Αφηρημένο

Το πολλαπλό μυέλωμα (ΜΜ) είναι μια κλωνική νόσος των κυττάρων του πλάσματος ότι παραμένει ανίατη παρά την έλευση αρκετών νέων θεραπευτικών. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε ως στόχο να οριοθετηθούν τις επιπτώσεις του φιδιού δηλητήριο που προέρχονται από το

Walterinnesia aegyptia

(WEV) μόνη ή σε συνδυασμό με νανοσωματίδια διοξειδίου του πυριτίου (WEV + NP) στην πρωτογενή κύτταρα ΜΜ απομονωθεί από ασθενείς με διάγνωση MM καθώς και ως επί δύο κυτταρικές σειρές ΜΜ, U266 και RPMI 8226. το IC

50 τιμές του WEV και WEV + ΝΡ που μειώθηκαν σημαντικά τη βιωσιμότητα των κυττάρων ΜΜ χωρίς να επηρεάζει την βιωσιμότητα των φυσιολογικών περιφερικών μονοπύρηνων κυττάρων (PBMCs) προσδιορίστηκαν να είναι 25 ng /ml και 10 ng /ml, αντίστοιχα. Παρά το γεγονός ότι τόσο WEV (25 ng /ml) και WEV + ΝΡ (10 ng /ml) μείωσε την έκφραση επιφάνειας CD54 χωρίς να επηρεάζει την έκφραση του CXCR4 (υποδοχέας CXCL12) σχετικά με τα κύτταρα του ΠΜ, μείωσαν σημαντικά την ικανότητα του CXC συνδέτη χημειοκίνης 12 (CXCL12 ) για την επαγωγή της ακτίνης του κυτταροσκελετού αναδιάταξη και την επακόλουθη μείωση της χημειοταξίας. Έχει αποδειχθεί ότι η σύνδεση του CXCL12 στον υποδοχέα της CXCR4 ενεργοποιεί πολλαπλά ενδοκυτταρικά μονοπάτια μεταγωγής σήματος που ρυθμίζουν MM κύτταρο χημειοταξίας, προσκόλλησης, και τον πολλαπλασιασμό. Βρήκαμε ότι WEV και WEV + ΝΡ μειώθηκε σαφώς την CXCL12 CXCR4 διαμεσολαβούμενη ενεργοποίηση της ΑΚΤ, ERK, ΝΡκΒ και Α Rho-ανάλυση χρησιμοποιώντας western blot /? ακύρωσε την CXCL12 μεσολάβηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων ΠΜ χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό CFSE? και επαγόμενη απόπτωση σε ΜΜ κυττάρων όπως προσδιορίζεται με PI /αννεξίνης V διπλή χρώση ακολουθούμενη από ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Παρακολούθηση της έκφραση του Β-κυττάρου CCL /λεμφώματος 2 (Bcl-2) μελών της οικογένειας και ο ρόλος τους στην επαγωγή απόπτωσης μετά από θεραπεία με WEV ή WEV + ΝΡ αποκάλυψε ότι ο συνδυασμός της WEV με ΝΡ μειωμένη σθεναρά την έκφραση των αντι-αποπτωτικών τελεστές Bcl-2, Bcl

XL και Mcl-1? Αντιστρόφως αύξησε την έκφραση των προ-αποπτωτικών τελεστές Bak, Βαχ και Bim? και μεταβάλλεται το δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης στα κύτταρα ΜΜ. Στο σύνολό τους, τα δεδομένα μας αποκαλύπτουν τις βιολογικές επιδράσεις της WEV και WEV + NP και των υποκείμενων μηχανισμών ενάντια μυέλωμα καρκινικών κυττάρων

Παράθεση:. Badr G, Al-Sadoon ΜΚ, Abdel-Maksoud MA, Rabah DM, ελ Toni AM (2012) κυτταρικών και μοριακών μηχανισμών αποτελούν τη βάση των αντι-όγκου δραστηριότητες που ασκούνται από

Walterinnesia aegyptia

Venom συνδυασμό με Silica νανοσωματίδια κατά Πολλαπλές τύπους κυττάρων του καρκίνου του μυελώματος. PLoS ONE 7 (12): e51661. doi: 10.1371 /journal.pone.0051661

Επιμέλεια: Jin Ερ Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center page=details_en id=40) που χρηματοδοτείται από το βασιλιά Abdulaziz πόλη για την Επιστήμη και την Τεχνολογία (http : //www.kacst.edu.sa/en/Pages/default.aspx) μέσω του αριθμού του έργου 10-BIO969-02. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και να συμφωνήσει το περιεχόμενο του χειρογράφου και ενέκρινε την υποβολή. Οι συγγραφείς δηλώνουν δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων, δηλώνουν ότι το χειρόγραφο δεν έχει δημοσιευθεί ή υποβληθεί αλλού.

Εισαγωγή

Οι αιματολογικές κακοήθειες είναι μία από τις πιο διαδεδομένες μορφές των ανθρώπινων καρκίνων σε όλο τον κόσμο και να προκαλέσει υψηλή θνησιμότητα ποσοστά. Δεδομένου ότι η δεύτερη πιο διαδεδομένη αιματολογικός καρκίνος [1], του πολλαπλού μυελώματος (ΜΜ) είναι μία κακοήθεια των κυττάρων του πλάσματος που πλήττει περίπου 20.000 και σκοτώνει περίπου 10.000 άτομα στις Ηνωμένες Πολιτείες κάθε χρόνο [2]. Οι χημειοκίνες είναι μία μεγάλη οικογένεια χαμηλού μοριακού βάρους (8-10 kDa) κυτοκίνη όπως πρωτεΐνες που εμφανίζουν χημειοελκτικό ιδιότητες προς G-πρωτεΐνη επτά διαμεμβρανικών υποδοχέων στα λευκοκύτταρα [3]. Αρκετές μελέτες έχουν αποκαλύψει το σημαντικό ρόλο των χημοκινών και των υποδοχέων τους στην παθογένεση των κυττάρων ΜΜ [4]. Υποδοχείς χημειοκινών καταδείχθηκαν να εκφράζονται σε καρκινικά κύτταρα και να ενεργεί σε όλα τα στάδια της εξέλιξης του όγκου, συμπεριλαμβανομένων των νεοπλασματικών μετασχηματισμό, χημειόταξη και εισβολή, την αγγειογένεση, κλωνική επέκταση και ανάπτυξη [5]. τα κύτταρα του ΠΜ εκφράζουν διάφορα επίπεδα χημειοκίνης υποδοχείς [6]. Από τα πολυάριθμα εκφράζονται υποδοχείς χημειοκινών, CXCR4 είναι το πιο υψηλά εκφρασμένο σε mm και πολλά άλλα καρκινικά κύτταρα [7]. Ο συνδετήρας CXCR4, CXCL12, εκφράζεται έντονα στον πνεύμονα, το ήπαρ, μυελό των οστών και των λεμφαδένων, τα οποία είναι όλα κοινά μεταστατικό προορισμοί για πολλούς τύπους καρκίνου. Επιπλέον, η προς τα πάνω ρύθμιση του CXCR4 έχει συχνά παρατηρηθεί σε διάφορους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του καρκινώματος του κόλου, λέμφωμα, καρκίνο του μαστού, γλοιοβλάστωμα, λευχαιμία, καρκίνο του προστάτη, ΜΜ και παγκρεατικό καρκίνο [6]. Επιπλέον, διάφορες μελέτες έχουν δείξει ότι CXCR4 είναι επίσης η πιο άφθονη και λειτουργική των υποδοχέων χημειοκίνης εκφράζονται από τα κύτταρα του ΠΜ, και ως εκ τούτου, μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην παθογένεση της νόσου. Πρόσφατα στοιχεία υποδεικνύουν την εμπλοκή του CXCL12 /CXCR4 στην διατήρηση και την επιβίωση των κυττάρων ΛΛ σε τόσο in vivo όσο και in vitro μοντέλα [8]. Παρ ‘όλα αυτά, μετά την διέγερση του CXCR4 με CXCL12 σε κύτταρα του ΠΜ, η ενεργοποίηση των οδών κατάντη σηματοδότησης παραμένει ασαφής και η κατανόηση αυτών των οδών σηματοδότησης αποτελεί ένα σημαντικό μοριακός στόχος για θεραπεία MM [9]. Πυρηνικός παράγοντας-κΒ (NF-κΒ) και ΑΚΤ εμπλέκονται σε δύο μεγάλες οδούς κυτταρικής επιβίωσης που συχνά ιδιοσυστατικά ενεργοποιημένα σε καρκινικά κύτταρα και να συμβάλει ουσιαστικά στην χημειοαντίσταση των καρκινικών κυττάρων [10]. Ωστόσο, η αναστολή της φωσφορυλίωσης της ERK (μια άλλη σημαντική διαδρομή κυτταρικής επιβίωσης) συμβάλλει στην διϋδροαρτεμισινίνη επαγόμενη απόπτωση σε καρκίνο του ήπατος [11]. Τα πρόσφατα δεδομένα μας έδειξαν ότι thymoquinone (φυσικό εκχύλισμα φυτού) διεγείρει διακοπή της ανάπτυξης των κυττάρων ΜΜ με την κατάργηση του CXCL12 μεσολάβηση σηματοδότηση και χημειόταξη, καθώς και με την αύξηση των επιπέδων έκφρασης CD95 και την επιδεκτικότητα των κυττάρων ΜΜ προς Fas απόπτωση που διαμεσολαβείται [12]. Αρκετές αναφορές έχουν αποσαφηνίσει ότι η αποτυχία να υποστούν απόπτωση έχει εμπλακεί στην ανάπτυξη των όγκων και την αντίσταση στη θεραπεία του καρκίνου [13]. Ως εκ τούτου, η επαγωγή της απόπτωσης σε κύτταρα ΜΜ μπορεί να οδηγήσει σε οπισθοδρόμηση και βελτιωμένη ασθένεια πρόγνωση τους [14]. Έτσι, παράγοντες που είναι ικανοί να επάγουν απόπτωση μπορεί να είναι χρήσιμοι χημειοθεραπευτικοί παράγοντες κατά ΜΜ. Στα περισσότερα κύτταρα όγκου, απόπτωση λαμβάνει χώρα μέσω δύο διαφορετικών οδών σηματοδότησης: την εξωγενή και ενδογενή μονοπάτια της απόπτωσης. Η ενδογενής οδός σχετίζεται με αλλαγές στο δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης (ΔΨ) [15], και ως εκ τούτου, το δυναμικό της μιτοχονδριακής μεμβράνης μετρήσεις θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για τη διάκριση μεταξύ των κυττάρων που έχουν apoptosed και κυττάρων που επιβιώνουν. Ωστόσο, η οικογένεια Bcl-2 πρωτεϊνών αποτελείται από εξέχοντα ρυθμιστών της σηματοδότησης απόπτωσης που συχνά υπεξαιρεθεί σε πολλούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του καρκινώματος του πνεύμονα, λέμφωμα, καρκίνωμα μαστού και MM [16]. Μέλη αυτής της οικογένειας πρωτεϊνών μπορούν να διαιρεθούν σε ανταγωνιστές θανάτου, όπως Bcl-2, και αγωνιστές θανάτου, όπως Bak και Βαχ [17]. Της οικογένειας Bcl-2, Bcl-2 είναι ένας πρωτότυπος αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη που συχνά υπερεκφράζεται σε διάφορους τύπους ανθρώπινων καρκίνων [18]. Bcl-2 υπερέκφραση έχει ενοχοποιηθεί σε χημειοαντίσταση καρκίνου, ενώ τα υψηλά επίπεδα της προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών, όπως Βαχ, προάγουν την απόπτωση και ευαισθητοποιούν καρκινικά κύτταρα σε διάφορες αντικαρκινικές θεραπείες.

Αν και το τοπίο της θεραπείας ΜΜ είναι ταχέως μεταβαλλόμενο, αυτή η ασθένεια είναι σε μεγάλο βαθμό ανίατη [19]. Αρκετές χημειοθεραπευτικούς παράγοντες (π.χ., βινκριστίνη, δεξαμεθαζόνη και μελφαλάνη) που χρησιμοποιούνται σήμερα για τη θεραπεία MM. Ωστόσο, αυτά τα φάρμακα έχουν το μειονέκτημα της αύξησης του κινδύνου ανάπτυξης δευτερογενών αιματολογικές κακοήθειες, όπως τα μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα που σχετίζονται με θεραπεία [20]. Ως εκ τούτου, υπάρχει μια κρίσιμη ανάγκη να προσδιοριστούν περαιτέρω βιολογικούς παράγοντες και τους μηχανισμούς που είναι υπεύθυνοι για την επιβίωση των κυττάρων ΜΜ, ογκογένεση και αντίστασης στα φάρμακα [12].

φυσικές ενώσεις έχουν χρησιμοποιηθεί ως ανοσοενισχυτικά σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία για τη μείωση του παρενέργειες και να αυξήσει την αποτελεσματικότητα των θεραπειών κατά του καρκίνου [21]. Τα τελευταία χρόνια, έχουν πολλά φυσικά προϊόντα έχουν αξιολογηθεί για τη χρήση τους στη θεραπεία του καρκίνου [22], [23]. δηλητήριο φιδιών είναι ένα σύμπλοκο μίγμα πολλών ουσιών με ένα ευρύ φάσμα βιολογικών δραστηριοτήτων, συμπεριλαμβανομένης της τοξίνες, ένζυμα, αυξητικούς παράγοντες, ενεργοποιητές και αναστολείς. Φυσικές τοξίνες, ειδικά υπο-θανατηφόρες δόσεις του δηλητηρίου φιδιού, έχουν τη δυνατότητα να μειωθεί το μέγεθος των στερεών όγκων και αναστέλλουν την αγγειογένεση [24]. πρόσφατες μελέτες μας κατέδειξαν την πιθανή κατά του όγκου του δηλητηρίου φιδιού από το

Walterinnesia aegyptia

(WEV) επί της κυτταρικής καρκινώματος μαστού σειρά ανθρώπινου MDA-MB-231, καθώς και η επίδρασή της σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος φυσιολογικού ποντικού (PBMCs) [25], [26]. Επιπλέον, άλλα στοιχεία έχουν δείξει ότι

Vipera lebetina turanica

δηλητήριο φιδιού στην περιοχή συγκέντρωσης νανογραμμαρίων αναστέλλει ορμονοάντοχου ανθρώπινου προστάτη ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, και η δράση σχετίζεται με την επαγωγή σήματος διαμεσολαβείται ΝΡκΒ απόπτωσης [27] . Τα νανοσωματίδια που μεταφέρουν χημικά θεραπευτικά μέσα έχουν δείξει μεγάλη υπόσχεση για τη θεραπεία ασθενών με καρκίνο. Όταν φορτώνονται με αντικαρκινικούς παράγοντες, τα νανοσωματίδια μπορούν να αυξήσουν επιτυχώς συγκεντρώσεις του φαρμάκου σε ιστούς του καρκίνου και δρουν σε κυτταρικό επίπεδο για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας κατά των όγκων. Τα νανοσωματίδια μπορούν να ενδοκυττάρωση και /ή φαγοκυτταρώνονται από κύτταρα, με αποτέλεσμα την εσωτερικοποίηση του έγκλειστου φαρμάκου [28]. Δεν υπάρχουν διαθέσιμα δεδομένα για τις επιδράσεις του δηλητηρίου φιδιού σε συνδυασμό με νανοσωματίδια για τα καρκινικά κύτταρα ΜΜ. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε τα αποτελέσματα των

Walterinnesia aegyptia

δηλητήριο (WEV), μεμονωμένα και σε συνδυασμό με νανοσωματίδια διοξειδίου του πυριτίου (WEV + NP). Εστιάσαμε ιδιαίτερη προσοχή στις κυτταρικών και μοριακών μηχανισμών που διέπουν τη κατά του όγκου δραστηριότητες που ασκείται για τη μετανάστευση, εισβολή, πολλαπλασιασμό και την απόπτωση των πρωτογενών κυττάρων ΠΜ έχουν απομονωθεί από ασθενείς ΜΜ καθώς και 2 ανθρώπινης ΜΜ κυτταρικές γραμμές (U266 και RPMI 8226).

Υλικά και Μέθοδοι

Προετοιμασία Walterinnesia aegyptia δηλητήριο

Walterinnesia aegyptia

φίδια συλλέχθηκαν από την κεντρική περιοχή της Σαουδικής Αραβίας (Δεν υπάρχουν ειδικές άδειες που απαιτούνται για την οι περιγραφόμενες μελέτες πεδίου, καθώς δεν υπάρχουν συγκεκριμένα δικαιώματα ήταν απαραίτητα για αυτές τις θέσεις /δραστηριότητες, επειδή η τοποθεσία δεν είναι ιδιόκτητα ή να προστατεύονται με κάθε τρόπο και οι μελέτες πεδίο δεν περιλαμβάνουν απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη). Τα φίδια κρατήθηκαν σε ένα serpentarium στο Τμήμα Ζωολογίας του College of Science στο King Saud University. Τα φίδια θερμάνθηκαν καθημερινά για εννέα ώρες χρησιμοποιώντας μια λάμπα 100 βατ, και το νερό ήταν πάντοτε διαθέσιμο. Τα φίδια είχαν τραφεί ποντίκια σκοπό φυλής κάθε 10 έως 14 ημέρες. Όλες οι διαδικασίες των ζώων ήταν σύμφωνα με τα πρότυπα που ορίζονται στις κατευθυντήριες γραμμές για τη φροντίδα και τη χρήση των πειραματόζωων από την επιτροπή για το σκοπό της Εποπτείας των πειραμάτων σε ζώα (CPCSEA) και των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας πρωτόκολλο (NIH). Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων του Τμήματος Ζωολογίας, College of Science, King Saud University. Το δηλητήριο ήταν αρμέγονται από ενήλικα φίδια, λυοφιλισμένο και να ανασυσταθεί σε 1Χ αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) πριν από τη χρήση.

Συνδυασμός δηλητήριο φιδιού με Silica Τα νανοσωματίδια

νανοσωματίδια Silica και ο συνδυασμός τους με φίδι δηλητήριο παρασκευάστηκαν στο King Abdullah Ινστιτούτο για τη νανοτεχνολογία στο King Saud University. Διπλό μεσοπορώδη κελύφη νανοσφαίρα πυρήνα-σίλικα σχηματίστηκαν γύρω πυρήνες διοξειδίου του πυριτίου χρησιμοποιώντας ένα ανιονικό επιφανειοδραστικό σε μια διαδικασία στην οποία ένα στερεό πυρήνα σίλικα μετατράπηκε σε μια μεσοπορώδη ένα. Πρώτον, για τη σύνθεση των πυρήνων στερεού διοξειδίου του πυριτίου, 0,875 ml υδατικής αμμωνίας προστέθηκαν σε ένα διάλυμα που περιέχει 18 ml αιθανόλης και 2,6 ml απιονισμένου νερού, ακολουθούμενα από την προσθήκη 1,5 ml του ορθοπυριτικού τετρααιθυλίου (TEOS) στο διάλυμα με ζωηρή ανακάτεμα. Το προκύπτον μίγμα θερμάνθηκε στους 30 ° C για 60 λεπτά, και το ίζημα διοξειδίου του πυριτίου στη συνέχεια συλλέχθηκε με φυγοκέντρηση και πλένεται τρεις φορές με νερό. Η μοριακή σύνθεση του εναιωρήματος ήταν ως ακολούθως: TEOS: EtOH: NH

3: H

2O = 1:46.9:3.2:20.5

Δεύτερον, για τη σύνθεση των μεσοπορωδών πυρήνα-κελύφους. νανοσφαίρες χρησιμοποιώντας ένα ανιονικό επιφανειοδραστικό, σίλικα SiO

2 σωματίδια διασπείρονται σε 15 ml H

2O με υπερήχους για 10 λεπτά. Για την καταστολή του πυρήνα συσσωμάτωσης του πυριτίου, 1 g /L πολυβινυλοπυρρολιδόνης προστέθηκε με συνεχή ανάδευση για 60 λεπτά. Στη συνέχεια, 0,1 ml, 0,2933 g (1 mmol) και 1,5 ml 3-αμινοπροπυλοτριμεθοξυσιλανίου (ΝΚΠ), προστέθηκαν Ν-λαυροϋλσαρκοσίνη νάτριο (Sar-Na) και TEOS, αντίστοιχα, στο μίγμα της αντίδρασης με επακόλουθη ανάδευση στους 50 ° C για 2 h. Το τελικό στερεό ανακτήθηκε με φυγοκέντρηση, πλύθηκαν με απιονισμένο νερό και στέγνωσε σε ένα φούρνο στους 60 ° C για την απομάκρυνση Πρότυπο 12 ώρες επιτεύχθηκε με θερμική κατεργασία σε ένα ρεύμα αέρα στους 550 ° C για 6 ώρες. Η προκύπτουσα μοριακή αναλογία ήταν TEOS: H

2O: ναρκών κατά προσωπικού: Sar-Na: HCl: PVP = 1:331.6:0.08:0.14:0.06:5 × 10

-3. Στη συνέχεια, συνολικά 25 mg μεσοπορώδη νανοσωματιδίων πυριτίας προστέθηκε σε ένα διάλυμα από 50 mg ml δηλητηρίου /σε νερό. Το εναιώρημα αναδεύτηκε για 2 ώρες? η εξάτμιση του νερού αποτράπηκε. Μεσοπορώδη νανοσωματίδια πυριτίας φορτωθεί με δηλητήριο ανακτήθηκαν χρησιμοποιώντας φυγοκέντρηση υψηλής ταχύτητας και ξηραίνεται σε κλίβανο κενού στους 60 ° C. μικροσκοπία μετάδοσης ηλεκτρονίου (ΤΕΜ) ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα ηλεκτρονικό μικροσκόπιο JEOL JSM-2100F (Ιαπωνία) που λειτουργεί στα 200 kV. ισόθερμες προσρόφησης αζώτου μετρήθηκαν στους 77 Κ με Quantachrome NOVA 4200 αναλυτή (USA). Πριν από τη μέτρηση, τα δείγματα απαερώθηκαν στο κενό στους 200 ° C για τουλάχιστον 18 ώρες. Η μέθοδος Brunauer-Emmett-Teller (BET) χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό της ειδικής επιφάνειας (

S στοίχημα) χρησιμοποιώντας δεδομένα προσρόφησης σε εύρος σχετικής πίεσης από 0,05 έως 0,35. Χρησιμοποιώντας το μοντέλο Barrett-Joyner-Halenda (BJH), οι όγκοι πόρων και πόρων κατανομές μεγέθους προήλθαν από τα κλαδιά προσρόφηση των ισόθερμων, και ο συνολικός όγκος πόρων (

V

t) υπολογίστηκαν από το ποσό προσροφημένο σε μια σχετική πίεση

P

/

P

0 από 0.992.

Όσον αφορά την επίδραση του χρόνου αντίδρασης για την αλληλεπίδραση μεταξύ των νανοσωματιδίων διοξειδίου του πυριτίου και το δηλητήριο φιδιών, μεταβολή στη σύνθεση χρόνος αντίδρασης για πυρήνες στερεού διοξειδίου του πυριτίου είχε ως αποτέλεσμα το σχηματισμό του διπλού σφαιρών σίλικα μεσοπορώδη πυρήνα-κελύφους, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1. S στις δύο 1 και 6 h χρόνοι αντίδρασης παρατηρήθηκαν, ομοιογενές κελύφη μεσοπορώδη πυριτία. Ωστόσο, σε ένα χρόνο αντίδρασης 1 ώρα, οι πυρήνες του πυριτίου φάνηκε να είναι αρκετά πυκνό. Η παράταση του χρόνου αντίδρασης μέχρι 6 ώρες κατέληξε σε σαφή και προφερθεί mesopores ακτινικά προσανατολισμένες που αγκυρώνονται μέσα στον πυρήνα και επεκτάθηκε από τον πυρήνα κέντρο μέχρι το κέλυφος, όπως φαίνεται στο Σχήμα S 1Β. Η διάσπαση του πυρήνα αντίθεση με αυξανόμενο χρόνο αντίδρασης από 1 έως 6 ώρες πρότεινε την αγκύρωση περισσότερο μεσοπόρων και την απώλεια της πυκνότητας πυρήνα, το οποίο επίσης υποδεικνύεται από τον υψηλό όγκο πόρου. Ωστόσο, το πάχος κελύφους περίπου 50 nm δεν μεταβλήθηκε σημαντικά από tuning του χρόνου αντίδρασης. Ανάλυση της κατανομής μεγέθους σωματιδίων έδειξε ότι και τα δύο δείγματα εμφανίζεται μεγέθη σωματιδίων περίπου 300 nm. Ωστόσο, το δείγμα της αντίδρασης 6 h κατείχαν στενότερη κατανομή από το δείγμα 1 ώρα, όπως φαίνεται στο Σχήμα S 2. Από το N

2 ισοθέρμου προσρόφησης-εκρόφησης που φαίνεται στο Σχήμα S 3, οι ισόθερμες σε διαφορετικούς χρόνους αντίδρασης επιφανειοδραστικό εκτεθεί ο τύπος χαρακτηριστική IV ισοθερμική της μεσοπορώδη υλικά με συνολικό όγκο των πόρων των 0,342 και 0,416 cc.g

-1 κατά τις ώρες που η αντίδραση 1 και 6, αντίστοιχα. Η παρατήρηση ενός τριγωνικού βρόχου υστέρησης μεταξύ των κλάδων προσρόφησης και εκρόφησης θα μπορούσε να αποδοθεί στη συνύπαρξη εξαγωνικό και ελασματωδών φάσεων. Οι περιοχές επιφάνεια BET ήταν 304,08 και 440,73 m

2 /g κατά τις ώρες που η αντίδραση 1 και 6, αντίστοιχα. Είναι σαφές ότι οι χαρακτηριστικά υφής των μεσοπορωδών δομών πυρήνα-κελύφους ήταν ενισχυμένη με την αύξηση του χρόνου αντίδρασης.

Κύτταρα και Αντιδραστήρια

Ο ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ΠΜ RPMI8226 και U266 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC) (Rockville, MD). Αυτά τα κύτταρα του ΠΜ διατηρήθηκαν με συνήθη τρόπο σε R-10 μέσο καλλιέργειας (RPMI 1640 που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου και 1% L-γλουταμικό), και οι καλλιέργειες καθιερώθηκαν σε 5 × 10

5 βιώσιμα κύτταρα /ml. Η μέγιστη πυκνότητα των κυττάρων ιδρύθηκε στις 1-2 × 10

6 κυττάρων /ml. Οι κυτταρικές καλλιέργειες χωρίς

Mycoplasma

, όπως αξιολογείται χρησιμοποιώντας μια ενζυμο-συνδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) κιτ (Boehringer, Mannheim, Germany).

μυελού των οστών (ΒΜ) δείγματα αναρρόφηση από 70 ασθενείς με MM ελήφθησαν από τη Νότια Αίγυπτο Ινστιτούτο Καρκίνου και του Ασιούτ Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Ασιούτ στην Αίγυπτο. Bone μονοπύρηνα κύτταρα μυελού απομονώθηκαν με Ficoll-Hypaque φυγοκέντρηση πυκνότητας (Pharmacia ΕΚΒ Biotechnology, Uppsala, Σουηδία) από ηπαρινωμένο αναρρόφηση ΒΜ προέρχονται από ασθενείς MM. Τα πλασματοκύτταρα καθαρίστηκαν περαιτέρω από μονοπύρηνα κύτταρα ΒΜ με θετική επιλογή με αντι-CD138 ανοσομαγνητικά σφαιρίδια επικαλυμμένα με αντίσωμα σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (MACS, Miltenyi Biotech). καθαρισμός MACS οδήγησε σταθερά σε & gt? καθαρότητα 95% στον κυτταρικό πληθυσμό πρωτογενή ΜΜ (με παρακολούθηση της έκφρασης στην κυτταρική επιφάνεια των CD38 και CD45) και μια βιωσιμότητα της & gt?. 90% (σύμφωνα με τη μέθοδο εξαίρεση κυανούν τρυπανίου)

PBMCs από υγιείς δότες καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας μια πρότυπη μέθοδο Ficoll-Paque κλίση φυγοκέντρηση σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Amersham Pharmacia, Uppsala, Σουηδία). Εν συντομία, ηπαρινοποιημένο αίμα αραιώθηκε 1:01 σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS), προσεκτικά επιστρώνεται επί του Ficoll-Paque κλίση, και φυγοκεντρείται για 20 λεπτά στα 1.020 χ

g

. Το στρώμα διεπαφής κυττάρων προσεκτικά συλλέχθηκαν, και τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές σε PBS και επανεναιωρήθηκαν σε RPMI 1640.

την αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση του WEV, WEV + ΝΡ ή ΝΡ μόνος στο U266 και κυτταρικές σειρές RPMI 8226 και τα απομονωμένα κανονική PBMCs προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλοτετραζολίου (ΜΤΤ) πρόσληψη μέθοδο. Τα κύτταρα απλώθηκαν σε 1 × 10

6 κύτταρα /ml σε 2 ml μέσου καλλιέργειας σε έξι φρεατίων Costar (Corning, Corning, ΝΥ). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις WEV ή WEV + ΝΡ για 1, 2, 6, 12, 24, 36 ή 48 ώρες, και κυτταροτοξικότητα εκφράζεται ως το σχετικό ποσοστό των τιμών OD μετρήθηκε στον έλεγχο χωρίς αγωγή (0), NP-, WEV- και WEV + NP-επεξεργασμένα κύτταρα. Μορφολογικές αλλαγές παρατηρήθηκαν μετά από έκθεση σε NP, WEV και WEV + ΝΡ χρησιμοποιώντας μια αντίστροφη αντίθεσης φάσης μικροσκόπιο (Olympus, Ιαπωνία).

Ηθική Δήλωση

Για τη συλλογή φίδι από την κεντρική περιοχή της Σαουδικής Αραβίας Αραβία καμία συγκεκριμένη άδειες που απαιτούνται για τις περιγραφόμενες μελέτες πεδίου, καθώς και χωρίς συγκεκριμένα δικαιώματα ήταν απαραίτητα για αυτές τις θέσεις /δραστηριότητες, επειδή η τοποθεσία δεν είναι ιδιόκτητα ή να προστατεύονται με κάθε τρόπο και οι μελέτες πεδίο δεν περιλαμβάνουν απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη. Επειδή τα φίδια είχαν τραφεί ποντίκια σκοπό φυλής κάθε 10 έως 14 ημέρες, όλες οι διαδικασίες των ζώων ήταν σύμφωνα με τα πρότυπα που ορίζονται στις κατευθυντήριες γραμμές για τη φροντίδα και τη χρήση των πειραματόζωων από την επιτροπή για το σκοπό της Εποπτείας των πειραμάτων σε ζώα (CPCSEA) και το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας του πρωτοκόλλου (NIH). Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων του Τμήματος Ζωολογίας, College of Science, King Saud University. δείγματα αναρρόφηση BM ελήφθησαν από ασθενείς που προσδιορίζονται με MM στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Ασιούτ. Όλες οι πτυχές αυτής της μελέτης είχαν εγκριθεί από επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Ασιούτ, και όλοι οι ασθενείς παρέχεται γραπτή συγκατάθεση ανάλογα με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

κυτταρομετρίας ροής

έκφραση του αντιγόνου επιφάνειας των κυττάρων προσδιορίστηκε με ενιαία ανάλυση -parameter ενεργοποιημένων με φθορισμό διαλογέα κυττάρου (FACS) χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα μονοκλωνικά αντισώματα (mAbs): (i) ΡΕ-συζευγμένο αντι-CCR1, αντι-CCR3, αντι-CCR5 (κλώνος 45531.111), αντι-CCR7 (κλώνος 150503), αντι-CCR6 (κλώνος 53103.111), αντι-CXCR3, αντι-CXCR4 (κλώνος 44717.111) και αντι-CXCR5, όλα αγοράστηκαν από την R &? D Systems? και (ii) ΡΕ-συζευγμένο αντι-CD38, αντι-CD44 και αντι-CD138 (IgG1), FITC-συζευγμένο αντι-CD62L, αντι-CD49d, αντι-VLA4, αντι-α4β1, αντι-α4β7 και αντι-CD54, και FITC- και ΡΕ-συζευγμένα mAbs ελέγχου ισότυπο ποντικού, όλα αγοράστηκαν από την BD Biosciences. Μια FACSCalibur όργανο κυτταρομετρίας ροής (BD-PharMingen) χρησιμοποιήθηκε για την απόκτηση και την ανάλυση των δεδομένων. Μετά βιώσιμων κυττάρων περίφραξη, 15.000 περιστατικά ανά δείγμα αναλύθηκαν. Για κάθε δείκτη, το όριο θετικότητας ορίστηκε πέρα ​​τη μη ειδική σύνδεση που παρατηρείται παρουσία μιας σχετικής mAb ισοτυπικού ελέγχου.

F-ακτίνης Δοκιμασία Πολυμερισμός

κύτταρα του ΠΜ καλλιεργήθηκαν για 12 ώρες σε μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με ή χωρίς ΝΡ, WEV ή WEV + ΝΡ πριν από τη δοκιμή πολυμερισμού F-ακτίνης. Η ενδοκυτταρική πολυμερισμού F-ακτίνης αξιολογήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29]. Εν συντομία, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και επαναιωρήθηκαν (4 × 10

6 /ml) σε ρυθμισμένο με HEPES RPMI 1640 στους 37 ° C με ή χωρίς CXCL12 (250 ng /ml). Στους χρόνους που υποδεικνύονται, τα κυτταρικά εναιωρήματα (100 μΙ) προστέθηκαν σε 400 μΐ ρυθμιστικού δοκιμασίας που περιέχει 4 × 10

-7 Μ FITC-επισημασμένο φαλλοϊδίνη, 0,5 mg /ml L-α-λυσοφωσφατιδυλχολίνη (αμφότερα από την Sigma-Aldrich) και 4,5% φορμαλδεΰδη σε PBS. Τα σταθερά κύτταρα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής, και η μέση ένταση φθορισμού (MFI) προσδιορίστηκε για κάθε δείγμα. Η ποσοστιαία αλλαγή σε MFI υπολογίστηκε για κάθε δείγμα σε κάθε χρονικό σημείο χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: (1- (MFI πριν από την προσθήκη του CXCL12 /MFI μετά την προσθήκη του CXCL12) χ 100.

In Vitro Δοκιμασίες χημειόταξης

Η χημειοκίνη-εξαρτώμενη μετανάστευση των κυττάρων ΠΜ μετρήθηκε χρησιμοποιώντας μία vitro δοκιμασία μετανάστευσης 2-θαλάμου (χρησιμοποιώντας πλάκες Transwell αγοράστηκαν από την Costar, Cambridge, ΜΑ) που ακολουθείται από ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Ολες οι δοκιμασίες χημειόταξης πραγματοποιήθηκαν σε προ -warmed ρυθμιστικό μετανάστευσης (RPMI 1640 που περιέχει 1% FCS) Ένα σύνολο 600 μΙ ρυθμιστικού μετανάστευση μόνη ή συμπληρωμένο με CXCL12 (σε 250 ng /ml) (R &? D Systems). προστέθηκε στον κάτω θάλαμο, και 10

5 κύτταρα σε ρυθμιστικό μετανάστευσης προστέθηκαν στον άνω θάλαμο. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν για 3 ώρες στους 37 ° C, και τα κύτταρα εισόδου και transmigrated κύτταρα φυγοκεντρήθηκαν, σταθεροποιήθηκαν σε 300 μΙ 1 χ PBS + 1% φορμαλδεΰδη και μετρήθηκαν για 60 δευτερόλεπτα κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας ένα ροής FACSCalibur κυτταρόμετρο (BD-PharMingen). το ποσοστό της μετανάστευσης υπολογίστηκε ως το ποσοστό των κυττάρων εισόδου που μετανάστευσαν στο κατώτερο θάλαμο. Για τον υπολογισμό του ποσοστού της ειδικής μετανάστευσης επάγεται από χημειοκίνες, το ποσοστό των κυττάρων που μεταναστεύουν σε μέσο μόνο του αφαιρέθηκε από το ποσοστό των κυττάρων που μεταναστεύουν σε μέσο με χημειοκίνη.

Ανάλυση Western Blot

Μη επεξεργασμένα (0 ) ή NP-, WEV-, και WEV + NP-κατεργασμένα κύτταρα μυελώματος (5 χ 106 κύτταρα /ml σε προθερμασμένο R-10 μέσο χωρίς FCS) διεγέρθηκαν επί 2 λεπτά στους 37 ° C με ή χωρίς 250 ng /ml CXCL12. Κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29]. Ίσες ποσότητες (50 μg) του συνόλου της κυτταρικής πρωτεΐνης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής SDS-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και αναλύθηκαν με κηλίδωση Western. Τα αντισώματα που αναγνωρίζουν φωσφο-ΡΚΒ /ΑΚΤ (S473), φωσφο-ERK1 /2 (T202 /Y204), φωσφο-ΙκΒα (S32 /36), ΙκΒα, φωσφο-PLCβ3 (S537) και PLCβ3 (όλα από την New England Biolabs, Beverly, ΜΑ) και αντι-Bcl-2, Bcl

XL, Mcl-1, Bax, Bak, Bim και αντισώματα β-ακτίνης (όλα από την Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) χρησιμοποιήθηκαν σε συνδυασμό με συζευγμένη με υπεροξειδάση χρόνου δευτερογενή αντισώματα. Οι ζώνες της πρωτεΐνης ανιχνεύθηκαν με χρήση ενισχυμένης χημειοφωταύγειας αντιδραστήρια (ECL, SuperSignal Westpico υπόστρωμα χημειοφωταύγειας, Perbio, Bezons, Γαλλία), και το σήμα ECL καταγράφηκε σε Hyperfilm ECL. Για την ποσοτικοποίηση εντάσεις μπάντα, ταινίες σαρώθηκαν, αποθηκεύονται ως αρχεία TIFF και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ΝΙΗ Image J λογισμικού.

Για να εκτιμηθεί Rho-A ενεργοποίηση, τα κύτταρα (5 × 10

6 ανά συνθήκη) στερήθηκαν για 2 h σε προθερμασμένο R-10 μέσον χωρίς FCS, επωάσθηκε επί 2 λεπτά στους 37 ° C με ή χωρίς 250 ng /ml CXCL12, και λύθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω (χρησιμοποιώντας 200 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσης). Μετά από φυγοκέντρηση, ένα κλάσμα 15 μΐ του υπερκειμένου κρατήθηκε ως το συνολικό δείγμα προϊόντος λύσης. Το υπόλοιπο υπερκείμενο (185 μλ) επωάστηκε για 16 ώρες στους 4 ° C με GST-C21

38 προ-συζευγμένη με σφαιρίδια γλουταθειόνης-αγαρόζης (Sigma, France). Τα σφαιρίδια πλύθηκαν με χρήση περίσσειας του ρυθμιστικού λύσης, και η δραστική Rho-Α (Rho-Α

GTP έλκεται προς τα κάτω από το λύμα και συνδέεται με την πρωτεΐνη σύντηξης /σφαιρίδια) εκλούστηκε χρησιμοποιώντας Laemli ρυθμιστικού δείγματος. Η ανάλυση με SDS-PAGE και κηλίδωση Western χρησιμοποιώντας αντι-Rho-Α mAb (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε σε αμφότερες τις συνολικά κυτταρολύματα και τα δείγματα εκλούστηκαν σε ρυθμιστικό Laemli για την ανίχνευση συνολικού Rho-Α και Rho -Α

GTP.

CFSE Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού

κύτταρα του ΠΜ συλλέχθηκαν, πλύθηκαν δύο φορές σε PBS και βάφτηκαν με 0.63 μΜ καρβοξυφλουοροσκεϊνης ηλεκτριμιδυλεστέρας διοξικής εστέρα (CFSE) (Molecular Probes, Eugene, OR ) για 8 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Υπολειμματική CFSE απομακρύνθηκε με πλύση τρεις φορές σε PBS, και CFSE-επισημασμένα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων, διεγέρθηκαν ή όχι με CXCL12, αντιμετωπίζονται χωρίς (0) ή με ΝΡ, WEV και WEV + ΝΡ και αναπτύχθηκαν για 4 ημέρες σε μέσο καλλιέργειας κυττάρων. Η ένταση φθορισμού CFSE μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας κυτταρόμετρο ροής FACSCalibur (BD-PharMingen).

Η απόπτωση Δοκιμασίες

Μετά την επεξεργασία με ΝΡ, WEV και WEV + ΝΡ, κύτταρα μυελώματος συλλέχθηκαν. Τα κύτταρα πλύθηκαν και επωάστηκαν σε PBS που περιέχει 30% ανθρώπινο ΑΒ ορό στους 4 ° C για 30 λεπτά πριν από την χρώση με Annexin V-FITC και ΡΙ για 15 λεπτά στους 25 ° C χρησιμοποιώντας ένα εμπορικό κιτ σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Abcam, Καναδάς ). Τα κύτταρα αναλύθηκαν με FACSCalibur ροής κυτταρόμετρο (BD-PharMingen) εντός 1 ώρας από τη χρώση, και το ποσοστό των κυττάρων που υφίστανται απόπτωση προσδιορίστηκε.

δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης Μετρήσεις

μιτοχονδριακή ενεργοποίηση προσδιορίστηκε με η διατήρηση του JC-1dye (Molecular Probes). Εν συντομία, τα κύτταρα του ΠΜ (5 × 10

5), φορτώθηκαν με JC-1dye (1 μg /ml) κατά την διάρκεια των τελευταίων 30 λεπτών επώασης στους 37 ° C σε ένα 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές σε PBS. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα FACS, επαναιωρήθηκαν και αποθηκεύεται σε 500 μΙ διαλύματος παραφορμαλδεΰδης 2%. Περίπου 10

5 κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας κυτταρόμετρο ροής FACSCalibur (BD-PharMingen). Ο φθορισμός παρακολουθήθηκε σε ένα φθορόμετρο χρησιμοποιώντας 570 nm διέγερση /595 nm εκπομπή για την J-συσσωμάτωμα JC-1. δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης (Δψ

m) υπολογίστηκε ως ο λόγος του φθορισμού της JC-συσσωμάτωμα (υδατική φάση) και μονομερούς (δεσμευμένα σε μεμβράνη) μορφές της JC-1. Ως εκ τούτου, η χρήση του JC-1 χρώση μας kitallowed να κάνει διακρίσεις μεταξύ των αποπτωτικών κυττάρων (πράσινο χρώμα) και την επιβίωση των κυττάρων (κόκκινο χρώμα).

Στατιστική Ανάλυση

Δεδομένα για πρώτη φορά δοκιμάστηκε για κανονικότητας (χρησιμοποιώντας το τεστ Anderson-Ντάρλινγκ) και για την ομοιογένεια της διακύμανσης πριν από οποιαδήποτε περαιτέρω στατιστική ανάλυση. Τα δεδομένα κανονικά κατανεμημένα και εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM). Σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ANOVA ενός ή δύο κατευθύνσεων που ακολουθείται από πολλαπλές δοκιμές σύγκριση Bonferroni χρησιμοποιώντας λογισμικό PRISM στατιστική ανάλυση (GraphPad Software). Τα δεδομένα αναλύονται πάλι χρησιμοποιώντας ένα ή δύο κατευθύνσεων ANOVA που ακολουθείται από post-test Tukey για τη χρήση του SPSS (Στατιστικού Πακέτου για τις Κοινωνικές Επιστήμες), το λογισμικό, έκδοση 17. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε Ρ & lt? 0,05. * P & lt? 0,05, WEV αγωγή έναντι του ελέγχου? # P & lt? 0,05, WEV + NP-αγωγή έναντι του ελέγχου? + P & lt? 0,05, WEV + NP-αγωγή εναντίον WEV επεξεργασμένο

Αποτελέσματα

WEV και WEV + NP αναστέλλουν την ανάπτυξη των ΜΜ κύτταρα

Ηλεκτρονικό μικροσκόπιο εικόνες. τα διπλά νανοσφαίρες μεσοπορώδη πυρήνα-κελύφους του πυριτίου (DMCSSs) πριν (Α) και μετά (Β) τη φόρτωση δηλητήριο απεικονίζεται. Αυτές οι δύο εικόνες έδειξαν μια απόδειξη για τη φόρτωση του δηλητηρίου φιδιού σε μεσοπόροι του DMCSSs. Venom χωρίς DMCSSs (Α) έδειξε μια σαφή mesopores ή mesochannels. Ωστόσο, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Β μεσοπόροι του DMCSSs έχουν φράξει από τα μόρια του δηλητηρίου και κατά συνέπεια mesopores του δηλητηρίου-φορτωμένο DMCSS δεν μπορεί να φανεί καθαρά λόγω της ύπαρξης του δηλητηρίου μέσα κανάλια τους. Επιπλέον, τα μόρια δηλητήριο μπορεί επίσης να παρατηρηθεί γύρω από την εξωτερική επιφάνεια του DMCSSs. Zhao

et al.

, Ανέφεραν ότι το μέγεθος των σωματιδίων για νανοφορείς που χρησιμοποιούνται σε συστήματα παροχής φαρμάκου θα πρέπει να κυμαίνεται μεταξύ 50 και 300 nm [30]. Οι συγγραφείς περιγράφουν ότι το μέγεθος των σωματιδίων πάνω από 300 nm, ένα σημαντικό ποσοστό των σωματιδίων θα παγιδευτούν στους πνεύμονες και το ήπαρ, ενώ πολύ μικρό μέγεθος σωματιδίων δεν θα είναι αποτελεσματική για τη φόρτωση του φαρμάκου ή διανομής φαρμάκου. Με βάση αυτά τα κριτήρια, δείγμα DMCSSs-6h έχει επιλεγεί για το δηλητήριο φόρτωση φίδι, διότι κατείχε ανώτερες ιδιότητες υφής, επιφάνειας 440 m

2 /συνολικός όγκος πόρων των 0,416 εκατοστά

3 /g, παχύτερο πυριτίου g και κέλυφος (40 nm) και αποδεκτό μέγεθος σωματιδίων. Επιπλέον, πρόσφατα χαρακτήριζε τις βέλτιστες ιδιότητες των νανοσωματιδίων πυριτίου μοντέλο που χρησιμοποιείται για να παραδώσει τα φυσικά προϊόντα σε κυτταρική σειρά MM καθώς και στα φυσιολογικά κύτταρα [31].

Ηλεκτρονικές εικόνες μικροσκόπιο της διπλής νανοσφαιρών πυριτίου μεσοπορώδη πυρήνα-κελύφους (DMCSSs) πριν (Α) και μετά (Β) τη φόρτωση δηλητήριο. Η βιωσιμότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ΜΤΤ. RPMI 8226 κύτταρα (C), κύτταρα U266 (D) και φυσιολογική PBMCs (Ε) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία επί μία νύκτα με διαφορετικές συγκεντρώσεις (0, 1, 5, 10, 25, 50, 100 και 1000 ng /ml) του ΝΡ (ανοικτοί κύκλοι) , WEV (γκρι τρίγωνα) ή WEV + ΝΡ (κλειστά μαύρα τετράγωνα). RPMI 8226 κύτταρα (F), κύτταρα U266 (G) και η κανονική PBMCs (H) υποβλήθηκαν σε αγωγή με 25 ng /ml NP (ανοικτοί κύκλοι), 25 ng /ml WEV (γκρι τρίγωνα) ή 10 ng /ml WEV + ΝΡ (κλειστά μαύρα τετράγωνα) για διαφορετικούς χρόνους επώασης (0, 1, 2, 6, 12, 24, 36 και 48 ώρες). Τα δεδομένα που συλλέγονται από ανεξάρτητα πειράματα (η = 5) εμφανίζονται, και τα αποτελέσματα εκφράζονται ως το μέσο ποσοστό των βιώσιμων κυττάρων ± SEM.

Η

Χρησιμοποιώντας αυτές νανοσωματίδια μοντέλο, ερευνήσαμε πρώτα την ικανότητα του WEV και WEV + NP να προκαλέσει αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων ΜΜ.