έχουν

Αφηρημένο

Μεγάλες προσπάθειες έχουν γίνει για την ανάπτυξη νέων και αποτελεσματικών θεραπευτικών κατά του καρκίνου του παγκρέατος να βελτιώσει τα αποτελέσματα της θεραπείας. Όγκου-παράγοντας νέκρωσης σχετίζονται συνδέτη που επάγει απόπτωση (TRAIL) είναι μια τέτοια θεραπευτική κυτοκίνη με επιλεκτική δράση θανάτωσης προς κακοήθη κύτταρα. Ωστόσο, ορισμένες ανθρώπινους καρκίνους του παγκρέατος είναι εγγενώς ανθεκτικοί σε TRAIL-μεσολαβούμενη απόπτωση ή θεραπεία. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι ο αναστολέας αποακετυλάσης ιστόνης LBH589 μπορεί συνεργούν με TRAIL για να αυξήσει την απόπτωση, ακόμη και σε TRAIL-ανθεκτικά κύτταρα. LBH589 μειωμένα επίπεδα c-FLIP σε κάθε δοκιμή κυτταρική γραμμή και τα επίπεδα survivin σε ορισμένες από τις εξετασθείσες κυτταρικές γραμμές. Η αναγκαστική έκφραση της έκτοπης c-flip, αλλά όχι survivin, κατάργησε την επαγωγή συνεργατική απόπτωσης με το συνδυασμό των LBH589 και TRAIL, υποδεικνύοντας ότι η C-FLIP μειορύθμιση διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ευαισθητοποίηση των LBH589 παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων σε TRAIL. Επιπλέον, LBH589 μειωμένη σταθερότητα γ-FLIP και η παρουσία του αναστολέα πρωτεασώματος MG132 εμπόδισε γ-FLIP από μείωση κατά LBH589. Αντίστοιχα, εντοπίσαμε αυξημένα επίπεδα ubiqutinated c-FLIP στα κύτταρα LBH589-θεραπεία. Αυτά τα στοιχεία δείχνουν έτσι ότι LBH589 προωθεί ουμπικουϊτίνης /πρωτεασώματος με τη μεσολάβηση της υποβάθμισης του c-FLIP, οδηγώντας σε ελάττωση του c-FLIP. Συλλογικά, LBH589 προκαλεί υποβάθμιση του c-FLIP και κατά συνέπεια ευαισθητοποιεί καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος να TRAIL επαγόμενη απόπτωση, αναδεικνύοντας μια νέα θεραπευτική αγωγή κατά του καρκίνου του παγκρέατος

Παράθεση:. Kauh J, Fan S, Xia Μ, Yue P, Γιανγκ L, Khuri FR, et al. (2010) γ-FLIP Υποβάθμιση Μεσολαβεί ευαισθητοποίηση των κυττάρων καρκίνο του παγκρέατος σε TRAIL απόπτωση που επάγεται από τον αναστολέα απακετυλασών LBH589. PLoS ONE 5 (4): e10376. doi: 10.1371 /journal.pone.0010376

Επιμέλεια: Dong-Yan Jin, Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 12 Μαρτίου, 2010? Αποδεκτές: 7η Απριλίου, 2010? Δημοσιεύθηκε: 28, Απριλίου 2010

Copyright: © 2010 Kauh et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη Γεωργία τον Καρκίνο του Συνασπισμού διακεκριμένο βραβείο του καρκίνου του Μελετητή (για SY. Σ) και νομαρχιακό ταμείο έρευνας (σε JK). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο δύσκολες καρκίνους για τη θεραπεία, αν και αντιπροσωπεύει μόνο το 3% όλων των καρκίνων. Παρά τις πολλαπλές κλινικές δοκιμές με νέα χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, κατά τα τελευταία 25 χρόνια το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών 5%, και μέση επιβίωση 6 μηνών παρέμεινε σε μεγάλο βαθμό αμετάβλητη. Η μέση επιβίωση είναι περίπου 6 μήνες [1], [2]. Ένας λόγος για την κακή επιβίωση του καρκίνου του παγκρέατος είναι η έλλειψη ευαισθησίας στις περισσότερες συμβατικές θεραπείες, συμπεριλαμβανομένων χημειοθεραπεία και την ακτινοθεραπεία [3]. Έτσι, τα νέα και αποτελεσματικά θεραπευτικά μέσα ή αγωγές χρειάζονται επειγόντως για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος.

Η απόπτωση είναι ένα ουσιαστικό μέρος των μηχανισμών που διατηρούν φυσιολογικής ομοιοστασίας των ιστών [4]. Η απορρύθμιση των μηχανισμών της απόπτωσης και της φοροδιαφυγής απόπτωσης είναι ένα γενικό μηχανισμό για τον καρκίνο. Οι περισσότερες χημειοθεραπείες δρουν με την επαγωγή της απόπτωσης. Ως εκ τούτου, αποφυγή της απόπτωσης είναι κυρίως υπεύθυνη για την ανεπάρκεια των σημερινών θεραπειών [2], [5]. Είναι γνωστό ότι τα κύτταρα μπορεί να πεθάνουν απόπτωσης πρωτίστως μέσω της οδού του υποδοχέα που προκαλείται από εξωγενή θάνατο και /ή την εγγενή μιτοχόνδρια μεσολάβηση οδού [6]. Η ενεργοποίηση της εξωγενούς θανάτου μεσολάβηση υποδοχέα αποπτωτική οδός περιλαμβάνει την απολίνωση ενός συνδέτη θανάτου (π.χ., παράγοντας νέκρωσης των όγκων που σχετίζονται με συνδέτη που επάγει απόπτωση? TRAIL) με τον υποδοχέα της αντίστοιχης επιφάνειας κυττάρου θανάτου (ες) ή συσσωμάτωση (π.χ. τριμερισμό) του θανάτου υποδοχείς, οδηγώντας στο σχηματισμό του θανάτου που επάγει σηματοδότηση σύμπλοκο (DISC) που ακολουθείται από την ενεργοποίηση διάσπαση κασπάσης-8 στο δίσκο. Επειδή Προσφορά χρησιμεύει ως κασπάσης-8 υποστρώματος, η ενεργοποίηση του αποπτωτικό μονοπάτι εξωγενούς υποδοχέα θανάτου αποδεικνύεται επίσης από την εγγενή αποπτωτικό μονοπάτι [7].

Το TRAIL συνδέτη θανάτου έχει πρόσφατα αναδειχθεί ως εν δυνάμει θεραπευτικό του καρκίνου παράγοντα, διότι κατά προτίμηση επάγει απόπτωση σε μετασχηματισμένα ή κακοήθη κύτταρα [8]. Επί του παρόντος, η ανασυνδυασμένη ανθρώπινη TRAIL δοκιμάζεται σε κλινικές δοκιμές φάσης Ι. Επιπλέον, αγωνιστικά αντισώματα εναντίον DR4 και DR5, οι οποίες ενεργοποιούν άμεσα την εξωγενή αποπτωτικό μονοπάτι, έχουν επίσης δοκιμαστεί σε φάση Ι ή ΙΙ δοκιμές [9]. Έτσι, ο υποδοχέας ποινή, ιδιαίτερα η απόπτωση που διαμεσολαβείται από τον υποδοχέα TRAIL θάνατο έχει υπό έντονη έρευνα ως θεραπευτικός στόχος καρκίνο [10], [11]. Πολλές προκλινικές μελέτες έχουν δείξει θεραπευτικές δυνατότητες της στόχευσης του TRAIL /death μεσολάβηση υποδοχέα απόπτωσης σε παγκρεατικού καρκίνου [12] – [20]. Ωστόσο, ένα σημαντικό ζήτημα από την άποψη αυτή είναι η εγγενής αντίσταση ορισμένων καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα σε απόπτωση TRAIL /θανάτου υποδοχέα που προκαλείται [17], [18].

Κινητά ΡΕΙΟΕ-ανασταλτική πρωτεΐνη (C- FLIP), η οποία αναστέλλει κασπάση-8 ενεργοποίησης, εμποδίζοντας την πρόσληψη της κασπάσης-8 σε δίσκο, είναι ο πρωταρχικός αναστολέας της απόπτωσης που επάγεται από υποδοχέα TRAIL /death [21], [22]. Τα επίπεδα της C-FLIP, συμπεριλαμβανομένων τόσο FLIP

L και flip

S υπόκεινται σε ρύθμιση από ουμπικιτίνης /πρωτεασώματος με τη μεσολάβηση της υποβάθμισης [23] – [25]. Η αυξημένη έκφραση c-FLIP προστατεύει τα κύτταρα από την απόπτωση με τη μεσολάβηση υποδοχέων θανάτου, ενώ ρύθμιση προς τα κάτω της c-FLIP με χημικά ή μικρό παρεμβαλλόμενο RNA ευαισθητοποιεί κύτταρα σε θάνατο μεσολάβηση υποδοχέα απόπτωσης [26]. Η υπερέκφραση του c-FLIP έχει προταθεί να είναι ο βασικός μηχανισμός υποκείμενη αντίσταση TRAIL στον καρκίνο του παγκρέατος [13], [17].

LBH589 (panobinostat) είναι μια παν-δεακετυλάσης ιστόνης (HDAC) αναστολέας με ελπιδοφόρα αντικαρκινικά δραστηριότητα [27]. δραστηριότητα Single-παράγοντα κατά του καρκίνου του παγκρέατος έχει αποδειχθεί σε προκλινικές πειραματικά μοντέλα [28]. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε αποκαλύψει μια νέα δραστηριότητα του LBH589, η οποία ευαισθητοποιεί παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα να TRAIL επαγόμενη απόπτωση. Επιπλέον, έχουμε δείξει ότι LBH589 διευκολύνει ουμπικουϊτίνης /πρωτεασώματος μεσολάβηση αποικοδόμησης c-flip, οδηγώντας σε ενίσχυση της TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε καρκίνο του παγκρέατος.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

LBH589 παρεσχέθη από Novartis (Βασιλεία, Ελβετία). Το διαλυτό ανασυνδυασμένο ανθρώπινο TRAIL αγοράστηκε από την PeproTech, Inc. (Rocky Hill, NJ). Το MG132 αναστολέας πρωτεασώματος και ο αναστολέας της πρωτεϊνικής σύνθεσης cyclohexemide (CHX) αγοράστηκαν από την Sigma Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ). αντίσωμα αντι-DR5 κουνελιού πολυκλωνικό αγοράστηκε από Prosci Inc (Poway, CA). Mouse μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-DR4 (Β-N28) αγοράστηκε από Diaclone (Stamford, CT). μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-κασπάση-3 αγοράστηκε από την Imgenex (San Diego, CA). Πολυκλωνικός αντι-ΧΙΑΡ, αντι-κασπάση-8, αντι-Mcl-1, και αντισώματα αντι-ΡΑΚΡ και μονοκλωνικά ποντικού αντι-survivin αντίσωμα αγοράστηκαν από Cell Signaling Technology, Inc. (Beverly, ΜΑ). Mouse αντίσωμα αντι Bcl-2 αγοράστηκε από Santa Cruz Biotechnology, Inc (Santa Cruz, CA). αντι-GAPDH πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού και μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-Βαχ ποντικού αγοράστηκαν από Trevigen (Gaithersburg, MD). μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-β-ακτίνης αγοράστηκε από την Sigma Chemical Co.

Γραμμές Κυττάρων και Cell Culture

Ανθρώπινο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection ( Manassas, VA). Για τον καθορισμό των παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές που εκφράζουν σταθερά έκτοπη c-FLIP ή survivin, Panc-1 κύτταρα μολύνθηκαν με φακοϊούς φιλοξενούν λεντοϊού φορείς έκφρασης του FLIP

L και survivin, αντίστοιχα, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29], [30]. Μπορούμε επίσης μολυσμένα κύτταρα με φακοϊούς που φέρουν φορέα έκφρασης Lac Ζ ως μάρτυρας [29]. Ξεχωριστοί κλώνοι κυττάρων ανθεκτικές σε βλαστισιδίνη επεκτάθηκαν και υποβλήθηκαν σε διαλογή της έκφρασης του στοχευμένου πρωτεΐνης με κηλίδωση Western. Αυτές οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε μέσο DMSM που περιέχει 5% ορό εμβρύου μόσχου στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2 και 95% αέρα.

Κυττάρων Δοκιμασία Επιβίωσης

τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες κυτταρικής καλλιέργειας 96 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία η επόμενη ημέρα με τα μέσα που αναφέρονται. Οι αριθμοί των βιώσιμων κυττάρων προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία σουλφοροδαμίνης Β (SRB), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [31]. δείκτης συνδυασμού για την αλληλεπίδραση φαρμάκων (π.χ., η συνέργεια) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό CompuSyn (ComboSyn, Inc .; Paramus, NJ). Η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών μεταξύ των δύο θεραπειών αναλύθηκε με δύο όψεων unpaired σπουδαστή

t

δοκιμές με τη χρήση του Graphpad Instat 3 λογισμικό (GraphPad Software, San Diego, CA). Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν ότι είναι στατιστικά σημαντική σε

P

& lt?. 0.05

Ανίχνευση απόπτωσης

Η απόπτωση εκτιμήθηκε με χρώση αννεξίνης V χρησιμοποιώντας κιτ ανίχνευσης απόπτωσης αννεξίνη V-ΡΕ αγοράζονται από BD Biosciences (San Jose, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Διαπιστώσαμε επίσης την ενεργοποίηση της κασπάσης με κηλίδωση Western (όπως περιγράφεται παρακάτω) ως επιπρόσθετος δείκτης της απόπτωσης.

Ανάλυση Western Blot

λύματα πρωτεΐνη ολόκληρου κυττάρου παρασκευάστηκαν και αναλύθηκαν με κηλίδωση Western όπως περιγράφεται προηγουμένως [32], [33].

Ανοσοκαταβύθιση για την ανίχνευση των Ubiqutinated γ-FLIP

Panc-1 /FLIP

L 5-κύτταρα, τα οποία εκφράζουν σταθερά FLIP

L, επιμολύνθηκαν με HA-ουβικιτίνη πλασμιδίου χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Fugene 6 διαμόλυνσης (Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, ΙΝ) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με LBH589 ή MG132 συν LBH589 για 4 ώρες και στη συνέχεια λύθηκαν για ανοσοκαταβύθιση Flag-FLIP

L χρησιμοποιώντας το μονοκλωνικό αντίσωμα Flag Μ2 (Sigma Chemicals) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [34] που ακολουθείται από την ανίχνευση της ουβικουιτινωμένης FLIP

L με κηλίδωση Western χρησιμοποιώντας αντι-HA αντίσωμα (Abgent? San Diego, CA)

Αποτελέσματα

LBH589 ευαισθητοποιεί καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος να TRAIL επαγόμενη απόπτωση

.

Προσδιορίσαμε πρώτα τις ευαισθησίες του παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη να TRAIL. Όπως παρουσιάζεται στο Σχ. 1Α, τέσσερα παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές έδειξαν απόκλιση ευαισθησίες: MiaPaCa-2 και BxPC3 εμφάνισαν δοσοεξαρτώμενη μείωση στην επιβίωση των κυττάρων κατά την κατεργασία TRAIL και έτσι ήταν ευαίσθητα σε TRAIL, ενώ Panc-1 και Capan-2 ήταν ανθεκτικά σε TRAIL επειδή έδειξε ελάχιστη απόκριση προς TRAIL σε μείωση στην επιβίωση των κυττάρων. Όταν συνδυάζεται με LBH589, ενισχυμένη επιδράσεις κυτταρικής θανάτωσης ήταν δεν παρατηρήθηκαν μόνο σε TRAIL-ευαίσθητα κύτταρα (π.χ., BCPC-3), αλλά και σε TRAIL-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές (π.χ., Panc-1 και Capan-2), λόγω του συνδυασμού των LBH589 και TRAIL ήταν πολύ περισσότερο από οποιαδήποτε μόνη στη μείωση της επιβίωσης των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων (Εικ. 1Β) παράγοντα. Οι δείκτες συνδυασμού για LBH589 (π.χ., 12,5 ηΜ) και TRAIL (3,125 – 26 ng /ml) συνδυασμό στις δοκιμαζόμενες κυτταρικές γραμμές ήταν & lt? 0,5 ​​(Εικ. 1C), δείχνοντας ότι LBH589 και συνδυασμός TRAIL εξασκεί συνεργιστικά αποτελέσματα στη μείωση κυτταρικής επιβίωσης παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων. Επιπλέον, ανιχνεύονται απευθείας με τη μέτρηση της απόπτωσης αννεξίνη V-θετικά κύτταρα και διάσπαση της κασπάσης σε κύτταρα που εκτίθενται σε LBH589 μόνο, TRAIL μόνο και συνδυασμός τους. Σε συμφωνία με τα δεδομένα επιβίωσης των κυττάρων, ο συνδυασμός του LBH589 και TRAIL ήταν πολύ πιο ισχυρή από κάθε μεμονωμένο παράγοντα μόνο στην επαγωγή διάσπαση της κασπάσης-9, κασπάσης-8, κασπάσης-3 και PARP (Εικ. 2Α) και την αύξηση της αννεξίνης ν-θετικής κύτταρα (δηλαδή, αποπτωτικά κύτταρα) (Σχ. 2Β). Συγκεκριμένα, LBH589 και TRAIL μόνη προκάλεσε περίπου 18% και 21% απόπτωση, αντίστοιχα? Ωστόσο, ο συνδυασμός του LBH589 και TRAIL επαγόμενη περίπου 62% απόπτωση, η οποία είναι προφανώς μεγαλύτερη από αθροιστική δράση. Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι LBH589 ευαισθητοποιούν παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα να TRAIL επαγόμενη απόπτωση.

A

, οι αναφερόμενες κυτταρικές γραμμές σπάρθηκαν σε πλάκες κυτταρικής καλλιέργειας 96 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία την επόμενη μέρα με οι δεδομένες συγκεντρώσεις του TRAIL για 24 ώρες. Οι αριθμοί των κυττάρων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία SRB. Τα δεδομένα είναι τα μέσα τις τέσσερεις πανομοιότυπες προσδιορισμών? μπαρ, ± SDS. *,

P

& lt? 0,01 σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα.

B

, οι αναφερόμενες κυτταρικές γραμμές εμβολιάστηκαν σε πλάκες κυτταρικής καλλιέργειας 96 φρεατίων υπέστησαν κατεργασία με τις δεδομένες συγκεντρώσεις του TRAIL και μόνο, LBH589 μόνο, ή το αντίστοιχο συνδυασμό LBH και TRAIL για 24 ώρες. Οι αριθμοί των κυττάρων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία SRB. Τα δεδομένα είναι τα μέσα τις τέσσερεις πανομοιότυπες προσδιορισμών? μπαρ, ± SDS. Σε Bxpc-3 και τα κύτταρα Panc-1, κάθε συνδυασμός είναι σημαντικά πιο αποτελεσματικός από είτε μόνες TRAIL ή LBH589 μόνος στη μείωση της κυτταρικής επιβίωσης (

P

& lt? 0,05 ή & lt? 0.001). Σε κύτταρα Capan-2, LBH589 στους 50 ηΜ σε συνδυασμό με 12,5 ng /ml ή 25 ng /ml είναι σημαντικά πιο αποτελεσματικά από ό, τι LBH589 ή TRAIL μόνος στη μείωση της κυτταρικής επιβίωσης (

P

& lt? 0.001). Έτσι είναι η LBH589 σε 25 πΜ ή 50 ηΜ σε συνδυασμό με TRAIL (

P

& lt? 0,05).

C

, Συνδυασμοί ευρετήρια (ΠΙ) υπολογίστηκαν με βάση τα δεδομένα που παρουσιάζονται στο Σχ. 1Β χρησιμοποιώντας το λογισμικό CompuSyn.

Η

Μια

, οι αναφερόμενες κυτταρικές σειρές υποβλήθηκαν σε θεραπεία με DMSO ελέγχου, 50 nM LBH589 25 ng /ml TRAIL μόνο, ή LBH589 συν TRAIL. Μετά από 16 ώρες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε παρασκευή προϊόντων λύσης πρωτείνης ολικού κυττάρου για την ανίχνευση διάσπασης κασπάσης χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western. Casp, κασπάσης? CF, διασπασμένο θραύσμα.

B

, κύτταρα Panc-1 υποβλήθηκαν σε αγωγή με 25 ng /ml TRAIL μόνος, μόνος 50 ηΜ LBH589 ή συνδυασμός τους για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε μέτρηση της απόπτωσης χρησιμοποιώντας χρώση αννεξίνης V. Οι τοις εκατό θετικών κυττάρων στην επάνω δεξιά και κάτω δεξιά τεταρτημόρια αντιπροσωπεύουν το σύνολο του πληθυσμού αποπτωτικών κυττάρων.

Η

LBH589 μειώνει τα επίπεδα της C-FLIP και Survivin σε παγκρεατικά κύτταρα καρκίνου

Για να καταλάβετε οι μηχανισμοί με τους οποίους LBH589 ευαισθητοποιεί καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές σειρές με TRAIL επαγόμενη απόπτωση, αναλύσαμε πρώτα τα ρυθμιστικά αποτελέσματα των LBH589 σε γ-flip, DR5, DR4 και TRAIL, τα οποία εμπλέκονται άμεσα στη ρύθμιση του /απόπτωση με τη μεσολάβηση υποδοχέων θανάτου TRAIL , σε τρία παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. κύτταρα Capan-2 Panc-1 και είχαν υψηλότερα βασικά επίπεδα της c-FLIP (ιδιαίτερα FLIP

L) από ό, τι Bxpc-3 κύτταρα. Η κατεργασία αυτών των κυτταρικών σειρών με LBH589 μείωσε τα επίπεδα του c-FLIP σε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο (Εικ. 3Α). Η μείωση του c-FLIP συνέβη σε 3 ώρες και έγινε ακόμη πιο έντονη σε 12 ώρες μετά και στη συνέχεια μετά τη θεραπεία LBH589 (Σχ. 3Β). LBH589 δεν μετέβαλλε τα επίπεδα του TRAIL σε οποιαδήποτε από τις δοκιμαζόμενες κυτταρικές σειρές (Σχ. 3Α) και μόνο ελάχιστα αυξημένη έκφραση του DR5 σε μία από τις τρεις κυτταρικές γραμμές δοκιμάστηκαν (δηλ Bxpc-3) (Σχ. 3Α και 3Β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν σαφώς ότι το c-FLIP donwregulation είναι ένα σημαντικό γεγονός που προκαλείται από LBH589.

Οι δοθείσες κυτταρικές γραμμές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις LBH589 όπως υποδεικνύεται για 12 ώρες (

A

) ή με 50 ηΜ LBH589 για τους υποδεικνυόμενους χρόνους (

B

). Μετά τις αγωγές, οι κυτταρικές σειρές υποβλήθηκαν σε παρασκευή προϊόντων λύσης πρωτείνης ολικού κυττάρου και την επακόλουθη ανάλυση στυπώματος Western για την ανίχνευση των υποδεικνυόμενων πρωτεϊνών.

Η

Επιπλέον, εξετάσαμε επίσης τα ρυθμιστικά αποτελέσματα των LBH589 επί άλλες πρωτεΐνες συμπεριλαμβανομένων survivin, ΧΙΑΡ, Bcl-2, Mcl-1, και Βαχ, τα οποία ρυθμίζουν την μιτοχόνδρια απόπτωση. LBH589 μειωμένα επίπεδα survivin σε κύτταρα Capan-2 Panc-1 και, αλλά όχι Bxpc-3 κύτταρα (Σχ. 3Α). ανάλυση πορεία Χρόνος επίπεδα survivin σε κύτταρα Panc-1 κατέδειξαν ότι η έντονη μείωση survivin συνέβη στις 12 ώρες μετά τη θεραπεία LBH589 (Σχ. 3Β). LBH589 δεν μετέβαλε τα επίπεδα των Bax και ΧΙΑΡ σε αυτές τις κυτταρικές σειρές? Ωστόσο, αύξησε τα επίπεδα του Mcl-2 σε αυτές τις κυτταρικές σειρές, καθώς και τα επίπεδα Bcl-2 σε Bxpc-3 κύτταρα (Σχ. 2Α). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν επίσης ότι η μείωση survivin μπορεί επίσης να είναι ένα σημαντικό γεγονός που προκαλείται από LBH589.

Αναγκαστική έκφραση της έκτοπης c-flip, αλλά όχι Survivin, προστατεύει τα κύτταρα από επαγωγή απόπτωσης με το συνδυασμό των LBH569 και TRAIL

και οι δύο γ-FLIP και survivin εμπλέκονται στη ρύθμιση της ευαισθησίας TRAIL κυττάρων [35]. Για να προσδιοριστεί η συμμετοχή του c-FLIP και survivin μειορύθμιση σε ευαισθητοποίηση των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων στο TRAIL απόπτωση που επάγεται από LBH589, έχουμε καθιερωμένες κυτταρικές γραμμές Panc-1 που εκφράζεται σταθερά έκτοπη FLP

L ή survivin μέσω lentivial σύστημα έκφρασης και, στη συνέχεια, εξέτασε τις απαντήσεις τους στο συνδυασμό LBH589 και TRAIL. Η έκφραση της survivin έκτοπη ή c-FLIP υποτέθηκε με κηλίδωση Western όπως παρουσιάζεται στο Σχ. 4Α. Lac Ζ είναι μια άσχετη πρωτεΐνη και εδώ χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Όπως καταδεικνύεται ανωτέρω, ο συνδυασμός των LBH589 και TRAIL μειωθεί αποτελεσματικά την επιβίωση των κυττάρων σε Lac Ζ ή survivin-κυτταρικές σειρές που εκφράζουν, αλλά απέτυχε να το πράξει στις δύο κυτταρικές σειρές που εκφράζουν έκτοπη FLIP

L (Εικ. 4Β), υποδεικνύοντας το εκτελεστεί έκφραση της έκτοπης FLIPL, αντί survivin, προσδίδει αντίσταση κύτταρο να αυξηθεί επαγωγή απόπτωσης με LBH589 και συνδυασμού TRAIL. Με την ανίχνευση απόπτωσης, βρήκαμε ότι ο συνδυασμός του LBH589 επάγεται ισχυρά διάσπαση της κασπάσης-8, κασπάσης-9, κασπάσης-3 και PARP σε Panc-1 κυτταρικές σειρές που εκφράζουν Lac Ζ ή survivin, αλλά μόνο ελάχιστα σε FLIP

L εκφράζοντα κύτταρα Panc-1 (Σχ. 5Α). Σε συμφωνία, ο συνδυασμός LBH589 και TRAIL προκάλεσε περίπου 79% και 69% απόπτωσης σε Panc-1 /lac Ζ-1 και Panc-1 /survivin-4 κύτταρα, αντίστοιχα, αλλά μόνο περίπου 25% απόπτωσης σε Panc-1 /FLIPL-5 κύτταρα (Σχ. 5Β), επιβεβαιώνοντας περαιτέρω ότι το FLIP

L υπερέκφραση προσδίδει αντίσταση των κυττάρων με το συνδυασμό LBH589 και TRAIL. Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν ότι το c-FLIP μειορύθμιση διαδραματίζει βασικό ρόλο στην LBH-589 με τη μεσολάβηση ευαισθητοποίηση των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος να TRAIL επαγόμενη απόπτωση.

A

, η έκφραση της έκτοπης survivin ή c-FLIP στα διάφορα trasnfectants όπως υποδεικνύεται ανιχνεύθηκε με κηλίδωση Western με survivin ή αντίσωμα c-FLIP.

B

, Οι δοθείσες μορφομετατροπείς σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις LBH589 μόνο, 25 ng /ml TRAIL μόνο, ή μεμονωμένα συνδυασμός LBH589 με TRAIL. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε δοκιμασία SRB για τη μέτρηση της κυτταρικής επιβίωσης. Τα δεδομένα είναι τα μέσα τις τέσσερεις πανομοιότυπες προσδιορισμών? μπαρ? ± SDS. *,

P

& lt? 0,0001 και #,

P

& lt? 0.001 σε σύγκριση με τη θεραπεία LBH589 μόνη

Η

Τα αναφερόμενα προϊόντα επιμόλυνσης υποβλήθηκαν σε θεραπεία χωρίς και με 50 nM. LBH589 συν 25 ng /ml TRAIL (L /T) για 16 ώρες (

Α

) ή 24 ώρες (

Β

). Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέχθηκαν για παρασκευή προϊόντων λύσης πρωτείνης ολικού κυττάρου για την ανίχνευση κασπάσης και PARP διάσπαση χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western (

A

) ή για τη μέτρηση της απόπτωσης χρησιμοποιώντας χρώση αννεξίνης V (

B

). Οι τοις εκατό θετικών κυττάρων στην επάνω δεξιά και κάτω δεξιά τεταρτημόρια αντιπροσωπεύουν το σύνολο του πληθυσμού αποπτωτικών κυττάρων.

Η

LBH589 Donwregulates γ-ξεφυλλίσετε Προώθηση Ubiqitin /πρωτεασώματος με τη μεσολάβηση Υποβάθμιση

Με δεδομένη την κρίσιμη ρόλος της c-FLIP ρύθμιση προς τα κάτω στη διαμεσολάβηση ενίσχυση του TRAIL επαγόμενη απόπτωση από LBH589 όπως αποδείχθηκε παραπάνω, ασχοληθήκαμε περαιτέρω πώς LBH589 μειωμένα επίπεδα c-FLIP. Επειδή οι πρωτεΐνες c-FLIP είναι γνωστό ότι ρυθμίζονται από ουμπικιτίνης /πρωτεασώματος μεσολάβηση αποικοδόμησης [23], [25], μπορούμε τότε προσδιορίζεται εάν η παρατηρούμενη προς τα κάτω ρύθμιση της c-FLIP με LBH589 θα προκαλείται μέσω αυτής της διαδικασίας. Έτσι, εξέτασε πρώτα κατά πόσον LBH589 προωθεί την υποβάθμιση γ-FLIP. Για το σκοπό αυτό, υποβάλλαμε σε αγωγή Panc-1cells είτε με DMSO ή LBH589 για 4 ώρες και στη συνέχεια πλύθηκε μακριά το φάρμακο που ακολουθείται από την επαναπλήρωση των κυττάρων με φρέσκο ​​μέσο που περιέχει τον CHX αναστολέα σύνθεσης πρωτεΐνης. Στους δεικνυόμενους χρόνους μετά CHX, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για κηλίδωση Western για την ανάλυση ρυθμός αποικοδόμησης c-FLIP. Όπως παρουσιάζεται στο Σχ. 6Α, το ποσοστό μείωσης ή αποικοδόμηση του FLIP

L σε κύτταρα LBH589 αγωγή ήταν εμφανώς ταχύτερα από ότι σε κύτταρα ελέγχου DMSO-θεραπεία, δείχνοντας ότι LBH589 διευκολύνει πράγματι αποικοδόμηση c-FLIP. Στη συνέχεια, κατεργασμένα κύτταρα με LBH589 απουσία και παρουσία του MG132 αναστολέα πρωτεασώματος και στη συνέχεια συγκρίνονται διαμόρφωσης c-FLIP υπό αυτές τις συνθήκες. Όπως παρουσιάζεται στο Σχ. 6Β, LBH589 μειωμένα επίπεδα c-FLIP απουσία MG132, αλλά όχι με την παρουσία του MG132, υποδηλώνοντας ότι LBH589 επαγόμενη αποικοδόμηση c-FLIP είναι πρωτεασώματος εξαρτώμενη. Με ανοσοκαταβύθιση /κηλίδωση Western, ανιχνεύσαμε επίσης τα υψηλότερα επίπεδα ubiqutinated FLIP

L σε κύτταρα κατεργασμένα με LBH589 συν MG132 σύγκριση με τα κύτταρα που εκτίθενται σε μόνη ή MG132 μόνο (Σχ. 6C) LBH589, υποδεικνύοντας ότι ΗΝΚ αυξάνει c-FLIP ουβικουϊτινίωση . Στο σύνολό τους, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι LBH589 προκαλεί ουμπικιτίνης /πρωτεασώματος με τη μεσολάβηση της υποβάθμισης c-FLIP, οδηγώντας σε ελάττωση της c-FLIP στα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος.

Μια

, κύτταρα Panc-1 ήταν υποβλήθηκε σε επεξεργασία με DMSO ή 50 ηΜ LBH589 για 4 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν με PBS 3 φορές και επανατροφοδοτήθηκαν με φρέσκο ​​μέσο που περιέχει 10 μg /ml CHX. Στους δεικνυόμενους χρόνους μετά CHX, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για την παρασκευή των προϊόντων λύσης πρωτείνης ολικού κυττάρου και την εν συνεχεία ανάλυση Western blot. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν με το λογισμικό ΝΙΗ Image J (Bethesda, ΜΑ) και κανονικοποιήθηκαν προς GAPGH. Τα αποτελέσματα χαράσσονται ως τα σχετικά επίπεδα c-FLIP σε σύγκριση με εκείνους που βρίσκονται στο χρόνο 0 της αγωγής CHX (κάτω πίνακας).

B

, κύτταρα Panc-1 προκατεργάστηκαν με 20 μΜ MG132 για 30 λεπτά πριν από την προσθήκη 50 ηΜ LBH589. Μετά την συν-θεραπεία για 4 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για την παρασκευή των προϊόντων λύσης πρωτείνης ολικού κυττάρου και την εν συνεχεία ανάλυση Western blot.

C

, Panc-1 /FLIP

L-5 κύτταρα τα οποία εκφράζουν σταθερά έκτοπη flag-FLIP

L επιμολύνθηκαν με HA-ουβικιτίνης πλασμίδιο χρησιμοποιώντας FuGENE 6 αντιδραστήριο επιμόλυνσης για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια προκατεργάστηκαν με 20 μΜ MG132 για 30 λεπτά και στη συνέχεια συν-επεξεργασία με 50 ηΜ LBH589 για 4 ώρες. λύματα πρωτεΐνη ολόκληρου κυττάρου στη συνέχεια παρασκευάζονται για ανοσοκαταβύθιση (ΙΡ) με τη χρήση αντισώματος αντι-Flag που ακολουθείται από κηλίδωση Western (WB) με τη χρήση αντι-ΗΑ αντίσωμα για την ανίχνευση του ουβικουιτινωμένης FLIP

L (Ub-FLIP

L) και αντι -FLAG αντισωμάτων για την ανίχνευση της έκτοπης FLIP

L.

Η

Συζήτηση

Ανθρώπινο παγκρέατος καρκινικών όγκων ή κυτταρικές σειρές παρουσιάζουν ετερογενείς αντιδράσεις στο TRAIL. Μερικοί από αυτούς τους όγκους ή κυτταρικές γραμμές είναι εγγενώς ευαίσθητα στην TRAIL επαγόμενη απόπτωση [17], [18]. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε παρουσιάσει ένα νέο εύρημα ότι ο αναστολέας αποακετυλάσης ιστόνης LBH589 αυξάνει αποτελεσματικά TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που ανθεκτικά σε TRAIL επαγόμενη απόπτωση. Δεδομένου ότι LBH589 δείχνει αντικαρκινική δράση σε προκλινικά μοντέλα καρκίνου του παγκρέατος [28], καθώς και ότι ο όγκος επιλεκτικών TRAIL είναι ένας πιθανός καρκίνος θεραπευτικής πρωτεΐνης και ο οποίος δοκιμάζεται στην φάση Ι των κλινικών δοκιμών, τα ευρήματά μας απαιτούν περαιτέρω αξιολόγηση για το συνδυασμό των LBH589 και TRAIL ως ένα δυνητικό θεραπευτικές αγωγές κατά του καρκίνου του παγκρέατος σε ζωικά μοντέλα και σε κλινικές δοκιμές.

Τόσο survivin και ΧΙΑΡ προτείνονται για τη ρύθμιση διαμεσολαβείται από TRAIL απόπτωση [12], [36], [37]. Μερικοί αναστολείς HDAC όπως το βουτυρικό νάτριο και LAQ824 αναφέρθηκαν για να αυξήσουν TRAIL απόπτωση που επάγεται περιλαμβάνουν donwregualtion της survivin και ΧΙΑΡ [38], [39]. Μια πρόσφατη μελέτη έχει προτείνει ότι LBH589 ενισχύει TRAIL επαγόμενη απόπτωση μέσω προς τα κάτω ρύθμιση των ΧΙΑΡ σε κύτταρα μεσοθηλιώματος [40]. Στη μελέτη μας, βρήκαμε ότι LBH589 μειωμένα επίπεδα survivin σε δύο (δηλαδή, Panc-1 και Capan-2) τριών δοκιμάστηκαν παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές αλλά δεν προφανώς μεταβάλλουν τα επίπεδα του ΧΙΑΡ (Εικ. 3). Επιπλέον, επιβάλλεται η έκφραση της έκτοπης survivin δεν προσδίδουν αντίσταση σε LBH589 /TRAIL-επαγώμενη απόπτωση (Σχ. 4 και 5). Έτσι, survivin και ΧΙΑΡ είναι απίθανο να εμπλέκονται στη ρύθμιση του LBH589 μεσολάβηση ευαισθητοποίηση του TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος.

Bcl-2 μελών της οικογενείας όπως Bcl-2 και Mcl-1 έχουν επίσης προτείνεται στην ρύθμιση του TRAIL-επαγώμενη απόπτωση [14], [35]. Άλλοι αναστολείς HDAC ενισχύσουν TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε διάφορα καρκινικά κύτταρα που περιλαμβάνουν διαμόρφωση των μελών της οικογένειας Bcl-2, όπως ρύθμιση προς τα κάτω της Bcl-2 και Bcl-X

L και προς τα πάνω ρύθμιση του Βαχ και Bim [39], [41] – [ ,,,0],44]. Στη μελέτη μας, LBH589 δεν άλλαξε τα επίπεδα Bax. Απροσδόκητα, LBH589 αύξησε τα επίπεδα του Bcl-2 και Mcl-1 (Εικ. 3). Έτσι, η διαμόρφωση των πρωτεϊνών αυτών δεν είναι πιθανό να συνδέεται με LBH589 μεσολάβηση δυναμικοποίηση του TRAIL επαγόμενη απόπτωση σε αυτές τις κυτταρικές σειρές? μάλλον, αύξηση στην Bcl-2 και Mcl-1 μπορεί να εξουδετερώσει επίδραση LBH589 στην ευαισθητοποίηση των παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα να TRAIL απόπτωση. Έτσι, η περαιτέρω ενσωμάτωση ενός αναστολέα της Bcl-2 ή Mcl-1 σε αυτό το σχήμα μπορεί να οδηγήσει σε ακόμη πιο αποτελεσματική αντικαρκινική αποτελεσματικότητα από τον συνδυασμό των LBH589 και TRAIL και θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω.

επαγωγή DR5 και c-FLIP προς τα κάτω ρύθμιση είναι σημαντικοί μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω φάρμακο μεσολάβηση αύξηση ή ευαισθητοποίηση του TRAIL-επαγώμενη απόπτωση [45]. Στη μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι LBH589 είτε έκαναν όχι ή μόνο ασθενώς αυξημένη έκφραση του DR5 σε παγκρεατικά καρκινικές κυτταρικές σειρές (Εικ. 3), γεγονός που υποδηλώνει ότι DR5 διαμόρφωση έχει περιορισμένο ρόλο στην LBH589 μεσολάβηση ευαισθητοποίηση του TRAIL απόπτωση σε αυτά τα κύτταρα. Τα επίπεδα c-FLIP προταθεί ότι σχετίζεται με την ευαισθησία των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος να TRAIL απόπτωση? Συγκεκριμένα, τα υψηλότερα επίπεδα της c-FLIP ανιχνεύθηκε στα TRAIL ανθεκτικά παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές σε σχέση με τα ευαίσθητα κύτταρα TRAIL [17]. Αναστολή της c-FLIP με ένα μικρό παρεμβαλλόμενο RNA ή ένα μικρό μόριο ευαισθητοποιεί παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα να TRAIL επαγόμενη απόπτωση [13], [17]. Επιπλέον, άλλοι αναστολείς HDAC όπως LAQ824, MS-275, FR901228, βαλπροϊκό οξύ και droxinostat έχουν αποδειχθεί ότι ρυθμίζουν προς τα κάτω τα επίπεδα c-FLIP και να ενισχύσει υποδοχέα απόπτωση που επάγεται θάνατος [46] – [52]. Στη μελέτη μας, βρήκαμε επίσης ότι οι TRAIL-ανθεκτικές κυτταρικές σειρές Panc-1 και Capan-2 είχαν υψηλότερα βασικά επίπεδα της C-FLIP από την κυτταρική σειρά TRAIL-ευαίσθητα (Bxpc-3) (Εικ. 3Α). Όπως και άλλοι αναστολείς HDAC, LBH589 μειώθηκε κυτταρικές σειρές C-FLIP σε αυτούς τους τρεις δοκιμάστηκε κυτταρικές σειρές? Αυτό c-FLIP προς τα κάτω ρύθμιση είναι μια ταχεία εκδήλωση επειδή μείωση c-FLIP ανιχνεύθηκε ακόμη και σε 3 ώρες μετά τη θεραπεία LBH589 (Εικ. 3). Είναι σημαντικό, επιβάλλεται η έκφραση της έκτοπης c-FLIP (δηλαδή, flip

L) κατήργησε την ικανότητα LBH589 να ενισχύσει TRAIL επαγόμενη απόπτωση (Σχ. 4 και 5). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι προς τα κάτω ρύθμιση της c-FLIP είναι κρίσιμη για LBH589 μεσολάβηση ευαισθητοποίηση των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος να TRAIL επαγόμενη απόπτωση.

c-FLIP είναι γνωστό ότι ρυθμίζεται από ουμπικιτίνης /πρωτεασώματος μεσολάβηση αποικοδόμησης [ ,,,0],23], [24]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η c-FLIP προς τα κάτω ρύθμιση που επάγεται από ορισμένους αναστολείς HDAC λαμβάνει χώρα σε επίπεδο mRNA [39], [51]. Πώς αναστολείς HDAC ρυθμίζουν προς τα κάτω τα επίπεδα γ-FLIP δεν έχει πλήρως διευκρινιστεί. Στη μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι LBH589 διευκολυνθεί η υποβάθμιση γ-FLIP όπως αποδεικνύεται στην δοκιμασία CHX κυνηγητό. Η παρουσία του MG132 αναστολέα πρωτεασώματος εμπόδισε γ-FLIP από τη μείωση που προκαλείται από LBH589. Επιπλέον, LBH589 αύξησε τα επίπεδα της c-ουβικουιτινωμένης FLIP (Εικ. 6). Έτσι, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι LBH589 διευκολύνει ubqitin /πρωτεασώματος μεσολάβηση αποικοδόμησης c-flip, με αποτέλεσμα c-FLIP μειορύθμιση. Για το καλύτερο της γνώσης μας, το εύρημα για την υποβάθμιση γ-FLIP ή προς τα κάτω ρύθμιση από LBH589 είναι νέα και εγγυάται περαιτέρω έρευνα σχετικά με το πώς η αναστολή της δεακετυλάσης ιστόνης οδηγεί σε υποβάθμιση c-FLIP.

Οι μέγιστες συγκεντρώσεις στο πλάσμα της LBH589 σε ασθενείς με καρκίνο του ανθρώπου κυμαίνονται από 200 ηΜ έως 1300 ηΜ, ανάλογα με τις δόσεις που εξετάστηκαν [53]. Οι συγκεντρώσεις των LBH589 που χρησιμοποιείται στη μελέτη μας, που ρυθμίζουν προς τα κάτω c-FLIP και να ενισχύσει TRAIL-επαγώμενη απόπτωση είναι μεταξύ 12,5 ηΜ και 100 ηΜ και έτσι εντός κλινικά εφικτό εύρος. Ως εκ τούτου, το μέλλον των κλινικών δοκιμών του συνδυασμού είναι δικαιολογημένη.

Ευχαριστίες

F.R. Khuri και S-Y. Sun είναι η Γεωργία Συνασπισμό Καρκίνο Διακεκριμένος Καρκίνος μελετητές.