Αφηρημένο

Ιστορικό

Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η microRNAs (miRNAs ) μπορούν να λειτουργήσουν ως καταστολείς όγκων και ογκογονίδια. Πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) σε γονίδια miRNA μπορεί να επηρεάσει την ωρίμανση των miRNAs ή miRNA με τη μεσολάβηση μεταγραφικής ρύθμισης. Ο στόχος μας ήταν να διερευνηθεί η συσχέτιση των SNPs σε απελευθερωμένης miRNAs με την κλινική έκβαση σε ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) σε ένα κινεζικό πληθυσμό.

Μέθοδοι

Η απορρύθμιση miRNAs σε NSCLC και SNPs τους εντοπίστηκαν μέσω δημόσιων βάσεων δεδομένων. Μια ενιαία SNP, rs895819 στο

προ-miR-27a

, βρέθηκε κατάλληλο για την επιλογή. δοκιμασίες TaqMan διεξήχθησαν για προσδιορισμό του γονότυπου και να εκτιμηθεί η επίδραση στη συνολική επιβίωση (OS) και την απάντηση χημειοθεραπεία σε 576 ασθενείς με NSCLC.

Αποτελέσματα

Log-rank test και ανάλυση παλινδρόμησης Cox έδειξε ότι το G αλληλόμορφο της rs895819 σχετίστηκε με μικρότερη επιβίωση και αυξημένο κίνδυνο θανάτου σε NSCLC [κυρίαρχο μοντέλο: 22,0 έναντι 46,0 μήνες,

P

& lt? 0.001? προσαρμοσμένη αναλογία κινδύνου (HR) = 1,71, 95% εμπιστευτικά διάστημα (CI): 1.12 – 2.26]. Περαιτέρω ανάλυση παλινδρόμησης κατά βήματα προταθεί ότι αυτή η SNP ήταν μια ανεξάρτητα δυσμενή παράγοντα για την πρόγνωση του NSCLC και η επίδραση παρέμεινε σημαντική στην ανάλυση υποομάδας στρωματοποιημένη κατά κλινικές παραμέτρους και την κατάσταση της θεραπείας. Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης έδειξε ότι τα άτομα με γονότυπους AG /GG της rs895819 είχε μειωθεί σημαντικά το ποσοστό ανταπόκρισης στην πλατίνα χημειοθεραπεία με βάση την σύγκριση με εκείνους με το γονότυπο ΑΑ.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμός μπορεί να επηρεάσει την κλινική έκβαση των ασθενών με NSCLC. Περαιτέρω μεγάλες μελέτες δείγμα θα πρέπει να χρησιμοποιείται για την επικύρωση ευρήματά μας

Παράθεση:. Xu J, Γιν Ζ, Shen Η Gao W, Qian Υ, Pei D, et al. (2013) Ένας γενετικός πολυμορφισμός στο

προ-miR-27a

παρέχει κλινική έκβαση της μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα σε ένα κινεζικό πληθυσμό. PLoS ONE 8 (11): e79135. doi: 10.1371 /journal.pone.0079135

Επιμέλεια: Xifeng Wu, MD Anderson Cancer Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6 Ιούνη 2013? Αποδεκτές: 18η Σεπτεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 6 Νοεμβρίου του 2013

Copyright: © 2013 Xu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81172140, 81272532) και την προτεραιότητα Ακαδημαϊκό Πρόγραμμα Ανάπτυξης των Jiangsu Ιδρυμάτων Ανώτατης Εκπαίδευσης (JX10231801). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με όλο τον κόσμο, λόγω της υψηλής επίπτωσης της, κακοήθη συμπεριφορά και έλλειψη αποτελεσματικής στη θεραπευτική στρατηγική [1]. Στην Κίνα, υπήρξε μια σημαντική αύξηση στη συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του πνεύμονα τόσο στις αστικές όσο και στις αγροτικές περιοχές κατά τη διάρκεια των δύο τελευταίων δεκαετιών, ιδιαίτερα σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) [2], [3]. Παρά το γεγονός ότι με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία συνδυασμού είναι η θεραπεία πρώτης γραμμής για ασθενείς με προχωρημένο NSCLC, τα ποσοστά ανταπόκρισης ποικίλουν μεταξύ των ασθενών, που κυμαίνονται από 26% έως 60% [4]. Η πενταετής επιβίωση πάνω ποσοστό (OS) είναι μόνο 15% στις ΗΠΑ και είναι ακόμη χαμηλότερο στην Κίνα [1]. Ιδρύθηκε μέθοδοι για την πρόβλεψη πρόγνωση περιλαμβάνουν τον όγκο, κόμβος, και μετάσταση (TNM) σύστημα σταδιοποίησης, ωστόσο, πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η ανακάλυψη και εφαρμογή ειδικών προγνωστικών βιοδεικτών μπορεί να βελτιώσει την αγωγή και την έκβαση των ασθενών με NSCLC [5]. Παρά τη σημαντική ποσότητα της έρευνας [6], [7], [8], πολύ λίγες σταθερές βιοδείκτες έχουν προσδιοριστεί για την αξιολόγηση του κινδύνου ή κατηγόρησης κλινικού αποτελέσματος και απαιτείται περαιτέρω διερεύνηση.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μια κατηγορία των μικρών ενδογενών RNAs μη κωδικοποιητική που δρουν ως αρνητικοί ρυθμιστές γονιδίου με άμεση διάσπαση mRNA στόχο ή με αναστολή της μετάφρασης [9], [10]. Η απώλεια και το κέρδος της λειτουργίας των συγκεκριμένων miRNAs ή παρεκκλίνουσα έκφραση των miRNAs πιστεύεται ότι είναι βασικά γεγονότα στην ογκογένεση πολλών τύπων καρκίνου [11], [12]. Στο NSCLC, έχουν προφίλ έκφρασης των miRNAs και ειδικά miRNAs έχουν συσχετιστεί με την επιβίωση των ασθενών [13], [14]. Επιπλέον, υπάρχουν αυξανόμενες ενδείξεις ότι πολυμορφισμοί ενός νουκλεοτιδίου (SNPs), παίζουν σημαντικό ρόλο στην ευαισθησίας στον καρκίνο και την έκβαση. Ο υψηλός βαθμός φυλογενετικής διατηρήσεως σε αλληλουχίες miRNA προσδιορίζει ότι οι λειτουργικές γενετικές παραλλαγές σε miRNAs μπορεί να επηρεάσει διάφορες βιολογικές διεργασίες. Ως εκ τούτου, SNPs σε γονίδια miRNA θα μπορούσε να επηρεάσει τις πρωτογενείς μεταγραφές (PRI-miRNAs), πρόδρομος RNAs (προ-miRNAs), ώριμη miRNAs ή miRNA με τη μεσολάβηση μεταγραφικής ρύθμισης [15].

Αξιοποιήσαμε τις δημόσιες βάσεις δεδομένων για να εντοπίζουν απορυθμισμένη miRNAs σε NSCLC και SNPs σε αυτά τα miRNAs ακολουθίες, συμπεριλαμβανομένης της πρωτοβάθμιας, πρόδρομος και ώριμη miRNAs. αναζητήσεις μας εντόπισε μια ενιαία SNP, rs895819 στο

προ-miR-27a

, για περαιτέρω διερεύνηση. Ο πολυμορφισμός rs895819 βρίσκεται στο τερματικό βρόχο του

προ-miR-27a

και περιλαμβάνει μια gt A &? G μετάβαση νουκλεοτιδίων. HSA-miR-27a έχει δειχθεί ότι λειτουργεί ως ογκογονίδιο με τη στόχευση prohibitin [16] και συνεπώς είναι ένας στόχος για αντικαρκινικά φάρμακα [17], [18]. Metens-Τάλκοτ

et al

. [19] έδειξε ότι η επιμόλυνση του αντιπληροφοριακού miR-27a σε καρκινικά κύτταρα του μαστού οδήγησε σε αύξηση στην έκφραση της υποτιθέμενης δακτύλου Sp-καταστολέα ψευδάργυρος και το domain BTB που περιέχει 10 (ZBTB10), με ταυτόχρονη μείωση στην έκφραση του Sp-εξαρτώμενη επιβίωση και αγγειογόνων γονίδια. Αυτές περιλαμβάνουν αγγειακό ενδοθηλιακό παράγοντα ανάπτυξης (VEGF) και survivin [19]. Υπερ-έκφραση του VEGF και επιζών συνδέονται με την εξέλιξη ή κακή επιβίωση του NSCLC [20], [21]. Sun

et al

. [22] ανέφεραν rs895819 τροποποιεί γαστρικό καρκίνο επιδεκτικότητα με ρύθμιση των επιπέδων έκφρασης του miR-27a και του γονιδίου-στόχου του,

ZBTB10

. Shi

et al

. [23] πρότεινε ότι αυτός ο πολυμορφισμός θα μπορούσε να προβλέψει νεφρική κίνδυνο καρκίνου των κυττάρων σε ένα κινεζικό πληθυσμό. Μετα-ανάλυση έδειξε ότι το

προ-mir-27α

πολυμορφισμός μπορεί να παίζουν ρόλο στην προδιάθεση του καρκίνου του μαστού και της ανάπτυξης καρκίνου σε Καυκάσου [24].

Μέχρι σήμερα, δεν υπήρξαν αναφερθεί μελέτες για τη σχέση μεταξύ

προ-mir-27α πολυμορφισμοί

και την επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο. Βασίζονται στην τρέχουσα γνώση των βιολογικών λειτουργιών του HSA-miR-27a και ο ρόλος των πολυμορφισμών στην πρόβλεψη του κινδύνου του καρκίνου, υποθέσαμε ότι rs895819 μπορεί να σχετίζεται με την κλινική έκβαση σε ασθενείς με NSCLC. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε τις συσχετίσεις μεταξύ rs895819 και NSCLC συνολική επιβίωση (OS), καθώς και απάντηση με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Nanjing Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Όλοι οι συμμετέχοντες ήταν εθελοντική και κατόπιν γραπτής ενημερωμένη συγκατάθεση πριν από τη συμμετοχή σε αυτή την έρευνα.

Θέματα Μελέτη

Όλα τα θέματα που είχαν προσληφθεί από την Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing (Jiangsu, Κίνα) μεταξύ Ιανουαρίου 2004 και Σεπτεμβρίου 2012. ήταν όλοι διαγνωστεί πρόσφατα, ιστοπαθολογικά επιβεβαιώνεται και χωρίς προηγούμενο ιστορικό καρκίνου ή προηγούμενη χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία. Συνολικά, 612 ασθενείς με ΜΜΚΠ προσλήφθηκαν, όλα εκ των οποίων ήταν άσχετα εθνοτικών Κινέζων Χαν πληθυσμού (CHB). Ένα δομημένο ερωτηματολόγιο σχετικά με τη δημογραφία και την έκθεση του περιβάλλοντος, όπως η ηλικία, το φύλο και την κατανάλωση του καπνίσματος, διεξήχθη από εκπαιδευμένους ερευνητές μέσω πρόσωπο με πρόσωπο συνεντεύξεις με τους ασθενείς. Επιπλέον, 5 ml φλεβικού αίματος συλλέχθηκε από κάθε ασθενή για την εκχύλιση γενωμικού DNA. Τα υποκείμενα με χαμηλή συχνότητα (& lt? 1 τσιγάρο ανά ημέρα) και διάρκεια (& lt? 1 έτος) από το κάπνισμα ορίστηκαν ως μη καπνιστές? όλοι οι άλλοι είχαν χαρακτηριστεί ως καπνιστών.

εκτιμήθηκε Η απάντηση με βάση την πλατίνα (σισπλατίνη ή η καρβοπλατίνη) χημειοθεραπείας σε ασθενείς με προχωρημένο NSCLC μετά τις δύο ή τρεις πρώτες κύκλους και ορίζεται σύμφωνα με Κριτηρίων Αξιολόγησης της Ανταπόκρισης σε συμπαγείς όγκους κριτήρια (RECIST) 1.1 [25]. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε δύο μεγάλες ομάδες με βάση τις απαντήσεις τους: εκείνα με πλήρη ανταπόκριση (CR) και μερική ανταπόκριση (PR) έχουν χαρακτηριστεί ως ανταποκρινόμενοι? εκείνα με σταθερή νόσο (SD) και προοδευτική ασθένεια (PD) έχουν χαρακτηριστεί ως μη ανταποκρινόμενοι. Παρακολούθηση διεξήχθη κάθε τρεις μήνες από τη στιγμή της εγγραφής τους μέχρι το θάνατο ή την τελευταία προγραμματισμένη παρακολούθηση. Η maximun χρόνος παρακολούθησης ήταν 102,0 μήνες (τελευταία παρακολούθηση, τον Φεβρουάριο του 2013) και η διάμεση χρόνος παρακολούθησης ήταν 18,0 μήνες. Έχουμε επιλέξει τις ασθενείς με πλήρη παρακολούθηση-ups και επαρκές δείγμα DNA. επιλέχθηκαν ασθενείς που ολοκλήρωσαν όλες τις παρακολουθήσεις και παρέχεται επαρκής δείγμα DNA. Από τους αρχικούς 612 ασθενείς, 576 εγγράφηκαν και ο γονότυπος στη μελέτη μας.

γονοτυπικός

Κάθε δείγμα αίματος συλλέχθηκε σε αντιπηκτικό EDTA σωλήνα και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την εκχύλιση του DNA. Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε ακολουθώντας τα πρότυπα πρωτόκολλα, με πέψη με πρωτεϊνάση Κ και εκχύλιση με φαινόλη /χλωροφόρμιο. Η γονοτύπηση εκτελέστηκε με δοκιμασίες αλληλόμορφες διάκριση TaqMan χρησιμοποιώντας σύστημα ΑΒΙ 7900 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Ο κύριος και ανιχνευτές έχουν ως εξής: προς τα εμπρός, GGCGGAACTTAGCCACTGT, αντίστροφη, CAGGGCTTAGCTGCTTGTG? FAM-ACTTGGTGTGGACC-MGB και HEX-ACTTGGCGTGGAC-MGB. Οι δοκιμασίες TaqMan διεξήχθησαν σε έναν τελικό όγκο αντίδρασης 5 μΐ που περιέχει 0.25 μΙ εκκινητή, 0,125 μΙ ιχνηλάτη, 2 μΙ PCR αντιδραστήριο μίγμα και 25 ng DNA. Η αντίδραση PCR συνίστατο από ένα αρχικό στάδιο στους 95 ° C για 10 λεπτά που ακολουθήθηκε από 55 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 15 s και ανασύνδεση σε 60 ° C για 60 ss. λογισμικού διακρίσεις αλληλομόρφων SDS (ΑΒΙ) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των αποτελεσμάτων του γονότυπου PCR. Δύο κενό (νερό) μάρτυρες συμπεριλήφθηκαν σε κάθε δοκιμασία 384 φρεατίων. Τουλάχιστον το 10% των δειγμάτων επιλέχθηκαν τυχαία για ανάλυση επανάληψης, αποδίδοντας 100% συμφωνία. Ένα επιπλέον 60 δείγματα επιλέχθηκαν τυχαία για την άμεση αλληλουχίας για να επιβεβαιωθούν τα αποτελέσματα TaqMan. Και πάλι, τα αποτελέσματα έδειξαν 100% συμφωνία.

Στατιστική Ανάλυση

Hardy-Weinberg ισορροπία αξιολογήθηκε από μια χ

2 τεστ καλοσύνη-of-fit. OS υπολογίστηκε ως ο χρόνος μεταξύ της πρώτης θεραπείας και το θάνατο ή την τελευταία παρακολούθηση ημερομηνία. Σύνδεσης μεταξύ του ποσοστού του γονότυπου και η επιβίωση υπολογίστηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier και δοκιμασία log-rank. Ο μέσος χρόνος επιβίωσης (MST) υπολογίστηκε επίσης. Αναλογικών κινδύνων κατά Cox μοντέλα πραγματοποιήθηκαν για την εκτίμηση των λόγων κινδύνου (HR) και 95% εμπιστευτικά διαστήματα τους (ΠΙ) για το OS. μοντέλο σταδιακής παλινδρόμησης Cox πραγματοποιήθηκε επίσης να καθορίσουν τους παράγοντες πρόβλεψης για NSCLC πρόγνωση. Η

P

αξία για τη δοκιμή ετερογένειας βασίστηκε στη χ

δοκιμή Q 2-based. αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και 95% ΚΠ τους υπολογίστηκαν ως μέτρο της διαφοράς στο ποσοστό ανταπόκρισης χρησιμοποιώντας λογιστική ανάλυση παλινδρόμησης (ανταποκρίθηκαν έναντι μη ανταποκρινόμενοι). Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS 18.0 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA), και

P

& lt?. 0.05 βασίζονται σε δύο-side δοκιμή θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

αποτελέσματα

τα χαρακτηριστικά της μελέτης Πληθυσμός

τα δημογραφικά και κλινικά χαρακτηριστικά των 576 ασθενών που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη, και την ένωσή τους με το λειτουργικό σύστημα που δίνονται στον πίνακα S1. Η διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 60 έτη (εύρος, 29-86 ετών) και περιελάμβανε 380 άνδρες (66,0%) και 267 καπνιστές (46,4%). Μεταξύ αυτών των ασθενών, 381 (66,2%) ήταν αδενοκαρκινώματα, 166 (28,8%) ήταν καρκινώματα πλακωδών κυττάρων, και οι άλλοι (29 ασθενείς, 5,0%) ήταν μεγάλων κυττάρων, μη διαφοροποιημένα ή μικτών κυττάρων καρκινωμάτων. Κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης, 206 ασθενείς πέθαναν από NSCLC. το κάπνισμα, το κλινικό στάδιο και χειρουργική επέμβαση συσχετίστηκε σημαντικά με τον χρόνο επιβίωσης (όλα τα log-rank

P

& lt? 0.001, Σχήμα 1)? Ωστόσο, η χημειοθεραπεία και η στοχευμένη θεραπεία δεν ήταν. Αξίζει να σημειωθεί ότι, οι ασθενείς με διαβήτη είχαν 42% μειωμένο σημαντικά τον κίνδυνο θανάτου, σε σύγκριση με άτομα χωρίς διαβήτη (54,9

vs

42,0 μήνες? HR = 0,58, 95% CI:. 0,35 – 0,97).

Log-rank

P

τιμές ήταν (Α) & lt? 0.001, (Β) 0.034, (C) & lt? 0.001, (Δ) & lt? 0.001, (Ε) & lt? 0.001 και (F ) & lt?. 0.001, αντίστοιχα

Η

Επιλογή SNP

Η βάση δεδομένων IGDB.NSCLC (https://igdb.nsclc.ibms.sinica.edu.tw) [26] ήταν που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό απελευθερωμένης miRNAs σε NSCLC. Ένα σύνολο από 28 έως ρυθμιζόμενων miRNAs στις ενισχυμένες περιοχές και 28 κάτω-ρυθμίζονται miRNAs στην διαγράφονται περιοχές βρέθηκαν. βάση δεδομένων Πατροκλής ο Μακεδόνας (www.patrocles.org) [27] προσδιορίζονται 5 miRNAs με 5 υποθετικό SNPs στο πλαίσιο του προ-miRNAs ή ώριμη miRNAs ακολουθίες αυτών των 56 miRNAs (Πίνακας 1). Αυτά περιλαμβάνονται rs2043556 εντός του

προ-miR-605

ακολουθία και rs895819 μέσα στο

προ-miR-27a

ακολουθία, που και οι δύο είχαν μια συχνότητα ανήλικο αλληλομόρφων (MAF) & gt? 5% σε CHB . Η rs2043556 είχε αποκλειστεί, επειδή η υψηλή περιεκτικότητα σε GC μπορεί να οδηγήσει σε αποτυχία στη δοκιμασία ανιχνευτή TaqMan. Ως εκ τούτου, μόνο ένα SNP, rs895819 A & gt? G, τελικά επιλεγεί

Η

Σύνδεσης μεταξύ της

προ-miR-27a

Πολυμορφισμός και Επιβίωση σε NSCLC

Η. συχνότητες γονοτύπου των rs895819 ήταν σε ισορροπία Hardy-Weinberg (

P

= 0,538). Η δοκιμασία log-rank έδειξε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ rs895819 και την επιβίωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ στην συνεπικρατούν και κυρίαρχα μοντέλα (και τα δύο

P

& lt? 0.001? Σχήμα 1). Οι ασθενείς που φέρουν τουλάχιστον ένα αλληλόμορφο παραλλαγή είχε μια μικρότερη OS σε σύγκριση με εκείνους με το γονότυπο ΑΑ (22,0

vs

46,0 μήνες,

P

& lt?. 0.001). Μονοπαραγοντική Cox ανάλυση παλινδρόμησης έδειξε ότι αυτό το SNP ήταν ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης του NSCLC (κυρίαρχο μοντέλο: HR = 1,74, 95% CI: 1,32 – 2,28). Η ένωση παραμένει σημαντική μετά από προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, ο σακχαρώδης διαβήτης, ιστολογία, κλινικό στάδιο, χειρουργική επέμβαση και η κατάσταση επεξεργασίας (κυρίαρχο μοντέλο: HR = 1,71, 95% CI: 1.12 – 2.26? Πίνακας 2).

για να προσδιοριστούν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση NSCLC, πραγματοποιήσαμε πολυπαραγοντική κλιμακωτή ανάλυση παλινδρόμησης Cox, χρησιμοποιώντας επιλεγμένα δημογραφικά χαρακτηριστικά, τα κλινικά χαρακτηριστικά και το

προ-miR-27a

πολυμορφισμό. Το τελικό μοντέλο πρόβλεψης περιλαμβάνονται τα rs895819 SNP (

P

& lt? 0.001), σε συνδυασμό με το κάπνισμα (

P

= 0,018), με σακχαρώδη διαβήτη (

P

= 0,042) και χειρουργική επέμβαση (

P

& lt? 0.001). (Πίνακας 3)

Η

διαστρωμάτωση και η αλληλεπίδρασή Ανάλυση

Η σχέση μεταξύ

προ-miR-27a

πολυμορφισμού και η επιβίωση NSCLC αξιολογήθηκε περαιτέρω με στρωματοποιημένη ανάλυση από την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, ο σακχαρώδης διαβήτης, ιστολογία, κλινικό στάδιο, χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία και στοχευμένη θεραπεία. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4, παρατηρήθηκε αυξημένος κίνδυνος θανάτου στα ακόλουθα θέματα: ηλικιωμένα άτομα (προσαρμοσμένη HR = 2,71, 95% CI: 1,84 – 4,00)? αρσενικά (προσαρμοσμένη HR = 2,05, 95% CI: 1,46 – 2,87)? καπνιστές (προσαρμοσμένη HR = 2,08, 95% CI: 1,40 – 3,08)? άτομα χωρίς διαβήτη (προσαρμοσμένη HR = 1,53, 95% CI: 1.15-2.05)? εκείνοι με αδενοκαρκινώματα (προσαρμοσμένη HR = 1,73, 95% CI: 1,19 – 2,49)? εκείνους που δεν υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση (προσαρμοσμένη HR = 1,67, 95% CI: 1,18 – 2,36)? υποβληθεί σε χημειοθεραπεία (προσαρμοσμένη HR = 1,66, 95% CI: 01.23 – 02.25)? και δεν έχουν λάβει στοχευμένη-θεραπεία (προσαρμοσμένη HR = 1,71, 95% CI: 1,26 – 2,32). δοκιμή ετερογένεια μεταξύ κάθε ζεύγους στρωμάτων έδειξε ότι η ετερογένεια ήταν σημαντική για το κάπνισμα (

P

= 0,019). Ωστόσο, η ανάλυση της αλληλεπίδρασης γονιδίων το κάπνισμα δεν αποκάλυψε σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ του πολυμορφισμού rs895819 και το κάπνισμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η

Σύνδεσης μεταξύ της

προ-miR-27a

Πολυμορφισμός και Ανταπόκρισης με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία

αξιολογήθηκε περαιτέρω η σχέση μεταξύ rs895819 και την ανταπόκριση στη θεραπεία. Μόνο οι 296 ασθενείς με ανεγχείρητο προχωρημένο στάδιο NSCLC (IIIb-IV), οι οποίοι είχαν λάβει με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία ως θεραπεία πρώτης γραμμής, και είχε μια πλήρη αξιολόγηση της ανταπόκρισης χημειοθεραπεία, είχαν συμπεριληφθεί προκειμένου να αποφευχθεί πιθανή σύγχυση συνέπειες από τη χειρουργική επέμβαση, κλινικό στάδιο και είδος της θεραπείας. Λεπτομερείς πληροφορίες για την θεραπεία παρέχεται στον Πίνακα S2. Το πολυπαραγοντικό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης έδειξε ότι οι ασθενείς με αλληλόμορφο G της rs895819 είχε μειωθεί σημαντικά το ποσοστό ανταπόκρισης στην πλατίνα χημειοθεραπεία με βάση την σύγκριση με εκείνους με το γονότυπο ΑΑ (AG /GG εναντίον ΑΑ: προσαρμογή OR = 0.54, 95% CI = 0.32- 0,91) και κατά συνέπεια, αυξημένος κίνδυνος θανάτου (προσαρμοσμένη HR = 1,59, 95% CI: 01.09 – 02.31). Διαπιστώσαμε τα παρόμοια αποτελέσματα με τη χρήση ενός μοντέλου πρόσθετο (προσαρμογή OR = 0.54, 95% CI = 0,35 – 0,83? Προσαρμοστεί HR = 1,59, 95% CI: 0,97 – 1,63? Πίνακας 5).

Η

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι το αλληλόμορφο παραλλαγή G του rs895819 στο

προ-miR-27a

συσχετίστηκε με σημαντικά αυξημένο κίνδυνο θανάτων για NSCLC. Το αποτέλεσμα ήταν ακόμη μεγαλύτερη σε πιο ηλικιωμένα άτομα, άνδρες, εκείνοι με αδενοκαρκινώματα, χωρίς διαβήτη, και σε εκείνους που δεν υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση και έλαβαν χημειοθεραπεία. Επιπλέον, μειώθηκε σημαντικά το ποσοστό ανταπόκρισης στην πλατίνα χημειοθεραπεία με βάση παρατηρήθηκε σε ασθενείς με προχωρημένο NSCLC με γονότυπους AG /GG. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη για τη σύνδεση μεταξύ του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμό και την κλινική έκβαση σε ασθενείς με NSCLC.

Αν και miRNAs αντιπροσωπεύουν μόνο ένα μικρό μέρος του γονιδιώματος, ρυθμίζουν σχεδόν το ένα τρίτο των ανθρώπινων γονιδίων [28]. Ένας αυξανόμενος αριθμός μελετών έχουν δείξει ότι τα miRNAs εμπλέκονται σε κρίσιμες βιολογικές διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένης της ανάπτυξης, της διαφοροποίησης, της απόπτωσης και του πολλαπλασιασμού, και συνεπώς μπορεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στην καρκινογένεση ως ογκογονίδια όγκου ή καταστολείς [29], [30]. Γενετικοί πολυμορφισμοί σε miRNAs έχουν αναφερθεί ότι συνδέονται με πολλούς όγκους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του στομάχου [31], του καρκίνου του μαστού [32] και του παχέος εντέρου [33]. Hu

et al

. [14] διαπιστώθηκε ότι μια παραλλαγή ομοζυγώτες της rs11614913 στο

προ-miR-196a2

συσχετίστηκε με κακή επιβίωση σε ασθενείς με NSCLC. Χονγκ

et al

. [34] πρότεινε ότι το

προ-miR-149

rs2292832 Τ & gt? C πολυμορφισμοί συνδέονταν σημαντικά με την επιβίωση ελεύθερη νόσου και OS σε NSCLC. Επιπλέον, γενετικές παραλλαγές εντός των γονιδίων miRNA-μηχανήματα ή θέσεις miRNA δέσμευσης σε 3′-αμετάφραστη περιοχή γονιδίων στόχων έχουν επίσης αναφερθεί ότι σχετίζεται με την ευαισθησία του καρκίνου ή την πρόγνωση [35], [36], [37].

έχει προταθεί ότι η γενετική παραλλαγή προκαλεί διαρθρωτική αλλαγή σε μια κρίσιμη περιοχή των miRNA μπορεί να επηρεάσει τη διαδικασία και την ωρίμανση των miRNA [38], [39]. Η

προ-miR-196a2

rs11614913 C αλληλόμορφο συσχετίστηκε με σημαντικά αυξημένη έκφραση του ώριμου miR-196a και ως εκ τούτου θα μπορούσε να επηρεάσει τη δέσμευση του miR-196a2 στο στόχο του mRNA

LSP1

[14] , [40]. Η rs11671784 SNP έχει αναφερθεί σε κίνδυνο την ωρίμανση του miR-27a, με αποτέλεσμα τη μειωμένη έκφραση του ώριμου miR-27a και ένα αυξημένο επίπεδο του στόχου του

HOXA10

[41]. Οι rs895819 SNP έχει επίσης έχουν προσδιορισθεί σε προ-miRNA περιοχές της HSA-miR-27a, με MAF & gt? 5% σε CHB. Προκαταρκτική λειτουργικές δοκιμασίες από την Sun

et al

. [22] αποκάλυψε ότι το αλληλόμορφο rs895819 G παρέχει ένα υψηλότερο επίπεδο των miR-27a, η οποία θα συνοδεύεται από σημαντικά μειωμένη

ZBTB10

mRNA. Χρησιμοποιήσαμε το πρόγραμμα RNAfold να προβλέψει τις πιο σταθερές δευτερεύουσες δομές του

προ-miR-27a

με δύο διαφορετικά αλληλόμορφα. Ωστόσο, ούτε μια διαμορφωτική επίδραση ούτε ελεύθερη ενέργεια επίδραση είχε προβλεφθεί (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σε αντίθεση, με βάση το μοντέλο της Zeng και Cullen, οι μεταλλάξεις στο στέλεχος του προ-miRNAs είχε σημαντική επίδραση επί miRNAs επεξεργασία [39]. Αν και το SNP εντός miR-27a βρισκόταν στο τερματικό βρόχο, η μετάλλαξη στο τερματικό βρόχο μπορεί ελαφρώς να επηρεάσει pri-miRNA επεξεργασία και DGCR8 δέσμευση με βάση την ssRNA-dsRNA Junction Αγκυροβολημένο μοντέλο [42]. Ένας τέτοιος μηχανισμός έχει αποδειχθεί για hnRNP Α1 [43].

Βρήκαμε ότι το αλληλόμορφο G της rs895819 στο

προ-miR-27a

συσχετίστηκε με σημαντικά μειωμένο ποσοστό ανταπόκρισης στην πλατίνη χημειοθεραπεία με βάση και ένα σημαντικά αυξημένο κίνδυνο θανάτων για NSCLC. HSA-miR-27a έχει βρεθεί ότι υπερεκφράζεται σε διάφορους τύπους όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [44] και τον καρκίνο των ωοθηκών [45]. Έχει δειχθεί ότι λειτουργεί ως ογκογονίδιο με τη στόχευση prohibitin [16] και είναι ένας στόχος για αντικαρκινικά φάρμακα [17], [18]. Down-ρυθμιζόμενη δύναμη miR-27a μπορεί επίσης να αντιστραφεί η αντίσταση σε πολλά φάρμακα της οισοφαγικό καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων [46]. Αν και η έκφραση του miR-27a έχει αναφερθεί ότι μειώνεται σημαντικά και στις δύο δείγματα ιστού και ορό ασθενών με NSCLC [26], [47], ένα σχετικά υψηλότερο επίπεδο έκφρασης miR-27a παρατηρήθηκε με το αλληλόμορφο rs895819 G σε σχέση με το Ένα αλληλόμορφο [22]. Αυτά τα αποδεικτικά στοιχεία που μπορεί να υποστηρίξει εν μέρει τα ευρήματά μας. Περαιτέρω σε βάθος οι λειτουργικές μελέτες που απαιτούνται για τη διαλεύκανση του μηχανισμού miR-27a και αυτή η παραλλαγή στον NSCLC.

Επίσης, παρατηρήθηκε μια αύξηση στο OS σε ασθενείς τόσο με NSCLC και σακχαρώδη διαβήτη σε σύγκριση με άτομα χωρίς διαβήτη (54,9 έναντι 42,0 μηνών?

P

= 0,034). Η πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης κατά βήματα Cox έδειξε ότι αυτό ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για NSCLC, η οποία είναι σύμφωνη με αρκετές μελέτες κοόρτης σε Καυκάσιους [48], [49]. Από του στόματος αντιδιαβητικά φάρμακα, ειδικά μετφορμίνη, συνήθως χορηγούνται ως θεραπεία πρώτης γραμμής για τους ασθενείς με διαβήτη. Τόσο βασική όσο και των ζώων πειράματα έχουν δείξει ότι ένα μετφορμίνη μεσολάβηση μείωση της αντίστασης στην ινσουλίνη μπορεί να σχετίζεται με μειωμένο κίνδυνο ανάπτυξης όγκων [50], [51], [52]. Η μετφορμίνη χορηγείται μόνη της ή σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία έχει επίσης αναφερθεί να εμποδίσει την ανάπτυξη του όγκου

in vitro

και

in vivo πειράματα

[53], [54], [55]. Τα ευρήματα της Tan

et al

. [56] έδειξαν ότι η μετφορμίνη μπορεί να βελτιώσει τα αποτελέσματα της χημειοθεραπείας και της επιβίωσης των ασθενών με NSCLC με διαβήτη. Αυτές οι μελέτες υποστηρίζουν τα αποτελέσματα μας.

Κατά την ερμηνεία αποτελεσμάτων μας, αρκετοί περιορισμοί θα πρέπει να ανησυχούν. Πρώτον, όλα τα θέματα που είχαν προσληφθεί από ένα μόνο φορέα, ο οποίος μπορεί να εισάγει μεροληψία της επιλογής. Παρ ‘όλα αυτά, η κατανομή γονότυπων ήταν σε ισορροπία Hardy-Weinberg. Δεύτερον, το μέγεθος του δείγματος μας ήταν σχετικά μικρό. Ωστόσο, πετύχαμε 89% της ισχύος της μελέτης (δοκιμή διπλής όψης, α = 0,05) για την ανίχνευση ενός HR 1,71 για το γονότυπο rs895819 G στο κυρίαρχο μοντέλο. Τρίτον, λόγω της έλλειψης των ιστών του καρκίνου του πνεύμονα που αντιστοιχεί στο υπόδειγμα του αίματος που αναλύθηκαν, ήμασταν σε θέση να ανιχνεύσει την έκφραση του miR-27a και τους στόχους της, και να διερευνήσουν τη σχέση μεταξύ αυτών και rs895819 SNP. Παρά τους περιορισμούς αυτούς, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για τη διερεύνηση της συσχέτισης μεταξύ του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμό και την κλινική έκβαση των NSCLC, και παρείχε πολύτιμες πληροφορίες που θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν για να καθοδηγήσει τις μελλοντικές μελέτες και την κλινική πρακτική.

Συμπεράσματα

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματά μας παρείχε την πρώτη εικόνα για τη συμβολή του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμός στην κλινική έκβαση των NSCLC. Τα ευρήματα υπογραμμίζουν ακόμη ότι πολυμορφισμοί στις αλληλουχίες miRNA μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στον καρκίνο του πνεύμονα. Αν και η ένωση φάνηκε να είναι στατιστικά σημαντική στην παρούσα μελέτη, τα ευρήματα θα πρέπει να αξιολογηθούν περαιτέρω από μεγάλες, καλά σχεδιασμένες μελέτες.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. .

Ασθενής χαρακτηριστική και κλινικά χαρακτηριστικά

doi: 10.1371 /journal.pone.0079135.s001

(DOC)

Πίνακας S2. χαρακτηριστικά

Θεραπεία των 296 ασθενών

doi:. 10.1371 /journal.pone.0079135.s002

(DOC)