Αφηρημένο

Ιστορικό

δείκτες ορού αντιπροσωπεύουν πιθανά εργαλεία για την ανίχνευση του παχέος εντέρου καρκίνο (CRC). Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αποκτήσει πρωτεομική προφίλ έκφρασης και τον προσδιορισμό δεικτών ορού για την έγκαιρη ανίχνευση της CRC.

Μέθοδοι

πρωτεομικής προφίλ δειγμάτων ορού συλλέχθηκαν από 35 υγιείς εθελοντές, 35 ασθενείς με προχωρημένο ορθοκολικού αδενώματος (ACA), και 40 ασθενείς με CRC συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τεχνολογία Clinprot. Χρησιμοποιώντας συνδεδεμένη με ένζυμο ανοσορροφητικές δοκιμασίες (ELISA), 366 δείγματα οροί αναλύθηκαν επιπλέον, και οι μελέτες ανοσοϊστοχημείας 400 ιστοί χρησιμοποιούνται για την επαλήθευση της έκφρασης του κινινογόνο-1 και την αξία του στην πρώιμη ανίχνευση του CRC.

Αποτελέσματα

Πρόβλεψη μοντέλα δημιουργήθηκαν μεταξύ των τριών ομάδων, και κινινογόνο-1 ταυτοποιήθηκε ως ένας πιθανός δείκτης για CRC χρησιμοποιώντας την τεχνολογία Clinprot. ELISAs ανιχνεύθηκε επίσης σημαντικά υψηλότερη ορό κινινογόνο-1 επίπεδα σε ACA και οι ασθενείς CRC σύγκριση με τους μάρτυρες (

P

& lt? 0,05). Περαιτέρω, η περιοχή κάτω από την χαρακτηριστική λειτουργική καμπύλη (AUC) για ορό κινινογόνο-1 στη διάγνωση της ACA ήταν 0.635 (Ρ = 0,003), και για καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο ορού (CEA) ήταν 0.453 (Ρ = 0,358). Η ευαισθησία, η ειδικότητα, και την ακρίβεια των κινινογόνο-1 ορού για τη διάγνωση στάδιο Δούκα Α και Β CRC ήταν 70.13%, 65.88% και 67.90%, αντίστοιχα, ενώ CEA στον ορό ήταν 38.96%, 85.88% και 63.58%, αντίστοιχα. Επιπλέον, ανοσοϊστοχημεία έδειξε ότι η έκφραση του κινινογόνο-1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε CRC και ACA ιστούς από ότι στα φυσιολογικά βλεννογόνο (48,39% έναντι 15,58% έναντι 0%,

P

& lt? 0,05).

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η τεχνολογία Clinprot παρέχει ένα χρήσιμο εργαλείο για τη διάγνωση της CRC, και κινινογόνο-1 είναι ένας πιθανός βιολογικός δείκτης ορού για την έγκαιρη ανίχνευση των προηγμένων ορθοκολικού αδενώματος και CRC.

Παράθεση: Wang J, Wang Χ, Lin S, Chen C, Wang C, Ma Q, et al. (2013) Ταυτοποίηση των κινινογόνο-1 ως Ορός βιοδεικτών για την έγκαιρη ανίχνευση των προηγμένων ορθοκολικού αδενώματος και του καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 8 (7): e70519. doi: 10.1371 /journal.pone.0070519

Επιμέλεια: Mitsunobu R. Κάνο, Πανεπιστήμιο Okayama, Japan

Ελήφθη: 14 Νοεμβρίου, 2012? Αποδεκτές: 25 Ιουν, 2013? Δημοσιεύθηκε: 23 Ιούλη του 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από την Επιστήμη και την Τεχνολογία Σχεδιασμού Έργου της επαρχίας Γκουανγκντόνγκ (2010B031600098) και Επιστήμης και Τεχνολογίας Πρόγραμμα Ανάπτυξης του Δήμου Guangzhou (2.060.402). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

εκτιμάται ότι περισσότερα από 143.000 άτομα στις Ηνωμένες Πολιτείες θα διαγνωστούν με καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC) το 2012, και πάνω από 50.000 άτομα θα πεθάνουν από την ασθένεια αυτή [1]. Με εξέταση ατόμων μέσος κινδύνου, υποτίθεται ότι CRC μπορούσε να ανιχνευθεί στα πρώτα της στάδια, μειώνοντας έτσι τα ποσοστά θνησιμότητας που σχετίζονται με CRC [2] – [4]. Επί του παρόντος, CRC ελέγχου μπορεί να περιλαμβάνει ένα Τεστ Κρυφού Αίματος, σιγμοειδοσκόπηση, και κολονοσκόπηση [5]. Σε πολλές χώρες με περιορισμένους πόρους χώρες, η κοπράνων δοκιμασία κρυφού αίματος είναι κατά κύριο λόγο χρησιμοποιείται, παρά την ανεπαρκή ευαισθησία του προσδιορισμού [6], [7]. Επιπλέον, με τη σιγμοειδοσκόπηση και η κολονοσκόπηση είναι επεμβατική και ενοχλητικό διαδικασίες, η εφαρμογή τους για προβολές CRC έχει περιοριστεί [8]. Ως εκ τούτου, οι λιγότερο επεμβατικές και μη επεμβατικές προσεγγίσεις για να βελτιωθεί η ευαισθησία και η συμμόρφωση του ασθενούς σε προβολές CRC.

Ο προσδιορισμός των βιολογικών δεικτών ορολογικές ειδικό για CRC θα μπορούσε να παρέχει ένα σχετικά μη επεμβατική και οικονομικά συμφέρουσα μέθοδος για την ανίχνευση του CRC σε σύγκριση με τις τρέχουσες επιλογές ελέγχου. Ωστόσο, ο ορός είναι ένα σύνθετο σώμα υγρό που περιέχει πολλές διαφορετικές πρωτεΐνες. Για παράδειγμα, περισσότερα από 10.000 διαφορετικές πρωτεΐνες έχουν ανιχνευθεί σε ανθρώπινο ορό, και οι πολλές πρωτεΐνες που εκκρίνονται ή αποβάλλεται από τα κύτταρα κατά τη διάρκεια διαφόρων φυσιολογικών ή παθολογικών διαδικασιών [9], [10]. Ως εκ τούτου, είναι δύσκολο να προσδιοριστεί μια ασθένεια-ειδικό δείκτη ορού. Λόγω πρόοδοι στις μεθοδολογίες πρωτεομική, είναι τώρα δυνατό να εντοπίσει γρήγορα τα νέα υποψήφια δείκτες για τον καρκίνο. Για παράδειγμα, πολλές μελέτες έχουν αποδείξει τις ικανότητες υποβοηθούμενης από μήτρα λέιζερ εκρόφησης /ιοντισμού χρόνου πτήσης φασματομετρίας μάζας (MALDI-TOF-MS) για το διαχωρισμό πολύπλοκων μειγμάτων πρωτεϊνών, διευκολύνοντας έτσι την σύγκριση των μεταβολών στην έκφραση της πρωτεΐνης για την κανονική και καρκινικά δείγματα ορού [11] – [13]. Ειδικότερα, Clinprot τεχνολογία, η οποία βασίζεται σε MALDI-TOF-MS, έχει πολλά πλεονεκτήματα για κλινική εφαρμογή, περιλαμβανομένης της ευαισθησίας του, την ευκολία χρήσης, και την ικανότητα για ανάλυση υψηλής απόδοσης [14], [15].

Χρήση MALDI-MS, Seraglia

et al.

[16] που έχουν αναφερθεί προηγουμένως κινινογόνο-1 να είναι ένας εν δυνάμει νέος δείκτης πλάσματος για CRC. Κινινογόνο-1 είναι μια πολυλειτουργική πρωτεΐνη που παίζει σημαντικό ρόλο σε πολλές παθοφυσιολογικές διεργασίες [17], συμπεριλαμβανομένων ινωδόλυση, θρόμβωση, και φλεγμονή, καθώς επίσης και έχοντας ένα ρόλο στην ογκογένεση [18]. Για την επιβεβαίωση αυτών των αποτελεσμάτων και για την ταυτοποίηση επιπλέον δεικτών νέα πλάσματος για CRC, ορούς από ασθενείς με CRC, ασθενείς με προχωρημένο ορθοκολικό αδένωμα (ACA) και υγιή άτομα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τεχνολογία Clinprot, ανοσορροφητικές δοκιμασίες συνδεδεμένου ενζύμου (ELISA), και ανοσοϊστοχημεία.

Υλικά και Μέθοδοι

Επιλογή ασθενών

Όλα τα δείγματα συλλέχθηκαν από το Νοσοκομείο Nanfang. Οι οροί συλλέχθηκαν μεταξύ 1ης Οκτωβρίου 2009 και 31 Δεκεμβρίου 2010. ιστούς παραφίνης συλλέχθηκαν μεταξύ της 1ης Απριλίου, 1999 και 31 Δεκεμβρίου 2007. Οι ασθενείς με γνωστό ιστορικό οικογενή αδενωματώδη πολυποδίαση, κληρονομική μη-πολυποειδούς καρκίνο του παχέος εντέρου, η υπέρταση, οποιαδήποτε άλλη όγκους, και προφανείς φλεγμονωδών νόσων, αποκλείστηκαν. Οι ακόλουθοι παράγοντες καταγράφηκαν για κάθε ιστό: η ηλικία του ασθενούς, το φύλο του ασθενούς, το μέγεθος του όγκου, εντόπιση όγκου για CRC και ACA, ιστολογία ιστού και του βαθμού του όγκου για ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία για ACA, διαφοροποίησης, το στάδιο Δούκα, και Όγκου-Node-Μετάσταση (TNM) στάδιο (7ο EDN) για CRC. ασθενείς με ορθοκολικό αδένωμα έχει τουλάχιστον ένα αδένωμα ≥10 mm, ή με λαχνών δομή ή καρκίνωμα

in situ

, ταξινομήθηκαν ως ασθενείς ACA [19].

Αυτή η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με θεσμικό ηθικές κατευθυντήριες γραμμές και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Ηθικής του Ιατρικού Πανεπιστημίου της Νότιας (# 2011119). Γραπτή ενημέρωσε έντυπα συγκατάθεσης ελήφθησαν από όλους τους ασθενείς.

Προετοιμασία δείγματος

Οι οροί συλλέχθηκαν από υγιείς εθελοντές, ACA ασθενείς, CRC ασθενείς προεγχειρητικά (που λαμβάνεται πριν από κάθε κλινική θεραπεία), και μετεγχειρητική CRC ασθενείς (που λαμβάνεται επτά ημέρες μετά την επέμβαση). Για την ανάλυση Clinprot, συνολικά 110 δείγματα ορών ελήφθησαν από υγιείς εθελοντές (n = 35), οι ασθενείς ACA (n = 35), και CRC ασθενείς προεγχειρητική (n = 40). Για ELISAs, συνολικά 366 οροί ελήφθησαν από ένα επιπλέον χρόνο 85 υγιείς εθελοντές, 80 ασθενείς ACA, 143 CRC ασθενείς προεγχειρητική, και 58 ασθενείς CRC μετεγχειρητική. Ασυμπτωματική και προφανώς υγιείς εθελοντές επιλέχθηκαν που δεν έχουν προηγούμενο ιστορικό καρκίνου. Όλα τα δείγματα συλλέχθηκαν σε σωλήνες διαχωρισμού ορού 5 ml, και στη συνέχεια επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Μετά από φυγοκέντρηση στις 3000 rpm για 10 λεπτά, οι οροί κατανεμήθηκαν σε δείγματα 50 μΐ και αποθηκεύεται στους -70 ° C μέχρι να χρειαστούν.

Ένα σύνολο 400 εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία, συμπεριλαμβανομένων 75 φυσιολογικό ορθοκολικό βλεννογόνου ιστοί που συλλέχθηκαν από υγιείς εθελοντές, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε ενδοσκοπική βιοψία βλεννογόνου. Επιπλέον, 77 ACA ιστοί συλλέχθηκαν από ACA ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ενδοσκοπική εκτομή, και 248 CRC ιστοί συλλέχθηκαν από ασθενείς CRC που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση. Όλα τα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε διάλυμα φορμόλης 10% και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Τμήματα (4 μm) κόπηκαν και προετοιμάστηκαν για προσδιορισμούς χρώσης και ανοσοϊστοχημεία αιματοξυλίνη-ηωσίνη.

Εκχύλιση των πεπτιδίων από ορό χρήση μαγνητικών σφαιριδίων, Ακολουθούμενη από MALDI-TOF-MS Ανάλυση

πεπτίδια ορού διαχωρίστηκε και καθαρίστηκε με χρήση μαγνητικών σφαιριδίων που βασίζεται αδύναμος κατιόν κιτ καθαρισμού χρωματογραφία ανταλλαγής (Bruker Daltonics GmbH). Ένα σύνολο 110 δειγμάτων ορών κλασματώθηκαν σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο που προτείνει ο κατασκευαστής. Ο αυστηρός έλεγχος της ποιότητας διατηρείται για να εξασφαλιστεί η ακρίβεια και η επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων που επιτυγχάνονται. προφίλ πεπτίδιο ορού στη συνέχεια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Ultraflex MALDI-TOF /TOF-MS (Bruker Daltonik, Βρέμη, Γερμανία). Φάσματα αποκτήθηκαν στη μάζα /φορτίο (m /z) εύρος 1.000 έως 10.000, χρησιμοποιώντας το λογισμικό FlexAnalysis (Bruker Daltonics).

Clinpro λογισμικού Εργαλεία 2.2 (Bruker, Daltonik) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση όλων των δεδομένων που προκύπτουν από δείγματα ορού. Αυτό που περιλαμβάνονται ανεπεξέργαστα δεδομένα που λαμβάνονται πριν από τη θεραπεία, βασική αφαίρεση των φασμάτων, κανονικοποίηση των φασμάτων, εσωτερική ευθυγράμμιση αιχμής χρησιμοποιώντας εξέχοντες κορυφές, και μια διαδικασία αιχμής μάζεμα. Επιπλέον, προεπεξεργασμένα δεδομένα οπτικοποιήθηκαν και στατιστικώς αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το t-test και γενετικοί αλγόριθμοι (GA) Student. Επιπλέον, τα μοντέλα πρόβλεψης προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη GA. Για τον προσδιορισμό της ακρίβειας των μοντέλων πρόβλεψης που δημιουργούνται, cross-επικύρωση εκτελέστηκε. Συνοπτικά, όλα τα δείγματα επιλέχθηκαν ως σύνολο εκπαίδευσης στον αλγόριθμο τάξη προγνωστικό, τότε τα ίδια δείγματα εκτός από ένα τυχαία επιλεγμένο δείγμα χρησιμοποιήθηκαν ως σύνολο ελέγχου. Ένα «τεστ» ήταν τότε πραγματοποιείται δέκα φορές τυχαία.

Peptide Στοιχεία από MALDI-TOF /TOF

Μετά την ολοκλήρωση της στατιστικής ανάλυσης, εντοπίστηκαν διαφορικά εκφρασμένων πεπτιδίων. Αρχικά, οι μονο-ισοτοπική μάζες των πεπτιδίων στο εύρος m /z 1000 έως 3000 προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μια αντανακλαστική λειτουργία. Μετά MS /MS φάσματα του προδρόμου ιόντων αποκτήθηκαν με τον τρόπο TOF /TOF, τα δεδομένα MS /MS υποβλήθηκαν σε μία βάση δεδομένων αναζήτησης Mascot για τον προσδιορισμό των αντιστοίχων ταυτίσεων πρωτεΐνη πλήρους μήκους.

Ένζυμο-συνδεδεμένη Δοκιμασία ανοσοαπορρόφησης ( ELISA)

Όλοι οι οροί αναλύθηκαν με τυφλό τρόπο, και τα πρότυπα και τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν. Οι συγκεντρώσεις κινινογόνο-1 ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μια ανθρώπινη κινινογόνο ELISA Kit (Νο EK2001-1, Assaypro, ΜΟ, USA). Εν συντομία: (1) 25 μΙ προτύπου ή δείγματος και 25 μΐ βιοτινυλιωμένου κινινογόνο προστέθηκε σε πολυστυρόλιο 96 φρεατίων μικροπλακιδίων επικαλυμμένων με πολυκλωνικό αντίσωμα εναντίον ανθρώπινου κινινογόνο. Μετά από 2 h σε RT, οι πλάκες πλύθηκαν πέντε φορές και στη συνέχεια 50 μΙ στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης συζυγούς προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Μετά από 30 λεπτά σε RT, οι πλάκες πλύθηκαν πέντε φορές και 50 μΙ χρωμογόνου υποστρώματος προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Μετά από μια μπλε χρώμα επαρκώς ανεπτυγμένη, 50 μΙ διαλύματος τερματισμού προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και οι τιμές απορρόφησης στα 450 nm καταγράφονταν χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη μικροπλακός. Μία πρότυπη καμπύλη δημιουργήθηκε και χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων του κινινογόνο-1 που υπάρχει στα δείγματα που αναλύθηκαν.

Για την ανίχνευση των επιπέδων του CEA, ένα εμπορικά διαθέσιμο κιτ ενζυμικού ανοσοπροσδιορισμού (Whiga, Guangzhou, Κίνα) ορός που χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

η ανοσοϊστοχημεία

κινινογόνο-1 αντίσωμα αγοράστηκε από Santa Cruz Biotechnology (SC-25799, CA, USA). Μια προηγουμένως δημοσιευμένο πρωτόκολλο χρησιμοποιήθηκε για τις δοκιμασίες ανοσοϊστοχημείας [20], με κινινογόνο-1 αντίσωμα αραιωμένο 1:150. Όλες οι τομές τυφλά και ανεξάρτητα αξιολογείται μικροσκοπικά από δύο καλά εκπαιδευμένο παθολόγους. Η ένταση της χρώσης αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα βαθμολόγησης ημιποσοτική ως ακολούθως: 0, αρνητική χρώση? 1, ασθενής χρώση? 2, μέτρια χρώση? και 3, ισχυρή χρώση. Η κατανομή της χρώσης επίσης κλιμακώνονται ανάλογα με το ποσοστό των χρωματισμένων κυττάρων που υπάρχουν στην περιοχή ενδιαφέροντος: 0, θετικά κύτταρα αποτελούσαν & lt? 10% των κυττάρων του όγκου? 1, θετικά κύτταρα αποτελούσαν το 10-50% των κυττάρων του όγκου? 2, θετικά κύτταρα αποτελούσαν το 50-75% των κυττάρων του όγκου? ή 3, θετικά κύτταρα αποτελούσαν & gt? 75% των κυττάρων του όγκου. Προστέθηκαν βαθμολογίες για ένταση και διανομή για να παρέχει μια συνολική βαθμολογία για κάθε δείγμα. Εν συντομία, θεωρήθηκαν δείγματα που λαμβάνουν μηδέν βαθμούς αρνητική (0), θεωρήθηκαν περιπτώσεις λαμβάνουν 1-3 πόντους ασθενώς θετικά (1+), περιπτώσεις λήψης 4-7 σημεία θεωρήθηκαν μάλλον θετική (2+), και περιπτώσεις που λαμβάνουν τελικό σκορ & gt ? 7 θεωρήθηκαν έντονα θετική (3+)

Στατιστική Ανάλυση

οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 13.0.. Για τον έλεγχο των διαφορών μεταξύ των ομάδων, εφαρμόστηκε η Chi-square test, με την εξαίρεση ότι έλεγχος τ εφαρμόστηκε σε ηλικία. Οι συσχετίσεις μεταξύ των βαθμολογιών ανοσοϊστοχημική προσδιορίζεται για κινινογόνο-1 και των κλινικοπαθολογικών παραμέτρων της κλάσης αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την κατάταξη τάξης συντελεστής συσχέτισης Spearman. Συγκεντρώσεις κινινογόνο-1 και CEA βρέθηκαν να έχουν μια κανονική κατανομή. Ως εκ τούτου, τα δεδομένα αυτά συγκρίθηκαν με χρήση ανάλυσης μονόδρομη δοκιμή διακύμανσης. Σε αντίθεση, πολλαπλές συγκρίσεις αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μεθόδους LSD. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM). Χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) καμπύλες χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστούν οι τιμές του κινινογόνο-1 ορού και CEA για την διάγνωση των όγκων παχέος εντέρου. Η Kaplan-Meier (δοκιμασία log-rank) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση επιβίωσης. Για όλες τις αναλύσεις, η P-τιμή μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε σημαντική.

Αποτελέσματα

πρωτεομικής Προφίλ του ACA και CRC ορού ασθενούς

Ένα σύνολο από 110 δείγματα ορών που λαμβάνονται από 35 υγιείς εθελοντές (μάρτυρες), 35 ασθενείς ACA, και 40 ασθενείς CRC προεγχειρητική υποβλήθηκαν σε ανάλυση Clinprot. Τα κύρια κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών των ασθενών έδειξε στον πίνακα S1. Αντιπροσωπευτικά φάσματα για κάθε μία από αυτές τις ομάδες παρουσιάζονται στο σχ. 1Α, και οι διαφορές στην ένταση κορυφής θέση και η κορυφή μπορεί να παρατηρηθεί. Χρησιμοποιώντας την ανάλυση MALDI-TOF, 70 διακριτές κορυφές στην περιοχή 1000 έως 10.000 m /z ταυτοποιήθηκαν μεταξύ των δειγμάτων ορών από τους ελέγχους και τους ασθενείς ACA, και 43 από αυτές τις κορυφές ήταν στατιστικά σημαντικές (Ρ & lt? 0,01, λεπτομέρειες στο Υλικά S1). Επιπλέον, 61 κορυφές διακρίθηκαν μεταξύ των ορών ελέγχου και CRC ορούς ασθενών, με 54 από αυτές τις κορυφές είναι στατιστικά σημαντική (P & lt? 0,01, λεπτομέρειες Υλικά S2)

Α:. Εκπρόσωπος φάσματα μάζας του ορού ελέγχου (α ), ορός από έναν ασθενή με ACA (β), και ορό από ένα ασθενή με CRC (γ). Β: MALDI /MS /MS φάσματα των ιόντων σε m /z 1943.95 (α) και m /z 2081.01 (β). Πίνακας C παρέχει τα αποτελέσματα από την αναζήτηση της βάσης δεδομένων μασκότ, η οποία αναφέρεται δύο κορυφές αντιστοιχούν σε κινινογόνο-1.

Η

Χρησιμοποιώντας κάθε πέμπτη αιχμής, GA ήταν σε θέση να δημιουργήσει διασταυρούμενη επικυρωμένα μοντέλα ταξινόμησης για τις διάφορες ομάδες. Τα καλύτερα μοντέλα πρόβλεψης (λεπτομέρειες στον Πίνακα 1) πέτυχαν ικανότητα αναγνώρισης των 98,96%, 100,00% και 100,00% για συγκρίσεις των CRC και ελέγχου, ACA και τον έλεγχο, και ACA και CRC, αντίστοιχα. Επιπλέον, οι εκτιμήσεις διασταυρούμενη ισχύς ήταν 95,49%, 100,00% και 98,19%, αντίστοιχα.

Η

Αναγνώριση CRC Μαρκαδόροι

Μια υψηλότερη συγκέντρωση των πεπτιδίων με m /z τιμές 1943 και 2081 ήταν εμφανής σε φάσματα CRC, αλλά όχι στα φάσματα ελέγχου (

P

& lt? 0,01). Χρησιμοποιώντας MALDI-TOF /TOF-MS και τη βάση δεδομένων μασκότ (Εικ. 1Β), MS /MS κατακερματισμό αυτών των δύο πεπτιδίων προσδιόρισε τις ακόλουθες σειρές, NLGHGHKHERDQGHGHQ και HNLGHGHKHERDQGHGHQ, αντίστοιχα. Επιπλέον, αυτά τα πεπτίδια βρέθηκαν να αντιπροσωπεύουν περιοχές της ίδιας προδρόμου κινινογόνο-1, αναστολέα a2-θειόλη πρωτεϊνάσης.

Συγκεντρώσεις ορού κινινογόνο-1 και CEA για τα διάφορα Sera Ομάδες

Για την επικύρωση η έκφραση του κινινογόνο-1 ανιχνεύθηκε σε ορούς από ασθενείς με CRC, δοκιμασίες ELISA ορού πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση 366 ορούς που αποκτήθηκαν από 85 υγιείς εθελοντές, 80 ασθενείς ACA, 143 CRC ασθενείς προεγχειρητική, και 58 ασθενείς CRC μετεγχειρητική. Η ηλικία, το φύλο, ο ορός κινινογόνο-1 συγκεντρώσεις και οι συγκεντρώσεις CEA μεταξύ των διαφορετικών ομάδων φαίνονται στον Πίνακα 2. Οι μέσες συγκεντρώσεις του κινινογόνο-1 ανιχνεύθηκε σε ελέγχους και προεγχειρητική CRC ασθενών ήταν 153.22 ± 8.43 μg /ml και 215.62 ± 7.63 μg /ml, αντίστοιχα, με το τελευταίο να είναι σημαντικά υψηλότερη (

P =

0.000). Επιπλέον, τα επίπεδα της κινινογόνο-1 ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ασθενείς CRC μετά από χειρουργική επέμβαση (188.04 ± 11.70 μg /ml?

P =

0,044). Για τους ασθενείς ACA, η μέση κινινογόνο-1 συγκέντρωση που ανιχνεύθηκε ήταν 194,26 ± 10,14 μg /ml, η οποία ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη της ομάδας ελέγχου (

P =

0,003). Σε αντίθεση, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ κινινογόνο-1 συγκεντρώσεις ανιχνεύονται για την προεγχειρητική CRC ασθενείς και ασθενείς ACA (

P =

0.082).

Η

Για συγκεντρώσεις CEA στον ορό, τα επίπεδα για την προεγχειρητική ασθενείς CRC, CRC ασθενείς μετεγχειρητική, ACA ασθενείς και μάρτυρες ήταν 14,66 ± 2,25 μg /l, 4,48 ± 0,72 μg /l, 3,10 ± 1,15 μg /l, και 2.43 ± 0.28 μg /l, αντίστοιχα (ACA

vs.

υγιή ελέγχου,

P =

0.797?.. CRC

vs

υγιή ελέγχου,

P =

0.000)

διαγνωστική αξία του ορού κινινογόνο -1 και CEA για όγκους παχέος εντέρου

για να αξιολογηθεί η διαγνωστική αξία των κινινογόνο-1, διεξήχθη μια ανάλυση της καμπύλης ROC. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2 Αα, η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) για ορό κινινογόνο-1 σε συνδυασμό με διάγνωση ACA ήταν 0.635 (95% CI: 0,551 – 0,719, p = 0,003), ενώ η AUC που σχετίζεται με τη διάγνωση της CRC ήταν 0,706 (95% CI:. 0,635 έως 0,777, P = 0,000? Σχήμα 2 Ac). Με βάση αυτές τις καμπύλες ROC, ένας ορός κινινογόνο-1 συγκέντρωση των 162,99 μg /ml επιλέχθηκε ως η βέλτιστη τιμή αποκοπής για τη διαφοροποίηση των ασθενών ACA και τους ελέγχους, με ευαισθησία, ειδικότητα, θετική και αρνητική προγνωστική αξία, και τα ποσοστά ακρίβειας είναι 51.25%, 63.53 %, 56,94%, 58,06% και 57,58%, αντίστοιχα. Ομοίως, ένας ορός κινινογόνο-1 συγκέντρωση των 173,96 μg /ml επιλέχθηκε ως η βέλτιστη τιμή αποκοπής για τη διαφοροποίηση των ασθενών CRC και τους ελέγχους, με τη σχετική ευαισθησία, ειδικότητα, θετική και αρνητική προγνωστική αξία, και τα ποσοστά ακρίβειας είναι 63.64%, 65.88%, 75,83%, 51,85% και 64,47%, αντίστοιχα

α:. Η καμπύλη ROC για ορό κινινογόνο-1 (α) και CEA (β) για τη διάγνωση του ACA, και την καμπύλη ROC για ορό kininogen- 1 (γ) και CEA (δ) για τη διάγνωση του CRC. Β: Μια σύγκριση της ευαισθησίας (Se), ειδικότητας (Sp), θετική προγνωστική αξία (PV +), αρνητική προγνωστική αξία (PV-), και την ακρίβεια (Ac) τα ποσοστά για την ανίχνευση των κινινογόνο-1 και CEA για την διάγνωση του Δούκα στάδιο α και β CRC (α) ή Δούκα στάδιο Γ και Δ CRC (β)

Η

Η AUC για την CEA στον ορό ως μια διάγνωση της ACA ήταν 0,459 (95% CI:. 0,370 έως 0,547, P . = 0,358? Σχήμα 2 Ab), και ως διάγνωση της CRC ήταν 0,695 (95% CI: 0,627 – 0,767, P = 0.000? Σχήμα 2 AD).. Η ευρέως αποδεκτή τιμή αποκοπής 5 μg /l για CEA ορός χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη, δεδομένου ότι η τιμή αποκοπής υπολογίζεται από την καμπύλη ROC ήταν 5.095 μg /L. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιώντας αυτήν την τιμή αποκοπής για τη διαφοροποίηση των ασθενών CRC και τους ελέγχους, την ευαισθησία, ειδικότητα, θετική και αρνητική προγνωστική αξία, και τα ποσοστά ακρίβειας βρέθηκαν να είναι 38,46%, 85,88%, 82,09%, 45,34% και 56,14%, αντίστοιχα. Έτσι, CEA σχετίστηκε με χαμηλότερα ποσοστά ευαισθησίας και ακρίβειας σε σύγκριση με κινινογόνο-1.

Οι παραπάνω πέντε παραμέτρους χρησιμοποιήθηκαν επίσης για την αξιολόγηση κινινογόνο-1 και ανίχνευση CEA για το στάδιο Α Δούκα και τους ασθενείς Β CRC. Για κινινογόνο-1, τα ποσοστά ήταν 70,13%, 65,88%, 65,06%, 70,88% και 67,90%, αντίστοιχα. Για CEA, τα ποσοστά ήταν 38.96%, 85.88%, 71.43%, 60,83% και 63,58%, αντίστοιχα. Εκτός από την εξειδίκευση και τις θετικές τιμές πρόβλεψης, οι τιμές των άλλων παραμέτρων που σχετίζονται με κινινογόνο-1 ήταν καλύτερες από εκείνες για το CEA (Εικ. 2 Βα). Όταν αναλύθηκαν στάδιο Γ και Δ CRC ασθενείς Duke, οι προαναφερθείσες πέντε παράμετροι για κινινογόνο-1 ήταν 72.73%, 65.88%, 62.34%, 75.68% και 68.87%, αντίστοιχα, και για το CEA, ήταν 34,85%, 85,88%, 65,71 %, 62,93% και 63,58%, αντίστοιχα. Παρόμοια με το στάδιο Α του Δούκα και οι ασθενείς Β CRC, οι παράμετροι για κινινογόνο-1, με την εξαίρεση της ειδικότητας και θετική προγνωστική αξίες, ήταν καλύτερες από εκείνες για το CEA (Εικ. 2 ββ). Επιπλέον, η ευαισθησία, η αρνητική προγνωστική αξία, και τα ποσοστά ακρίβειας βελτιώθηκαν όταν οι ασθενείς CRC είχε ένα θετικό αποτέλεσμα για κινινογόνο-1 ορού και /ή CEA στον ορό. Σε αντίθεση, τα ποσοστά ειδικότητα που σχετίζονται με αυτές τις θετικές εξετάσεις μειώθηκαν σημαντικά (Πίνακας 3).

Η

Έκφραση Επίπεδα κινινογόνο-1 στην κανονική του παχέος βλεννογόνο, ACA ιστοί και ιστοί CRC

κινινογόνο -1 μπορεί να ανιχνευθεί στο αίμα υπό φυσιολογικές συνθήκες. Ωστόσο, παραμένει ασαφές εάν υψηλότερα επίπεδα κινινογόνο-1 ανιχνεύθηκε στον ορό των ασθενών με ορθοκολικό όγκους προκύπτει από την ίδια την ορθοκολικού όγκου. Ως εκ τούτου, οι δοκιμασίες ανοσοϊστοχημείας πραγματοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί η έκφραση του κινινογόνο-1 σε ορθοκολικό ιστούς. Εξετάστηκαν συνολικά 75 κανονική του παχέος ιστούς βλεννογόνου, 77 ιστούς ACA, και 248 CRC ιστούς. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στην έκφραση των κινινογόνο-1 βρέθηκε ανάμεσα στους άνδρες σε σχέση με τις γυναίκες μεταξύ των τριών ομάδων (

P

& gt? 0,05). Επιπλέον, ανοσοαντιδραστικότητα για κινινογόνο-1 βρέθηκε στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων ACA και CRC (Σχ. 3 Α-C), και το επίπεδο έκφρασης της κινινογόνο-1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς CRC από ότι σε ιστούς ACA ή φυσιολογικό βλεννογόνο (48,39 %

vs

15,58%

vs

0%,

P

& lt?.. 0,05? Εικ. 3D)

Εκπρόσωπος ανοσοκηλιδώσεις των κινινογόνο-1. σε φυσιολογικό ορθοκολικό βλεννογόνο (Α), ACA ιστού (Β), και CRC ιστού (C). Τόσο επισκόπηση (20 ×) και μεγέθυνση (40 ×) Οι εικόνες που παρέχονται, με την τελευταία προϋπόθεση, όπως κουτιά και κύριο θέμα στην πάνω αριστερή γωνία του κάθε πάνελ. D: Ποσοτικοποίηση των κινινογόνο-1 επίπεδα στα έλεγχο, ομάδες ACA, και CRC. Ε: Επιβίωση καμπύλες για τον έλεγχο, ομάδες ACA, και CRC. Η μπλε γραμμή αντιπροσωπεύει CRC ασθενείς αρνητικοί για κινινογόνο-1 έκφρασης και την πράσινη γραμμή αντιπροσωπεύει CRC ασθενείς θετικοί για κινινογόνο-1 έκφρασης.

Η

Συσχέτιση κινινογόνο-1 έκφρασης με κλινικοπαθολογοανατομικές Χαρακτηριστικά του ACA και CRC Ασθενείς

οι συσχετίσεις μεταξύ των κυτταροπλασματικά επίπεδα κινινογόνο-1 και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά του ACA και οι ασθενείς CRC αναλύθηκαν ξεχωριστά. Ενώ κυτταροπλασματική συσσώρευση κινινογόνο-1 βρέθηκε να συσχετίζεται αρνητικά με ιστολογία ιστού σε ασθενείς ACA (

r

s

= -0,250, P = 0.029), δεν συσχετίζεται με τη θέση του όγκου, το μέγεθος του όγκου, ή βαθμού ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (όλα

P

& gt? 0,05, λεπτομέρειες στον πίνακα S2). Σε αντίθεση, κυτταροπλασματική συσσώρευση κινινογόνο-1 συσχετίζεται σημαντικά με το στάδιο και λεμφαδένων κατάσταση μετάσταση Δούκα για CRCs (

r

s

= 0,151, P = 0,018 και

r

s

= 0,128, Ρ = 0.045, αντίστοιχα). Ωστόσο, αυτό δεν συσχετίζονται με τη θέση του όγκου, το μέγεθος του όγκου, η διαφοροποίηση των κυττάρων του όγκου, ή μακρινή μετάσταση (όλα

P

& gt? 0,05, λεπτομέρειες στον πίνακα S3).

Ανάλυση Επιβίωσης

ασθενών CRC (n = 110) αναλύθηκαν περαιτέρω για να αξιολογήσει μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ κινινογόνο-1 ανοσολογική αντίδραση και την επιβίωση των ασθενών. Στο Σχήμα 3Ε, η καμπύλη επιβίωσης σύμφωνα με την κυτταροπλασματική κινινογόνο-1 επίπεδα δείχνεται. Ο μέσος χρόνος επιβίωσης για τους ασθενείς με αρνητικό CRC έναντι θετική έκφραση κινινογόνο-1 ήταν 45.21 ± 3,17 μήνες και 38,15 ± 3,07 μήνες αντίστοιχα. Έτσι, οι ασθενείς με αρνητική έκφραση κινινογόνο-1 είχε μια μεγαλύτερη περίοδο επιβίωσης από ό, τι τα άτομα με θετική έκφραση κινινογόνο-1, αν και η διαφορά δεν ήταν σημαντική (

P =

0.166).

Συζήτηση

Έλεγχος για αδενώματα και σε πρώιμα στάδια CRC έχει μειωθεί η επίπτωση και η θνησιμότητα για CRC στις ΗΠΑ κατά τις τελευταίες δεκαετίες [3]. Ωστόσο, οι τρέχουσες μέθοδοι ελέγχου δεν παρέχουν καλή ευαισθησία. Ως εκ τούτου, συνεχίζονται οι προσπάθειες πρέπει να κατευθύνονται προς την ανάπτυξη νέων διαγνωστικών ή διαλογής δείκτες ορού για CRC. Επιπλέον, οι πρόοδοι στην τεχνολογία πρωτεομικής έχουν διευκολύνει την ταυτοποίηση νέων βιολογικών δεικτών. Ειδικότερα, η τεχνολογία Clinprot έχει βρεθεί να παρέχει εξαιρετικά ακριβή και αναπαραγώγιμα αποτελέσματα, ένα καλό επίπεδο ευαισθησίας, και είναι συμβατή με μια μορφή υψηλής απόδοσης για την ταχεία ταυτοποίηση των πρωτεϊνών [21]. Κατά συνέπεια, πρωτεομική προφίλ για διάφορες ανθρώπινες ασθένειες έχουν ληφθεί χρησιμοποιώντας Clinprot μεθοδολογία [22] – [24]. Στην παρούσα μελέτη, το πρωτόκολλο Clinprot παρέχεται πρόβλεψη μοντέλα για CRC και ACA σε σχέση με υγιείς μάρτυρες, καθώς και μεταξύ ACA και CRC. Επιπλέον, οι ικανότητες αναγνώριση αυτών των μοντέλων ήταν 98,96%, 100,00%, και 100,00%, αντίστοιχα. Έτσι, κινινογόνο-1 ταυτοποιήθηκε ως πιθανό δείκτη του CRC και ACA, και τα αποτελέσματα αυτά επικυρώθηκαν με χρήση ELISA. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαιώνουν την ακρίβεια της τεχνολογίας Clinprot.

Συσσωρευμένα στοιχεία συνεχίζουν να καταδεικνύουν ένα ρόλο για κινινογόνο-1 στην καρκινογένεση [25]. Για παράδειγμα, έχουν σημαντικά μειωμένα επίπεδα κινινογόνο-1 έχουν ανιχνευθεί στα ούρα ασθενών με καρκίνο ωοθηκών σε σύγκριση με άτομα ελέγχου [26]. Προηγούμενες μελέτες απέδειξαν επίσης ότι κινινογόνο-1 εμφανίζει αντιαγγειογενετικές ιδιότητες και μεσολαβεί ανασταλτικές δράσεις επί του πολλαπλασιασμού των ενδοθηλιακών κυττάρων [27]. Επιπλέον, σε ασθενείς με καρκίνο, τα χαμηλότερα επίπεδα από κινινογόνο-1 έκφραση έχουν ανιχνευθεί σε δείγματα αίματος, και αυτά τα επίπεδα μπορούν να συμβάλλουν στην επιβίωση των καρκινικών κυττάρων που υπάρχουν [28]. Ωστόσο, ο ρόλος του κινινογόνο-1 στην καρκινογένεση, ειδικά στην CRC, έχει παραμείνει ασαφής. Στην παρούσα μελέτη, ο ορός κινινογόνο-1 επίπεδα σε ασθενείς με ACA ή CRC βρέθηκαν να είναι σημαντικά υψηλότερη σε σύγκριση με τους υγιείς ελέγχους. Είναι ευρέως αποδεκτό ότι η ACA είναι μια προκαρκινική βλάβη του CRC [29]. Έτσι, μια σημαντική αύξηση στον ορό κινινογόνο-1 επίπεδα σε αυτούς τους ασθενείς μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα δείκτη για την έγκαιρη ανίχνευση της CRC, και αυτό είναι συνεπές με τα αποτελέσματα των Qiu

et al.

[30]. Παρά το γεγονός ότι, σε μια μελέτη του κινινογόνο-1 έκφραση ανιχνεύθηκε σε 118 δείγματα πλάσματος που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο του γαστρεντερικού, σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα κινινογόνο-1 ανιχνεύθηκαν [31]. Ενώ αυτό είναι σε αντίθεση με τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης, η διαφορά αυτή μπορεί να οφείλεται σε διαφορές στο μέγεθος του δείγματος, τους πόρους του δείγματος, καθώς και τη μέθοδο ανίχνευσης που χρησιμοποιείται.

έχουν μετρήσεις των επιπέδων του CEA έχουν βρεθεί να είναι ακατάλληλες για πληθυσμός προβολές λόγω της έλλειψης ευαισθησίας αυτού του προσδιορισμού κατά τα πρώτα στάδια του CRC [32], [33]. Μια επιτροπή της Αμερικανικής Εταιρείας Κλινικής Ογκολογίας συνιστά επίσης κατά τη δοκιμή CEA για CRC ελέγχου [34]. Αντίστοιχα, οι προσδιορισμοί CEA πραγματοποιήθηκαν στην παρούσα μελέτη δεν έδειξε καμία διαγνωστική αξία για ACA (AUC = 0,453), καθώς επίσης και παρουσίασαν μικρότερη ευαισθησία (38.96%

vs.

70.13%) και την ακρίβεια (63.58%

έναντι

67,90%) για το στάδιο Α Δούκα και Β CRC, σε σύγκριση με κινινογόνο-1. Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι τα επίπεδα της κινινογόνο-1 παρακολούθηση ορού είναι πιο πολύτιμη από την ανίχνευση CEA σε πρώιμα στάδια της CRC. Επιπλέον, όταν και τα δύο επίπεδα ορού της κινινογόνο-1 και τα επίπεδα του CEA παρακολουθήθηκαν σε ασθενείς CRC, η ειδικότητα και θετική προγνωστική αξία αυτών των αποτελεσμάτων βελτιωθεί. Ως εκ τούτου, η ανίχνευση του κινινογόνο-1 σε συνδυασμό με άλλους δείκτες όγκου συνιστάται. Επιπλέον, εάν ένας ασθενής βρέθηκε να είναι θετικό για κινινογόνο-1 και CEA, αλλά αρνητικό για εμβρυϊκή πρωτεΐνη άλφα, τότε είναι δυνατόν αυτός /αυτή υποφέρει από CRC αντί καρκίνο του ήπατος. Περαιτέρω μελέτες θα χρειαστούν για να επιβεβαιώσουν αυτή την υπόθεση.

Σε CRC ασθενείς μετεγχειρητικά, τα επίπεδα της κινινογόνο-1 ορού ήταν χαμηλότερες από εκείνες της CRC ασθενείς προεγχειρητικά. Αν και παραμένει ασαφές γιατί αυτό παρατηρήθηκε, υποτίθεται ότι η αυξημένη παραγωγή κινινογόνο 1-προέρχεται από ιστούς όγκων. Αυτό υποστηρίζεται από τα αποτελέσματα που λαμβάνονται ανοσοϊστοχημεία η οποία έδειξε κινινογόνο-1 που συσσωρεύεται στο κυτταρόπλασμα του κύτταρα όγκου του ορθού. Ωστόσο, οι μηχανιστικές λεπτομέρειες αυτής της διαδικασίας παραμένουν ασαφείς. Επιπλέον, κυτταροπλασματική συσσώρευση κινινογόνο-1 συσχετίζεται σημαντικά με την κατάσταση μετάσταση λεμφαδένα σε ασθενείς με CRC. Ωστόσο, μια ανάλυση επιβίωσης των ασθενών CRC σύμφωνα με κινινογόνο-1 έκφραση βρέθηκε καμία σημαντική διαφορά μεταξύ των αρνητικών και θετικών ομάδα έκφραση κινινογόνο-1, δείχνοντας την αξία πρόγνωση του κινινογόνο-1 είναι περιορισμένη.

Για τις γνώσεις μας, αυτό είναι η πρώτη μελέτη που αναφέρουν τον εντοπισμό των κινινογόνο-1 σε ACA και CRC ασθενείς, με επικύρωση από ELISA και ανοσοϊστοχημεία. Με βάση αυτά τα αποτελέσματα, κινινογόνο-1 φαίνεται να είναι ένας πιθανός δείκτης CRC, η οποία μπορεί να είναι πολύτιμη για την πρώιμη ανίχνευση του CRC, ιδιαίτερα σε συνδυασμό με άλλα βιοδείκτες σε προβολές πληθυσμού CRC. Μια ανάλυση των επιπλέον ασθενείς, συμπεριλαμβανομένων τυποποιημένη επεξεργασία των δειγμάτων που λαμβάνονται, είναι αναγκαία για την επαλήθευση και την επέκταση των σημερινών αποτελεσμάτων. Επιπλέον, οι μηχανιστικές μελέτες κινινογόνο-1 σε όγκους παχέος εντέρου δικαιολογημένη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Τα κύρια κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των ασθενών που περιλαμβάνονται στις ομάδες ανακάλυψη και την επικύρωση

doi:. 10.1371 /journal.pone.0070519.s001

(DOC)

Πίνακας S2. .

Συσχέτιση μεταξύ κινινογόνο-1 έκφρασης και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών ACA

doi: 10.1371 /journal.pone.0070519.s002

(DOC)

Πίνακα S3. .

Συσχέτιση μεταξύ κινινογόνο-1 έκφρασης και των κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών CRC

doi: 10.1371 /journal.pone.0070519.s003

(DOC)

Υλικά S1.

ClinProt Peak Στατιστικά μεταξύ υγιών ελέγχου και ασθενείς ACA

doi:. 10.1371 /journal.pone.0070519.s004

(XLS)

Υλικά S2.

ClinProt Peak Στατιστικά μεταξύ υγιών ελέγχου και ασθενείς CRC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0070519.s005

(XLS)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω τους καθηγητές . Γυαλί Zhang και Yadong Wang, για τις προτάσεις τους σχετικά με την παθολογία.