Abstract

παραθυρεοειδούς ορμόνης-πρωτεΐνης που σχετίζονται με (PTHrP) διαθέτει μια ποικιλία από φυσιολογικές και αναπτυξιακές λειτουργίες και είναι επίσης γνωστή για τη διευκόλυνση της εξέλιξης πολλών κοινών καρκίνων, κυρίως σκελετική εισβολή τους, κυρίως με την αύξηση της οστικής απορρόφησης. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστεί αν θα μπορούσε να προωθήσει PTHrP επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ), μία διαδικασία που εμπλέκονται σε βλαστικά κύτταρα καρκίνου που είναι εξαιρετικά εμπλέκονται στην εισβολή καρκίνου και μετάσταση. EMT παρατηρήθηκε σε DU 145 κύτταρα καρκίνου του προστάτη που υπερεκφράζουν σταθερά είτε το 1-141 ή 1-173 ισομορφή της PTHrP, όπου υπήρχε προς τα πάνω ρύθμιση σαλιγκάρι και βιμεντίνης και προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης σε σχέση με τη γονική DU 145. Αντιθέτως, το αντίθετο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε σε καρκινικά κύτταρα PC-3 προστατικού όπου νοκ-κάτω μέσω βραδέος μεταγωγής siRNA υψηλά επίπεδα της PTHrP. Αυξημένη εξέλιξης του όγκου παρατηρήθηκε σε PTHrP υπερεκφράζουν DU 145 κύτταρα ενώ μειώθηκε εξέλιξη παρατηρήθηκε σε PTHrP-knockdown κυττάρων PC-3. PTHrP που υπερεκφράζουν DU 145 σχηματίζεται μεγαλύτερους όγκους όταν εμφυτευθούν orthoptopically σε γυμνά ποντίκια και σε μία περίπτωση οδήγησαν σε νωτιαίο μετάσταση, μια επίδραση που δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των ποντικών που εγχύθηκαν με γονικά κύτταρα DU 145. PTHrP-υπερεκφράζουν DU 145 κύτταρα προκάλεσε επίσης σημαντική καταστροφή των οστών, όταν εγχέεται στο κνήμες των γυμνών ποντικών, ενώ τα γονικά κύτταρα DU 145 προκαλείται λίγα σε καμία καταστροφή των οστών. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι PTHrP μπορεί να λειτουργήσει μέσω EMT να προωθήσουν μια επιθετική και μεταστατική φαινότυπο στον καρκίνο του προστάτη, μία διαδρομή σημασία σε καρκινικά βλαστικά κύτταρα. Έτσι, συνέχισε τις προσπάθειες για τη διαλεύκανση των οδών που εμπλέκονται στην PTHrP που προκαλείται από EMT, καθώς και να αναπτύξουν τρόπους για να στοχεύουν συγκεκριμένα σηματοδότησης PTHrP μπορεί να οδηγήσει σε πιο αποτελεσματικές θεραπείες για τον καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Ongkeko WM, Burton D, Kiang Α, Abhold Ε, Kuo SZ, Rahimy Ε, et al. (2014) παραθυρεοειδούς ορμόνης Σχετικές-Protein Προωθεί Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση στον καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 9 (1): e85803. doi: 10.1371 /journal.pone.0085803

Επιμέλεια: Seema Σινγκ, Πανεπιστήμιο της Νότιας Αλαμπάμα Mitchell Ινστιτούτο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 Ιουν του 2013? Αποδεκτές: 2 Δεκέμβρη, 2013? Δημοσιεύθηκε: 22, Ιανουαρίου 2014

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Merit Award Veterans Administration (LJ Deftos) υποστήριξε αυτό το έργο (https://www.research.va.gov/services/csrd/merit_review.cfm # .UcI2KPY-Πανεπιστημίου Στερεάς Ελλάδας). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς θα ήθελαν να δηλώσουν ότι αν και ο Robert M. Hoffman είναι συνδεδεμένες σε αντικαρκινικά, Inc., δεν υπάρχουν διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων και όλοι οι συγγραφείς δηλώνουν δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

Εισαγωγή

παραθυρεοειδούς ορμόνης που σχετίζονται με πρωτεΐνη (PTHrP) διαθέτει μια ποικιλία φυσιολογικών και αναπτυξιακές λειτουργίες, αλλά είναι επίσης γνωστό ότι διευκολύνει την πρόοδο πολλών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη. Εμείς και άλλοι έχουν δείξει προηγουμένως ότι PTHrP διεγείρει την ανάπτυξη των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη, εισβολή και μετάσταση, που λειτουργεί μέσω δύο παρακρινών /αυτοκρινών και intracrine οδούς [1] – [3]. PTHrP είναι γνωστό ότι ενεργοποιεί μια ποικιλία από μιτογόνο οδών συμπεριλαμβανομένων ΜΑΡΚ και ΡΙ3Κ /Akt, καθώς και μονοπάτια που διεγείρουν σκελετικές μεταστάσεις, μια από τις πιο συχνές διαταραχές που απειλούν τη ζωή σχετίζεται με τον καρκίνο [4] – [6] .Secreted PTHrP είναι γνωστό ότι μεσολαβούν κυτταρικές επιδράσεις της μέσω αλληλεπίδρασης με την πρωτεΐνη G-συζευγμένο ΡΤΗ /ΡΤΗγΡ υποδοχέα [7]. Συν-έκφραση της PTHrP και του υποδοχέα του έχει προηγουμένως ταυτοποιηθεί σε καρκίνο του προστάτη πρωτογενείς όγκους και τις αντίστοιχες οστικές μεταστάσεις τους [8]. Επιπλέον, Freemont κ.ά. έχουν αναφερθεί στο παρελθόν μια αύξηση στην έκφραση του υποδοχέα PTHrP σε προστάτη οστικές μεταστάσεις του καρκίνου σε σύγκριση με πρωτογενείς όγκους, υποδηλώνοντας έναν πιθανό ρόλο του μονοπατιού μεσολάβηση υποδοχέα στο σχηματισμό σκελετικές μεταστάσεις [9].

Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) είναι μια διαδικασία κατά την οποία τα επιθηλιακά κύτταρα υφίστανται κυτταροσκελετικές και μορφολογικές αλλαγές να αποκτήσουν φαινότυπο μεσεγχυματικών και είναι σημαντική σε κανονικές διαδικασίες όπως η ίνωση [10]. Λόγω των συνεπειών του στην κυτταρική προσκόλληση και EMT κινητικότητα είναι επίσης κρίσιμο ρόλο στην μετάσταση και εισβολή [11] καρκίνου, [12]. EMT μπορεί να χαρακτηρίζεται από την απώλεια των επιθηλιακών δεικτών όπως Ε-καδερίνης και αυξημένη έκφραση των μεσεγχυματικών πρωτεϊνών συμπεριλαμβανομένων βιμεντίνη και Ν-cadherin [13]. Η μεταγραφή παράγοντες σαλιγκάρι, Slug και Twist είναι γνωστό ότι καταστέλλει την έκφραση Ε-καδερίνης και επάγουν ΕΜΤ [14] – [16]. Άλλες ογκογόνο οδοί περιλαμβανομένης της Src, Ras, Wnt /β-κατενίνης, ΡΙ3Κ /Akt, ΜΑΡΚ, και ΤΟΡ-β έχουν όλα συνδεθεί με ΕΜΤ [17]. Πολλαπλές μελέτες έχουν δείξει ότι τα καρκινικά κύτταρα γίνονται πιο επεμβατικές και μεταστατικό αφού υποστούν EMT. Επιπλέον, ΕΜΤ έχει αποδειχθεί ότι προσδίδουν ιδιότητες βλαστικών κυττάρων προς κύτταρα καρκίνου του μαστού [18].

Δεδομένου ότι PTHrP έχει ένα ρόλο στην προώθηση εισβολή και μετάσταση στον καρκίνο του προστάτη και ότι ΕΜΤ είναι ένας από τους κύριους ρυθμιστές της αυτές οι ιδιότητες στον καρκίνο, το κρίσιμο ερώτημα που παρουσιάζονται είναι κατά πόσον PTHrP είναι ικανός να προωθήσει EMT σε καρκινικά κύτταρα. PTHrP έχει δειχθεί ότι επάγει EMT σε λίγα πλαίσια, και κατά τη διάρκεια του σχηματισμού ενδόδερμα βρεγματικό και νεφρική ινογένεση [19], [20], αν και η ικανότητα της PTHrP να ρυθμίζουν EMT στον καρκίνο έχει παραμείνει μη διερευνώνται. Στον καρκίνο του μαστού, οι προ-μεταστατικό επιδράσεις του ΤΟΡ-β, ένας ισχυρός επαγωγέας της ΕΜΤ, έχει δειχθεί ότι διαμεσολαβείται από PTHrP [21]. Στο σύνολό τους, η υπάρχουσα βιβλιογραφία δείχνει ότι η ρύθμιση του EMT από PTHrP στον καρκίνο είναι πολύ πιθανό. Σε αυτή τη μελέτη επιδιώξαμε να προσδιοριστεί ο ρόλος της PTHrP στη ρύθμιση ΕΜΤ στον καρκίνο του προστάτη κύτταρα μαζί με εισβολή και τη μετάσταση. Για τη θέσπιση ρόλο της PTHrP στη ρύθμιση του καρκίνου μετάσταση στα οστά και EMT παρέχει τόσο βασική και κλινική λογικές για την κατανόηση του μοριακού μηχανισμού των δράσεων PTHrP σε πολλούς κοινούς καρκίνους όπως του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η VA IACUC ενέκρινε αυτή τη μελέτη. Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου (ΝΙΗ Δημοσίευση Αριθμός 85-23) με τον αριθμό διασφάλισης A3873-01. Τα ζώα κρατήθηκαν υπό αναισθησία με ισοφλουράνιο κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Αυτά τα ζώα ήταν στενά παρατηρήθηκαν, ελέγχονται καθημερινά και ευθανασία στα πρώτα σημάδια της ταλαιπωρίας. Σημάδια της ταλαιπωρίας περιλαμβάνουν τυχόν μη φυσιολογικές κινήσεις, μη φυσιολογική διατροφή ή το ποτό συμπεριφορές, η έλλειψη αυτο-περιποίηση ή οποιαδήποτε άλλη μη φυσιολογική συμπεριφορά.

Cells

Οι γραμμές ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του προστάτη DU 145 και PC-3 και ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA) και αναπτύχθηκαν σε μονοστιβάδα σε RPMI 1640 (MediaTech, Herndon, VA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Gemini Bio Products, Woodland, CA) στους 37 ° C σε ένα υγροποιημένο επωαστή με 95% αέρα, 5% CO

2. Η κυτταρική γραμμή DU 145 επελέγη επειδή έχει χαμηλή συστατική έκφραση PTHrP και δεν αναπτύσσονται ή μεταστάσεις καλά σε μοντέλα όγκου ποντικού, σε αντίθεση με κύτταρα PC-3 [22] – [24]. Η κυτταρική σειρά PC-3, η οποία αρχικά απομονώθηκε από ένα αδενοκαρκίνωμα του προστάτη που είχε κάνει μετάσταση σε οστό, έχει μια οστεολυτική φαινότυπο στα ανοσοκατεσταλμένα μοντέλα ποντικού [22], [25].

κατασκευή πλασμιδίου

Τα πλασμίδια έκφρασης PTHrP που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη ήταν ανθρώπινο προπρο PTHrP1-87, PTHrP1-141 και PTHrP1-173? προπρο μορφές χρησιμοποιήθηκαν για να διευκολύνουν την έκκριση PTHrP. Τα κατασκευάσματα υποκλωνοποιήθηκαν κατευθυντικά στον φορέα έκφρασης ρΟΙ-ηβο (Promega, Madison, WI) και τα fidelities όλων των πλασμιδίων επιβεβαιώθηκαν με προσδιορισμό της αλληλουχίας του DNA και ειδική σε θέση ανοσοδοκιμασίες PTHrP [23], [26].

PTHrP επιμόλυνση και λεντοϊού μεσολάβηση φίμωση

Τα DU 145 κύτταρα προστάτη σπάρθηκαν σε πυκνότητα 2 × 10

4 κύτταρα /cm

2 σε δίσκους κυτταρικής καλλιέργειας 12 φρεατίων και επιμολύνθηκαν με 1 μα πλασμιδίου ανά φρεάτιο. ανθεκτικές Μεμονωμένες αποικίες G418 (800 μg G418 /ml) απομονώθηκαν 21-30 ημέρες αργότερα. Τα ρυθμισμένα μέσα από τις κυτταρικές αποικίες συλλέγονται αξιολογήθηκαν για έκφραση PTHrP με τοπο-ειδική ανοσοανιχνεύσεις και της PTHrP που εκφράζουν σταθερά κύτταρα DU145 επεκτάθηκαν [23], [26]. Έχει προηγουμένως δειχθεί ότι άγριου τύπου και του φορέα-επιμολυσμένα DU 145 εμφανίζουν ένα παρόμοιο φαινότυπο [27], [28]. Άγριου τύπου πατρικά κύτταρα DU 145 Επομένως, χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος για RT-qPCR και πειράματα matrigel εισβολή, ωστόσο παράλληλα πειράματα διεξήχθησαν με ένα άδειο παράγωγο ελέγχου φορέα-επιμολυσμένα. Τα κύτταρα PC-3 προστάτη υποβλήθηκε σε μια σταθερή νοκ ντάουν της PTHrP μέσω λεντοϊού siRNA. Τα κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε λεντοϊού μεταγωγή siRNA με ένα κατασκεύασμα αλληλουχία μη-στόχευσης.

Ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή PCR

Τα κύτταρα συλλέχθηκαν δύο ημέρες μετά ανακαλλιεργείται σε περίπου 70-80% συρροή. Συνολικά κυτταρικό λύμα συλλέχθηκε και RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ RNeasy (Qiagen). cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας Superscript III ανάστροφης μεταγραφάσης (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Σε πραγματικό χρόνο τα μείγματα αντίδρασης PCR παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας Ισχύς SYBR Green (Applied Biosystems, Foster City, CA), και λειτουργούν με τα 7,300 σύστημα πραγματικού χρόνου PCR (Applied Biosystems) χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρόγραμμα: 95 ° C για 10 λεπτά, 95 ° C για 30 s, και 60 ° C για 1 λεπτό, για 40 κύκλους. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με τη χρήση της μεθόδου Συγκριτικό ddCt και καμπύλες τήξης διεξήχθησαν για να εξασφαλιστεί η ειδικότητα προϊόντος. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν τεχνική και επαναλήφθηκαν τουλάχιστον δύο φορές ανεξάρτητα. έκφραση GAPDH γονιδίου μετρήθηκε ως ενδογενή έλεγχο. Εκκινητές έθιμο διέταξε (Eurofins MWG Operon, Huntsville, AL) χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες σειρές:

σαλιγκάρι Forward 5′-TCTGAGTGGGTCTGGAGGTG-3 ‘, σαλιγκάρι αντίστροφη 5′-CTCTAGGCCCTGGCTGCTAC-3′, GAPDH Forward 5’-CTTCGCTCTCTGCTCCTCC -3 ‘, GAPDH Reverse 5′-CAATACGACCAAATCCGTTG -3′, Ε-καδερίνης Forward 5’-GGCGGAGAAGAGGACCAGGACT-3 ‘, Ε-καδερίνης Reverse 5′-TGGCAGGGCGGGGAAGATACC-3′, 5’-βιμεντίνης Forward GGAAATGGCTCGTCACCTTCGT-3 ‘, βιμεντίνης Reverse 5’-AGAAATCCTGCTCTCCTCGCCT-3 ‘.

ανοσοφθορισμού

τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν και καλλιεργήθηκαν σε καλυπτρίδες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη και αποκλείστηκε σε ορό κατσίκας σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό ϋυΐββοοο σε θερμοκρασία δωματίου πριν από την επώαση με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού σε αντι-ανθρώπινη βιμεντίνη (Sigma Aldrich, St. Louis, ΜΟ). Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάζονται με ένα αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού FITC συζευγμένο δευτερογενές αντίσωμα (Chemicon, Temecula, CA) και αντίθετα με DAPI. Τέλος, SlowFade Gold αντιδραστήριο αντιξεθωριάσματος (Invitrogen, Carlsbad, CA) χρησιμοποιήθηκε για να τοποθετήσετε το κάλυμμα γλιστρά πάνω σε διαφάνειες. Φθορίζουσες εικόνες ελήφθησαν σε 40Χ χρησιμοποιώντας Leica DMIRE2 ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού και το πρόγραμμα του υπολογιστή Απλή PCI χρησιμοποιήθηκε για λήψη εικόνας.

Matrigel εισβολής Δοκιμασία

Εισβολή των PC3 και DU κύτταρα 145 μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Matrigel δοκιμασία εισβολής (Becton Dickinson, Bedford, ΜΑ). Transwell ένθετα με μέγεθος πόρου 8 μm καλύφθηκαν με μία τελική συγκέντρωση 1 mg /mL του Matrigel σε κρύο DMEM ελεύθερο ορού. Τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν, και 500 mL εναιωρήματος κυττάρων (1 χ 10

5 κύτταρα /mL) προστέθηκαν σε φρεάτια εις τριπλούν. Το κατώτερο τμήμα του transwell πληρώθηκε με 750 μΙ μέσου καλλιέργειας που περιέχει 0.5% ορό ως χημειοελκυστικό και αφέθηκαν να επωαστούν στους 37 ° C για 48 ώρες. Εισβάλλοντα κύτταρα στην κάτω επιφάνεια που πέρασε μέσα από το φίλτρο μονιμοποιήθηκαν και χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας κρυσταλλικό ιώδες σε γλουταραλδεΰδη και φωτογραφήθηκαν. Ο αριθμός των χρωματισμένων πυρήνων μετρήθηκε σε έναν προκαθορισμένο και συνεπή τμήμα κάθε φρεάτιο.

Ζώα

Έξι μηνών αρσενικό, σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια ποντικούς (SCID) στεγάστηκαν σε ένα φράγμα δωμάτιο φίλτρο και τρέφονται Purina τρωκτικών κατά βούληση τροφή. Τα ζώα αφαιμάχθηκαν κατά το τέλος της μελέτης χρησιμοποιώντας οπισθοκογχική μέθοδο.

ορθοτοπική Tumor Εμφύτευση

Υποσυρρέουσες DU145 και σταθερώς επιμολυσμένα DU145 PTHrP-(1-173)-ΟΡΡ κύτταρα ήταν προσφάτως θρυψινοποιήθηκαν, μετρήθηκαν και τοποθετήθηκαν σε πάγο αμέσως πριν την ένεση. Οι ποντικοί εγχύθηκαν με 10

6 κύτταρα υποδόριο χώρο του πλευρού του ζώου σε ένα συνολικό όγκο του ελεύθερου RPMI 1640 0,25 ml ορού. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν την συγκομιδή ιστό όγκου 4 εβδομάδες μετά τις ενέσεις των καρκινικών κυττάρων. θραύσματα όγκου (1 mm

3) παρασκευάστηκαν φρέσκα από υποδόριων όγκων και εμφυτεύονται εντός του προστάτη πλευρική λοβού του άλλου ποντικού SCID (22-24). Οι 1 χιλιοστό

3 τεμάχια όγκου αποκόπηκαν, μετράται με παχύμετρο και ζυγίζονται για να εξασφαλιστεί το ακριβές ποσό της έναρξης του όγκου χρησιμοποιήθηκε για κάθε ζώο. Η κάψουλα του προστάτη εκτέθηκε εξής χαμηλότερο μεσαίας γραμμής κοιλιακή τομή και ένα θραύσμα όγκου εισήχθη στην κάψουλα. Η κάψουλα του προστάτη κατόπιν κλείνεται με ένα 8-0 χειρουργικό ράμμα και της τομής στο κοιλιακό τοίχωμα κλείστηκε με ένα ράμμα χειρουργικό 6-0 σε μία στρώση [29].

Τα ζώα κρατήθηκαν υπό αναισθησία με ισοφλουράνιο κατά τη διάρκεια χειρουργική. Όλες οι διαδικασίες της λειτουργίας που περιγράφηκε παραπάνω διεξήχθησαν με 7 Χ μεγέθυνση μικροσκοπίου. Οι ποντικοί αξιολογήθηκαν 60 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου για την εξέλιξη του όγκου και τη μετάσταση με φθοριομέτρηση και για σκελετικές ανωμαλίες με ακτίνες Χ. Υψηλή μεγέθυνση απεικόνιση των όγκων που εκφράζουν GFP διεξήχθη με ένα στερεομικροσκόπιο φθορισμού Leica, μοντέλο LZ12, εξοπλισμένο με μία απεικόνιση 50 W λάμπα υδραργύρου και σε ολόκληρο το σώμα διεξήχθη σε ένα κουτί φωτός φωτίζεται από οπτικές ίνες μπλε φως (Research Lightools , Encinitas, CA) και απεικονίζεται χρησιμοποιώντας θερμοηλεκτρικά ψύχεται έγχρωμη κάμερα CCD (Hamamatsu Photonics, Bridgewater, NJ).

ενδοοστική ενέσεις

για να αξιολογηθεί η επίδραση της PTHrP στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη στα οστά, χρησιμοποιήσαμε ένα μοντέλο ενδο-κνημιαίο για προστάτη και οστικές μεταστάσεις του καρκίνου (1, 24). Μελετήσαμε πέντε τύποι σταθερώς επιμολυσμένα κύτταρα που εκφράζουν GFP DU145: (1) άγριου τύπου, (2) τον φορέα (PCI-neo), (3) PTHrP (1-87), (4) PTHrP (1-141) και ( 5) PTHrP (1-173) μετασχηματισμένα κύτταρα. Οι ποντικοί εγχύθηκαν με 10

6 κύτταρα σε 15 μΐ αποστειρωμένου PBS στο μυελό των οστών του δεξιού εγγύς κνήμη χρησιμοποιώντας μια βελόνα 26-gauge και σύριγγα Hamilton γυαλί. Η αριστερή κνήμη χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Οι ποντικοί αξιολογήθηκαν 60 ημέρες μετά τις ενέσεις intraosseous για σκελετικές ανωμαλίες με ακτίνες Χ [24]. Σκελετικές ακτίνες Χ εκτέθηκαν με 40 keV για 20 δευτερόλεπτα σε ένα ΡθχϊΙγοπ 5000 σειρά καταψύκτη ακτίνων Χ και Kodak X-Omat TL ταινίες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε έναν επεξεργαστή φιλμ Kodak. Για υψηλότερη ανάλυση απεικόνισης των ανωμαλιών των οστών, χρησιμοποιήσαμε ένα GE Εξερευνήστε Micro CT (GE Healthcare).

PTHrP Immunoassay

εκχυλίσματα κυττάρων και PTHrP μέσων μετρήθηκαν με RIA με βάση PTHrP (1- 34), PTHrP (38 έως 64), και το PTHrP (109-141), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30]. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν σε πολλαπλές αραιώσεις και εις τριπλούν.

Στατιστική Ανάλυση

Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση. Η στατιστική σημαντικότητα ελέγχθηκε με χρήση δύο δειγμάτων ανεξάρτητο t-test (2-tailed test) με το κατώτατο όριο ορίζεται σε

P

& lt?. 0.05

Αποτελέσματα

PTHrP υπερέκφραση Προωθεί η έκφραση των μεσεγχυματικών Μαρκαδόροι

Για να μελετήσουμε ρύθμιση της EMT, PTHrP ήταν σταθερά υπερεκφράζεται σε DU 145, μια κυτταρική σειρά καρκίνου του προστάτη με χαμηλή έκφραση βασική PTHrP, όπως καθορίζεται από ανοσολογική δοκιμή (Εικόνα 1Α). Δύο κλώνοι δημιουργήθηκαν, με μία υπερεκφράζουν τον 1-141 ισομορφή της PTHrP και η άλλη που υπερεκφράζουν τον 1-173 ισομορφή (Σχήμα 1Β). Και οι δύο κλώνοι που εμφανίζονται δείκτες EMT, εκφράζοντας κυρίως υψηλότερα επίπεδα των μεσεγχυματικών πρωτεϊνών σαλιγκάρι και βιμεντίνη και χαμηλότερα επίπεδα Ε-καδερίνης σε σχέση με τη γονική DU 145, όπως προσδιορίζεται με qRT-PCR (Εικόνα 1Β). Μετά την σταθερή υπερέκφραση της πλήρους μήκους PTHrP- (1-173) σε DU 145, βιμεντίνη και mRNA σαλιγκάρι έκφραση ήταν αυξημένα κατά 115 και 6,82 φορές αντίστοιχα, ενώ η έκφραση Ε-καδερίνης μειώθηκε αποδεδειγμένα από 2080 φορές. Ομοίως, σταθερή υπερέκφραση PTHrP- (1-141) αυξήθηκε βιμεντίνη και έκφραση σαλιγκάρι mRNA κατά 23,5 και 3,88 φορές αντίστοιχα, και μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης κατά 12,3 φορές. Τα δεδομένα εμφανίζονται με τη γονική παράγωγο άγριου τύπου ως έλεγχος. Σε ένα παράλληλο πείραμα, PTHrP υπερεκφράζουν DU 145 κύτταρα επέδειξαν 6.06 πλάσια επαγωγή σαλιγκάρι και 9.68 μείωση στην έκφραση Ε-καδερίνης σε σύγκριση με τον κενό φορέα επιμολυσμένα DU 145 παράγωγο (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η επαγωγή της EMT επαληθεύεται από μια δοκιμασία ανοσοφθορισμού. Overexpressions των δύο ισομορφών της PTHrP, εμφανίζουν μείωση της Ε-καδερίνης με μια αύξηση στην έκφραση της πρωτεΐνης βιμεντίνη (Σχήμα 1 C).

Α) Ποσοτικοποίηση των επιπέδων πρωτεΐνης PTHrP στον έλεγχο και ΡΤΗγΡ υπερεκφράζουν DU 145 κύτταρα με ανοσοπροσδιορισμό. Β) έκφραση του mRNA της PTHrP και EMT δείκτες στον έλεγχο και PTHrP-κύτταρα που υπερεκφράζουν DU 145. Γ) εικόνες ανοσοφθορισμού επιβεβαιώνει την υπερέκφραση της PTHrP, η προς τα πάνω ρύθμιση βιμεντίνη, και προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης σε PTHrP υπερεκφράζουν DU 145 κύτταρα.

Η

PTHrP Knockdown μειώνει την έκφραση των μεσεγχυματικών Markers

Για να καταδειχθεί περαιτέρω η ρύθμιση της ΕΜΤ με PTHrP σε καρκίνο του προστάτη, οι μόνιμοι PTHrP knockdown μέσω ρετροϊική μεταγωγή εκτελέσθηκε σε PC-3, μια κυτταρική σειρά καρκίνου του προστάτη με υψηλή βασική έκφραση PTHrP, όπως προσδιορίζεται με ανοσοδοκιμασία (Σχήμα 2Α). Στα κύτταρα PC-3-KD, η έκφραση της PTHrP μειώθηκε στο 15% του ελέγχου PC-3 (Εικόνα 2Β), ενώ τα επίπεδα των σαλιγκαριών και βιμεντίνης ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω από 3.03 και 3.73 φορές, αντίστοιχα, και Ε-καδερίνη έκφραση ανυψώθηκε από 2.30 φορές (Σχήμα 2Β). Η αλλαγή στην έκφραση πρωτεΐνης EMT καταδεικνύεται με μία δοκιμασία ανοσοφθορισμού. Να χτυπήσει κάτω PTHrP ρυθμίζει προς τα κάτω βιμεντίνη και απορυθμίζει E-cadherin, η οποία επιβεβαιώνει τα στοιχεία qPCR (Σχήμα 2C). Μαζί με το σχήμα 1, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η δραστηριότητα PTHrP ή έκφραση προάγει ΕΜΤ στον καρκίνο του προστάτη.

Α) Ποσοτικοποίηση των επιπέδων πρωτεΐνης PTHrP στον έλεγχο και ΡΤΗγΡ-knockdown PC-3 κύτταρα με ανοσοπροσδιορισμό. Β) έκφραση του mRNA της PTHrP και EMT δείκτες στον έλεγχο και ΡΤΗγΡ-knockdown κυττάρων PC-3. Γ) εικόνες ανοσοφθορισμού επιβεβαιώνει την υπερέκφραση της PTHrP η προς τα πάνω ρύθμιση της βιμεντίνης, και προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης σε PC-3 κύτταρα ελέγχου και ΡΤΗγΡ-knockdown.

Η

PTHrP Ρυθμίζει εισβολή και Προς τα πάνω ρύθμιση ΜΜΡ-9

προκειμένου να διαπιστωθεί ότι η ενεργοποίηση της PTHrP ή EMT αποτέλεσμα αυξημένη διεισδυτικότητα σε πειραματικό μας σύστημα, ένας προσδιορισμός matrigel εισβολή πραγματοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η σχετική διεισδυτικότητα του DU 145-PTHrP (1-141), DU 145-PTHrP (1-173), και PC-3-KD κυττάρων σε σύγκριση με τις αντίστοιχες τους ελέγχους τους. DU 145-PTHrP (1-141) και DU 145-PTHrP (1-173) κύτταρα βρέθηκαν να είναι 3,0 (p & lt? 0,01) και 2,9 (p & lt? 0,05) φορές πιο επεμβατική από τα γονικά κύτταρα DU 145, αντίστοιχα ( Σχήμα 3Α). Εν τω μεταξύ, τα κύτταρα PC-3-KD βρέθηκαν να είναι μόνο 0,5 φορές (ρ & lt? 0,01) ως επεμβατική ως γονικά κύτταρα PC-3 (Σχήμα 3Β). Σε ένα παράλληλο πείραμα, PTHrP- (1-141) και – (1-173) DU 145 κύτταρα έδειξε μια 2.0 (ρ & lt? 0,5) και 2,1 φορές (ρ & lt? 0,05) αύξηση matrigel εισβολή σε σύγκριση με το κενό οργανισμούς φορείς επιμολυσμένα DU 145 παράγωγο, αντίστοιχα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τέλος, PTHrP υπερέκφραση σε DU 145 παρατηρήθηκε να ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση της ΜΜΡ-9 με 17,1 και 7,10 φορές σε PTHrP- (1-141) και PTHrP- (1-173) που εκφράζουν τα παράγωγα, αντίστοιχα, ενώ knockdown σε PC-3 μειωτικά MMP-9 κατά 25,1 φορές (Σχήμα 3C).

Α) δοκιμασία εισβολής Matrigel δείχνει αύξηση εισβολή των κυττάρων DU145 κατά την υπερέκφραση είτε PTHrP 1-141 ή 1-173. Β) Δοκιμασία εισβολή Matrigel που δείχνει μείωση της διήθηση των PC3 κυττάρων μετά knockdown της PTHrP. επίπεδα C) mRNA της ΜΜΡ-9 σε PTHrP-κύτταρα που υπερεκφράζουν DU145 και ΡΤΗγΡ-knockdown κυττάρων PC3 σε σχέση με τις αντίστοιχες τους ελέγχους τους. * Υποδηλώνει p & lt? 0,05, ** υποδεικνύει ρ & lt?. .01

Η

PTHrP προωθεί την ανάπτυξη των όγκων και την καταστροφή των οστών σε ένα /Ενδοοστική μοντέλο ποντικού ορθοτοπική

DU 145 και DU 145- (1-173) PTHrP κύτταρα διαμολύνθηκαν σταθερά με ένα πλασμίδιο έκφρασης GFP και εμφυτεύθηκαν ορθοτοπικά μέσα στην κλίνη του προστάτη γυμνών ποντικών ή απευθείας στο οστό, όπως περιγράφηκε προηγουμένως (1). Αν και όλες οι όγκοι ποντικών που σχηματίζεται, εκείνοι εμφυτεύονται με DU 145-PTHrP (1-173) κύτταρα σχηματίζονται σημαντικά μεγαλύτερους όγκους σε σύγκριση με εκείνους που ενέθηκαν με φυσιολογικά κύτταρα DU 145. Αντιπροσωπευτικές εικόνες δείχνουν εκτεταμένη μάζα του όγκου σε ποντικούς που ενέθηκαν με DU 145-PTHrP (1-173) κυττάρων σε σύγκριση με τα ποντίκια που ενέθηκαν με τη γονική DU 145 (Σχήμα 4Α). Επιπλέον, η μετάσταση στη σπονδυλική στήλη παρατηρήθηκε σε έναν από τους ποντικούς που εγχύθηκαν με 145 DU-PTHrP (1-173), ενώ δεν ποντικούς που ενέθηκαν με DU 145 σχηματίζεται μεταστάσεις (Εικόνα 4Β). DU 145 ή DU 145-φορέα κύτταρα που σχηματίζονται δεν όγκου όταν εγχέεται σε ποντίκια κνήμες, ενώ DU 145-PTHrP (1-141) ή DU 145-PTHrP (1-173) κύτταρα εγχέονται σε ποντικούς κνημών οδήγησε στο σχηματισμό όγκων, την εισβολή και την καταστροφή του οστού (Σχήμα 5), επιβεβαιώνοντας την καθιερωμένη ρόλος της PTHrP στην οστική απορρόφηση. Τέλος, η έκφραση της PTHrP σε όγκους επιβεβαιώθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (Σχήμα 5Β).

Α) ορθοτοπική μοντέλο ποντικού που δείχνει ένα ποντίκι ένεση με κύτταρα DU145-GFP. Β) Ποντίκι ένεση με DU 145-PTHrP (1-173) κύτταρα. Γ) την απόδειξη της καταστροφής των οστών σε ποντικό ένεση με 1-173) κύτταρα (DU 145-PTHrP. Δ) μετάσταση σπονδυλικής στήλης σε ένα ποντίκι ένεση με 1-173) κύτταρα (DU 145-PTHrP.

Η

Α) X-ray και UCT Εικόνες που δείχνουν την επίδραση της PTHrP υπερέκφραση για την καταστροφή των οστών σε ένα intraosseous ποντίκι μοντέλο. Κνήμη των ποντικών που έλαβαν PTHrP-υπερεκφράζουν DU 145 εμφανίζεται σημαντική καταστροφή των οστών σε σύγκριση με τον έλεγχο. Β) Ο όγκος του προστάτη DU 145-GFP-PTHrP1-173 αφαιρέθηκε από το ποντίκι, μονιμοποιήθηκαν και χρωματίστηκαν ανοσοϊστοχημικά για PTHrP χρησιμοποιώντας ένα σύστημα υπεροξειδάσης κοχλιαρίας βιοτίνης-στρεπταβιδίνη (καφέ προϊόν αντίδρασης δεικνύει έκφραση PTHrP).

Η

Συζήτηση

Έχουμε εντοπίσει PTHrP όχι μόνο ως ένα κρίσιμο μεσολαβητής της εξέλιξης όγκων σε καρκίνο του προστάτη, αλλά επίσης ως υποκινητή της EMT. Ενώ PTHrP έχει δειχθεί ότι επάγει EMT σε ανάπτυξη [10], [31], παρατήρηση μας ότι προωθεί EMT στον καρκίνο, καθώς παραμένει νέο εύρημα. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει ότι PTHrP μπορεί να έχει ένα ακόμη πιο σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου από πίστευαν προηγουμένως, δεδομένου ότι η ικανότητα να ρυθμίζει EMT συνεπάγεται τη δυνατότητα να ρυθμίζουν μια ποικιλία από ιδιότητες που σχετίζονται με την πρόοδο του καρκίνου συμπεριλαμβανομένης της εισβολής, μετάσταση, κυτταρική κινητικότητα, κυτταρικής προσκόλλησης , αγγειογένεση, και βλαστική ικανότητα /ογκογονικότητα [11], [18], [32] – [34]. Η πρόγνωση για προχωρημένο καρκίνο του προστάτη παραμένει φτωχή λόγω των συχνών μετάσταση στα οστά και εισβολή [35], [36]. Έτσι, η στόχευση της PTHrP μπορεί να οδηγήσει σε πιο αποτελεσματικές θεραπείες για τον καρκίνο του προστάτη.

Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι PTHrP υπερέκφραση σε DU 145 κύτταρα που προκαλείται από EMT και προώθησε την εισβολή, κακοήθεια, ικανότητα και τη μετάσταση, ενώ PTHrP νοκ ντάουν σε κύτταρα PC-3 που προκαλούνται αντίθετα αποτελέσματα. Επιπλέον παρατηρήσαμε ότι η κυτταρική σειρά PC-3 έχει υψηλή βασική έκφραση της PTHrP, όπως προσδιορίζεται με PTHrP ανοσοδοκιμασία και είναι εγγενώς περισσότερο μεταστατικό και επεμβατικές σε σύγκριση με DU 145, το οποίο έχει χαμηλή βασική έκφραση PTHrP. Αυτές οι παρατηρήσεις θέτουμε ότι PTHrP μπορεί να διευκολύνει όχι μόνο τη μετάσταση με την προώθηση επαναρρόφηση οστού, αλλά μπορεί επίσης να είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής των επιθετικών φαινοτύπου σε καρκίνο του προστάτη. Αμφότερα τα 1-141 και 1-173 ισομορφές της PTHrP βρέθηκαν να προωθούν EMT, συνάδει με το γεγονός ότι η κλασική ενεργό κέντρο βρίσκεται κοντά στο αμινο-τελικό άκρο, όπως φαίνεται από τις προηγούμενες μελέτες [37]? Ωστόσο, επιπλέον επεξεργασμένων πεπτιδίων της PTHrP μπορούν επίσης να είναι σημαντικοί μεσολαβητές της δράσης αυτής. Στόχευση όλων των ισομορφών της PTHrP για αντικαρκινική θεραπεία μπορεί αναγκαίο, αν και στοχοθέτηση του 1-141 ισομορφή μπορεί να είναι πρωταρχικής σημασίας καθώς αντιπροσωπεύει το μεγαλύτερο μέρος της έκφρασης PTHrP σε ανθρώπους.

Οι μεταγενέστεροι στόχους που ενεργοποιούνται από PTHrP περιλαμβάνουν σαλιγκάρι, ΑΡ-1, CREB, ERK1 /2, VEGF, ΡΙ3Κ /Akt και Κυκλίνη D1 [20], [38] – [45]. Σαλιγκάρι προωθεί EMT με άμεση μεταγραφική καταστολή της E-cadherin [15]. CREB ρυθμίζει προς τα πάνω του VEGF που με τη σειρά του προωθεί την EMT, εισβολή και την αγγειογένεση [46], [47]. Η οδός ΡΙ3Κ /Akt είναι ένας βασικός ρυθμιστής του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και έχει επίσης αποδειχθεί ότι επάγει ΕΜΤ σε μια ποικιλία καρκίνων [48]. ΑΡ-1 δείχθηκε ότι εμπλέκεται στην ΤΟΡ-β επαγόμενη EMT [49]. Η υπερέκφραση της κυκλίνης D1 έχει δειχθεί ότι επάγει γλοιώματος εισβολή αυξάνοντας δραστικότητα μεταλλοπρωτεϊνάσης και κυτταρική κινητικότητα [50]. Επικρατούσα μελέτες δείχνουν ότι PTHrP, ΤΟΡ-β, EGF, και VEGF να συνεργάζονται μέσω της ενεργοποίησης του ERK1 /2 για την επαγωγή EMT κατά την διάρκεια της νεφρικής ινογένεση [19], και ότι σαλιγκάρι είναι ένας άμεσος πρώιμος στόχος της PTHrP σε σχηματισμό ποντικού βρεγματικό ενδόδερμα [20]. Ένα ή ένας συνδυασμός αυτών των οδών είναι πιθανό να εξηγήσει την επαγωγή της ΕΜΤ και εισβολής που παρατηρήθηκαν στα πειράματα μας, στην οποία επιβεβαίωσε την επαγωγή του σαλιγκαριού με PTHrP. Αν και έχει δειχθεί στο παρελθόν ότι PTHrP είναι σε θέση να ρυθμίζει αυξητικά σαλιγκάρι μεταγραφή απουσία του de σύνθεσης ηονο πρωτεΐνης [20], παραμένει ασαφές αν αυτή η επίδραση είναι μέσω άμεσης σύνδεσης με τον υποκινητή σαλιγκάρι ή μέσω της ενεργοποίησης του μονοπάτια σηματοδότησης όπως Akt ότι είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν σαλιγκάρι. Είτε έτσι είτε αλλιώς, περαιτέρω μελέτες θα χρειαστούν για να επιβεβαιώσουν τον μηχανισμό της PTHrP που προκαλείται EMT στον καρκίνο του προστάτη.

Είναι πιθανό ότι διάφορες άλλες οδοί βασίζονται σε PTHrP για την προώθηση της EMT, εισβολή και τη μετάσταση. ΤΟΡ-β, ένας ισχυρός επαγωγέας της ΕΜΤ, έχει δειχθεί σε καρκίνο του μαστού για την προώθηση της έκφρασης PTHrP με αποτέλεσμα την καταστροφή των οστών [21]. Διάφορα ογκοπρωτεΐνες συμπεριλαμβανομένων Ras, trp-met, Src έχουν όλα δειχθεί να στοχεύσουν PTHrP και επίσης έχουν αποδειχθεί ρόλους στην EMT, εισβολή και μετάσταση [51] – [53]. Ιδιαίτερο ενδιαφέρον θα ήταν Indian hedgehog, το οποίο είναι γνωστό ότι ρυθμίζει PTHrP κατά την πρώιμη ανάπτυξη των οστών και των χόνδρων [54], [55]. Μέλη της οικογένειας hedgehog ενεργοποιούνται ανωμάλως σε μια ποικιλία καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη, έχουν δειχθεί ότι προάγουν έμμεσα EMT, και θεωρία να έχουν ένα ρόλο στη μεταμόρφωση των ενήλικων βλαστικών κυττάρων σε καρκινικά βλαστικά κύτταρα [56] – [59] . Θα ήταν ενδιαφέρον να διαπιστωθεί αν Ihh βασίζεται σε PTHrP για την επαγωγή της EMT και άλλες κακοήθεις ιδιότητες στον καρκίνο.

Συνεχίζεται η έρευνα συνεχίζεται για να ενισχύσουν τη θεωρία ότι καρκινικά βλαστικά κύτταρα είναι οι κύριοι παράγοντες της εξέλιξης του καρκίνου και καθοριστικοί παράγοντες της θεραπευτική απόκριση [60]. Έτσι, ένα σημαντικό ζήτημα να εξεταστεί είναι αν PTHrP μπορούν να ρυθμίζουν τον καρκίνο του προστάτη βλαστικά κύτταρα μέσω μιας EMT μεσολάβηση οδού. Όπως EMT έχει δειχθεί προηγουμένως να επάγουν τις ιδιότητες του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων [18], έπεται ότι θα πρέπει PTHrP δυνητικά να είναι σε θέση να ρυθμίζουν τις ιδιότητες των βλαστικών κυττάρων στον καρκίνο του προστάτη και έτσι μπορεί να είναι ένα πολύτιμο θεραπευτικό στόχο για την πρόληψη της υποτροπής και μετάσταση. Καρκίνο του προστάτη βλαστικά κύτταρα έχουν προηγουμένως απομονωθεί και χαρακτηρίζεται από CD44

+ /CD133

+ /α2β1

hi φαινότυπο [61]. Μελλοντικές εργασίες θα πρέπει να επικεντρωθεί στην ικανότητα της PTHrP να ρυθμίσει αυτό το διαμέρισμα στον καρκίνο του προστάτη.

Η διαπίστωση ότι PTHrP προκαλεί EMT προωθώντας παράλληλα την εισβολή και την ανάπτυξη του όγκου υποδηλώνει ότι οι θεραπείες που στοχεύουν PTHrP μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με συμβατικές θεραπείες για αναστολή της διήθησης και μετάστασης του καρκίνου του προστάτη, ειδικά για επαναλαμβανόμενες όγκους. Έχουμε διαλογή προηγουμένως μια βιβλιοθήκη ενώσεων και προσδιόρισε αρκετές που είναι ικανά να αναστέλλουν την έκφραση PTHrP και την ανάπτυξη των κυττάρων στον καρκίνο του πνεύμονα [62]. Θα ήταν μεγάλο κλινικό ενδιαφέρον για την επέκταση αυτών των αποτελεσμάτων για τον καρκίνο του προστάτη και να καθοριστεί αν τέτοια φάρμακα είναι επίσης ικανές αποκλεισμού PTHrP επαγόμενης ΕΜΤ και εισβολή. Εν τω μεταξύ, περαιτέρω προσπάθειες για το χαρακτηρισμό των οδών που εμπλέκονται στην PTHrP επαγόμενη EMT μπορεί να οδηγήσει στην αποκάλυψη ενός ρόλου για PTHrP στην ανάπτυξη καρκίνου των βλαστικών κυττάρων και σε νέες θεραπείες που θα μπορούσαν να βελτιώσουν σημαντικά την πρόγνωση του μεταστατικού καρκίνου του προστάτη (1, 57).