Αφηρημένο

Ιστορικό

Καλύτερα συστήματα παράδοσης απαιτούνται για την τακτική που χρησιμοποιούνται εμβόλια, να τη βελτίωση της απορρόφησης των εμβολίων. Πολλά εμβόλια περιέχουν στυπτηρία ή στυπτηρία βάση επικουρικά. Εδώ ερευνούμε ένα νέο ξηρό επικαλυμμένο με πυκνά συσκευασμένα έμπλαστρο μικρο-προεξοχή συστοιχία δέρματος (Nanopatch ™) σαν ένα εναλλακτικό σύστημα παράδοσης για ενδομυϊκή ένεση για τη χορήγηση ενός στυπτηρία ανοσοενισχυμένου ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) εμβόλιο (Gardasil®) χρησιμοποιούνται συνήθως ως προφυλακτικό εμβόλιο κατά του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

συστοιχιών μικρο-προβολής ξηρό επικαλυμμένο με το υλικό του εμβολίου (Gardasil®) παραδίδονται σε C57BL /6 αυτί του ποντικιού δέρμα κυκλοφορήσει το εμβόλιο μέσα σε 5 λεπτά. Για να αξιολογηθεί η ανοσογονικότητα του εμβολίου, δόσεις που αντιστοιχούν σε HPV-16 συστατικό του εμβολίου μεταξύ 0,43 ± 0,084 ng και 300 ± 120 ng (μέση ± SD) χορηγήθηκαν σε ποντικούς την ημέρα 0 και την ημέρα 14. Μία δόση 55 ± 6,0 ng παραδοθεί ενδοδερμικά με συστοιχία μικρο-προεξοχή ήταν αρκετή για την παραγωγή μέγιστης εξουδετέρωσης του ιού απόκριση αντισώματος ορού κατά την ημέρα 28 μετά τον εμβολιασμό. Τίτλους εξουδετερωτικών αντισωμάτων διατηρήθηκαν σε 16 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό, και, για παρόμοιες δόσεις του εμβολίου, κάπως υψηλότερες τίτλοι παρατηρήθηκαν με ενδοδερμική παράδοση επίθεμα από ό, τι με ενδομυϊκή παράδοση με τη βελόνα και τη σύριγγα σε αυτό το χρονικό σημείο.

Συμπεράσματα /Σημασία

η χρήση των συστοιχιών ξηρή μικρό-προβολής (Nanopatch ™) έχει τη δυνατότητα να ξεπεράσει την ανάγκη για ένα εμβόλιο ψυκτικής αλυσίδας για τα κοινά εμβόλια στιγμή που παραδίδονται από τη βελόνα και τη σύριγγα, και να μειωθεί ο κίνδυνος τραυματισμού από βελόνες και αποφυγή εμβόλιο λόγω του φόβου της βελόνας, ιδίως μεταξύ των παιδιών

Παράθεση:. Corbett HJ, Fernando GJP, Chen X, Frazer ΙΗ, Kendall MAF (2010) Ο εμβολιασμός του δέρματος κατά του τραχήλου της μήτρας Καρκίνος των συνδεδεμένων Ιού των Ανθρώπινων θηλωμάτων με Μυθιστόρημα μικρο-Projection Array σε ένα μοντέλο ποντικού. PLoS ONE 5 (10): e13460. doi: 10.1371 /journal.pone.0013460

Επιμέλεια: Σωτήρης Κουτσόπουλος, Ινστιτούτο Τεχνολογίας της Μασαχουσέτης, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 του Ιουλ 2010? Αποδεκτές: 16, Αύγ, 2010? Δημοσιεύθηκε: 18 Οκτ 2010

Copyright: © 2010 Corbett et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Καρκίνος του Συμβουλίου του Queensland, Πανεπιστήμιο του Queensland, Εθνικό Σύστημα Υγείας και του Συμβουλίου Ιατρικής έρευνας (Αυστραλία) Επιχορηγήσεις ID # 569726, ID # 456150, Αυστραλιανό Συμβούλιο έρευνας Grant ID # DP077464 και το σύστημα Queensland Smart κρατική χρηματοδότηση αυτής της έρευνας. Ο καθηγητής Mark Α Φ Κένταλ ήταν ο αποδέκτης της Αυστραλίας Συμβουλίου Έρευνας μέλλον της Κοινότητας. Ο καθηγητής Ian H. Frazer ήταν ο αποδέκτης της υποτροφίας ενός Queensland κυβέρνηση πρωθυπουργού. Το Πανεπιστήμιο του Κουίνσλαντ και ο καθηγητής Ian H. Frazer αντλούν εισόδημα των δικαιωμάτων από την πώληση των εμβολίων HPV VLP. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τα περισσότερα εμβόλια είναι σήμερα παραδίδεται με βελόνα και σύριγγα. Ωστόσο, ως συσκευή χορήγησης εμβολίου, η βελόνα και σύριγγα έχει πολλές σημαντικές ελλείψεις. Αυτές περιλαμβάνουν δυνητικής μετάδοσης αιματογενώς μεταδιδόμενων νοσημάτων μέσω τραυματισμούς από βελόνες [1] και την επαναχρησιμοποίηση της βελόνας – περίπου το 30% των ενέσεων για τους σκοπούς του εμβολιασμού στις αναπτυσσόμενες χώρες είναι ανασφαλείς [2], και ότι οι τραυματισμοί από βελόνες προκαλούν περισσότερους από 500.000 θανάτους ανά έτος [3]. Βελόνα-φοβία και τον πόνο που συνδέεται με ενδομυϊκή ένεση είναι επίσης αρνητικές πλευρές – εκτιμάται ότι φοβία βελόνα βρίσκεται παρούσα σε τουλάχιστον 10% [4] του πληθυσμού, ή υψηλότερη [5]. Ο μυς είναι επίσης ένα εξαιρετικά αναποτελεσματική περιοχή για εμβολιασμό, καθώς δεν έχουν μια υψηλή πυκνότητα των κυττάρων που παρουσιάζουν αντιγόνο. Αντίθετα, το δέρμα είναι μια ελκυστική εναλλακτική τοποθεσία για εμβολιασμό λόγω της πυκνής δίκτυο των ισχυρών κυττάρων που παρουσιάζουν αντιγόνο (APC) συμπεριλαμβανομένων Langerhans κύτταρα (LCS) [6], και πολλά υποσύνολα των δενδριτικών κυττάρων δερματικών (DDCs) [7] . Η εγγύτητα αυτών των κυττάρων στην επιφάνεια του δέρματος σημαίνει ότι θα μπορούσε να είναι δυνατόν να στοχεύσουν σε τρόπους που μπορεί να μειώσει τον πόνο και τις δυνατότητες της μετάδοσης των παθογόνων το αίμα. Ενώ η δερματική παράδοση έχει μεγάλες δυνατότητες, το πιο κοντινό μέθοδος που χρησιμοποιείται σήμερα στην κλινική – ενδοδερμική ένεση – είναι τεχνικά δύσκολο, που απαιτεί ανάπτυξη προηγμένων μεθόδων στόχευσης όπως επανεξεταστεί το [8], [9]

Σε αυτή τη μελέτη α. νέα επίθεμα του δέρματος που ονομάζεται ο Nanopatch ™ χρησιμοποιείται για να στοχεύουν αυτά τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος του δέρματος. Η Nanopatch ™ είναι μια συστοιχία μικρο-προβολής με μοναδικά πυκνή προβολή συσκευασίας (& gt? 20.000 /cm

2) και σύντομες προβλέψεις (110 μm σε μήκος). Αυτή η πυκνότητα βελόνα σχεδιάστηκε έτσι ώστε παραδοθεί εμβόλιο έχει συν-εντοπίζεται με κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος του 50% του δέρματος – και στις δύο επιδερμίδα και το χόριο. – Κατόπιν δερματική εφαρμογή χωρίς να βασίζονται σε διάχυση (βλέπε Σχήμα 1) [10]

A δύο διαστάσεων σειρά προεξοχών εντοπίζεται ξηρού επικαλυμμένου εμβόλια στιβάδες του δέρματος πλούσιο σε κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος. Μόλις οι υδρίτες εμβολίου, διαχέεται μέσω της βιώσιμης επιδερμίδας και χορίου.

Η

Προηγούμενες μελέτες με Nanopatch ™ ανοσοποίηση έχουν χρησιμοποιήσει την ωοαλβουμίνη και εμβόλιο γρίπης ως αντιγόνα χωρίς την προσθήκη ανοσοενισχυτικού. Crichton et. al [11] κατέδειξε υψηλούς τίτλους αντισωμάτων μετά από μία ανοσοποίηση με κάτω των 2 μg μέσω Nanopatch ™ χρησιμοποιώντας το μοντέλο ωολευκωματίνης αντιγόνου σε C57BL /6 ποντίκια χωρίς ώθηση χρησιμοποιώντας 65 μm μακρές προεξοχές Nanopatch. Fernando et. al. [10] κατέδειξε επαγωγή προστατευτικών επιπέδων λειτουργικών αντισωμάτων κατά της γρίπης σε ποντίκια με 110 μm μακρές προεξοχές Nanopatch ™ (ίδια όπως χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη) χρησιμοποιώντας έναν ιό split, χωρίς ανοσοενισχυτικό τρισθενές εμβόλιο γρίπης (Fluvax 2008®)? με έναν παράγοντα 100 σε παρεχόμενης δόσης-φειδωλός, σε σύγκριση με τη βελόνα και τη σύριγγα. Σε αυτές τις προηγούμενες μελέτες, τα εμβόλια παραδόθηκαν χωρίς ανοσοενισχυτικό.

Στην παρούσα μελέτη θα επεκταθεί για να διερευνήσει τη χρησιμότητα της Nanopatch ™ στην παράδοση ένα επικουρικό στυπτηρία. Αυτό είναι σημαντικό, επειδή πολλά εμβόλια με ανοσοενισχυτικό -. Με Alum στο πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο [12]

Μάλιστα, μέχρι την πρόσφατη έγκρισης της AS04, στυπτηρία ήταν το μόνο ανοσοενισχυτικό να έχει άδεια από το FDA [13] . AS04 είναι στυπτηρία βάση, με την προσθήκη ενός λιπιδίου που βασίζονται ΤοΙΙ υποδοχέα 4 αγωνιστής 3-Ο-desacyl-4′-μονοφωσφορυλο λιπίδιο Α (MPL) [14]. «Alum» είναι χημικά είτε οξυ-υδροξείδιο του αργιλίου, ή υδροξυφωσφορικό αργίλιο. Για τις νέες τεχνολογίες για να επωφεληθούν από το παρόν άδεια εμβολίων, στην ιδανική περίπτωση θα πρέπει να συνεργαστεί με τα εμβόλια στυπτηρία ανοσοενισχυτικό. Μέχρι στιγμής, στερεά εργασία σκεύασμα έχει πραγματοποιηθεί με στυπτηρία ανοσοενισχυτικό για ανοσοποίηση επιδερμική σκόνη (ΕΡΙ) με ηπατίτιδα Β [15], [16], [17], και ατοξίνες διφθερίτιδας και τετάνου [17]. Εκτεταμένες πήξη στυπτηρία γέλη κατά την ξήρανση είναι ύποπτο ότι αναστέλλουν την απελευθέρωση του αντιγόνου τέτοια ώστε να μην είναι ανακτήσιμο μετά επανυδάτωση [16], και οι απώλειες αποτελεσματικότητας έχουν αναφερθεί μετά από λυοφιλίωση ή κατάψυξη [18], [19], [20]. Για την ελαχιστοποίηση αυτών των απωλειών χωρίς να μειώνουν σημαντικά την ποσότητα στυπτηρίας στο συνολικό στερεό (& lt? 1% [18])., Η ταχεία κατάψυξη χρησιμοποιείται για την πρόληψη πάγωμα συγκέντρωση των διαλυμένων ουσιών σε συνδυασμό με έκδοχα σχηματισμού υάλου

Ωστόσο, στην επικάλυψη μικρο-προβολή μας, ένα βήμα πάγωμα δεν είναι μόνο περισσότερο τεχνικά απαιτητική, αλλά έχει τη δυνατότητα να μειώσει τη μηχανική ακεραιότητα του επικαλυμμένου στρώματος. Η επικάλυψη πρέπει να είναι μηχανικά αρκετά ισχυρή ώστε να παραμένουν συνδεδεμένα επί της διείσδυσης της βελόνας, και διαφορετικές ιδιότητες θερμικής διαστολής μεταξύ των προεξοχών και του εμβολίου μπορεί να προκαλέσει ρωγμές ή αποφλοίωση του επικαλυμμένου στρωμάτων, ενώ η συσκευή φέρεται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος.

ξήρανση αέρα στυπτηρίας περιέχουν σκευάσματα διερευνήθηκε σε Maa et.al. [17], και βρέθηκε να προκαλέσουν εκτεταμένες πήξη ακόμη και παρουσία τρεαλόζης, ή /και μαννιτόλη, και /ή δεξτράνη. Όπως τρέχοντα πρωτόκολλα επικάλυψης είναι πιο κοντά στα πρωτόκολλα ξήρανση στον αέρα περιγράφεται στο [17], σε αντίθεση με λυοφιλίωση ή ξήρανση με κατάψυξη, αναμένεται ότι ο εμβολιασμός με μικρο-προβολές ξηρών επικαλυμμένων με στυπτηρία που περιέχει σκεύασμα θα κατέληγε σε κακή ανοσολογική απόκριση. Στην εργασία αυτή χρησιμοποιούμε το διαλυτό πολυμερές μεθυλο-κυτταρίνης για να μειώσει την πήξη της γέλης σε αφυδάτωση, και να βοηθήσει στην διάλυση στο ενυδάτωσης κατόπιν αιτήσεως.

νόσο περίπτωση της δοκιμής μας για την παρούσα μελέτη είναι η ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV), επειδή – εκτός από την κοινωνική σημασία του εμβολίου – δοκιμασίες για τη μέτρηση της εξουδετέρωσης του ιού είναι καλά εδραιωμένη. δομή αντιγόνο είναι σημαντική για την αύξηση απόκριση εξουδετέρωσης ιού αντισώματος [19], καθιστώντας το σύστημα ευαίσθητο σε διαταραχές στη δομή αντιγόνο το οποίο μπορεί να προκαλείται από στυπτηρία αφυδάτωση κατά τη διάρκεια της επίστρωσης ξηρού.

HPV λοίμωξη είναι αιτιολογικός σε σχεδόν όλες τις περιπτώσεις καρκίνο του τραχήλου – με HPV DNA παρούσα σε 99.7% των καρκινωμάτων του τραχήλου της μήτρας [20]. Ο εμβολιασμός έγινε δυνατή με σύγχρονα συστήματα ανασυνδυασμένης έκφρασης πρωτεΐνης και την ανακάλυψη ότι η έκφραση μόνο της L1 μείζονα πρωτεΐνη καψιδίου ήταν αρκετή για την παραγωγή αυτο-συναρμολόγηση του ιού, όπως σωματιδίων (VLPs) [21], [22]. Το VLP είναι ένα άδειο σωματίδιο ιού -., Ώστε να μην περιέχει το γονιδίωμα του ιού το οποίο κωδικοποιεί για τις πρωτεΐνες ογκογόνο που προκαλούν κακοήθειας [23], [24], [25] σε ένα φυσικό μόλυνση

Τα εμπορικά διαθέσιμα εμβόλια Gardasil® [Merck] και το Cervarix [GlaxoSmithKline] κατέδειξε άριστη προφυλακτική δράση σε κλινικές δοκιμές, αποτρέποντας προ-κακοήθεις και επακόλουθη καρκίνων σε σχεδόν το 100% στο πρωτόκολλο σύμφωνα προς αναλύσεις [26], [27], [28]. Αμφότερα τα εμβόλια περιέχουν μια μορφή στυπτηρία ανοσοενισχυτικό. Οι ανοσοποιήσεις χορηγείται σε τρεις δόσεις κατά τη διάρκεια των έξι μηνών. Αυτά τα εμβόλια είναι προφυλακτική. HPV είναι το πιο κοινό σεξουαλικά μεταδιδόμενο νόσημα [29], και η αθροιστική συχνότητα μόλυνσης πάνω από 2 χρόνια μετά την πρώτη σεξουαλική επαφή είναι περίπου 30%, με χρήση προφυλακτικού δεν δείχνει σημαντική προστατευτική επίδραση [30]. Ανοσοποίηση πρέπει να γίνει πριν από την πρώτη επαφή να είναι πλήρως προστατευτικό. Πολλά έθνη έχουν τώρα τα εθνικά προγράμματα εμβολιασμού με στόχο 11 και 12-year-old κορίτσια. Αυτό δεν ήταν χωρίς προβλήματα. Μάζα λιποθυμία και πονοκεφάλους πιστεύεται ότι προκαλείται από μια φοβία βελόνα και μαζική υστερία [31], και τον εμβολιασμό χωρίς βελόνες μπορεί να βελτιώσει την πρόσληψη του εμβολίου και την αποδοχή.

Μακροχρόνια αποτελεσματικότητα των εμβολίων HPV είναι σημαντική. Ενώ συχνότητα ποικίλλει ανάλογα με την ηλικία, ο επιπολασμός ακόμη και σε γυναίκες μεταξύ των ηλικιών 40 και 49 υπολογίζεται σε 25,2% [32], έτσι ώστε η πιθανότητα για μόλυνση συνεχίζεται στη διάρκεια μιας ζωής. Η διάρκεια της προστασίας είναι ένας σημαντικός παράγοντας στην αποτελεσματικότητα κόστους των εμβολίων HPV [33], και τυχόν εμβόλια δεύτερης γενεάς πρέπει να αποδείξουν μακράς διαρκείας προστασία.

Intra-δερματική έγχυση του σκύλου Προφορική Θηλωμάτων (COPV) L1-γλουταθειόνη- πενταμερή σύντηξης S-τρανσφεράσης – παρόμοια με HPV πενταμερή – έχει αποδειχθεί ότι είναι προστατευτικό σε λαγωνικά σε 400 ng /σκύλο [33]. Suzich, J.A., et al. [34] έδειξε ότι συναρμολογούνται COPV-VLP είχε σαν αποτέλεσμα πλήρη προστασία σε επίπεδο δόσης 50 ng, και μερική προστασία στα 0,125 ng χρησιμοποιώντας την ενδο-δερματικής οδού σε λαγωνικά.

Ο HPV VLP συναρμολογείται από 72 πενταμερή της η πρωτεΐνη L1 [35], [36]. Αποσυναρμολόγηση της VLPs μπορεί να εκτελεστεί αντιστρεπτά

in-vitro

σε υψηλό ρΗ, χαμηλή συγκέντρωση άλατος, και με την προσθήκη αναγωγικών παραγόντων (για παράδειγμα ρΗ 8,2, 0.166M NaCl με 2 mM DTT). Η διαπίδυση έναντι ενός ρυθμιστικού διαλύματος ρΗ 6,8 με συγκέντρωση άλατος 0,5-1 Μ αποτελέσματα στη συναρμολόγηση των σωματιδίων [37]. Lenz, Ρ, et al. [38] δείχνει ότι HPV16L1-VLPs μόνος του, αλλά όχι συστατικό L1-πενταμερή τους επάγουν ωρίμανση των δενδριτικών κυττάρων

in-vitro

. Thones et. al. [39] εκτιμούν ότι η ανοσοποίηση με L1-πενταμερή απαιτεί επίσης 20-40 φορές περισσότερη πρωτεΐνη χορηγείται για να ληφθεί παρόμοια ανταπόκριση αντισώματος. Μετουσιωμένη πρωτεΐνη L1 δεν δώσει εξουδετέρωσης ιού απόκριση αντισώματος [19], και ενώ ξηρές συνθέσεις μπορεί να σημαίνει μεγαλύτερη διάρκεια ζωής σε υψηλότερες θερμοκρασίες, μια φτωχή σκεύασμα μπορεί να προκαλέσει σημαντική υποβάθμιση των προϊόντων πρωτεΐνης. Κατάλληλα υγρά σκευάσματα για τη σταθερότητα του HPV-VLP έχουν οριστεί για τις δύο Gardasil [40] και το Cervarix [41]. Καθώς η σύνθεση έχει επιπτώσεις στην συναρμολόγηση των VLPs (και ενδεχομένως η δομή των ίδιων των καψομεριδίων) και VLPs είναι περισσότερο ανοσογόνα από τα καψομερίδια, τυποποίηση είναι σημαντική για την δραστικότητα ενός ξηρού επικαλυμμένου εμβόλιο. Και τα δύο εμβόλια μια συνιστώσα της στυπτηρία – Gardasil περιέχει υδροξυφωσφορικό αργίλιο. Για τις γνώσεις μας, οι μελέτες που χρησιμοποιούν στερεά σκευάσματα δεν έχουν δημοσιευθεί για τον HPV, ή HPV προσροφημένο σε στυπτηρία.

Ο σχεδιασμός Nanopatch ™ χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη αυτή χρησιμοποιεί ένα 58 × 58 συστοιχία μικρο-προεξοχών 110 μm υψηλή, και 30 μm σε διάμετρο βάσης, με μία απόσταση 70 μm μεταξύ των κέντρων προεξοχής (βλέπε σχήμα 2). Εμβόλιο ξηρό επιστρώνεται σε μικρο-προβολές, όπως περιγράφεται στο [42], και Nanopatches ™ εφαρμόζονται σε 2 ms

-1. Αυτή η διαμόρφωση παρέχει το υλικό μέσα στα επιδερμικά και δερματικά στρώματα του δέρματος του αυτιού ποντικού με βάθος διείσδυσης των 42 μm (SD = 9,9, Ν = 365), όπως καθορίζεται από την απεικόνιση του φθορίζοντος ιχνηθέτη σε κρυο-τομή αυτιά ποντικού όπως περιγράφεται στο [11] , αλλά με παρόμοιες προβλέψεις με εκείνες που χρησιμοποιούνται στην [10]

Δευτεροβάθμια εικόνες ηλεκτρονίων δείχνουν την επιφανειακή μορφολογία ενώ οπισθοσκέδασης εικόνες ηλεκτρονίων δείχνουν τη σύνθεση -. με χαμηλά ατομική μάζα στοιχεία δίνοντας χαμηλό σήμα – δηλαδή επικαλυμμένη περιοχή εμφανίζεται σκούρο σε σύγκριση με το μη επιστρωμένο Nanopatch ™. Τα μικρο-προβολές επικαλυμμένα με β) 800 ng, γ) 80 ng, δ) 8 ng και ε) 0,8 ng του HPV-16 πρωτεΐνης ανά έμπλαστρο. Ενώ κάποια γεφύρωση συμβαίνουν στην ομάδα 800 ng (πάνελ β – λευκό βέλος)., Επίστρωση φαίνεται στο κωνικό τμήμα προβολών σε όλες τις ομάδες δόσης

Η

Σε αυτό το έγγραφο, έχουμε αποδείξει ξηρή επίστρωση και απελευθέρωση ενός στυπτηρία ανοσοενισχυμένο εμβόλιο κατά του HPV-VLP με την Nanopatch ™. Στη συνέχεια καταδεικνύουν μια επακόλουθη ανοσολογική απόκριση η οποία είναι μακράς διαρκείας, και εξουδετερώνει τον ιό σε επίπεδα συγκρίσιμα με ενδομυϊκή ένεση με τη βελόνα και τη σύριγγα.

Αποτελέσματα

Προβολή μορφολογία των ξηρών επικαλυμμένων Nanopatches ™ είναι κατάλληλο για βελόνα διείσδυση

τα επικαλυμμένα επιθέματα εξετάστηκαν με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης (SEM) χρησιμοποιώντας δευτερογενή ηλεκτρονίων και οπισθοσκεδαζόμενο τρόπους (Σχήμα 2) για τη διερεύνηση της κατανομής του επικαλυμμένου εμβολίου κατά μήκος προεξοχές. Λειτουργία Δευτερογενής ηλεκτρονίων έδειξε την επιφάνεια σχήμα των επικαλυμμένων βελόνες, ενώ η λειτουργία ηλεκτρονίων οπισθοσκέδασης χρησιμοποιήθηκε για να επιβεβαιώσει την ποιοτική πάχος της επικάλυψης λόγω των διαφορών στην ατομική μάζα της επιφάνειας Nanopatch ™ χρυσού και της επικάλυψης. Προσπάθειες να στεγνώσει παλτό στυπτηρία ανοσοενισχυτικό έκδοχο χωρίς οδήγησε σε ελάχιστη επικάλυψη εμβόλιο στις άκρες της βελόνας, και κρυστάλλωση του στυπτηρία ανοσοενισχυτικό (Σχήμα S1). Ως εκ τούτου, προσθέσαμε μεθυλο-κυτταρίνη για να σταθεροποιήσει το εμβόλιο και να βελτιωθεί η μορφολογία επικάλυψης (Σχήμα 2). Ένα σημαντικό ποσοστό της επικάλυψης εντοπίστηκε στο κωνικό τμήμα των προεξοχών. Αυτό μπορεί να φανεί στις εικόνες δευτεροβάθμια ηλεκτρονίων από τη διαφορά στην μορφολογία πριν και μετά την επικάλυψη, και στα οπισθοσκεδαζόμενων εικόνες ηλεκτρονίων από το σκοτάδι σήμα στις άκρες προβολής. Στην ομάδα 800 ng, μερικοί γεφύρωση μεταξύ των προβλέψεων παρατηρήθηκε σε ορισμένες περιοχές της Nanopatches ™ (που υποδεικνύεται από το βέλος στην εικόνα 2β) πιθανώς λόγω της υψηλότερης συγκέντρωσης των εμβολίων από ότι σε άλλες ομάδες.

Vaccine είναι απελευθερώνεται από συμβουλές προβολής, και χύδην αποδοτικότητα παράδοσης είναι συνεπής με τις προσδοκίες με βάση την μορφολογία επικάλυψης και τη διείσδυση

δεδομένα

δέκα φορές σειριακές αραιώσεις Gardasil® παρασκευάστηκαν και 14C επισημαίνονται Οβαλβουμίνη προστίθεται ως ιχνηθέτης σε κάθε δείγμα, επικαλυμμένα στη Nanopatches ™ , και εφαρμόζεται στο κοιλιακό λοβό του αυτιού του C57BL /6 ποντίκια (Ν = 5 ανά ομάδα δόσης) όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Ένα ισοζύγιο μάζας χρησιμοποιώντας το ραδιοσημασμένο ιχνηθέτη πραγματοποιήθηκε μεταξύ του συνολικού ποσού επικαλυμμένο, και εκείνο που παραδόθηκε στο δέρμα αυτιού, αριστερά στην Nanopatch ™, ή εναποτίθενται στην επιφάνεια του δέρματος. Αποτελεσματικότητα της απελευθέρωσης ήταν: 19% (SD = 7.5), 34% (SD = 4.7), 36% (SD = 10), και το 27% (SD = 5.2) για 800 ng, 80 ng, 8 ng και 0,8 ng επικαλυμμένων HPV-16, αντίστοιχα (βλέπε Εικόνα 3).

απελευθέρωση προσδιορίστηκε από ισοζύγιο μάζας, και κυμαινόταν μεταξύ επικαλυμμένων ποσών με μέσο όρο 19%, 34%, 36%, και 27% για τα σκευάσματα που χρησιμοποιήθηκαν για 800 ng, 80 ng, 8 ng, και 0.8 ng επιχρισμένου HPV-16 ανά Nanopatch ™.

η

τα ποσοστά επίδοσης στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν για να υπολογιστεί αποτελεσματικές δόσεις πολλαπλασιάζοντας αποδοτικότητα παράδοσης από τον επικαλυμμένο ποσό. ποσά παράδοση εκτιμήθηκαν σε 300 ng (SD = 120), 55 ng (SD = 6.0), 5.7 ng (SD = 1,6), και 0,43 ng (SD = 0.084) του HPV-16L1.

Nanopatches ™ μετά την εφαρμογή επίσης ορατά με SEM για να προσδιοριστεί εάν οποιαδήποτε λύση επίστρωση παρέμεινε σχετικά με τις προβλέψεις. Χαμηλή μάζα υλικού μοριακού εντοπίστηκε στη βάση, σε ορισμένες περιπτώσεις, αλλά σπάνια στις άκρες προβολής (Σχήμα S3)

Nanopatch ™ εμβολιασμός προκαλεί μακροχρόνιες εξουδετέρωσης του ιού ανοσολογικής απόκρισης, συγκρίσιμη με ενδομυϊκή

Nanopatch ™ δόσεις διαιρέθηκαν πάνω από κάθε αυτί (δηλαδή ένα έμπλαστρο ανά αυτί), και χορηγήθηκε την ημέρα 0 και πάλι κατά την ημέρα 14. οροί συνελέγησαν την ημέρα 28 και την ημέρα 112 μετά τον εμβολιασμό για να εξετάσει την άμεση απόκριση και τα μακροπρόθεσμα διατήρηση των αντισωμάτων μετά την εμβολιασμός. Οι οροί αναλύθηκαν για την ικανότητα να εξουδετερώνουν τον ιό HPV με τη δοκιμασία εξουδετέρωσης βασιζόμενη σε ψευδοβίρια (PBNA) (Σχήμα 4). Μια ανάλυση μη κατωτερότητας χρησιμοποιήθηκε (Υλικά και Μέθοδοι) παρόμοια με προηγούμενες μελέτες σύγκρισης ανοσοποίηση των ανθρώπινων θηλωμάτων [43].

δόσεις Nanopatch ™ ήταν 300 ng (SD = 120), 55 ng (SD = 6.0), 5.7 ng (SD = 1,6) και 0,43 ng (SD = 0.084). Ενδομυϊκές δόσεις ήταν 10 μg, 1 μg, 100 ng, 10 ng, και 1 ng. Την ημέρα 28, Nanopatch ™ 300 ng και 55 ng ομάδες δόσης έχουν φθάσει συγκρίσιμα ιό τίτλοι εξουδετέρωσης σε όλους τους ενδομυϊκή ένεση ομάδες (ρ & lt? 0,05). Μέχρι την ημέρα 112, όλες οι δόσεις Nanopatch ™ έχουν φθάσει συγκρίσιμα τίτλους εξουδετέρωσης ενάντια σε όλες τις ομάδες ενδομυϊκή ένεση (ρ & lt? 0,05). Οι επαναλήψεις κλιμακώνονται στον άξονα x, για να βοηθήσει στην οπτικοποίηση. Ανοσοποιημένο απεικονίζονται σε μία δόση των 0,05 ng λόγω λογαριθμική κλίμακα.

Η

Την ημέρα 28 μετά την ανοσοποίηση, οι τίτλοι στην ng 300 ± 120 και 55 ± δόση 6,0 ng ομάδες Nanopatch ™ ήταν στατιστικά μη κατώτερη σε όλες τις ενδομυϊκές δόσεις (ρ & lt? 0.001) με γεωμετρικός μέσος τίτλος (GMT) της 30500 και 26000 αντίστοιχα (Σχήμα 4). Σε καθένα από τα 5.7 ± 1.6 ng και το επίπεδο της δόσης ng 0.43 ± 0.084 ομάδες Nanopatch ™, δύο ποντίκια δεν ορομετατροπής.

Τα αντισώματα εξουδετέρωσης τιτλοποιήθηκαν την ημέρα 112 μετά την ανοσοποίηση (Σχήμα 4) για τη δημιουργία μακροπρόθεσμων αποτελεσματικότητα. Την ημέρα 112 μετά την ανοσοποίηση, όλες οι ομάδες Nanopatch ™ έδειξε 100% ορομετατροπή. Την ημέρα 112, όλες οι δόσεις Nanopatch ™ ήταν στατιστικά μη κατώτερη σε όλες τις ενδομυϊκές δόσεις (p & lt? 0,05).

Κατά τη σύγκριση της απόκρισης κατά την ημέρα 112 και ημέρα 28 σε κάθε ομάδα (Σχήμα 4), την ημέρα 112 τίτλος δεν πληρούσε τα κριτήρια μη κατωτερότητας έναντι της ημέρας 28 τίτλος τόσο στην 100 ng και 1 ng ενδομυϊκή ομάδες (αναλογία τίτλοι: 100 ng 90% CI (0.40, 1.2), και 1 ng 90% CI (0.39,1.2) ). Αντίθετα, εντός συγκρίσεις τίτλος ομάδα Nanopatch ™ έδειξε τίτλους κατά την ημέρα 112 ήταν μη-κατώτερες σε όλες τις περιπτώσεις, και ανώτερη στο επίπεδο δόσης 0,43 ± 0,084 ng, με ο τίτλος ημέρα 112 είναι 1.2 έως 5.8 φορές υψηλότερη από την ημέρα 28 τίτλο ( p & lt? 0,05) στην ίδια δόση

Συζήτηση

Αυτό το έγγραφο αποδεικνύει την αποτελεσματική επίστρωση και την απελευθέρωση της στυπτηρία που περιέχει το εμβόλιο Gardasil® από μια σειρά επίθεμα μυθιστόρημα μικρο-προβολής (Nanopatch ™) έχουν σχεδιαστεί για να. παραδώσει εμβόλιο απευθείας σε περίπου 50% των κυττάρων που εμφανίζουν αντιγόνο άφθονα δέρματος που παρουσιάζουν [10], για την αποτελεσματική επαγωγή μιας απόκρισης αντισώματος εξουδετέρωσης ιού.

αποδοτικότητα Release ποικίλει μεταξύ των ομάδων δόσης. Προβλέπεται ότι αυτό εξαρτάται κυρίως από την μορφολογία της επικάλυψης. Αυτό υποστηρίζεται από θεωρητικές προσδοκίες μας παράδοσης (Εικόνα S2). προέβλεψε δελτία μας (Εικόνα S2) σε σύγκριση με την μετρηθείσα απελευθέρωση ήταν πιο ακριβή μέσα στις χαμηλότερες ομάδες δόσης. Έχουμε πάνω-προέβλεψε την απελευθέρωση στα υψηλότερα ομάδες δόσης. Αυτή η ασυμφωνία είναι πιθανό να οφείλεται στην γεφύρωση μεταξύ των προεξοχών και η υπερβολική επικάλυψη επί της βάσεως του Nanopatches ™ (Σχήμα 2β) που οδηγεί σε σπατάλη του διαλύματος επικάλυψης. Από την επικάλυψη στη βάση και στη γεφύρωση προβλέψεις δεν αντιστοιχούσαν στους υπολογισμούς, όπου τα ποσά αυτά είναι σημαντικά, αυτό θα οδηγήσει σε μια υπερεκτίμηση της παραδοθεί ποσό όπως οι θεωρητικοί υπολογισμοί βασίστηκαν μόνο με διάλυμα επικάλυψης για τις προβολές. Αυτό γεφύρωσης είναι πιθανό να μετριαστούν με την προσθήκη ενός επιφανειοδραστικού σε μεταγενέστερο σκευάσματα. Τα στοιχεία αυτά, καθώς και οι εικόνες μετά την εφαρμογή αποδεικνύουν ότι η απελευθέρωση από τις προβλέψεις είναι πλήρης, και ως εκ τούτου με τις προόδους στην τεχνολογία επίστρωσης να απομονώσουν επίστρωση αποκλειστικά σε τμήματα των προεξοχών που εισχωρούν στο δέρμα, πλήρη απελευθέρωση 100% αποτελεσματικότητα είναι δυνατόν με αυτά τα σκευάσματα.

Γρήγορη απελευθέρωση είναι πιθανό να βοηθήσει στην εξασφάλιση της συνεπούς δόση εμβολίου παραδίδεται, καθώς είναι πιο εύκολο να εξασφαλιστεί η συμμόρφωση με το πρωτόκολλο ανοσοποίησης. Μια περίοδος παρατήρησης 15-20 λεπτά μετά από ένα πρότυπο ενδομυϊκή ανοσοποίηση γενικά συνιστάται ως πλέον αναφυλακτικό σοκ θα συμβεί εντός αυτής της περιόδου [44]. Απελευθέρωση των ξηρών επικαλυμμένων εμβολίου από την Nanopatch ™ συνέβησαν μέσα σε πέντε λεπτά. – Έτσι ώστε να ικανοποιηθούν εύκολα τις κατευθυντήριες γραμμές της περιόδου παρατήρησης

Για να αποδειχθεί ότι ο ιός αντισωμάτων εξουδετέρωσης τέθηκαν, ορό προβλήθηκε από την Δοκιμασία βασιζόμενη σε ψευδοβίρια Εξουδετέρωση (PBNA) – θεωρείται ο «χρυσός κανόνας» στις κατευθυντήριες γραμμές του ΠΟΥ για τον HPV εμβόλια [45], [46]. Αυτή η δοκιμασία μετρά την αποτελεσματικότητα των αντισωμάτων ή άλλων ενώσεων στον αποκλεισμό της εισόδου του ιού HPV σε κύτταρα 293TT [47]. Αυτό είναι σημαντικό, καθώς η προστασία πιστεύεται ότι είναι ένα αποτέλεσμα του μεσολάβηση αντισωμάτων κατά του ιού εξουδετέρωση [48], [49]. Η μέθοδος αφαιρεί επίσης την μεροληψία του χρησιμοποιώντας το ίδιο υλικό τόσο για την ανοσοποίηση και ανοσολογική δοκιμασία η οποία συμβαίνει όταν χρησιμοποιείται ELISA. σήμα Δοκιμασία παράγεται μόνο από άθικτα ψευδοϊοσωμάτια που μιμούνται το φυσικό ιό, έτσι οποιαδήποτε ανοσοαπόκριση που εγείρεται έναντι ρυπαντών ή μετουσιωμένη πρωτεΐνη δεν θα επηρεάσει τα αποτελέσματα της δοκιμασίας εξουδετέρωσης. Nanopatch ™ ανοσοποίηση με 0.43 ± 0.084 ng του HPV-16 είχε σαν αποτέλεσμα εξουδετέρωσης ιού απόκριση κατά την ημέρα 112 μετά τον εμβολιασμό. Αυτό σημαίνει ότι η ξηρή επικαλυμμένη πρωτεΐνη L1 διατηρεί κάποια φυσική δομή που ομοιάζει με ιό. Είμαστε εικάζουν ότι μπορεί να έχει συμβεί κάποιο βαθμό αποσυναρμολόγησης των VLP σε πενταμερή. Ο ισχυρισμός αυτός βασίζεται σε παρόμοιες μελέτες μας με τη χρήση ιικών φορέων (μη δημοσιευμένα δεδομένα). Λόγω της αυξημένης ανοσογονικότητα των VLPs σε σύγκριση με πενταμερή, αν αποσυναρμολόγηση σε πενταμερή στιγμή που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της ξηρής επίστρωσης, μια μεγάλη αύξηση της δραστηριότητας είναι πιθανό μέσω αναδιατύπωση για να διατηρήσει περαιτέρω τη δομή VLP.

Αν και τα πρώτα αποτελέσματα έδειξαν μόνο 50% ορομετατροπή σε 5.7 ± 1.6 ng και 0,43 ± 0,084 ng ομάδες Nanopatch ™, πλεονεκτήματα καταστεί σαφέστερη στο τερματικό αιμορραγία όταν όλα τα ποντίκια έχουν ορο-μετατραπεί. Στις χαμηλότερες δόσεις ενδομυϊκή άρχισε να επιβραδύνεται, με τους τίτλους των δύο ποντίκια πέφτουν κάτω από το όριο ανίχνευσης. Είναι πιθανό ότι Nanopatch ™ ανοσοποίηση, με εμβόλια που περιέχουν στυπτηρία, έχει πιο αργή κινητική απελευθέρωσης σε σύγκριση με την ενδομυϊκή χορήγηση – λόγω της διαφορετικής οδού χορήγησης και σε μεγαλύτερο αποτέλεσμα αποθήκης από αφυδατωμένα στυπτηρία. Ενώ εξαιρετικά χαμηλές δόσεις του HPV-VLP εμφανίζονται ανοσογονική ενδομυϊκά σε ποντίκια, οι δόσεις για τους ανθρώπους στα εγκεκριμένα εμβόλια είναι στο εύρος 20-40 μg ανά υπότυπο. κινητική αργής απελευθέρωσης μπορεί ευνοϊκά μεταβάλλουν ανοσολογικές αποτελέσματα και να βοηθήσει στην επίτευξη της βέλτιστης ενεργοποίησης των APCs, χωρίς την ανάγκη εφαρμογής σωματικά περισσότερες δόσεις. Απαιτείται περαιτέρω εργασία για τη διερεύνηση αυτή.

Προηγούμενες μελέτες των ενδοδερμική ανοσοποίηση με COPV [33], [34] χρησιμοποιείται μια δοκιμασία ELISA έτσι μια άμεση σύγκριση με τα αποτελέσματά μας δεν είναι δυνατό. Suzich et al [34] μελέτησαν την παράδοση ενδοδερμική συναρμολογημένων COPV-VLPs και έλαβε μερική προστασία σε επίπεδο δόσης υπο-νανογραμμαρίων. Συγκριτικά, μια μεταγενέστερη μελέτη από Yuan, et. al. [33] με ενδοδερμική χορήγηση της πρωτεΐνης σύντηξης COPV-L1-GST (σε θέση να οργανωθεί σε VLP) δεν έδειξαν ανιχνεύσιμη απόκριση με ELISA κάτω από μια δόση των 400 ng. Η εργασία αυτή επικεντρώνεται στην συναρμολόγηση ανίκανους πενταμερή ως μια φθηνή εναλλακτική λύση για VLPs. Σε αμφότερες τις περιπτώσεις, η μερική προστασία παρατηρήθηκε έναντι πρόκλησης ακόμη και όταν δεν ανιχνεύθηκαν αντισώματα. Nanopatch ™ ανοσοποίηση με διάσπαση εμβόλιο λοιμογόνου παράγοντα γρίπης δίνει ανώτερη μείωση της δόσης κατά την ενδομυϊκή [10], σε σύγκριση με ό, τι έχει αποδειχθεί σε ενδοδερμική χορήγηση [50]. Αν αποσυναρμολόγηση του HPV-VLPs συμβαίνει σε ξηρή επίστρωση μας Nanopatch ™, το πιο κοντινό αποτελεσματική σύγκριση δόση είναι με το έργο του Yuan et al. Αυτό θα σήμαινε ότι Nanopatch ™ ανοσοποίησης μπορεί να δώσει αυξημένη ανοσογονικότητα σε άμεση σύγκριση με ενδοδερμική χορήγηση (και, συνεπώς, κατά πάσα πιθανότητα ενδομυϊκή χορήγηση) της L1-πενταμερών. Ωστόσο, δεδομένου ότι οι επί του παρόντος άδεια εμβόλια με βάση νΕΡ, αναδιατύπωση για τη διατήρηση της ακεραιότητας VLP θα είναι το επίκεντρο των μελλοντικών εργασιών

δοκιμασίες απελευθέρωσης μας μετρούν το ποσοστό της επικάλυψης που απελευθερώνεται μέσα στο δέρμα. – Που δεν μετρούν, τι αναλογία του αντιγόνου είναι ουσιαστικά απελευθερώνεται από την στυπτηρία, ούτε διαμόρφωση του κατά την απελευθέρωση. Αν η γέλη στυπτηρία θρομβώνεται, σύμφωνα με τις προηγούμενες μελέτες [17], το αντιγόνο μπορεί να μην ξεφύγει από την αναδιπλωμένη μήτρα στυπτηρία – μειώνοντας έτσι την αποτελεσματική δόση. Αυτή η επίδραση μπορεί στην πραγματικότητα αναιρεί τυχόν επικουρική οφέλη η στυπτηρία ορίζει άλλως, αν και απαιτείται περαιτέρω μελέτη για να καθορίσει το βαθμό στον οποίο η μήτρα στυπτηρία παρεμποδίζει την απελευθέρωση, και τον αντίκτυπό της. Η μελλοντική εργασία θα διερευνήσει τη δομή των πρωτεϊνών και πήξης του alum, καθώς και έκδοχα για τη μείωσή του. Όπως HPV-L1-VLPs είναι άκρως ανοσογόνα ακόμη και χωρίς ανοσοενισχυτικό, σκευάσματα χωρίς στυπτηρία Επίσης, θα διερευνηθεί. Θεωρούμε ότι με την ενισχυμένη σκευάσματα, Nanopatch ™ ανοσοποίηση μπορεί να σημαίνει τελικά χαμηλότερες δόσεις των στυπτηρία ανοσοενισχυτικό VLP μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προκαλέσει μια διαρκή ανοσολογική απόκριση στον άνθρωπο.

Η μελλοντική εργασία θα επικεντρωθεί στη βελτίωση φειδωλοί δόση σε Nanopatch ™ ανοσοποίηση, και τη διερεύνηση θερμική σταθερότητα. Για το σκοπό αυτό, ξηρό επικαλυμμένο ακεραιότητα VLP, εξερευνώντας ανοσοενισχυτικό VLPs και τη βελτίωση των σκευασμάτων θα πρέπει να διερευνηθούν.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με το Πανεπιστήμιο του Κουίνσλαντ κανονισμούς ζώων ηθική.

Nanopatch ™ Κατασκευή

Nanopatches ™ κατασκευάστηκαν από Deep Reactive Ion Χαρακτική σύμφωνα με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας [51] στο Rutherford Appleton Laboratory, Οξφόρδη, Ηνωμένο Βασίλειο. Nanopatches ™ ήταν επιστρωμένα μ ‘επιμετάλλωση με χρυσό σε πάχος 100 nm. Ομοιόμορφη μορφολογία επιβεβαιώθηκε από Μικροσκοπία Ηλεκτρονικής Σάρωσης (SEM) σε ένα Philips XL30. Τα δείγματα κλίση σε 45 ° για να επιβεβαιώσει κατάλληλο προφίλ προβολής.

Nanopatch ™ Επίστρωση

Gardasil® (Merck, USA) φυγοκεντρήθηκε στα 5000 g για 15 λεπτά για την κατακρήμνιση του alum με τον ιό προσροφημένο όπως σωματίδια. Το υπερκείμενο απομακρύνθηκε και το σφαιρίδιο επαναιωρήθηκε σε μεθυλοκυτταρίνη σε τελική συγκέντρωση 10 μg /μL μεθυλοκυτταρίνη, και 100 ng /μL του HPV-16-VLP. Δέκα-φορές σειριακές αραιώσεις παρασκευάστηκαν σε 10 μg /μL μεθυλοκυτταρίνης να διαμορφώσει διαφορετικές δόσεις. Methocel® 60 HG – μεθυλο-κυτταρίνη (cat # 646555) αγοράστηκε από Sigma Aldrich (Castle Hill, NSW, Australia)

Nanopatches ™ με 110 μm μακριές βελόνες καλύφθηκαν με πιπέττα 8 μL του διαλύματος επικάλυψης πάνω. η επιφάνεια και ξηρή επίστρωση μέσω πίδακα άζωτο όπως περιγράφηκε προηγουμένως [42]. Κατάλληλη μορφολογία επίστρωση επιβεβαιώθηκε από SEM.

Nanopatch ™ Ανοσοποίηση

Τέσσερις ομάδες (Ν = 5) των θηλυκών ποντικών C57BL /6 στα 6 Εβδομάδων παλιά αναισθητοποιούνται με Ketamil® και Xylasil®. Τα ποντίκια στη συνέχεια patched μία φορά σε κάθε αυτί στην κοιλιακή πλευρά χρησιμοποιώντας μια συσκευή εφαρμογής ελατήριο να τοποθετήσει το έμπλαστρο 2,0 ms

-1 – μια ταχύτητα βρέθηκε να δίνει μέγιστη διείσδυση της βελόνας χωρίς να καταστραφεί ιστού (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Δόσεις αναφέρεται στο παρόν έγγραφο αναφέρονται σε συνολικές HPV-16 δόση για κάθε ανοσοποίηση κατανέμονται σε δύο Nanopatches ™, και οι ποντικοί ανοσοποιήθηκαν την ημέρα 0 και ενισχύθηκαν την ημέρα 14. Τα μπαλώματα διεξήχθησαν in situ για 5 λεπτά. Η μελέτη αυτή πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου του Εθνικού Συμβουλίου Έρευνας Υγείας και Ιατρικής (Αυστραλία). Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα του Πανεπιστημίου του Queensland (Αριθμός Άδειας ΑΙΒΝ /020/10 (NF)). Όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

ενέσεις ενδομυϊκή

δόσεις Gardasil® συγκεντρώθηκαν με φυγοκέντρηση στα 5000 g για 15 λεπτά. Η περίσσεια υπερκείμενο απομακρύνθηκε και σφαιρίδιο επαναιωρήθηκε στην κατάλληλη ποσότητα του υπερκειμένου για να δώσει ένα HPV-16 VLP συγκέντρωση του 0.2 μg /μL. Τέσσερις 10-φορές σειριακές αραιώσεις παρασκευάστηκαν στο περίσσεια υπερκειμένου.

Πέντε ομάδες (Ν = 5) από C57BL /6 ποντικούς σε 6 Εβδομάδων παλιά ανοσοποιήθηκαν ενδομυϊκά την ημέρα 0 και ενισχύθηκαν την ημέρα 14 με 25 uL παραδοθεί περίπου 2 mm σε κάθε ουραία μυ του πίσω πόδι με κάθε ομάδα που λαμβάνει 10 μg, 1 μg, 100 ng, 10 ng ή 1 ng του HPV-16 ανά ποντικό ανά ανοσοποίηση.

εφαρμογή ελέγχου

Επίκαιρα ελέγχου: Μία ομάδα (Ν = 5) των C57BL /6 ποντίκια σε 6 Εβδομάδων παλιά αναισθητοποιούνται με ketamil και xylasil. Οι ποντικοί ακινητοποιούνται με επιφάνεια κοιλιακό αυτί επίπεδη, και 125 μι Gardasil® (που περιέχει 10 μg του HPV-16) εφαρμόστηκε τοπικώς επί πέντε λεπτά

Fluvax ανοσοποιηθεί ελέγχου:. Μία ομάδα (Ν = 5) του C57BL /6 ποντικούς σε 6 Εβδομάδων παλιά αναισθητοποιούνται με Ketamil® και Xylasil®, και ανοσοποιήθηκαν ενδομυϊκώς με 6 μg του Fluvax 2008® (CSL Ltd, Μελβούρνη, Αυστραλία) σε όγκο 30 μλ.

ανοσοποιημένο ελέγχου : Μία ομάδα (Ν = 5) των C57BL /6 ποντίκια σε 6 Εβδομάδων αναισθητοποιούνται με Ketamil® και Xylasil® και θανατώθηκε αμέσως μετά την παύση των αντανακλαστικών με καρδιακή παρακέντηση

συλλογή Sera

αίματος. δείγματα λήφθηκαν την ημέρα 28 και 112 μετά τους εμβολιασμούς με οπισθοκογχική αιμορραγίες, και ο ορός διαχωρίστηκε. Οι οροί αποθηκεύτηκαν στους -20 ° C μέχρι την ανάλυση.

Ηλεκτρονική Μικροσκοπία Σάρωσης (SEM)

Τα δείγματα εξετάστηκαν στη δευτεροβάθμια ηλεκτρονίων και πίσω διάσπαρτα τρόπους ηλεκτρόνιο σε ένα Philips XL30.