Αφηρημένο

Ιστορικό

Υπό την καθοδήγηση και τη χορηγία του Εθνικού Ινστιτούτου για τον Καρκίνο, εμείς έκθεση σχετικά με την πρώτη προ-κλινική δοκιμή της κοινοπραξίας Δοκιμές Συγκριτική Ογκολογίας (COTC). Το COTC είναι μια νέα υποδομή για την ενσωμάτωση των καρκίνων που αναπτύσσονται φυσιολογικά στο κατοικίδιο ζώο τα σκυλιά στην πορεία της ανάπτυξης νέων ανθρώπινων φαρμάκων. Οι δοκιμές έχουν σχεδιαστεί για να απευθύνουν ερωτήσεις πρόκληση σε συμβατικά προκλινικά μοντέλα και ανθρώπινες δοκιμές πρώιμη φάση. Μεγάλο ζώο αυθόρμητη μοντέλα καρκίνου μπορεί να είναι μια πολύτιμη προσθήκη στην επιτυχημένη μελέτες της βιολογίας του καρκίνου και νέων θεραπευτικών φαρμάκων, την απεικόνιση και την ανάπτυξη της συσκευής.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Μέσω αυτής της πάγιας υποδομής, η πρώτη δίκη του COTC (COTC001) αξιολόγησε μια στοχευμένη φορέα AAV-φάγου παράδοση παράγοντα νέκρωσης όγκου (RGD-Α-

TNF

) να αν- ιντεγκρίνες στο ενδοθήλιο του όγκου. πρόοδο της δοκιμής και τα δεδομένα αναθεωρήθηκε ταυτόχρονα με τη χρήση ενός web-enabled σύστημα ηλεκτρονικής υποβολής εκθέσεων που αναπτύχθηκε για την κοινοπραξία. Κλιμάκωσης της δόσης σε ομάδες των 3 σκύλων (n = 24) προσδιορίζεται μια βέλτιστη ασφαλής δόση (5 × 10

12 μονάδες μεταγωγής ενδοφλέβια) της RGD-Α-

TNF

. Αυτό απέδειξε η επιλεκτική στόχευση των συνδεόμενη με όγκο αγγείωση και φειδωλή φυσιολογικών ιστών αξιολογήθηκε μέσω σειριακής βιοψίας τόσο όγκου και φυσιολογικού ιστού. Επαναλαμβανόμενες δοσολόγηση σε μία ομάδα από 14 σκύλους, κατά την καθορισμένη βέλτιστη δόση, ήταν καλά ανεκτή και οδήγησε σε αντικειμενικές υποχώρηση του όγκου σε δύο σκύλους (14%), σταθερή ασθένεια σε έξι (43%), και την εξέλιξη της νόσου σε έξι (43%) μέσω Κριτηρίων αξιολόγησης της Ανταπόκρισης σε συμπαγείς όγκους (RECIST).

Συμπεράσματα /Σημασία

Η πρώτη μελέτη του COTC κατέδειξε τη χρησιμότητα και την αποτελεσματικότητα της καθιερωμένης υποδομής να ενημερώσει την ανάπτυξη νέων φαρμάκων κατά του καρκίνου κατά μεγάλο ζώο φυσικά μοντέλα καρκίνου. Η προκλινική αξιολόγηση του RGD-Α-

TNF

μέσα σε αυτό το δίκτυο παρείχε πολύτιμη και τα απαραίτητα στοιχεία για την ολοκλήρωση του σχεδιασμού του πρώτου-in-άνθρωπος μελέτες

Παράθεση:. Paoloni MC, Tandle Α, Mazcko C, Hanna E, Kachala S, LeBlanc A, et al. (2009) Έναρξη λειτουργίας υποδομής Μυθιστόρημα Προκλινικά: Δοκιμές Συγκριτική Ογκολογία Κοινοπραξία Κατευθυνόμενη Θεραπευτική Στόχευση του TNFα με τον καρκίνο αγγειακό σύστημα. PLoS ONE 4 (3): e4972. doi: 10.1371 /journal.pone.0004972

Επιμέλεια: Alfred Lewin, Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10η Δεκεμβρίου του 2008? Αποδεκτές: 19 του Φεβρουαρίου 2009? Δημοσιεύθηκε: 30 Μάρτη του 2009

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της δήλωσης Creative Commons Public Domain που ορίζει ότι, μόλις τοποθετηθεί στο δημόσιο τομέα, το έργο αυτό μπορεί να ελεύθερα αναπαραχθεί, να διανεμηθεί, μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο σκοπό

Χρηματοδότηση:. θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε το Κέντρο Έρευνας για τον Καρκίνο, Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, ΝΙΗ για την υποστήριξή τους από αυτό το έργο. Η έρευνα αυτή κατέστη δυνατή εν μέρει από το εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα του Εθνικού Ινστιτούτου Υγείας, Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Κέντρο Έρευνας για τον Καρκίνο. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η τρέχουσα πορεία ανάπτυξης καρκίνου του φαρμάκου περιλαμβάνει ένα γραμμικό σχέδιο ανάπτυξης που θα περιλαμβάνει αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας σε μικρά ζώα και τις αξιολογήσεις της ασφάλειας σε μη-όγκου που φέρουν μεγάλα ζώα που οδηγούν στην πρώτη-in-man κλινικές δοκιμές. Για πολλούς λόγους η διαδικασία αυτή προκλινική ανάπτυξη έχει επικριθεί για την αδυναμία της να εντοπίσει τα φάρμακα που είναι πιο πιθανό να πετύχει στην ανθρώπινη κλινική. Για παράδειγμα, η χρήση ενός είδους (δηλαδή τα τρωκτικά) να καθορίσει την αποτελεσματικότητα και ένα δεύτερο είδος να καθορίσει την ασφάλεια (δηλαδή το σκύλο) αποκλείει εκτίμηση του θεραπευτικού δείκτη μέχρι ένας παράγοντας εισέρχεται πράγματι ανθρώπινες μελέτες πρώιμης φάσης. Η βιολογική πολυπλοκότητα και ετερογένεια του καρκίνου δεν αντιπροσωπεύεται επαρκώς από τους αριθμούς των μοντέλων τρωκτικών όγκων που χρησιμοποιούνται συνήθως σε προκλινικές έλεγχο αποτελεσματικότητας [1]. Πολύπλοκες σχέσεις μεταξύ της έκθεσης των ναρκωτικών και απαραίτητες βιολογικές αλλαγές στον ιστό του όγκου ή κυκλοφορούν χώρος δεν είναι εύκολο να διαμορφωθεί σε καρκίνους του ποντικού. Ως αποτέλεσμα, τα πολλά ερωτήματα που άφησε αναπάντητα πριν από την ανθρώπινη μελέτες πρώιμη φάση. Παρόμοια, αν όχι περισσότερο πιεστικές ερωτήσεις παραμένουν μετά την πρόωρη ανθρώπινες δοκιμές φάσης που μπορεί να περιορίσει σημαντικά τον βέλτιστο σχεδιασμό των ανθρώπινων μελετών μεταγενέστερη φάση.

Η αυθόρμητη καρκίνοι στο σύντροφο (pet) σκύλοι προσφέρουν μια μοναδική, και σε μεγάλο βαθμό ανεκμετάλλευτο μεταγραφική έρευνα ευκαιρία για απεικόνισης του καρκίνου, της συσκευής και την ανάπτυξη φαρμάκων [2], [3]. Αυτό το πεδίο της μελέτης, που είναι γνωστή ως συγκριτική ογκολογία, έχει μια μακρά ιστορία της προώθησης χειρουργικές τεχνικές, όπως είναι φειδωλοί άκρων για παιδιατρικούς ασθενείς που σάρκωμα, αποσαφήνιση υπερθερμία και ραδιοβιολογίας, και την αξιολόγηση νέων αντικαρκινικών παραγόντων και μηχανισμών διανομής, συμπεριλαμβανομένων των κυτοκινών όταν εισπνέεται και σε στρατηγικές χημειοθεραπεία [4], [5], [6], [7], [8], [9]. Τα χαρακτηριστικά και η χρήση των καρκίνων σε σκύλους κατοικίδιων ζώων που μπορεί να συμβάλει στην κατανόηση της παθογένειας του καρκίνου, της εξέλιξης και θεραπείας έχουν επίσης πρόσφατα αναθεωρηθεί [2]. Η ευκαιρία για την αξιολόγηση της έκθεσης των ναρκωτικών, την τοξικότητα και την αποτελεσματικότητα (θεραπευτικός δείκτης) σε ένα ενιαίο μεγάλο ζωικό μοντέλο είναι άκρως κατατοπιστική. Αυτοί οι καρκίνοι ανακεφαλαιώνουν μεγαλύτερη ακρίβεια την ετερογένεια και πολυπλοκότητα των ανθρώπινων κακοηθειών και ως αποτέλεσμα συνδέονται με τα προβλήματα της υποτροπής, την αντοχή και τη μετάσταση. Το μέγεθος του σκύλου και όγκων σε αυτά τα σκυλιά κάνουν εκτίμηση των διασυνδέσεων τελικά σημεία, όπως φαρμακοδυναμικές μεταβολές σε έναν όγκο ή δευτερογενή ιστό αρκετά εφικτό. Κατά συνέπεια, τα μοντέλα αυτά είναι καλά κατάλληλες για να ενσωματωθεί με τις υπάρχουσες μοντέλο προσεγγίσεις και τη βελτιστοποίηση της πορείας ανάπτυξης του φαρμάκου.

Για να επωφεληθούν από τις ευκαιρίες που παρέχονται από το μοντέλο σκυλιά κατοικίδιων ζώων που έχουν φυσικά ανέπτυξαν καρκίνο, το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου κέντρο Έρευνας για τον καρκίνο-Συγκριτική Ογκολογίας Πρόγραμμα (CCR-COP) ανέπτυξε πρόσφατα μια υποδομή που είναι σε θέση να πολυκεντρικές μελέτες σε εθνικό επίπεδο σε σκύλους που φέρουν όγκο με τη χρήση φαρμάκων κατά του καρκίνου που είναι υπό ανάπτυξη για ανθρώπους ασθενείς. Αναφέρονται ως οι δοκιμές Συγκριτική Ογκολογίας Consortium (COTC), αυτή η υποδομή περιλαμβάνει 18 state-of-the-art ακαδημαϊκή κτηνιατρική ογκολογικά κέντρα. COTC δοκιμές κεντρική διαχείριση και έχουν σχεδιαστεί για να περιλαμβάνει πολλαπλές παραμέτρους που καθορίζουν την ασφάλεια, βιολογικές και κλινική δραστηριότητα των νέων μέσων θεραπείας.

Η πρώτη ολοκληρωμένη μελέτη του COTC είναι ένα παράδειγμα μιας φαρμακοδυναμικά εστιασμένη μελέτη που διεξήχθη για την ενημέρωση, ακριβώς δίπλα αποφάσεις βήμα στην κλινική ανάπτυξη ενός αδενο-συνδεόμενου ιού φάγων [10], [11], [12] παράδοση του παράγοντα νέκρωσης όγκων-α (RGD-Α-

TNF

) να αν- ιντεγκρίνες σε όγκο και που σχετίζονται με όγκους αγγειακό ενδοθήλιο. Η ανάπτυξη των αντι-αγγειογόνου και αγγειακά στόχευσης παραγόντων υπήρξε πολύπλοκη και με δυσανάλογες αποτελέσματα από μελέτες σε ποντίκια που φέρουν όγκο και ανθρώπους ασθενείς με καρκίνο [13], [14]. Είναι λογικό ότι μερικές από τις ιδιότητες της προσέγγισης συγκριτικής ογκολογίας μπορεί να είναι ιδιαίτερα κατατοπιστική στην αξιολόγηση των δύο αντι-αγγειογόνοι παράγοντες και νέες μεθόδους διανομής γονιδίων [15]. Κατά συνέπεια, η πρώτη δίκη του COTC έχει αξιολογήσει αυτό το σύστημα συνδέτη άμεση παράδοση γονιδίου στόχευση [10], [11], [12], [16], [17], [18]. Μέσα από μια σταδιακή δοκιμή σχεδιασμού αποδείξαμε την ασφάλεια, τον όγκο επιλεκτική διακίνηση, και κατά του όγκου δραστικότητα του RGD-Α-

TNF

στα αιμοφόρα αγγεία του όγκου και στοχευμένη έκφραση του TNFα σε ένα σχετικό κλινικό περιβάλλον. Αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν μια ισχυρή προ-κλινικές μελέτες βάση για την πρώτη-in-man σε ασθενείς με καρκίνο του ανθρώπου. Σε ένα ευρύτερο πλαίσιο, η παρούσα έκθεση της πρώτης κλινικής δοκιμής από την COTC, δείχνει ότι το υφιστάμενο πληθυσμό των σκύλων με αυθόρμητες όγκους και αυτή την προηγμένη μελέτη των υποδομών κλινική μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα αποτελεσματικό ενδιάμεσο βήμα στη μετάφραση των νέων θεραπειών κατά του καρκίνου από την προ-κλινικές μοντέλα για τον άνθρωπο.

Αποτελέσματα

κλιμάκωσης της δόσης και τη φάση δοκιμής ασφαλείας μίας δόσης

Τροποποιημένο κανόνες Fibonacci της κλιμάκωσης της δόσης ακολουθήθηκαν μέσα σε πέντε ομάδες δόσης (n = 3) κάθε έλαβαν εφάπαξ χορήγηση RGD-Α-

TNF

(Σχήμα 1Α, Πίνακας 1). Όλοι οι σκύλοι υποβλήθηκαν σε βιοψία προεπεξεργασία των όγκων και των φυσιολογικών ιστών (Σχήμα 1Β). Σκυλιά στις αρχικές πέντε ομάδες (n = 18) έλαβαν RGD-Α-

TNF

ακολουθείται από οριστική χειρουργική εκτομή των όγκων τους τέσσερις ημέρες αργότερα (όγκου και τον έλεγχο φυσιολογικών ιστών συλλέχθηκαν μετά την αγωγή)? ένα πρόσθετο έκτη ομάδα (n = 6) έλαβαν RGD-Α-

TNF

και υποβλήθηκε σε οριστική χειρουργική επέμβαση την ίδια ημέρα (4-6 ώρες μετά την ενδοφλέβια χορήγηση) (Σχήμα 1Β). Κατά την εγγραφή στη μελέτη φάσης κλιμάκωσης της δόσης της μελέτης, υπήρχαν 9 σαρκώματα πρωτογενές οστό και 15 σαρκώματα μαλακών ιστών (στοματική κοιλότητα 3? Αξονική ή appendicular 12) (Πίνακας 1). Ηλικία (εύρος, 2,7 έως 14,1 χρόνια? Διάμεση τιμή 9,7 χρόνια), το βάρος (εύρος, 15 – 61,2 kg? Διάμεσος 34,4 kg) και η φυλή (11 μικτής φυλής και 13 καθαρόαιμων) από τα σκυλιά που τέθηκε αυτό το δοκιμαστικό στάδιο καταγράφηκαν

(Α) η μελέτη δομήθηκε ως κλιμάκωσης της δόσης χρησιμοποιώντας μια τροποποιημένη Fibonacci σχεδιασμό να κυβερνήσει η αύξηση της δόσης προς μια MTD. (Β) Τρεις σκύλοι εντάχθηκαν στην ομάδα αρχική δόση, και τρεις σκύλοι ανά ομάδα φοιτούσαν εκεί μετά για κάθε ένα από τα πέντε επίπεδα δόσης προγραμματιστεί. Τα σκυλιά ήταν προγραμματισμένο να λάβουν RGD-Α-

TNF

την ημέρα μηδέν και να υποβληθεί σε οριστική αφαίρεση του όγκου μετά από 4 ημέρες. Αυτή η αρχική ομάδα 4 ημερών σχεδιάστηκε (i) την αξιολόγηση φορέα εντοπισμό και την έκφραση του TNFa εντός των όγκων και (ii) για να βεβαιωθείτε ότι η δοκιμαστική παρακολούθηση χρονοδιαγράμματος των RGD-Α-

TNF

διοίκησης σε μία εβδομάδα διαστήματα μεταξύ των χορηγήσεων ήταν βιολογικά κατάλληλη. Μετά από μια ομάδα σκύλων (n = 18) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σύμφωνα με το χρονοδιάγραμμα αυτό, μια πρόσθετη ομάδα γράφτηκε από ισοδύναμα κριτήρια ένταξης για να λάβετε RGD-Α-

TNF

την ίδια ημέρα της οριστικής χειρουργική εκτομή. Σε αυτό το υποσύνολο των σκύλων (η = 6), χειρουργική επέμβαση διεξήχθη 4-6 ώρες μετά τη χορήγηση του RGD-Α-

TNF,

αυτό αυθημερόν πειραματική υποσύνολο σχεδιάστηκε για να καθοριστεί η οξεία εκλεκτικότητα του RGD-A –

TNF

εμπορίας ανθρώπων και του όγκου του αγγειακού εντοπισμό του

η

Όλα τα δεδομένα που αναφέρθηκαν από ταυτόχρονη ηλεκτρονική υποβολή αναφορών έτσι ώστε οι ανεπιθύμητες ενέργειες ήταν ομοιόμορφα παρακολουθούνται και να αντιμετωπίζονται μέσα σε αυτό το πολυ-κέντρο COTC. δίκη του σχεδιασμού. Single-δόσεις των RGD-Α-

TNF

ήταν ως επί το πλείστον καλά ανεκτή σε όλες τις ομάδες δόσης κλιμάκωση προγραμματιστεί για αυτή τη φάση της μελέτης. Η μόνη σημαντική ανεπιθύμητη ενέργεια που παρατηρείται κατά τη διάρκεια της ενδοφλέβιας έγχυσης του RGD-Α-

TNF

στην υψηλότερη δόση κοόρτης (10

13 TU), όπου σημειώθηκε μία μόνο περιοριστική της δόσης τοξικότητα (DLT) ( Dog # 1,18? βαθμού 3 αντίδραση υπερευαισθησίας)? αυτό το γεγονός (ναυτία, ταχυκαρδία και υπόταση) ήταν παροδικές και υποχώρησαν με ελάχιστη υποστηρικτική φροντίδα. Τρεις επιπλέον σκύλοι τέθηκε σε αυτό ομάδα δόσης χωρίς περαιτέρω τοξικότητα που παρατηρήθηκε. Αριθ μέγιστη ανεκτή δόση (MTD) επετεύχθη επειδή η υψηλότερη δόση που δεν κατάφερε να οδηγήσουν σε οποιαδήποτε τοξικότητες που περιορίζουν τη δόση. Δεν υπήρχαν κλινικά σημαντικές νευρολογικές, καρδιακές, αναπνευστικές, γαστρεντερική, νεφρική, ή τοξικότητα αιματολογικές που σχετίζονται με τη θεραπεία των σκύλων που εγγράφονται στην παρούσα φάση της μελέτης. Επιπλέον, δεν υπήρχαν καθυστερήσεις στην επούλωση των πληγών (χειρουργική τομή) ανιχνεύεται ή εμπύρετα επεισόδια που σχετίζονται με την ενιαία-δόσεις των RGD-Α-

TNF

Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι το RGD-Α-

TNF

ήταν ασφαλής μετά από ενδοφλέβια χορήγηση μιας μόνο δόσης της RGD-Α-

TNF

έως 10

13 TU. Δεδομένου ότι δεν MTD επιτεύχθηκε, είναι πιθανό ότι οι υψηλότερες εφάπαξ δόσεις RGD-Α-

TNF

μπορεί επίσης να χορηγηθεί με ασφάλεια.

Η εμπορία στην αγγειακό ενδοθήλιο του όγκου και στοχευμένη παράδοση ΤΝΡα

για να προσδιορίσετε αν RGD-Α-

TNF

διακινείται σε όγκο σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς, αναλύσαμε προ-επεξεργασίας και μετά τη θεραπεία (μετά από 4-6 ώρες και μετά από 4 ημέρες) βιοψίες των όγκων και φυσιολογικών ιστών ( δηλαδή, του βλεννογόνου του στόματος, του δέρματος, των μυών και) μετά από εφάπαξ δόση RGD-Α-

TNF από

dual-χρώμα ανοσοφθορισμού (IF) χρώση για φάγων (Σχ. 2Α, Β). Το πρότυπο χρώσης όλων των δειγμάτων βιοψίας βαθμολογήθηκαν ως θετικά ή αρνητικά όπως περιγράφεται (Μέθοδοι). Clear συν-εντοπισμό του RGD-Α-

TNF

σωματίδια παρατηρήθηκαν μόνο εντός αγγειακό ενδοθήλιο του όγκου σε βιοψίες όγκων, αλλά όχι στα αιμοφόρα αγγεία των φυσιολογικών ιστών, ήδη από 4 έως 6 ώρες μετά την αγωγή (Σχ . 2Α) και σε 4 ημέρες μετά την αγωγή (Σχ. 2Β). Η εξειδίκευση της δοκιμασίας IF υποστηρίχθηκε από την έλλειψη χρώσης παρατηρήθηκε στις βιοψίες προ-επεξεργασίας σε οποιαδήποτε σκύλους (Σχ. 2Α, Β). Δευτερευόντως, δεν υπήρχε κύτταρο όγκου RGD-Α-

TNF

χρώση εμφανής, μόνο του όγκου αγγειακό ενδοθήλιο χρώση. Παρατηρήσαμε ετερογενή RGD-Α-

TNF

χρώσης σε διαφορετικά τμήματα από το ίδιο βιοψία όγκου και σε διαφορετικές βιοψίες εντός των ίδιων όγκων. Αυτό αντανακλά την ετερογένεια της αγγείωσης του όγκου βιολογίας στο αυθόρμητο καρκίνο που οδήγησε στην διαφορική απορρόφηση των RGD-Α-

TNF

σε ιστούς όγκων. Συνεπής διακίνηση των RGD-Α-

TNF

στα αιμοφόρα αγγεία του όγκου παρατηρήθηκε και στις δύο ομάδες που έλαβαν τις υψηλότερες δόσεις? Συγκεκριμένα, δύο από τους τρεις σκύλους (67%) στην ομάδα που έλαβε 5 × 10

12 TU και πέντε από τα έξι σκυλιά (83%) στην ομάδα που έλαβε 1 × 10

13 TU. Δεν υπήρχε καμία εμφανής συσχέτιση μεταξύ ιστολογία του όγκου και την αγγειακή στόχευση όγκων.

(Α, Β) RGD-Α-

TNF

επιλεκτικά στοχοθετημένες αγγείωση που σχετίζεται με όγκο (βέλη) και ήταν απούσα από τους φυσιολογικούς ιστούς σε 4-6 ώρες (Α) και σε 4 ημέρες (Β). Μεγέθυνση, 400-φορές? κλίμακα bar, 100 μΜ. βιοψίες προ-θεραπεία όγκου, βιοψίες όγκων μετά τη θεραπεία, και μετά την αγωγή των φυσιολογικών ιστών σε σκύλους που έλαβαν εφάπαξ δόση του RGD-Α-

TNF

διπλό βάφονται με ένα ειδικό αντίσωμα αντι-CD31 συν ένα αντι-βακτηριοφάγου ειδικού αντισώματος. Η ανίχνευση πραγματοποιήθηκε με Alexa Fluor 488 (πράσινο, τα αιμοφόρα αγγεία), Alexa Fluor 594 (κόκκινο, AAVP) και DAPI (μπλε, πυρήνες κυττάρων). (Γ) βιοψίες όγκων Προ-επεξεργασία (ημέρα 0), μετά την αγωγή βιοψίες κανονικό (ημέρα 4) και βιοψίες όγκων μετά την αγωγή (ημέρα 4) χρησιμοποιήθηκαν για την εξαγωγή του ολικού RNA. RT-PCR πραγματοποιήθηκε για τη μέτρηση των επιπέδων μεταγραφής του ανθρώπινου ΤΝΡα εις τετραπλούν. Ο Υ-άξονας αντιπροσωπεύει τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του TNFa σε μετα-κατεργασία κανονικές βιοψίες και βιοψίες όγκων μετά τη θεραπεία σε σύγκριση με βιοψίες όγκων προεπεξεργασία μετά από κανονικοποίηση προς την έκφραση GAPDH (Kruskal-Wallis Test, ρ = 0.0107). Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσοι όροι ± τυπικές αποκλίσεις. (D-F) Παρουσία RGD-Α-

TNF

αξιολογήθηκε σε μετά την αγωγή (ημέρα 28) νεκροψίας δείγματα όγκου (D) και φυσιολογικούς ιστούς (E, F). Οι ιστοί χρωματίσθηκαν για RGD-Α-

TNF

όπως περιγράφηκε προηγουμένως. RGD-Α-

TNF

επιλεκτικά στοχοθετημένες συνδεόμενη με όγκο αγγείωση σε δείγματα όγκων μετά τη θεραπεία (βέλη). Σε αντίθεση, ο φορέας δεν ήταν εμφανής σε δείγματα όγκων προεπεξεργασίας ή στην μετα-θεραπεία φυσιολογικά δείγματα νεκροψία ελέγχου (όπως πνεύμονα, ήπαρ, σπλήνα ή του εντέρου) μετά από σειριακή διοικήσεων των RGD-Α-

TNF

.

η

αφού διαπίστωσε ότι RGD-Α-

TNF

εντοπίζεται κατά προτίμηση εντός του όγκου του αγγειακού ενδοθηλίου μετά από συστηματική χορήγηση, είμαστε δίπλα αξιολογηθεί κατά πόσον φορέας εντοπισμού θα μπορούσε να οδηγήσει σε στοχευμένες έκφραση του γονιδίου TNFa. Τρία από τα τέσσερα σκυλιά δοκιμάζονται για την έκφραση του γονιδίου ΗΤΝΡα έδειξαν σημαντικά αυξημένα επίπεδα του ΗΤΝΡα σε βιοψίες όγκων μετά την αγωγή (ημέρα 4) σε σύγκριση με βιοψίες όγκων προεπεξεργασίας (Kruskal-Wallis test ρ = 0.0107) μετά από μια μονή δόση του RGD- Α-

TNF

(Σχ. 2C). Αντιθέτως, βιοψίες μετά τη θεραπεία των φυσιολογικών ιστών δεν έδειξε ανιχνεύσιμη αύξηση στα επίπεδα του ΗΤΝΡα σε σύγκριση με προ-αγωγή βιοψίες όγκων (Kruskal-Wallis τεστ, ρ & gt? 0,05).

φάση πολλαπλών δόσεων σπουδών

Στη φάση πολλαπλών δόσεων της μελέτης, η ομάδα των σκύλων (n = 18) ήταν εγγεγραμμένοι και σειριακά αντιμετωπίζονται με σταθερή συστηματική δόσεις (5 × 10

12 TU ανά εβδομάδα) της RGD-Α-

TNF

(Σχήμα 3). βιοψίες όγκου ελήφθησαν προ της θεραπείας (ημέρα θεωρείται μηδέν) και τις ημέρες 7, 28 και 56 μετά την αγωγή (Σχήμα 3). Κατά την εγγραφή στη φάση πολλαπλών δόσεων της μελέτης, παθολογικές τύπους όγκων (Πίνακας 2) περιλαμβάνεται σαρκώματα μαλακών ιστών (n = 8), τα κακοήθη μελανώματα (n = 5), οστεοσάρκωμα (n = 1), multilobular οστεοχονδροσάρκωμα (n = 1 ), hemangiosarcoma (n = 1), λέμφωμα (n = 1), και το καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (n = 1). Όλες οι όγκοι βρίσκονται σε περιφερειακές περιοχές που ήταν προσιτή σε βιοψία? Ωστόσο, η ταυτόχρονη μεταστατική νόσο υπήρχε σε δύο σκύλους. Ηλικία (εύρος, 6 έως 14,8 χρόνια? Διάμεση τιμή 10,2 χρόνια), το βάρος (εύρος, 11-55 κιλά? Διάμεσος 33,3 kg) και η φυλή (7 μικτής φυλής και 11 καθαρόαιμων) από τα σκυλιά που τέθηκε αυτό το δοκιμαστικό στάδιο καταγράφηκαν (Πίνακας 2).

Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε ως μία ανοικτή, μελέτη πολλαπλών σταθερής δόσης (i) για τη δημιουργία σκοπιμότητας και (ii) για την αναγνώριση της χρόνιας ή /και αθροιστική τοξικότητα των επαναληπτικών χορηγείται RGD-Α-

TNF

. Σκύλοι έλαβαν εβδομαδιαίες δόσεις (5 × 10

12 TU ενδοφλεβίως) της RGD-Α-

TNF

. Αντικαρκινική δράση αυτού του παράγοντα εκτιμήθηκε με τη χρήση κριτηρίων RECIST. Η θεραπεία έλαβε πληθυσμός περιλάμβανε σκύλους που έλαβαν τουλάχιστον τέσσερις εβδομαδιαίες δόσεις (δηλαδή, ένας κύκλος 1). Ο πληθυσμός αυτός αποτελείται από 14 σκυλιά. Τα σκυλιά είχαν τη δυνατότητα να λάβουν πρόσθετη θεραπεία σε επόμενους κύκλους εάν υπάρχουν αποδεικτικά στοιχεία, είτε σταθερή νόσος ή ανταπόκριση του όγκου. μετρήσεις του όγκου καταγράφηκαν κάθε δύο εβδομάδες με πλήρη αναβίωση κάθε 28 ημέρες

Η

Serial, πολλαπλές σταθερές δόσεις (συνολικά 78,25 δόσεις?. σημαίνουν 4.34 δόσεις /σκύλο? φάσμα, 1-8 δόσεις /σκύλος) χορηγήθηκαν. Δεκατέσσερις σκύλοι σε αυτήν την ομάδα (78%) ολοκληρώνεται τουλάχιστον ένα πλήρη κύκλο (που ορίζεται ως τέσσερις εβδομαδιαίες δόσεις) της θεραπείας και συμπεριλήφθηκαν στη θεραπεία έλαβε πληθυσμός για την αξιολόγηση της ανταπόκρισης του όγκου. Ο θάνατος οφείλεται στην εξέλιξη της νόσου (n = 2) ή ανάκληση μελέτη από αίτημα του ιδιοκτήτη (n = 2), ήταν η πιο κοινή αιτία για τα σκυλιά να αποτύχει ολοκλήρωση του κύκλου θεραπείας 1. Τρεις από 14 σκύλους (21%) συμπλήρωσαν ένα δεύτερο πλήρη κύκλο ( δηλαδή, οκτώ εβδομαδιαίες δόσεις) της αγωγής.

Παρόμοια με την φάση κλιμάκωσης της δόσης της μελέτης, όλα τα δεδομένα αναφέρθηκαν με ηλεκτρονικά μέσα στο μορφή αυτού COTC πολυκεντρική δοκιμή σχεδιασμού. Επιπλέον, οι ίδιες αξιολόγησης, απεικόνισης και εργαστηριακές μελέτες κλινικής ελήφθησαν πριν και μετά τη χορήγηση κάθε εβδομαδιαίας δόσης της RGD-Α-

TNF.

Σε σκύλους που έλαβαν επαναλαμβανόμενες εβδομαδιαίες δόσεις, η πιο κοινή τοξικότητα (n = 9) ήταν βαθμού 3 αντίδραση υπερευαισθησίας κατά τη διάρκεια της ενδοφλέβιας χορήγησης? έξι σκύλους από 14 (42%) είχαν περισσότερες από μια κλινικές επεισόδιο (δηλαδή, έμετος, υπόταση, ταχυκαρδία και) τα οποία δεν εμποδίστηκε από την προ-φάρμακα (φαμοτιδίνη, διφαινυδραμίνη και δεξαμεθαζόνη). Ωστόσο, όλες αυτές οι ανεπιθύμητες ενέργειες ήταν παροδικές και υποχώρησε μετά την προσωρινή παύση (& lt? 30 min) της διοίκησης και ελάχιστη υποστηρικτική φροντίδα, μετά την οποία συνεχίστηκε η πιο αργή ενδοφλέβια ρυθμός έγχυσης (100 ml /ώρα) χωρίς περαιτέρω επιπλοκές. Δεν υπήρχαν εμφανείς μακροπρόθεσμες κλινικές επιπτώσεις σε αυτά τα γεγονότα. Βαθμού 3 ή 4 μη ουδετεροπενικούς πυρετό σημειώθηκε σε πέντε σκύλους (36%) στη μελέτη (τρεις σημειωθεί κατά τη διάρκεια της έγχυσης και δύο ημέρες μη χορήγηση). Όλα τα επεισόδια πυρετό επιλυθεί με συμπτωματική φροντίδα. Μία περίπτωση (Dog # 2.2) παρουσιάζονται με βαθμού 3 νέκρωση (ανοικτή πληγή και παροχέτευση στη θέση του όγκου) στις ημέρες θεραπείας 19? Αυτή η ίδια σκύλος είχε μείωση 18% του μεγέθους του όγκου κατά τον χρόνο (που ορίζεται από RECIST ως σταθερή νόσος). Υπήρχαν τρεις άλλες εκδηλώσεις με άγνωστη απόδοση, συμπεριλαμβανομένης μιας δερματική αντίδραση βαθμού 2 συνδέονται με demodectic ψώρας (Demodex

canis

), ένας βαθμός 1 κοιλιακή αρρυθμία, και για πρώτη περίπτωση θανάτου από άγνωστη αιτία δύο ημέρες μετά την πέμπτη δόση του RGD-Α-

TNF

. Στην περίπτωση της πρώτης εκδήλωσης-θανάτου, δεν ανεπιθύμητες ενέργειες παρατηρήθηκαν (Dog # 2.14) κατά τη διάρκεια της εβδομάδας πριν από την εκδήλωση αυτή. Πρώτη περίπτωση θανάτου σε σκύλους με προχωρημένο καρκίνο (όχι αντίθετα ανθρώπινες δοκιμές πρώιμη φάση) δεν είναι ασυνήθιστο και μπορεί να σχετίζεται με την εξέλιξη της νόσου, ιδιαίτερα όταν παρατηρούνται ως μεμονωμένα συμβάντα. Δεν υπάρχουν άλλες σημαντικές ανεπιθύμητες ενέργειες, συμπεριλαμβανομένης της κλινικής ή εργαστηριακής αναφορές νευρολογικών, καρδιακή, αναπνευστική, γαστρεντερική, νεφρική ή αιματολογική τοξικότητα που σχετίζονται με σειριακή επεξεργασία με RGD-Α-

TNF

παρατηρήθηκαν. Τρεις σκύλοι από 14 (21%) υποβλήθηκαν σε ευθανασία εξαιτίας προοδευτική ασθένεια και υποβλήθηκε ταχεία (ζεστό) νεκροψία? παθολογική αξιολόγηση των σπλαγχνικών οργάνων (εγκέφαλος, καρδιά, πνεύμονες, ήπαρ, σπλήνα, του γαστρεντερικού σωλήνα, των νεφρών, και λεμφαδένες) δεν εντοπιστούν τυχόν ανωμαλίες ιστολογική σχετίζονται με τη θεραπεία σε αυτά τα όργανα? δεδομένα που υποστηρίζουν τη σχετική ασφάλεια και όγκων στόχευση των RGD-Α-

TNF

. Σε επιλεγμένες περιπτώσεις ζεστή νεκροψία (n = 2), δίχρωμη IF έγινε και όγκου-ειδικά διακίνηση των RGD-Α-

TNF

παρατηρήθηκε (Σχήμα 2D.)? καμία RGD-Α-

TNF

ανιχνεύθηκε σε κανονικούς ιστούς εξετάστηκε (πνεύμονα, ήπαρ, σπλήνα, και του γαστρεντερικού σωλήνα) (Σχ. 2Ε, F).

σχετιζόμενη με τη θεραπεία αντικειμενική ανταπόκριση

στη θεραπεία έλαβε πληθυσμό 14 σκύλων, χρησιμοποιήσαμε μετρήσεις σειριακό όγκου για να προσδιοριστεί η δραστικότητα του RGD-Α-

TNF

σύμφωνα με τα Κριτήρια αξιολόγησης απόκρισης σε συμπαγείς όγκους (RECIST) (Πίνακας 2 ). Και πάλι, τα τέσσερα σκυλιά που απέτυχε να ολοκληρώσει έναν κύκλο (4 εβδομάδες) θεραπείας αποκλείστηκαν για την αξιολόγηση της ανταπόκρισης. Αξιολογήσιμο σκύλους περιλαμβάνουν εκείνες με όγκους που δεν επιδέχονται χειρουργική εκτομή, όγκων για τους οποίους προηγούμενη θεραπεία είχε αποτύχει, και οι όγκοι στα οποία απορρίφθηκε θεραπεία πρότυπο-of-care. Δύο ζώα (σκύλοι # 2,11 και 2,16 #) είχαν RECIST καθορισμένη μερική ανταπόκριση (PR) (14%? 95% διάστημα εμπιστοσύνης 2-43%), ένα κάθε ημέρα 28 και η άλλη σε 56 ημέρες (Πίνακας 2). Έξι σκύλοι είχαν σταθερή νόσο (SD) (43%? 95% διάστημα εμπιστοσύνης 18-71%) που περιλαμβάνει ένα σκυλί με μια μείωση 18% του μεγέθους του όγκου, και τους έξι σκύλους είχαν εξέλιξη της νόσου (PD) (43%? 95% διάστημα εμπιστοσύνης 18-71%) μετά από ένα κύκλο της θεραπείας. Μετά από δύο κύκλους θεραπείας, δύο από τους σκύλους με προηγουμένως ορίστηκε σταθερή νόσο κατά την Ημέρα 28 προοδεύσει (Πίνακας 2). Η περίπτωση ενός σημειώνονται κλινικής PR απεικονίζεται να απεικονίσουν το μέγεθος του σειριακού θεραπευτικό αποτέλεσμα των RGD-Α-

TNF

σε ένα σκύλο που παρουσιάζει με ένα μεγάλο σάρκωμα μαλακών μορίων (Εικ. 4). Αυτό το σκυλί (# 2.11) είχαν επιτύχει μια μείωση ≥85% σε ό, τι είχε προηγουμένως ανεγχείρητο νόσο. Μετά από αυτή την απάντηση μια & lt? 2 εκατοστά υπολειμματική βλάβη έγινε εκτομή με αποτέλεσμα μια παθολογική κριτική αποκαλύπτοντας καμία βιώσιμη όγκου. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν τις προηγούμενες μελέτες που αξιολογούν την ασφάλεια και τη δραστηριότητα αυτής της στρατηγικής σε μοντέλα τρωκτικών που φέρει όγκο [10], [19].

Ένα μεγάλο πρωτογενές σάρκωμα μαλακών μορίων στο πλευρό των σκυλιών # 2.11 φαίνεται να διαθέτουν το δυναμικό μέγεθος της απόκρισης του όγκου. Πριν από την θεραπεία (ημέρα 0), ο όγκος μετράται 12,3 εκατοστά σε διάμετρο μεγαλύτερη. Την ημέρα 28, μετά από 4 εβδομαδιαίες εγχύσεις του RGD-Α-

TNF

, ο όγκος μετράται 8,2 εκατοστά σε διάμετρο μεγαλύτερη (33% παλινδρόμηση) και RECIST που βασίζεται μερική ανταπόκριση (PR). Την ημέρα 56, μετά από ένα σύνολο 8 εβδομαδιαίες εγχύσεις του συστημικού RGD-Α-

TNF

, ο όγκος μετράται 1,85 εκατοστά σε διάμετρο μεγαλύτερη πριν από την εκτομή. Ως εκ τούτου, η απάντηση αυτή εξισώνεται σε μια υποχώρηση 85% από την αρχική τιμή και συνέχισε την κλινική PR. Μετά την χειρουργική εκτομή της υπολειμματικής βλάβης, δεν υπάρχει βιώσιμη όγκου βρέθηκε και μια παθολογική πλήρης απόκριση προσδιορίστηκε.

Η

RGD-Α-

TNF

κατευθύνεται ανοσολογική απόκριση σε θεραπεία σκύλων

Αναλύσαμε προεπεξεργασίας και δείγματα ορού μετά τη θεραπεία από εφάπαξ δόση και το σειριακό τα σκυλιά μελέτη πολλαπλών δόσεων για τη μέτρηση της αντι-AAVP αντισώματα. Συλλογικά, παρατηρήσαμε 1,8 έως 2,0 φορές μεγαλύτερο τίτλοι αντι-AAVP αντίσωμα μετά τη θεραπεία σε σύγκριση με τα επίπεδα προ της θεραπείας. Ωστόσο, δεν παρατηρήσαμε περαιτέρω αυξήσεις των αντι-AAVP αντισώματα πάροδο του χρόνου στις σειριακές πολλαπλών δόσεων θεραπεία σκύλων (Ημέρα 7 εναντίον Ημέρα 28 εναντίον Ημέρα 56).

Συζήτηση

Η ευκαιρία να ενσωματωθούν οι καρκίνοι που αναπτύσσονται φυσιολογικά στο κατοικίδιο σκυλιά μέσα στο μονοπάτι της ανάπτυξης ενός νέου φαρμάκου ανθρώπινα καρκινικά περαιτέρω πραγματοποιούνται κατευθείαν στον εναρκτήρια μελέτη του COTC. Στην έκθεση αυτή, περιγράφουμε μια στοχευμένη παράδοση του TNFα με AAVP σύστημα απελευθέρωσης γονιδίου σε αιμοφόρα αγγεία του όγκου των κατοικίδιων σκύλων με αυθόρμητο καρκίνο. Επιλεκτική παλιννόστησης AAVP, σχετίζονται με τον όγκο αγγειακό έκφραση του TNFa, συστημικής ασφάλειας, και αντικειμενικές αποκρίσεις RECIST που βασίζεται παρατηρήθηκαν (ίδιο είδος θεραπευτικός δείκτης). Αυτά τα μεγάλα ζωικά μοντέλα αυθόρμητης καρκίνου είναι κατάλληλη για να ενημερώσει προ-κλινικά στην κλινική μεταβάσεις είναι απαραίτητες για την επιτυχή ανάπτυξη φαρμάκων και να συγχαρώ τη χρήση και των δύο υπάρχοντα μοντέλα τρωκτικών και κλινικές δοκιμές σε ανθρώπους.

Η COTC είναι ένα ενεργό δίκτυο ακαδημαϊκών συγκριτική ογκολογικά κέντρα, την κεντρική διαχείριση της συγκριτικής Ογκολογίας Πρόγραμμα του ΝΚΜ. Τα σχέδια COTC και υλοποιεί κλινικές δοκιμές σε σκύλους με καρκίνο με στόχο την παροχή των απαραίτητων στοιχείων για μεταγραφική νέες θεραπείες, τεχνικές ή συσκευές για τη μελλοντική τους ασθενείς με καρκίνο. Οι δοκιμές εκτελούνται σε ιδρύματα-μέλη COTC, οι οποίες περιλαμβάνουν σήμερα δεκαοκτώ κτηνιατρικά νοσοκομεία διδασκαλίας σε όλη την Ηνωμένες Πολιτείες. Όπως περιγράφεται παραπάνω, οι δοκιμές που πραγματοποιούνται από την COTC μπορεί να περιλαμβάνει αρκετές βιολογικές και κλινικά τελικά σημεία που μπορούν να ενσωματωθούν άμεσα στο σχεδιασμό των ανθρώπινων Φάσης Ι και II κλινικών δοκιμών. Παρά το γεγονός ότι δεν περιλαμβάνονται στη μελέτη που παρουσιάζεται εδώ, με αλληλένδετες στρατηγικές απεικόνισης, όπως η PET /CT ή MRI δυναμική, με την ικανότητα να συνδέουν αυτές τις παραμέτρους απεικόνισης σε όγκο ή κυκλοφορούν βιολογικά υποκατάστατα είναι εφικτές μέσω της σχεδιασμένης υποδομής. Τέτοια σύνθετα διασυνδέσεων μελέτες μπορεί να ελεγχθεί σε μια κλινικά σχετική ρύθμιση μέσω μελετών COTC, και αυτό παρέχει ένα μοντέλο για να αξιολογήσει όλα τα μέρη αυτής της διαδικασίας συμπεριλαμβανομένων των προτύπων συλλογής των ιστών και των τεχνικών, το χρονοδιάγραμμα της απεικόνισης και βιοψία, και μεθοδολογίες ανάλυσης πριν από ανθρώπινες μελέτες πρώιμη φάση .

στην παρούσα μελέτη, COTC001, αξιολογήσαμε τη ρευστότητα και τη δομή αυτού του μυθιστορήματος προκλινικών υποδομής. Κατά τη διαδικασία αυτή, ορίσαμε την ασφάλεια και την αποτελεσματικότητα των RGD-Α-

TNF

στόχευση στο ενδοθήλιο όγκων σε σκυλιά με αυθόρμητο καρκίνο. RGD στοχευμένη παράδοση σε όγκο αν- ιντεγκρίνες έχει περιγραφεί προηγουμένως [20], [21] και αυτό αναμενόμενη στόχευση ήταν η βάση του RGD-Α-

TNF

ανάπτυξη φορέα [11], [19], [22 ]. Στην προηγουμένως δημοσιευμένο έργο σε μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού, περιγράψαμε στοχευμένη συστημική απελευθέρωση του RGD-Α

VVP

φορείς που εκφράζουν είτε HSVtk ή ΤΝΡ-α, για αγγείωση όγκου [12], [22], [23], [ ,,,0],24]. Αντικαρκινική δράση έχει παρατηρηθεί σε σάρκωμα Kaposi, καρκίνωμα της ουροδόχου κύστεως, καρκίνωμα του προστάτη και μελάνωμα [12], [22]. Παρά το γεγονός ότι, η δραστικότητα του RGD-Α-

TNF

έχει επιδειχθεί σε παραδοσιακά μικρά μοντέλα ζώων, η προσέγγιση συγκριτικό ογκολογία παρέχονται μοναδικές πληροφορίες σχετικά με την ασφάλεια του RGD-Α-

TNF

που δεν θα έχουν ήταν δυνατόν σε συμβατικές μελέτες ασφάλειας των ζώων. Δεδομένου ότι ούτε όγκο ούτε αγγείωση των όγκων υπάρχουν σε υγιή ζώα (δηλαδή σκοπός φυλής έρευνα σκυλιά), η αξιολόγηση της ασφάλειας σε αυτά τα ζώα θα ήταν πιθανόν να υπο-έκθεση ανεπιθύμητες ενέργειες που σχετίζονται με RGD-Α-

TNF.

Συνδέονται με τα ναρκωτικά συμβάντα που αναφέρθηκαν στον πληθυσμό μας σκύλων συντροφιάς που φέρει τον όγκο ήταν πράγματι γενικά ήπια και αυτοπεριοριζόμενη. Στην πραγματικότητα, μια MTD δεν επιτεύχθηκε στις ομάδες απλής δόσης αξιολογήθηκε στη δόση-κλιμάκωση ως αύξηση της δόσης του RGD-Α-

TNF

περιορίστηκε από διαδικασία κατασκευής. Οι περισσότερες ανεπιθύμητες ενέργειες που καταγράφηκαν είχαν δει είτε κατά τη διάρκεια της χορήγησης ή εντός 2 ωρών από τη χορήγηση σε σκύλους που είχαν λάβει πολλαπλές δόσεις των RGD-Α-

TNF.

Διοίκησης που σχετίζονται με συμβάντα συμπεριλαμβανομένων των αντιδράσεων υπερευαισθησίας, όπως και πυρετό. Δεδομένης της ανά-οξεία φύση αυτών των γεγονότων, είναι εύλογο ότι τέτοια είχαν σχετίζονται είτε με μη ανιχνεύσιμο υπόλοιπο ενδοτοξίνης στο προϊόν επεξεργασίας ή σε μια συγκεκριμένη απόκριση προς τον ίδιο τον φορέα. Δοκιμή όλων των παρτίδων των RGD-Α-

TNF

απέτυχε να αποκαλύψει υπολειμματική ενδοτοξίνη? Ωστόσο, δεν μπορεί κανείς να αποκλείσει εντελώς αυτό ή άλλους μολυσματικούς παράγοντες ως αιτία μερικών από τις ανεπιθύμητες ενέργειες.

Serial όγκου και των ιστών ελέγχου βιοψίες ελήφθησαν πριν και μετά τη χορήγηση του RGD-Α-

TNF

έδωσε την ευκαιρία να συσχετίσει την έκθεση στο φάρμακο με όγκο και φυσιολογικό διακίνηση των ιστών του RGD-Α-

TNF.

Αυτά τα πειράματα επικυρωθεί από τον όγκο-ειδική στόχευση του RGD-Α-

TNF

στη ρύθμιση των σκύλων με αυθόρμητη καρκίνους. Παρατηρήσαμε διάνυσμα εντοπισμό σε αγγειακό ενδοθήλιο του όγκου σε βιοψίες όγκων μετά τη θεραπεία λαμβάνεται 4-6 ώρες και 4 ημέρες μετά από συστηματική χορήγηση του RGD-Α-

TNF.

Συγκεκριμένα, υπήρχε πλήρης απουσία του φορέα σε κανονική βιοψίες ιστών σε όλους τους σκύλους που έλαβαν. Έτσι, RGD-Α-

TNF

εκμεταλλεύεται παρεκκλίνουσα αγγείωση σχετιζόμενα με τη νόσο να στοχεύσουν την θεραπεία του ενδιαφέροντος ειδικά στον όγκο. Έτσι, επιβεβαιώνοντας την ασφάλεια αυτού του συστήματος διανομής που παρατηρήθηκε για πρώτη φορά το μικρό ζώο μας μοντέλα [22]. Σε συμφωνία με αυτό, ζεστό νεκροψίες από σκύλους ευθανασία λόγω της εξέλιξης της νόσου έδειξε ότι RGD-Α-

TNF

στοχευμένη περιοχή αγγείωσης του όγκου, αλλά όχι τα αιμοφόρα αγγεία εντός των κανονικών σπλαχνικά όργανα. Σημαντικά, δεν παρατηρήσαμε RGD-Α-

TNF

σε οποιαδήποτε από τους ιστούς που αναλύθηκαν ελέγχου, συμπεριλαμβανομένου του ήπατος ενώ η παρουσία του RGD-Α-

TNF

έχει προηγουμένως παρατηρηθεί στο ήπαρ και σπλήνα τρωκτικών που έλαβαν θεραπεία με RGD-Α-

TNF

[22]. Αυτά τα μεγάλα στοιχεία των ζώων είναι ιδιαίτερα πολύτιμη, καθώς οι κίνδυνοι και τα οφέλη για στρατηγικές διανομής AAVP σε ασθενείς με καρκίνο του ανθρώπου θεωρείται. Η αποτελεσματική στόχευση των RGD-Α-

TNF

παρατηρήθηκε σε δόσεις από 5 × 10

12-10

13 TU. Μια δόση 5 × 10

επελέγη 12 TU ως βέλτιστη δόση για τη μελέτη πολλαπλών δόσεων, λόγω ισοδύναμο εμπορίας, η στοχοθέτηση και την ασφάλεια καθώς και την αδυναμία μας να παράγουμε 1 × 10

13 TU σε μια έγκαιρη τρόπος. Σε αυτό το φορέα στόχευσης δόση είχε επίσης ως αποτέλεσμα μετρήσιμη έκφραση του ανθρώπινου ΤΝΡα. Περαιτέρω υποστήριξη για την βιολογική σημασία της παρατηρούμενης διακίνησης των RGD-Α-

TNF

μαζί με στοχευμένες έκφρασης του ανθρώπινου TNFα, που παρέχονται από τον στόχο αντι-όγκου που παρατηρείται σε σκύλους που λαμβάνουν πολλαπλές εβδομαδιαίες θεραπείες. αποκρίσεις RECIST με βάση παρατηρήθηκαν σε δύο σκύλους με σάρκωμα μαλακών ιστών και του μεταστατικού μελανώματος? όπως αντικειμενικές ανταποκρίσεις του όγκου είναι ιδιαίτερα σχετικός, γιατί όλοι οι σκύλοι σε αυτή τη μελέτη είχαν μεγάλη ογκώδη όγκους και δεν ήταν υποψήφιοι για τα συμβατικά τοπική-περιφερειακή θεραπείες, όπως χειρουργική επέμβαση ή ακτινοθεραπεία.