Αφηρημένο

Ο καρκίνος που σχετίζεται με ινοβλάστες (CAFS) αναφέρονται για την υποστήριξη ογκογένεση με την τόνωση της αγγειογένεσης, τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, και την εισβολή στην πιο συμπαγείς όγκους. Ωστόσο, οι ρόλοι των CAFS στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου του ήπατος δεν έχουν μελετηθεί λεπτομερώς. Σε προηγούμενη μελέτη μας, απομονωμένες επιτυχία CAFS από ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) (H-CAFS) και απέδειξε ότι η H-CAFS κατέστειλε την ενεργοποίηση των ΝΚ κυττάρων και έτσι να δημιουργούνται ευνοϊκές συνθήκες για την εξέλιξη της HCC. Στην παρούσα μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων MHCC97L και Hep3B προωθήθηκε σημαντικά με επεξεργασία με κατάλληλα προετοιμασμένο μέσο από H-CAFS. Παθολογική ανάλυση αποκάλυψε επίσης ότι η H-CAFS αύξησε το ποσοστό των Ki-67 (+) κακοήθη κύτταρα και τους απέτρεψε από το να υποστούν νέκρωση. Επιπλέον, η συγκέντρωση του αυξητικού παράγοντα ηπατοκυττάρων (HGF) κυτοκίνης στο ρυθμισμένο μέσο της H-CAFS ήταν υψηλότερη από ρυθμισμένο μέσο από φυσιολογικούς ινοβλάστες δέρματος (NSFs). Αντι-HGF μείωσε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό που προάγουν την ικανότητα του H-CAFS. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η αφθονία των H-CAFS συσχετίζεται θετικά με το μέγεθος του όγκου. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η H-CAFS αποτελούν σημαντικό παράγοντα για την προώθηση της ανάπτυξης της HCC

in vitro

και

in vivo

, και ότι HGF διαδραματίζει καίριο ρόλο στην HCC πολλαπλασιασμό που προκαλείται από H-CAFS .

Παράθεση: Jia CC, Wang TT, Liu W, Fu BS, Hua X, Wang GY, et al. (2013) σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες από ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα Προώθηση κακοήθη πολλαπλασιασμό κυττάρων από HGF έκκριση. PLoS ONE 8 (5): e63243. doi: 10.1371 /journal.pone.0063243

Επιμέλεια: Τραγούδι Guo Zheng, University of Southern California, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10 Νοεμβρίου του 2012? Δεκτές: 1 Απρίλη του 2013? Δημοσιεύθηκε: May 7, 2013

Copyright: © 2013 Jia et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από: μέλος 973 Εθνικό Πρόγραμμα βασικής Έρευνας της Κίνας (2009CB522404), Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC-30972914, 81000936, 81172036, 81170451, 81170452), 985 Έργου (82000-3281901), Θεμελιωδών ταμεία Έρευνα για την Κεντρική πανεπιστήμια (10ykpy05), μέλος Key Projects για Μολυσματικές ασθένειες της Κίνας (2012ZX10002016-023, 2012ZX10002010-001-007), Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Γκουανγκντόνγκ (10151008901000208), καθώς και βασικό έργο της Ιατρικής Επιστήμης στο Sun Yat-sen University ( 10YKJC03). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η αξιοσημείωτη επίδραση του στρώματος του όγκου για την ανάπτυξη κακοηθών καρκινικών κυττάρων έχει αποδειχθεί και διερευνήθηκε με ενθουσιασμό σε αυτήν την εποχή της στοχευμένης θεραπείας [1], [2]. Ως ένα σημαντικό συστατικό του στρώματος του όγκου, αυξάνοντας στοιχεία έχουν δείξει ότι σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες (CAFS) είναι μια σημαντική τροποποιητής της εξέλιξης του καρκίνου [3], και προωθούν την ογκογένεση [4], της εξέλιξης [5], εισβολή [6] και χημειοαντίσταση [7] των καρκινικών κυττάρων με διάφορους μηχανισμούς. Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) [8], [9], επειδή περισσότερες περιπτώσεις HCC μπορεί να προέρχονται από κίρρωση του ήπατος [10]. CAFS είναι κυρίως ανθεκτικά στη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία λόγω ένα μικρό ποσοστό των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων, σε αντίθεση με κακοήθη κύτταρα [11], η οποία κάνει CAFS δυνητική πηγή εξέλιξης του όγκου και υποτροπή [12]. Στοχευμένη θεραπεία προς CAFS έχει εμφανιστεί πολλά υποσχόμενο αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου [6], η οποία έχει ενισχυθεί περαιτέρω η ανάγκη για τη μελέτη της σχέσης μεταξύ CAFS και φιλοξενεί τους [13].

Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά σχετικά με την CAFS στο HCC (H-CAFS). H-CAFS απομονώθηκαν και χαρακτηρίστηκαν σε προηγούμενη μελέτη μας [8], η οποία ήταν συγκρίσιμη με την μελέτη του Antonio [9] Mazzocca. Βρήκαμε ότι η H-CAFS μορφωμένοι ΝΚ κύτταρα να αποκτήσουν ένα απενεργοποιημένο φαινότυπο και να δημιουργήσει μια κατάσταση έλλειψης ανταπόκρισης στους όγκους [8]. Επιπλέον, η μελέτη [9] Αντόνιο Mazzocca έδειξε ότι λυσοφωσφατιδικού οξύ (LPA) επιταχύνει HCC εξέλιξη με την πρόσληψη ινοβλαστών περι-όγκου (PTFs) και την προώθηση της δια-τους σε μυοϊνοβλάστες. Ωστόσο, η μελέτη δεν προσδιορίζει τον αντίκτυπο του CAFS για καρκίνο του ήπατος κύτταρα in vitro. Ο ρόλος των Η-CAFS στο HCC είναι άγνωστη. Οι περισσότερες μελέτες που απαιτούνται για την απόκτηση της πλήρους άποψη του cross-talk μεταξύ H-CAFS και HCC στον ξενιστή.

Οι CAFS πιστεύεται ότι είναι ενεργοποιημένη, η οποία χαρακτηρίζεται από την έκφραση της α-ακτίνη των λείων μυών (α α-δΜΑ), πρωτεΐνη ενεργοποίησης ινοβλαστών (FAP), πρωτεΐνη επιφανείας ινοβλαστών (FSP), και βιμεντίνη [1] – [3]. Αυτή επιχορηγήσεις ενεργοποίηση CAFS πολλαπλές λειτουργίες στην προώθηση της ανάπτυξης του καρκίνου, όπως η διευκόλυνση της αγγειογένεσης, επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) [14], χημειοαντίσταση [5], [7], δυσλειτουργία του τοπικού ανοσοποιητικού συστήματος [6], [8], και ακόμη πιο ουσιαστικά, τον πολλαπλασιασμό κακοήθους κυττάρου [1] – [3]. Ωστόσο, το κλειδί μοριακός μηχανισμός και λειτουργικό σηματοδοτικό μονοπάτι που εμπλέκονται σε αυτές τις βιολογικές διαδικασίες είναι ελάχιστα κατανοητή και μακριά από διερευνηθεί πλήρως.

Στην παρούσα μελέτη, επιδιώξαμε να διαλευκανθεί ο ρόλος των Η-CAFS στην προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων HCC και ο υποκείμενος μηχανισμός.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς και την επιλεξιμότητα

Ερευνήσαμε μια συνεχόμενη σειρά από 43 ασθενείς με ιστολογικά επιβεβαιωμένο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, οι οποίοι έγιναν δεκτοί στο τρίτο Ενταγμένο νοσοκομείο του Sun Yat-sen University (Guangzhou, Κίνα) από το Νοέμβριο του 2008 έως τον Αύγουστο του 2011. οι ασθενείς συμπεριλήφθηκαν με τα ακόλουθα κριτήρια ένταξης: (α) παθολογικά επιβεβαιώθηκε ως HCC, (β) age≥18, (γ) αντιμετωπίζονται με ριζική εκτομή για HCC, (δ) τη διαθεσιμότητα των δεδομένων CT για μορφολογία του όγκου, (ε) έλλειψη αντικαρκινική θεραπεία, όπως καθετήρα αρτηριακής χημειοεμβολισμός (TACE), sorafenib, χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία πριν από την επέμβαση. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Κλινική Επιτροπή Ερευνητικής Δεοντολογίας του Τρίτου Ενταγμένο Νοσοκομείο του Sun Yat-sen University, Guangzhou, Κίνα. Μια γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς κατά τη στιγμή της εισαγωγής. Τα δείγματα εγκλεισμένο σε παραφίνη και κλινικά δεδομένα ανακτήθηκαν για κάθε ασθενή.

Απομόνωση των πρωτογενών ινοβλαστών από HCC δείγματα

δείγματα όγκου ελήφθησαν από ασθενείς HCC, δείγματα φυσιολογικού ήπατος ελήφθησαν από ασθενείς ηπατική αιμαγγείωμα και ακροποσθία δείγματα ελήφθησαν από υγιείς δότες από την Τρίτη Συνδεδεμένες Νοσοκομείο του Sun Yat-sen University. Η διάγνωση του HCC σε όλους τους ασθενείς που υποβλήθηκαν σε hepatolobectomy επιβεβαιώθηκε από παθολογική και των κλινικών δοκιμών. Δείγματα ανώνυμα κωδικοποιημένες σύμφωνα με τις τοπικές κατευθυντήριες γραμμές δεοντολογίας (όπως ορίζεται από τη Διακήρυξη του Ελσίνκι), και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από ασθενείς και υγιείς εθελοντές. Το έργο πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με το σχεδιασμό της μελέτης, όπως έχει εγκριθεί από την Κλινική Επιτροπή Ερευνητικής Δεοντολογίας του Νοσοκομείου Τρίτη Ενταγμένο στο Sun Πανεπιστήμιο Yat-sen σε Guangzhou, Κίνα.

H-CAFS απομονώθηκαν από την καρκινική περιοχή , και μη-καρκινική ινοβλάστες (NFS) περιελάμβανε τρία είδη ινοβλαστών: περινεοπλασματικής ινοβλάστες (PTFs) που λαμβάνονται από ιστό cm άπω τουλάχιστον 2 προς το εξωτερικό περιθώριο της μάζας του καρκίνου, ινοβλάστες που προέρχονται από ηπατική καλοήθη αιμαγγείωμα ως φυσιολογικό ήπαρ ινοβλάστες (NLFs) και ινοβλάστες που λαμβάνονται από ακροποσθία κανονικά ινοβλάστες δέρματος (NSFs). Οι ιστοί κιμά και πέψη σε Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI 1640? Invitrogen, Carlsbad, CA) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS? Gibco-BRL, Grand Island, ΝΥ), 1 mg /ml κολλαγενάση τύπου Ι ( Sigma, St. Louis, ΜΟ) και 100 U /ml υαλουρονιδάση (Sigma, St. Louis, ΜΟ) στους 37 ° C για 6 έως 8 ώρες, πλύθηκαν δύο φορές με PBS (Sigma, St. Louis, ΜΟ) και φυγοκεντρήθηκαν στα 450 g για 8 λεπτά κάθε φορά. Είχαν τελικά επαναιωρήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% FBS, 100 IU /ml πενικιλίνη, 100 μg /ml στρεπτομυκίνη, και στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένη 5% CO

2 περιβάλλον. Διαφορική θρυψινοποίηση εφαρμόστηκε κατά τη διάρκεια της υπο-καλλιέργειας για την επιλογή για την ανάπτυξη των ινοβλαστών. Το ποσοστό των καθαρίστηκε ινοβλάστες ήταν 95% μετά από 2-3 διόδους, το οποίο προσδιορίστηκε με ανοσοφθορισμό, κηλίδωση Western και κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας αντισώματα έναντι βιμεντίνης, κυτοκερατίνης, FAP, και α-SMA. Μετέπειτα πειράματα διεξήχθησαν με τη χρήση αυτών των κυττάρων εντός 3-10 περάσματα.

Κύτταρα και κυτταρική καλλιέργεια

Η κυτταρική γραμμή Hep3B HCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA) καλλιεργήθηκε σε Minimum Essential Medium (ΜΕΜ? Gibco-BRL, Grand Island, ΝΥ) συμπληρωμένο με πενικιλλίνη (100 U /ml), στρεπτομυκίνη (100 μg /ml) και 10% FBS. κύτταρα MHCC-97L (97L? ήπατος Ινστιτούτο Καρκίνου, Zhongshan Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Fudan, Σαγκάη, Κίνα) διατηρήθηκαν σε Μέσο Eagle Τροποποιημένο είναι Medium (DMEM? Gibco-BRL, Grand Island, ΝΥ) συμπληρωμένο με πενικιλίνη (100 U /ml), στρεπτομυκίνη (100 μg /ml), L-γλουταμίνη (300 μg /ml) και 10% FBS. κύτταρα LO2 (που λαμβάνονται από την αποθήκη εργαστήριο μας) καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 (Gibco-BRL, Grand Island, ΝΥ) συμπληρωμένο με πενικιλλίνη (100 U /ml), στρεπτομυκίνη (100 μg /ml) και 10% FBS. Όλα τα κύτταρα ανακαλλιεργήθηκαν σε αναλογία 1:04 κάθε 4-5 ημέρες.

Συλλογή ρυθμισμένου μέσου και ανοσορροφητική δοκιμασία συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA)

Για τη συλλογή του ρυθμισμένου μέσου από αυτά ινοβλάστες, ινοβλάστες κύτταρα τοποθετήθηκαν σε 75 cm

2 φιάλες, πλύθηκαν δύο φορές με PBS 4 ημέρες αργότερα, και επωάστηκαν για 48 ώρες με ϋΜΕΜ χωρίς ορό. Στη συνέχεια, το υπερκείμενο συλλέχθηκε, φυγοκεντρήθηκε στις 3000 rpm για 5 λεπτά, πέρασαν μέσα από ένα αποστειρωμένο σύστημα διήθησης Millipore ml 50 με μία μεμβράνη polyvinylidenedifluoride 0,45 μm και αποθηκεύεται σε ένα -80 ° C ψυγείο για μεταγενέστερη χρήση.

Για μετρούν διαλυτό κυτοκίνες στο ρυθμισμένο μέσο, ​​2 × 10

5 ινοβλάστες καλλιεργήθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων και καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες, και το ρυθμισμένο μέσο συλλέχθηκε για ELISA. Η ίδια μέθοδος χρησιμοποιήθηκε για να ληφθεί ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα LO2. Τα επίπεδα της ανθρώπινης στρωματικών παράγοντα που προέρχεται από κύτταρα 1 (SDF-1), αυξητικό παράγοντα ηπατοκυττάρων (HGF), αυξητικό παράγοντα μετασχηματισμού-βήτα (TGF-β) και του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) προσδιορίστηκαν με χρήση ανθρώπινων κιτ ELISA (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

ανοσοαποτύπωσης

η συνολική πρωτεΐνη εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό RIPA μετά τα φρεάτια πλύθηκαν τουλάχιστον 3 φορές με ρυθμιστικό διάλυμα PBS. Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με 12% SDS-PAGE, ανοσοστυπώθηκαν με ένα αντίσωμα κατά α-SMA (Abcam, Cambridge, ΜΑ), FAP (Abcam, Cambridge, ΜΑ), βιμεντίνη (Abcam, Cambridge, ΜΑ) και β-ακτίνης (Santa Cruz βιοτεχνολογίες, Santa Cruz, CA) και, στη συνέχεια, οπτικοποιούνται με το ενισχυμένο σύστημα χημειοφωταύγειας (GE, Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο).

ανοσοφθορισμού (IF)

Τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν σε παγωμένη μεθανόλη (σε 4 ° C για 15 λεπτά), πλύθηκαν με PBS, αποκλείστηκαν με 3% BSA και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τα κύτταρα ανοσοχρώστηκαν για α-SMA, FAP, βιμεντίνη, FSP (Sigma, St. Louis, ΜΟ) και κυτοκερατίνη (Dako, Carpinteria, CA). Τα δευτερεύοντα αντισώματα ήταν Alexa Fluor 488 αντι-ποντικού κατσίκας IgG (H + L) και Alexa Fluor 546 αντι-ποντικού κατσίκας IgG (H + L) (Molecular Probes, Grand Island, ΝΥ). Οι πυρήνες βάφτηκαν με Hoechst 33342 (Sigma, St. Louis, ΜΟ). Οι εικόνες δει κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού (LEICA DMI 4000B, Solms, Γερμανία) και αναλύθηκαν από το λογισμικό σουίτα εφαρμογών Leica (έκδοση 4.0).

Η ανοσοϊστοχημεία

Οι ιστοί μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη (PFA? Sigma, St. Louis, ΜΟ), ενσωματωμένο σε παραφίνη και κόπηκαν σε 4 μm πάχους τομές. Η ενδογενής δραστηριότητα υπεροξειδάσης εμποδίστηκε, ανάκτηση αντιγόνου εκτελέστηκε, και οι αντικειμενοφόρες πλάκες χρωματίστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα ενάντια Ki-67 (Abcam, Cambridge, ΜΑ), α-SMA και CD31 (Abcam, Cambridge, ΜΑ), τα οποία χρησιμοποιούνται στις αραιώσεις που υποδεικνύεται από τον κατασκευαστή. Ανοσοαντιδράσεις ανιχνεύθηκαν από το Dako-Cytomation Envision HRP System (Dako, Glostrup, Denmark), και οι τομές με αιματοξυλίνη (Sigma, St. Louis, ΜΟ). Οι αρνητικοί έλεγχοι χρωματίστηκαν μόνο με το δευτερεύον αντίσωμα.

H-CAFS ταυτοποιήθηκαν με α-SMA ανοσοαντιδραστικότητα. Ο πληθυσμός του H-CAFS ταξινομήθηκε σε υψηλής έντασης ή χαμηλής έντασης χρώσης μοτίβα σύμφωνα με τα κριτήρια που περιγράφονται προηγουμένως [14].

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δοκιμασία

κύτταρα HCC (κύτταρα 97L) απλώθηκαν σε ένα πυκνότητα 2 × 10

3 κύτταρα εις τριπλούν σε μία πλάκα 96 φρεατίων (Corning Life Sciences, Lowell, ΜΑ). Το εμπλουτισμένο μέσο που περιέχει 10% FBS από τα δείγματα ινοβλαστών ή από LO2 κύτταρα προστέθηκε και ανταλλάσσονται για 4 έως 5 ημέρες, και DMEM συμπληρωμένο με 10% FBS χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήθηκε με τη χρήση του Κυττάρου Μετρώντας Kit-8 (Dojindo, Rockville, MD) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.

In vivo

επίδραση του Η-CAFS στην ανάπτυξη του όγκου

Ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου του ήπατος ιδρύθηκε επιτυχώς να αξιολογηθεί η επίδραση του η-CAFS στην ανάπτυξη του όγκου στην παρούσα μελέτη. Τεσσάρων έως έξι εβδομάδων αρσενικούς BALB /c γυμνά ποντίκια αγοράστηκαν από Wei Tong Li Hua Εταιρείας (Πεκίνο, Κίνα) και διατηρείται σε πίεση αεριζόμενα κλουβιά στο Vaccine Research Institute της Sun Yat-sen University. Τα κύτταρα 97L (5 × 10

6) μόνο ως έλεγχο ή αναμεμιγμένο με είτε CAFS (5 × 10

6) ή NFs (5 × 10

6) αιωρήθηκαν σε ένα σωλήνα 0.5 ml και εγχύθηκε υποδορίως (sc) σε γυμνά ποντίκια. Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν σαν ρουτίνα με παχύμετρο κάθε 3 ημέρες, και οι όγκοι του όγκου υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: π /6 × μεγαλύτερη διάμετρο χ μικρότερη διάμετρο)

2. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ένα διάγραμμα της μέσης όγκων του όγκου συναρτήσει του χρόνου σε ημέρες. Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις συστάσεις στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου του Sun Yat-sen University και εγκρίθηκαν από την επιτροπή δεοντολογίας των Ζώων του Τρίτου Ενταγμένο Νοσοκομείο (Αριθμός Άδειας: 0021942).

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή ± SEM, και t-test Student χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθεί η διαφορά μεταξύ δύο ομάδων.

P

τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν ως στατιστικά σημαντικές. Σημαντικές διαφορές για συνεχή δεδομένα κλινικών χαρακτηριστικών μεταξύ των δύο ομάδων (H-CAFS υψηλής έντασης εναντίον του H-CAFS χαμηλή ένταση) συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Mann-Whitney.

Αποτελέσματα

απομόνωση, τον πολιτισμό και ο χαρακτηρισμός των H-CAFS

H-CAFS απομονώθηκαν από πρωτογενείς ιστούς όγκου και καλλιεργήθηκαν σύμφωνα με τις μεθόδους που περιγράφονται στο προηγούμενη μελέτη μας [8]. H-CAFS έδειξε έκφραση υψηλού επιπέδου του α-SMA, FAP, FSP, βιμεντίνη και ινονεκτίνη σύμφωνα με την ανάλυση ανοσοφθορισμού (Εικ. 1Α), η οποία επιβεβαιώθηκε με κηλίδωση Western (Εικ. 1Β). Επιπλέον, όπως το βασικό χαρακτηριστικό της H-CAFS και ενεργοποιημένων ινοβλαστών, έκφραση α-SMA ανιχνεύθηκε σε ιστούς πρωτογενούς όγκου χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία για να επιβεβαιωθεί η παρουσία του Η-CAFS σε δείγματα όγκων. έκφραση CD31 αξιολογήθηκε να αποκλειστεί η παρουσία αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων, τα οποία συν-εκφράζουν α-SMA και CD31. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η H-CAFS ήταν πιο άφθονα σε ιστούς όγκων σε σχέση με περι-όγκου και φυσιολογικό ιστό του ήπατος (Εικ. 1Γ).

(Α) Η έκφραση της α-SMA, FAP, FSP, βιμεντίνη, ινονεκτίνη και κυτοκερατίνη στους τέσσερις τύπους καθαρίστηκε ινοβλάστες καλλιεργήθηκαν για 3-10 διελεύσεις προσδιορίστηκε με χρώση ανοσοφθορισμού. Και οι τέσσερις τύποι ινοβλαστών έδειξαν υψηλή έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών FSP, βιμεντίνη και ινονεκτίνη. NLFs, Η-CAFS, PTFs και NLFs εμφανίζεται υψηλή έκφραση της α-SMA, γεγονός που υποδηλώνει ότι υπάρχουν αυτές οι ινοβλάστες σε ενεργοποιημένη κατάσταση υπό συνθήκες καλλιέργειας κυττάρων. Ωστόσο, ένα άλλο FAP σήμα κατατεθέν της ενεργοποίησης ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται σε H-CAFS και PTFs αλλά όχι σε NSFs και NLFs. (Β) κηλίδωση Western έδειξε διαφορές στο α-SMA και έκφραση FAP μεταξύ των τεσσάρων ινοβλάστες. Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα της χρώσης ανοσοφθορισμού, Η-CAFS, PTFs και NLFs εμφανίζεται υψηλή έκφραση του α-SMA. FAP ήταν άκρως εκφράζεται σε H-CAFS και PTFs αλλά όχι σε NSFs και NLFs. (Γ) Η κατανομή του H-CAFS προσδιορίζονται από α-SMA (+) CD31 (-) έκφραση σε κάθε δείγμα από κακοήθη, περι-όγκου και φυσιολογικών περιοχών του ήπατος ανιχνεύθηκε μέσω ανοσοϊστοχημείας σε σειριακές παθολογικές τομές. έκφραση α-SMA ανιχνεύθηκε για να επιβεβαιώσει την παρουσία της Η-CAFS. Επιπλέον, η έκφραση CD31 αξιολογήθηκε να αποκλειστεί η παρουσία αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων, τα οποία συν-εκφράζουν α-SMA και CD31. H-CAFS ήταν πιο άφθονο στον ιστό του όγκου, σε σύγκριση με το περι-όγκου και φυσιολογικό ιστό του ήπατος.

Η

Ωστόσο, PTFs εξέφρασε ένα παρόμοιο επίπεδο α-SMA, FAP, FSP, βιμεντίνη και ινωδονεκτίνη σε H -CAFs

in vitro

(Εικ. 1Α), η οποία επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με κηλίδωση Western (Εικ. 1Β). NLFs εμφανίζεται σημαντικά χαμηλότερη έκφραση του FAP σύγκριση με H-CAFS

in vitro

, και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στις άλλες βιοδείκτες (Εικ. 1Α και το Σχ. 1Β). Η έκφραση του α-SMA και FAP ήταν εξαιρετικά χαμηλό σε NSFs σε αντίθεση με H-CAFS, το οποίο αποδείχθηκε με ανοσοφθορισμό και κηλίδωση Western (Εικ. 1Α και το Σχ. 1Β).

H-CAFS προήγαγαν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HCC τόσο

in vivo

και

in vitro

η

CCK-8 δοκιμές έδειξαν ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων 97L και Hep3B αυξήθηκε σημαντικά με τη θεραπεία με κατάλληλα προετοιμασμένο μέσο από NLFs , PTFs και H-CAFS σε σύγκριση με το ρυθμισμένο μέσο από NSFs ή την ομάδα ελέγχου

in vitro

. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι H-CAFS διαθέτουν ένα προ-πολλαπλασιαστικό αποτέλεσμα επί των κυττάρων HCC (Εικ. 2Α και σχ. 2Β).

(Α και Β) κύτταρα 97L (Α) και τα κύτταρα Hep3B (Β) καλλιεργήθηκαν σε ρυθμισμένο μέσο από διαφορετικές ινοβλάστες, και τον πολλαπλασιασμό των κακοήθων κυττάρων προσδιορίστηκε με CCK-8 ανάλυση. NLFs, PTFs και H-CAFS αύξησε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HCC σε σχέση με NSFs και την ομάδα ελέγχου. (Γ και Δ) Ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος /c γυμνό ποντίκι BALB βασίζεται στην συν-έγχυση των κυττάρων HCC με ή χωρίς δύο τύπων ινοβλαστών (NSFs ή Η-CAFS) χρησιμοποιήθηκε για να διερευνηθεί η

in vivo

αλληλεπίδραση μεταξύ H-CAFS και HCC κύτταρα. Οι όγκοι των όγκων των κόμβων του όγκου που παράγεται από το συν-έγχυση των κυττάρων HCC και Η-CAFS ήταν με συνέπεια σημαντικά μεγαλύτερες από αυτές που σχηματίζονται από κύτταρα HCC χωρίς συν-ένεση του H-CAFS. NSFs δεν αύξησε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου σε σχέση με τον έλεγχο. Επιπλέον, οι ινοβλάστες δεν παρήγαγε όγκους όταν εγχέονται μόνο. (Γ) Τα μεικτά δείγματα όγκου στο τέλος του πειράματος φαίνονται. Τα μεγαλύτερα όγκοι HCC που σχηματίζονται όταν τα κύτταρα HCC είναι συν-ένεση με Η-CAFS (n = 5 ανά ομάδα) (D). (*

P

& lt? 0,05? **

P

& lt? 0,01).

Η

Για την εκτίμηση της συνεισφοράς του H-CAFS και NSFs σε όρους όγκου ανάπτυξη

in vivo

, ένα σύστημα ξενομοσχεύματος καρκίνου του ήπατος ιδρύθηκε, όπως περιγράφεται στην ενότητα Μέθοδοι. Γυμνοί ποντικοί εγχύθηκαν υποδορίως με κύτταρα HCC, ινοβλάστες, ή με κύτταρα HCC και κύτταρα ινοβλαστών. Η ανάπτυξη του όγκου καταγράφηκε για μέγιστο χρονικό διάστημα 28 ημερών μετά την ένεση των κυττάρων. μέτρηση του μεγέθους του όγκου έδειξε ότι η εμφύτευση του καθαρού H-CAFS ή NSFs δεν είχε ως αποτέλεσμα το σχηματισμό όγκου. Περαιτέρω, συν-ένεση του H-CAFS συνέβαλε στην παραγωγή μεγαλύτερων όγκων (HCC + Η-CAFS

vs

HCC,

P

& lt?. 0.05, η = 5) σε αντίθεση με την ο συν-ένεση NSFs, που δεν ενισχύουν τον σχηματισμό της μάζας του όγκου ή την ανάπτυξη (ΕΕΑ + NSFs

vs

HCC,

P

& gt?. 0.05, n = 5). (Εικ 2C και Σχ. 2D).

Επιπλέον, αυτή η ικανότητα προώθησης επιβεβαιώθηκε από το ποσοστό των κυττάρων του όγκου Ki-67-θετικά σε κόμβους του όγκου. Το Ki-67 (+) αφθονία αντανακλά άμεσα την αυξανόμενη κλάσμα των ιστών του όγκου. Όπως ήταν αναμενόμενο, οι όγκοι που σχηματίζονται από HCC και Η-CAFS εμφανίζεται ισχυρή και πυκνό έκφραση Ki-67, ενώ οι άλλες δύο ομάδες έδειξαν μέτρια και διάσπαρτα χρώση Κί-67 (Σχ. 3Α). Είναι ενδιαφέρον ότι, μια υψηλή συχνότητα εμφάνισης Ki-67-θετικών κυττάρων που βρίσκονται γύρω από ινοβλάστες εντός σειριακά τμήματα, ιδιαίτερα σε περιοχές με μαζική νέκρωση, η οποία πρότεινε περαιτέρω το ρόλο προαγωγικός ινοβλαστών στην επιβίωση των κυττάρων του όγκου (Σχ. 3Β).

(Α) Ki-67 έκφραση σε κύτταρα HCC ήταν σημαντικά υψηλότερη σε κόμβους του όγκου που σχηματίζεται από την συν-έγχυση των κυττάρων 97L και η-CAFS, η οποία ήταν σε αντίθεση με τα αποτελέσματα των όγκων που σχηματίζεται από την συν-ένεση του 97L και NSFs ή κύτταρα 97L μόνο. (Β) Ki-67-θετικά κύτταρα ήταν άφθονα κοντά στο α-SMA (+) CD31 (-) ινοβλάστες μέσα σε σειριακές τομές όγκου. Σε δείγματα που είχαν διπλή ανοσοχρώση με α-SMA (κόκκινο χρώμα, μαύρη γραμμή) και CD31 (καφέ χρώμα, κόκκινο σειρά), CD31 δεν εκφράζεται σε α-SMA-θετικά κύτταρα (Άνω πάνελ). Όταν διπλή ανοσοχρώση με α-SMA (κόκκινο χρώμα) και Ki-67 (καφέ χρώμα), υψηλή συχνότητα εμφάνισης καρκινικών κυττάρων με Ki-67 έκφρασης (καφέ χρώμα, κόκκινο σειρά) παρατηρήθηκε βρέθηκε στην περιοχή του H-CAFS με α α-δΜΑ-θετική χρώση (κόκκινο χρώμα, μαύρη γραμμή) (κάτω πίνακας). (Γ) Η νέκρωση ήταν μαζικά μειωμένος σε κόμβους του όγκου που παράγεται από το συν-έγχυση των ινοβλαστών (+ NSFs ή + Η-CAFS), σε σύγκριση με τους όγκους που σχηματίζονται από την ένεση 97L κύτταρο μόνο (έλεγχος). έκφραση (D) α-SMA παρατηρήθηκε σε όλες τις ξενομοσχεύματα όγκου, συμπεριλαμβανομένων των κόμβων του όγκου σχηματίζεται χωρίς ινοβλαστών συν-ένεση (ομάδα ελέγχου).

Η

Αυτή η αυξημένη ανάπτυξη κόμβος όγκου ενδέχεται να μην ενισχύεται μόνο από τον πολλαπλασιασμό προαγωγής, αλλά υποστηρίζεται και από την αποφυγή νέκρωσης. Νέκρωση σε κόμβους του όγκου των τριών ομάδων όταν η διάμετρος κόμβος αυξήθηκε σε ένα ορισμένο επίπεδο. Είναι ενδιαφέρον, νεκρωτικές περιοχές εντός των διαδοχικών τομών ήταν πολύ μικρότερες στις μάζες όγκων που αναπτύσσονται με ινοβλάστες (Σχ. 3C). Επιπλέον, τα κύτταρα όγκου απομεινάρι στις νεκρωτικές περιοχές διανεμήθηκαν γύρω ινοβλάστες που εκφράζουν α-SMA, το οποίο υποδεικνύεται έντονα το ρόλο επιβίωση των ινοβλαστών για κακοήθη κύτταρα (Σχ. 3Β).

Επιπλέον, ένα ενδιαφέρον φαινόμενο παρατηρήθηκε σε το πείραμά μας. H-CAFS παρατηρήθηκαν επίσης σε κόμβους του όγκου που σχηματίζεται από μόνο κύτταρα HCC, η οποία πρότεινε ότι κύτταρα όγκου μπορεί να προκαλέσει ορισμένα κύτταρα με άγνωστης προέλευσης να μετατρέψει σε CAFS (Σχ. 3D).

HGF εμπλέκεται στην ενίσχυση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων HCC

ήταν εξαιρετικά έδειξε ότι η H-CAFS μπορεί να επικοινωνεί με τα κύτταρα HCC μέσω παρακρινούς τρόπους, διότι H-CAF ρυθμισμένο μέσο προώθησε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HCC. Ως εκ τούτου, οι αυξητικοί παράγοντες και χημειοκινών μπορεί να είναι τα κύρια μεσολαβητές μέσω των οποίων επικοινωνούν με ινοβλάστες κύτταρα καρκίνου. Μετρήσαμε τα επίπεδα των τεσσάρων προηγουμένως αναφερθεί κυτοκίνες, SDF-1 [15], HGF [16], ο ΤΟΡ-β [1], [3] και EGF, στο ρυθμισμένο μέσο της H-CAFS. Η ELISA έδειξαν ότι η συγκέντρωση HGF στο ρυθμισμένο μέσο της H-CAFS ήταν η υψηλότερη μεταξύ των τεσσάρων τύπων των ινοβλαστών. PTFs έδειξαν επίσης υψηλό επίπεδο έκκρισης των HGF, χωρίς σημαντική διαφορά σε σύγκριση με το H-CAFS. HGF εκκρίνεται από NLFs ήταν σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με H-CAFS και παρουσίασε πτωτική τάση σε σχέση με PTFs. Επιπλέον, NSFs δεν εκκρίνουν HGF. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκκριση HGF συσχετίστηκε με τον τύπο ινοβλαστών. Ωστόσο, αυτή η παρόμοια τάση δεν παρατηρήθηκε στις συγκεντρώσεις του SDF-1, ΤΟΡ-β ή EGF που εκκρίνεται από τα διάφορα ινοβλάστες (Σχ. 4Α).

(Α) Το επίπεδο της SDF-1, HGF, ΤΟΡ-β και EGF στο ρυθμισμένο μέσο που προέρχεται από η-CAFS προσδιορίστηκε με ELISA. H-CAFS και PTFs εκκρίνεται HGF σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα από ό, τι NLFs, ενώ NSFs εκκρίνονται σχεδόν καμία ανιχνεύσιμη HGF. Ωστόσο, NSFs εκκρίνεται υψηλότερο επίπεδο από ό, τι SDF1 τους άλλους τρεις τύπους ινοβλαστών. ΤΟΡ-β και έκκριση EGF ήταν παρόμοιες για τις τέσσερις ινοβλαστών τύπους. πολλαπλασιασμό (Β) Cell αυξημένο μετά την έκθεση σε διαφορετικές συγκεντρώσεις του HGF, όπως αποδεικνύεται από CCK-8 δοκιμές. HGF προώθησε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HCC σε όλα τα επίπεδα συγκέντρωσης. (Γ) Η αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων HCC όπως διαμεσολαβείται από H-CAF ρυθμισμένο μέσο ήταν σημαντικά ανταγωνίζεται από HGF αντίσωμα εξουδετέρωσης. Επιπλέον, αντι-ΗΟΡ δεν παρεμβαίνει στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων 97L. (*

P

& lt? 0,05? **

P

& lt? 0,01).

Η

Ήταν ενδιαφέρον το γεγονός ότι η τάση της παραγωγής HGF ήταν σύμφωνη με εκείνη της αύξηση του όγκου του όγκου, η οποία οδήγησε στην υπόθεση ότι HGF έπαιξε ρόλο μεσολαβητή σε HCC πολλαπλασιασμό διευκολύνεται από H-CAFS (Σχ. 2D και Σχ. 4Α). Κατά συνέπεια, ο HGF αναλύθηκε με CCK-8 δοκιμές για να διαπιστωθεί το δυναμικό πολλαπλασιασμού του. Τα αποτελέσματα ήταν θετικά για όλες τις ομάδες σε διαφορετικές συγκεντρώσεις του HGF (Εικ. 4Β). Επιπλέον, τα αντι-ΗΟΡ χορηγήθηκε σε ανταγωνίζεται τη δράση του Η-CAF ρυθμισμένο μέσο σε κύτταρα HCC και μείωσε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό (Εικ. 4C). Επιπλέον, HGF δεν ανιχνεύθηκε στο ρυθμισμένο μέσο των κυττάρων 97L, η οποία απέκλεισε την HGF αυτοκρινή αυξητική πορεία των κυττάρων HCC. Το εύρημα αυτό αποδεικνύεται περαιτέρω από το γεγονός ότι το αντι-ΗΟΡ δεν παρεμβαίνει με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων 97L (Εικ. 4C). Ωστόσο, ο πολλαπλασιασμός δεν ήταν εντελώς εξαλειφθεί, η οποία υπονοείται ότι ο HGF δεν είναι η μόνη κυτοκίνη που εμπλέκονται στη μοριακό μηχανισμό του πολλαπλασιασμού των κακοηθών κυττάρων που διαμεσολαβείται από H-CAFS.

H-CAF-εκκρίνεται HGF επαγόμενο πολλαπλασιασμό των κυττάρων HCC

Επίσης, αναλύσαμε το επίπεδο HGF στο ρυθμισμένο μέσο της H-CAFS, φυσιολογικά ηπατοκύτταρα (LO2) και τα κύτταρα HCC (97L και Hep3B) με ELISA για να αποκλείσει την πιθανότητα ενός αυτοκρινούς μηχανισμού HGF. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν μια μεγάλη διαφορά σε HGF έκκριση μεταξύ H-CAFS και ηπατικά κύτταρα προερχόμενα ανεξάρτητα από την κακοήθη φύση. Επιπλέον, ο HGF δεν ανιχνεύθηκε σε LO2 ρυθμισμένο μέσο (Εικ. S1 Α). Για να εξετάσει τον ειδικό ρόλο του H-CAFS σε εξέλιξη HCC περαιτέρω, συγκρίναμε τον πολλαπλασιασμό που προάγουν την ικανότητα του H-CAFS με εκείνη των κυττάρων LO2. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η H-CAFS είχαν σημαντικά ισχυρότερη επίδραση στον πολλαπλασιασμό HCC από κύτταρα LO2. Όλα τα ευρήματά μας δείχνουν ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων HCC δεν οφείλεται σε ένα αυτοκρινή τρόπο (Εικ. S1B). Έτσι, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι ο πολλαπλασιασμός HCC προωθείται σε ένα παρακρινή τρόπο από HGF εκκρίνεται από H-CAFS.

Παθολογική ενεργοποίησης είναι ένα από τα βασικά χαρακτηριστικά της H-CAFS

Ομοιότητες βρέθηκαν στην ο φαινότυπος και ο πολλαπλασιασμός ενίσχυση μεταξύ NLFs, PTFs και η-CAFS (Εικ. 1Α, το Σχ. 1Β, Εικ. 2Α και Σχήμα 2Β) σε

in vitro

πειράματα, συμπεριλαμβανομένων έκφραση α-SMA. Ωστόσο, ινοβλάστες που προέρχονται από τις περιοχές του ιστού του όγκου, του ιστού περι-όγκου και κανονικούς ιστούς του ήπατος εκφράζεται διαφορετικά επίπεδα α-SMA, το ειδικό δείκτη για την ενεργοποίηση των ινοβλαστών. Αυτή η ασυνέπεια στα αποτελέσματα θα μπορούσε να προκληθεί από το γεγονός ότι οι ινοβλάστες θα μετατραπεί από μια στατική, περικύτταρο-φαινότυπο σε έναν ενεργοποιημένο φαινότυπο που μοιάζει με μυοϊνοβλάστες μετά από μερικές ημέρες καλλιέργειας

in vitro

. Σε σύγκριση με μια προηγούμενη μελέτη, η κανονική ινοβλάστες ενεργοποιήθηκαν μετά από 1 εβδομάδα καλλιέργειας

in vitro

, η οποία χαρακτηρίζεται από την έκφραση α-SMA (Fig.1A και η Εικ. 1Β). Έτσι, ήταν λογικό να υποθέσουμε ότι PTFs και NLFs ήταν στατική σε όγκους και ενεργοποιούνται κατά τη διάρκεια του πολιτισμού. Επιπλέον, Η-CAFS ήταν σχετικά ενεργοποιούνται σε όγκους. Συνεπής με αυτή την υπόθεση, η παρούσα μελέτη έδειξε ότι PTFs και NLFs ήταν «περικύτταρο σαν», ενώ η H-CAFS ήταν «μυοϊνοβλαστών όπως» όταν είχαν αρχικά απομονώθηκε από δείγματα όγκου (Εικ. 5Α). Για να δοκιμαστεί περαιτέρω αυτή η υπόθεση, ανοσοφθορισμού χρησιμοποιήθηκε για να ανιχνεύσει έκφραση α-SMA μεταξύ των διαφορετικών τύπων των ινοβλαστών επωάζονται για 24 ώρες μετά την απομόνωση του αρχικού ιστού. Όπως φαίνεται στο σχήμα 5Β, Η-CAFS ήταν σε ενεργοποιημένη φάση, όπως υποδεικνύεται από την έκφραση α-SMA, ενώ PTFs και NLFs παρουσίασε φαινότυπο ηρεμίας, όπως αποδεικνύεται από αρνητική χρώση α-SMA, υποδεικνύοντας ότι η παθολογική ενεργοποίηση μπορεί να είναι ο κύριος λόγος για τη διαφορά μεταξύ της κανονικής ινοβλάστες και H-CAFS.

(Α) μικροσκόπιο εικόνες των H-CAFS, PTFs και NSFs επωάστηκαν για 24 ώρες. Όταν αρχικά απομονώθηκε από τα δείγματα όγκων, PTFs και NLFs παρουσιάζονται με μια στατική, περικύτταρο φαινότυπο, ενώ H-CAFS έτρεφε ένα ενεργοποιημένο φαινότυπο που μοιάζει με μυοϊνοβλάστες. (Β) Η έκφραση της α-SMA, FAP, FSP και φιμπρονεκτίνη σε H-CAFS, PTFs και NSFs επωάστηκαν για 24 ώρες προσδιορίστηκε με χρώση ανοσοφθορισμού. α-SMA έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε H-CAFS και σχετικά ανύπαρκτο στις άλλες ινοβλαστών τύπους, όταν αναλύονται αμέσως μετά τη συγκομιδή από δείγματα όγκου. Αυτή η διαφορά υποδηλώνει την παθολογικά ενεργοποιημένων φύση του H-CAFS και τη σχετικά στατική φύση των άλλων ινοβλαστών εντός των αρχικών ιστούς.

Η

Η παρουσία του Η-CAFS συσχετίζεται θετικά με όγκο μέγεθος

Για τον προσδιορισμό της κλινικής σημασίας του H-CAFS στο πλαίσιο της ανάπτυξης του όγκου, διερευνήσαμε την παρουσία του η-CAFS εντός δείγματα όγκων που λαμβάνονται από 43 ασθενείς με α-SMA ανοσοαντιδραστικότητα. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι είκοσι επτά δείγματα ασθενών εμφάνισαν υψηλό επίπεδο χρώσης για H-CAFS, ενώ τα δείγματα που απομένουν δεκαέξι παρουσιάζονται με ένα χαμηλό επίπεδο χρώσης για H-CAFS (Σχ. 6Α). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η συσσωμάτωση των H-CAFS συσχετίστηκε σημαντικά με μεγαλύτερο μέγεθος του όγκου (Σχ. 6Β και Πίνακας S1), το οποίο προτείνει μια θετική συσχέτιση μεταξύ της σχετικής αφθονίας των H-CAFS και την ανάπτυξη του όγκου στο κλινικό επίπεδο.

(Α) Η αφθονία των Η-CAFS ήταν διχοτομήθηκε σε δύο επίπεδα, υψηλής πυκνότητας και χαμηλής πυκνότητας. (Β) Οι όγκοι των όγκων της ομάδας υψηλής πυκνότητας (n = 27) ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι οι όγκοι των όγκων της ομάδας χαμηλής πυκνότητας (n = 16,

P

= 0,006).

Η

Συζήτηση

το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) είναι η πέμπτη πιο διαδεδομένη μορφή καρκίνου και η τρίτη κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο σχετίζονται, αντιπροσωπεύοντας το 90% όλων των περιπτώσεων πρωτοπαθούς καρκίνου του ήπατος. Ο ρόλος του μικροπεριβάλλοντος του όγκου κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης έχει σε μεγάλο βαθμό μελετηθεί ως ένα δυναμικό σύστημα ενορχηστρωμένη από φλεγμονώδη κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των καρκινικών κυττάρων. Το μικροπεριβάλλον του HCC αποτελείται από ινοβλάστες, εισβάλλοντα φλεγμονώδη κύτταρα, ενδοθηλιακά κύτταρα (ECs), περικύτταρα δίπλα στο ECs, και εκτεταμένη εξωκυτταρική μήτρα (ECM) συστατικά. Καρκίνωμα που σχετίζονται με ινοβλάστες (CAFS) είναι ένα από τα πιο κρίσιμα στοιχεία του μικροπεριβάλλοντος HCC. Σε προηγούμενη μελέτη μας, απομονώσαμε με επιτυχία συγκεκριμένες ινοβλάστες καρκίνωμα που σχετίζεται των HCC (H-CAFS) από την πρωτοβάθμια ιστούς HCC και απέδειξε ότι η H-CAFS κατέστειλε την ενεργοποίηση των ΝΚ κυττάρων και δημιούργησαν ένα ευνοϊκό ανοσοκατασταλτική ασπίδα για τα κύτταρα HCC.