Αφηρημένο

Ιστορικό

αντίδραση του όγκου-στρώματος σχετίζεται με την ενεργοποίηση των ινοβλαστών. Nemosis είναι ένας νέος τύπος ενεργοποίησης ινοβλαστών. Οδηγεί σε αυξημένη παραγωγή των αυξητικών παραγόντων και προφλεγμονωδών και πρωτεολυτικά πρωτεΐνες, ενώ την ίδια στιγμή οι πρωτεΐνες του κυτταροσκελετού είναι υποβαθμισμένη. Εδώ χρησιμοποιείται σε συνδυασμό φυσιολογικούς ινοβλάστες του δέρματος και του καρκίνου που σχετίζονται με ινοβλάστες (ΚΠΑ) και της πρωτοβάθμιας και υποτροπιάζουσες κύτταρα του στόματος πλακωδών κυττάρων καρκίνωμα (SCC) για να μελετήσει την απάντηση nemosis.

Κύρια Ευρήματα

ινοβλαστών nemosis ήταν αναλύθηκε με πρωτεΐνη και η έκφραση του γονιδίου και την παρακρινή ρύθμιση με δοκιμασία σχηματισμού αποικίας. Μία από τις κανονικές ινοβλαστών στελέχη, FB-43, ρυθμίζεται προς τα πάνω COX-2 σε nemosis, αλλά FB-74 κύτταρα δεν το έκανε. Σε αντίθεση, CAF-74 σφαιροειδή εκφράζεται COX-2, αλλά CAF-43 κύτταρα δεν το έκανε. Άλφα-SMA πρωτεΐνη εκφράστηκε στα δύο στελέχη CAF και FB-74 κύτταρα, αλλά όχι σε FB-43 ινοβλαστών. τα επίπεδα του mRNA ήταν προς τα κάτω σε nemosis, αλλά οι CAFS άρχισε να ανακτήσει την έκφραση. FSP1 mRNA ήταν προς τα κάτω σε φυσιολογικούς ινοβλάστες και CAF-74 κύτταρα, αλλά όχι σε CAF-43 ινοβλαστών. Σερίνη πρωτεάση FAP ρυθμίζεται αυξητικά σε όλες τις ινοβλάστες, πολύ περισσότερο σε nemotic CAFS. VEGF, HGF /SF και FGF7 mRNA επίπεδα ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε διαφορετικό βαθμό σε nemosis. CAFS αύξησε το σχηματισμό αποικίας πρωτογενών καρκινικών κυτταρικών σειρών UT-SCC-43Α και UT-SCC-74Α, αλλά κανονική ινοβλάστες ανέστειλε την αγκύρωση-ανεξάρτητη ανάπτυξη των επαναλαμβανόμενων κύτταρα UT-SCC-43Β και UT-SCC-74Β.

Συμπεράσματα

ανταπόκριση Nemosis, όπως παρατηρείται από την COX-2 και παράγοντα ανάπτυξης επαγωγής, και η έκφραση των δεικτών CAF α-SMA, FSP1 και FAP, ποικίλλει μεταξύ των πληθυσμών των ινοβλαστών. Η έκφραση των δεικτών CAF διαφέρει μεταξύ των κανονικών ινοβλαστών και CAFS σε nemosis. Τα αποτελέσματα αυτά υπογραμμίζουν την ετερογένεια των ινοβλαστών και των εξελισσόμενων όγκων-προώθηση ιδιότητες του CAFS

Παράθεση:. Ρασάνεν K, Virtanen Ι, Salmenperä P, Grenman R, Vaheri Α (2009) Οι διαφορές στην Nemosis απόκριση φυσιολογικών και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες από ασθενείς με από του στόματος πλακώδες καρκίνωμα. PLoS ONE 4 (9): e6879. doi: 10.1371 /journal.pone.0006879

Επιμέλεια: Immo Α Hansen, State University New Mexico, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 9 του Ιουνίου, 2009? Αποδεκτές: 6, Αυγούστου του 2009? Δημοσιεύθηκε: 1 Σεπτεμβρίου, 2009

Copyright: © 2009 Ρασάνεν et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από Πολιτιστικό Ίδρυμα της Φινλανδίας, Magnus Ίδρυμα Ehrnrooth, το φινλανδικό Ίδρυμα Diabetes Research, EVO Research Grant, φινλανδική Καρκίνο Οργανώσεις και η Ακαδημία της Φινλανδίας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μικροπεριβάλλον του όγκου και παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου και ινοβλάστες είναι γνωστό ότι είναι τα βασικά συστατικά του στρώματος του όγκου. Πρόσφατα έχει προταθεί ότι τα στρωματικά ινοβλάστες αναστέλλουν αρχικά πρώιμα στάδια της καρκινογένεσης και αργότερα υπό την παρακρινή επίδραση του μετασχηματισμένου επιθηλίων ενεργοποιούνται οδηγεί στην προώθηση της ανάπτυξης του καρκίνου. Η εξάρτηση της καρκινωμάτων επί στρωματικών ινοβλαστών μειώνεται καθώς ο καρκίνος εξελίσσεται, εν μέρει μέσω ενός διακόπτη σε επιθηλιακά κύτταρα από παρακρινής να αυτοκρινή ρύθμιση [1], [2]. Μεταξύ των ενεργοποιημένων ινοβλαστών είναι καρκίνος που σχετίζεται με ινοβλάστες (CAF), που χαρακτηρίζονται από αυξημένη μιτωτικό δείκτη, μεταλλάξεις σε γονίδια καταστολέα όγκου όπως ρ53 και από την αυξημένη έκκριση των αυξητικών παραγόντων, των χημειοκινών και των συστατικών του εξωκυτταρικού πλέγματος (ECM) [2], [3], οι αλλαγές που όλοι εμπλέκονται στην εισβολή και ανάπτυξη όγκου [4] .Widely χρησιμοποιούνται δείκτες CAF περιλαμβάνουν α-λείου μυός ακτίνη (α-SMA), ινοβλαστών ειδική πρωτεΐνη 1 (FSP1, επίσης γνωστή ως S100A4) και πρωτεΐνη ενεργοποίησης ινοβλαστών (FAP, επίσης γνωστή ως seprase) [5]. α-SMA, ένα συστατικό του κυτταρικού σκελετού, είναι το πιο συχνά χρησιμοποιούμενος δείκτης για ενεργοποιημένων ινοβλαστών. Γίνεται ενσωματωθεί ίνες στρες έτσι αυξάνοντας τη συσταλτική δραστηριότητα των ινοβλαστών [6]. FSP1 ανήκει στην S100 υπερ-οικογένειας των πρωτεϊνών δέσμευσης ασβεστίου. Προάγει την ανάπτυξη του όγκου με τον έλεγχο της προόδου του κυτταρικού κύκλου και κυτταροσκελετική ακεραιότητα [7]. FAP είναι μια πρωτεάση σερίνης που δεν εκφράζεται σε φυσιολογικούς ιστούς ενηλίκου, αλλά η έκφρασή του επάγεται σε ενεργοποιημένα ινοβλάστες ανταποκρίνεται στην επούλωση τραυμάτων και όγκων στρώματος αντίδραση [8]. Ωστόσο, είναι αποδεδειγμένο ότι οι ινοβλάστες είναι ετερογενείς [9], [10] και ότι CAFS διαφορετικά εκφράζουν αυτούς τους δείκτες [11], [12].

Nemosis, ένα φαινόμενο της ενεργοποίησης των ινοβλαστών (για επισκόπηση βλέπε Vaheri et al. 2009 [13]), έχει προηγουμένως μελετηθεί χρησιμοποιώντας κανονικό δερματικούς ινοβλάστες [14] – [19]. Ο σχηματισμός ενός σφαιροειδούς ινοβλαστών προκαλεί μυριάδες γονίδια να εκφράζονται διαφορικά σε αυτά τα ενεργοποιημένα ινοβλάστες. Δύο διακριτές μορφές μπορεί να βρεθούν στην έκφραση: i) έκφραση των αυξητικών παραγόντων και η πρωτεολυτική και προφλεγμονωδών πρωτεϊνών αυξάνεται και ii) την έκφραση των συστατικών κυτταροσκελετικών μειώνεται. Με βάση προηγουμένως δημοσιευμένα αποτελέσματα, της κυκλοοξυγενάσης-2 (COX-2), που είναι γνωστό ότι σχετίζονται με τη φλεγμονή και τα πρώτα στάδια της καρκινογένεσης, και παράγοντα ανάπτυξης ηπατοκυττάρου /παράγοντα διασποράς (HGF /SF), η οποία έχει δειχθεί ότι προάγει κύτταρο όγκου εισβολής, έχουν θεωρηθεί σήμα κατατεθέν πρωτεΐνες nemosis. Αυθόρμητη ομαδοποίηση των ινοβλαστών σε σφαιροειδή μπορεί επίσης να προκληθεί από ρυθμισμένο μέσο των κυττάρων του όγκου [14], [15]. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι η καλλιέργεια ινοβλαστών σφαιροειδή υπό την επίδραση της καλοήθους HaCaT κερατινοκύτταρα αναστέλλει nemosis, όπως φαίνεται από κατασταλεί έκφραση της COX-2, ενώ κακοήθη HaCaT κύτταρα έχουν ένα nemosis αποτέλεσμα προαγωγής επί φυσιολογικούς ινοβλάστες, που εκδηλώνεται ως αυξημένη αυξητική ρύθμιση για την COX-2 , HGF /SF και VEGF (αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα) [17].

Κεφάλι και ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα τραχήλου (HNSCC) είναι η έκτη πιο συχνή κακοήθεια σε όλο τον κόσμο και η συνολική επιβίωση των ασθενών είναι κακή. Αυτό οφείλεται κυρίως στα υψηλά ποσοστά υποτροπής του καρκίνου και των τοπικών εισβολή, εν μέρει προκαλείται από μεταλλάξεις του γονιδίου ρ53, η οποία μπορεί να βρεθεί σε περισσότερο από το 70% των HNSCCs [20], [21]. Χειρουργική και ακτινοθεραπεία είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη σειρές θεραπείας και επί του παρόντος το μόνο εγκεκριμένο μοριακή στοχευμένη θεραπεία για καρκίνο κεφαλής και τραχήλου είναι το cetuximab (Erbitux? ImClone Systems Inc., New York, ΝΥ), ένα μονοκλωνικό αντίσωμα αναστολέα του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα ( EGFR). Ωστόσο, δεν είναι όλοι οι ασθενείς HNSCC επωφελούνται από θεραπείες που στοχεύουν EGFR, αφού υπερέκφραση, αλλά όχι μετάλλαξη φαίνεται να προσδιοριστεί η ανταπόκριση στη θεραπεία. 3 δοκιμές Φάσης για HNSCC βρίσκονται σε εξέλιξη για τη στόχευση VEGF (Bevacizumab, αναστολέας μονοκλωνικό αντίσωμα) και p53 (INGN 201, γονιδιακή θεραπεία) [22], [23]. Ένας άλλος πιθανός στόχος είναι COX-2 που έχει βρεθεί να είναι αυξημένα σε στοματικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (OSCC) και έχει αποδειχθεί ότι μειώνει την ραδιοευαισθησία του όγκου [24]. Μελέτες που χρησιμοποιούν συμφωνημένα στελέχη κυττάρων ασθενών έδειξαν ότι υπάρχει συσχέτιση σε radiosensitivities μεταξύ των κυττάρων OSCC, δερματικοί ινοβλάστες και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες που συλλέγονται από το ίδιο άτομο και ότι αυτές οι ατομικές διαφορές στην ραδιοευαισθησία μπορούσε να προβλέψει την έκβαση της ακτινοθεραπείας [25], [ ,,,0],26].

με βάση τα προηγούμενα αποτελέσματα ότι κάτω από την επίδραση των κακοήθων κυττάρων κανονικής nemotic ινοβλάστες αρχίζουν να μοιάζουν με CAFS, ο στόχος της παρούσας εργασίας ήταν να μελετηθεί η ανταπόκριση nemosis αυτόλογου δέρματος και του καρκίνου που σχετίζονται με ινοβλάστες, για να συγκρίνουν την έκφραση των δεικτών CAF μεταξύ αυτών των ινοβλαστών στελεχών και η μοίρα τους σε nemosis και να ερευνήσει το πώς αυτές οι διαφορετικοί πληθυσμοί των ινοβλαστών επηρεάζουν τον ασθενή-συμφωνημένα στόματος κύτταρα SCC. Η μελέτη μας δείχνει ότι τόσο φυσιολογικά και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες παρουσιάζουν διακύμανση μεταξύ των ατόμων, θεωρείται ως μεταβολή των βασικών επιπέδων έκφρασης CAF και διαφορετικές αποκρίσεις παράγοντα ανάπτυξης σε nemosis, και έχουν μια διαφορική επίδραση επί των κυττάρων SCC. Η συμπεριφορά των υπό μελέτη δεικτών ΚΠΑ σε nemosis ακολούθησε τη γενική απάντηση nemosis: κυτταροσκελετού α-SMA και FSP1 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω και πρωτεολυτική FAP ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω. Η μόνη εξαίρεση ήταν ένα από τα στελέχη ΚΠΑ που απορυθμίζεται FSP1 στην nemosis. Σημαντικές συστηματικές διαφορές μεταξύ των κανονικών και του καρκίνου που σχετίζεται με ινοβλάστες η μειωμένη βασικά επίπεδα αυξητικών παραγόντων σε CAFS και η ικανότητα του nemotic CAFS να αρχίσει να ανακτήσει την έκφραση α-SMA και την αυξημένη έκφραση FAP σε nemosis σύγκριση με τα φυσιολογικά αντίστοιχά τους.

Αποτελέσματα

Διαφορετικοί πληθυσμοί των ινοβλαστών παρουσιάζουν διαφορές ως απάντηση σε nemosis

Κατ ‘αρχάς θα θέλαμε να διερευνήσει την έκφραση του χρησιμοποιήθηκε προηγουμένως δείκτη nemosis COX-2 στους τέσσερις πληθυσμούς των ινοβλαστών. Δεν υπήρξε καμία βασική έκφραση COX-2 σε οποιοδήποτε από τα στελέχη ινοβλαστών, και δεν προκλήθηκε σε μονοστρωματική καλλιέργεια. Ωστόσο, όταν καλλιεργείται ως σφαιροειδή τις κανονικές ινοβλάστες FB-43 άρχισαν να εκφράζουν COX-2 μετά από 48 ώρες (Σχήμα 1Α), αλλά αυτό δεν παρατηρήθηκε στις άλλες κανονικές ινοβλάστες στέλεχος FB-74 (Σχήμα 1 C). Απέναντι αποτελέσματα παρατηρήθηκαν με τις σχετιζόμενες με καρκίνο ινοβλάστες, όπου δεν COX-2 εκφράστηκε στα CAF-43 σφαιροειδή ινοβλαστών (Εικόνα 1Β) αλλά τα κύτταρα CAF-74 άρχισαν να εκφράζουν COX-2 μετά από 24 ώρες (Σχήμα 1 D). Τα αποτελέσματα διαφέρουν από τα προηγουμένως δημοσιευτεί και δείχνουν ότι η COX-2 δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται αποκλειστικά και μόνο για τη μέτρηση της απόκρισης nemosis.

Οι ινοβλάστες αναπτύχθηκαν ως σφαιροειδή ή μονοστοιβάδα για το χρονικό διάστημα που αναφέρεται. (Α) FB-43 σφαιροειδή άρχισαν να παράγουν COX-2 μετά από 48 ώρες και όχι α-SMA παρήχθη, ενώ CAF-43 κύτταρα (Β) δεν προκάλεσε COX-2, αλλά εκφράζεται α-SMA. Τόσο FB-74 (C) και CAF-74 (D) που παράγεται α-SMA, αλλά COX-2 επάγεται μόνο σε CAF-74 σφαιροειδή. Όλοι οι τύποι ινοβλάστες εξέφρασε ίσες ποσότητες βιμεντίνης. (Ε) Όλα τα κύτταρα UT-SCC εξέφρασε COX-2, αλλά μόνο 74Α και 74Β έδειξαν προκαλείται από τα επίπεδα ρ53.

Η

Εξετάσαμε επίσης τα επίπεδα της πρωτεΐνης της βιμεντίνης και α-SMA σε αυτά τα κύτταρα. Και οι τέσσερις ινοβλαστών πληθυσμούς που εκφράζονται vimentin σε ίσες ποσότητες, όπως αναμενόταν, αφού ινοβλάστες

in vitro

θεωρούνται ότι είναι σε μια κατάσταση που μοιάζουν με την επούλωση των πληγών. Και τα δύο στελέχη CAF εκφράζεται α-SMA, CAF-74 λίγο περισσότερο από το ΚΠΑ-43. Είναι ενδιαφέρον ότι, και τα φυσιολογικά κύτταρα FB-74 εκφράζεται α-SMA, αλλά καμία έκφραση πρωτεΐνης ανιχνεύθηκε στο άλλο στέλεχος κανονική ινοβλαστών FB-43. Χρονικά εξαρτώμενη ρύθμιση προς τα κάτω του α-SMA παρατηρήθηκε σε σφαιροειδή αλλά όχι στις καλλιέργειες μονοστιβάδας, που προκαλείται από την αποικοδόμηση του κυτταροσκελετού σε αυτές τις ινοβλάστες διέρχεται nemosis. Αυτό είναι σύμφωνο με τα προηγούμενα αποτελέσματα από Bizik et al. [14], όπου μειώνοντας τα επίπεδα της ακτίνης χρησιμοποιήθηκαν ως δείκτης του σφαιροειδούς αποικοδόμησης. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Σχήμα 1Ε είναι ένα ανοσοστύπωμα των τεσσάρων κυτταρικές γραμμές καρκινώματος UT-SCC. Όλοι τους εξέφρασαν COX-2, αλλά έχει ενδιαφέρον μόνο UT-SCC 74Α και 74Β είχαν επαγόμενη επίπεδο πρωτεΐνης ρ53, γεγονός που υποδηλώνει μια μετάλλαξη ρ53. Εμείς δεν θα μπορούσε να ανιχνεύσει p53 σε κανέναν από τους πληθυσμούς των ινοβλαστών, μια έννοια που συμφωνεί με την έκθεση του Qiu et al. [27], στην οποία δεν μπορούν να ανιχνεύσουν σωματικά γενετικές μεταβολές σε CAFS.

Διαφορετικές έκφραση δεικτών CAF σε στελέχη ινοβλαστών

Επειδή τα επίπεδα της πρωτεΐνης του α-SMA ποικίλει μεταξύ διαφορετικών πληθυσμών ινοβλαστών, εμείς αποφάσισε να διερευνήσει επίσης την έκφραση των άλλων χρησιμοποιούνται ευρέως ΚΠΑ δείκτες FSP1 και FAP. πρότυπο γονιδιακή έκφραση αυτών των τριών γονιδίων σε ινοβλάστες που καλλιεργούνται ως σφαιροειδή για 0, 24, 48 και 72 ώρες αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου. Q-PCR επελέγη ως μέθοδος επί ανοσοκηλιδώσεως λόγω της υψηλότερης ευαισθησίας της. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως γονίδιο αναφοράς το οποίο η έκφραση των γονιδίων-στόχων κανονικοποιήθηκε σε, μετά την οποία υπολογίστηκαν σχετικές αναλογίες έκφραση φορές. Το βασικό επίπεδο έκφρασης της α-SMA, FSP1 και FAP ήταν σημαντικά χαμηλότερη (Ρ & lt? 0,01) σε CAF-43 κύτταρα από ότι στα φυσιολογικά FB-43 ινοβλάστες (Σχήμα 2Α). Ωστόσο, όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β, αυτό δεν ήταν η περίπτωση με CAF-74 ινοβλάστες, όπου σε σύγκριση με FB-74 κύτταρα α-SMA αναλογία έκφρασης ήταν ίση, FSP1 1,4 φορές υψηλότερη και αναλογία έκφραση FAP εκπληκτικά 10 φορές υψηλότερη (Ρ & lt ? 0,01)

η γονιδιακή έκφραση των δεικτών CAF μελετήθηκε χρησιμοποιώντας Q-PCR.. αναλογίες έκφραση (Α) α-SMA, FSP1 και FAP ήταν σημαντικά χαμηλότερα (Ρ & lt? 0,01) σε CAF-43 κυττάρων σε σύγκριση με FB-43 κύτταρα, αλλά ίση ή υψηλότερη σε CAF-74 ινοβλαστών. (Β) Όταν μεγαλώσει ως σφαιροειδή όλους τους ινοβλάστες μειωτικά την έκφραση α-SMA, αλλά CAFS άρχισε να ανακτήσει την έκφραση σε 72 ώρες (P & lt? 0.05 στο FB-43 εναντίον ΚΠΑ-43 και στο FB-74 εναντίον CAF-74) ( Γ) FSP1 ήταν προς τα κάτω σε φυσιολογικούς ινοβλάστες και σε CAF-74 κύτταρα, αλλά όχι σε CAF-43 κύτταρα, (D) και FAP ρυθμίζεται αυξητικά σε όλες τις κυτταρικές σειρές που διέρχεται nemosis, πολύ περισσότερο σε CAFS (Ρ & lt? 0,05 σε 72 ώρες CAF -43 σε σύγκριση με 72 ώρες FB-43). Στήλες: μέση? γραμμές σφάλματος? SEM.

Η

Nemosis ανταπόκριση των δεικτών ΚΠΑ μεταξύ αυτών των ινοβλαστών των πληθυσμών έδειξε επίσης παραλλαγή. Το επίπεδο α-SMA δραστικά προς τα κάτω σε σφαιροειδή, που αντικατοπτρίζει τα επίπεδα πρωτεΐνης και δείχνει την αποσύνθεση του κυτταροσκελετού σε αυτά τα σφαιροειδή. Αυτό ίσχυε επίσης για FB-43 κύτταρα, για την οποία δεν μπορούσε να ανιχνεύσει την έκφραση της πρωτεΐνης. Διαφέρουν από τις κανονικές ινοβλάστες, οι CAFS άρχισε να ανακτήσει την έκφραση α-SMA σε 72 ώρες? σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ινοβλάστες, η αύξηση ήταν στατιστικά σημαντική (Ρ & lt? 0,05) (Σχήμα 2C). FSP1 mRNA μειώθηκε, όπως αναμένεται, σε αμφότερες τις κανονικές στελέχη ινοβλαστών και CAF-74 κύτταρα, αλλά εκπληκτικά αυξημένη σε CAF-43 σφαιροειδή (σχήμα 2D). Η τρίτη FAP δείκτης CAF προκλήθηκε σε nemosis σε όλους τους πληθυσμούς ινοβλαστών, ακολουθώντας τη γενική δακτυλικό αποτύπωμα nemosis. Αυτή η πρόκληση ήταν υψηλότερη στα CAF σφαιροειδή από ό, τι στην κανονική σφαιροειδή ινοβλαστών (P & lt? 0.05 στο ΚΠΑ-43 εναντίον FB-43, όχι στατιστικά σημαντικά σε 73 κύτταρα λόγω της υψηλής διακύμανσης μεταξύ των δειγμάτων) (Σχήμα 2Ε)

. η διαφορική έκφραση των αυξητικών παραγόντων σε φυσιολογικά και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες

το άλλο χαρακτηριστικό γνώρισμα της nemosis είναι η αυξημένη παραγωγή αρκετών αυξητικών παραγόντων, περιλαμβανομένων των VEGF, HGF /SF και FGF7 (KGF). Ως εκ τούτου χρησιμοποιήσαμε Q-PCR για τη μελέτη των επιπέδων έκφρασης αυτών των γονιδίων στις τέσσερις ινοβλαστών πληθυσμούς. Αμφότερα τα στελέχη CAF είχαν χαμηλότερα βασικά επίπεδα έκφρασης του VEGF, HGF /SF (Ρ & lt? 0,05) και FGF7 (Ρ & lt? 0,01) mRNA σε σύγκριση με τα ζεύγη φυσιολογικούς ινοβλάστες (Σχήμα 3Α και 3Β). Όταν καλλιεργείται ως σφαιροειδή και οι τέσσερις πληθυσμούς των ινοβλαστών παρουσίασαν ρυθμίζεται προς τα πάνω του VEGF, HGF /SF και έκφραση FGF7 mRNA. επαγωγή VEGF ήταν υψηλότερα στην ΚΠΑ-74 κύτταρα (πάνω από 15 φορές) (Σχήμα 3C), ενώ υψηλότερη επαγωγή /SF HGF παρατηρήθηκε σε CAF-43 κύτταρα (πάνω από 30 φορές) (Εικόνα 3D). επίπεδα FGF7 ρυθμίζονταν λίγο διαφορετικά? πάνω παρατηρήθηκε 6-πλάσια επαγωγή σε FB-43 κύτταρα, άλλα κύτταρα είχαν κατά μέσο όρο 5-φορές επαγωγή, και έχει ενδιαφέρον σε CAF-74 κύτταρα στο χρονικό σημείο 72 ώρα σήμερα το επαγωγή είχε κατέβει έως 2,5-φορές (Σχήμα 3Ε) .

έκφραση του γονιδίου αυξητικού παράγοντα μελετήθηκε χρησιμοποιώντας Q-PCR. (Α και Β) δύο κυτταρικές σειρές CAF είχαν μειωμένη έκφραση HGF /SF (Ρ & lt? 0,05) και FGF7 (Ρ & lt? 0,01) και οι τρεις παράγοντες ανάπτυξης ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε διαφορετικό βαθμό σε nemosis (C – VEGF, D – HGF /SF και Ε – FGF7). Στήλες: μέση? γραμμές σφάλματος? SEM.

Η

παρακρινή ρύθμιση μεταξύ ινοβλάστες και τα κύτταρα SCC

Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη των κυτταρικών γραμμών καρκινώματος UT-SCC ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό soft-αγαρόζης. Κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης των τριών εβδομάδων Όλες οι κυτταρικές σειρές καρκινώματος τέσσερα σχηματίζονται αποικίες, αλλά σαφής διαφορά μεταξύ πρωτογενών και επανεμφανιζόμενων κυτταρικές γραμμές όγκου παρατηρήθηκε (Σχήμα 4). Όταν καλλιεργήθηκαν μόνο, και οι δύο επαναλαμβανόμενες καρκινικές κυτταρικές σειρές UT-SCC-43Β και SCC-UT-74Β σχηματίζεται το διπλάσιο του ποσού των αποικιών σε σύγκριση με πρωτογενείς κυτταρικές γραμμές όγκου UT-SCC-43Α και UT-SCC-74Α? η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική και στις δύο περιπτώσεις (P & lt? 0,05). Η υποκείμενη μονοστιβάδα φυσιολογικών ινοβλαστών FB-43 και FB-74 αυξήθηκε ελαφρώς τον αριθμό των αποικιών των κυττάρων 43Α και 74Α καρκίνωμα, αντίστοιχα. Αύξηση του αριθμού των αποικιών ενισχύθηκε περαιτέρω όταν 43Α και 74Α SCC κύτταρα αναπτύχθηκαν υπό την επίδραση του CAF-43 και CAF-74 (Ρ & lt? 0,05), αντίστοιχα. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν καλλιέργεια των πιο επεμβατικές κύτταρα 43Β και 74Β SCC με FB-43 και FB-74 ινοβλάστες, μία μείωση στον αριθμό των αποικιών παρατηρήθηκε? Αυτή η επίδραση ήταν περισσότερο έντονη με 74Β κύτταρα (Ρ & lt? 0,05 σε FB-74 σε σύγκριση με το μάρτυρα). CAF-43 και CAF-74 ινοβλάστες αποκατέστησε τον αριθμό των αποικιών σε ίδιο επίπεδο με τον έλεγχο, αλλά δεν περαιτέρω ενισχύουν το σχηματισμό αποικίας των επαναλαμβανόμενων SCC κυττάρων.

σχηματισμό αποικίας UT-SCC μελετήθηκε με δοκιμασία soft-αγαρόζη . Όλα τα κύτταρα UT-SCC σχηματίζονται αποικίες σε μαλακή αγαρόζη, επαναλαμβανόμενες SCC (Β και D) δύο φορές όσο πρωτογενή κύτταρα SCC (Α και C) (P & lt? 0,05). Κανονική ινοβλάστες αύξησε τον αριθμό των αποικιών των πρωτογενών κυττάρων καρκινωμάτων και αυτό περαιτέρω επαυξημένης με κύτταρα CAF (Ρ & lt? 0,05) (Α και C). Περιοδική σχηματισμός SCC αποικιών κυττάρων αναστέλλει με φυσιολογικούς ινοβλάστες (Ρ & lt? 0,05 σε FB-74 σε σύγκριση με το μάρτυρα) και αποκαθίσταται και έχασε επίπεδο με CAFS (Β και C). Στήλες: μέση? γραμμές σφάλματος? SEM

Η

Οι UT-SCC αποικία αποτελέσματα σχηματισμό συμβάδιζαν μεταξύ των κυττάρων που λαμβάνονται από τα δύο άτομα.? Ωστόσο, δεν υπήρξε διαφοροποίηση μεταξύ των ατόμων, όταν παρατηρώντας στενά τις υποκείμενες μονοστρωματικές καλλιέργειες ινοβλαστών. σχηματισμός Αυθόρμητη σφαιροειδές παρατηρήθηκε στην υποκείμενη μονοστιβάδα καλλιέργειας FB-43 και CAF-43 ινοβλάστες όταν συν-καλλιεργήθηκαν με τόσο 43Α και 43Β κύτταρα SCC (Σχήμα 5Α-Δ). FB-74 και CAF-74 δεν σχηματίζουν αυθόρμητα σφαιροειδή σύμφωνα με οποιαδήποτε από τις ανωτέρω προϋποθέσεις, αλλά δεν μεγαλώνουν γρηγορότερα όταν συν-καλλιεργήθηκαν με πιο κακοήθεις 74Β κύτταρα (Σχήμα 5G-H). Τα σχήματα 5Θ-J παρουσιάζει τον αυθόρμητο σχηματισμό σφαιροειδές 43 ινοβλάστες με κύτταρα 43Α και 43Β SCC. Με δύο κυτταρικές σειρές UT-SCC, CAF-43 κύτταρα σχηματίζονται σημαντικά περισσότερο από ό, τι σφαιροειδή FB-43 ινοβλαστών (Ρ & lt? 0,05). Οι δύο διαφορετικές κυτταρικές σειρές SCC δεν επηρέασε σημαντικά το σχηματισμό ινοβλαστών σφαιροειδές? αν και μια μικρή αύξηση παρατηρήθηκε στις CAF-43 σφαιροειδή με υποτροπιάζοντα κύτταρα 43Β SCC. Κανένας από τους τύπους των ινοβλαστών (FB-43, CAF-43, FB-74 και CAF-74) που σχηματίζονται αποικίες σε μαλακή αγαρόζη.

Εκπρόσωπος εικόνες της υποκείμενης καλλιέργειες ινοβλαστών μονοστιβάδας. Αυθόρμητη ομαδοποίησης (βέλη) φαίνεται σε FB-43 και CAF-43 κύτταρα υπό την επίδραση του ζεύγη SCC κυττάρων 43Α (Α και Β) και 43Β (C και D). Σε αντίθεση, FB-74 (Ε και G) και CAF-74 (F και Η) δεν σχηματίζουν σφαιροειδή. μπαρ κλίμακα 60 μm. Ο αριθμός των σχηματίστηκε σφαιροειδή υπολογίστηκε από τις καλλιέργειες μονοστοιβάδας ινοβλαστών (Ι και J). CAF-43 κύτταρα σχηματίζονται σημαντικά περισσότερο από ό, τι σφαιροειδή FB-43 κύτταρα (Ρ & lt? 0,05). Στήλες: μέση? γραμμές σφάλματος? SEM.

Η

Για να διευκρινιστεί η αιτία για τη διαφορετική συμπεριφορά των στελεχών των ινοβλαστών σε καλλιέργειες μονοστιβάδας, και ιδιαίτερα τον αργό ρυθμό ανάπτυξης του ΚΠΑ-74 κύτταρα, πραγματοποιήσαμε γήρανση σχετίζεται με βήτα-γαλακτοσιδάση (Α.Ε. β-gal χρώση). δραστηριότητα SA-β-gal είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη δείκτης για την κυτταρική γήρανση. Πρόωρη στρες που προκαλείται από γηρασμό προκαλείται από οξειδωτικό στρες, βλάβη του DNA και ογκογονιδίου ενεργοποίησης [28]. Όπως αναμενόταν, CAF-74 κύτταρα έδειξαν ισχυρή χρώση SA-β-gal. CAF-43 ινοβλάστες ήταν επίσης θετική, αλλά CAF-74 είχαν σημαντικά περισσότερο (Ρ & lt? 0,01). Γηρασμένα κύτταρα (Σχήμα 6)

Αντιπροσωπευτικά εικόνες των καλλιεργειών ινοβλαστών μονοστοιβάδας χρώση για δραστικότητα SA-β-gal. FB-43 (Α) και FB-74 (C) δείχνουν μικρή ή καθόλου χρώση? CAFS είναι θετικά (Β και D). Κλίμακα bar 200 μm. CAF-74 είχαν σημαντικά περισσότερο (Ρ & lt? 0,01) κύτταρα SA-β-gal συγκριτικά με CAF-43 (Ε). Στήλες: μέση? γραμμές σφάλματος? SEM.

Η

Συζήτηση

Τα Δημοτικά καρκινώματα θεωρούνται ότι είναι ανοργάνωτη όργανα που αποτελούνται από διάφορους τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των καρκινικών κυττάρων, ινοβλάστες και άλλα μεσεγχυματικά κύτταρα, και τα κύτταρα που σχετίζονται με την ασυλία και αγγείωση. Το μικροπεριβάλλον του όγκου-στρώματος οδηγεί σε ινοβλαστών σηματοδότηση ενεργοποίησης και παρακρινείς μεταξύ ινοβλάστες και καρκινικά κύτταρα [29]. Σε nemosis, ενεργοποιημένα ινοβλάστες αρχίζουν να παράγουν πρωτεΐνες που εμπλέκονται στη φλεγμονή, πρωτεόλυση και καρκίνος εξέλιξη και ταυτόχρονα ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση των κυτταροσκελετικών πρωτεϊνών [14] – [19].

Ο στόχος αυτής της εργασίας ήταν να διερευνηθεί η απόκριση nemosis του ταιριαστού ασθενούς φυσιολογικά και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες, και να μελετήσει το πρότυπο έκφρασης των δεικτών CAF και τη συμπεριφορά τους σε nemosis. Μόνο ένα από τα φυσιολογικά στελέχη ινοβλαστών (FB-43) και ένα από τα CAFS (FB-74) που προκαλείται από COX-2 σε nemosis. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με τα προηγουμένως δημοσιευμένα αποτελέσματα, όπου η επαγωγή της COX-2 έχει θεωρηθεί ένα σήμα κατατεθέν χαρακτηριστικό του nemosis. Ωστόσο, σε αυτές τις μελέτες ινοβλάστες έχουν από νεογνική προέλευσης και εδώ έχουμε χρησιμοποιήσει ινοβλάστες λαμβάνονται από τους ενήλικες. Ως εκ τούτου, αυτό αντικρουόμενες αποτέλεσμα δείχνει ότι η COX-2 δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται αποκλειστικά και μόνο για τη μέτρηση της απόκρισης nemosis, αλλά άλλοι δείκτες, όπως το προφίλ της εκκρίνονται πρωτεϊνών, θα πρέπει να διερευνηθεί επίσης.

Το άλλο βασικό χαρακτηριστικό της nemosis είναι η χρονο-εξαρτώμενη αποδόμηση του κυτταροσκελετού. Σε επίπεδο πρωτεΐνης τρία από τα στελέχη ινοβλαστών εξέφρασαν α-SMA, αναπάντεχα επίσης οι συνήθεις ινοβλάστες δέρματος FB-74. Το άλλο στέλεχος κανονική ινοβλαστών FB-43 δεν εκφράζουν α-SMA σε επίπεδο πρωτεΐνης. Ωστόσο, όταν μέτρηση των επιπέδων του mRNA με τη μέθοδο πιο ευαίσθητη Q-PCR, και τα τέσσερα ινοβλαστών πληθυσμοί έδειξαν έκφραση α-SMA και αυτό ρυθμίζεται προς τα κάτω σε nemosis. Η εξαρτώμενη από το χρόνο προς τα κάτω ρύθμιση τόσο το επίπεδο της πρωτεΐνης και του mRNA είναι σύμφωνη με τα προηγούμενα αποτελέσματα για nemosis, που δείχνει την αποσύνθεση του κυτταροσκελετού. Είναι ενδιαφέρον ότι οι CAFS άρχισαν να επανακτήσει την έκφραση του mRNA α-SMA σε 72 ώρες, η διαφορά ήταν σημαντική σε σύγκριση με τους αντίστοιχους φυσιολογικούς. Σε αντίθεση με τα αποτελέσματά μας, μια μελέτη από τον Shannon et al. [30] έδειξε ότι η κανονική ινοβλάστες του δέρματος, αλλά όχι από το στόμα ινοβλάστες εκφράζεται α-SMA. Ωστόσο, πιο πρόσφατα αποτελέσματα έδειξαν, σύμφωνα με τα αποτελέσματα μας, ότι η κανονική του στόματος ινοβλάστες εκφράζουν α-SMA και η έκφραση αυτή αυξάνεται όταν τα κύτταρα αυτά καλλιεργήθηκαν σε ρυθμισμένο μέσο που λαμβάνεται από κύτταρα OSCC [31]. Αυτά τα αντικρουόμενα αποτελέσματα θα μπορούσαν να προέρχονται εν μέρει από τη μέθοδο που χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η έκφραση α-SMA? σε χρησιμοποιήθηκε το πρώτο ανοσοκηλίδωση, στη δεύτερη η μέθοδος ήταν ελαφρώς πιο ευαίσθητος ανοσοϊστοχημεία.

Ερευνήσαμε επίσης τα επίπεδα του mRNA των δύο άλλων δεικτών CAF, FSP1 και FAP. Σε nemosis FSP1 επίπεδα μειώθηκαν στο FB-43, FB-74 και CAF-74 σφαιροειδή, αλλά αυξήθηκε το ΚΠΑ-43 κύτταρα. Η τρίτη FAP ερευνήθηκε δείκτη CAF ρυθμίζεται αυξητικά σε nemosis, πιο CAFS ό, τι σε φυσιολογικούς ινοβλάστες, η διαφορά ήταν σημαντική, με τα στελέχη 43 ινοβλαστών. Με όλα τα τρία CAF δείκτες η απόκριση nemosis ακολούθησε το πρότυπο της μειωμένης έκφρασης του κυτταροσκελετικών γονιδίων (α-SMA και FSP1) και αύξηση στην έκφραση πρωτεολυτική γονιδίου (FAP). Σαφώς διαφορετική απάντηση παρατηρήθηκε με το ΚΠΑ-43 κύτταρα, όπου, αντί για ρύθμιση προς τα κάτω της FSP1, τα επίπεδα αυξήθηκαν σε nemosis.The ετερογένεια των ινοβλαστών γίνεται εμφανής όταν εξετάζουμε τα βασικά επίπεδα της έκφρασης δείκτη CAF? CAF-43 κύτταρα είχαν χαμηλότερα επίπεδα και των τριών δεικτών, CAF-74 είχε μικρότερη α-SMA, ελαφρώς πιο FSP1 και πάνω από 10 φορές πιο FAP. Τα αποτελέσματα αυτά υπογραμμίζουν επίσης ότι η α-SMA, η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη δείκτης CAF /μυοϊνοβλαστών, δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται αποκλειστικά για τον ορισμό ενεργοποιηθεί ινοβλάστες.

Ένα άλλο χαρακτηριστικό γνώρισμα του nemosis είναι η επαγωγή αυξητικών παραγόντων. Έχει αποδειχθεί ότι η στοματική ινοβλάστες παράγουν σημαντικά περισσότερο FGF7 και HGF /SF σε σύγκριση με ινοβλάστες δέρματος [30]. Αυτοί οι δύο παράγοντες ανάπτυξης, μαζί με VEGF, είναι γνωστό ότι είναι σημαντική στην επούλωση των πληγών και την πρόοδο του καρκίνου [32], [33]. Η βασική έκφραση του VEGF, HGF /SF και FGF7 mRNA ήταν χαμηλότερη σε CAFS από ότι στα φυσιολογικά ινοβλάστες, και αυτό έρχεται σε αντίθεση με τα προηγούμενα αποτελέσματα [30]. Ωστόσο, ο ρυθμός ανάπτυξης των κυττάρων αυτών ήταν βραδύτερη από εκείνη της κανονικής τους ομολόγους τους, η οποία μπορεί να αντανακλά μειωμένη παραγωγή τους αυξητικούς παράγοντες. Η δραστικότητα SA-β-gal των CAFS υποστηρίζει αυτή τη θεωρία, υποδεικνύοντας ότι αυτά τα κύτταρα είναι σε γήρανση. Η ανάγκη αυτών των αυξητικών παραγόντων να εκκρίνεται από τους ινοβλάστες θα μπορούσε να μειωθεί στις CAFS δεδομένου ότι τα ίδια τα κύτταρα του όγκου, σε συνδυασμό με διείσδυση μακροφάγων και ενδοθηλιακών κυττάρων, είναι ικανά να παράγουν αυτούς τους παράγοντες. Όπως ήταν αναμενόμενο, ο VEGF, HGF /SF και FGF7 mRNAs ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ινοβλάστη nemosis, και το επίπεδο της επαγωγής ποικίλει μεταξύ των πληθυσμών των ινοβλαστών. επαγωγή VEGF ήταν υψηλότερα στην CAF-74 σφαιροειδή, HGF /SF σε CAF-43 σφαιροειδή και FGF7 σε FB-43 σφαιροειδή.

Με βάση αυτά τα αποτελέσματα φαίνεται ότι η ικανότητα των κανονικών και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες να παράγουν αυτοί οι παράγοντες ανάπτυξης σε nemosis είναι κάπως συναφή, στο βαθμό που είναι απαραίτητες στα εξέλιξης του καρκίνου. Η εξάρτηση των όγκων επί στρωματικών ινοβλαστών, και ειδικότερα για τους αυξητικούς παράγοντες που παράγουν, μειώνεται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου. Τα επιθηλιακά κύτταρα απαιτούν FGF7 να σπάσει τον επιθηλιακό πόλωση. FGF7 εκφράζεται μόνο από στρωματικά κύτταρα και ο υποδοχέας της FGFR2IIb μόνο από επιθηλιακά κύτταρα, υποδεικνύοντας το FGF7 ρόλο στην έναρξη της εξέλιξης του όγκου [34]. Των μελετηθεί ινοβλαστών πληθυσμούς τα κύτταρα FB-43, η οποία φαίνεται να είναι πιο φυσιολογικό από τις μελετήθηκαν στελέχη (βάση της επαγωγής της COX-2 και η έλλειψη α-SMA), είχε την υψηλότερη επαγωγή FGF7 στην nemosis. HGF /SF απαιτείται για την μετανάστευση /σκέδαση των επιθηλιακών κυττάρων από το αρχικό σημείο θραύσης. Nemotic κύτταρα CAF-43 παρήγαγε περισσότερο HGF /SF από τα άλλα τρία στελέχη κυττάρων. Η υποστήριξη αυτής της Kankuri et al. [15] έχουν δείξει ότι ο HGF /SF που παράγεται από σφαιροειδή ινοβλαστών προάγει άμεσα καρκινικών κυττάρων εισβολή. Επίσης μια άλλη μελέτη έχει δείξει ότι η στοματική ινοβλάστες οδηγούν εισβολή των κυττάρων OSCC αυξάνοντας την έκκριση του HGF /SF [35]. VEGF απαιτείται αργότερα στην εξέλιξη του όγκου όταν η μάζα καρκινικών κυττάρων επεκτείνει το σημείο όπου δεν μπορεί πλέον να αναπτυχθούν χωρίς παροχή οξυγόνου. VEGF, που εκκρίνεται από ινοβλάστες, επάγει την αγγειογένεση προσλαμβάνοντας ενδοθηλιακά κύτταρα να σχηματίσουν νέα αιμοφόρα αγγεία [36]. . CAF-74 κύτταρα, τα οποία είναι γηρασμένα, έχουν μακράν το υψηλότερο επίπεδο VEGF σε nemosis

Έχει επίσης αποδειχθεί ότι CAFS, αλλά δεν είναι φυσιολογικό ινοβλάστες, είναι σε θέση να προωθήσει την εξέλιξη του όγκου [37] – [ ,,,0],39]. Πιο πρόσφατα αποτελέσματα έδειξαν ότι αρχικά οι κανονικές ινοβλάστες αναστέλλουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων [2], και να παρουσιάσει τα αποτελέσματα μας συμφωνούν με αυτή την έννοια. Δείχνουμε εδώ ότι οι κανονικές ινοβλάστες αναστέλλει πράγματι τον σχηματισμό αποικίας των επαναλαμβανόμενων κυττάρων SCC, αλλά περιέργως αυτό δεν παρατηρήθηκε με κύτταρα πρωτογενούς όγκου. Οι CAFS φαίνεται να είναι σε θέση να επηρεάσουν μόνο τις πρωτογενείς SCC κύτταρα και όχι τα επαναλαμβανόμενα κύτταρα. Οι CAFS παράγονται χαμηλότερα επίπεδα αυξητικών παραγόντων, και θα μπορούσε να είναι ότι για το λόγο αυτό είναι σε θέση να επηρεάσουν την ανταποκρίνεται περισσότερο πρωτογενή κλώνοι ενός κυττάρου, αλλά τα λιγότερο ευαίσθητα υποτροπιάζοντα κύτταρα δεν ανταποκρίνονται σε αυτό το χαμηλότερο ποσό της εκκρινόμενης αυξητικών παραγόντων.

Η παρατηρούμενη αυθόρμητο σχηματισμό σφαιροειδές FB-43 και CAF-43 σε καλλιέργειες μονοστοιβάδας είναι σύμφωνη με τα αποτελέσματα από Kankuri et al. [15], όπου αυθόρμητη ομαδοποίηση των ινοβλαστών, δηλ nemosis, θα μπορούσε να επιτευχθεί με την προσθήκη του όγκου που προέρχεται από κύτταρα ρυθμισμένο μέσο σε μία μονοστιβάδα ινοβλαστών. Ωστόσο, δεν βρήκαμε αυτό με τα στελέχη ινοβλαστών από την άλλη ασθενή SCC. Αυτό μπορεί να οφείλεται εν μέρει στην επαγωγή ογκοκατασταλτικών ρ53 στα κύτταρα 74Α και 74Β SCC. Παρ ‘όλα αυτά, οι ινοβλάστες έκανε μεγαλώνουν πιο γρήγορα κάτω από την επιρροή των κυττάρων 74Β SCC? Αυτό ίσχυε επίσης με τα κύτταρα CAF-74 που φαίνεται να είναι σε μια κατάσταση που προκαλείται από στρες γηρασμού. Ακόμη περισσότερο, δεν είδαμε αγκύρωση-ανεξάρτητη ανάπτυξη των ινοβλαστών, έρχονται σε αντίθεση με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με προστάτη και του προστάτη ινοβλάστες που σχετίζονται με καρκίνωμα [40]. Πιθανές εξηγήσεις για αυτό είναι ατομικές παραλλαγές και την προέλευση των ινοβλαστών. Αξίζει να σημειωθεί ότι στα soft-αγαρόζη πειράματα τα SCC κύτταρα και ινοβλάστες δεν ήταν σε άμεση επαφή, αλλά χωρίζονται από ένα στερεό στρώμα αγαρόζης, και οι καλλιέργειες δεν ήταν αναπληρώνονται με φρέσκο ​​μέσο. Επομένως, η παρακρινής σηματοδότηση μεταξύ αυτών των δύο τύπων κυττάρων πρέπει να διαμεσολαβείται από διαλυτούς παράγοντες.

Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη σαφώς καταδεικνύει ότι οι ινοβλάστες που λαμβάνονται από διαφορετικά άτομα ποικίλουν στην έκφραση γονιδίων και τη συμπεριφορά και ότι η έκφραση των δεικτών CAF διαφέρει μεταξύ των φυσιολογικούς ινοβλάστες και CAFS σε nemosis. Τόσο η κανονική και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες ρυθμίζουν τα καρκινικά κύτταρα, ινοβλάστες κανονική αναστέλλοντας την ανάπτυξη των επεκτατικών SCC κυττάρων και CAFS με την περαιτέρω βελτίωση της ανάπτυξης των πρωτογενών SCC κυττάρων. Nemosis, ένας

in vitro

μοντέλο της ενεργοποίησης των ινοβλαστών, μπορεί να έχει

in vivo

ομόλογό του στον καρκίνο που σχετίζεται με ινοβλάστες και αποτελεί ένα πολύτιμο εργαλείο για τη μελέτη των διαφορών μεταξύ των ινοβλαστών που λαμβάνονται από διαφορετικά άτομα. απόκριση Nemosis, ιδίως των δεικτών CAF α-SMA και FAP, θα μπορούσαν ως εκ τούτου να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης για την πρόβλεψη της αντίδρασης στρωματικών όγκων.

Υλικά και Μέθοδοι

στελέχη κυττάρων και κυτταρικής καλλιέργειας

Όλα τα χρησιμοποιούμενα στελέχη των κυττάρων είχε προηγουμένως συσταθεί [25], [26], [41] και δόθηκαν από τον Dr Reidar Grenman (Turku University Κεντρικό Νοσοκομείο, Φινλανδία). Εν συντομία, τα κύτταρα UT-SCC-43Α (43Α) ελήφθησαν από πρωτογενή όγκο ενός 75-ετών γυναίκα με ούλων εξέλκωση και μετάσταση. Ιστολογία (T4N1M0) ήταν ένα καλά διαφοροποιημένο SCC. UT-SCC-43B κύτταρα (43Β) ιδρύθηκαν από την εκτομή υποτροπιάζοντα όγκο. UT-SCC-74Α κύτταρα (74Α) ελήφθησαν από μια παλιά αρσενικό 31 ετών που έχουν SCC στη γλωσσική δεξί περιθώριο (T3N1M0). UT-SCC-74Β (74Β) κυτταρική σειρά ιδρύθηκε από μια μετάσταση βρέθηκαν αργότερα στο λαιμό. Οι ασθενείς-συμφωνημένα FB-43 και FB-74 φυσιολογικούς ινοβλάστες ελήφθησαν από το δέρμα και CAF-43 και CAF-74 ινοβλάστες ελήφθησαν από το στρώμα του αντίστοιχου στόματος SCC. Η μεσεγχυματικής προέλευσης των στελεχών ινοβλαστών επιβεβαιώθηκε αρχικά με θετική χρώση για βιμεντίνη και αρνητική χρώση για κυτοκερατίνη χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία.

Όλοι οι πληθυσμοί κυττάρων καλλιεργήθηκαν στους + 37 ° C σε 5% CO

2 ατμόσφαιρα σε Dulbecco τροποποιημένο μέσο Eagle (DMEM) (Invitrogen, Carlsbad, CA) και συμπληρωμένο με 5% ορό εμβρύου μόσχου (FCS) (Invitrogen), 0,3 mg /ml γλουταμίνη, 100 μg /ml στρεπτομυκίνη και 100 U /ml πενικιλίνη. Ινοβλαστών σφαιροειδή σχηματίστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17]. Εν συντομία, 150 μΙ υποπολλαπλάσια /φρεάτιο εναιωρήματα μονών κυττάρων (1.3 χ 10

5 κύτταρα /ml) τοποθετήθηκαν σε U-bottom 96 φρεατίων πλάκες αγαρόζης επικαλυμμένα (Costar, Cambridge, ΜΑ).