Αφηρημένο

υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) εκτενώς εκφράζεται σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου. Ωστόσο, η θεραπεία στοχεύει EGFR έχει μόνο μέτρια αποτελεσματικότητα σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου, μέσω μηχανισμών που δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Εδώ, βρήκαμε ότι η αναστολή του EGFR με erlotinib διεγερμένα φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση της STAT3 που οδηγεί σε αυξημένη έκφραση Bcl2 /Bcl-XL σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου κύτταρα, τα οποία μπορεί να αμβλύνει την θεραπευτική αποτελεσματικότητα της erlotinib έναντι καρκίνου κεφαλής και τραχήλου. Η erlotinib-ενισχυμένα αποτελέσματα φωσφορυλίωση STAT3, τουλάχιστον εν μέρει, από την καταστολή των φυσιολογικών φωσφατάσης της, PTPMeg2. Ειδικά knockdown του STAT3 με παρεμβολή RNA ευαισθητοποιημένα σημαντικά καρκίνο κεφαλής και λαιμού κύτταρα με την erlotinib θεραπεία. Φαρμακολογική αναστολή της STAT3 από νικλοζαμίδιο όχι μόνο μπλοκάρει erlotinib διεγείρεται STAT3 φωσφορυλίωση αλλά και συνεργικά καταπιεσμένες ανάπτυξης καρκίνου κεφαλής και τραχήλου

in vitro

και

in vivo

. Συνδυασμένη παρεμπόδιση του EGFR και STAT3 με erlotinib και νικλοζαμίδιο επαγόμενη απόπτωση πιο αποτελεσματικά σε ιστούς όγκου χωρίς τοξικότητα για κανονικούς ιστούς. Με βάση τα ευρήματά μας, η θεραπεία με erlotinib συνδυάζεται με νικλοζαμίδιο μπορεί να προσφέρει μια αποτελεσματική θεραπευτική προσέγγιση για να βελτιώσει την πρόγνωση του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου

Παράθεση:. Λι R, S Μπορείτε, Χου Ζ, Chen ZG, Sica GL, Khuri FR, et al. (2013) Αναστολή της STAT3 από Niclosamide συνεργεί με erlotinib κατά του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου. PLoS ONE 8 (9): e74670. doi: 10.1371 /journal.pone.0074670

Επιμέλεια: Xiaolin Zi, του Πανεπιστημίου της Καλιφόρνια Irvine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 1η Μάη του 2013? Αποδεκτές: 5 Αυγούστου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 3 Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από R01CA136534 (XD), NCI P50 CA128613 (DMS) και R33 CA161873 (ZGC). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

κεφαλής και τραχήλου καρκίνους κατατάσσονται με συνέπεια μεταξύ των έξι πιο συχνά διαγιγνώσκονται καρκίνοι στον κόσμο [1]. Πάνω από το 90% των καρκίνων της κεφαλής και του λαιμού είναι καρκινώματα πλακωδών κυττάρων της ανώτερης αναπνευστικής οδού, συμπεριλαμβανομένης και της στοματικής κοιλότητας, του φάρυγγα, του λάρυγγα, και παραρρινικών κόλπων (1). Πλακώδες καρκίνωμα κεφαλής και τραχήλου (SCCHN) αποτελεί ένα εκτιμώμενο 2,5% των διαγνώσεων καρκίνου στις Ηνωμένες Πολιτείες, με διαγνωσμένη 41.380 νέες περιπτώσεις και κατ ‘εκτίμηση 7.890 θανάτους το 2013 [2]. Παρά τις προόδους σε συμβατικές θεραπείες, συμπεριλαμβανομένης της χειρουργικής επέμβασης, ακτινοβολίας και χημειοθεραπείας, το συνολικό ποσοστό επιβίωσης για SCCHN δεν έχει βελτιωθεί σημαντικά τις τελευταίες δεκαετίες. Υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) εκφράζεται ευρέως σε SCCHN και έχει χρησιμοποιηθεί ως ένα κρίσιμο στόχο για θεραπεία αυτής της ασθένειας [3]. Η erlotinib, ένας αναστολέας τυροσίνης κινάσης του EGFR (ΤΚΙ), έχει χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία του SCCHN αλλά η αποτελεσματικότητά της είναι περιορισμένη [5]. Ο μηχανισμός που αντιπροσωπεύουν την περιορισμένη αποτελεσματικότητα της erlotinib στο κεφάλι και θεραπεία του καρκίνου του αυχένα δεν είναι πλήρως κατανοητός. Είναι πιθανό ότι η αναστολή του EGFR με erlotinib μπορεί να επάγει την ενεργοποίηση κάποιου επιβίωση μονοπάτι σηματοδότησης (ες) που μειώνει την αποτελεσματικότητα της erlotinib έναντι SCCHN.

STAT3, ένα μέλος της οικογένειας STAT των παραγόντων μεταγραφής, ενεργοποιείται σε αρκετές μορφές καρκίνου, και έχει πρόσφατα επικυρωθεί ως ένα ελκυστικό θεραπευτικό στόχο στη θεραπεία του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου [6-10]. Επιπλέον, τα δείγματα SCCHN έχουν επίσης υψηλότερα επίπεδα από ό, τι STAT3 φυσιολογικό ιστό [11]. Λανθάνουσα κυτταροπλασματική STAT3 ενεργοποιείται μέσω φωσφορυλίωσης στο κατάλοιπο Tyr705 με Janus συνδέονται κινάσης (JAK) ή κινάση υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που συνδέεται με τυροσίνη (Src) [12]. Η φωσφορυλιωμένη STAT3 διμερίζεται μέσω αμοιβαίας αλληλεπίδρασης 2-φωσφο-τυροσίνης Src ομολογίας και συσσωρεύεται στον πυρήνα, όπου ενεργοποιεί τη μεταγραφή ενός ευρύ φάσμα των γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων Bcl2 /Bcl-XL, κυκλίνη D1, c-myc, κλπ [13, 14]. Εκτός από κινάσες STAT3 (δηλ JAK), η φωσφορυλίωση STAT3 επίσης ρυθμίζεται στενά από μια διαδικασία αποφωσφορυλίωσης, η οποία προκαλείται από τη φωσφατάση τυροσίνης πρωτεϊνών PTPMeg2 [15]. PTPMeg2 έχει πρόσφατα αναγνωριστεί ως ένα νέο φυσιολογικό φωσφατάση STAT3 που αποφωσφορυλιώνει άμεσα STAT3 στο υπόλειμμα Tyr705 [15]. Η ενδονεοπλασματική χορήγηση STAT3 δόλωμα ανέστειλε την ανάπτυξη των όγκων ξενομοσχεύματος SCCHN

in vivo

[16], υποδηλώνοντας ότι η STAT3 είναι ένας πιθανός θεραπευτικός στόχος για SCCHN. Παρά την υπόσχεση ενός αριθμού ορθολογικής προσεγγίσεων για τη στόχευση λειτουργία STAT3, δεν είναι μικρό μόριο αναστολέα STAT3 φαίνεται να είναι έτοιμος για την κλινική ανάπτυξη μέχρι σήμερα [17].

Niclosamide έχει πρόσφατα αναφερθεί ως ένας ισχυρός αναστολέας STAT3 κατά του καρκίνου κύτταρα [18]. Στην παρούσα έκθεση, δείχνουμε ότι η erlotinib βελτιώνει την φωσφορυλίωση STAT3 με προς τα κάτω ρύθμιση της φωσφατάσης της PTPMeg2 οδηγώντας σε αυξημένα επίπεδα της Bcl2 /Bcl-XL, το οποίο μειώνει την ευαισθησία του SCCHN με την erlotinib θεραπεία. Niclosamide, ως αναστολέας STAT3, μπορούν να μπλοκάρουν erlotinib επαγόμενη φωσφορυλίωση της STAT3 που οδηγούν σε συνεργιστική καταστολή καρκίνου κεφαλής και τραχήλου.

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά |

Niclosamide αγοράστηκε από τη Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, USA). Η erlotinib ελήφθη από LC Laboratories (Woburn, ΜΑ). Φωσφο-EGFR (Tyr1068) φωσφογλυκόζης STAT3 (Tyr705) φωσφογλυκόζης JAK2 (Tyr1007 /1008), δραστική κασπάση 3 και survivin αντισώματα αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology (Beverly, ΜΑ). β-ακτίνη και αντισωμάτων Mcl-1, PTPMeg2 shRNA και τον έλεγχο του shRNA αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). PTPMeg2 αντίσωμα ελήφθη από την R &? Συστήματα D (R &? Συστήματα D, ΜΝ). Bcl2 ελήφθη από την Calbiochem (Darmstadt, Γερμανία). Bcl-XL αγοράστηκε από Epitomics, Inc. (Burlingame, CA). συζυγούς QD605 κατσίκας αντι-κουνελιού IgG (κόκκινο), QD705 κατσίκα αντι-ποντικού IgG προϊόν σύζευξης (πράσινο) και αντιδραστήριο αντιξεθωριάσματος ProLong® Χρυσό με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (ϋΑΡΙ) αγοράστηκαν από την Invitrogen Life Technologies Inc (Carlsbad , CA). Όλα τα άλλα αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται ελήφθησαν από εμπορικές πηγές, εκτός αν ορίζεται διαφορετικά.

Κυτταρικές γραμμές και κυτταροκαλλιέργεια

κυτταρικές σειρές ανθρώπινου SCCHN Tu212 και Tu686 καθιερώθηκαν από πρωτογενή HNSCCs και διατηρήθηκαν σε DMEM /F12 (1 : 1) μέσο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Αυτές οι κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιήθηκαν για τις περιγραφόμενες πειράματα χωρίς περαιτέρω έλεγχο ταυτότητας.

Παρασκευή κυτταρολύματα και

κηλίδα Western

Τα κύτταρα πλύθηκαν με ψυχρό PBS και επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό EBC παγωμένο (0,5% Nonidet Ρ-40, 50 mM Tris, ρΗ 7,6, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, και 1 mm- β-μερκαπτοαιθανόλη) που περιέχει μείγμα αναστολέα πρωτεάσης που I. Μετά τη λύση των κυττάρων με κατεργασία με υπερήχους και φυγοκέντρηση στα 14.000 xg για 15 λεπτά στους 4 ° C , το προκύπτον υπερκείμενο συλλέχθηκε ως το συνολικό προϊόν λύσης κυττάρου. Η πρωτεϊνική έκφραση αναλύθηκε με κηλίδα Western, όπως περιγράφεται προηγουμένως [20].

Ποσοτική PCR αντίστροφης μεταγραφής (RT-PCR)

Για την ποσοτική RT-PCR, το συνολικό RNA καθαρίστηκε και αντίστροφη μεταγραφή με τυχαία εξαμερή και SuperScript III (Invitrogen). Η ενίσχυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας 2 χ SYBR πράσινο μίγμα PCR (Bio-Rad, CA) με ΑΒΙ 7500 πραγματικού χρόνου σύστημα PCR (Applied Biosystems) όπως περιγράφεται [21,22]. Ειδικοί εκκινητές: για την ανθρώπινη Bcl2: προς τα εμπρός, 5′-GGT GGA GGA GCT CTT CAG G-3 ‘και να αντιστραφεί, 5′-ATA Γ.Ο.Σ. CCA CAA ΑΓΓ CAT CC-3′? για την ανθρώπινη Bcl-XL: προς τα εμπρός, 5’-ATA Γ.Ο.Σ. CCA CAA ΑΓΓ CAT CC-3 ‘και να αντιστραφεί, 5′-ΤΟΟ GAT GTC ΑΓΓ TCA CTG ΑΑ-3′? και για την β-ακτίνη: προς τα εμπρός, 5’-TCA GGA TCC ACG TGC TTG TCA -3 ‘? αντιστραφεί, 5’-TAC ΚΔ ΤΟΟ ACC CAG AGG TTC ΤΤΤ GA -3 ‘. Σχετική ποσοτικοποιήσεις γονιδιακής έκφρασης διεξήχθησαν σύμφωνα με τη συγκριτική μέθοδο Ct χρησιμοποιώντας β-ακτίνης ως εσωτερικό πρότυπο. Ποσοτικοποίηση της έκφρασης γονιδίου αναλύθηκε με το 7500 v πρόγραμμα 2.0.5 λογισμικού και ποσοτικοποιηθεί με τη μέθοδο 2-ΔΔCt. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων.

παρεμβολή RNA

λεντοϊών pSIH1-puro-STAT3 shRNA και pSIH1-puro-ελέγχου shRNA ελήφθησαν από Addgene (Cambridge, ΜΑ). Ο έλεγχος shRNA πλασμίδιο-Α κωδικοποιεί μια αλληλουχία κωδικοποιημένο shRNA που δεν θα οδηγήσει στην ειδική αποικοδόμηση οποιουδήποτε κυτταρικών μηνύματος. shRNA ελέγχου φουρκέτα ακολουθία: ΚΔ AAG GTT AAG ΤΕΕ CCC ΤΕΕ CTC GAG CGA GGG CGA CTT AAC CTT ΑΓΓ. STAT3 shRNA φουρκέτα ακολουθία: GAT CCG CAT CTG ΚΔ AGA TCG GCT ΑΤΤ CAA GAG ΑΤΑ GCC GAT CTA GGC AGA TGT ΤΤΤ TTG. PTPMeg2 shRNA και τον έλεγχο της shRNA αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Για την παραγωγή pseudovirus, STAT3 shRNA ή PTPMeg2 shRNA συνεπιμολύνθηκε εντός 293FT κυττάρων με το πλασμίδιο πακεταρίσματος lentivector μίγμα (Σύστημα Biosciences, CA) χρησιμοποιώντας κιτ μορφομετατροπής NanoJuice (EMD Chemical, Inc.) όπως περιγράφεται [23]. Μετά από 48 ώρες, τα μέσα που περιέχουν ιό συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση στα 20.000 χ g. Τα κύτταρα μολύνθηκαν με τα μέσα που περιέχουν τον ιό με την παρουσία πολυβρενίου (8μg /ml) για 24 ώρες, μετά την οποία επιλέγεται σταθερή θετικοί κλώνοι χρησιμοποιώντας 1 μg /ml πουρομυκίνη.

Σουλφοροδαμίνη Β (SRB) δοκιμασία

Τα ανασταλτικά αποτελέσματα της erlotinib και νικλοζαμίδιο επί της κυτταρικής ανάπτυξης αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την δοκιμασία σουλφοροδαμίνης Β (SRB), όπως περιγράφεται [24]. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε τριπλά φρεάτια χρησιμοποιώντας πλάκες 96 φρεατίων. Μετά από ολονύκτια ανάπτυξη, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με erlotinib, νικλοζαμίδιο ή του συνδυασμού για 48 ώρες. Το κλάσμα επιζών κυττάρων προσδιορίστηκε όπως περιγράφεται [24].

κεφαλής και τραχήλου ξενομοσχεύματα καρκίνου και θεραπείες

Η φροντίδα των ζώων και Χρήση Επιτροπής Θεσμικών του Πανεπιστημίου Emory ενέκρινε το πρωτόκολλο για τα πειράματα σε ζώα. Έξι εβδομάδων Νυ /Νυ γυμνά ποντίκια αγοράστηκαν από τη Harlan και στεγάστηκαν κάτω από συνθήκες ελεύθερες παθογόνων σε κλουβιά μικροαπομονωτικά. Τα ξενομοσχεύματα εγέρθηκαν με έγχυση 5 × 10

6 κυττάρων Tu212 σε ένα ισορροπημένο διάλυμα άλατος στον υποδόριο ιστό πάνω από την περιοχή του πλευρού γυμνών ποντικών. Οι όγκοι αφέθηκαν να αναπτυχθούν σε ένα μέσο όγκο 250 mm

3 πριν την έναρξη της θεραπείας, όπως περιγράφεται [25]. Ποντίκια που έφεραν όγκο τυχαιοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες θεραπείας (η = 8 ανά ομάδα) ως εξής: (1) έλεγχος οχήματος (0,5% DMSO, 100 μΙ /d ε.π.)? (2) erlotinib (40 mg /kg /d ε.π.)? (3) νικλοζαμίδιο (20 mg /kg /d ε.π.)? (4) erlotinib (40 mg /kg /d) + νικλοζαμίδιο (20 mg /kg /d). Ο όγκος του όγκου αξιολογήθηκε με μετρήσεις καλίμπρας μία φορά κάθε δύο ημέρες και υπολογίζεται με τον τύπο: V = (LXW

2) /2 (L: μήκος? W: πλάτος) όπως περιγράφεται [26]. Μετά από 14 συνεχόμενες ημέρες θεραπείας, τα ποντίκια θυσιάστηκαν με εισπνεόμενα

2 CO. Συγκομιδής όγκοι χρησιμοποιήθηκαν για περαιτέρω ανάλυση.

ανοσοϊστοχημεία (IHC) ανάλυση

IHC χρώση του ιστού όγκου χρησιμοποιώντας κουνελιού αντι-ανθρώπινο δραστική κασπάση 3 αντίσωμα διεξήχθη όπως περιγράφεται [25]. Εν συντομία, συλλέχθηκαν οι όγκοι εγκλείστηκαν σε παραφίνη και κόπηκαν σε 4-μm τμήματα. Η χρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το R.T.U. Vectastain κιτ ακόλουθο πρότυπο πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Τα πλακίδια ιστός αποκλείσθηκαν με 2,5% κανονικό ορό αλόγου για 10 λεπτά. Τα δείγματα στη συνέχεια επωάστηκαν με αντι-ανθρώπινο αντίσωμα δραστικό κασπάσης 3 κουνελιού (1:50 αραίωση), επί μία νύκτα στους 4 ° C. Μετά την πλύση, τα πλακίδια ιστού επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα IgG HRP αντι-κουνελιού επί 10 λεπτά. Τα πλακίδια χρωματίστηκαν με 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) (Vector Laboratories) και με αιματοξυλίνη (Vector Laboratories), αφυδατωμένο, υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ξυλόλιο, και τοποθετημένα. Όλες οι διαφάνειες εξετάστηκαν και ελήφθησαν αντιπροσωπευτικές εικόνες χρησιμοποιώντας ένα Olympus BX41 μικροσκόπιο (Olympus, Αμερική, Melville, ΝΥ). Δραστική κασπάση-θετικών κυττάρων σε ιστούς όγκων βαθμολογήθηκαν στα 400 × μεγέθυνση. Ο μέσος αριθμός των θετικών κυττάρων ανά 0,0625 χιλιοστά

2 περιοχή προσδιορίστηκε από τρία ξεχωριστά πεδία σε κάθε ένα από τα τρία ανεξάρτητα δείγματα όγκων όπως περιγράφεται [25].

Quantum dot-based immunohisto fl uorescence (QD-ΔΟΕ) και ποσοτικοποίηση του σήματος

QD-IHF για τη μέτρηση της έκφρασης της πρωτεΐνης σε ιστούς όγκων διεξήχθη όπως περιγράφεται προηγουμένως [27-29]. Εν συντομία, συλλέχθηκαν οι όγκοι εγκλείστηκαν σε παραφίνη και κόπηκαν σε 4-μm τμήματα. Μετά αποπαραφίνωση και την επανυδάτωση, ανάκτηση αντιγόνου διεξήχθη με θέρμανση με διάλυμα κιτρικού οξέος (10 mmol /L, ρΗ 6,0) σε ένα φούρνο μικροκυμάτων για 10 λεπτά. Τα πλακίδια ιστός αποκλείσθηκαν με 2,5% κανονικό ορό αλόγου για 10 λεπτά πριν από το πρωτεύον αντίσωμα επώαση. Κουνέλι αντι-ανθρώπινα pEGFR και αντισώματα ποντικού αντι-ανθρώπου π-STAT3 αναμίχθηκαν σε 1:50 αραίωση σε 1 χ PBS που περιέχει 2.5% ορό αλόγου. Κανονική IgG κουνελιού χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Οι τομές ιστού επωάσθηκαν με ένα μικτό διάλυμα από ρ-EGFR και ρ-STAT3 αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Μετά την πλύση με 1 χ PBS τρεις φορές, συζυγούς QD705 κατσίκα αντι-ποντικού IgG (πράσινο) και συζυγές IgG αντι-κουνελιού κατσίκας QD605 (κόκκινο) δευτερογενή αντισώματα προστέθηκαν στα πλακίδια με περαιτέρω επώαση για 1 ώρα στους 37 ° C. Τα πλακίδια πλύθηκαν τρεις φορές με 1 χ PBS, αντίθετα με ϋΑΡΙ, τοποθετείται και φυλάσσεται στους 4

oC υπό σκοτεινές συνθήκες. διαδικασίες απεικόνισης και ποσοτικοποίηση QD διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29]. Η Nuance

σύστημα TM φθορισμού μικροσκόπιο (CRI ενοποιούνται με δαγκάνα, μια εταιρεία PerkinElmer, Hopkinton, ΜΑ) χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση των σημάτων QD-ΔΟΕ. Όλα κύβους αρχεία εικόνας συλλέχθηκαν από διαφάνειες ιστό του όγκου κατά διαστήματα μήκος κύματος 10 nm 420 – 720 nm, με χρόνο έκθεσης αυτοκινήτων ανά διάστημα μήκους κύματος στα 200 ~ μεγέθυνση 400χ. Λαμβάνοντας τον κύβο με ένα μακρύ μήκος κύματος του φίλτρου διέλευσης ζώνης επιτρέπεται η διαβίβαση όλων των μηκών κύματος εκπομπής πάνω από 420 nm. Και τα δύο διαχωρίζονται και σε συνδυασμό εικόνες QD ελήφθησαν από unmixing τον κύβο εικόνα με βάση την ίδρυση της φασματικής βιβλιοθήκης QD. Για κάθε slide ιστό, ελήφθησαν 10 κύβους. Το σήμα υποβάθρου αφαιρέθηκε για ακριβή ποσοτικοποίηση των σημάτων QD. Ο μέσος όρος κάθε σήμα QD ελήφθη με επιλογή των περιοχών του όγκου σε κάθε κύβο για την ποσοτικοποίηση από το λογισμικό απεικόνισης Nuance (δαγκάνα /PerkinElmer). Ένα μέσο ανάγνωσης από τις 10 κύβους ελήφθη ως συνολική μέση μέτρηση του σήματος του κάθε slide ιστού τόσο για pEGFR και pSTAT3 σήματα.

Ποντίκι ανάλυση αίματος

Ολόκληρο αίμα (250 μΐ) συλλέχθηκε σε EDTA -επικαλυμμένα σωλήνες μέσω καρδιακής παρακέντησης από αναισθητοποιημένους ποντικούς για μελέτες αιματολογία. Τα δείγματα αναλύθηκαν για τα λευκά αιμοσφαίρια (WBC), ερυθρά αιμοσφαίρια (RBC), τα αιμοπετάλια (PLT), της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT), ασπαρτική αμινοτρανσφεράση (AST) και αζώτου ουρίας αίματος (BUN) στο κλινικό εργαστήριο Παθολογίας στο Πανεπιστήμιο του Γεωργία (Αθήνα, GA)

Η στατιστική ανάλυση

οι σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων αναλύθηκαν με t-test και τιμή p & lt διπλής όψης unpaired Student.? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Η στατιστική ανάλυση έγινε με Graphpad INSTAT 3 λογισμικό (San Diego, CA) [30].

Ανάλυση του συνδυασμού δείκτη (CI) τιμή

τιμή CI για συνέργεια ναρκωτικών υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό CompuSyn (Combo-Syn, Inc., Paramus, NJ) όπως περιγράφεται [31].

Αποτελέσματα

η αναστολή του EGFR με erlotinib ρυθμίζει προς τα κάτω PTPMeg2 που οδηγεί σε αυξημένη φωσφορυλίωση STAT3

έχει πρόσφατα αναφερθεί ότι η αναστολή του EGFR με erlotinib ενεργοποιεί ο STAT3 /Bcl2 /Bcl-XL επιβίωση μονοπατιού σηματοδότησης στον καρκίνο του ανθρώπινου πνεύμονα [32]. Για να ελεγχθεί αν αυτή η επίδραση της erlotinib συμβαίνει σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου κύτταρα, Tu212 και Tu686 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με erlotinib (0,1 μΜ) για διάφορους χρόνους. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι erlotinib μειωμένη φωσφορυλίωση του EGFR σε συνδυασμό με αυξημένη φωσφορυλίωση Tyr705 STAT3, αυξημένα επίπεδα Bcl2 /Bcl-XL και μειωμένα επίπεδα survivin (Σχήμα 1Α). STAT3 είναι ένας φυσιολογικός παράγοντας μεταγραφής της Bcl2 και Bcl-XL [33-35]. Αυξημένα επίπεδα Bcl2 και Bcl-XL mRNA παρατηρήθηκαν επίσης σε Tu212 και Tu686 κυττάρων μετά κατεργασία erlotinib (Σχήμα 1Β), υποδεικνύοντας ότι erlotinib ενεργοποιούμενη STAT3 ρυθμίζει θετικά Bcl2 /Bcl-XL αλλά όχι survivin στο μεταγραφικό στάδιο. Για να καταδείξει πώς η erlotinib διεγείρει φωσφορυλίωση STAT3, αξιολογήθηκαν οι επιδράσεις της erlotinib στη STAT3 κινάση (δηλαδή JAK2) και φωσφατάση (δηλαδή PTPMeg2). Περιέργως, erlotinib όχι μόνο ανέστειλε φωσφορυλίωση JAK2, αλλά και σημαντικά μειωμένο επίπεδο έκφρασης PTPMeg2 σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου κύτταρα (Σχήμα 1Α). Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι STAT3 φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση erlotinib μεσολάβηση μπορεί να προκύψει από την αναστολή της STAT3 φωσφατάσης PTPMeg2.

A

, Tu212 και Tu686 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με erlotinib (0,1 μΜ) για διάφορους χρόνους . Επίπεδα των διαφόρων πρωτεϊνών (pSTAT3, PTPMeg2, pEGFR, Bcl2, Bcl-XL, κλπ) αναλύθηκαν με στύπωμα Western.

B

, Tu212 και Tu686 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με erlotinib (0,1 μΜ) για διάφορους χρόνους. Επίπεδα Bcl2 ή Bcl-XL mRNA αναλύθηκαν με RT-PCR.

Η

Είναι σημαντικό ότι, ειδικές knockdown του PTPMeg2 οδήγησε επίσης σε αυξημένη φωσφορυλίωση STAT3 και αυξημένα επίπεδα Bcl2 και Bcl-XL σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου κύτταρα (Σχήμα 2), η οποία υποστηρίζει περαιτέρω το ρόλο της PTPMeg2 ως φυσιολογική STAT3 φωσφατάση, όπως αναφέρθηκε πρόσφατα [15].

PTPMeg2 shRNA ή ελέγχου shRNA διαμολύνθηκε σε κύτταρα Tu212. επίπεδα έκφρασης του pSTAT3, Bcl-XL, Bcl2 και Mcl-1 αναλύθηκαν με κηλίδα Western.

Η

Η διακοπή της STAT3 ευαισθητοποιεί καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρα με την erlotinib

Για να ελέγξετε εάν η erlotinib μεσολάβηση ενεργοποίηση STAT3 επηρεάζει αρνητικά την δραστηριότητα erlotinib εναντίον καρκίνου κεφαλής και τραχήλου, STAT3 χτυπήθηκε κάτω από τα κύτταρα Tu212 και Tu686 χρησιμοποιώντας STAT3 shRNA (Εικόνα 3Α). Αποσιώπηση του STAT3 όχι μόνο ρυθμίζει προς τα κάτω Bcl2 και Bcl-XL (Σχήμα 3Α), αλλά και ευαισθητοποιεί σημαντικά καρκίνο κεφαλής και λαιμού κυττάρων σε erlotinib (Σχήμα 3Β), γεγονός που υποδηλώνει ότι η στόχευση STAT3 μπορεί να έχει μεγάλες δυνατότητες για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας της erlotinib έναντι καρκίνου κεφαλής και τραχήλου .

Μια

, STAT3 shRNA ή τον έλεγχο shRNA μετασκευάστηκε σε κύτταρα Tu212 και Tu686. Τα επίπεδα έκφρασης του STAT3, Bcl-XL και Bcl2 αναλύθηκαν με κηλίδα Western.

Β

, κύτταρα Tu212 και Tu686 εκφράζοντας STAT3 shRNA ή τον έλεγχο shRNA υποβλήθηκαν σε θεραπεία με erlotinib (1 μΜ) για 48 ώρες. Η ανάπτυξη των κυττάρων προσδιορίστηκε με προσδιορισμούς SRB.

Η

Niclosamide μπλοκ erlotinib επαγόμενη φωσφορυλίωση STAT3 και συνεργεί με erlotinib στην καταστολή της κεφαλής και την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων τραχήλου

Niclosamide έχει πρόσφατα αναγνωριστεί ως ένας ισχυρός αναστολέας STAT3 [18]. Για να ελεγχθεί αν φαρμακολογική διάρρηξη της δραστηριότητας STAT3 ευαισθητοποιεί καρκίνο κεφαλής και λαιμού κύτταρα να erlotinib, Tu212 και Tu686 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με erlotinib απουσία ή παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων του νικλοζαμίδιο. Η ανάλυση στυπώματος Western έδειξε ότι το νικλοζαμίδιο ανέστειλε STAT3 φωσφορυλίωση erlotinib επαγόμενη και μειωτικά Bcl2 /Bcl-XL με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 4Α). Σημαντικά, νικλοζαμίδιο σε συνδυασμό με erlotinib αύξησε σημαντικά την αναστολή της ανάπτυξης του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρα (δηλαδή Tu212 και Tu686) (Σχήμα 4Β). Να αναλύσει με μεγαλύτερη ακρίβεια το βαθμό συνέργειας μεταξύ νικλοζαμίδιο και erlotinib, ο δείκτης συνδυασμού (CI) τιμές υπολογίστηκαν όπως περιγράφεται στο «Μέθοδοι». Οι τιμές CI ήταν 0,39325 για Tu212 και 0,447333 για τα κύτταρα Tu686, αντίστοιχα. Οι τιμές CI μικρότερη από 1 υποδεικνύει ότι η αναστολή νικλοζαμίδιο και ερλοτινίμπη εμφανίζουν συνεργιστική ανάπτυξη καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρα.

Μια

, Tu212 και Tu686 κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με erlotinib με την απουσία ή την παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων νικλοζαμίδιο για 48 ώρες. pSTAT3, Bcl2 και Bcl-XL αναλύθηκαν με Western Blot.

Β

, Tu212 και Tu686 κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με erlonitib, νικλοσαμίδη ή συνδυασμό τους. Μετά από 48 ώρες, η κυτταρική ανάπτυξη προσδιορίστηκε με δοκιμασίες SRB. αξίες (CI) Συνδυασμός δείκτη υπολογίστηκαν όπως περιγράφεται στο «Μέθοδοι.

Η

Niclosamide και ερλοτινίμπη συνεργικά αναστέλλουν την ανάπτυξη του κεφαλιού και των ζώων καρκίνου του τραχήλου ξενομοσχευμάτων

Από νικλοζαμίδιο και ερλοτινίμπη παίζουν συνεργιστική ρόλο κατά καρκίνου κεφαλής και τραχήλου

in vitro

(Σχήμα 4), είναι ενδιαφέρον να εξετάσουμε αυτό το συνεργιστική δράση

in vivo

. Πρώτον, καρκίνο κεφαλής και τραχήλου ξενομοσχεύματα παρήχθησαν χρησιμοποιώντας κύτταρα Tu212. Στη συνέχεια, τα ποντίκια που φέρουν το κεφάλι και τον αυχένα Tu212 ξενομοσχεύματα καρκίνου υποβλήθηκαν σε αγωγή με erlotinib (40 mg /kg /d), niclosamide (20 mg /kg /ημέρα) μόνη ή σε συνδυασμό για δύο εβδομάδες. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και οι δύο erlotinib και νικλοζαμίδιο μόνο είχε μέτρια αποτελεσματικότητα έναντι των όγκων ξενομοσχεύματος. Ωστόσο, ο συνδυασμός της erlotinib και νικλοζαμίδιο καταστέλλεται σχηματισμός ξενομοσχεύματος όγκου σημαντικά πιο αποτελεσματικά από ό, τι είτε απλός παράγων μόνος

in vivo

(ρ & lt? 0,01) (Σχήμα 5Α). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το νικλοζαμίδιο και erlotinib έχουν ισχυρή συνέργεια στη θεραπεία του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου.

A

, ποντίκια που φέρουν ξενομοσχεύματα Tu212 υποβλήθηκαν σε αγωγή με έκδοχο ελέγχου, erlotinib (Erlo, 40mg /kg /d), νικλοζαμίδιο (Niclo, 20 mg /kg /d) ή συνδυασμός τους για 14 ημέρες. Κάθε ομάδα περιλάμβανε 8 ποντικούς. Ο όγκος του όγκου μετρήθηκε μία φορά κάθε 2 ημέρες. Μετά από 14 ημέρες, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και οι όγκοι αφαιρέθηκαν και αναλύθηκαν. ελήφθησαν Εκπρόσωπος φωτογραφίες του όγκου.

B

, δραστική κασπάση 3 και Ki 67 αναλύθηκαν σε ιστούς όγκων στο τέλος των πειραμάτων με χρώση IHC και ποσοτικοποιείται όπως περιγράφεται στο «Methods».

C

, τα επίπεδα έκφρασης του pEGFR, pSTAT3, Bcl2 και Bcl-XL σε ιστούς όγκου από διάφορες ομάδες αγωγής αναλύθηκαν με κηλίδα Western.

Η

Μετρήσαμε την απόπτωση με ανάλυση δραστικής κασπάσης 3 στους ιστούς του όγκου με χρώση IHC όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Ο συνδυασμός της erlotinib και νικλοζαμίδιο αυξήθηκε σημαντικά δραστική κασπάση 3 θετικών κυττάρων σε συνδυασμό με μειωμένη Ki-67 θετικών κυττάρων σε ιστούς κεφάλι και το λαιμό του όγκου (Σχήμα 5Β). Ανάλυση πρωτεΐνης των κυτταρολυμάτων ιστού του όγκου από τρεις ποντικούς σε κάθε ομάδα θεραπείας ανέφεραν ότι νικλοζαμίδιο μπλοκ erlotinib διεγερμένα φωσφορυλίωση STAT3 που οδηγούν εις μειωμένη Bcl2 και τα επίπεδα Bcl-XL (Σχήμα 5C). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν το μοριακό μηχανισμό με τον οποίο νικλοζαμίδιο και ερλοτινίμπη εμφανίζουν συνέργεια ενάντια στην ανάπτυξη καρκίνου κεφαλής και τραχήλου

in vivo

.

Είναι σημαντικό, θεραπείες ήταν καλά ανεκτές χωρίς απώλεια βάρους κατά τη διάρκεια της θεραπείας (Σχήμα 6Α). Δεν υπήρχαν παρατηρήσιμες μεταβολές στις λειτουργίες των ζωτικών οργάνων όπως αντικατοπτρίζεται από τα αποτελέσματα του ήπατος, των νεφρών, και οι δοκιμές λειτουργίας του μυελού των οστών (ALT, AST και BUN, WBC, Hb και αιμοπεταλίων) (Σχήμα 6Β). Ιστοπαθολογική συγκομίζονται φυσιολογικούς ιστούς (εγκέφαλος, καρδιά, πνεύμονες, ήπαρ, σπλήνα, τα νεφρά και το έντερο) δεν αποκάλυψαν ενδείξεις τοξικότητας σε φυσιολογικό ιστό (Εικόνα 6C).

Μια

, το βάρος του σώματος του ποντίκια με ξενομοσχεύματα Tu212 μετρήθηκε μία φορά κάθε δεύτερη μέρα κατά τη διάρκεια της θεραπείας με τον έλεγχο του οχήματος, erlotinib (Erlo, 40mg /kg /d), νικλοζαμίδιο (Niclo, 20 mg /kg /d) ή συνδυασμός τους.

B

, ανάλυση αίματος ποντικών μετά από διάφορες θεραπείες για 14 ημέρες. C, H & amp? Ε ιστολογία των διαφόρων οργάνων μετά τις θεραπείες.

Η

Ανάλυση pEGFR και pSTAT3 σε ιστούς όγκων από την κβαντική τελεία (QD) -με βάση immunohistofluorescence (QD-ΔΟΕ)

Η τεχνική QD-ΔΟΕ έχει ένα σημαντικό πλεονέκτημα, επιτρέποντας για την ποσοτικοποίηση των αρκετών βιοδείκτες ταυτόχρονα στο ίδιο πλακίδιο ιστού [27-29,36]. Επίπεδα pEGFR και pSTAT3 αναλύθηκαν ταυτόχρονα με QD-IHF χρησιμοποιώντας πρωτογενή αντισώματα και QD-συζευγμένα δευτερογενή αντισώματα με δύο διαφορετικά μήκη κύματος εκπομπής (δηλ QD705 (πράσινο) και QD605 (κόκκινο)). Και τα δύο διαχωρίζονται και σε συνδυασμό εικόνες QD ελήφθησαν μετά τον καθορισμό της φασματικής βιβλιοθήκης QD και unmixing την κύβους εικόνα. QD εικόνες από ιστούς όγκων έδειξε ότι pEGFR εντοπίστηκε στην κυτταρική μεμβράνη και pSTAT3 βρισκόταν στον πυρήνα (Σχήμα 7). Μειωμένη pEGFR και αυξημένα επίπεδα pSTAT3 παρατηρήθηκαν σε ιστούς ξενομοσχεύματος όγκου της κεφαλής και του τραχήλου μετά την θεραπεία των ποντικών με erlotinib (Σχήμα 7). Επιπλέον, νικλοζαμίδιο μπλοκαριστεί εντελώς STAT3 φωσφορυλίωση erlotinib διεγείρεται στους ιστούς του όγκου (Σχήμα 7).

A

και

B

, Tu212 ξενομοσχεύματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τον έλεγχο του οχήματος, ερλοτινίμπη (Erlo, 40mg /kg /d), νικλοζαμίδιο (Niclo, 20 mg /kg /d) ή συνδυασμός τους για 14 ημέρες. pEGFR και pSTAT3 αναλύθηκαν σε ιστούς όγκων στο τέλος των πειραμάτων από QD-ΔΟΕ και ποσοτικά όπως περιγράφεται στο «Μέθοδοι».

Η

Συζήτηση

Το κεφάλι και το λαιμό καρκίνων είναι από τα πιο διαδεδομένη όγκων στον κόσμο. Παρά τις προόδους σε συμβατικές θεραπείες (π.χ. χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία), το συνολικό ποσοστό επιβίωσης για SCCHN δεν έχει βελτιωθεί σημαντικά κατά τις τελευταίες τρεις δεκαετίες [4]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών νέες προσεγγίσεις που δρουν μέσω βασικών μοριακών μηχανισμών είναι κρίσιμη για να βελτιώσει την πρόγνωση των καρκίνων της κεφαλής και του λαιμού. EGFR είναι ευρέως υπερεκφράζεται σε SCCHN. Παρά πανταχού παρούσα έκφραση της, θεραπείες στόχευσης EGFR είναι μόνο μέτρια αποτελεσματική στη θεραπεία του SCCHN [5]. Ο μηχανισμός της ανθεκτικότητας σε παράγοντες στόχευσης EGFR δεν είναι πλήρως κατανοητός. Εδώ, βρήκαμε ότι η αναστολή του EGFR με erlotinib αποτέλεσμα φωσφορυλίωση της STAT3 στο Tyr705 που οδηγούν στην ενεργοποίηση της και σε αυξημένα επίπεδα Bcl2 /Bcl-XL τόσο σε mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου κύτταρα (Σχήμα 1). Αυτή η επίδραση θα μπορούσε να μειώσει την αποτελεσματικότητα της erlotinib έναντι καρκίνου κεφαλής και τραχήλου. Είναι ενδιαφέρον, STAT3 φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση erlotinib που προκαλείται δεν ήταν αποτέλεσμα ανάντη JAK2 κινάση της επειδή erlotinib δεν ενεργοποιεί JAK2, αλλά αντιστρόφως μειώνει τη φωσφορυλίωση JAK2 (Εικόνα 1Α). Εκτός από την JAK2, φωσφορυλίωση STAT3 επίσης ρυθμίζεται στενά από αποφωσφορυλίωση μέσω φυσιολογικές φωσφατάσης του PTPMeg2 [15]. Θεραπεία του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρα Tu212 και Tu686 με erlotinib μειωμένη PTPMeg2 (δηλαδή μία φυσιολογική STAT3 φωσφατάση) σε ένα χρονοεξαρτώμενο τρόπο (Εικόνα 1Α). Έτσι, erlotinib, εκτός από την αναστολή του EGFR, μπορεί επίσης να καταστείλει PTPMeg2 οδηγώντας σε αυξημένη φωσφορυλίωση STAT3. Περιέργως, οι ειδικές knockdown του PTPMeg2 ενεργοποιημένων επίσης την STAT3 /μονοπάτι επιβίωσης Bcl2 /Bcl-XL (Σχήμα 2), γεγονός που υποδηλώνει ότι PTPMeg2 μπορεί να παίζει έναν σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ευαισθησίας της erlotinib να καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρα.

STAT3 έχει πρόσφατα αναγνωριστεί ως ένα πιθανό θεραπευτικό στόχο για την θεραπεία του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου [37]. Εξάντληση των STAT3 με RNAi ευαισθητοποιεί σημαντικά καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρα στην erlotinib (Σχήμα 3). Niclosamide έχει πρόσφατα ταυτοποιηθεί ως αναστολέας STAT3 που μπορεί να καταστείλει την φωσφορυλίωση STAT3 στο Tyr705 και δραστικότητα μεταγραφής [18]. Από νικλοζαμίδιο όχι μόνο ισχυρά μπλοκ erlotinib επαγόμενη φωσφορυλίωση STAT3, αλλά συνεργεί επίσης με erlotinib κατά καρκίνο κεφαλής και τραχήλου

in vitro

και

in vivo

(σχήματα 4 και 5), προτείνουμε ότι η erlotinib σε συνδυασμό με νικλοζαμίδιο έχει μεγάλες δυνατότητες να αναπτυχθεί ως μια νέα και πιο αποτελεσματική θεραπευτική προσέγγιση για τη βελτίωση της πρόγνωσης του καρκίνου κεφαλής και τραχήλου. Κβαντικές τελείες (ΚΤ) είναι νανοσωματίδια γίνονται από ανόργανα ημιαγωγούς και να έχουν νέες οπτικές ιδιότητες που μπορούν να παράγουν εκπομπή φθορισμού σε διάφορα μήκη κύματος ανάλογα με το μέγεθος και τη σύνθεση [38-40] τους. Η μεγάλη Stokes-μετατόπιση της ΚΤ, που μετράται με την απόσταση μεταξύ των κορυφών διέγερσης και εκπομπής, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη βελτίωση της ευαισθησίας ανίχνευσης. Αυτό είναι ιδιαίτερα σημαντικό όταν αναλύονται σύνθετα βιολογικά δείγματα όπως δείγματα ιστών που περιέχουν υψηλό υπόβαθρο αυτόματη φθορισμού και πολλαπλούς βιοδείκτες ταυτόχρονα. Επιπλέον, το σήμα QD-based immunohistofluorescence (QD-IHF) δεν είναι photobleachable και το φάσμα του σήματος είναι στενότερο από εκείνους από οργανικές χρωστικές, ενισχύοντας έτσι την εξειδίκευση του ποσοτικού προσδιορισμού. ανάλυση QD-based επιβεβαίωσαν ότι η αναστολή της pEGFR με erlotinib διεγείρει φωσφορυλίωση του STAT3 σε καρκινικούς ιστούς, και ότι νικλοζαμίδιο ειδικά μπλοκ erlotinib επαγόμενη φωσφορυλίωση STAT3 χωρίς να επηρεάζει pEGFR (Σχήμα 7). Αυτά τα δεδομένα QD-IHF όχι μόνο παρέχουν επιπλέον αποδείξεις ότι erlotinib ενεργοποιεί STAT3, αλλά επίσης να αποκαλύψει το μοριακό μηχανισμό με τον οποίο νικλοζαμίδιο και ερλοτινίμπη συνεργικά καταστέλλουν καρκίνου κεφαλής και τραχήλου

in vivo

.

Εν περιλήψει, οι παρούσες μελέτες έδειξαν ότι η αναστολή του EGFR με erlotinib διεγείρει φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση της STAT3 που οδηγεί σε αυξημένα επίπεδα Bcl2 και Bcl-XL, η οποία θα μπορούσε να μειώσει την αποτελεσματικότητα της erlotinib έναντι καρκίνου κεφαλής και τραχήλου. Η erlotinib επαγόμενη ενεργοποίηση STAT3 μπορεί να συμβεί μέσω καταστολής της φυσιολογικής PTPMeg2 φωσφατάσης της. Συνδυασμένη παρεμπόδιση του EGFR και STAT3 χρησιμοποιώντας erlotinib και νικλοζαμίδιο καταστέλλει συνεργικά καρκίνου κεφαλής και τραχήλου

in vitro

και

in vivo

, το οποίο μπορεί να αντιπροσωπεύει μία νέα και αποτελεσματική θεραπευτική στρατηγική για τη βελτίωση πρόγνωση των ασθενών με κεφαλή και του καρκίνου του τραχήλου.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Anthea Hammond για την επαγγελματική επιμέλεια του χειρογράφου.