρτυρες) για την ανάλυση σύνδεσης ήταν σχετικά μικρή και μόνο τρεις παραλλαγές στην περιοχή προαγωγέα του

CASP8

γονίδιο γονότυπος, πράγμα που δεν θα μπορούσε να έχει επαρκή ισχύ για την ανίχνευση των επιδράσεων υποθέτοντας μια σχετικά χαμηλή αναλογία πιθανοτήτων. Περαιτέρω μελέτες με μεγαλύτερο αριθμό δειγμάτων και περισσότερες γενετικές παραλλαγές, είναι σημαντικό να ελέγξει το συμπέρασμά μας. Δεύτερον, αναλύσαμε μόνο

CASP8

έκφραση mRNA και πρωτεΐνης σε μία υποομάδα ασθενών CRC. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, παρατηρήσαμε μια μειωμένη έκφραση εντός ορισμένων γονότυπους (Σχήμα 2). Περισσότεροι ασθενείς θα πρέπει να αναλυθούν για να αποκλείσει οριστικά η πιθανή προκατάληψη που προκαλείται από μικρό αριθμό ασθενών σε αυτές τις ομάδες. Τρίτον, δεν είχαμε πάρει όλα τα

CASP8

/μεταγραφές πρόδρομοι σε αυτή τη μελέτη. μέτρηση μας για

CASP8

μεταγραφές mRNA A, B, C, G και G σε μία δοκιμασία δεν μπορούσε να διακρίνει ποιες μεταγραφής παίζει σημαντικό ρόλο στον ιστό του ενδιαφέροντος. Τέλος, δεν είχαμε μετάλλαξη οθόνη στην περιοχή κωδικοποίησης του

CASP8

γονίδιο. Παραμένει άγνωστο αν συγκεκριμένο μεταλλαγμένο CASP8 θα επηρεάσει CRC ανάπτυξης. Kim και συνεργάτες [38] ανέφεραν ότι η παρουσία μεταλλάξεων στο

CASP8

γονίδιο που κωδικοποιεί την περιοχή θα μπορούσαν να προκαλέσουν δυσλειτουργία του αποπτωτικό μονοπάτι, το οποίο μπορεί να συμβάλει τελικά στην ανάπτυξη του CRC.

Συλλογικά, εμείς εικάζουν ότι το

CASP8

γονίδιο θα μπορούσε να ξεκινήσει την ανάπτυξη και την εξέλιξη της CRC, εάν υπάρχει, μέσω της ρύθμισης του επιπέδου της πρωτεΐνης ή /και κωδικοποίησης λειτουργική μετάλλαξη (ες) περιοχή, αντί της έκφρασης του mRNA.

Συμπεράσματα

Βρήκαμε ότι rs3834129 γενετικές παραλλαγές, rs3769821, και rs113686495 στο

CASP8

περιοχή υποκινητή δεν συνδέονται με τη γενετική προδιάθεση για CRC σε Κινέζους Χαν από την Νοτιοδυτική Κίνα. Περαιτέρω αναλύσεις του

CASP8

γονιδιακής έκφρασης σε καρκινικούς και paracancerous ιστών δεν έδειξε συσχέτιση του επιπέδου έκφρασης του mRNA με διαφορετικούς γονότυπους και την πρόοδο της CRC. Ωστόσο, βρήκαμε ότι η πρωτεΐνη CASP8 ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με ζεύγη paracancerous φυσιολογικούς ιστούς, αν και τα δύο δείγματα είχαν παρόμοια επίπεδα έκφρασης του mRNA. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η παρεκκλίνουσα έκφραση ή /και η δυσλειτουργία της πρωτεΐνης CASP8 θα διαδραματίσει ενεργό ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη της CRC. Ανεξάρτητη πληθυσμού με μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος και λειτουργικές δοκιμασίες που απαιτούνται για να επιβεβαιώσουν περαιτέρω τα ευρήματά μας.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

γονότυπου και παθολογικές πληροφορίες για 39 ασθενείς που αναλύθηκαν για την έκφραση της πρωτεΐνης CASP8

doi:. 10.1371 /journal.pone.0067577.s001

(DOC)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε ασθενών για τη δωρεά ιστών. Ευχαριστούμε επίσης τους δύο ανώνυμους κριτές για τις εποικοδομητικές παρατηρήσεις τους.