Αφηρημένο

Οι κλινικές δοκιμές επιβεβαίωσαν την ασφάλεια των επιλεκτικά ογκολυτικού αδενοϊούς για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου. Ωστόσο, ολοένα και πιο αποτελεσματική ιών θα μπορούσε να οδηγήσει σε περισσότερο τοξικότητα και ως εκ τούτου θα ήταν χρήσιμο αν αντιγραφής θα μπορούσε να καταργηθεί εάν είναι απαραίτητο. Αναλύσαμε τους ιούς που περιέχουν την κυκλοοξυγενάση-2 (COX-2) ή αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) προαγωγό για τον έλεγχο αντιγραφής. Αντι-φλεγμονώδεις παράγοντες μπορεί να μειώσει Cox-2 επίπεδα πρωτεΐνης και ως εκ τούτου υποθέσαμε ότι επίσης ο προαγωγός μπορεί να επηρεασθεί. Όπως Cox-2 ρυθμίζει την έκφραση του VEGF, επίσης ο προαγωγός VEGF μπορεί να είναι ελεγχόμενη. Πρώτον, αξιολογήσαμε την επίδραση των αντι-φλεγμονωδών παραγόντων επί της δραστικότητας προαγωγού ή μολυσματικότητα αδενοϊού

in vitro

. Περαιτέρω, αναλύσαμε την ογκολυτική δραστικότητα των ιών

in vitro

και

in vivo

με και χωρίς τα αντιδραστήρια. Επιπλέον, το αποτέλεσμα του σχετικά με τον ιό αντιγραφής αναλύθηκε. Βρήκαμε ότι RGD-4C ή Ad5 /3 τροποποιημένες ίνες βελτιωθεί η ογκολυτική δραστικότητα των ιών

in vitro

και

in vivo

. Βρήκαμε ότι και οι δύο προαγωγοί θα μπορούσαν να ρυθμίζεται προς τα κάτω με δεξαμεθαζόνη, σαλικυλικό νάτριο, ή σαλικυλικό οξύ. Ογκολυτικού αποτελεσματικότητα σχετίζεται με τη δραστηριότητα υποκινητή και

in vitro

παραγωγή του ιού θα μπορούσε να καταργηθεί με τις ουσίες.

In vivo

, είδαμε καλή θεραπευτική αποτελεσματικότητα των ιών σε ένα μοντέλο της ενδοφλέβιας θεραπείας του μεταστατικού καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, αλλά η ανασταλτική δράση της δεξαμεθαζόνης δεν ήταν αρκετά ισχυρή για να παρέχει σημαντικές διαφορές σε συγκρότημα

in vivo

περιβάλλον. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα αντι-φλεγμονώδη φάρμακα μπορεί να επηρεάσουν την αντιγραφή αδενοϊό, ο οποίος μπορεί να είναι σχετικά σε περίπτωση παρενεργειών που σχετίζονται αντιγραφή

Παράθεση:. Kanerva Α, Lavilla-Alonso S, ρακί M, L Kangasniemi, Bauerschmitz GJ, Takayama Κ, et al. (2008) Συστημική Θεραπεία για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας με δυνητικά ρυθμιζόμενους Oncolytic αδενοϊοί. PLoS ONE 3 (8): e2917. doi: 10.1371 /journal.pone.0002917

Επιμέλεια: Alfred Lewin, Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 5η Μαΐου 2008? Δεκτές: 7 Ιούλη, 2008? Δημοσιεύθηκε: 13 Αυγούστου του 2008

Copyright: © 2008 Kanerva et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το 6ο ΠΠ THERADPOX ΕΕ και Apotherapy, Huch Κονδυλίων Έρευνας (EVO), Sigrid Ίδρυμα Juselius, Ακαδημία της Φινλανδίας, Emil Ίδρυμα Aaltonen, φινλανδική Αντικαρκινική Εταιρεία, Πανεπιστήμιο του Ελσίνκι, Sohlberg Ιδρύματος, η Instrumentarium Ταμείο Έρευνας, της Φινλανδίας Ογκολογίας Ένωση, Ελσίνκι Βιοϊατρική Μεταπτυχιακό σχολείο, Ελσίνκι Graduate School στο Βιοτεχνολογίας και Μοριακής Βιολογίας, Πολιτιστικό Ίδρυμα της Φινλανδίας, Ίδρυμα Ερευνών και Μελετών της Bayer Schering Pharma, Deutsche Forschungsgemeinschaft /DFG και Biocentrum Ελσίνκι. Α.Η. είναι Κ Albin Johansson Έρευνας καθηγητής του Ινστιτούτου Καρκίνου της Φινλανδίας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η παθογένεια του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας χαρακτηρίζεται από επίμονη λοίμωξη με υψηλού κινδύνου ιό των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV), γενικά αποδεκτό, όπως απαιτείται για την έναρξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Σε ένα κλάσμα των ασθενών, των HPV μόλυνσης προχωρεί από δυσπλασία και καρκίνωμα

in situ

σε διηθητικό καρκίνο και μεταστατική νόσο [1]. Μόνο λίγα ιικών στελεχών είναι ειδικά υπεύθυνη για την αυχενική νεοπλάσματα, εκ των οποίων αντιπροσωπεύει HPV16 για περισσότερο από το ήμισυ των περιπτώσεων που αναφέρθηκαν. Δυστυχώς, ούτε οι βελτιώσεις στη χειρουργική ούτε ακτινοθεραπεία έχουν μειωθεί σημαντικά η θνησιμότητα των ασθενών με προχωρημένο, υποτροπιάζοντα ή μεταστατική νόσο. Η Αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία εκτιμά περίπου 9 700 νέες περιπτώσεις και 3 700 θανάτους σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, το 2006 [2]. Ωστόσο, ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας παραμένει η κύρια αιτία των γυναικολογικών θνησιμότητας από καρκίνο σε όλο τον κόσμο με πάνω από 270 000 θανάτους το 2002 [3].

αδενοϊό γονιδιακή θεραπεία έχει προταθεί ως μια νέα εναλλακτική θεραπεία για τον προχωρημένο καρκίνο [4]. Ωστόσο, η αποτελεσματική μεταγωγή του όγκου συνεχίζει να είναι ο περιοριστικός βήμα για την επίτευξη κλινικών αποτελεσμάτων. Oncolytic αδενοϊοί μπορεί να αποδειχθεί χρήσιμη από αυτή την άποψη [5]. Αυτοί οι ιοί έχουν ένα κυτταρολυτική φύση,

δηλ.

Το αντιγραφική κύκλο ζωής των αποτελεσμάτων ιού σε καταστροφή κυττάρου-ξενιστή. Τροποποιήσεις στο ιικό γονιδίωμα μείωση αντιγραφής σε φυσιολογικούς ιστούς, ενώ τα καρκινικά κύτταρα να συνεχίσουν να επιτρέπουν παραγωγική αντιγραφή που οδηγεί σε λύση των καρκινικών κυττάρων (ογκόλυσης). Τύπου Ι ογκολυτική αδενοϊοί διαθέτουν απώλειας λειτουργίας μεταλλάξεις στο γονιδίωμα του ιού, τα οποία αντισταθμίζονται από μεταλλάξεις σε καρκίνο αλλά όχι σε φυσιολογικά κύτταρα. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί με την ενσωμάτωση διαγραφές στα πρώιμα αδενοϊικά γονίδια με αποτέλεσμα οι μεταλλαγμένες πρωτεΐνες Ε1 δε μπορεί να δεσμεύσει κυτταρικές πρωτεΐνες είναι απαραίτητες για την αντιγραφή του ιού στα φυσιολογικά κύτταρα, αλλά όχι σε καρκινικά κύτταρα. Σε ιούς τύπου II, του όγκου ή ιστού ειδικούς προαγωγούς αντικαταστήσει ενδογενείς προαγωγούς ιικής όπως ο υποκινητής Ε1Α, να περιορίσει την αντιγραφή του ιού σε ιστούς στόχους που εκφράζουν τον προαγωγό.

Αν και κλινικές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει την ασφάλεια των ογκολυτικού αδενοϊών για τη θεραπεία της προχωρημένοι καρκίνοι [6] – [9], οι περισσότερες μελέτες έχουν χαρακτήρισε σχετικά εξασθενημένους ιούς. Έτσι, όλο και περισσότερο αποτελεσματικούς παράγοντες μπορεί να οδηγήσει σε περισσότερο τοξικότητα και ως εκ τούτου θα ήταν χρήσιμο αν αντιγραφής θα μπορούσε να καταργηθεί εάν είναι απαραίτητο. Η γονιδιακή έκφραση από ορισμένους προαγωγούς μπορεί να ρυθμιστεί. Για παράδειγμα, το γονίδιο απόκριση πρώιμης ανάπτυξης 1 (

EGR

-1) ενισχυτή /υποκινητή, έχει χρησιμοποιηθεί ως ένα ρυθμίσιμο υποκινητή για την ειδική έκφραση του HSV-ΤΚ σε κύτταρα γλοιώματος και μπορεί να προκληθεί από την ακτινοβολία [10] . Μια άλλη στρατηγική ρύθμισης είναι η χρήση της υποξίας-επαγώγιμων προαγωγέων [11]. Περαιτέρω, η ρύθμιση μπορεί να επιτευχθεί με χημικά επαγόμενοι υποκινητές. Για παράδειγμα, ένας προαγωγός τετρακυκλίνη ενεργοποιημένα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης και η επακόλουθη παραγωγή πρωτεϊνών από του στόματος τετρακυκλίνη. Απόσυρση του φαρμάκου καταργεί ταχέως έκφρασης γονιδίου [12].

Cox-2 είναι το περιοριστικό του ρυθμού ένζυμο στη σύνθεση των προσταγλανδινών, και εμπλέκεται στον έλεγχο φλεγμονωδών αντιδράσεων σε απόκριση σε τραυματισμό ή μόλυνση. Χρήση μη-στεροειδή αντι-φλεγμονώδη φάρμακα (ΜΣΑΦ) έδειξε ότι η δραστηριότητα και επίσης το επίπεδο της πρωτεΐνης Cox-2 μπορεί να ρυθμιστεί. Παρά το γεγονός ότι και άλλοι παράγοντες εκτός δραστηριότητα υποκινητή συχνά έχουν ένα ρόλο στα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης, μελέτες έχουν δείξει ότι η δραστηριότητα του υποκινητή Cox-2 συσχετίζεται καλά με την έκφραση της πρωτεΐνης [13]. Περαιτέρω, η δραστικότητα του υποκινητή Cox-2 στους περισσότερους υγιείς φυσιολογικούς ιστούς είναι χαμηλή, εκτός αν επάγεται από αυξητικούς παράγοντες (όπως VEGF), κυτοκίνες ή όγκους ειδικούς παράγοντες [14]. Όσον αφορά αδενοϊούς, η πιο σχετική όργανο για τοξικότητα είναι το συκώτι. Ως εκ τούτου, είναι χρήσιμο ότι ηπατική έκφραση του Cox-2 είναι χαμηλή [15], [16]. Cox-2 μπορεί να έχει ένα ρόλο στην καρκινογένεση πολλών επιθηλιακών καρκίνων, και τα επίπεδα έκφρασης έχουν συνδεθεί με διεισδυτικότητα όγκου και την αγγειογένεση [14]. Αυτοί οι λόγοι οδήγησαν στην χρησιμοποίηση του προαγωγού Cox-2 ως υποκινητή ειδικού όγκου για καρκίνο ειδική έκφραση [15] – [20]

VEGF διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην επαγωγή που σχετίζονται με όγκους αγγειογένεση, όπως. είναι ένας μεσολαβητής του πολλαπλασιασμού των ενδοθηλιακών κυττάρων, τη διαφοροποίηση και την αγγειακή διαπερατότητα [21]. VEGF εκφράζεται ευρέως κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης και ανιχνεύεται στους περισσότερους κακοήθεις επιθηλιακούς όγκους [18], [19], [21] Cox-2 ή αυξητικούς παράγοντες όπως ΤΟΡ-β1 μπορεί να ρυθμίσει VEGF [22], [23]. Περαιτέρω, ογκώδες στερεό μάζες όγκου περιέχουν υποξικές περιοχές, τα οποία διαθέτουν υψηλά επίπεδα του παράγοντα μεταγραφής HIF-1, το οποίο με τη σειρά του επάγει την έκφραση του VEGF και Cox-2 [23]. Έτσι, η ρύθμιση και η έκφραση της COX-2 και VEGF συνδέονται. Κατά συνέπεια, δεν είναι εντελώς εκπληκτικό το ότι επίσης ο προαγωγός VEGF έδειξε χρησιμότητα για συγκεκριμένα καρκινικά έκφραση [18], [19], [24]. Ένα μέχρι τώρα ανεξερεύνητη δυνατότητα είναι η ρύθμιση του COX-2 και υποκινητές VEGF από αντι-φλεγμονώδεις παράγοντες. Αυτό θα μπορούσε να προσφέρει ένα διακόπτη ασφαλείας σε περίπτωση που προκαλείται υποκινητή παρενεργειών σε κλινικές δοκιμές.

Τα κλινικά δείγματα καρκίνου του τραχήλου εκφράζουν υψηλά επίπεδα της COX-2, ενώ είναι μη ανιχνεύσιμο στην κανονική επιθηλιακή επένδυση του τραχήλου της μήτρας. Περαιτέρω, υπάρχει μία προοδευτική αύξηση των επιπέδων Cox-2, ανάλογα με το στάδιο της νόσου, και επίσης το μέγεθος του όγκου. έκφραση COX-2 είναι επίσης ένας αρνητικός προγνωστικός παράγοντας για την επιβίωση [25], [26]. Όσον αφορά την VEGF και ο καρκίνος του τραχήλου, ένα υψηλό επίπεδο προεπεξεργασίας έχει βρεθεί να συνδέσει με μεγάλους όγκους, στρωματικά εισβολή και πυελική μετάσταση λεμφαδένα. έκφραση VEGF συσχετίζεται επίσης με φτωχή πρόγνωση [27] – [29]. Ως εκ τούτου, και οι δύο προαγωγοί ελκυστικά υποψήφιοι για τον καρκίνο του τραχήλου ειδικές προσεγγίσεις γονιδιακής θεραπείας.

σαλικυλικό νάτριο και σαλικυλικό οξύ είναι μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη, τα οποία ενζυμικά αναστέλλουν Cox-2. Περαιτέρω, έχει αναφερθεί ότι οι ουσίες αυτές μειώνουν Cox-2 mRNA επίπεδα, η οποία θα μπορούσε να διαμεσολαβείται μέσω διαμόρφωσης της δραστηριότητας προαγωγού [13], [30]. Η δεξαμεθαζόνη είναι ένα αντι-φλεγμονώδες στεροειδές που αναστέλλει την έκφραση και των δύο Cox-2 mRNA και πρωτεΐνη [30]. Περαιτέρω, μετα-μεταγραφικής αποσταθεροποίησης του mRNA μπορεί να είναι ένας σημαντικός μηχανισμός στη δράση της δεξαμεθαζόνης [31]. ΤΟΡ-β1 είναι ένας αυξητικός παράγοντας πεπτίδιο και αντι-φλεγμονώδης κυτοκίνη, η οποία παράγεται από πολλά κύτταρα, αλλά βρίσκεται πιο συγκεντρωμένη στα αιμοπετάλια θηλαστικών. Μπορεί να ρυθμίζουν με για πολλαπλασιασμό παράδειγμα των κυττάρων και την διαφοροποίηση, την αγγειογένεση και μετάσταση, και έχει αποδειχθεί ότι έχουν μια επίδραση στα επίπεδα Cox-2 [32].

Υποθέσαμε ότι μπορεί να είναι δυνατόν να μειωθεί αντιγραφή αδενοϊό με φαρμακολογική παρέμβαση. Συγκεκριμένα, αναλύσαμε ογκολυτικοί ιοί που περιέχουν το κυκλοοξυγενάσης-2 (COX-2) ή του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) προαγωγό που ελέγχει την έκφραση του

Ε1Α

, και αξιολόγησε την επίδραση των αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια [σαλικυλικό νάτριο, δεξαμεθαζόνη, σαλικυλικό οξύ και ο αυξητικός παράγοντας μεταμόρφωσης β1 (ΤΟΡ-β1)] επί ογκόλυσης και αντιγραφή

in vitro

και

in vivo

αποτελεσματικότητα. Ως έλεγχοι, συμπεριλάβαμε ένα ρετινοβλάστωμα (Rb) -p16 μονοπάτι επιλεκτική Δ24-based τύπου Ι ογκολυτική ιός [33] και τον αδενοϊό άγριου τύπου. Περαιτέρω, όπως έχει γίνει προφανές ότι ένα σημαντικό καθοριστικό παράγοντα της αποτελεσματικότητας των αναπαράγει αδενοϊοί είναι η αποτελεσματικότητα χορήγησης γονιδίου [34], χρησιμοποιήσαμε ινών τροποποιηθεί, μολυσματικότητα ενισχυμένη ιούς.

Αποτελέσματα

Η μολυσματικότητα του ανθρώπινου καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές

in vitro

η

ο καρκίνος του τραχήλου κυτταρικές σειρές C33A, SiHa, Caski και HeLa μολύνθηκαν με εκφράζει ισογονιδιακές λουσιφεράσης ιούς που χαρακτηρίζει είτε το καψίδιο αδενοϊό ορότυπο 5 (Ad5luc1), ένα χιμαιρικό καψίδιο με τον τομέα κουμπί από τον ορότυπο 3 (Ad5 /3luc1) ή την τροποποίηση RGD-4C καψιδίου (Ad5lucRGD). Σε τρεις από τις τέσσερις κυτταρικές σειρές, μόλυνση με Ad5 /3luc1 είχε ως αποτέλεσμα 6 έως 14 φορές υψηλότερη έκφραση λουσιφεράσης σε σύγκριση με Ad5luc1 (5 000 ιϊκού σωματιδίου (VP) /κύτταρο, το Σχ. 1β-d). Ωστόσο, με τα κύτταρα C33A, τα οποία διαθέτουν υψηλή έκφραση του coxsackie-αδενοϊού υποδοχέα [19], [35], Ad5luc1 ήταν πιο αποτελεσματικό (7-πλάσια, Σχ. 1α). Ad5lucRGD δεν αύξησε τη μολυσματικότητα του τραχήλου της μήτρας καρκινικών κυττάρων

in vitro

, εκτός από τα κύτταρα SiHa (2,5 έως 5,5 εξάρτημα φορές, Σχ. 1β).

(α-δ) Κυτταρικές σειρές ήσαν μολυνθεί με Ad5luc1, Ad5 /3luc1, και Ad5lucRGD. Η δραστηριότητα της λουσιφεράσης εκφράζεται ως σχετικές μονάδες φωτός (RLU) κανονικοποιημένη για ολική συγκέντρωση πρωτεΐνης. (E-h) Η επίδραση των αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια για την αποτελεσματικότητα μεταγωγής του καψιδίου τροποποιημένων αδενοϊούς. Τα κύτταρα μολύνθηκαν με την παρουσία ουσιών. Η τιμή χωρίς αντιδραστήρια ορίστηκε σε 1, και οι σχετικές τιμές λουσιφεράσης εμφανίζεται. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο όρο τριών πειραμάτων ± τυπικό σφάλμα. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt?. 0.0001

έναντι

Ad5luc1

Η επίδραση της αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια για την αποτελεσματικότητα μεταγωγής του καψιδίου τροποποιημένων αδενοϊούς

Ο καρκίνος του τραχήλου κυτταρικές γραμμές μολύνθηκαν με καψίδιο τροποποιημένο αδενοϊούς με την παρουσία των ουσιών. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1e-h, δεξαμεθαζόνη αύξησε την αποτελεσματικότητα μεταγωγής με όλες τους ιούς σε κυτταρικές σειρές SiHa και Caski. Άλλες αναλύθηκαν ουσίες είχε μόνο ελάσσονα επίδραση.

Κανονισμός του Cox-2 και υποκινητές VEGF με αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια

Η μεταγραφική δραστηριότητα των υποκινητών Cox-2 και VEGF αξιολογήθηκε σε τραχηλικό καρκινικό κύτταρο γραμμές με και χωρίς αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια σαλικυλικό νάτριο, δεξαμεθαζόνη, σαλικυλικό οξύ και ΤΟΡ-β1 (Εικ. 2a-Η). Ad5luc1, το οποίο περιέχει έναν πολύ ισχυρό προαγωγέα CMV, χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση, και οι σχετικές δραστηριότητες λουσιφεράσης δείχνεται. Συνολικά, ο προαγωγός VEGF που επάγεται ένα υψηλότερο επίπεδο έκφρασης διαγονιδίου από Cox-2 (Σχ. 2β, d, f, h). έκφραση υποστηρικτής ήταν καλά σε συμφωνία με προηγούμενα δεδομένα για το Cox-2 και την έκφραση του VEGF mRNA σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές [19]. Αν και οι δύο προαγωγοί θα μπορούσαν να ρυθμίζεται προς τα κάτω με αντιφλεγμονώδεις ουσίες, VEGF ήταν πιο τακτικά επηρεάζονται (Σχ. 2b, d).

Οι μονοστιβάδες προ-επωάστηκαν με αντιδραστήρια, και C33A (a, b), SiHa (c, d ), Caski (e, f) και g, h) κύτταρα (HeLa μολύνθηκαν με 1 000 ιικά σωματίδια (VP) /κύτταρο του Ad5luc1 (με τον έλεγχο της λουσιφεράσης CMV), Adcox-2Mluc ή AdVEGFluc, και η έκφραση της λουσιφεράσης αναλύθηκε. επίπεδο διαγονιδιακή έκφραση με Cox-2 και VEGF υποκινητές είναι σε σύγκριση με τον υποκινητή CMV (%). Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο όρο τεσσάρων πειραμάτων ± τυπικό σφάλμα. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt?. 0.0001

έναντι

καμία ουσία

Oncolytic αδενοϊοί εμφανίζεται αποτελεσματική δολοφονία του τραχήλου της μήτρας καρκινικών κυττάρων

in vitro

Η

Μονοστιβάδες του τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα μολύνθηκαν με ογκολυτικού αδενοϊοί, ο ιός άγριου τύπου και Ad5luc1, ένα

Ε1

ιό ελέγχου -deleted (Εικ. 3a-d). Σε όλες τις κυτταρικές σειρές, η δοκιμασία ποσοτικά θανατώσεως κυττάρων έδειξαν κυτταρόλυση με ογκολυτικοί ιοί και ο ιός άγριου τύπου, ενώ Ad5luc1 προκαλείται ελάχιστη θανάτωση κυττάρων. Στις περισσότερες κυτταρικές σειρές, ογκόλυσης βελτιώθηκε σημαντικά με αναπαράγει ιούς σε σύγκριση με Ad5luc1. Περαιτέρω, ογκόλυσης προκαλείται από RGDCRADcox-2R ήταν σημαντική και για C33A και τα κύτταρα Caski όταν χρησιμοποιήθηκε δόση 10 νρ /κύτταρο (Σχ. 3α, c). Σε όλες τις κυτταρικές σειρές, θανάτωσης κυττάρων με Ad5-Δ24RGD ήταν συγκρίσιμη με τον αδενοϊό άγριου τύπου, ενώ η αποτελεσματικότητα του RGDCRADcox-2R και Ad5 /3VEGF-Ε1 ήταν ασθενέστερη.

(Α-δ) Οι μονοστιβάδες μολύνθηκαν με RGDCRADcox-2R, Ad5 /3VEGF-E1, Ad5-Δ24RGD, αδενοϊό άγριου τύπου και Ad5luc1 (

Ε1

ιό ελέγχου -deleted). Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με δοκιμασία MTS. Οι OD

490 τιμές των μη μολυσμένων κυττάρων ορίστηκαν ως 100%. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα των πειραμάτων τετραπλούν. (Ε-Ρ) C33A κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς και προχωρημένους όγκους αφέθηκαν να αναπτυχθούν. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με (ε) τρεις εντός του όγκου εγχύσεις με 1 × 10

9 ιικά σωματίδια (νρ) του Ad5luc1, τον ιό άγριου τύπου ή ογκολυτική αδενοϊούς σε τρεις διαδοχικές ημέρες, ή με (στ) μία εφάπαξ ενδοφλέβια ένεση της 1 × 10

11 VP. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt? 0,0001

έναντι

Ad5luc1. Μπάρες δείχνουν το τυπικό σφάλμα.

Η

Oncolytic αδενοϊοί παραδοθεί θεραπευτική αποτελεσματικότητα σε μοντέλα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας ποντικού

in vivo

Η

Για προχωρημένους όγκους υποδόρια C33A υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τα τρία εντός του όγκου εγχύσεις 1 × 10

9 VP της Ad5luc1, τον ιό άγριου τύπου, Ad5 /3VEGF-E1, RGDCRADcox-2R ή Αά5-Δ24RGD σε τρεις διαδοχικές ημέρες, ή με μία μόνο ενδοφλέβια ένεση του 1 × 10

11 VP της ίδιους ιούς. Η θεραπεία με ογκολυτικούς ιούς έδωσε σημαντική θεραπευτική αποτελεσματικότητα και στα δύο μοντέλα (Σχήμα 3ε, στ:

P

& lt? 0,0001 για RGDCRADcox-2R, Ad5 /3VEGF-E1 ή Αά5-Δ24RGD

έναντι

Ad5luc1. ). Αδενοϊό άγριου τύπου δεν εμφανίζει σημαντική επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου (

P

= 0,1471 και 0,8297

έναντι

Ad5luc1 για ενδοογκική και ενδοφλέβια μοντέλα, αντίστοιχα).

Anti- φλεγμονώδη αντιδραστήρια μείωσε ογκόλυσης που προκαλούνται από COX-2 και υποκινητή του VEGF οδηγείται ογκολυτική αδενοϊούς και τον αδενοϊό άγριου τύπου

Η επίδραση των αντι-φλεγμονωδών παραγόντων επί ογκολυτική αδενοϊούς και τον ιό άγριου τύπου αναλύθηκε σε C33A και μονοστοιβάδες κυττάρων SiHa. Κανένα από τα αναλύονται αντιδραστήρια (δεξαμεθαζόνη, σαλικυλικό οξύ και σαλικυλικό νάτριο) που προκαλείται δολοφονία σημαντικών κυττάρων από μόνα τους ή σε συνδυασμό με αντιγραφή ανεπάρκεια

Ε1

-deleted Ad5luc1 (Σχ. 4α, ε). Το κύτταρο θανάτωση αποτελεσματικότητα της αντιγραφής ιών μειώθηκε με δεξαμεθαζόνη (Εικ. 4b, c, f-h), σαλικυλικό οξύ (Εικ. 4γ) και σαλικυλικό νάτριο (Εικ. 4f, g).

(α- h) μονοστιβάδες κυττάρων προεπωάστηκαν με ουσίες, και C33A (α-δ) και SiHa (e-h) κύτταρα μολύνθηκαν με Ad5luc1, ιό άγριου τύπου, Ad5 /3VEGF-E1 και RGDCRADcox-2R. Κυττάρων σκοτώνοντας αποτελεσματικότητα της αντιγραφής ιών μειώθηκε με δεξαμεθαζόνη (b, c, f-h) και σαλικυλικό νάτριο (c, f, g). Για να δειχθεί η επίδραση των ουσιών

per se

στην επιβίωση των κυττάρων, μια δεύτερη πλαστή έχει προστεθεί σε πάνελ Α και Ε. Το σημείο διέλευσης γ-άξονας δείχνει τη βιωσιμότητα των κυττάρων χωρίς ιό ή ουσίες, ενώ το «0» στα δεξιά δείχνει την επιβίωση των κυττάρων χωρίς ιό, αλλά με ουσίες. Η

in vivo

επίδραση της δεξαμεθαζόνης στην θεραπευτική αποτελεσματικότητα της ογκολυτικού ή άγριου τύπου αδενοϊούς. (I) Η υποδόρια C33A όγκους καρκίνου του τραχήλου αφέθηκαν να καθιερώσει και ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με μία μόνο ενδοφλέβια ένεση του 1 × 10

11 ιικά σωματίδια (VP) ογκολυτικού ιούς ή χωρίς ιό. Στις ομάδες RGDCRADcox-2R, 3 × 10

8 VP εγχύθηκαν εντός του όγκου κατά τις ημέρες 1, 3 και 5. Επιπλέον, τα ποντίκια έλαβαν ενδοπεριτοναϊκή δεξαμεθαζόνη ή PBS. (Ι) Ανθρώπινη καρκίνο των ωοθηκών (Hey) όγκους καθορίστηκαν σε γυμνούς ποντικούς, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ενδοογκική ενέσεις των 3 × 10

8 VP του RGDCRADcox-2R, Ad5 /3VEGF-E1, Ad5-Δ24RGD ή κανένας ιός δεν τις ημέρες 1 , 3 και 5. Οι ποντικοί έλαβαν ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις από PBS ή δεξαμεθαζόνη καθημερινά. Μπάρες δείχνουν το τυπικό σφάλμα. Παρά υποδηλώνουν τάση σε ορισμένα χρονικά σημεία, δεξαμεθαζόνη δεν επηρέασε την ανάπτυξη των όγκων σημαντικά στη συνολική ανάλυση των δύο μοντέλου. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt? 0,0001

έναντι

χωρίς ουσία. Μπάρες δείχνουν το τυπικό σφάλμα.

Η

Η

in vivo

επίδραση της δεξαμεθαζόνης στην θεραπευτική αποτελεσματικότητα της ογκολυτικού ή άγριου τύπου αδενοϊοί

Η υποδόρια C33A του τραχήλου της μήτρας καρκινικούς όγκους είχαν τη δυνατότητα να αναπτύσσουν και οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε αγωγή με μία μόνο ενδοφλέβια ένεση του 1 × 10

11 νρ του Ad5 /3VEGF-E1, Ad5-Δ24RGD ή χωρίς ιό. Στις ομάδες RGDCRADcox-2R, 3 × 10

8 VP εγχύθηκαν εντός του όγκου τις ημέρες 1, 3 και 5. Στη συνέχεια, οι ποντικοί τυχαιοποιήθηκαν σε ενδοπεριτοναϊκή δεξαμεθαζόνη ή θεραπεία PBS (σχ. 4θ). Ad5-Δ24RGD χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο ενός ογκολυτικού ιού χωρίς υποκινητή ειδικού ιστού. ιός άγριου τύπου δεν θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν επειδή δεν απέδωσαν καμία αποτελεσματικότητα στο μοντέλο (Εικ. 3). Παρά την κάποια ελπιδοφόρα έστω και ήσσονος σημασίας τάσεις, δεξαμεθαζόνη δεν επηρέασε την ανάπτυξη του όγκου σημαντικά (

P

= 0,5726 – 0,9909

έναντι

ιό μόνο). Ωστόσο, όλες οι ογκολυτικού αδενοϊοί συνέχισαν να εμφανίζουν αποτελεσματικότητα κατά των όγκων όπως στο προηγούμενο πείραμα (όλα

P

& lt? 0,0001

έναντι

μακέτα)

Για να δούμε αν θα μπορούσαμε. δώσουμε έμφαση την αντιγραφή ελαφρυντικών επίδραση της δεξαμεθαζόνης σε μια ταχέως αναπτυσσόμενη, εξαιρετικά επιθετική υποδόριο μοντέλο, χρησιμοποιήσαμε Hey ωοθηκών καρκινικά κύτταρα (Εικ. 4ι). Προηγούμενη εργασία προτείνει ότι οι ιοί που χρησιμοποιούνται εδώ θα αναπαραχθούν σε Hey κύτταρα [36], [37]. Τα ξενομοσχεύματα σε επεξεργασία με ενδοογκική ενέσεις των 3 × 10

8 VP ιών ή χωρίς ιό τις ημέρες 1, 3 και 5. Οι ποντικοί έλαβαν ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις από PBS ή δεξαμεθαζόνη καθημερινά, και την ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε. Και πάλι, αν και υπήρξε μια πρόταση της εξασθένησης της αναπαραγωγής του ιού (

δηλ.

Μεγαλύτερους όγκους), δεξαμεθαζόνη δεν είχε σημαντική επίδραση στη θεραπευτική αποτελεσματικότητα της αναλύονται ιών (

P

= 0,8897 – 0,9441). Η αντικαρκινική αποτελεσματικότητα της ογκολυτικού αδενοϊών συνέχισε να είναι σημαντική σε σύγκριση με ψευδο-αγωγή (όλα

P

& lt? 0,0001)

Η επίδραση της δεξαμεθαζόνης επί της αντιγραφής του Cox-2 και VEGF υποκινητή οδηγείται ογκολυτική. αδενοϊούς και τον αδενοϊό άγριου τύπου σε τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα

in vitro

η

Αναλύσαμε το

in vitro

παραγωγή ιοσωματίων από RGDCRADcox-2R, Ad5 /3VEGF-E1 και άγρια -τύπος αδενοϊού σε κύτταρα SiHa με και χωρίς αγωγή με δεξαμεθαζόνη (Σχ. 5a-c). Συνολικά, η δεξαμεθαζόνη μείωσε την αντιγραφή αναλύθηκε ιών. Η αναπαραγωγή του RGDCRADcox-2R μειώθηκε 2-, 7- και 10-φορές σε 24, 60 και 96 h, αντίστοιχα (Σχήμα 5Α:

P

& lt? 0,0001 στους 60 h.). Μια παρόμοια αλλά ασθενέστερη επίδραση παρατηρήθηκε με Ad5 /3VEGF-E1 (Σχήμα 5Β:. 1,5 έως 3,5-φορές,

P

= 0,0640 στις 96 ώρες). Η αντιγραφή ενός ιού άγριου τύπου ήταν σημαντικά μειωμένο σε 96 ώρες (Εικ 5c: 40-φορές,

P

& lt? 0.0001.)

(α-γ) SiHa μονοστιβάδες καρκίνο του τραχήλου ήταν. μολυνθεί με ιούς μόνο (10 ιϊκού σωματιδίου (VP) /κύτταρο) ή σε συνδυασμό με δεξαμεθαζόνη, και η παραγωγή του ιού αναλύθηκε με προσδιορισμό πλάκας. Παρά τη σαφή τάση σε πρώιμα χρονικά σημεία, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική επίδραση της δεξαμεθαζόνης στο

in vivo

αντιγραφής λόγω της μεγαλύτερης διακύμανσης

in vivo

(δ-στ). Οι ανθρώπινοι όγκοι καρκίνου των ωοθηκών καθορίστηκαν σε γυμνούς ποντικούς και κατεργάζεται με μία μόνο ένεση εντός του όγκου 3 × 10

8 νρ. Οι ποντικοί έλαβαν ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις της δεξαμεθαζόνης ή PBS καθημερινά. Τέσσερις όγκοι /ομάδα συλλέχθηκαν τις ημέρες 2 και 4, και η ποσότητα των μολυσματικών σωματιδίων αναλύθηκε με TCID

50. ***

P

& lt? 0,0001

έναντι

μόνος του ιού. Ν.Α. = δεν αναλύονται. Μπάρες δείχνουν το τυπικό σφάλμα.

Η

Η επίδραση της δεξαμεθαζόνης επί της αντιγραφής του Cox-2 και υποκινητή του VEGF οδηγείται ογκολυτική αδενοϊούς και τον αδενοϊό άγριου τύπου σε κύτταρα καρκίνου

in vivo

Η

κανονισμός της αντιγραφής με δεξαμεθαζόνη

in vivo

αναλύθηκε με υποδόρια ανθρώπινους όγκους των ωοθηκών Hey αδενοκαρκίνωμα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ενδοογκική ενέσεις την ημέρα 0. τα μισά από τα ποντίκια έλαβαν ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις της δεξαμεθαζόνης ημερησίως. Οι όγκοι αναλύθηκαν κατά τις ημέρες 2 και 4. Αν και δεξαμεθαζόνη μείωσε την αντιγραφή του Ad5 /3VEGF-Ε1 και ιό άγριου τύπου σε πρώιμο χρονικό σημείο, η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (Σχ. 5d-f, όλων

P

= 0,1283 – 0,6144).

Συζήτηση

Επειδή ο κύριος υποδοχέας αδενοϊός μπορεί να είναι συχνά απουσιάζει ή εκφράζονται έκτροπα σε προχωρημένους όγκους [34], πρέπει πρώτα να αναλυθεί

in vitro

αποτελεσματικότητα μεταγωγής των ινών τροποποιημένων, μολυσματικότητας ενισχυμένη φορείς αδενοϊού που εκφράζουν το διαγονίδιο λουσιφεράσης (Εικ. 1). τροποποίηση RGD-4C δεν φαίνεται να είναι πολύ αποτελεσματική στην αύξηση της γονιδιακής μεταφοράς, αλλά ο επαναστοχεύοντα Ad3 υποδοχέα ιού ήταν αρκετά αποτελεσματική σε τρεις από τις τέσσερις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 1Α-d). Περαιτέρω, αξιολογήσαμε την επίδραση των αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια στην αποτελεσματικότητα μεταγωγής, και βρήκε κάποια αύξηση στην έκφραση διαγονιδίου μετά από θεραπεία με δεξαμεθαζόνη σε δύο από τα τέσσερα τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές (Σχήμα 1 f, g) ως ένα σημαντικό καθοριστικό παράγοντα της αποτελεσματικότητα του ογκολυτικού αδενοϊών είναι μολυσματικότητα [34], χρησιμοποιήσαμε τροποποιήσεις γενετική ινών για τη βελτίωση της θανάτωσης αποτελεσματικότητα των κυττάρων. Αξιολογήσαμε το

in vitro

κυτταρολυτική δραστικότητα αυτών των ογκολυτικού αδενοϊών σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές, και βρέθηκε συσχέτιση μεταξύ ογκολυτική δραστικότητα, παράδοση γονιδίων και η δραστικότητα προαγωγού,

δηλαδή

τόσο ισχυρότερη είναι η υποκινητή και υψηλότερη της μολυσματικότητα, τόσο ισχυρότερη είναι η ογκολυτική δραστικότητα (Σχ. 3a-d).

το πιο σημαντικό, όλες οι αναλύθηκαν ογκολυτική αδενοϊοί είχαν στατιστικά σημαντική θεραπευτική αποτελεσματικότητα σε αμφότερες τοπική και συστηματική αγωγή σχήματα του ποντικού τραχήλου ξενομοσχεύματα καρκίνου (Σχ. 3e, f). Κάποια διακύμανση στην αποτελεσματικότητα παρατηρήθηκε μεταξύ

in vitro

και

in vivo

αποτελέσματα με μερικά από τους ιούς. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε πρόσφατες ανακαλύψεις που υποδηλώνει ότι ενώ η διανομή του γονιδίου

in vitro

εξαρτάται κυρίως από την πρωτοβάθμια υποδοχείς αδενοϊό, θέματα βιοδιαθεσιμότητα φαίνεται να κυριαρχούν σε σχέση με

in vivo

αποτελεσματικότητα. Για παράδειγμα, είναι όλο και περισσότερο αποδεκτό ότι ενώ η σύνδεση με CAR είναι ένας σημαντικός καθοριστικός παράγοντας της μεταγωγής

in vitro

, άλλες περιοχές της ίνας μπορεί να είναι ακόμη πιο σχετικές

in vivo

[38]. Παράλληλα με τα προηγούμενα ευρήματα με άλλες κυτταρικές σειρές [37], [39], τον αδενοϊό άγριου τύπου δεν ήταν αποτελεσματική στα κύτταρα C33A

in vivo

, παρά την δραστηριότητα

in vitro

. Παρά το γεγονός ότι θεωρούμε αυτό σχετίζεται με τις διαφορές μεταξύ των

in vitro

και

in vivo

περιβάλλοντα (π.χ.. Στρώμα, αγγειακό σύστημα, η έκφραση του υποδοχέα), χρειάζεται περαιτέρω εργασία για να αποσαφηνιστεί το θέμα.

Όταν Cox-2 και VEGF υποκινητή οδηγείται διαγονιδιακή έκφραση αξιολογήθηκε, και οι δύο προαγωγοί βρέθηκαν δραστικές σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές σειρές. Συνολικά, η δραστηριότητα υποκινητή του VEGF ήταν υψηλότερη από Cox-2 σε όλες τις κυτταρικές σειρές, και να συγκριθεί με τα προηγούμενα δεδομένα [19]. Σημαντικά, προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα δεν εκφράζουν τον VEGF [40]. Επίσης Cox-2 επίπεδα παρατηρήθηκαν σε τραχήλου καρκινικά κύτταρα ήταν υψηλότερες από ό, τι έχει αναφερθεί για το συκώτι προηγουμένως [16]. Σημαντική μείωση της έκφρασης λουσιφεράσης με τη μεσολάβηση του VEGF υποκινητή παρατηρήθηκε με σαλικυλικό νάτριο, δεξαμεθαζόνη και σαλικυλικό οξύ (Σχ. 2b, d). σαλικυλικό νάτριο μείωσε επίσης Cox-2 προαγωγό ελεγχόμενη έκφραση διαγονιδίου (Σχ. 2e).

Όταν πειράματα θανάτωσης κυττάρου διεξήχθησαν με την παρουσία αντι-φλεγμονώδεις παράγοντες, δεξαμεθαζόνη και σαλικυλικό νάτριο ήταν αποτελεσματική στη μείωση ογκόλυσης (Σχ. 4). Είναι ενδιαφέρον ότι η επίδραση δεν περιορίζεται στην ογκολυτική αδενοϊούς, αλλά επίσης τον ιό άγριου τύπου που εμφανίζεται ασθενέστερη κυτταρόλυση όταν δεξαμεθαζόνη ήταν παρούσα. Έτσι, το αποτέλεσμα μπορεί να μην είναι εντελώς σχετική με τον προαγωγό που ελέγχει την αντιγραφή, αλλά ένα γενικότερο φαινόμενο στην ιική αντιγραφή μπορεί επίσης να εμπλέκονται. Μία αιτία της μειωμένης αντιγραφής μπορεί να είναι προς τα κάτω ρύθμιση των σχετικών υποδοχέων που απαιτούνται για την μόλυνση. Προηγουμένως, εμείς και άλλοι έχουν αναλύσει τη διαμόρφωση του αδενοϊού έκφρασης πρωτογενούς υποδοχέα στην επιφάνεια των κυττάρων από διάφορες ουσίες συμπεριλαμβανομένων ορισμένων χημειοθεραπευτικών και αντι-φλεγμονώδη αντιδραστήρια. Βρήκαμε καμία επίδραση στο επίπεδο του υποδοχέα, όπως εκτιμήθηκε με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής, μετά από τη θεραπεία με δεξαμεθαζόνη, ενώ άλλοι ανιχνευθεί μια ελαφρά μείωση στο επίπεδο των δύο πρωτογενών υποδοχέα και α

ιντεγκρίνες νβ [41], [42].

Η επίδραση της δεξαμεθαζόνης επί του υποδοχέα ορότυπο 3 δεν είχε μελετηθεί, ούτε είχαν οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιούνται εδώ έχουν μελετηθεί πριν σε σχέση με τις άλλες σχετικές υποδοχείς αδενοϊού. Ως εκ τούτου αναλύσαμε την επίδραση των ουσιών κατά την παράδοση γονιδίων και βρήκαν ότι σε μερικές περιπτώσεις η έκφραση της λουσιφεράσης αυξήθηκε (Εικ. 1e-h). Έτσι, η μειωμένη αντιγραφή δει εδώ δεν ήταν πιθανόν να οφείλεται σε μειορρύθμιση του υποδοχέα.

Μια άλλη μηχανιστική δυνατότητα θα μπορούσε να περιλαμβάνει την επαγωγή της COX-2 από την αντιγραφή του ιού

per se

. Όσον αφορά έρπη, κυτταρομεγαλοϊού, και άλλους ιούς DNA, έχει αποδειχθεί ότι επάγει λοίμωξη από τον ιό Cox-2 [43], [44]. Περαιτέρω, το εύρημα ότι η αναστολή της Cox-2 μειώνει την αντιγραφή των ιών αυτών υποδηλώνει ότι η επαγωγή Cox-2 είναι ωφέλιμη για τον πολλαπλασιασμό του ιού. Αυτοί οι ιοί μπορούν να χρησιμοποιήσουν τα αναβολικά αποτελέσματα της Cox-2 για τη βελτιστοποίηση της αποτελεσματικότητας αντιγραφής τους. Τα προκαταρκτικά στοιχεία υποδεικνύουν ότι το ίδιο μπορεί επίσης να ισχύει και για τον αδενοϊό, το οποίο θα μπορούσε να βοηθήσει να εξηγήσει γιατί η ογκολυτική δράση του άγριου τύπου αδενοϊός εξασθενημένος από δεξαμεθαζόνη [45].

Αν και ογκόλυσης είναι πιθανό να συσχετίζονται με την αντιγραφή του ιό, ερευνήσαμε αυτό ξεχωριστά. Όπως ήταν αναμενόμενο, η αντιγραφή του ιού μειώθηκε με θεραπεία με δεξαμεθαζόνη

in vitro

(Σχ. 5a-c). Αυτό φαίνεται να υποστηρίζει τη θεωρητική υπόθεση ότι ογκόλυσης είναι στενά συνδεδεμένη με την αντιγραφή του ιού. Όπως ανθρώπινοι αδενοϊοί δεν αντιγράφονται παραγωγικά σε φυσιολογικούς ιστούς ποντικού [46], τα ανθρώπινα ξενομοσχεύματα σε ποντικούς χρησιμοποιήθηκαν για την εξασθένιση αντιγραφή

in vivo

μελέτες. Σε αυτά τα μοντέλα, αν αντιγραφής ή /και θανάτωσης κυττάρων αποτελεσματικότητα μειώνεται

in vivo

με δεξαμεθαζόνη, όγκους σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με τον ιό και δεξαμεθαζόνη θα είναι μεγαλύτερο από τον ιό μόνο θεραπεία. Και στα δύο μοντέλα που μελετήθηκαν, δεξαμεθαζόνη δεν μείωσε σημαντικά την αντικαρκινική αποτελεσματικότητα των αναλυθέντων ογκολυτικού αδενοϊοί, παρά την τάση προς αυτή την κατεύθυνση (Σχ. 4θ-j, όλα

P

≥0.1654). Τέλος, αναλύσαμε την ποσότητα των μολυσματικών σωματιδίων σε υποδόριους όγκους με και χωρίς αγωγή με δεξαμεθαζόνη (Σχ. 5d-ί). Παρά την τάση εξέχοντα σε πρώιμα χρονικά σημεία, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές, οι οποίες μπορεί να οφείλονται στη διακύμανση τυπικά

in vivo πειράματα

.

Η πιο πιθανή αιτία για τη διαφορά μεταξύ του παρατηρούμενου

in vitro

και

in vivo

επίδραση της δεξαμεθαζόνης στην ογκολυτικού δυναμικό των ιών μπορεί να σχετίζεται με την υψηλότερη πολυπλοκότητα του

in vivo

μοντέλα. Αυτές οι πολυπλοκότητες ήταν καλά καταδειχθεί σε μία πρόσφατη μελέτη όπου μια αύξηση στα επίπεδα VEGF στο Cox-2 θετικό και Cox-2 αρνητικό παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα παρατηρήθηκε μετά τη θεραπεία με υψηλές συγκεντρώσεις αναστολέων Cox-2, υποδηλώνοντας ότι η σχέση μεταξύ της πρωτεΐνης Cox-2 αναστολή και VEGF ή έκφραση υποστηρικτής Cox-2 μπορεί να μην είναι πάντα στενά συνδεδεμένη [47]. Αντίθετα με τις προσδοκίες, τόσο Cox-2 θετικό και αρνητικό

in vitro

μοντέλα εμφάνισε αυξημένα επίπεδα του VEGF μετά την αναστολή Cox-2. Ωστόσο, στην Cox-2 θετικά καρκινικά

in vivo

μοντέλο, μη κακοήθη κύτταρα εξέφρασαν ένα σημαντικά μειωμένο επίπεδο VEGF ποντικού οδηγεί σε μειωμένη συνολική VEGF και την αγγειογένεση των όγκων και την ανάπτυξη, ενώ Cox-2 όγκους αρνητικούς επέδειξαν αυξημένη την ανάπτυξη του όγκου. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν επίσης ότι ο στρώματος του όγκου μπορεί να έχει μια σημαντική επίδραση στην έκφραση της COX-2 και σχετικών παραγόντων.

Μια άλλη πτυχή σχετίζεται με την μη-γραμμική σχέση μεταξύ των επιπέδων Ε1Α και την αποτελεσματικότητα της αντιγραφής του ιού. Κλασικό μελέτες δείχνουν ότι η εξαιρετικά μεταβλητή επίπεδα Ε1Α επιτρέπουν την αποτελεσματική αντιγραφή χωρίς άμεση συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης Ε1Α και την παραγωγή του λοιμογόνου παράγοντα [48]. Έτσι, είναι πολύ πιθανό, ότι ακόμη και αν η έκφραση Ε1Α επηρεάστηκε λόγω δεξαμεθαζόνη αναστέλλοντας τους υποκινητές, το αποτέλεσμα δεν ήταν αρκετά δραματική πρέπει να θεωρηθεί ως μια διαφορά στις καμπύλες ανάπτυξης όγκου. Δεξαμεθαζόνη ρυθμίζει πολλαπλές συνιστώσες τόσο έμφυτη και προσαρμοστική ανοσία.