Abstract

Μετά την επίδειξη, με καρυότυπο, αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και του φθορισμού

in-situ

υβριδοποίηση, η διατήρηση ορισμένων ανθρώπινων χρωμοσωμάτων και γονιδίων μετά την αυθόρμητη σύντηξη ανθρώπινων όγκων και τα κύτταρα χάμστερ

in-vivo

, είχε υποτεθεί ότι η σύντηξη των κυττάρων προκαλεί την οριζόντια μετάδοση της κακοήθειας και του δότη γονίδια. Εδώ, αναλύσαμε τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης του 3 διαφορετικά υβριδικά όγκους που δημιουργούνται για πρώτη φορά στο θύλακα παρειάς χάμστερ μετά την ανθρώπινη μεταμόσχευση του όγκου, και στη συνέχεια πολλαπλασιάζονται σε χάμστερ και σε κυτταρικές καλλιέργειες για χρόνια: δύο Hodgkin λεμφώματα (GW-532, GW-584) και ένα πολύμορφο γλοιοβλάστωμα (GB-749). Με βάση τα κριτήρια του MAS 5.0 ανίχνευσης

P

-τιμές ≤0.065 και τουλάχιστον ένα 2-φορές μεγαλύτερη αξία έκφραση του σήματος από τον έλεγχο μελανώματος χάμστερ, εντοπίσαμε 3759 σετ καθετήρα (που κυμαίνονται από 1.040 έως 1.303 σε κάθε μεταμόσχευση ) από σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένοι σε παραφίνη τομές των 3 υβριδικών όγκων, η οποία χωρίς αμφιβολία αντιστοιχιστεί σε 3.107 μοναδικά αναγνωριστικά Gene Entrez, αντιπροσωπευτικά όλων των ανθρώπινων χρωμοσωμάτων? Ωστόσο, με καρυολογία, ένα από τα υβριδικά όγκων (GB-749) είχε συνολικά 15 ανθρώπινα χρωμοσώματα στα κύτταρα του. Μεταξύ των γονιδίων χαρτογραφηθεί, 39 σύνολα καθετήρα, που αντιπροσωπεύει 33 μοναδικά Gene αναγνωριστικά Entrez, πληρούσε τα κριτήρια ανίχνευσης σε όλα τα υβριδικά δείγματα όγκων. Πέντε από αυτά τα 33 γονίδια κωδικοποιούν παράγοντες μεταγραφής που είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν την ανάπτυξη και διαφοροποίηση των κυττάρων? πέντε κωδικοποιούν adhesion- κυττάρου και μετανάστευση που σχετίζεται με πρωτεΐνες που συμμετέχουν στην ογκογένεση ή /και τη μετάσταση και εισβολή? και επιπλέον γονίδια κωδικοποιούν πρωτεΐνες που εμπλέκονται σε μονοπάτια, ρύθμιση της απόπτωσης, την επιδιόρθωση του DNA, και η αντίσταση σε πολλά φάρμακα σηματοδότησης. Τα ευρήματα αυτά επιβεβαιώθηκαν με PCR και αντίστροφη μεταγραφή PCR, που δείχνουν την παρουσία της ανθρώπινης alphoid (α) δορυφορική DNA και το

F11R

μεταγραφές σε επιπλέον γενιές μεταμόσχευση του όγκου. Έχουμε υποθέσει ότι

in-vivo

σύντηξης αποκαλύπτει γονίδια που εμπλέκονται στην πρόοδο του όγκου, και των οικογενειών γονιδίων που κωδικοποιούν για οργανοειδούς φαινότυπο. Έτσι, τα καρκινικά κύτταρα μπορούν να μετάγουν γειτονικά στρωματικά κύτταρα, με το προκύπτον απόγονοι που έχουν μόνιμα μεταγράφονται γονίδια με κακοήθεις και άλλες λειτουργίες γονιδίων του DNA δότη. Χρησιμοποιώντας Ετεροειδικά

in-vivo

σύντηξη κυττάρων, γονιδίων που κωδικοποιούν ογκογόνο και οργανογενετικά χαρακτηριστικά μπορούν να αναγνωριστούν

Παράθεση:. Goldenberg DM, Ρούνεϊ RJ, Loo Μ, Liu D, Chang CH (2014)

In-Vivo

Fusion Ανθρωπίνων Καρκίνου και χάμστερ στρωματικά κύτταρα Μόνιμα μετατρέπει και μεταγράφει ανθρώπινο DNA. PLoS ONE 9 (9): e107927. doi: 10.1371 /journal.pone.0107927

Επιμέλεια: Θωμάς Dittmar, Witten /Πανεπιστήμιο Herdecke, Γερμανία

Ελήφθη: 27 Μάρτη 2014? Αποδεκτές: 19 Αύγ 2014? Δημοσιεύθηκε: 26η Σεπτεμβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Goldenberg et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Τα αρχεία δεδομένων έχουν κατατεθεί στο Gene Expression Omnibus, και μπορούν να προβληθούν σε https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE58277.

Χρηματοδότηση : Οι αρχικές μελέτες μεταμόσχευσης και τον χαρακτηρισμό υποστηρίχθηκαν εν μέρει από την αμερικανική Εταιρεία Καρκίνου Grant IN-581, USPHS χορηγεί CA11327 και CA12374 από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας, και το Ταμείο Damon Runyon Memorial για την Έρευνα του Καρκίνου (για DMG). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Όλοι οι συγγραφείς απασχολούνται από Immunomedics, Inc., ή Genome Εξερευνήσεις, Inc., αλλά αυτό δεν αλλάζει την προσήλωσή τους στις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Πρωτοβάθμια μεταμοσχεύσεις ανθρώπινου όγκου, ιδιαίτερα σε ανοσοκατεσταλμένους τρωκτικά, όπως γυμνό και NOD /SCID ποντίκια, είναι χρησιμοποιούνται ως προκλινικά μοντέλα για την αξιολόγηση της βιολογίας του όγκου και ευαισθησία φαρμάκου [1] – [7]. Οι μελέτες αυτές βασίζονται στην υπόθεση ότι οι εν λόγω ξενομοσχευμάτων διατηρούν τις ιδιότητες και την κριτική τους γονότυπους των όγκων των χορηγών τους, έτσι είναι προγνωστική για την κλινική μετάφραση. Ωστόσο, και άλλοι έχουν καταδείξει ότι τέτοιες μεταμοσχεύσεις μπορούν να προκαλέσουν όγκους σε λήπτες τρωκτικών τους, όπως χρυσό χάμστερ [8] – [10], γυμνά /SCID ποντίκια [11] – [24], και ανοσοκαταστολή αρουραίους [25], αν και σπάνια (είτε λόγω της χαμηλής συχνότητας ή σπάνια δοκιμές). Μια πιθανή εξήγηση είναι η οριζόντια μεταφορά των ογκογόνων DNA [25] – [27]. Πράγματι, πλευρική ογκογένεση μεταξύ όγκου και στρωματικά κύτταρα του μπορούν να αναχθούν σε Ehrlich και Apolant το 1905, ο οποίος έδειξε ότι στρωματικά κύτταρα ενός όγκου μπορεί να γίνει ένα σάρκωμα, όταν ένα καρκίνωμα είναι μπολιασμένα σε ποντίκια, και στην πραγματικότητα οι συγγραφείς υπέθεσαν ότι μια χημική παράγοντας είχε εμπλακεί [28]. Εβδομήντα έξι χρόνια αργότερα, ένα ανθρώπινο καρκίνωμα μεταμοσχεύονται σε γυμνούς ποντικούς επίσης αναφέρθηκε ότι επάγει ινοσαρκώματα που σκότωσε τα γυμνά αποδέκτες ποντίκι και θα μπορούσε να διαδοθεί ως κακοήθεις όγκους σε ανοσοϊκανά ποντίκια της ίδιας γενετικό υπόβαθρο [12]. Επιπλέον, ένα ανθρώπινο μεταμόσχευση καρκίνου των ωοθηκών σε γυμνούς ποντικούς έδειξαν δύο πληθυσμούς του καρκίνου, ένα επιθηλιακό και σαρκωματώδεις, ο πρώην δείχνει ανθρώπινη και τις τελευταίες ποντικού ιδιότητες [14], υποδηλώνοντας έτσι την πλευρική μεταγωγή ή μεταφοράς DNA. τα κύτταρα ποντικού σαρκώματος, τα οποία έχει υποτεθεί ότι επάγεται μόνο από τα κύτταρα ανθρώπινου καρκινώματος, ήταν μεταστατικό και θανατηφόρος σε γυμνούς ποντικούς ή ανοσοεπαρκείς ποντικοί του ίδιου γενετικού υποβάθρου [14]. Αυτή η επαγωγή στρωματικών όγκων σε ζώα ξενιστές μετά ξενομεταμόσχευση ανθρώπινων επιθηλιακών καρκίνων έχει επιβεβαιωθεί από άλλους [15] – [25], υποδηλώνοντας έτσι ότι ξενομοσχεύματα καρκίνου να αξιολογούνται προσεκτικά για οριζόντια ογκογένεση [13], [24]. Πώς αυτός ο μετασχηματισμός ή η επαγωγή συνέβη δεν ήταν σαφής, έχει όμως μια ιογενής ρόλο έχει συζητηθεί [17].

Σε μερικά από αυτά τα πειράματα που αφορούν πρωτογενή μεταμόσχευση ανθρώπινου όγκου, η μεταφορά των λειτουργικών ανθρώπινων γενετικών πληροφοριών από

ΕΝΤΟΣ vivo

κύτταρο υβριδοποίηση των καρκινικών κυττάρων δότη και δέκτη ξενιστή, δείχνοντας χρωμοσωμική, ανοσολογικές, ή γενετικά χαρακτηριστικά και των δύο εταίρων [9], [29] – [33], προτάθηκε ως ο μηχανισμός για την επαγωγή αυτών των όγκων που έδειξαν ιδιαίτερα επεμβατική και μεταστατική συμπεριφορά στο ζώο ξενιστές τους [34], [35]. Για παράδειγμα, αναφέρθηκε ότι μετά από μακροχρόνια διάδοση των υβριδικών όγκων ανθρώπου-χάμστερ που προέρχεται από ένα πολύμορφο γλοιοβλάστωμα [33] και δύο Hodgkin λεμφώματα, ανθρώπινο DNA και τα γονίδια θα μπορούσε να επιβεβαιωθεί με φθορισμό

in-situ υβριδισμού

( FISH) και αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR), και του δότη οργανοειδή χαρακτηριστικά τους με την ιστολογική εξέταση [36], [37]. Μετάφραση του μερικά από αυτά τα προϊόντα γονιδίων βρέθηκε με ανοσοϊστοχημεία (IHC) στις μεταμοσχεύσεις πολύμορφο γλοιοβλάστωμα, ακόμα και μετά από διάδοση για πάνω από ένα έτος [36].

Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι τα ανθρώπινα γονίδια μπορούν να παραμείνουν λειτουργικά εντός ανθρώπου-χάμστερ υβρίδιο όγκοι πολλαπλασιάστηκαν στο ζώο ξενιστή, δίνοντας έμφαση στην οριζόντια μετάδοση του ανθρώπινου DNA εμπλέκεται με κακοήθεια και οργανοειδούς χαρακτηριστικά των αρχικών όγκων δότη ασθενή. Ωστόσο, το πεδίο του ανθρώπινου DNA σε μεταγωγή και μεταγράφονται σε αυτά μεταξύ των ειδών υβριδικών κυττάρων δεν έχει διερευνηθεί. Κατά συνέπεια, εξετάσαμε (

i

) αν τέτοια σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένα σε παραφίνη (FFPE) μοσχεύματα όγκου, η οποία ήταν αποθηκευμένα για περισσότερο από 40 χρόνια από τότε που έγιναν, θα μπορούσαν να δοκιμαστούν σε παγκόσμιο επίπεδο για την έκφραση ανθρώπινης μεταγράφεται γονίδια, (

ii

) εάν τα ανθρώπινα γονίδια διατηρείται κατά τη διάρκεια μακροχρόνιας σειριακή δίοδο, και (

iii

) αν υπάρχουν συγκεκριμένες οικογένειες ανθρώπινο γονίδιο αυτόχθονες σε αυτές τις ανθρώπου-χάμστερ υβρίδιο όγκους. Με τη χρήση όγκων και ξενιστών διαφορετικών ειδών, είμαστε σε θέση να προσδιορίσει γενετική συμβολή κάθε μέρους, το οποίο είναι ιδιαίτερα προβληματική όταν επιχειρείται να αποδειχθεί σύντηξη κυττάρου-κυττάρου σε ανθρώπους, είτε πρόκειται για κανονικές-κανονικό, κακοήθη-κανονικό, ή κακοήθη-κακοήθη συντήξεις.

Εμείς υποθέσουμε ότι αυτά τα αποτελέσματα της ετεροειδικά συγχωνεύσεις παρέχουν ένα γενικό μηχανισμό της μεταφοράς του DNA του όγκου σε στρωματικά κύτταρα που οδηγεί σε γενετική αστάθεια, ετερογένεια, και ανευπλοειδία, που οδηγεί σε σταθερή γενωμική αλλαγές που σχετίζονται με την εξέλιξη του καρκίνου, ενώ διατηρεί επίσης το πρωτότυπο οργανοειδούς φαινοτύπου του όγκου, καθώς επίσης και άλλα γονίδια που προέρχονται από το ανθρώπινο όγκο δότη. Αυτή η συγχώνευση των καρκινικών και φυσιολογικών γονιδιωμάτων σε ένα νέο πληθυσμό κακοήθων υβριδικών κυττάρων θα μπορούσε να είναι ένα μηχανισμό με τον οποίο ένας καρκίνος δραπετεύει ανοσίας του ξενιστή με τη μείωση της ανοσολογικής διαφορά μεταξύ του όγκου και ξενιστή του [34], [35]. Διάφορες πτυχές του ρόλου της σύντηξης κυττάρου-κυττάρου σε καρκινικά κερδίζουν τώρα αυξημένη προσοχή [35], [38] – [47]

Αποτελέσματα

Ανθρώπινο mRNA μεταγραφές παρόν σε καθένα από τα τέσσερα. διαφορετικά υβριδικά ανθρώπου-χάμστερ όγκου δείγματα FFPE (Πίνακας 1) ταυτοποιήθηκαν με ανάλυση του συνολικού RNA, σε σύγκριση με μια γραμμή μελανώματος χάμστερ ελέγχου (CCL-49), χρησιμοποιώντας συστοιχίες Affymetrix Human U133 X3P. Probe θέτει με MAS 5.0 ανίχνευσης

P

-τιμές ≤0.065 σε ένα υβριδικό δείγμα, ένα ανίχνευσης

P

-τιμή & gt? 0.065 στον έλεγχο χάμστερ, και μια τιμή του σήματος έκφραση που ήταν τουλάχιστον 2 φορές σε μεγαλύτερη στην υβριδική δείγμα σε σχέση με τον έλεγχο χάμστερ, θεωρήθηκαν να εκπροσωπεί εκφρασμένο ανθρώπινο γονίδιο μεταγραφές. Χρησιμοποιώντας αυτά τα κριτήρια, ταυτοποιήσαμε συνολικά 3.759 σύνολα ανιχνευτή (που κυμαίνονται από 1040 έως 1303 σύνολα ανιχνευτή σε τουλάχιστον ένα υβρίδιο δείγμα), η οποία χωρίς αμφιβολία αντιστοιχιστεί σε 3.107 μοναδικές Entrez Gene αναγνωριστικά (Πίνακας S1), που αντιπροσωπεύουν γονίδια από όλα τα ανθρώπινα χρωμοσώματα. Μεταξύ αυτών, 39 σύνολα καθετήρα περάσει όλα τα κριτήρια έκφρασης σε όλα τα τέσσερα υβριδικά δείγματα (Σχήμα 1, Πίνακας 2), με 34 σετ καθετήρα ανίχνευσης 33 μοναδικά Εηίτεζ Gene αναγνωριστικά (Πίνακας S2), δύο σετ ανιχνευτή που ανιχνεύει είτε

MUC3A

ή

MUC1B

, και τα υπόλοιπα σύνολα ανιχνευτή που ανιχνεύει έναν μη χαρακτηρισμένο γονίδιο (

LOC286068

),

GUSBP2

ή mutlple

GUSB

ψευδογονίδια, και

FAM91A2

ή πολλαπλά μη χαρακτηρισμένα γονίδια. Έτσι, τουλάχιστον 33 μοναδικά ανθρώπινα γονίδια μεταγράφηκαν σε αυτούς τους ιστούς FFPE από 3 διαφορετικά ξενομοσχεύματα ανθρώπινων όγκων που αντιπροσωπεύουν διαφορετικές γενιές μεταμόσχευση, συμπεριλαμβανομένων δύο για GW-532, που μεταδίδονται σειριακά για μήνες έως χρόνια ως άκρως μεταστατικών όγκων.

Η θερμότητας χάρτης απεικονίζει τις τιμές των σημάτων έκφρασης για 39 Affymetrix Human U133_X3P σύνολα ανιχνευτή ανιχνεύθηκε σε FFPE τμήματα από τα τέσσερα υβρίδια εξετάστηκαν (IMM001-004) και ενός ελέγχου χάμστερ (IMM006). Πριν από ανεξέλεγκτους ιεραρχική ομαδοποίηση, οι τιμές σήματος MAS 5.0 ήταν log2 μετασχηματισμένη και σειρά σημαίνει επίκεντρο. Δείγματα συγκεντρωμένα από Πλήρης Σύνδεση με βάση Pearson συσχέτιση? σετ καθετήρα ήταν συγκεντρωμένα από Πλήρης Σύνδεση με βάση την Ευκλείδεια απόσταση. Κριτήρια για την ανιχνεύσιμη έκφραση ανθρώπινου γονιδίου που περιλαμβάνονται MAS 5,0 p-τιμές Ανίχνευση ≤0.065 στο υβριδικό δείγματος και & gt? 0.065 στον έλεγχο χάμστερ, και ≥2 φορές αυξημένο σήμα στην υβριδική δείγμα έναντι του ελέγχου χάμστερ

Η

που παρατίθενται στον πίνακα S3, μεταγραφές των γονιδίων που εκφράζονται σε όλα τα τέσσερα υβριδικά δείγματα περιλαμβάνουν πέντε παράγοντες που κωδικοποιεί μεταγραφής που είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν την αύξηση και τη διαφοροποίηση των κυττάρων (

HOXB8, PPARγ και, POU2F2, ZFHX2, και ZNF580

), και πέντε κωδικοποιεί κυτταρική προσκόλληση και μετανάστευση που σχετίζεται με πρωτεΐνες που συμμετέχουν στην ογκογένεση ή /και εισβολή /μετάσταση (

CDH3, FUT7, F11R, MUC3A, και SEMA3F

). Επιπλέον, τα γονίδια των οποίων τα προϊόντα που συνδέονται με μονοπάτια σηματοδότησης, ρύθμιση της απόπτωσης, την επιδιόρθωση του DNA, και η αντίσταση σε πολλά φάρμακα, επίσης, εντοπίστηκαν (δηλαδή,

PRKD2, ECEL1

,

CARD11, CFLAR, PARP15

και

MRP6

).

Αναγνωρίζοντας ότι η υποβαθμισμένη φύση του FFPE RNA και το υψηλό υπόβαθρο του RNA χάμστερ στα υβριδικά δείγματα FFPE θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ευαισθησία της MAS 5.0 ανίχνευσης

P

-τιμές, χαλαρώσαμε την ανίχνευση

P

-τιμή κριτήριο απαιτώντας ανίχνευσης

P

-τιμή ≤0.065 μόνο σε ένα από τα τέσσερα υβριδικά δείγματα, αντί των τεσσάρων, και παρήγαγε μια μεγαλύτερη λίστα των ανθρώπινων γονιδίων που ενδεχομένως είχαν συνήθως εκφράζεται σε όλα τα υβριδικά δείγματα. Ο δεύτερος αυτός κατάλογος περιείχε 1120 σετ καθετήρα, που αντιπροσωπεύει 982 μοναδικά αναγνωριστικά Εηίτεζ Gene (Πίνακας S4). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν την παρουσία γονιδίων για CD20 (

MS4A1

), CD22, CD44 και (σηματοδότηση συστατικό του παράγοντα αναστολέα μετανάστευσης των μακροφάγων (MIF) σύμπλοκο υποδοχέα CD44 -CD74-), που πιστοποιεί έτσι τα προηγούμενα αποτελέσματα PCR για η παρουσία των CD20 και, επίσης, τα γονίδια CD74 στην GW-532 και GW-584 λέμφωμα υβρίδιο όγκους [36], [37]. Ένας αριθμός άλλων ανθρώπινων γονιδίων, όπως αυτές που κωδικοποιούν CD24, CD27, CD47, CD52, CD84, CD151, και τενασκίνη ΧΒ (

TNXB

), βρέθηκαν να μεταγραφεί σε αυτές τις υβριδικές κυτταρικές γραμμές όταν η ανίχνευση

P

-τιμή κριτήριο ήταν χαλαρή (Πίνακας S4).

ανάλυση εμπλουτισμό Διαδρομή του μεγαλύτερου, χαλαρή, κοινό σύνολο γονιδίων και τα επιμέρους σύνολα γονιδίων από κάθε ένα από τα τέσσερα υβριδικά δείγματα εκτελέστηκε με Webgestalt [48], [49], χρησιμοποιώντας το KEGG [50] – [52], και Pathway Commons βάσεων δεδομένων [53], για να εντοπίσει παρόμοιες πορείες που συνήθως εκπροσωπούνται σε όλα τα τέσσερα δείγματα των τριών υβριδικών όγκους (Πίνακας S5). Μονοπάτια που εμπλουτίστηκαν σε όλα τα πέντε σετ γονιδίων (το μεγάλο κοινό σύνολο γονιδίων και των τεσσάρων επιμέρους σύνολα γονιδίων υβριδικό δείγμα) εμπίπτουν σε δύο γενικές κατηγορίες που σχετίζονται με την επικοινωνία μεταξύ κυττάρων /εστιακής προσκόλλησης /κόμβους κυττάρων /ECM (εξωκυττάρια μήτρα) αλληλεπιδράσεις, και κυτοκίνης ή μεταγωγής σήματος του αυξητικού παράγοντα (συμπεριλαμβανομένων των διαφόρων οδών σηματοδότησης ErbB). Πορείες σε δύο άλλες γενικές κατηγορίες που σχετίζονται με υποδοχείς πυρηνικής ορμόνης και MHC αντιγόνου επεξεργασία /παρουσίαση εμπλουτίστηκαν σε τέσσερις από τις πέντε σειρές γονιδίων. Εμπλουτισμός ανάλυση με τη χρήση της βάσης δεδομένων DAVID Βιοπληροφορική [54], [55] εντόπισε έξι λειτουργικά συμπλέγματα σχολιασμό που εκπροσωπούνται σε όλα τα πέντε σετ γονιδίων: εμβρυϊκής μορφογένεσης, κυκλική δραστηριότητα /αδενυλικής κυκλάσης AMP, μίτωση /ουβικιτίνης μεσολάβηση πρωτεόλυση, πυρηνικών ορμονικών υποδοχέων, των λεμφοκυττάρων πολλαπλασιασμός /ενεργοποίησης, και την απόπτωση (Πίνακας S6). Αυτά τα αποτελέσματα, τόσο από την οδό και λειτουργικό εμπλουτισμό αναλύσεις, δείχνουν ότι τα διάφορα σύνολα των ανθρώπινων γονιδίων που εκφράζονται σε κάθε υβριδικό δείγμα όγκου επηρεάζουν σχετίζονται με τις κυτταρικές διεργασίες, και ως εκ τούτου ενδέχεται να παράγουν παρόμοια αποτελέσματα στην κυτταρική λειτουργία και την ανάπτυξη.

Για να περαιτέρω επιβεβαιώνουν τα ευρήματα των μικροσυστοιχιών, η PCR διεξήχθη επί έξι επιπλέον δείγματα ιστού FFPE: τρεις από την GW-532 (γενεές 11, 52, και 82), το ένα από GW-584 (παραγωγή 3), και δύο από την GB-749 (και τα δύο του γενεά 2), για να εκτιμηθεί η παρουσία του ανθρώπινου DNA σε αυτά τα τμήματα του ιστού, με τη χρήση ενός ζεύγους εκκινητών που κατευθύνεται προς το 171-bp μονομερές της ανθρώπινης άλφα δορυφορική DNA [56]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, τέσσερα από τα 6 δείγματα (GW-532 γενεές 52 και 82, GW-584 γενιάς 3, και GB-749 γενιάς 2) ήταν θετικά για το αναμενόμενο προϊόν της PCR του ανθρώπινου δορυφόρου Αlpha DNA (το 171-bp ), η οποία ανιχνεύθηκε επίσης στο DNA των ανθρώπινων κυττάρων λεμφώματος Raji (θετικός έλεγχος), αλλά όχι στο DNA του CCL-49 κυττάρων μελανώματος χάμστερ (αρνητικός έλεγχος). Επιπλέον, ήμασταν σε θέση να επιβεβαιώσει την έκφραση του

F11R

γονίδιο ανιχνεύεται από τις μελέτες cDNA μικροσυστοιχίας σε δύο από τις έξι δείγματα κατά ένα βήμα αντίστροφη μεταγραφή-ΡΟΚ, χρησιμοποιώντας ανθρώπινα ηπατικά κύτταρα καρκίνου του HepG2 ως θετικός έλεγχος [57]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, η παρουσία ενός 141-bp ζώνη ήταν εμφανής σε τόσο GW-532 γενεά 11 και GW-584 γενιάς 3, καθώς επίσης και σε ανθρώπινα κύτταρα HepG2 (θετικός έλεγχος), αλλά όχι στον ιστό ενός χάμστερ σπλήνα (αρνητικός έλεγχος). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν σε ένα πείραμα επανάληψης (Σχήμα S1), χρησιμοποιώντας CCL-49 κύτταρα ως αρνητικός έλεγχος.

Η παρουσία του ανθρώπινου DNA αποδείχθηκε με την ανίχνευση του 171-bp προϊόντος GW-532 γενιάς 52 (διαδρομή 2), GW-532 γενιάς 82 (λωρίδα 3), GB-749 γενιάς 2 (λωρίδα 5), και GW-584 γενιάς 3 (λωρίδα 6), αλλά όχι στο αρνητικό δείγμα αναφοράς του μελανώματος χάμστερ, CCL-49 (λωρίδα 8). Το 171-bp και ανώτερα ολιγομερή του ανιχνεύθηκαν στο θετικό έλεγχο των κυττάρων Raji λεμφώματος ανθρώπου (διαδρομή 7). υποδεικνύονται οι πειραματικές συνθήκες και το ονομαστικό ποσό του DNA που χρησιμοποιούνται για κάθε δείγμα.

Η

Οι μεταγραφές mRNA της

η F11R

γονιδίου ήταν ανιχνεύσιμη σε GW-532 γενιά 11 (λωρίδα 1) , GW-584 γενιάς 3 (διαδρομή 2), και ο θετικός έλεγχος της ανθρώπινης HepG2 κύτταρα (λωρίδα 6), αλλά όχι στα αρνητικά σπληνικά κύτταρα χάμστερ ελέγχου (λωρίδα 5). Οι πειραματικές συνθήκες και το ονομαστικό ποσό του RNA που χρησιμοποιείται για κάθε δείγμα που αναφέρεται.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μικροσυστοιχίες έκφρασης των γονιδίων του ανθρώπου να υποβάλει περαιτέρω αποδείξεις ότι τα ανθρώπινα γονίδια μπορούν να παραμένουν σε λειτουργία μέσα σε μεταστατικούς όγκους υβριδικού ανθρώπου-χάμστερ διαδίδεται στο ζώο-ξενιστή, και επιβεβαιώνονται αυτές οι διαπιστώσεις με επιπλέον δείγματα που δείχνει την παρουσία της ανθρώπινης alphoid (α) δορυφορικού DNA και τις

F11R

μεταγραφές με PCR και αντίστροφη μεταγραφή-PCR , αντίστοιχα. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ανθρώπινων όγκων μεταμοσχευμένων σε τρωκτικά μπορεί να συγχωνεύσει το DNA τους με το γονιδίωμα του ζώου ξενιστή, ως ένα παράδειγμα του ευρύτερου προγράμματος του όγκου-στρωματικών στιχομυθία. Τα καρκινικά κύτταρα εξαρτώνται και επηρεάζονται από «έδαφος» ή ως στρωματικά μικροπεριβάλλον [58] – [60], αλλά είναι επίσης γνωστό ότι μπορεί να υπάρξει γενετική ανταλλαγή [61], [62]. Η αμοιβαία οριζόντια μεταφορά γενετικού υλικού μεταξύ του στρώματος και τα καρκινικά κύτταρα θα μπορούσε να εξηγήσει την ετερογένεια και γενετική ποικιλότητα και την εξέλιξη του καρκίνου κυτταρικών πληθυσμών, όχι μόνο μεταξύ των διαφορετικών όγκων ασθενούς του ίδιου τύπου καρκίνου, αλλά ακόμη και διαφορετικούς όγκους του ίδιου ασθενή, όπως παρατηρήθηκε σε γενετικές αναλύσεις των δειγμάτων ανθρώπινου όγκου [63] – [65]. σύντηξη κυττάρου-κυττάρου επιτρέπει τη μεταφορά των χρωμοσωμάτων και του γενετικού υλικού από το ένα κύτταρο στο άλλο, και έχει αποδειχθεί ότι έχει ως αποτέλεσμα βιώσιμο υβρίδιο απογόνους ικανός αντιγραφής για διαφορετικές χρονικές περιόδους, αλλά συνήθως όχι μακράς διαρκείας ή ως μόνιμες κυτταρικές σειρές [66]. Με τη χρήση Ετεροειδικά κυττάρου-κυττάρου σύντηξης

in-vivo

, γονίδια που ελέγχουν ογκογένεση και οργανοειδούς γνωρίσματα στα καρκινικά κύτταρα του δότη μπορεί να διευκρινιστεί στο συγχωνευμένο απογόνους.

Η συγχώνευση των όγκων και μυελοειδή κύτταρα ήταν πρότεινε στις αρχές του 20

ου αιώνα από διάφορα γερμανικά παθολόγους, όπως Aichel, Dor, Hallion, και Kronthal, όπως αναφέρθηκε με τα πρώτα πειραματικά αποτελέσματα και συζήτηση των αυθόρμητων σύντηξης

in-vivo

στην 1968 [34]. Αυτό βασίστηκε στην ανάπτυξη ιδιαίτερα επιθετικών και μεταστατικών όγκων μετά τη μεταμόσχευση τέσσερις διαφορετικούς ανθρώπινους καρκίνους, με ένα από καρκίνο προέλευσης των ωοθηκών (GW-127) δείχνει χρωμοσώματα χάμστερ, αλλά και κατακράτηση του [8] ανθρώπινα αντιγόνα, [9], [29 ], [30]. Μια σειρά από μελέτες που ακολούθησαν περιγράφονται τη μεταμόσχευση ποικίλων ανθρώπινων καρκίνων στο μάγουλο θύλακα του άνευ όρων (μη ανοσοκατεσταλμένα) χρυσά χάμστερ, και επίσης έδειξε μεταστάσεων σε χάμστερ τους φιλοξενεί το νωρίτερο 3-4 εβδομάδες μετά τη μεταμόσχευση, και η παρουσία της ανθρώπινης και δείκτες χάμστερ μέσα στα καρκινικά κύτταρα. Τα μοσχεύματα που εμφανίζονται ως επί το πλείστον ιδιότητες χάμστερ ενώ διατηρεί χαρακτηριστικά της ανθρώπινης προέλευσης, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπινων χρωμοσωμάτων, ισοενζύμου μοτίβα, αντιγόνα, και stathmokinetic ιδιότητες σε απόκριση σε κολχικίνη η οποία ήταν πιο συμβατή με τα ανθρώπινα κύτταρα από χάμστερ [30] – [33]. Κατά τη διάρκεια των περίπου 15 χρόνια, ενώ το μόσχευμα περισσότερο από 1200 πρωτογενείς ανθρώπινους καρκίνους να χάμστερ (μάγουλο θέση θύλακα) ή γυμνοί ποντικοί (υποδόρια θέση), 15 (1,25%) πολύ επιθετική και μεταστατικών όγκων προέκυψαν από τις μεταμοσχεύσεις χάμστερ [35]. Αυτά προήλθαν από διαφορετικά στερεά και αιματοποιητικά ανθρώπινων όγκων, και θα μπορούσε να διαδοθεί

in-vitro

ή

in-vivo

για χρόνια ως μόνιμες κυτταρικές σειρές, που δείχνει ταχεία ανάπτυξη και μεταστατική χαρακτηριστικά τυπικά μιας όγκου χάμστερ [10], [33], [35].

από το γονίδιο ανιχνευτές δεν ήταν διαθέσιμα τότε, ήταν μόνο πρόσφατα ότι FFPE ιστούς από αυτές τις παλαιότερες μεταμοσχεύσεις υποβλήθηκαν σε FISH, μεθόδων PCR και IHC να αποδειχθεί η παρουσία γενετικών δεικτών και μετάφρασης των ανθρώπινων γονιδίων σε ορισμένες από αυτές τις μόνιμες μεταμοσχεύσεις δύο είδη », ακόμη και μετά από χρόνια στην ξένη, ζώο-ξενιστή [36], [37]. Για παράδειγμα, το πολύμορφο γλοιοβλάστωμα (GW-749) αναφέρθηκε το 1974 να είναι ένα ανθρώπινο-χάμστερ υβρίδιο όγκου βασίζεται στην διατήρηση του έως και 15 ανθρώπινης και πολλά χρωμοσώματα χάμστερ στα ίδια κακοήθη κύτταρα, όπως ταξινομούνται με χρώση Giemsa, ακόμη και με σαφή ταυτοποίηση των χρωμοσωμάτων καρυοτυπήθηκαν από λεμφοκύτταρα του ασθενούς, όντας έτσι μία heterosynkaryon [33]. Πιο πρόσφατα, η ξενομόσχευμα όγκου GW-749 φάνηκε να έχουν διατηρήσει 7 μεταγραφεί ανθρώπινα γονίδια

(CD74, CXCR4, PLAGL2, GFAP, VIM, TP53, EGFR

), από τις οποίες

CD74, CXCR4, και PLAGL2

, συνέχισε να μεταφραστούν στις αντίστοιχες πρωτεΐνες τους που έγιναν ορατές με IHC, καθώς και χάμστερ Χ χρωμόσωμα και τα ανθρώπινα pancentromeric DNA στα ίδια πυρήνες με FISH [36]. Απροσδόκητα, αυτά τα γονίδια είναι γνωστό ότι έχουν μια ένωση με κακοήθεια και, ειδικότερα νευρογλοιακά όγκους, καθώς και

VIM

σχετίζεται με μεσεγχυματικά κύτταρα. Τα μοσχεύματα συνέχισαν να εκφράζουν χαρακτηριστικά του αρχικού όγκου γλοιώματος μπολιασμένα, ακόμη και μετά από πολλαπλασιασμό σε χάμστερ για ~ 1 έτος [36].

Παρόμοιες αναλύσεις αναφέρθηκαν πρόσφατα για δύο λεμφώματα εμβολιασμένο να χάμστερ [37], ένας από τους οποίους περιγράφηκε το 1970 και φαίνεται να μοιάζουν με δότη ανθρώπινου όγκου του αν και κερδίζουν εξαιρετικά μεταστατικές ιδιότητες στο χάμστερ [10]. FISH και PCR αναλύσεις έδειξαν ότι τα δύο αυτά Hodgkin λέμφωμα προερχόμενο υβρίδιο όγκων εμφανίζεται τόσο χάμστερ και ανθρώπινο DNA στα ίδια πυρήνες με FISH, διατηρώντας επίσης τα ανθρώπινα γονίδια,

CD74, CXCR4, CD19, CD20, CD71, CD79b, και VIM

. Είναι αξιοσημείωτο ότι η ΟΒ-749 γλοιοβλάστωμα υβρίδιο όγκου έδειξαν κατακράτηση των γονιδίων που σχετίζονται με γλοιώματος (

PLAGL2, GFAP

), ενώ η λέμφωμα προερχόμενο υβρίδιο όγκου διατηρείται αρκετά υποδοχέα αντιγόνου Β-κυττάρου (BCR)-σχετικών γονιδίων (

CD19, CD20, CD71, CD79b

). Τρεις ανθρώπινα γονίδια,

CD74

,

CXCR4

, και

VIM

, ήταν κοινή τόσο για το γλοιοβλάστωμα και μεταμοσχεύσεων λέμφωμα. Τόσο βιμεντίνη και CXCR4 είναι μεσεγχυματικά δεικτών που σχετίζονται με επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) των οποίων τα γονίδια μεταγράφηκαν σε όλες τις 3 υβρίδιο όγκων που έχουν εξετασθεί. Προτάθηκε επίσης ότι οι heterosynkaryons του Hodgkin λεμφώματος με τους κύτταρα Hodgkin Reed-Sternberg (HRS) διατήρησε Β-κυττάρων καταγωγής τους [37], επιβεβαιώνοντας άλλα αποδεικτικά στοιχεία για ένα Β-κυττάρων προέλευση αυτού του νεοπλάσματος [67], και πάλι επιβεβαιώνεται εδώ με ανάλυση ανιχνευτή γονιδίου αποκαλύπτει τα γονίδια Β-κυττάρων (

CD20, CD22

) σε αυτά τα δείγματα. Όπως περιγράφεται, οι όγκοι αυτοί παρατηρήθηκαν εντός 2 εβδομάδων από την πρώτη μεταμόσχευση τους, και έδειξε ένδειξη μετάστασης στο χάμστερ εντός 3-4 εβδομάδων [10], [37], υποδηλώνοντας ότι η πρώιμη απόκριση του ξενιστή χάμστερ στο ξένο μόσχευμα ιστού μπορεί να έχουν συνέβαλαν σε αυτή τη διαδικασία. Πράγματι, η φλεγμονή και την επούλωση τραυμάτων είναι γνωστό ότι διευκολύνει την κυτταρική σύντηξη [68] – [70]

Στις τρέχουσες μελέτες, μας ενδιαφέρει αποτύπωση της έκτασης με την οποία θα μπορούσε να μεταφερθεί ανθρώπινου DNA και μεταγράφεται συνεχώς στο. υβριδικό όγκων. Gene ανάλυση μικροσυστοιχιών έκφραση εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ολικό RNA που απομονώθηκε από τομές FFPE αυτές οι υβριδικές όγκων, συμπεριλαμβανομένων δύο διαφορετικές γενιές μεταμόσχευση του GW-532. Απροσδόκητα, εντοπίσαμε ένα συνδυασμένο σύνολο & gt? 3.000 ανθρώπινα γονίδια μεταξύ όλων των δειγμάτων, που αντιπροσωπεύουν γονίδια από όλα τα 23 ζεύγη των ανθρώπινων χρωμοσωμάτων, και βρέθηκε ότι το 33 ανθρώπινα γονίδια εκφράζονται παντού σε κάθε ένα από τα 4 δείγματα από τις 3 όγκους. Πέντε από αυτά τα γονίδια κωδικοποιούν παράγοντες μεταγραφής που είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν την αύξηση και τη διαφοροποίηση (

HOXB8, PPARγ και, POU2F2, ZFH2, ZNF580

), ενώ ένα άλλο πρωτεΐνες κυτταρικής προσκόλλησης και μετανάστευση που σχετίζεται με πέντε κωδικοποιούν που είναι γνωστό ότι συμμετέχουν κύτταρο στην ογκογένεση ή /και μεταστατικό εισβολή (

CDH3, FUT7, F11R, MUC3A

, και

SEMA3F

). Πρόσθετες γονίδια των οποίων τα προϊόντα μπορούν να προωθήσουν την ανάπτυξη των μεταστατικών εντοπίστηκαν επίσης, μεταξύ των οποίων δύο ενζύμων σηματοδοτικό μονοπάτι (

PRKD2

και

ECEL1

), δύο ρυθμιστές της απόπτωσης (

CARD11

και

CFLAR

), η επιδιόρθωση του DNA και απόπτωση ρυθμιστής (

PARP15

), και το γονίδιο ανθεκτικότητας σε πολλαπλά φάρμακα (

ABCC6

). Ένα αντιπροσωπευτικό δημοσίευση για καθένα από αυτά τα 16 γονίδια παρέχονται σε αναφορές S1. Είναι ιδιαίτερα αξιοσημείωτο ότι οι δημοσιευόμενες εκθέσεις δείχνουν ότι η απορρύθμιση της έκφρασής του, είτε

PPARγ και

ή

POU2F2

μπορεί να προωθήσει την ογκογόνο ανάπτυξη, την αναπτυξιακή λειτουργία

POU2F2

και

HOX

γονίδια είναι η διατήρηση των κυττάρων σε λιγότερο διαφοροποιημένη κατάσταση [71] – [80], και υψηλή έκφραση του

ECEL1

γονίδιο αναφέρθηκε από Kawamoto et al [81], για να συνδέσει με ευνοϊκή πρόγνωση σε ανθρώπινο νευροβλάστωμα . Ένας περιορισμός αυτής της αξιολόγησης, ωστόσο, είναι η πιστότητα του RNA που εκχυλίζεται από αυτούς τους ιστούς FFPE, η οποία ήταν πάνω από 40 ετών, τονίζοντας ότι μόνο θετικά αποτελέσματα μικροσυστοιχιών μπορούν να θεωρηθούν κατατοπιστική. Αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει γιατί μερικά από τα γονίδια που ταυτοποιήθηκαν σε αυτά τα δείγματα μέσω PCR [36] δεν ταυτοποιήθηκαν με ανάλυση μικροσυστοιχιών. Σε αυτή τη μελέτη, ωστόσο, τόσο οι συστοιχίες DNA και PCR προσδιόρισε την κατακράτηση μεταγράφεται ανθρώπινης

F11R

, το οποίο κωδικοποιεί για ένα συνδετικό μόριο προσκόλλησης. Το άλλο ανθρώπινο γονίδιο ανιχνεύεται με RT-PCR, α-δορυφορικό DNA, είναι παρών στο κεντρομερίδιο όλων των ανθρώπινων χρωμοσωμάτων, που περιλαμβάνει το κύριο δομικό συστατικό του ετεροχρωματίνη. Θα πρέπει επίσης να σημειωθεί ότι τα τμήματα FFPE είναι διαφόρων γενεών μεταμόσχευση γίνεται εδώ και πολλά χρόνια, και σε διάφορες χρονικές στιγμές που μελετήθηκαν

in vitro

. Οι πληθυσμοί είναι πολύ ομοιόμορφο, δεν αντανακλούν διαφορετικούς πληθυσμούς κυττάρων μορφολογικά. Όταν η μεταμόσχευση γλοίωμα GB-749 μελετήθηκε μετά τη μεταμόσχευση, αρκετές γενιές έδειξαν την παρουσία, σε μονά κύτταρα, τόσο των ανθρώπων και των χάμστερ χρωμοσωμάτων με βάση χρωμόσωμα banding, και στην πραγματικότητα σε σύγκριση με τα χρωμοσώματα που προσδιορίζονται στα λευκοκύτταρα του ασθενούς δότη. Δεδομένου ότι αυτά ήταν σε μεμονωμένα κύτταρα, που αναφέρονται σε αυτά ως heterosynkaryons. Ως τέτοια όγκοι πολλαπλασιάστηκαν για μεγάλες χρονικές περιόδους, ο κυτταρικός πληθυσμός έγινε πολύ ομοιόμορφο, και δεν υπήρξε ποτέ ενδείξεις καθαρά ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα να αναπαράγεται και διατηρήθηκαν σε σειριακή διέλευση.

Πρόσφατα, η σύντηξη των στρωματικών κυττάρων ανθρώπινου μυελού των οστών με δύο ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού έδειξε ότι το υβριδικό απόγονοι ήταν περισσότερο μεταστατικό από τα πατρικά καρκίνοι του μαστού, και ότι η ανάλυση των κωδικοποίησης πολυμορφισμών μονού νουκλεοτιδίου με αλληλούχιση RNA αποκάλυψαν γενετική συμβολή από τις δύο γονικές τους εταίρους, με μεταξύ 1.239 και 5.345 γονίδια από το γονικό κύτταρα διατηρούνται στα συντηγμένα κύτταρα [66]. Ωστόσο, αυτά τα συγχωνευμένα κύτταρα δεν έδειξαν μακροχρόνια σταθερότητα, αλλά περιέλαβε μορφολογία του καρκίνου του μαστού [66]. Σε αντίθεση, η σύντηξη των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων με φυσιολογική στρωματικά κύτταρα μαστικών αδένων ποντικού οδήγησε σε κακοήθεις όγκους που είχαν μια σαρκωματώδεις εμφάνιση [82]. Δύο διαφορετικοί πληθυσμοί ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του μαστού με ένεση σε ποντίκια οδήγησε σε κακοήθη κύτταρα που έδειξε απόδειξη της σύντηξης στο μυελό των οστών ποντικού, και ήταν περισσότερο εκτεταμένα μεταστατικό από τις γονικές κυτταρικές σειρές [83]. Ομοίως, δύο χωριστές ομάδες γονιδίων που προάγουν τη μετάσταση στα οστά και τους πνεύμονες συνδυάστηκαν μέσω σύντηξης των κυτταρικών γραμμών καρκίνου του μαστού, με αποτέλεσμα σταθερά υβρίδια πολλαπλασιάστηκαν μακροχρόνια σε κυτταρική καλλιέργεια και

in-vivo

[70]. Περαιτέρω, η σύντηξη των αιμοποιητικών κυττάρων με ανθρώπινη και ποντικού επιθηλιακών ωοθηκικών καρκινικών κυττάρων οδήγησε σε επιθετικούς όγκους ενός επιθηλιακού φαινοτύπου συγκράτησης αιμοποιητικών δείκτες [84]. Είναι ενδιαφέρον ότι ο υποδοχέας χημειοκίνης, CXCR4, το οποίο είναι ένας δείκτης promigration, εκφράστηκε στα υβριδικά όγκους, παρόμοια με τη δική μας εμπειρία του γονιδίου αυτού χημειοκίνης είναι που μεταγράφεται στα τρία υβριδικά όγκους που μελετήθηκαν εδώ.

μας δική πειράματα, οι μεταγράφονται γονίδια που είναι γνωστό ότι εμπλέκονται στην πρόοδο του όγκου στην εισβολή και μετάσταση, περιλαμβανομένων εκείνων που αφορούν EMT που προνοείται για να προωθήσει τα καρκινικά κύτταρα σε περισσότερο κακοήθη χαρακτηριστικά [85], [86]. Πρόσφατα, στην πραγματικότητα, συντήξεις ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα από κυτταρικές σειρές και ανθρώπινου μυελού των οστών προερχόμενα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, όταν συν-καλλιεργήθηκαν

in-vitro

, έδειξε απόδειξη της σύντηξης των κυττάρων και τη σύγκλιση σε ένα mesenchymal- όπως απογόνους με EMT και βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με τις ιδιότητες, ακόμα και μετά την ένεση σε NOD /SCID ποντίκια [87]. Δυστυχώς, αν και θεωρείται από τους συγγραφείς αυτούς ως «αυθόρμητη» κυτταρικής σύντηξης, δεν είναι καθόλου αυθόρμητη όταν 2 κυτταρικές σειρές που καλλιεργούνται μαζί σε καλλιέργεια, σε αντίθεση με την ανάπτυξη των όγκων που συγχωνεύονται

in-vivo

με μη επιλεγέντα κύτταρα στο τους μικροπεριβάλλον. Παρ ‘όλα αυτά, τέτοιες παρατηρήσεις παρέχουν πειραματικές ενδείξεις ότι σε περιπτώσεις προώθηση οριζόντια μεταφορά γονιδίων, αν πραγματικά αυθόρμητες ή το αποτέλεσμα των πειραματικών συνθηκών, νέο υβριδικό κόρη καρκινικά κύτταρα με νέες ιδιότητες ή δεν παράγονται, με τα χαρακτηριστικά της πιο προχωρημένης κακοήθειας [45], [46 ], [70], [82], [83]. Άλλα πειράματα επίσης έδειξαν ότι οι απόγονοι υβριδικά κύτταρα μετά τη σύντηξη μπορεί να αποκτήσει διαφορετικές ιδιότητες από τα γονικά κύτταρα [38], [43], [70], [82], [83], [88]. Ετσι, τέτοια πειράματα σύντηξης μπορεί να βοηθήσει να καθορίσει περαιτέρω γονίδια και οικογένειες γονιδίων που συμμετέχουν στην εξέλιξη, την αλλαγή, και την εξέλιξη των ανθρώπινων καρκίνων με μεθόδους που είναι δύσκολο να εφαρμοστούν σε ανθρώπους ή δείγματα ανθρώπινου όγκου απευθείας.

Είναι ενδιαφέρον ότι τόσα πολλά ανθρώπινα γονίδια, που αντιπροσωπεύουν όλα τα ατομικά ανθρώπινα χρωμοσώματα, μετήχθησαν, μεταγραφεί, και διατηρείται μόνιμα στην ανθρώπου-χάμστερ υβρίδιο όγκους μας διαδίδεται

IN-vivo

και

in-vitro

. Παρά μόνο 15 ανθρώπινα χρωμοσώματα που προσδιορίζονται από το χρωμόσωμα ταινίες σε διάφορα κύτταρα του δύο (5

ου και 15

ου) γενιές μεταμόσχευση, η οποία είχε την πλήρη σειρά των χάμστερ, καθώς και νέα χρωμοσώματα δείκτη, του GB-749 υβρίδιο όγκου προέρχονται από το ανθρώπινο πολύμορφο γλοιοβλάστωμα [36], τα αποτελέσματα συστοιχίας DNA δείχνουν ότι ένα σύνολο πάνω από 3.000 ανθρώπινα γονίδια εντοπίστηκαν σε μία τέταρτη δίοδο γενιά σε χάμστερ. Αυτή η διαφορά προκαλεί τον εικασίες ότι τα ανθρώπινα χρωμοσωμικών θραυσμάτων ή γονίδια θα μπορούσε να έχει μετατοπιστεί προς τα χρωμοσώματα χάμστερ, δεν σε αντίθεση με τις αλληλουχίες DNA (μεταθετά, ή «στοιχεία ελέγχου») που περιγράφεται από McClintock σε αραβόσιτο να μετακινηθούν σε άλλα χρωμοσώματα στο γονιδίωμα [89], και που είναι γνωστό ότι ρυθμίζει την έκφραση των κοντινών γονιδίων. Τη διάρκεια των επόμενων 60 ετών μεταθετά στοιχεία, λανθασμένα αναφέρεται προηγουμένως ως «σκουπίδια DNA», έχει επιβεβαιωθεί ότι λειτουργούν σε πολλά είδη ζώων, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπων [90], ακόμη και την εισαγωγή ενός μεταθετού στοιχείου στο ανθρώπινο γονιδίωμα που προκαλεί αιμορροφιλία Α [91]. Ρετροτρανσποζόνια (RNA τρανσποζόνια), ή «μεταθετά γονίδια» McClintock του, μπορεί να εξηγήσει τη διατήρηση των περισσότερων ανθρώπινων γονιδίων σε αυτά τα υβριδικά όγκους από ό, τι μπορεί να εξηγηθεί από τα 15 ανθρώπινα χρωμοσώματα που προσδιορίζονται από το χρωμόσωμα banding, και θέτει το ερώτημα κατά πόσον παρόμοιες εκδηλώσεις οδηγήσει γενικά με κυττάρου-κυττάρου συντήξεις μεταξύ όγκου και φυσιολογικών στρωματικών κυττάρων. Αυτά τα μεταθετά στοιχεία είναι πλέον κατανοητό να μεταβάλλουν τη γονιδιακή έκφραση και την προώθηση της εξέλιξης του γονιδιώματος [92].