Αφηρημένο

πορογενές αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος κατάταξη 4 για τον ασθενή »θανάτου από κακοήθη νόσο στις δυτικές χώρες, χωρίς ικανοποιητική θεραπεία. Εμείς επανεξέτασε ακριβέστερα τις αποακετυλάσες ιστόνης (

HDAC

) και Sirtuin (

SIRT

) πρότυπα γονιδιακής έκφρασης σε καρκίνο του παγκρέατος με περισσότερους όγκους του παγκρέατος και των φυσιολογικών ιστών. Έχουμε, επίσης, εξέτασε τις πιθανές σχέσεις μεταξύ

HDAC

επίπεδα γονιδιακής έκφρασης και μακροχρόνια έκβαση της νόσου. Επιπλέον, έχουμε αξιολογηθεί με τη χρήση ενός

in vitro

μοντέλο σύστημα της ανθρώπινης παγκρεατικής κυτταρικής γραμμής όγκου αν HDAC7 knockdown μπορεί να επηρεάσει τη συμπεριφορά των κυττάρων. Αναλύσαμε 29 παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα (PA), 9 χρόνια παγκρεατίτιδα (CP), 8 καλοήθη παγκρέατος (BP) και 11 φυσιολογικά παγκρέατος ιστούς. Σχετικά με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα, ήμασταν σε θέση να εισπράξει βιοψίες στην περιφέρεια του όγκου. Για να εκτιμηθεί η πιθανή εμπλοκή του HDAC7 της ικανότητας πολλαπλασιασμού των κυττάρων, έχουμε δημιουργήσει ανασυνδυασμένο ανθρώπινο Panc-1 όγκου που υποεκφράζονται ή υπερεκφράζεται HDAC7. Η έκφραση του

HDAC1,2,3,4,7 και Nur77

αυξήθηκε σε δείγματα PA σε επίπεδα σημαντικά υψηλότερα από αυτά που παρατηρήθηκαν στην ομάδα της CP (

σ

= 0,0160? 0.0114? 0,0227? 0,0440? 0,0136? 0,0004, αντίστοιχα). Η έκφραση της HDAC7, ήταν σημαντικά μεγαλύτερη στην ΠΑ σε σύγκριση με δείγματα ιστού BP (

σ

= 0,05). Τα μέσα επίπεδα μεταγραφής του mRNA της ΠΑ για

HDAC7

και

HDAC2

ήταν υψηλότερες σε σύγκριση με τον ομόλογό βιοψίες τους που λαμβάνονται στην περιφέρεια του όγκου (

σ

= 0,0346, 0,0053, αντίστοιχα) . Επιπλέον, τα δεδομένα που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας συνεστιακή μικροσκοπία και μία ποσοτική μέθοδο χρώση ανοσοφθορισμού υποστηρίζουν σθεναρά την υπερέκφραση HDAC7 σε χειρουργικά δείγματα ΡΑ. Ο αριθμός των θανάτων και των υποτροπών κατά το τέλος της παρακολούθησης ήταν σημαντικά μεγαλύτερη σε ασθενείς με υπερέκφραση του

HDAC7

. Είναι ενδιαφέρον ότι, ο ρυθμός αύξησης ήταν σημαντικά μειωμένη στην περίπτωση του κυττάρου που φέρει shRNA κατασκεύασμα στόχευσης γονιδίου που κωδικοποιεί HDAC7 σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα Panc-1 του όγκου (ρ = 0,0015) σε 48 ώρες και 96 ώρες (ρ = 0,0021). Αυτή η μελέτη υποστηρίζει σθεναρά την ιδέα ότι HDAC7play ένα ρόλο σε παγκρεατικά εξέλιξη αδενοκαρκίνωμα

Παράθεση:. Ouaïssi Μ, Silvy F, Loncle C, Ferraz da Silva D, Martins Abreu C, Martinez E, et al. (2014) Περαιτέρω χαρακτηρισμός του

HDAC

και

SIRT

γονιδιακής έκφρασης Μοτίβα στον Καρκίνο του παγκρέατος και η σχέση τους με την πορεία της νόσου. PLoS ONE 9 (10): e108520. doi: 10.1371 /journal.pone.0108520

Επιμέλεια: Wei-Guo Zhu, το Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Κέντρο Επιστημών Υγείας, Κίνα

Ελήφθη: 17 του Μάρτη 2014? Αποδεκτές: 24 Ιουνίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 2 Οκτωβρίου του 2014

Copyright: © 2014 Ouaïssi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Τα κλινικά δεδομένα ομαδοποιούνται σε: SIRIC- ιστοσελίδας Ολοκληρωμένο Recherche en Cancérologie, πρόγραμμα με τίτλο: Εναλλακτικές στρατηγικές του παγκρέατος θεραπείες του καρκίνου. Οι αιτήσεις μπορούν να αποστέλλονται με τον επικεφαλής του τμήματος, Dominique Lombardo (τηλ +33 (0) 491 324 402)

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από θεσμικής χρηματοδότησης από INSERM (Παρίσι, Γαλλία) και το Aix -Μασσαλία Université (Μασσαλία, Γαλλία) και με επιχορήγηση Inca-DGSO-INSERM 6038 από τοποθεσίες de Recherche Intégrée sur le Καρκίνο (SIRIC). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή αδενοκαρκίνωμα

πόρου του παγκρέατος είναι κατάταξη 4 για τον ασθενή »θανάτου από κακοήθη νόσο στις δυτικές χώρες [1]. Η επιθετικότητα του καρκίνου αυτού καταδεικνύεται από ένα ποσοστό θνησιμότητας της νόσου σχετίζεται στενά προσεγγίζει τη συχνότητα [2]. Του καρκίνου διάχυσης και του λογαριασμού μετάσταση περίπου το 90% όλων των θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο [2]. Μετάσταση ακολουθεί μια πολλών σταδίων πολύπλοκες διαδικασίες στις οποίες γειτονικές υγιή ιστό είναι εισέβαλαν από πρωτογενή κύτταρα όγκου, η οποία έχει πρόσβαση στην συστηματική κυκλοφορία και τελικά πολλαπλασιάζονται σε απομακρυσμένες θέσεις σε μακροσκοπικό δευτερογενείς όγκους μέσω του περιαγγειακή και /ή perilymphatic ιστού [3]. Στην περίπτωση του καρκίνου του παγκρέατος, οι περισσότεροι από τους ασθενείς έχουν ήδη μεταστάσεις κατά τη στιγμή της διάγνωσης. Ένας αριθμός ερευνών έχουν εστιάσει στην αναγνώριση των πιθανών δεικτών που μπορεί να επιτρέψει την έγκαιρη διάγνωση του καρκίνου του παγκρέατος. Τα συγκεκριμένα γεγονότα που προάγουν την καρκινογένεση και τον καρκίνο εξέλιξη που συνδέεται με τις πολύπλοκες μοριακές τροποποιήσεις, όπως η μεθυλίωση του DNA, ακετυλίωση ιστονών, φωσφορυλίωση, ubiquitylation και ADP ριβοζυλίωση. Επί του παρόντος, τα αποτελέσματα από τη βασική έρευνα υπογραμμίζουν τη σημασία της ακετυλίωσης και αποακετυλίωσης σε επίπεδο όχι μόνο ιστόνης λυσίνης υπολείμματα αλλά και άλλους κυτταρικούς παράγοντες που υποτίθεται ότι παρεμβαίνει στην ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης. Στην πραγματικότητα, η σταθερή-μέλος των ακετυλίωση των ιστονών πυρήνα ελέγχεται από τις αντίθετες ενέργειες της ιστόνης actetyltransferases (καπέλα) και αποακετυλάσες ιστόνης (HDACs) των οποίων οι δραστηριότητες συσχετίζονται με την ενεργοποίηση του γονιδίου και του γονιδίου καταστολής ή αποσιώπηση [4]. Αυξανόμενη γνώση σχετικά με τις HDACs δείχνει ότι είναι ρυθμιστές της ανάπτυξης, της διαφοροποίησης και τον κυτταρικό θάνατο (απόπτωση). Η δυσλειτουργία του μεταγραφική καταστολή διαμεσολαβείται από HDACs μπορεί να οδηγήσει σε καρκινογένεση. Πράγματι, η διαμόρφωση των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων που κωδικοποιούν HDACs (υπερ- και /ή υπο-έκφραση) έχει αναφερθεί για διαφορετικούς τύπους καρκίνου [5], [6], [7], [8]. Ο χαρακτηρισμός των βασικών γονίδια που παίζουν ρόλο στην ανάπτυξη του παγκρέατος όγκου μπορεί όχι μόνο να επιτρέψει να αποκαλύψει νέα βιοδείκτες, η οποία θα γίνει το επίκεντρο της εντατικής έρευνας ενδιαφέρον, αλλά θα ρίξουν επίσης φως στο δυναμικό γονιδιακά προϊόντα να αξιοποιηθούν για το σχεδιασμό των επιλεκτικών μέσων να παρεμβαίνει με την εξέλιξη του όγκου. Πρόσφατες μελέτες έδειξαν [9], [10] ότι HDAC2 υπερεκφράστηκε σε δείγματα παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα ιστού. Προκειμένου να παρέχουν πληροφορίες για τη βιολογική συμπεριφορά του καρκίνου του παγκρέατος και να εντοπίσει νέες δυνατότητες βιοδείκτες, έχουμε τα τελευταία χρόνια ξεκίνησε μια μελέτη με σκοπό να εξετάσει τα επίπεδα του

HDAC

και

SIRT

γονίδια έκφραση σε ένα σύνολο χειρουργικά παγκρεατικών ιστών συμπεριλαμβανομένων 11 δείγματα παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα και ένα κανονικό πάγκρεας ιστό. Παρά το σχετικά μικρό αριθμό των δειγμάτων που εξετάστηκαν, βρήκαμε αυξημένη έκφραση του HDAC7, ένα αποακετυλάσης τάξη IIa, σε 9 από 11 δείγματα [11], [12]. Ωστόσο, αν και έχουμε χρησιμοποιήσει μία κανονική παγκρεατική ως βαθμονομητή για μέτρηση γονιδιακής έκφρασης και άλλα δείγματα κοντά ή μακριά από τον όγκο ως έλεγχοι, πιστεύαμε ότι οι περαιτέρω έρευνες χρησιμοποιώντας ένα μεγαλύτερο αριθμό των κανονικών παγκρεατικών ιστών και δείγματα όγκων που απαιτούνται για την επανεξετάσουν με μεγαλύτερη ακρίβεια το

HDAC

και

SIRTs

πρότυπα γονιδιακής έκφρασης για τον καρκίνο του παγκρέατος. Επιπλέον, έγιναν προσπάθειες να εξετάσει την πιθανή σχέση μεταξύ της έκφρασης των γονιδίων HDAC και την έκβαση της νόσου. Μπορούμε επίσης να αξιολογήσει χρησιμοποιώντας ένα

in vitro

μοντέλο του συστήματος του ανθρώπινου παγκρέατος καρκινικών κυττάρων γραμμή αν HDAC7 νοκ ντάουν μπορεί να επηρεάσει τη συμπεριφορά των κυττάρων.

Υλικά και Μέθοδοι

Θέμα πληθυσμό

Από το Μάιο 2007 μέχρι τον Αύγουστο του 2012, 29 του παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα (PA), 9 χρόνια παγκρεατίτιδα (CP), 8 καλοήθεις όγκους του παγκρέατος, συμπεριλαμβανομένων ορώδες κυσταδένωμα (SC) n = 2, βλεννώδες κυσταδένωμα (n = 2), καλοήθεις IMPN ( n = 2), καλοήθης κύστη (retentional κύστη, n = 1), και παγκρεατικών ενδοκρινικών όγκων (n = 1), ελήφθησαν υπεύθυνος στο τμήμα της Χειρουργικής στο La Timone Νοσοκομείο (Μασσαλία, Γαλλία). Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε θωρακική αυξημένης αντίθεσης και κοιλιακό αξονική τομογραφία, κοιλιακό υπερηχογράφημα, μαγνητική τομογραφία και τον έλεγχο του αίματος. PA δεν είχε καμία προεγχειρητική θεραπεία πριν την επέμβαση. Είκοσι δύο pancreaticoduodenectomies (PD), και 7 αριστερή παγκρεατεκτομές διεξήχθησαν για παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα, αντίστοιχα. Δύο διαδικασίες PD, 4SP και 3 Frey [13] έγιναν για CP. Τέσσερις PD, 2 SP και 2 παγκρεατεκτομές έσω πραγματοποιήθηκαν για καλοήθεις βλάβες. Τέσσερις κανονική παγκρέατος βιοψίες (NP) ελήφθησαν κατά τη διάρκεια της μεταμόσχευσης ήπατος στην ηπατεκτομή δότη, 7others ελήφθησαν κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης susmesocolic όταν ριζοσπαστική γαστρεκτομή απαιτείται αριστερά παγκρεατεκτομή: 3 ampulloma (AP1-3), 2 χολαγγειοκαρκίνωμα του αγωγού κύρια χολής (BD1-2) , 1 γαστρίνωμα του δωδεκαδάκτυλου (G), 1 φυσιολογικά δείγματα γειτονικούς ιστούς μετά τη γαστρική εκτομή για γαστρικό αδενοκαρκίνωμα. Επιπλέον, 11 δείγματα ιστών ελέγχου που λαμβάνονται στην περιφέρεια των χειρουργικών δειγμάτων από διαφορετικούς ασθενείς με ΡΑ συμπεριελήφθησαν επίσης σε αυτή τη μελέτη. Τα δεδομένα προοπτικά συλλέγονται και ένα τυποποιημένο ερωτηματολόγιο ολοκληρώθηκε κατά το χρόνο της παρακολούθησης και της αξιολόγησης της μελέτης. Πριν από την εγχείρηση όλοι οι ασθενείς είχαν υπογράψει ένα έντυπο συγκατάθεσης που είχαν εγκριθεί από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας. οι άνθρωποι της επιτροπής προστασίας της Νότιας Μεσογείου II, που εγκρίθηκε με την υπουργική απόφαση με ημερομηνία 31 Μαΐου του 2012, που έχουν συσταθεί βάσει εντολής του Γενικού Διευθυντή του Οργανισμού Υγείας Περιφέρεια Provence-Alpes-Côte d’Azur της 13ης Ιουνίου του 2012, συγκείμενο από τους L. BOYER, V. PRADEL, Β DUSSOL, Γ Sichel, Μ CAILLOL, F. VINCENT, Γ NAURAYE, JP. VIDAL, O. SCHWEITZER, J. ACCIARO, συζητήθηκαν στην Ολομέλεια την αποθήκευση και την προετοιμασία για την επιστημονική στοιχεία του ανθρώπινου σώματος που προσδιορίζονται από το Υπουργείο Ανώτατης Εκπαίδευσης και Έρευνας στο πλαίσιο της αναφοράς DC-2013-1857 και του οποίου επιστημονικός διευθυντής αρχείο δήλωσης είναι ο Dominique LOMBARDO, έδωσε ευνοϊκή συμβουλές εμπειρογνωμόνων (Files S1, S2).

χειρουργική

Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκαν από τρεις έμπειρους χειρουργούς του παγκρέατος (BS, YPLT, IS, ΜΟ). Έμπειρους χειρουργούς διεξάγονται όλες παγκρέατος εκτομές κεφάλι. PD διεξήχθη χρησιμοποιώντας πυλωρού διατήρηση ή διαδικασία Whipple, και ένα pancreaticojejunostomy από άκρο σε άκρο (PjA) κατασκευάστηκε με μια αναστόμωση μονού στρώματος διακόπτεται 5-0 PDS (Ethicon χειρουργική) απορροφήσιμα ράμματα. Επιλογή της χειρουργικής τεχνικής αποφασίστηκε διεγχειρητικά δεσμεύεται με απόφαση χειρουργού. Πρόσθια SMA προσέγγιση στη συνέχεια χρησιμοποιείται συνήθως από το έτος 2001, για την τυποποίηση της ριζοσπαστικότητα της εκτομής στο χώρο του οπισθοπεριτοναϊκή περιθωρίου. Πρότυπο λεμφαδενεκτομή έγινε πριν από το έτος 2001 και επεκτάθηκε λεμφαδενεκτομή από την εποχή εκείνη [14]. Κατεψυγμένα εξετάσεις τμήμα στο παγκρέατος γραμμή trans-τμήμα, πραγματοποιήθηκε σε όλες τις περιπτώσεις και δεν έχει εισβάλει για όλους PA. Πρότυπο λεμφαδενεκτομή διεξήχθη κατά μήκος της hepatoduodenal συνδέσμου και της κοινής ηπατικής αρτηρίας [15]. Όλες οι εκτομές έγιναν με λαπαροτομία. Στην περίπτωση της αριστερής παγκρεατεκτομή: Η τεχνική της άπω παγκρεατεκτομή αρχίζοντας με διαίρεση της παγκρεατικής λαιμό πριν τον έλεγχο του σπληνός σκαφών χρησιμοποιήθηκε [16]. διαίρεση νωρίς το λαιμό επιτρέπει την ασφαλέστερη αγγειακό έλεγχο. Για άπω παγκρεατεκτομή, τα πρωτογενή τμήμα του λαιμού και του σπλήνα σκάφη απολίνωση, σε συνδυασμό με την διαίρεση του αριστερού γαστρο-ευέλικτη και μικρή γαστρική σκάφη, προηγείται μια κινητοποίηση devascularized δείγματος, ελαττώνει την αιμορραγία λειτουργική και φαίνεται καταλληλότερη από carcinologic άποψη. Μετά από χειρουργική επέμβαση οι ασθενείς έλαβαν επικουρική χημειοθεραπεία σε συνάρτηση με την κατάσταση των επιδόσεών τους, και κατά την κρίση του ογκολόγου. Δύο μαλακό αποχετεύσεις (Peters) ή αριστερά του παγκρέατος τμήμα για το αριστερό παγκρεατεκτομή ήταν συνήθως τοποθετείται κοντά στο pancreaticojejunal αναστομώνονται. Χειρουργικός χρόνος καταγράφηκε. Σε περίπτωση απουσίας ενός συριγγίου, αποχετεύσεις αφαιρέθηκαν μετά από 7 ημέρες.

δείγματα ιστών

Όλα τα χειρουργικά δείγματα εξετάστηκαν από έναν ανώτερο παθολόγο. Κλινικές και παθολογικές στάσης (Πίνακας S1) επανεκτιμήθηκαν σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο ΤΝΜ σταδιοποίηση του καρκίνου του παγκρέατος που αφορούν PA. Οι όγκοι είχαν καταψύχθηκαν σε RNA αργότερα και υγρό άζωτο κατά την διάρκεια 15 δευτερολέπτων και αποθηκεύεται αμέσως στους -80 ° C. χαρακτηριστικά όγκοι καταγράφηκαν σε όλους τους ασθενείς (Πίνακας S1). Αυτό περιέλαβε τη θέση του, μέσο μέγεθος κατά τη διάγνωση, σταδιοποίηση UICC, η επέκταση του νεοπλασματικής νόσου κατά τη διάγνωση, τον αριθμό των θέσεων μετάστασης όταν υπάρχει και το κομβικό κατάσταση. Όλα τα δείγματα βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με τους κανόνες ταξινόμησης των 6

ου έκδοση (2002) της Μικτής Επιτροπής του American για τον Καρκίνο Σταδιοποίηση Manuel (AJCC) [17]. Η ριζοσπαστικότητα της εκτομής ήταν κλιμακώνονται ανάλογα με R-κατάταξη της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου (R0: καμία υπολειμματική όγκου, R1: μικροσκοπικό υπολειμματικό όγκο, R2: μακροσκοπική υπολειμματική όγκου

in situ

) [18]. Η οπισθοπεριτοναϊκή περιθώριο βαθμολογήθηκε R1 εάν η υπολειμματική μικροσκοπικό όγκο εντοπίστηκε σε απόσταση 1 mm της γραμμής trans-ενότητα [19]. Από το έτος 2002, η παθολογική εξέταση των χειρουργικών δείγματος τυποποιήθηκε σύμφωνα με την Luttges

et al.

Πρωτόκολλο [20], με τη χρήση ρουτίνας μελάνι σήμανση του οπισθοπεριτοναϊκό γραμμή trans-ενότητα. Στις περιπτώσεις των αγγειακών εκτομή, η πλήρης αγγειακό τμήμα είχε ενσωματωθεί και τα δύο άκρα εξετάστηκαν ξεχωριστά ως πρόσθετα περιθώρια εκτομή.

Θεραπεία ιστών και ανοσοφθορισμό ιστολογική μελέτη

δείγματα ιστών (21 PA και 6 δείγματα NP ) έχουν συνήθως σταθερό σε 10% φορμαλίνη, ενσωματωμένα σε παραφίνη και περαιτέρω μείωση σε τμήματα 5 χιλιοστά αποθηκεύεται αμέσως στους 4 ° C ή χρώση με αιματοξυλίνη-Φλοξίνη-σαφράν (HPS).

Αντιδραστήρια και mAbs

στην περίπτωση της ανάλυσης Western blot, ενός μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού αντι-ακτίνης και POD-σημασμένο αντίσωμα αντι-ποντικού {από την Sigma (St Louis, ΜΟ)}, χρησιμοποιήθηκαν. Ένα αντι-HDAC7 αντίσωμα κουνελιού πολυκλωνικό ήταν από Euromedex (Souffelweyersheim, Γαλλία), POD-σημασμένο αντίσωμα αντι-κουνελιού ήταν από τη Cell Signaling (Beverly, ΜΑ). ΫΜΕΜ μέσο κυτταρικής καλλιέργειας, πενικιλλίνη, στρεπτομυκίνη, θρυψίνη-EDTA, υγρομυκίνη Β και νεομυκίνη ήταν από την Invitrogen (Carlsbad, ΝΜ) Για τη διεξαγωγή της ανοσοχρώση, μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (mAb) αντι-HDAC7 (20 μg /mL, Sigma-Aldrich, France ), και χρησιμοποιήθηκαν ένας αντι-Nur77 αντίσωμα κουνελιού (Ab) (5 μg /mL, Thermo Scientific, CergyPontoise, France). Βιοτίνη-συζευγμένο F (ab ‘) 2 θραύσμα των αντισωμάτων κατσίκας σε IgG ποντικού (Beckman Coulter, Roissy CDG, Γαλλία) ή IgG αντι-κουνελιού συζευγμένο με βιοτίνη κατσίκας (Sigma-Aldrich) για HDAC7 και Nur77 ανοσοχρώση αντίστοιχα χρησιμοποιήθηκαν.

ανοσοφθορισμού

, τομές ιστών φορμαλίνη σταθερού εμπεδωθεί με παραφίνη (5 μm) αποπαραφινοποιήθηκαν και κατεργάζεται με ένα διάλυμα ανάκτησης αντιγόνου. Τομές ιστού επωάστηκαν 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (RT) με αντι-HDAC7 ή αντι-Nur77 και πλύθηκαν σε PBS. Οι τομές μετά πλύθηκαν σε PBS και επωάστηκαν 1 ώρα σε RT με 1:50 αραίωση του με βιοτίνη συζευγμένο F (ab ‘) 2 θραύσμα των αντισωμάτων κατσίκας σε IgG ποντικού ή βιοτίνη-συζευγμένο IgG αίγας αντι-κουνελιού για HDAC7 και Nur77 ανοσοχρώση αντίστοιχα. Οι τομές πλύθηκαν σε PBS, κατεργάστηκαν 1 ώρα σε RT με 1:50 αραίωση στρεπταβιδίνης-φλουορεσκεΐνης (Beckman Coulter). Όλες οι τομές τοποθετήθηκαν σε Dako υδατικό μόνιμο μέσο στερέωσης.

Οι τομές παρατηρήθηκαν με τη βοήθεια ενός Zeiss Axiovert 200 Μ ανεστραμμένο μικροσκόπιο με 20 αντικειμενική και ένα μικροσκόπιο συνεστιακό λέιζερ σάρωσης (CLSM) (Leica, TCS SP5) με 60 στόχος. Ένα λέιζερ αργού με διέγερση των 488 nm χρησιμοποιήθηκε για να ενεργοποιήσετε το πράσινο φθορισμό.

υποβλήθηκαν σε επεξεργασία Επεξεργασία Εικόνας

Εικόνες όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11]. Για κάθε πρωτογενές αντίσωμα, η χρώση υπολογίστηκε ως ο λόγος μεταξύ της συνολικής φθορισμός της περιοχής (σύνολο ειδικό φθορισμό) και της επιφάνειας της περιοχής αυτής (μέση ειδικός φθορισμός, MSF). Οι μέσες τιμές των έξι χρωματισμένο περιοχών για κάθε βιοψία στη συνέχεια υπολογίστηκε.

Συνέχεια

Η μετεγχειρητική παρακολούθηση περιλαμβάνει κλινικών, βιοχημικών, και ακτινολογικών αξιολόγηση κάθε 3 μήνες κατά τη διάρκεια του πρώτου μετεγχειρητικού έτος, στη συνέχεια, κάθε 6 μήνες έως ένα μετεγχειρητική καθυστέρηση 5 ετών και αργότερα κάθε χρόνο έως και 10 χρόνια παρακολούθησης. Κανένας ασθενής χάθηκε από παρακολούθηση. Οι ασθενείς που επιβιώνουν αξιολογήθηκαν για υποτροπή της νόσου και την ιστοσελίδα της υποτροπής. Συνέχεια πληροφορίες που ελήφθησαν από τα ιατρικά αρχεία και τη διαβούλευση άμεση ασθενών. Παρακολούθηση συνεχίστηκε για όλους τους ασθενείς σε αυτήν την ομάδα μέχρι τον Ιούνιο του 2013 σε περίπτωση μη συμπεριλαμβανομένων των νέων ασθενών. Η μακροχρόνια παρακολούθηση ήταν διαθέσιμες για όλους τους ασθενείς. Η μέση διάρκεια της παρακολούθησης ήταν 16 μήνες (διάμεση τιμή: 18 μήνες, εύρος: 2-53). Το μήκος της επιβίωσης υπολογίστηκε από την ημερομηνία της πράξης, μέχρι την ημερομηνία του θανάτου ή από την ημερομηνία που έληξε η παρούσα μελέτη.

Η κυτταρική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό

Panc-1 κύτταρα (ATCC, CRL-1469) που προέρχεται από ανθρώπινο παγκρεατικό καρκίνωμα αναπτύχθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FCS, 1% πενικιλλίνη (100 U /ml), 1% στρεπτομυκίνη (100 μg /ml) και γλουταμίνη (1 mM). Τα κύτταρα σπάρθηκαν στα 4000 κύτταρα

ανά

καλά σε ένα πιάτο και κυτταρικής ανάπτυξης 96-φρεάτια αξιολογήθηκε στις 24, 48, 72 και 96 h με 3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2 , 5-διφαινυλ (ΜΤΤ). Τα αποτελέσματα δίδονται ως μέση τιμή ± SD (η = 8) και είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον 3 ανεξάρτητα πειράματα.

επιμόλυνση τα κύτταρα

Η σίγαση του γονιδίου HDAC7 διεξήχθη με σταθερή επιμόλυνση του Panc-1 κύτταρα με SureSilencing shRNA πλασμίδιο για Ανθρώπινη HDAC7 (Qiagen, Courtaboeuf, France), το οποίο προσδίδει αντίσταση σε υγρομυκίνη να επιμολυσμένων κυττάρων. Πάνω έκφραση HDAC7 έγινε με σταθερή επιμόλυνση χρησιμοποιώντας πλασμίδιο pCDNA3-HDAC7-Flag (πλασμίδιο Addgene 13824? Eric Verdin, Οι J. David Gladstone Ινστιτούτα, San Francisco, CA, [21]), το οποίο προσδίδει αντίσταση στη νεομυκίνη σε επιμολυσμένα κύτταρα. Panc-1 κύτταρα σε 50-80% συρροή επιμολύνθηκαν με αντιδραστήριο Lipofectamine LTX με Αντιδραστήριο PLUS (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά από επώαση 6 ώρες στους 37 ° C σε 5% CO2, το μέσο διαμολύνσεως αντικαταστάθηκε με πλήρες μέσο ϋΜΕΜ επί 48 ώρες και στη συνέχεια με φρέσκο ​​μέσο που περιέχει 300 μg /ml υγρομυκίνης Β (shRNA πλασμίδιο) ή 2 mg /ml νεομυκίνη (pCDNA3 πλασμίδιο -HDAC7-Flag). Μετά 1-2weeks, σε εκλεκτικό μέσο έγινε αραίωση όριο. Επιλεγμένοι κλώνοι αναφέρονται ως SH ή pFLAG κυτταρικών κλώνων, αντιστοίχως. επιμολύνσεις ελέγχου διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας φορέα shRNA CTL ή pCDNA3 κενό φορέα.

SDS-PAGE και κηλίδωση Western

Τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με παγωμένο PBS, συλλέχθηκαν και σφαιροποιήθηκαν με φυγοκέντρηση. Τα σφαιρίδια πλύθηκαν δύο φορές και λύθηκαν στους 4 ° C σε 0.1 ml ρυθμιστικού λύσης {50 mM Tris /HCl ρΗ 7,5, 100 mM NaCl, 0,5% Triton Χ-100, 1 mM EDTA, αναστολείς πρωτεάσης (Complete ΤΜ, Roche Diagnostics)} . Τα ομογενοποιήματα επωάστηκαν για 30 λεπτά στους 4 ° C και διαυγάστηκε με φυγοκέντρηση στα 10 000 g για 30 λεπτά στους 4 ° C και καταψύχθηκε στους -20 ° C. Ένα κλάσμα φυλάχτηκε για προσδιορισμό πρωτεΐνης με τη χρήση του δικιγχονινικού οξέος Kit (Sigma, St Louis). Ίσες ποσότητες των προϊόντων λύσης κυττάρου (100 μg) σε αναγωγικό ρυθμιστικό SDS διαχωρίστηκαν επί βαθμίδωσης 8-16% πηκτές Τπδ-Γλυκίνης πολυακρυλαμιδίου (Pierce). Μετά ηλεκτροφορητική μετανάστευση, οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης και υποβάλλονται σε επεξεργασία για ανοσοκηλίδωση με τη χρήση κατάλληλων πρωτογενή και δευτερογενή αντισώματα. Μετά από πλύσεις, οι μεμβράνες αποκαλύφθηκαν από χημειοφωταύγειας (Roche διαγνωστικές, Meylan, Γαλλία).

απομόνωση RNA και αντίστροφη μεταγραφή

Οι ιστοί (≈30 mg) διασπάστηκαν σε 600 μl ρυθμιστικού διαλύματος RLT Plus ( Qiagen) χρησιμοποιώντας ένα προσαρμοσμένο μέγεθος σκάφους για τη διαταραχή και ομογενοποίηση με Ruptor ιστών. Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ Όλα Prep DNA /RNA mini (Qiagen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η συγκέντρωση του RNA προσδιορίστηκε από την απορρόφηση και RNA ακεραιότητα ελέγχθηκε σε RNA Nano τσιπ (Agilent, Santa Clara, CA). Αντίστροφη μεταγραφή αντιδράσεις (RT) πραγματοποιήθηκαν σε 1 μg συνολικού RNA χρησιμοποιώντας κιτ IMPROM-II (Promega, Madison, WI) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τ ο κύτταρα συλλέχθηκαν και τα σφαιρίδια για καθαρισμό του RNA υποβλήθηκαν σε επεξεργασία αμέσως σε RLT ρυθμιστικού λύσης (Qiagen). Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy μίνι (Qiagen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. RNA δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ϋΝάση Ι (kit ελεύθερο DNA, Ambion Inc., Austin, Texas) για να απομακρυνθούν ίχνη του μολυσματικού γονιδιωματικού DNA. Η αντίστροφη μεταγραφή (RT) αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν σε 1 μg συνολικού RNA χρησιμοποιώντας τυχαία εξαμερή και της αντίστροφης μεταγραφάσης Μ-ΜΕν (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR (Q RT-PCR)

Q RT-PCR αντιδράσεις διεξήχθησαν εις τριπλούν σε δύο ανεξάρτητα παρασκευάσματα RNA από την κυτταρική κλώνους χρησιμοποιώντας το LightCycler480 SYBR Green Ι Master Mix και το όργανο PCR LightCycler πραγματικό χρόνο (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Germany) όπως περιγράφεται προηγουμένως [12]. Οι εκκινητές συνοψίζονται στον Πίνακα S2. Οι εκκινητές σχεδιάστηκαν για να ενισχύσουν ένα θραύσμα περίπου 200 bp στην αλληλουχία κωδικοποίησης του 11 γονιδίων που ανήκουν στις οικογένειες HDAC /SIR. Το γονίδιο 28S RN επιλέχθηκε ως έλεγχος. Συγκριτική ανάλυση των τιμών σημείου διέλευσης Ct (μέση τιμή

Cp

) του 4 ΝΡ και τα 7 κανονικό παγκρέατος βιοψίες για το σύνολο των HDAC και SIRT καθώς και γονίδια Nur77 αποκάλυψε ότι ήταν παρόμοιες τιμές χωρίς στατιστικά σημαντική διαφορά (Σχήμα 1, Πίνακας S3). Ως εκ τούτου, τα δείγματα 11 βιοψίες σχεδιαστεί ως μια ομάδα ελέγχου (CG) και η μέση τους

Cp

τιμές για όλα τα γονίδια προσδιορίστηκαν και χρησιμοποιήθηκαν ως βαθμονομητή. Το 2

-ΔΔCt μέθοδος χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθεί η σχετική έκφραση του γονιδίου [22]. Οι μέσες Ct (τιμές Cp) υπολογίστηκε τόσο για το στόχο και το γονίδιο 28S και την ΔΟΙ (C

t,

στόχου

-C

t,

28S

) ήταν αποφασισμένος. Η CG χρησιμοποιήθηκε ως βαθμονομητή [για τον υπολογισμό των ΔΔC

t = (C

t,

στόχου

-C

t,

28S

) – (C

t,

-στόχο CG

-C

t,

28S CG

)] [22]. Για το CG, ΔΔC

t ισούται με μηδέν και 2

0 ισούται με ένα, έτσι ώστε η πτυχή μεταβολή στην έκφραση γονιδίου σε σχέση προς το CG ισούται με ένα. Αξιολόγηση των 2

-ΔΔCt υποδεικνύει την φορές αλλαγή στην έκφραση γονιδίου σε σχέση με την CG.

Μέση Cp του HDACs, SIRTs και τα γονίδια Nurr77 και 28S μεταγραφές των δειγμάτων ιστών από την ομάδα ελέγχου. qPCR έτρεξαν εις τριπλούν σε δύο ανεξάρτητα σκευάσματα cDNA από παγκρεατικούς ιστούς, όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι τμήμα. Η μέση Cp τιμές Ct (μέση τιμή Cp) προσδιορίστηκαν για τα ακόλουθα δείγματα: NP-1 έως 4, η κανονική πάγκρεας? BD-1 και 2, φυσιολογικά δείγματα παγκρέατος από ασθενείς που φέρουν όγκους χολική αγωγού. ΑΡ-1 προς 3: κανονικό γειτονικούς ιστούς δείγματα ampulloma? G-A: φυσιολογικά δείγματα γειτονικούς ιστούς μετά τη γαστρική εκτομή για αδενοκαρκίνωμα στομάχου? Γαστρινώματος: φυσιολογικά δείγματα παρακείμενους ιστούς για γαστρινώματος του δωδεκαδακτύλου

Η

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Graph Pad 5 λογισμικού.. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± την τυπική απόκλιση ή διάμεση τιμή με διατεταρτημοριακό εύρος. Οι διαφορές μεταξύ δύο ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U test ή δοκιμή φοιτητή t. Μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης ή Kruskal-Wallis τεστ εκτελέστηκε για να συγκρίνετε περισσότερα από δύο ομάδες.

Για να συγκρίνετε για τις κατηγορικές μεταβλητές, το chi-square test ή Fisher ακριβή χρησιμοποιήθηκε. μέθοδο Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να υπολογίσει τη συνολική και ελεύθερη υποτροπής επιβίωση. Για όλες τις δοκιμές, μια τιμή p μικρότερη του 0,05 θεωρήθηκε σημαντική.

Αποτελέσματα

Η έκφραση της HDAC, SIRT και Nurr77 στον έλεγχο του παγκρέατος ιστούς

Πίνακας της 11ης κανονική πάγκρεας χειρουργικά δείγματα μελετήθηκαν. Αυτά τα δείγματα ιστών εκτιμήθηκαν για HDACs, SIRTs και την κατάσταση Nur77 mRNA με ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 και Πίνακας S3) κατά την εξέταση του σημείου διέλευσης (

Cp

) το οποίο καθορίζει το σημείο στο οποίο ο φθορισμός αυξάνεται σημαντικά πάνω από την πλάτη φθορισμού έδαφος, οι τιμές που παρατηρούνται για κάθε γονίδιο δεν ήταν στατιστικά σημαντικά διαφορετικές (οι τιμές ρ κυμαίνεται από 0,13 προς 1) γεγονός που υποδηλώνει ότι τα γονίδια στόχοι εκφράστηκαν σε παρόμοια επίπεδα στα χειρουργικά δείγματα που εξετάστηκαν. Αυτό μας επέτρεψε να καθορίσει τα 11 χειρουργικά δείγματα ως ομάδα ελέγχου (CG), ως εκ τούτου, χρησιμοποιώντας τις μέσες τιμές τους

Cps

ως βαθμονομητή.

Σύγκριση της Q RT-PCR ανάλυση των HDAC , SIRTs και τον καρκίνο του παγκρέατος Nur77 expressionbetween, χρόνια παγκρεατίτιδα, καλοήθους όγκου και της ομάδας ελέγχου

στην προηγούμενη έκθεσή μας [12] έχουμε δείξει ότι HDAC7 σημαντικά εκφράζεται σε δείγματα ιστών PA. Δεδομένου ότι χρησιμοποιήθηκαν μόνο 11 δείγματα ιστών PA και μία κανονική παγκρέατος βιοψία, πραγματοποιήσαμε qPCR ανάλυση των

HDACs

,

SIRTs

και

Nur77

έκφραση σε συνολικά 46 ιστοί δείγματα που περιλαμβάνουν 29 PA. Επιπλέον, 11 κανονική παγκρεατική ιστοί βιοψίες χρησιμοποιήθηκαν ως βαθμονομητής να καθοριστούν με μεγαλύτερη ακρίβεια τα παρατηρήσιμα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης του mRNA μεταξύ των ιστών από ΡΑ, CP και Β Mean

Cp

τιμές (Ct) του

HDAC7

,

Nurr77

,

SIRT1

,

SIRT2

, ήταν σημαντικά χαμηλότερες στην ομάδα ΠΠ σε σύγκριση με το CG (

σ

= 0,0010? 0,040? 0,0420? 0,0366, αντίστοιχα) (Εικόνα 2). Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι

HDAC7

,

Nurr77

,

SIRT1

,

SIRT2

ήταν σημαντικά υπερ-εκφράζεται σε δείγματα PA σε σχέση με αυτά που CG.

τα δείγματα διεξήχθησαν εις τριπλούν σε δύο ανεξάρτητα σκευάσματα cDNA από παγκρεατικούς ιστούς, όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι τμήμα. τιμές σημείο (Cp) Crossing. Οι συγκρίσεις έγιναν με δοκιμή Wilcoxon και οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές σε ρ & lt?. 0.05

Η

Στη συνέχεια εφαρμόζεται το 2

-ΔΔCt μέθοδος για την ανάλυση της σχετικής γονιδιακής έκφρασης σε δείγματα ιστού από ΡΑ, Β και PC [22]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α, η έκφραση του

HDAC1,2,3,4,7 και Nur77

αυξήθηκε σε δείγματα ΡΑ σε επίπεδα σημαντικά υψηλότερα από αυτά που παρατηρήθηκαν στην περίπτωση της ομάδας CP (

ρ

= 0,0160? 0.0114? 0,0227? 0,0440? 0,0136? 0,0004, αντίστοιχα). Επιπλέον, η έκφραση του HDAC7, ήταν σημαντικά υψηλότερη στην ΠΑ σε σύγκριση με τα δείγματα Β ιστού (

σ

= 0.05).

(Β) SIRT γονίδια έκφραση σε παγκρεατικά ιστούς όγκων. δείγματα ιστού από αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PA), Μπενίν όγκου (Β) και χρόνιας παγκρεατίτιδας (CP). Κόκκινη γραμμή:. Διάμεση τιμή των σχετικών επιπέδων μεταγραφής RNA

Η ανάλυση

Q RT-PCR έδειξε την έκφραση διαφόρων SIRTs mRNAs σε ιστούς από ΡΑ, CP, και Β (Σχήμα 3Β). Αν και μερικοί σημαντική μεταβολή στο επίπεδο του

μεταγραφή του γονιδίου SIRT

s θα μπορούσε να αποδειχθεί, τα δεδομένα δεν επιτρέπουν την ταυτοποίηση του

επίπεδα SIRT

γονιδιακής έκφρασης διακύμανση μεταξύ PA, CP και τα δείγματα Β.

Σας περαιτέρω σε σύγκριση με τα επίπεδα της γονιδιακής έκφρασης σε κάποιες δείγματα όπου ήμασταν σε θέση να εισπράξει βιοψίες στην περιφέρεια του όγκου. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, δείγματα PA έδειξε στατιστικά υψηλότερα μέσα επίπεδα μεταγραφής του mRNA για

HDAC7

και

HDAC2

σε σύγκριση με τον ομόλογό βιοψίες τους που λαμβάνονται στην περιφέρεια του όγκου (

p

= 0,0346, 0,0053, αντίστοιχα). Αν και κάποιος βαθμός μεταβλητότητας στο

SIRTs

επίπεδα έκφρασης του γονιδίου θα μπορούσε να αποδειχθεί μεταξύ των δειγμάτων ιστού, καμία τέτοια αξιοσημείωτη διαφορά με εκείνες που παρατηρήθηκαν για

HDAC7

και

HDAC2

θα μπορούσε να δει. Τα δεδομένα αυτά υποστηρίζουν την ιδέα ότι μεταξύ των

HDACs

και

SIRTs

γονίδιο που εξετάστηκαν,

HDAC7

και

HDAC2

είναι δύο γονίδια με τη μεγαλύτερη δυνατότητα να είναι δείκτες της ΠΑ.

όγκους του παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα (PA), απομακρυσμένη βιοψίες ιστών (RB).

Η

Πρότυπα και τα επίπεδα έκφρασης των HDAC7 και Nur77

Όταν χρησιμοποιείτε HDAC7 mAb, η χρώση ήταν αρνητική ή ελαφρά θετική σε περιπτώσεις ελέγχου (ΝΡ), ενώ ισχυρή θετική ανοσολογική αντιδραστικότητα βρέθηκε σε όλα τα ΡΑ (Σχήμα 5Α). Για να αναλυθεί με μεγαλύτερη ακρίβεια το επίπεδο της ανοσοχρώση σε δείγματα ιστών, έξι λεκιασμένων περιοχών για κάθε εικόνα ανοσοφθορισμού προσδιορίστηκαν ποσοτικά με τη μέτρηση της έντασης των MSF βάφονται περιοχών. Όλα PA παρουσίασαν στατιστικά υψηλότερες τιμές των ΓΧΣ από τα δείγματα ελέγχου. Ο μέσος όρος της έντασης των ΓΧΣ βρέθηκε με mAb να HDAC7 αυξήθηκε σημαντικά σε ΠΠ (μέση τιμή = 173.78 ± 4.46) σε σύγκριση με τα δείγματα ελέγχου (μέση τιμή = 54.31 ± 13.26) (Εικόνα 5Β) (

P

= 0,0004) . Η ανάλυση των έξι χρωματισμένο περιοχών για κάθε εικόνα ανοσοφθορισμού με τη μέτρηση της έντασης των ΓΧΣ έδειξε ότι ο μέσος όρος των τιμών των ΓΧΣ βρέθηκε με mAb να Nur77 αυξήθηκε σημαντικά σε ΠΠ (μέση τιμή = 146.50 ± 8.07) σε σύγκριση με τα δείγματα ελέγχου (μέση τιμή = 110.00 ± 4.41 ) (Σχήμα 6) (

P

= 0,0225).

Μια μικρή χρώση βρίσκεται στο NP. Στην ΡΑ, μια ισχυρή χρώση βρίσκεται στο κυτταρόπλασμα και σε συνεργασία με την κυτταρική μεμβράνη του πλάσματος. Αρχικό 250χ μεγέθυνση. Ο ποσοτικός προσδιορισμός των μέση ειδική φθορισμού (MSF) (Β). Μετρήθηκαν έξι τομείς σε κάθε περίπτωση. Οι διάμεσοι των εντάσεων των ΓΧΣ που λαμβάνονται με ΡΑ και ΝΡ ιστούς που αντιπροσωπεύονται από τις οριζόντιες γραμμές και το διατεταρτημοριακό διάστημα αντιπροσωπεύεται από κουτιά. (*

P

& lt? 0.0004)

Η

Μια μέτρια χρώση βρίσκεται στο κυτταρόπλασμα των NP.. Κύτταρα ΡΑ έντονα χρωματισμένο στο κυτταρόπλασμα και ένα μέτρια χρώση παρατηρήθηκε στις μεμβράνες των κυττάρων του πλάσματος. Αρχικό 250χ μεγέθυνση. Ο ποσοτικός προσδιορισμός των μέση ειδική φθορισμού (MSF) (Β). Μετρήθηκαν έξι τομείς σε κάθε περίπτωση. Οι διάμεσοι των εντάσεων των ΓΧΣ που λαμβάνονται με ΡΑ και ΝΡ ιστούς που αντιπροσωπεύονται από τις οριζόντιες γραμμές και το διατεταρτημοριακό διάστημα αντιπροσωπεύεται από κουτιά. (*

P

& lt? 0,0225).

Η

Επιπτώσεις του

HDAC7, έκφραση HDAC2 και Nurr77

στην έκβαση των ασθενών με παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα

Στη συνέχεια εξετάστηκε η πιθανή σχέση των επιπέδων μεταγραφής γονιδίων (

HDAC7

,

HDAC2

και

Nurr77

) και την έκβαση της νόσου. Όπως φαίνεται στα Σχήματα 7, 8, 9 και 10, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά θα μπορούσε να θεωρηθεί μεταξύ των ομάδων όσον αφορά τη συνολική και επιβίωσης χωρίς νόσο κατά την εξέταση ατόμων που εκφράζουν περισσότερο από λιγότερο από 4 φορές το επίπεδο βασικής γραμμής γονιδιακής μεταγραφής. Ωστόσο, όταν αναλύσαμε τον αριθμό του θανάτου και υποτροπές στο τέλος της παρακολούθησης, τον αριθμό του θανάτου και υποτροπές ήταν σημαντικά μεγαλύτερες σε ασθενή με υπερέκφραση

HDAC7

(4 φορές το επίπεδο μεταγραφής του γονιδίου βασικής γραμμής) (Σχήμα 8) .

Γενικά (συνεχής γραμμή) και την επιβίωση ελεύθερη νόσου (διακεκομμένη γραμμή)

Η

Ν:.. το επίπεδο της μεταγραφής γραμμή βάσης στην CG

Η

Ν :. επίπεδο μεταγραφής γραμμή βάσης στην CG

Η

Ν:. επίπεδο μεταγραφής γραμμή βάσης στην CG

Η

Ανάπτυξη σταθερών ανθρώπινων κυτταρικών σειρών του παγκρέατος κάτω εκφράζουν ή υπερεκφράζουν HDAC7

Για να εκτιμηθεί η πιθανή εμπλοκή του HDAC7 της ικανότητας πολλαπλασιασμού των κυττάρων, δημιουργήσαμε ανασυνδυασμένη Panc-1 καρκινικών κλώνων ανθρώπινο κύτταρο χρησιμοποιώντας ένα σύνολο από τέσσερα εμπορικά διαθέσιμα κατασκευάσματα shRNA και ένα αντίστοιχο πλασμίδιο ελέγχου. Επιπλέον, το πλασμίδιο pCDNA3-HDAC7-Flag χρησιμοποιήθηκε για να επιτευχθεί υπερέκφραση της πρωτεΐνης HDAC7. Οι επιμολύνσεις διεξήχθησαν επίσης χρησιμοποιώντας ένα pCDNA3 άδειο φορέα σαν έλεγχο. Η μεταγραφή του γονιδίου που κωδικοποιεί HDAC αναλύθηκε με Q RT-PCR.