Αφηρημένο

Ο καρκίνος του προστάτη είναι μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο στους άνδρες σε όλο τον κόσμο . Σε αυτή τη μελέτη, με τη χρήση διαγονιδιακών αδενοκαρκίνωμα του προστάτη ποντικού ποντικών (TRAMP), η επίδραση της δίαιτας εμπλουτισμένη με 1% w /w ουρσολικό οξύ (UA) ερευνήθηκε για να αξιολογηθεί η δραστικότητα συγκεκριμένο στάδιο χημειοπροληπτική έναντι του καρκίνου του προστάτη. Βρήκαμε ότι τα ποντίκια που τρέφονται με TRAMP UA δίαιτα για 8 εβδομάδες (εβδομάδα 4 έως 12) καθυστέρηση σχηματισμό προστάτη ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ). Παρομοίως, ποντίκια που τρέφονταν με UA δίαιτα για 6 εβδομάδες (εβδομάδες 12 έως 18) ανέστειλε την πρόοδο της ΡΙΝ για αδενοκαρκίνωμα, όπως προσδιορίζεται με χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης. Τέλος, TRAMP ποντίκια που τρέφονταν με UA δίαιτα για 12 εβδομάδες (εβδομάδες 24 έως 36), έδειξαν σημαντικά μειωμένη ανάπτυξη του όγκου, χωρίς σημαντικές επιπτώσεις στο συνολικό σωματικό βάρος και παρατεταμένη συνολική επιβίωση. Όσον αφορά το μοριακό μηχανισμό, βρήκαμε ότι UA κάτω ρυθμισμένα ενεργοποίηση διαφόρων προ-φλεγμονωδών μεσολαβητών, συμπεριλαμβανομένων, ΝΡ-κΒ, STAT3, ΑΚΤ και ΙΚΚα /φωσφορυλίωσης β στον πλαγιοπίσθιο προστάτη (DLP) ιστούς που συσχετίζεται με τη μείωση στον ορό επίπεδα TNF-α και IL-6. Επιπλέον, UA σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται τα επίπεδα έκφρασης της κυκλίνης D1 και COX-2, αλλά επάνω ρυθμισμένη τα επίπεδα της κασπάσης-3, όπως αποκαλύφθηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση τομών ιστού όγκου. Τέλος, UA ανιχνεύθηκε σε δείγματα ορού που λαμβάνονται από διάφορες ομάδες ποντίκια που τρέφονταν με εμπλουτισμένο διατροφή σε ποσότητα νανογραμμαρίων υποδεικνύοντας ότι απορροφάται καλά στον γαστρεντερικό σωλήνα. Συνολικά, τα ευρήματά μας παρέχουν ισχυρές ενδείξεις ότι UA μπορεί να είναι ένας εξαιρετικός παράγοντας τόσο για την πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου του προστάτη

Παράθεση:. Shanmugam MK, Ong Θ, Kumar AP, Lun CK, Ho PC, Wong PTH, et al. (2012) ουρσολικό οξύ αναστέλλει την έναρξη, εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και παρατείνει την επιβίωση των TRAMP Ποντίκια διαμορφώνοντας Pro-φλεγμονώδη μονοπάτια. PLoS ONE 7 (3): e32476. doi: 10.1371 /journal.pone.0032476

Επιμέλεια: Ganesh Chandra Jagetia, Πανεπιστήμιο Mizoram, Ινδία

Ελήφθη: 8 Ιουλ 2011? Αποδεκτές: 28 Γενάρη 2012? Δημοσιεύθηκε: 12 Μάρτη του 2012

Copyright: © 2012 Shanmugam et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ιατρικό Ερευνητικό Συμβούλιο της Σιγκαπούρης [R-184-000-168-275 και R-184-000-201-275] στο GS. ΔΧΕ υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Συμβούλιο Ιατρικής Έρευνας της Σιγκαπούρης [Grant R-713-000-119-275] και Καρκίνος Science Institute της Σιγκαπούρης, Experimental Therapeutics εγώ Πρόγραμμα [Grant R-713-001-011-271]. KMH υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Εθνικό Ιατρικό Ερευνητικό Συμβούλιο της Σιγκαπούρης, Ιατροβιολογικών Ερευνών του Συμβουλίου της Σιγκαπούρης, και το Ίδρυμα της Σιγκαπούρης Χιλιετίας. Οι χρηματοδότες δεν έχει κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή.

ο καρκίνος του προστάτη είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται μεταξύ των ανδρών στις δυτικές χώρες μετά τον καρκίνο του πνεύμονα [1]. Η χρόνια φλεγμονή αναγνωρίζεται όλο και ως μεσολαβητής για πολλούς καρκίνους [2], [3], [4], και σημαντικές ενδείξεις υποδεικνύουν ότι παίζει σημαντικό ρόλο τόσο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη [5]. Πρώτον, οι ασθενείς με συμπτωματική προστατίτιδα είναι πιο επιρρεπή στην ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη. Δεύτερον, ο καρκίνος του προστάτη έχει συνδεθεί με σεξουαλικά μεταδιδόμενες μολύνσεις. Τρίτον, μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του προστάτη συνδέεται με την αυξημένη πρόσληψη φρούτων και λαχανικών, αντιοξειδωτικά, και μη-στεροειδή αντι-φλεγμονώδη φάρμακα (ΜΣΑΦ) [6], [7]. Τέταρτον, φυσιολογικό προστάτη υφίσταται πολλαπλασιαστικής φλεγμονώδους ατροφία (PIA) πριν από τον σχηματισμό ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία προστάτη (PIN), τον πρόδρομο του καρκίνου του προστάτη [8]. Πέμπτον, PIA μπορεί να υπερεκφράζουν φλεγμονώδεις ένζυμο COX-2 [9]. Έκτον, η παράγοντες μεταγραφής ΝΡ-κΒ και STAT3, και οι δύο μεγάλες μεσολαβητής της φλεγμονής, είναι ουσιαστικά δραστική σε ιστούς καρκίνου του προστάτη [10]. Και έβδομο, ΝΡ-κΒ ρυθμίζεται φλεγμονώδεις κυτοκίνες όπως η ιντερλευκίνη (IL) -6 είναι ένας αυτοκρινής αυξητικός παράγοντας που είναι γνωστό ότι εκκρίνεται από τους ιστούς καρκίνου του προστάτη [11], [12]. Ως εκ τούτου, είναι λογικό να υποθέσουμε ότι οι παράγοντες που μπορούν να καταστέλλουν φλεγμονώδεις μεσολαβητές έχουν ένα δυναμικό τόσο για την πρόληψη και τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη.

UA (3β-υδροξυ-Urs-12-εν-28-οϊκό οξύ) , πεντακυκλικόν τριτερπενοειδείς προέρχεται από τα μούρα, φύλλα, άνθη και καρπούς των φαρμακευτικών φυτών, όπως

Rosemarinus officinalis

,

Eriobotrya japonica

,

Calluna vulgaris

,

Ocimum ιερό

, και

Ευγενία jumbolana

είναι ένας τέτοιος παράγοντας που έχει μελετηθεί εκτενώς για τις αντιφλεγμονώδεις και αντικαρκινικές τις δραστηριότητές της κατά την τελευταία δεκαετία [13]. UA έχει αναφερθεί ότι καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό μιας ποικιλίας κυττάρων όγκου, να επάγει απόπτωση, και να αναστέλλουν την προαγωγή όγκων, μετάσταση, και την αγγειογένεση [14], [15], [16], [17]. Η ομάδα μας βρίσκεται στη διαδικασία ανεξερεύνητη δυναμικό της UA για την πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου του προστάτη και έχει αναφερθεί πρόσφατα σε δύο ξεχωριστές μελέτες που UA μπορεί πράγματι να καταστείλει την ανάπτυξη του ξενομοσχεύματος προστάτη σε γυμνούς ποντικούς και επίσης αναστέλλουν μακρινή μετάσταση θέση διαμορφώνοντας την CXCR4 /CXCL12 καταρράκτη σηματοδότησης [18], [19].

Το διαγονιδιακό αδενοκαρκίνωμα του προστάτη ποντικού (ΤΡΑΜΡ) μοντέλο του καρκίνου του προστάτη βασίζεται σε ένα διαγονίδιο που αποτελείται από probasin (ΡΒ) κατευθυνόμενο από υποκινητή SV40 Τ αντιγόνο (Tag) έκφραση. Αυτό διαγονιδιακό ποντίκι είναι προτιμότερο να μοντέλα εμφύτευση επειδή σε αυτό το μοντέλο καρκίνου του προστάτη αυθόρμητα αναπτύσσεται μέσω μιας σειράς καλώς καθορισμένα στάδια. Εμφανίζουν αξιοσημείωτες ομοιότητες με την εξέλιξη ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη από το στάδιο ΡΙΝ σε διηθητικό αδενοκαρκίνωμα που μεθίσταται στο συκώτι, πνεύμονα και γαστρεντερικό σωλήνα μέσω της ενεργοποίησης ενός διαγονιδίου που ορμονικά ρυθμίζεται από ανδρογόνα [20], [21]. Επιπλέον, όλοι οι ποντικοί TRAMP αναπτύσσουν καλά διαφοροποιημένο καρκίνωμα (WDC) μεταξύ 8-12 εβδομάδων ηλικίας και μεταστάσεις σε απομακρυσμένες θέσεις μεταξύ 18 και 24 εβδομάδων ηλικίας [22]. Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε τις δυνητικές επιπτώσεις της UA εμπλουτισμένη διατροφή για την πρόληψη της ανάπτυξης, της προόδου, καθώς και τη συνολική επιβίωση των όγκων σε ποντίκια TRAMP. Τα δεδομένα μας δείχνουν σαφώς για πρώτη φορά ότι η διατροφή ποντικών με μια δίαιτα πλούσια σε UA μπορεί να αναστείλει σημαντικά την εξέλιξη από το ΡΙΝ σε αδενοκαρκίνωμα, και την ανάπτυξη του όγκου. Μπορεί επίσης να παρατείνει την επιβίωση των ποντικών μέσω της διαφοροποίησης των πολλαπλών καταρράκτες σηματοδότησης.

Αποτελέσματα

Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει την πιθανή επίδραση (ες) της UA στην ανάπτυξη όγκων σε πρώιμο στάδιο, όγκου εξέλιξης και η συνολική επιβίωση των ποντικών TRAMP (Σχήμα 1Α).

Α, Male TRAMP-ποντικοί ηλικίας 4 εβδομάδων τράφηκαν με δίαιτα εμπλουτισμένη UA για 8 εβδομάδες (Ομάδα 1).? 12 εβδομάδων ποντικούς για 6 εβδομάδες (Ομάδα 2)? και 24 εβδομάδων ποντίκια για 12 εβδομάδα (Ομάδα 3). Οι ποντικοί θυσιάστηκαν στο τέλος των περιόδων αγωγής. Ίδιας ηλικίας ελέγχου TRAMP-ποντίκια έλαβαν κανονική δίαιτα για τις ίδιες χρονικές περιόδους. Για μελέτες επιβίωσης, Ομάδες 1 έως 3 παρομοίως σε επεξεργασία ενώ η Ομάδα 4 τροφοδοτήθηκε με UA εμπλουτισμένη διατροφή για 36 εβδομάδες ξεκινώντας από την κατά ηλικία των 4 εβδομάδων. Β, Η &? Ε τομές του DLP μη TRAMP προστάτη (i), Ομάδα 1 ελέγχου (ii), και UA-αγωγή (iii) του προστάτη TRAMP. C, Μπαρ γράφημα δείχνει την επίπτωση της LG-PIN, HG-PIN, WDC, MDC και PDC σε DLP του ελέγχου και της ομάδας 1 ποντίκια. Μια μικρή αύξηση της LG-PIN και μια μείωση της HG-PIN παρατηρήθηκαν (n = 5) μετά τη θεραπεία UA. Αριθ MDC και PDC παρατηρήθηκαν στην Ομάδα 1 και τις αντίστοιχες ελέγχους. Βέλος δείχνει LG-PIN? οδοντωτή δεξί βέλος δείχνει HG-PIN.

Η

UA καταστέλλει την προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) σχηματισμό

Έχει αναφερθεί στο παρελθόν ότι TRAMP ποντίκια εμφανίζουν αυξημένη επιθηλιακά διαστρωμάτωση στην ραχιοπλευρικό προστάτη, επιθηλιακά κύτταρα με μεταβλητά επιμήκεις πυρήνες με συμπυκνωμένη χρωματίνη με επίπεδες μορφές χαμηλού βαθμού (LG) PIN (LG-PIN) από 4-8 εβδομάδες της ηλικίας και φουντωτά μικροθηλωματώδης και ένα μοτίβο ηθμοειδή του HG-PIN από 6-10 εβδομάδες της ηλικίας [ ,,,0],22] .Για να ερευνήσει εάν UA καταστέλλει σχηματισμό PIN, 4 εβδομάδων οι ποντικοί τράφηκαν με UA (1%, β /β) που περιέχουν δίαιτα για 8 εβδομάδες και θυσιάζονται σε 12 εβδομάδες ηλικίας (Ομάδα 1). Το υγρό βάρος του προστάτη με σπερματοδόχων κύστεων δεν μεταβλήθηκε σημαντικά τόσο στον έλεγχο όσο και UA τρέφονται TRAMP ποντικών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η οπτική εξέταση της κοιλιακής κοιλότητας, επίσης δεν αποκάλυψε ασυνήθιστο διεύρυνση των σπερματοδόχων κύστεων, του προστάτη λοβούς ή πυελική λεμφαδένες. Η κατανάλωση UA εμπλουτισμένο δίαιτα ήταν καλά ανεκτή χωρίς ενδείξεις τοξικότητας όσον αφορά την εμφάνιση των ζώων, τη συμπεριφορά και το σωματικό βάρος.

Αν και τα ποντίκια μη TRAMP δεν έδειξε κανένα σχηματισμό PIN (Εικ. 1Β, θ), τα ποντίκια TRAMP ζώα έδειξαν LG-και-HG PIN και καλά διαφοροποιημένο καρκίνωμα (WDC) (Εικ. 1Β, ΙΙ και ΙΙΙ). Οι επιδράσεις της UA-θεραπεία για το σχηματισμό του ΡΙΝ που φαίνεται στο Σχ. 1C. LG-PIN παρατηρήθηκε στο 60% των UA-αγωγή ποντικούς σε σύγκριση με το 40% σε ελέγχους ενώ HG-ΡΙΝ παρατηρήθηκε στο 20% των ποντικών που έλαβαν UA-σε αντίθεση με το 80% στους μάρτυρες. Αυτό έδειξε ότι η θεραπεία UA είχε μειώσει το σχηματισμό PIN, καθώς και καθυστέρησε την εξέλιξη από το LG-προς-HG PIN. Επιπλέον, μόνο ένα ζώο έδειξε μέτρια (MDC) ή κακώς διαφοροποιημένο καρκίνωμα (PDC) σε αυτό το στάδιο. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν σθεναρά ότι UA έχει τη δυνατότητα να χρησιμοποιηθεί ως μέσο χημειοαποτρεπτικός.

UA προλαμβάνει την εξέλιξη από το PIN για τον καρκίνο του προστάτη

Για να καθοριστεί εάν ή όχι UA μπορεί να αποτρέψει την εξέλιξη από το PIN για να καρκίνο του προστάτη, 12-εβδομάδων ηλικίας TRAMP-ποντικοί τράφηκαν με έλεγχο ή UA (1%, β /β) εμπλουτισμένη δίαιτα για 6 εβδομάδες και στη συνέχεια θυσιάστηκαν στις 18 εβδομάδες (Εικ. 1Α, Ομάδα 2). Στα 18 εβδομάδες της ηλικίας, η DLP της TRAMP ποντίκια παρουσίασαν υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης της LG-PIN, HG-PIN, WDC και MDC (Σχήμα 2Α, i & amp?. Ii) σε σύγκριση με εκείνες που παρατηρούνται σε μικρότερες ηλικίες (Σχήμα 1Β & amp.? ΝΤΟ). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλλαγές στην εμφάνιση, το βάρος σώματος και κατανάλωση τροφής παρατηρήθηκαν μεταξύ της ομάδας 2 ποντίκια και τους ελέγχους τους. Ωστόσο, υπήρχε μια σημαντική αλλά στατιστικά ασήμαντη μείωση στο υγρό βάρος του προστάτη αδένα με σπερματοδόχων κύστεων σε UA τρέφονται ποντικούς (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). UA-θεραπεία μείωσε τη συχνότητα εμφάνισης της LG-PIN κατά 60%, HG-PIN κατά 40% και WDC κατά 40% (Σχ. 2Α, iii) .Overall, υπήρξε μια αξιοσημείωτη στροφή προς τις υψηλότερες συχνότητες των μη-καρκινικές DLP στην UA-ποντίκια που έλαβαν αγωγή

A, H & amp?. Ε χρωματισμένο τμήμα του DLP 2 ελέγχου Συγκροτήματος (i) και UA-αγωγή (ii) TRAMP προστάτη. Βέλος δείχνει LG-PIN, οδοντωτή δεξί βέλος δείχνει HG-PIN, και να μπλοκάρει το δεξί βέλος δείχνει WDC. (Iii) Μπαρ γράφημα δείχνει την επίπτωση της LG-PIN, HG-PIN, WDC, MDC και PDC σε DLP του ελέγχου και της ομάδας 2 ποντίκια. Μειώσεις στις PIN, WDC και MDC παρατηρήθηκαν μετά τη θεραπεία UA. Β, Η &? Ε χρώση τμήμα του DLP της Ομάδας 3 ελέγχου (ί) και UA-αγωγή (ii) TRAMP προστάτη. Όπως περιγράφεται στο Α? Arrow κεφάλι δείχνει MDC και Chevron υποδηλώνει PDC. C, Western blot των pSTAT3, ρΑΚΤ, pIKKα /β, και πρωτεΐνες ρ65 σε DLP στις Ομάδες 1, 2 και 3 ποντίκια. λύματα DLP παρασκευάστηκε και ανοσοκηλίδωση διεξήχθη όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης φόρτωσης για ρΑΚΤ και pIKKα /β προσδιορίστηκε με απογύμνωση και σχολαστικά για το σύνολο των ΑΚΤ και ΙΚΚα, p65 και STAT3 κηλίδες είχαν αφαιρεθεί και ξαναϊχνηθετούνται για την β-ακτίνη για τον προσδιορισμό της ίσης φόρτωσης πρωτεΐνης. Η πυκνότητα ζώνη ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό Image J. ΝΤ = μη TRAMP-ποντίκια? ελέγχου Τ = TRAMP? T + UA = UA-αγωγή TRAMP-ποντίκια.

Η

UA καταστέλλει την ανάπτυξη των καθιερωμένων καρκίνου του προστάτη

in vivo

Η

Για να προσδιοριστεί εάν UA μπορεί να καταστείλει την ανάπτυξη καθιερωμένων καρκίνου του προστάτη, 24-εβδομάδων TRAMP-ποντικοί τράφηκαν με έναν έλεγχο ή UA (1%, β /β) εμπλουτισμένη διατροφή για 12 εβδομάδες και στη συνέχεια θυσιάστηκαν στις 36 εβδομάδες (Εικ. 1Α, Ομάδα 3). Σε αυτή την ηλικία, οπτική εξέταση της κοιλιακής κοιλότητας αποκάλυψε σαφώς μεγενθυμένη σπερματοδόχες κύστεις, DLP και άλλων λοβών του προστάτη στον έλεγχο TRAMP-ποντικούς. Το DLP έδειξε υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης του WDC, MDC και PDC σε σύγκριση με εκείνες που παρατηρήθηκαν στις νεώτερες ηλικίες, γεγονός που υποδηλώνει ότι η πλειοψηφία των ζώων που είχαν καρκινικές αλλοιώσεις στον DLP (Σχήμα 2Β, i & amp?. Ii). Σε αντίθεση, UA-αγωγή ποντίκια TRAMP έδειξαν μειωμένη συχνότητα εμφάνισης της HG-PIN κατά 40%, WDC κατά 60%, MDC κατά 40%, και PDC κατά 20% (Εικ. 2Β iii). Συνολικά, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι UA-αγωγή ποντικούς έδειξε μη καρκινικές βλάβες που κυμαίνονται από την LG-ΡΙΝ και HG-PIN σε κανονικό στρώμα σε σύγκριση με το 100% συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του προστάτη σε ποντίκια TRAMP ελέγχου.

UA αναστέλλει την ενεργοποίηση της ΑΚΤ, ΙΚΚα /β, NF-κΒ και STAT3 στο DLP των ποντικιών TRAMP

Έχουμε πρόσφατα ανέφερε ότι UA μπορεί να αναστείλει την AKT, ΙΚΚα /β, NF-κΒ και ενεργοποίηση STAT3 σε εξαρτημένα και ανεξάρτητα από ανδρογόνα καρκίνου του προστάτη κυτταρικές γραμμές [18]. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε περαιτέρω τις επιπτώσεις της UA εμπλουτισμένη δίαιτα στην ενεργοποίηση των προ-φλεγμονωδών μεσολαβητών στον DLP του TRAMP ποντικών (Σχ. 1Α). Όπως φαίνεται στο Σχ. 2C, η προοδευτική αύξηση του φωσφο (p) -Akt, -pIKKα /β, pSTAT3, και ρ65 έκφραση παρατηρήθηκαν από την Ομάδα 1 στην Ομάδα 3 ποντίκια TRAMP, όπως ο καρκίνος σταδιακά προχώρησε από το σχηματισμό LG-ΡΙΝ στην ομάδα 1 στο 4-12 εβδομάδα της ηλικίας, HG-PIN και το καρκίνωμα της WD στην DLP στην ομάδα 2 στο 12-18 εβδομάδα της ηλικίας, και WDC, MDC και PDC σε 24-36 εβδομάδες της ηλικίας. Ίδιας ηλικίας μη-TRAMP C57BL /6 ποντίκια, χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί έλεγχοι, δεν παρουσίασαν καμία μεταβολή στα επίπεδα αυτών των προφλεγμονωδών πρωτεϊνών. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε ότι η θεραπεία UA είχε ως αποτέλεσμα περίπου 40-50% αναστολή στην έκφραση αυτών των φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών στην DLP της ομάδας 2 και ομάδα 3 σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα ποντίκια TRAMP, ενώ μόνο μία μικρή μείωση παρατηρήθηκε στην ομάδα 1 (Σχ . 2C). Τα επίπεδα της μη φωσφορυλιωμένο ΑΚΤ και ΙΚΚα επηρεάστηκαν ελάχιστα από UA-αγωγή (Σχ. 2C). Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα μας αναφέρεται σαφώς ότι η καταστολή των προ-φλεγμονωδών ΑΚΤ, NF-κΒ και την ενεργοποίηση STAT3 παίζει ένα ρόλο στην αναστολή της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη σε ποντίκια TRAMP από UA.

UA αναστέλλει TNF ορού -α και τα επίπεδα IL-6 σε ποντικούς TRAMP

TNF-α και IL-6 είναι προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες, και θεωρούνται ως μείζων βιοδείκτες φλεγμονής. Ομάδες 1, 2 και 3 ποντίκια μαζί με τους ελέγχους τους θυσιάστηκαν στο τέλος της κάθε πρωτόκολλο θεραπείας? συλλέχθηκε αίμα μέσω καρδιακής παρακέντησης. Ο ορός που ελήφθη εκτιμήθηκε για τα επίπεδα του TNF-α και IL-6 χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA. Και οι δύο, TNF-α και IL-6 επίπεδα αυξήθηκαν από την Ομάδα 1 στην Ομάδα 3 που αντιστοιχεί σε αύξηση της ηλικίας και τα στάδια της εξέλιξης του καρκίνου (Εικ. 3Α). UA-θεραπεία μειώθηκε σημαντικά ορού ΤΝΡ-α στην ομάδα 2 (κατά -90%) Ομάδα 3 (~ 30%) (Σχ. 3Α, i), καθώς και στον ορό IL-6 σε όλες τις τρεις ομάδες με ~40-90% ( Εικ. 3Α, ii).

Α. Καταστολή της ορό ΤΝΡ-α (i) και IL-6 (ii) με UA-θεραπεία. Ομάδες 1-3 ποντικών υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Sandwich ELISA δοκιμασία διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες των κατασκευαστών (R &? Συστήματα D, USA) για τον προσδιορισμό των επιπέδων του TNF-α και IL-6. * Η στατιστική σημαντικότητα (P & lt? 0,05). Β, Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της κυκλίνης D1, κασπάσης 3 και COX-2 σε καρκινικούς ιστούς στην Ομάδα 3 ποντίκια TRAMP. DLP ιστούς όγκων, ενσωματωμένο σε μπλοκ παραφίνης, κόπηκαν σε τομές ιστών 5 μΜ και ανιχνεύτηκαν για κυκλίνη D1, κασπάσης 3 και COX-2 ανοσοαντιδραστικότητες όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. UA-θεραπεία (1% β /β) μειώθηκε η έκφραση της κυκλίνης D1 και COX-2, αλλά αυξήθηκε κασπάσης-3 έκφραση όταν συγκρίθηκαν με τους ελέγχους. Εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο της Olympus BX51 (μεγέθυνση, 20 ×). Θετικά κύτταρα (καφέ) ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το πακέτο εικόνας-Pro Plus v6.3 λογισμικό (Media Cybernetics, Inc.).

Η

UA καταστέλλει την έκφραση της κυκλίνης D1, COX-2 και Caspase-3 σε DLP του TRAMP ποντικών

επόμενο διερευνηθεί διάφορα γονιδιακά προϊόντα εμπλέκονται στην εξέλιξη του καρκίνου (COX-2), πολλαπλασιασμό (κυκλίνη D1) και την απόπτωση (κασπάση-3) με ανοσοϊστοχημεία σε DLP της Ομάδας 3 ποντικών TRAMP. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Β, UA-αγωγή μείωσε τον αριθμό των κυττάρων που χρωματίζονται θετικά για κυκλίνη D1 από 31% σε 3% και COX-2 από 89% έως 27%. Όπως αναμενόταν, η έκφραση της κασπάσης-3 αυξήθηκαν από 6% έως 95%. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν σαφώς ότι η αναστολή των πολλαπλών γονιδιακών προϊόντων που εμπλέκονται στην πρόοδο του όγκου και την διέγερση απόπτωσης συμβάλλουν στις ισχυρές δραστηριότητες κατά του όγκου του UA όπως παρατηρείται σε ιστούς όγκων TRAMP.

UA καταστέλλει την ανάπτυξη του όγκου και αυξάνει την επιβίωση των ποντικών TRAMP

για να προσδιοριστεί εάν UA μπορεί να καταστείλει την ανάπτυξη καθιερωμένων καρκίνου του προστάτη, 24-εβδομάδων TRAMP-ποντικοί τράφηκαν με έναν έλεγχο ή UA (1%, β /β) εμπλουτισμένη διατροφή για 12 εβδομάδες και στη συνέχεια θυσιάστηκαν στις 36 εβδομάδες (Εικ. 1Α, Ομάδα 3). Το υγρό βάρος του προστάτη με σπερματοδόχων κύστεων έδειξε σημαντικές διαφορές στο βάρος του συνόλου του προστάτη αδένα. Μία σημαντική (Ρ & lt? 0,05) διαφορά στον όγκο του όγκου παρατηρήθηκε στα UA-ποντίκια με αγωγή (Σχήμα 4Α).. Βρήκαμε επίσης ότι η μακροχρόνια διατροφή των UA εμπλουτισμένη διατροφή είναι ασφαλής χωρίς καμία τοξικότητα στα όργανα ή ιστούς με ελάχιστη επίδραση στο σωματικό βάρος (Εικ. 4Β). Καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου 36 εβδομάδων αντίστοιχης ηλικίας μη διαγονιδιακά ποντίκια C57BL /6 χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί μάρτυρες, η οποία έδειξε κανένα από τα χαρακτηριστικά που σχετίζονται με τον καρκίνο του προστάτη που παρατηρείται σε ποντίκια TRAMP. Όλα τα στοιχεία που παρουσιάζονται σχετικά με τις επιδράσεις του UA-θεραπεία σε ποντίκια TRAMP (Ομάδες 1 έως 3) είναι συνεπείς με τα δεδομένα επιβίωσης υποδεικνύοντας ότι τέτοια θεραπεία μπορεί να παρατείνει σημαντικά τη διάρκεια ζωής των ποντικών (Σχ. 4C). Εκτός από τις ομάδες 1, 2 και 3, 4ου ομάδα TRAMP-ποντικών τράφηκαν με το UA εμπλουτισμένη διατροφή για 36 εβδομάδων από ηλικία των 4 εβδομάδων (Ομάδα 4)? ομάδες ελέγχου έλαβαν κανονική δίαιτα (Σχ. 1Α). Τα ποντίκια βαθμολογήθηκαν κατά το χρόνο του θανάτου με βάση το φορτίο του όγκου. Kaplan-Meier για την επιβίωση δημιουργήθηκαν για να προσδιοριστεί η συνολική επιβίωση. Log-rank (Mantel-Cox) οικόπεδα έδειξαν αύξηση στη συνολική επιβίωση των ποντικών σε όλες τις ομάδες UA-θεραπεία. Η διάμεση επιβίωση των ποντικών στην ομάδα ελέγχου ήταν 55 εβδομάδες, σε σύγκριση προς 75 εβδομάδες για την Ομάδα 1 και Ομάδα 2, και 72 εβδομάδες για τις Ομάδα 4 (Ρ & lt? 0,05). Στην ομάδα 3, η μέση επιβίωση ήταν 68 εβδομάδες, αλλά απέτυχε να φθάσει στατιστική σημασία (Εικ. 4C). Ως εκ τούτου, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η UA-θεραπεία είναι πιο αποτελεσματική όταν άρχισε νωρίς, όταν ο αλήτης-ποντίκια δεν παρουσίασαν καρκίνο ή μόνο τα πρώτα στάδια της ανάπτυξης του PIN.

Ένα, ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία στις 36 εβδομάδες και η όγκος του όγκου μετρήθηκε όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SEM. * Η στατιστική σημαντικότητα (P & lt? 0,05). Β, το βάρος του σώματος των ποντικών Ομάδες 1-3 TRAMP και τους ελέγχους τους. C, Η επίδραση της UA-θεραπείας σχετικά με τη μακροπρόθεσμη επιβίωση των ποντικών TRAMP. ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier διεξήχθη για τον έλεγχο και την UA-αγωγή ποντίκια TRAMP. Ο μέσος χρόνος επιβίωσης ήταν 55 εβδομάδες για τους μάρτυρες (n = 5). Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης για την ομάδα 1, ομάδα 2, ομάδα 3 και η ομάδα 4 ήταν 75, 75, 68, και 72 εβδομάδες, αντίστοιχα. Συνολικά σημασία προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία log-rank (Mantel-Cox). UA εμπλουτισμένη διατροφή σημαντικά παρατεταμένη επιβίωση.

Η

Ανίχνευση UA στην

ορού

UA ανιχνεύθηκε στον ορό όλων των 3 ομάδων TRAMP-ποντίκια που τρέφονταν με UA εμπλουτισμένη διατροφή. Οι συγκεντρώσεις ανιχνεύονται ποικίλη από περίπου 600 έως 1300 ng /ml χωρίς στατιστική σημασία μεταξύ των ομάδων (Εικ. 5Β). Όπως είχαν επίπεδα ορού UA αναμένεται να έχουν φθάσει σε συγκέντρωση σταθερής κατάστασης σε όλες τις τρεις ομάδες, οι διαφορές στη συγκέντρωση αντανακλάται έτσι ατομικές παραλλαγές. Δεν υπάρχουν άλλες κορυφές ανιχνεύτηκαν στον ορό, δείχνοντας ότι UA δεν δημιουργεί μεταβολιτών (Εικ. 5Α III και IV). Η μελέτη μας παρουσιάζει την πρώτη πειραματική απόδειξη ότι UA απορροφάται καλά μετά την από του στόματος διατροφή και τις συγκεντρώσεις στον ορό επιτυγχάνονται είναι επαρκείς για την πρόκληση βιολογικών επιδράσεων, όπως φαίνεται από την αναστολή της ανάπτυξης του όγκου του προστάτη σε ποντίκια TRAMP.

Α, (ί) ion χρωματογραφήματα των εκχυλισμάτων ορού από τα ποντίκια που δεν είχαν λάβει UA (κενό). (Ii) Πλήρης φάσμα σάρωσης που δείχνει την κορυφή m /z με μοριακή μάζα 469 αντιστοιχεί στο εσωτερικό πρότυπο (IS) γλυκυρητινικό οξύ. (Iii) Πλήρης φάσμα σάρωσης που δείχνει την κορυφή m /z με μοριακή μάζα του προτύπου UA στα 455 και βρίσκεται στο 469 και (iv) Πλήρης σάρωση φάσμα του δείγματος, του χρόνου κατακράτησης ήταν 1,7 και 1,96 λεπτά, αντίστοιχα για τις δύο είναι και το δείγμα. Τα χρωματογραφήματα είναι αντιπροσωπευτικά 3 ανεξάρτητων πειραμάτων. Β, οι συγκεντρώσεις στον ορό της UA υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό Analyst 1.4.2 από τη γραμμική εξίσωση παλινδρόμησης του λόγου περιοχής κορυφής έναντι της συγκέντρωσης της καμπύλης βαθμονόμησης. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SEM.

Η

Συζήτηση

Το μοντέλο TRAMP ποντίκι είναι μια εδραιωμένη αυθόρμητα αναπτυσσόμενων μοντέλο καρκίνου του προστάτη που μιμείται την εξέλιξη του όγκου φυσικό του προστάτη, από το PIN σε ιδιαίτερα επεμβατική μεταστατικό καρκίνο του προστάτη [ ,,,0],20] σε ανθρώπους. Στα ποντίκια TRAMP, όγκος προέρχεται τόσο από DLP και κοιλιακού προστάτη (VP), ως αποτέλεσμα της έκφρασης Tag που κατά κύριο λόγο περιορίζεται στις προστάτη λοβούς [22], ενώ ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη προέρχεται από την περιφερειακή ζώνη, που είναι παρόμοιο με το DLP σε ποντίκια [23]. Οι αντικαρκινικές επιδράσεις διαφόρων χημειοαποτρεπτικών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων των αναλόγων ολεανολικό οξύ, σουλφοραφάνη, πολυφαινόλες που λαμβάνονται από πράσινο τσάι, το σκόρδο συστατικά, η κουρκουμίνη, 3, 3′-Diindolylmethane και genistein έχουν αξιολογηθεί προηγουμένως επί αυθόρμητα αναπτυσσόμενες ογκογένεση του προστάτη σε ποντίκια TRAMP [24], [25], [26]. Επιπλέον, το λυκοπένιο, γ-τοκοφερόλη, silbinin και δίαιτα ντομάτα εμπλουτισμένη όλα έχουν βρεθεί να αυξάνουν την επιβίωση και να καθυστερήσει την εξέλιξη από PIN για αδενοκαρκίνωμα και να μειώσει τη συχνότητα εμφάνισης των φτωχά διαφοροποιημένο καρκίνωμα [23], [27], [28], [ ,,,0],29], [30]. Ωστόσο, η μελέτη χημειοπροφύλαξη με UA σε μοντέλο καρκίνου του προστάτη δεν έχει πραγματοποιηθεί προηγουμένως, και μόνο η ομάδα μας έχει αναφερθεί πρόσφατα για πρώτη φορά ότι UA εμπλουτισμένη διατροφή μπορεί πράγματι αναστέλλει μετάσταση όγκου του προστάτη με ρύθμιση του άξονα CXCR4 /CXCL12 σε ποντίκια TRAMP [19 ]? αν και δεν αξιολογήθηκε η επίδραση της UA στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου. Στην παρούσα μελέτη, μελετήθηκε η επίδραση της θεραπείας UA σε τρία διαφορετικά στάδια της ανάπτυξης του καρκίνου σε ποντίκια TRAMP. Βρήκαμε ότι UA μπορεί να αναστείλει σημαντικά την ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου σε όλα τα τρία στάδια. Στην Ομάδα 1 ποντίκια, παρατηρήσαμε μετρήσιμα κατασταλτικά αποτελέσματα του UA στην ανάπτυξη PIN, ενώ στην Ομάδα 2 ποντίκια, ανάπτυξη υψηλής ποιότητας ΡΙΝ ανεστάλη όπως αποδεικνύεται από τη μείωση των καλά διαφοροποιημένο PIN. Επιπλέον, UA ανέστειλε σημαντικά την εξέλιξη της προ-νεοπλασματικών PIN σε DLP και ο όγκος του όγκου χωρίς να παρατηρηθούν ανεπιθύμητες ενέργειες στο Group 3 ποντίκια. Η ανάπτυξη ενός αφθονία των μη καρκινικές βλάβες σε αυτή την ομάδα σε αντίθεση με την επικράτηση του καρκινικές βλάβες στα ποντίκια TRAMP ελέγχου είναι προφανής. Αποτελέσματα της ιστολογικής βαθμολόγησης πρότεινε περαιτέρω ότι UA μπορεί να αναστείλει κατά κύριο λόγο την ανάπτυξη των προκαρκινικών βλαβών στην πλειοψηφία των ποντικών, και έτσι να εμποδίσει την ανάπτυξη ιδιαίτερα επεμβατική κακοήθεις αλλοιώσεις. UA επίσης αυξηθεί σημαντικά τη συνολική επιβίωση από όσο 20 εβδομάδες, καθυστέρησε την εξέλιξη από το PIN για αδενοκαρκίνωμα, και μείωσε την επίπτωση της PDC.

Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι οι αντι-πολλαπλασιαστικές και προ-αποπτωτικά αποτελέσματα της UA είναι που συνδέονται με την καταστολή της κυκλίνης D1 και COX-2 και την αναστολή της NF-κΒ, STAT3, ΑΚΤ και την ενεργοποίηση /β ΙΚΚα στους προστάτες των ποντικών TRAMP. Αυτή η αναστολή συσχετίζεται με το μήκος της περιόδου σίτισης όπως είναι εμφανές από ουσιαστικά μεγαλύτερη αναστολή στην Ομάδα 3 ποντίκια, τα οποία έλαβαν UA συνεχώς for12 διαδοχικές εβδομάδες. Η μείωση του ΤΝΡ-α και IL-6 επίπεδα συσχετίζονται επίσης με τη διάρκεια της περιόδου θεραπείας. Η καταστολή της κυκλίνης D1 και COX-2 μπορεί επίσης να είναι συνέπεια του μειωμένου ενεργοποίηση του NF-κΒ και STAT3 δεδομένου ότι αυτές προ-φλεγμονώδεις παράγοντες μεταγραφής ρυθμίζουν την έκφραση της κυκλίνης D1 και COX-2 [2], [3], [ ,,,0],31]. Η αυξημένη έκφραση της κασπάσης-3 είναι ενδεικτική της απόπτωσης. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν σαφώς ότι η αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και αύξηση στην απόπτωση παίζουν κεντρικό ρόλο στην UA-διαμεσολαβούμενη αναστολή της εξέλιξης του όγκου του προστάτη σε ποντίκια TRAMP. Το γεγονός ότι η UA ανιχνεύθηκε σε όλα τα δείγματα ορού σε σημαντικές συγκεντρώσεις υποδεικνύουν περαιτέρω ότι UA απορροφάται καλά και από του στόματος διατροφή μπορεί να θεωρηθεί ως μια προτιμώμενη οδός χορήγησης για μια πιθανή χημειοπροληπτικός και θεραπευτικός παράγοντας για τον καρκίνο του προστάτη. Ως εκ τούτου, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι UA-θεραπεία ανέστειλε την εξέλιξη της PIN για αδενοκαρκίνωμα, μειωμένη ανάπτυξη του όγκου και επίσης παρέτεινε την επιβίωση των ποντικών. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι UA μπορεί να έχει ένα τεράστιο δυναμικό για χρήση ως χημειοπροληπτικός παράγοντας, καθώς και μια πολλά υποσχόμενη παράγων για τη θεραπεία καρκίνου του προστάτη.

Εν περιλήψει, τα δεδομένα μας δείχνουν καθαρά ότι το τάισμα UA καθυστερεί την εξέλιξη της προστάτη καρκίνου σε ποντίκια μέσω της διαφοροποίησης των διαφόρων προ-φλεγμονωδών μορίων. Επειδή TRAMP είναι μια αυθόρμητη μοντέλο για τον καρκίνο του προστάτη που μιμείται στενά προοδευτική μορφές της ανθρώπινης ασθένειας, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης παρέχουν μια σταθερή βάση για την επιδίωξη περαιτέρω μελέτες σχετικά με τη χρήση του UA είτε μόνη της είτε σε συνδυασμό με άλλη θεραπεία για την πρόληψη και /ή θεραπεία του καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

UA (98% καθαρό) αγοράσθηκε από Guangxi Changzhou Φυσικά Προϊόντα Ανάπτυξης Company Ltd (Κίνα). UA αναμίχθηκε με κανονική δίαιτα ποντικού σε 1% w /w και αποθηκεύτηκε στους 4 ° C. Tris, γλυκίνη, NaCl, SDS, γλυκυρροχητινικό οξύ και το αντίσωμα β-ακτίνης αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, USA) και συζευγμένο με HRP δευτερογενές αντίσωμα ελήφθη από την Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Αντισώματα έναντι φωσφο-STAT3 (Tyr 705), φωσφο-ΑΚΤ (Ser 473), STAT3 αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Αντισώματα προς ΑΚΤ, p65, φωσφο-ΙΚΚα ειδικών /β (Ser 180 /Ser 181), και ΙΚΚα αγοράστηκαν από Cell Signaling Technology (Beverly, ΜΑ). TNF-α και IL-6 κιτ ELISA αγοράσθηκαν από την Research Instruments (MA, USA). αντιδραστήριο Bradford αγοράστηκε από την Bio-Rad (Hercules, CA). κιτ χρώση ανοσοϊστοχημείας αγοράστηκε από την Dako (Δανία).

ποντίκια TRAMP αναπαραγωγή και τον προσδιορισμό του γονότυπου

Τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Σιγκαπούρης NACLAR (νόμος από τον Νοέμβριο του 2004) για εργαστηριακή χρήση ζώων και φροντίδα και εγκρίθηκε από NUS Θεσμικών Ζωικά φροντίδα και χρήση επιτροπής αριθμό πρωτοκόλλου 052/09. Εν συντομία, 4-εβδομάδων θηλυκά ποντίκια TRAMP αγοράστηκαν από το The Jackson Laboratory ζευγαρώθηκαν με C57BL /6 αρσενικοί στο NUS CARE (Σιγκαπούρη). Τα νεογνά γονότυπου για το διαγονίδιο (Tag) σε ηλικία 3 εβδομάδων? DNA εκχυλίστηκε από την ουρά τεμάχια με χρήση αντιδραστηρίου TRIZOL® (Invitrogen, USA) και ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο Nanodrop (Thermo επιστημονικούς, USA). Ένα μg του DNA ελήφθη για ανάλυση PCR. Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) μίγμα της αντίδρασης περιείχε 10 μΐ 5 ρυθμιστικού × QIAGEN PCR, 1 μg DNA, 0.6 μΜ κάθε ένα από τα εμπρός και αντίστροφοι εκκινητές, 2 μΙ μίγματος dNTP και 1 μΐ ένζυμο πολυμεράσης Taq σε τελικό όγκο 50 μλ. Εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για προσδιορισμό του γονότυπου, πρόσθιο εκκινητή: 5′-CCG GTC GAC CGG AAG CTT CCA CAA ΟΤΟ CAT ΤΤΑ-3 ‘, ανάστροφο εκκινητή: 5′-ΑΟΟ CAT TCC ACC ACT GCT CCC ΑΤΤ CAT C-3’. Οι συνθήκες PCR ήταν 94 ° C για 3 λεπτά, 94 ° C για 30 sec, 62 ° C για 1 λεπτό, 72 ° C για 1 λεπτό, επαναλάβετε τα βήματα 2-4 για 35 κύκλους, 72 ° C για 2 λεπτά και διατηρήθηκε στους 4 ΝΤΟ. Τα προϊόντα PCR διέτρεξαν επί πήγματος αγαρόζης 1% που περιείχε 1 × GelRed λεκές γέλη νουκλεϊκών οξέων από Biotium (Hayward, CA). Βιτρώ ζώνες έγιναν ορατές κάτω από υπεριώδες φως και φωτογραφήθηκε χρησιμοποιώντας Biorad Gel σύστημα doc EZ (Bio-Rad, USA). Η διαγονιδιακή θετικά νεογνά χρησιμοποιήθηκαν στη συνέχεια για τις μετέπειτα πειράματα.

Παθολογική διαβάθμιση των καρκινικών ιστών

Η παθολογική ταξινόμηση του καρκίνου του προστάτη TRAMP διεξήχθη σύμφωνα με το σύστημα βαθμολόγησης που περιγράφηκε προηγουμένως [22]. αλλοιώσεις του προστάτη στην DLP είχαν ιστολογικά βαθμολογήθηκαν ως φυσιολογικά (αγωγός με επένδυση από μονό στρώμα εκκριτικά επιθηλιακά κύτταρα και περιβάλλεται από δύο ή τρία στρώματα κυττάρων του fibrousmuscular στρώμα), χαμηλού βαθμού προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) [επιθηλιακά κύτταρα με μεταβλητά επιμήκεις πυρήνες με συνοπτικές χρωματίνης], PIN υψηλής ποιότητας (επιθηλιακά διαστρωμάτωση και καπιτοναρίσματος, παρουσία μικροθηλωματώδης και cribiform δομές), καλά διαφοροποιημένο καρκίνωμα (WDC) (επιθηλιακά κύτταρα εισβάλλουν ινωμυϊκή στρώμα), και μετρίως διαφοροποιημένων (MDC) σε φτωχά διαφοροποιημένα (PDC) αδενοκαρκίνωμα του ο προστάτης (φύλλα των νεοπλασματικών κυττάρων με μικρή ή καθόλου αδενικές δομές). 15 τυχαία επιλεγμένα μικροσκοπικά πεδία σε αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) τομές του DLP βαθμολογήθηκαν για την επίπτωση και παθολογική βαθμός του καρκίνου του προστάτη σε έλεγχο και ποντικούς UA Fed TRAMP

in vivo.

αντι-όγκου μελέτη

Οι καθαρές αρσενικά ποντίκια TRAMP, ηλικίας 4 εβδομάδων, διατηρήθηκαν σε ελεγχόμενη θερμοκρασία δωμάτια με σκότους /12 ωρών φωτός. Όλα τα ποντίκια ζυγίστηκαν πριν έναρξη του πειράματος. Οι ποντικοί στη συνέχεια τυχαιοποιήθηκαν στις ακόλουθες ομάδες UA τρέφονται και ελέγχου (n = 5). Ομάδα 1: 4 εβδομάδων ποντίκια TRAMP τράφηκαν με UA (1% w /w) εμπλουτισμένη διατροφή για 8 εβδομάδες? Ομάδα 2: 12 εβδομάδες παλιά ποντίκια TRAMP ταΐστηκαν με UA εμπλουτισμένη διατροφή για 6 εβδομάδες? Ομάδα 3: 24 εβδομάδες τα ποντίκια TRAMP τράφηκαν με δίαιτα εμπλουτισμένη UA για 12 εβδομάδες. Ελέγχου TRAMP ποντικών έλαβε κανονική διατροφή. Το σωματικό βάρος και το μέγεθος του όγκου καταγράφηκαν δύο φορές κάθε εβδομάδα και το μέγεθος του όγκου προσδιορίστηκε με Vernier δαγκάνα και υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τον τύπο [μήκος Χ (πλάτος)

2] /2. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO

2 εισπνοή ακολουθούμενη από αυχενική εξάρθρωση. Δείγματα αίματος, συλλέχθηκαν με καρδιακή παρακέντηση, διατηρήθηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα και φυγοκεντρήθηκε στις 10.000 rpm για 20 λεπτά για να ληφθεί ορός, το οποίο αποθηκεύτηκε σε κλάσματα στους -80 ° C. Ο όγκος του όγκου μετρήθηκε και ζυγίστηκε. Προστάτη αδένα microdisected από σπερματοδόχων κύστεων κάτω από ένα στερεομικροσκόπιο, σταθεροποιήθηκαν σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη φωσφορικό για Η &? Ε και ανοσοϊστοχημική ανάλυση

δοκιμασία ELISA για ΤΝΡ-α και IL-6

αποθηκευτεί. δείγματα ορού αναλύθηκαν για ΤΝΡ-α και IL-6 επίπεδα χρησιμοποιώντας κιτ ELISA (R &? συστήματα D, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. πρωτόκολλα Sandwich ELISA χρησιμοποιήθηκαν και βαθμονόμηση έγινε με πρότυπο ΤΝΡ-α και IL-6 που παρέχονται στο κιτ.

κηλίδωση Western

dorsolateral προστάτη ιστούς όγκων λύθηκαν σε ρυθμιστικό λύσης που περιέχει (20 mM Τρις (ρΗ 7,4), 250 mM NaCl, 2 mM EDTA (ρΗ 8.0), 0.1% Triton Χ-100, 0,01 mg /ml απροτινίνη, 0,005 mg /ml λευπεπτίνη, 1 mM PMSF, και 4 mM NaVO4). Τα προϊόντα λύσης στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στα 13.000 rpm για 10 λεπτά για να απομακρυνθεί το αδιάλυτο υλικό και 50 μg πρωτεΐνης επιλύθηκε σε ένα 10% SDS πήκτωμα.