Αφηρημένο

Το πρωτο-ογκογονίδιο

PIK3CA

έχει μελετηθεί καλά για την ενεργοποίηση μεταλλάξεων του και γονιδιωματική ενισχύσεις, αλλά δεν πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP) στον καρκίνο του θυρεοειδούς. Ερευνήσαμε SNP rs17849071 (έλασσον αλληλόμορφο G και μεγάλες αλληλόμορφο Τ) στο

PIK3CA

σε όγκους του θυρεοειδούς σε 503 άτομα με PCR και αλληλούχιση μιας περιοχής του ιντρονίου 9 μεταφέρουν αυτό το SNP. Αυτό SNP βρέθηκε σε φυσιολογικούς και καρκινικούς ιστούς θυρεοειδούς, καθώς και σε διαφορετικές γενιές μιας οικογένειας που μελετήθηκαν, επιβεβαιώνοντας ότι είναι ένα βλαστικής σειράς γενετική συμβάν σε ασθενείς θυρεοειδούς όγκο. Σε σύγκριση με φυσιολογικά άτομα, μια δραματικά χαμηλότερο επιπολασμό του ετερόζυγο γονότυπο G /T σε rs17849071 βρέθηκε σε ασθενείς με θυλακιώδη καρκίνο του θυρεοειδούς (FTC). Συγκεκριμένα, rs17849071G /T βρέθηκε στο 15% (18/117) φυσιολογικά άτομα έναντι 1,3% (1/77) των ασθενών FTC, με αναλογία πιθανοτήτων 0,07 (95% CI 0,01 – 0,55? P = 0,001). Αυτό αντιπροσωπεύει μια μείωση του κινδύνου 93% για την FTC με αυτό το SNP. Αντιθέτως, δεν παρατηρήθηκε διαφορά με καλοήθη νεοπλάσματα του θυρεοειδούς στην οποία η επικράτηση του rs17849071G /Τ ήταν 13,1% (17/130), με μια αναλογία πιθανοτήτων 0,83 (95% CI 0,40 – 1,69? Ρ = 0,72). Υπήρχε μια τάση μείωσης επιπολασμού των rs17849071G Τ και λόγος πιθανοτήτων /και σε άλλες μορφές καρκίνου του θυρεοειδούς χωρίς στατιστική σημαντικότητα. Βρήκαμε επίσης μια ενδιαφέρουσα αντίστροφη σχέση της rs17849071G /Τ με

PIK3CA

ενίσχυσης. Με αριθμό αντιγράφων ≥4 ορίζεται ως κέρδος αντίγραφο, 2,9% (1/34) rs17849071G /T έναντι 19,0% (67/352) rs17849071T /T περιπτώσεις εμφανίζεται

PIK3CA

ενίσχυση (P = 0,01). Αντίθετα, 1,5% (1/68) περιπτώσεις με

PIK3CA

ενίσχυση έναντι 10,4% (33/318) περιπτώσεις, χωρίς να

PIK3CA

ενίσχυση έτρεφε rs17849071G /T (P = 0,01). Αυτό παρέχει μια εξήγηση για την αμοιβαία σχέση των rs17849071G /Τ με FTC, δεδομένου ότι

PIK3CA

ενίσχυση αποτελεί ένα σημαντικό ογκογόνο μηχανισμό στον καρκίνο του θυρεοειδούς, ιδιαίτερα FTC. Έτσι, η παρούσα μελέτη αποκαλύπτει ένα ενδιαφέρον φαινόμενο που rs17849071G /T είναι προστατευτική έναντι της FTC, ενδεχομένως μέσω της πρόληψης

PIK3CA

ενισχύσεις

Παράθεση:. Xing JC, Tufano RP, Murugan AK, Liu D, Wand G, Ladenson PW, et al. (2012) πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου rs17849071 G /T στο

PIK3CA

γονίδιο είναι αντιστρόφως ανάλογα με την Θυλακιώδες καρκίνο του θυρεοειδούς και

PIK3CA

Ενίσχυσης. PLoS ONE 7 (11): e49192. doi: 10.1371 /journal.pone.0049192

Επιμέλεια: Jingwu Xie, Indiana University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 7 Σεπτεμβρίου του 2012? Αποδεκτές: 4η Οκτωβρίου 2012? Δημοσιεύθηκε: 21 Νοέμβρη του 2012

Copyright: © 2012 Xing et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας επιχορήγησης R01CA134225. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του θυρεοειδούς είναι η πιο συχνή ενδοκρινική κακοήθεια, με 56.460 νέες περιπτώσεις και 1.780 θάνατοι που σχετίζονται με εκτιμώμενο για το 2012 και εξακολουθεί να αυξάνεται ραγδαία επίπτωση στις Ηνωμένες Πολιτείες [1]. καρκίνο του θυρεοειδούς μπορεί να χαρακτηριστεί ιστολογικά σε θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς (PTC), θυλακιώδη καρκίνο του θυρεοειδούς (FTC), αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς (ATC), και μυελοειδούς καρκίνου του θυρεοειδούς (MTC), οι οποίες αντιπροσωπεύουν περίπου το 80%, 15%, 2%, και 3% όλων των κακοηθειών του θυρεοειδούς, αντίστοιχα [2], [1]. PTC, FTC και ATC προέρχονται από θυλακιώδη κύτταρα του θυρεοειδούς, ενώ MTC προέρχεται από παραθυλακοειδή C κύτταρα. Προέρχεται από θυλακιώδη κύτταρα του θυρεοειδούς είναι και οι πολύ πιο κοινή καλοήθη νεοπλάσματα του θυρεοειδούς, συμπεριλαμβανομένων αδενώματα του θυρεοειδούς και υπερπλασία. Ένα ασυνήθιστο FTC-όπως, αλλά ιστολογικά και γενετικά διακριτές καρκίνος του θυρεοειδούς, καρκίνος Hurthle-κυττάρων του θυρεοειδούς (HTC), προέρχεται επίσης από θυλακιώδη-επιθηλιακά κύτταρα του θυρεοειδούς. FTC και PTC συνήθως διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς. ATC είναι ένα αδιαφοροποίητο και επιθετική μορφή του καρκίνου του θυρεοειδούς [2].

Ογκογόνες γενετικές αλλοιώσεις αποτελούν την κινητήρια δύναμη για την ανάπτυξη και την εξέλιξη των όγκων του θυρεοειδούς και έχουν μελετηθεί εκτενώς τα τελευταία χρόνια. Κλασική παραδείγματα περιλαμβάνουν

BRAF

μετάλλαξη στο PTC και ATC [3], [4],

Ras

,

PIK3CA

(κωδικοποιεί PIK3CA-η ρ110α καταλυτική υπομονάδα της φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3- κινάσης ή PI3K), και

PTEN

μεταλλάξεις σε καλοήθεις θυρεοειδούς νεοπλασία, FTC και ATC [5] – [8], και

RET

μετάλλαξη στο MTC [9]. Βρήκαμε στο παρελθόν κοινή γενετική ενισχύσεις του

PIK3CA

γονιδίων στον καρκίνο του θυρεοειδούς [10], η οποία επιβεβαιώθηκε σε αρκετές μεταγενέστερες μελέτες [11] – [15]. Η γονιδιωματική κέρδος αντίγραφο του

PIK3CA

γονίδιο είναι λειτουργικώς σημαντική, καθώς συνδέεται με ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης PIK3CA στον καρκίνο του θυρεοειδούς [11]. PIK3CA αποτελεί βασικό συστατικό του /Akt μονοπατιού σηματοδότησης ΡΙ3Κ που παίζει σημαντικό ρόλο στην κυτταρική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό και την καρκινογένεση [15] – [17] (Φρέσνο et al, 2004? Jiang BH και Liu LZ, 2009). ΡΙ3Κ καταλύει την φωσφορυλίωση της ομάδας 3′-ΟΗ του δακτυλίου ινοσιτόλης σε ινοσιτόλη φωσφολιπίδια, οδηγώντας σε παραγωγή φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης-3,4,5-τριςφωσφορικής [ΡΙ (3,4,5) P3] και ΡΙ (3,4) P2. Μέσω της αλληλεπίδρασης με αυτές τις τελευταίες μόρια στη μεμβράνη του κυττάρου πλάσματος, η Ser /Thr κινάσης Akt μετατοπίζεται σε μεμβράνη πλάσματος όπου φωσφορυλιώνεται και ενεργοποιείται από το φωσφοϊνοσιτιδίου εξαρτώμενη κινάση. Ενεργοποιημένη Akt μετατρέπει το σηματοδότησης περαιτέρω με φωσφορυλίωση διαφόρων υποστρωμάτων πρωτεΐνης κατάντη, τα οποία μεταβάλλουν τελικά την έκφραση των γονιδίων. Ενεργοποίηση μεταλλάξεων και γενωμικών ενισχύσεων του

PIK3CA

γονίδιο έχουν βρεθεί επίσης και σε πολλούς άλλους καρκίνους του ανθρώπου [18] – [20]. Ως εκ τούτου, μέσω της ενεργοποίησης μεταλλάξεων ή γονιδιωματικής ενίσχυσης, η

PIK3CA

γονίδιο παίζει σημαντικό ογκογόνο ρόλο στην καρκινογένεση στον άνθρωπο. Είναι ενδιαφέρον ότι, μεταξύ των διαφοροποιημένων όγκους του θυρεοειδούς,

PIK3CA

αντιγράψει κέρδος εμφανίζεται πιο συχνά σε FTC [10] – [12], συνάδει με το γεγονός ότι παρεκκλίνουσα ενεργοποίηση του μονοπατιού ΡΙ3Κ /Akt διαδραματίζει έναν ιδιαίτερα σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση του FTC μεταξύ αυτών των όγκων [7], [8].

Ορισμένες πολυμορφισμών μονού νουκλεοτιδίου (SNP) σε διάφορα εξόνια του

PIK3CA

γονιδίου έχουν επίσης βρεθεί αν και λειτουργική σημασία τους στον καρκίνο του ανθρώπου είναι ασαφές [21], [10]. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η σχέση του SNP, rs17849071 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi?rs=rs17849071), στο

PIK3CA

γονίδιο με διάφορους τύπους όγκων του θυρεοειδούς. Σε αντίθεση με όλες τις κοινές ογκογονικές γενετικές αλλοιώσεις που σχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου, αυτό SNP συσχετίστηκε με σημαντικά μειωμένο κίνδυνο ανάπτυξης FTC και

PIK3CA

ενίσχυση, προσθέτοντας μια νέα διάσταση στις γενετικές συστοιχιών σε θυρεοειδή ογκογένεση.

Υλικά και Μέθοδοι

Ανθρώπινοι ιστοί και απομόνωση DNA

ιστούς όγκων του Ανθρώπου θυρεοειδούς ή αίματος ελήφθησαν μετά την έγκριση του διοικητικού συμβουλίου θεσμικής αναθεώρησης (IRB) του Johns Hopkins University School of Medicine και γονιδιωματικού DNA απομονώθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10], [11], [15]. Απαιτείται γραπτή πληροφορημένες συγκαταθέσεις των ασθενών ελήφθησαν όπως εγκρίθηκε από το IRB μας. Εν συντομία, για την απομόνωση DNA από ιστούς παραφίνης, τα δείγματα υποβλήθηκαν αρχικά σε επεξεργασία για 8-h σε θερμοκρασία δωματίου με ξυλόλιο, που ακολουθείται από δύο επιπλέον επεξεργασίες 1-h με ξυλόλιο. πέψης ιστού πραγματοποιήθηκε με 1% SDS και 0,5 mg /ml πρωτεϊνάση Κ (Invitrogen, Carlsbad, CA) στους 48 ° C για 48 ώρες. Για να διευκολυνθεί η πέψη, ένα μέσο διάστημα προσθήκης ενός κλάσματος αιχμηρό 20% πρωτεϊνάσης Κ προστέθηκαν δύο φορές την ημέρα. Το DNA στη συνέχεια απομονώθηκε με τυποποιημένες διαδικασίες εκχυλίσεως φαινόλης-χλωροφορμίου και καταβύθιση αιθανόλης. Για την απομόνωση των λευκών αιμοσφαιρίων (WBC), πέντε ml αίματος αναμίχθηκαν με 40 ml 20 mM ρυθμιστικού διαλύματος Tris (ρΗ 7.0) που περιέχει 5 mM ΜΟΙ

2. Μετά λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBC), το μίγμα φυγοκεντρήθηκε για να κατακρημνιστούν το WBC και η διαδικασία επαναλήφθηκε μία φορά για να απομακρυνθεί εντελώς RBC και αιμοσφαιρίνης. Το λευκό WBC σφαιρίδιο στη συνέχεια υποβλήθηκε σε SDS-πρωτεϊνάσης Κ πέψη και το DNA απομόνωση ολοκληρώθηκε όπως προαναφέρθηκε.

Ανάλυση rs17849071 G /T στο PIK3CA Gene με άμεση DNA Sequencing

SNP rs17849071 είναι το 105

ου νουκλεοτιδίων του ιντρονίου 9 του

PIK3CA

γονίδιο (υπολογίζονται καθοδικά από την αρχή του ιντρονίου), με το κύριο αλληλόμορφο είναι Τ και ο ανήλικος αλληλόμορφο είναι G. μία περιοχή της

PIK3CA

γονίδιο που περιέχει rs17849071 στο ιντρόνιο 9 ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας τους εκκινητές GATTGGTTCTTTCCTGTCTCTG (προς τα εμπρός) και CCACAAATATCAATTTACAACCATTG (reverse) [18] (Samuels et al, 2004). Για την ενίσχυση της ειδικότητας, γονιδιακό DNA ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας ένα πρωτόκολλο PCR υποβιβασμού ως εξής: μετά από μια αρχική 3-min μετουσίωσης στους 95 ° C, το PCR διεξήχθη με κάθε θερμοκρασία για 40 δευτερόλεπτα σε 6 «βήμα-down» βήματα για την 2 κύκλους καθένα. Η θερμοκρασία μετουσίωσης ήταν 95 ° C και θερμοκρασία επέκτασης ήταν 72 ° C για κάθε ένα από τα βήματα »βήμα προς τα κάτω», με τη θερμοκρασία ανόπτησης των 66 ° C, 64 ° C, 62 ° C, 60 ° C, 58 ° C, και 56 ° C, αντίστοιχα. Το PCR τελικά τρέχει στους 95 ° C, 54 ° C και 72 ° C κάθε 40 δευτερόλεπτα για 30 κύκλους, που ακολουθείται από ένα τελικό στάδιο επιμήκυνσης στους 72 ° C για 5 λεπτά. Σε έναν τελικό όγκο 25 μΐ, το μείγμα της αντίδρασης PCR περιείχε 60-80 ng γενωμικού DNA, 67 mM Tris (ρΗ 8.8), 6.7 mM MgCl

2, 16.6 mM θειικό αμμώνιο, 10 mM 2-μερκαπτοαιθανόλη, 5% DMSO , 1,5 mM εκάστου dATP, dCTP, dTTP και dGTP, 1,67 μΜ εκάστου εκκινητές (εμπρός και πίσω), και 0,5 μονάδα της πλατίνας DNA πολυμεράσης Taq (Invitrogen, Carlsbad, CA). Η ποιότητα των προϊόντων PCR επιβεβαιώθηκε με ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης 1,5%, η οποία έδειξε με συνέπεια μια ειδική μονή ζώνη προϊόν PCR. Τα προϊόντα της PCR υποβλήθηκαν σε αντίδραση PCR με αντιδραστήρια προσδιορισμού αλληλουχίας Big Dye (Applied Biosystems, Foster City, CA) και το TTGCTTTTTCTGTAAATCATCTGTG εκκινητή αλληλουχίας, χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες ρυθμίσεις: 95 ° C για 30 δευτερόλεπτα χ 1 κύκλος? 95 ° C για 15 sec, 50 ° C για 15 sec, και 60 ° C για 4 λεπτά, x 35 κύκλους. ανάλυση της αλληλουχίας του DNA πραγματοποιήθηκε για την ταυτοποίηση SNP σε έναν ΑΒΙ PRISM 3700 ϋΝΑ αναλυτή (Applied Biosystems).

σε πραγματικό χρόνο ποσοτική PCR για την ανάλυση του αριθμού αντιγράφου του

PIK3CA

γονίδιο

Ανίχνευση

PIK3CA

αριθμού αντιγράφων διεξήχθη χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR και ένα πρωτόκολλο που περιγράφηκε προηγουμένως [10]. Εν συντομία, ένα ΡΕ Applied Biosystem ΑΒΙ 7900 ανιχνευτή ακολουθία TaqMan (Foster City, CA) χρησιμοποιήθηκε με ειδικούς εκκινητές και ανιχνευτές σχεδιάζονται με το λογισμικό Applied Biosystems να ενισχυθεί τόσο η

PIK3CA

και έλεγχος

β-ακτίνης

γονίδια. Ο ανιχνευτής που χρησιμοποιήθηκε για την

PIK3CA

γονίδιο ήταν 5′-6-καρβοξυφλουορεσκεΐνη-CACTGCACTGTTAATAACTCTCAGCAGGCAAA-tetramethylrhodamine-3 ‘, και οι εκκινητές ήταν 5′-AAATGAAAGCTCACTCTGGATTCC-3′ (προς τα εμπρός) και 5’-TGTGCAATTCCTATGCAATCG-3 ‘ (αναστρέψει). Για το

β-

ακτίνης γονίδιο, ο ανιχνευτής ήταν 5′-6-καρβοξυφλουορεσκεΐνη-ATGCCCTCCCCCATGCCATCC-tetramethylrhodamine-3 ‘, και οι εκκινητές ήταν 5′-TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3′ (προς τα εμπρός) και 5’-TCGGTGAGGATCTTCATGAGGTA- 3 ‘(αντίστροφο). Τα δείγματα διεξήχθησαν εις τριπλούν. Εκκινητές και ανιχνευτές σε β-ακτίνη έτρεξαν παράλληλα να τυποποιηθεί η DNA εισόδου. Για τον καθορισμό των προτύπων καμπυλών που χρησιμοποιείται διαδοχικές αραιώσεις του DNA που εξάγεται από την κανονική WBC κύτταρα με 0,01-20 ng DNA.

Στατιστική Ανάλυση

Η αναλογία πιθανοτήτων και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης υπολογίστηκαν με τη χρήση τυποποιημένων στατιστικών μέθοδο και χρησιμοποιείται για να δείξει τη σχέση κινδύνου του ετερόζυγη rs17849071 G /T με διάφορους τύπους όγκων του θυρεοειδούς σε σύγκριση με την κανονική ομάδα ελέγχου. Αντικατοπτρίζει την πιθανότητα εμφάνισης rs17849071 G /T σε έναν τύπο θυρεοειδούς όγκου σε σύγκριση με το φυσιολογικό έλεγχο. τιμές P για σύγκριση με την κανονική ομάδα ελέγχου υπολογίστηκαν με τη χρήση δύο όψεων ακριβής δοκιμασία του Fisher.

Αποτελέσματα

Η rs17849071 G /T ή T105G μεταστροφή Μεταβολή Intron 9 του PIK3CA γονίδιο είναι ένα βλαστικής σειράς Γενετική Εκδήλωση

Η συντριπτική πλειοψηφία των γονότυπων που περιέχει έλασσον αλληλόμορφο G στο rs17849071 του

PIK3CA

γονιδίου ήταν ετερόζυγα rs17849071G /Τ, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α και 1Β. Σε σύνολο 503 ατόμων, μόνο 7 περιπτώσεις ομόζυγη rs17849071G /G βρέθηκαν, με 1 σε ένα καλοήθη θυρεοειδούς νεόπλασμα, 1 στην HCT, και 5 στο ATC. Η αρχική μας προσπάθεια ήταν να δούμε αν 17849071G, αντιπροσωπεύει μια εγκάρσια μορφή μετατροπής Τ, ήταν πραγματικά μια βλαστική γενετική εκδήλωση σε ασθενείς με θυρεοειδή όγκων, αλλά όχι μια σωματική αλλαγή. Σε ένα υποσύνολο 12 περιπτώσεις με rs17849071G βρέθηκε τις πρωτογενείς όγκους του θυρεοειδούς, αυτό SNP βρέθηκε επίσης σε όλα συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς θυρεοειδούς τους. Ομοίως, σε ένα υποσύνολο 27 περιπτώσεις χωρίς rs17849071G βρέθηκε τις πρωτογενείς όγκους, αυτό SNP δεν βρέθηκε σε κανένα από τους φυσιολογικούς ιστούς συμφωνημένα θυρεοειδούς τους. Σε τέσσερις περιπτώσεις, των οποίων η κύρια θυρεοειδούς ήταν θετικά για SNP rs17849071G, τα διαθέσιμα αντίστοιχα δείγματα WBC ήταν επίσης θετικά για αυτό το SNP. Σε μια οικογένεια έξι μέλη, ένα ετερόζυγο rs17849071G /T βρέθηκε σε αρκετές από αυτές αφορούν δύο γενεές (γεμάτα σύμβολα στο σχήμα 1Γ). Αυτά τα δεδομένα, εκτός από την που δείχνει την υψηλή συχνότητα rs17849071G /T σε κανονική ομάδα ελέγχου (Πίνακας 1), διαπιστώθηκε ότι αυτό ήταν ένα SNP βλαστικής γενετικής εκδήλωσης σε ασθενείς με όγκο του θυρεοειδούς.

δείχνεται στο σχήμα 1Α είναι η ομόζυγη γονότυπο των μεγάλων αλληλόμορφο Τ στο rs1784907, που αντιπροσωπεύει το 105

ου νουκλεοτιδίων του ιντρονίου 9 του

PIK3CA

γονίδιο (μετρώντας από το πρώτο νουκλεοτίδιο του ιντρονίου προς τα κάτω). Το σχήμα 1Β δείχνει το ετερόζυγο γονότυπο έλασσον αλληλόμορφο G και μεγάλες αλληλόμορφο Τ στη rs17849071. Φαίνεται στο Σχήμα 1C είναι μια οικογένεια στην οποία πολλά μέλη, με τη συμμετοχή δύο γενιές, το λιμάνι της ετερόζυγο γονότυπο rs17849071G /T (γεμάτα σύμβολα).

Η

χαμηλή συχνότητα εμφάνισης της Ετερόζυγος Γονότυπος G /T σε rs17849071 στο οζώδες καρκίνο του θυρεοειδούς

Όπως φαίνεται στον πίνακα 1, η οποία συνοψίζει την εμφάνιση του ετερόζυγο γονότυπο G /T σε rs17849071, αυτό γονότυπος ήταν ένα συχνό γενετικό γεγονός στην φυσιολογική ομάδα ελέγχου, που συμβαίνουν σε 18/117 (15% ) φυσιολογικά άτομα. Αναλύσαμε την σχέση αυτής της SNP με διάφορους τύπους όγκων του θυρεοειδούς. Συγκρίσιμα συχνότητες των rs17849071G /T παρατηρήθηκαν στους περισσότερους τύπους των θυρεοειδικών όγκων-9% (10/115) PTC, 13% (17/130) καλοήθη νεοπλάσματα, 8% (3/38) ATC, 8% (1/13) HTC, και 15% (2/13) MTC (Πίνακας 1). Η εμφάνιση του rs17849071G /T σε αυτούς τους όγκους του θυρεοειδούς ήταν παρόμοια με εκείνη σε φυσιολογικό πληθυσμό. Σε πλήρη αντίθεση, όμως, μόνο 1% (1/77) FTC harbored rs17849071G /T, που αντιπροσωπεύει ένα πολύ χαμηλότερο επιπολασμό από εκείνο στο φυσιολογικό πληθυσμό, με μια περίεργη αναλογία 0,07 (95% CI: 0,01 – 0,55? P = 0,001) . Αυτά τα δεδομένα δείχνουν μια ενδιαφέρουσα αμοιβαίου αποκλεισμού μεταξύ rs17849071G /T και FTC, που υποδηλώνει μια προστατευτική επίδραση της rs17849071G /Τ κατά FTC. Συγκεκριμένα, υπήρχε μια μείωση 93% των πιθανοτήτων ανάπτυξης FTC όταν το

υπάρχει η ετερόζυγη γονότυπος G /T σε rs17849071 στο ιντρόνιο 9 του PIK3CA

γονιδίου. Αυτό το SNP δεν επηρέασε σημαντικά την εμφάνιση των άλλων τύπων των θυρεοειδικών όγκων.

Inverse Σύλλογος rs17849071G /Τ με την ενίσχυση της PIK3CA στο θυρεοειδούς

Για να διερευνήσει έναν πιθανό μηχανισμό για την προστατευτική δράση της rs17849071G /Τ κατά της FTC, εξετάσαμε τη σχέση της με διάφορες γενετικές αλλοιώσεις σε όγκους του θυρεοειδούς. Βρήκαμε μια ενδιαφέρουσα αντίστροφη σχέση της ετερόζυγο rs17849071G /Τ με γονιδιωματική κέρδος ενίσχυση /αντιγραφή του

PIK3CA

γονίδιο. Συγκεκριμένα, με αριθμό αντιγράφων ≥4 ορίζεται ως κέρδος αντίγραφο, 2,9% (1/34) rs17849071G /T έναντι 19,0% (67/352) rs17849071T /T περιπτώσεις εμφανίζεται

PIK3CA

ενίσχυση (P = 0,01). Αντίθετα, 1,5% (1/68) περιπτώσεις με

PIK3CA

ενίσχυση έναντι 10,4% (33/318) περιπτώσεις, χωρίς να

PIK3CA

ενίσχυση έτρεφε ετερόζυγη rs17849071G /T (P = 0,01). Η αντίστροφη σχέση μεταξύ rs17849071G /Τ και

PIK3CA

ενίσχυσης είναι πιο καθαρά φαίνεται στο Σχήμα 2. Αυτή η αποκλειστικότητα του

PIK3CA

ενίσχυση με ετερόζυγη rs17849071G /Τ μπορεί να εξηγήσει πώς αυτό το SNP μπορεί να προστατεύσει από FTC επειδή

PIK3CA

ενίσχυση διαδραματίζει εξέχοντα ρόλο στην FTC [7], [11], [12]. Δεν υπήρχε ειδική σχέση βρέθηκαν για rs17849071G /Τ με άλλες γενετικές αλλοιώσεις, όπως μεταλλάξεις στο

Ras

,

BRAF

,

PTEN

γονιδίων και στο

PIK3CA

ίδια γονίδιο (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

το Σχήμα 2Α δείχνει ότι στα άτομα με ετερόζυγο γονότυπο GT στο rs17849071very λίγες περιπτώσεις ήταν θετικές για

PIK3CA

ενίσχυση και, αντίστοιχα, ένας μεγάλος αριθμός των περιπτώσεων ήταν αρνητικό για

PIK3CA

ενίσχυσης, ενώ, αντίθετα, ένας μεγάλος αριθμός των ατόμων με ομόζυγο γονότυπο ΤΤ έτρεφε

PIK3CA

ενίσχυσης. Σύγκριση της διαφοράς μεταξύ

PIK3CA

ενίσχυση θετικών και -αρνητικοί υποκείμενα της ομάδας GT με εκείνη της ομάδας ΤΤ εμφάνισε υψηλή σημαντικότητα (Ρ = 0,01). Αντίθετα, το Σχήμα 2Β δείχνει ότι στα άτομα με

ενίσχυση PIK3CA

πολύ λίγες περιπτώσεις έτρεφε ετερόζυγο γονότυπο GT σε rs17849071 και, αντίστοιχα, ένα μεγάλο αριθμό περιπτώσεων έτρεφε ομόζυγη ΤΤ, ενώ, αντίθετα, ένα μεγάλο αριθμό θεμάτων χωρίς να

PIK3CA

ενίσχυση έτρεφε ετερόζυγο GT. Σύγκριση της διαφοράς μεταξύ GT και ΤΤ θέματα του

ομάδα ενίσχυση θετικών PIK3CA

με εκείνη του

PIK3CA

ομάδα ενίσχυση αρνητικών έδειξε υψηλή σημαντικότητα (P = 0.01).

Συζήτηση

Προηγούμενες γενετικές μελέτες για το

PIK3CA

γονιδίων στον καρκίνο του θυρεοειδούς έχουν ως επί το πλείστον επικεντρώθηκε σε σωματικά ογκογόνο γενετικές αλλοιώσεις, όπως η ενεργοποίηση μεταλλάξεων και γονιδιωματική ενίσχυση. Λίγα είναι γνωστά για το ρόλο του πολυμορφισμού του

PIK3CA

γονίδιο στην ανάπτυξη του καρκίνου του θυρεοειδούς. Η παρούσα εργασία για rs17849071G /Τ αντιπροσωπεύει μια νέα γενετική μελέτη σε όγκους του θυρεοειδούς. Το εντυπωσιακό εύρημα ήταν η εξαιρετικά χαμηλή εμφάνιση ετερόζυγο γονότυπο G /T σε rs17849071 στο ιντρόνιο 9 του

PIK3CA

γονίδιο κατά προτίμηση σε FTC, που συνδέεται με μια σημαντικά μειωμένη περίεργη αναλογία (93% μείωση) για την ανάπτυξη της FTC . Μόνο το 1,3% (1/77) περιπτώσεις της FTC έναντι 15% (18/117) φυσιολογικά άτομα (P = 0.001) και ο μέσος όρος 10,3% (52/503) όλων των υποκειμένων (P = 0,005) έτρεφε την rs17849071G /T , γεγονός που υποδηλώνει ότι η παρουσία του rs17849071G /Τ σε ένα άτομο θα προστάτευε σημαντικά κατά την ανάπτυξη του FTC.

Ο πολυμορφισμός, ιδιαίτερα SNP, είναι κοινή και αντιπροσωπεύει περίπου το 90% των παραλλαγών αλληλουχίας στο ανθρώπινο γονιδίωμα [22]. Αν και οι περισσότεροι SNPs φαίνεται να είναι λειτουργικά σιωπηλές, πολλοί σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο για την ανάπτυξη ορισμένων ασθενειών ή των χαρακτηριστικών της νόσου. Ορισμένα SNPs στην κωδικοποιητική περιοχή του γονιδίου μπορεί να επηρεάσει την λειτουργία της πρωτεΐνης του προϊόντος του γονιδίου ενώ άλλες SNPs στις ρυθμιστικές περιοχές μπορεί να επηρεάσει την έκφραση του γονιδίου [23]. Αυτή η τελευταία ομάδα των SNPs που συνήθως συμβαίνουν σε υποστηρικτές, σιγαστήρες, ενισχυτές και εσώνια. Μπορούν να επηρεάσουν την έκφραση του γονιδίου μεταβάλλοντας τις ιδιότητες σύνδεσης του ρυθμιστικές περιοχές ενός γονιδίου με μεταγραφή και ρυθμιστικών παραγόντων, τελικά παρεμβαίνει με τις διεργασίες μεταγραφής ή ματίσματος.

Ορισμένα SNPs έχουν αναφερθεί ότι επηρεάζουν τον καρκίνο του θυρεοειδούς. Για παράδειγμα, η L769L πολυμορφισμός του

RET

γονίδιο φάνηκε να επηρεάζει την ηλικία έναρξης της οικογενούς MTC [24]. Ορισμένες

SNPs RET

γονίδιο δείχθηκε να σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς [25], [26]. Ένα XRCC3 18067T πολυμορφική αλληλόμορφο ομοίως δειχθεί να σχετίζεται με διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς [27]. Πιο εκτεταμένες μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος-ευρεία έδειξαν πρόσφατα τη σύνδεση των διαφόρων SNPs με την εμφάνιση του καρκίνου του θυρεοειδούς [28], [29]. Σε αντίθεση με αυτές του θυρεοειδούς SNPs καρκίνο-προώθηση, η rs17849071G /Τ που βρέθηκαν στην παρούσα μελέτη μειώνει τον κίνδυνο για την FTC, η οποία αποτελεί ένα σπάνιο παράδειγμα ογκοκατασταλτικών SNP.

Επειδή η λειτουργία ογκοκατασταλτικό του rs17849071G /T ήταν μόνο φαίνεται στην FTC, αλλά όχι άλλους τύπους όγκων του θυρεοειδούς (Πίνακας 1), φαίνεται να είναι αλήθεια ότι αυτό το SNP επηρεάζει ένα ογκογόνο διαδικασία που είναι μοναδικό και κρίσιμη για την ογκογένεση του FTC. Η ανακάλυψη μας της αντίστροφη συσχέτιση της rs17849071G /Τ με

PIK3CA

ενίσχυση παρέχει έναν τέτοιο μηχανισμό που εξηγεί την προστατευτική επίδραση αυτού του SNP. Ως

PIK3CA

ενίσχυση διαδραματίζει εξέχοντα ρόλο στην ογκογένεση του καρκίνου του θυρεοειδούς, ιδιαίτερα FTC [7], η σημαντική μείωση στην εμφάνιση του

PIK3CA

ενίσχυση σε συνδυασμό με rs17849071G /Τ μπορεί θεωρητικά να έχει ως αποτέλεσμα σε μειωμένη ανάπτυξη του FTC στην παρουσία αυτού του SNP. Είναι επίσης πιθανό ότι η rs17849071G /Τ μπορεί να επηρεάσει αρνητικά την έκφραση του

PIK3CA

γονίδιο, ελαχιστοποιώντας ογκογένεσης του και μειώνοντας έτσι την ανάπτυξη της FTC. Καθώς η rs17849071G /Τ είναι στο ιντρόνιο 9 από το

PIK3CA

γονίδιο, ή το μεσαίο του γονιδίου, αυτό θα μπορούσε να επηρεάσει SNP την σύνδεση και λειτουργία του μηχανήματος ματίσματος, περιορίζοντας έτσι την παραγωγή της κανονικής mRNA του

PIK3CA

. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι 5 περιπτώσεις ομόζυγη rs17849071G /G στο ATC όλες έτρεφε

PIK3CA

ενισχύσεις. Ως εκ τούτου, η αμοιβαία αποκλειστικότητα φαίνεται να συμβεί μόνο μεταξύ

PIK3CA

ενίσχυση και ετερόζυγα rs17849071G /Τ, αλλά όχι η ομόζυγη rs17849071G /G. Ωστόσο, στην αδιαφοροποίητη ATC, το κέρδος αντίγραφο του

PIK3CA

μπορεί να μην αντιπροσωπεύουν απαραίτητα γονιδιωματική ενίσχυση? μπορεί να παριστάνει χρωμοσωμική ανευπλοειδία [7], επομένως, δεν ακολουθεί την σχέση του rs17849071with

PIK3CA

ενίσχυση σε διαφοροποιημένα καρκινώματα του θυρεοειδούς. Μένει να διευκρινιστεί πως rs17849071G /Τ συνδέεται με καταστολή της

PIK3CA

ενίσχυσης. Μια δυνατότητα που μπορεί να σκεφτεί είναι ότι rs17849071G /Τ μπορεί να επηρεάσουν την πρόσδεση του DNA με άγνωστη ρυθμιστή που παίζει σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της ενίσχυσης του γονιδίου.

Η ανακάλυψη αυτού του νέου FTC-καταστολέα SNP είναι ενδιαφέρουσα . Εάν αυτό μπορεί να επιβεβαιωθεί σε μεγαλύτερες μελέτες, θα προσθέσει μια νέα διάσταση στις σήμερα γνωστές συστοιχίες γενετική μεταβολή σε καρκίνο του θυρεοειδούς και αντιπροσωπεύει μία νέα οδό που παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση FTC. Μηχανιστική διαλεύκανση αυτού του φαινομένου θα οδηγήσει σε σημαντικές γνώσεις σχετικά με τους μοριακούς μηχανισμούς που εμπλέκονται στην ανάπτυξη της FTC και στην ανακάλυψη νέων θεραπευτικών στόχων, καθώς και. Η rs17849071G /Τ αντιπροσωπεύει επίσης την πρώτη γενετικό δείκτη που προβλέπει την απουσία FTC με υψηλή ακρίβεια. Επομένως, μπορεί να είναι χρήσιμη σε αποκλείοντας μια διάγνωση της FTC σε κατάλληλες κλινικές ρυθμίσεις.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τους συντάκτες της αναφοράς [10], [11], [15] από τα οποία μερικά από τα η

PIK3CA

πληροφορίες χρησιμοποιήθηκαν για την παρούσα μελέτη.