Abstract

αναστολείς πρωτεάσης σερίνης (Σερπίνες) φαίνεται να εκφράζεται παντού σε μια ποικιλία ειδών και παίζουν σημαντικό ρόλο στη περιστροφική φυσιολογικές διεργασίες όπως η αγγειογένεση, ανοσολογικές αποκρίσεις, την πήξη του αίματος και fibronolysis. Από αυτά, το αντιγόνο πλακώδες καρκίνωμα 1 (SCCA1), επίσης γνωστή ως SERPINB3, εντοπίστηκε για πρώτη φορά σε πλακώδη ιστό καρκινώματος από τον τράχηλο της μήτρας των γυναικών. Ωστόσο, δεν είναι ιδιαίτερα γνωστή για την έκφραση SERPINB3 στο επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών ανθρώπου (EOC). Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε το λειτουργικό ρόλο του

SERPINB3

γονίδιο σε ανθρώπινα EOC χρησιμοποιώντας τα κοτόπουλα, το πιο σχετικό ζωικό μοντέλο. Σε 136 κοτόπουλα, EOC βρέθηκε σε 10 (7,4%).

SERPINB3

mRNA επάχθηκε σε καρκινικά, αλλά όχι φυσιολογικές ωοθήκες κοτόπουλου (P & lt? 0,01), και ήταν άφθονο μόνο στο αδενικό επιθήλιο των καρκινικών ωοθήκες των κοτόπουλων. Επιπλέον, αρκετές microRNAs, ειδικά

miR-101, miR-1668

και

miR-1681

ανακαλύφθηκαν να επηρεάσουν

SERPINB3

έκφρασης μέσω του 3′-UTR της, η οποία υποδηλώνει ότι μετα-μεταγραφική ρύθμιση επιρροές

SERPINB3

έκφραση σε κοτόπουλα. πρωτεΐνη SERPINB3 εντοπίστηκε κυρίως στο αδενικό επιθήλιο σε καρκινικούς ωοθήκες των κοτόπουλων, και ήταν άφθονο στον πυρήνα τόσο κοτόπουλο και ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές των ωοθηκών. Σε 109 ασθενείς ανθρώπους με EOC, 15 (13,8%), 66 (60.6%) και 28 (25,7%) ασθενείς έδειξαν ασθενή, μέτρια και ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3, αντίστοιχα. Ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3 ήταν ένας προγνωστικός παράγοντας για την αντίσταση λευκόχρυσου (προσαρμογή OR? Αναλογία πιθανοτήτων, 5,94? 95% του ορίου εμπιστοσύνης, 1,21 – 29,15), και για κακή επιβίωση χωρίς εξέλιξη της νόσου (PFS? Προσαρμοσμένο HR? Αναλογία κινδύνου, 2,07? 95 % CI? διάστημα εμπιστοσύνης, 1,03 – 4,41). Ως εκ τούτου, SERPINB3 μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην ωοθηκών καρκινογένεση και είναι ένα μυθιστόρημα βιοδείκτη για την πρόβλεψη της αντίστασης πλατίνας και κακή πρόγνωση για την επιβίωση σε ασθενείς με EOC

Παράθεση:. Lim W, Kim HS, Jeong W, Ahn SE , Kim J, Kim YB, et al. (2012) SERPINB3 στο κοτόπουλο Μοντέλο του καρκίνου των ωοθηκών: Ένα προγνωστικό παράγοντα για την Platinum Αντίσταση και την επιβίωση σε ασθενείς με επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 7 (11): e49869. doi: 10.1371 /journal.pone.0049869

Επιμέλεια: Wendong Huang, Beckman Ερευνητικό Ινστιτούτο του City of Hope, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16, Απριλίου, 2012? Αποδεκτές: 15 του Οκτ, 2012? Δημοσιεύθηκε: 21 Νοέμβρη του 2012

Copyright: © 2012 Lim et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα χρηματοδοτήθηκε από το πρόγραμμα World Class Πανεπιστήμιο (WCU) (R31-10056) και από τη βασική επιστήμη πρόγραμμα Ερευνών (2010 έως 0.013.078), μέσω του Εθνικού Ιδρύματος Ερευνών της Κορέας (NRF), που χρηματοδοτείται από το Υπουργείο Παιδείας, Επιστημών και Τεχνολογίας, και επίσης, με επιχορήγηση από το Next-Generation BioGreen 21 Πρόγραμμα (Αρ PJ008142), Αγροτικής Ανάπτυξης Διοίκησης, Δημοκρατία της Κορέας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC) είναι το 7

ου κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους στις γυναίκες σε όλο τον κόσμο [1], [2]. Η κλινική σημασία έχει αυξηθεί σε μεγαλύτερο βαθμό, επειδή δεν υπάρχουν σχετικές συμπτώματα και δεν αποτελεσματικές μεθόδους ελέγχου για την έγκαιρη διάγνωση [3], η οποία οδηγεί σε Διεθνή Ομοσπονδία Γυναικολόγος (FIGO) Στάδια ΙΙΙ-IV της νόσου κατά τη στιγμή της διάγνωσης σε περισσότερες από 75 % των ασθενών με EOC [4]. Αν και σε πρώιμα στάδια της νόσου, αλλά και τη διαφοροποίηση, την ευαισθησία πλατίνα και βέλτιστη χειρουργική κυτταρομειωτική έχουν προταθεί ως ευνοϊκές προγνωστικούς παράγοντες, αλλά η αξία τους σε πρόγνωση δεν έχει βελτιωθεί σημαντικά [5]. Ως εκ τούτου, η έγκαιρη ανίχνευση του ΕΓΚ και πρόβλεψη της πρόγνωσης για την επιβίωση των ασθενών με χρήση ειδικών βιοδεικτών αναγνωρίζεται όλο και περισσότερο ως καλύτερη προσέγγιση για να ξεπεραστούν αυτοί οι περιορισμοί. Για το σκοπό αυτό, έχουν γενετικά τροποποιημένο μοντέλα τρωκτικών έχουν αναπτυχθεί για να αποσαφηνιστεί η αιτιολογία και παθογένεια της EOC. Ωστόσο, η τεχνητή φύση των επαγόμενων όγκων σε ποντίκια περιορίζει την κλινική σχετικότητα τους [6], [7], [8]. Εν τω μεταξύ, η τοποθέτηση κότα είναι γνωστή ως το μόνο ζώο που αναπτύσσεται αυθόρμητα όγκους από επιφανειακό επιθήλιο των ωοθηκών, και η τοποθέτηση κότα είναι μια μοναδική και κατάλληλο μοντέλο για ανάπτυξη νέων βιολογικών δεικτών και αντικαρκινικά φάρμακα για ασθενείς με EOC [6], [7 ], [9].

αναστολέας Serpin πεπτιδάσης, clade Β, μέλος 3

(

SERPINB3

) είναι μέλος της σερπίνης υπεροικογένεια των αναστολέων πρωτεάσης που εμπλέκονται στην απόπτωση, ανοσοαπόκριση, πήξη του αίματος, κυτταρική μετανάστευση και διεισδυτικότητα των κυττάρων [10], [11]. Είναι επίσης γνωστό ως αντιγόνο πλακώδους κυττάρου καρκινώματος 1 (SCCA1) ανακαλύφθηκε για πρώτη φορά σε πλακώδες καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας [12]. Στους ανθρώπους, το γονίδιο για

SERPINB3

βρίσκεται στο χρωμόσωμα 18q21.3, και αναστέλλει παπαΐνη πρωτεασών λυσοσωμικής κυστεϊνης, η καθεψίνη Κ (CTSK), CTSL και CTSS [10], [13]. Προηγουμένως, εντοπίσαμε

SERPINB3

σε κοτόπουλα και προσδιορίζεται ότι έχει μέτρια ομολογία με την πρωτεΐνη ορθόλογο της θηλαστικών (περίπου 36-47%). Η γρίπη SERPINB3 εκφράζεται στη σάλπιγγα σε απόκριση προς οιστρογόνο σε ένα ιστών και κυττάρων-ειδικό τρόπο [14]. Παρ ‘όλα αυτά, λίγα είναι γνωστά για την έκφραση και την προγνωστική αξία του

SERPINB3

είτε σε κοτόπουλα ή ανθρώπους με EOC.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μικρές και μη-κωδικοποίησης RNA των 18-23 νουκλεοτιδίων μήκος. Εκείνοι ρυθμίζουν την γονιδιακή έκφραση μετα-μεταγραφικά και είναι επίσης σε θέση να τροποποιήσει κύτταρο μοίρα ελέγχοντας μετάφραση των mRNA στόχου σε διάφορους ιστούς και κυτταρικούς τύπους. Ως εκ τούτου, miRNAs παίζουν σημαντικό ρόλο σε ένα διάφορες βιολογικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της ανάπτυξης σπονδυλωτού, την ανάπτυξη, τη διαφοροποίηση και την ογκογένεση με τη ρύθμιση της έκφρασης γονιδίων [15], [16], [17]. Ωστόσο, δεν υπάρχουν δημοσιευμένα αποτελέσματα της έρευνας miRNA που σχετίζονται με SERPINB3 σε κοτόπουλα. Προκειμένου να προσδιοριστεί ο ρόλος του SERPINB3 ως νέο βιοδείκτη για την EOC, συγκρίναμε την κατανομή και τον εντοπισμό των SERPINB3 μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών ωοθήκες των ωοπαραγωγών ορνίθων, και στη συνέχεια πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία επικύρωσης στόχο miRNA να διερευνήσει μετα-μεταγραφική ρύθμιση του

SERPINB3

έκφρασης. Μετά από αυτό συγκρίναμε την έκφραση SERPINB3 μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών από ωοτόκες όρνιθες, ανθρώπινες κυτταρικές σειρές EOC (OVCAR-3 και SKOV-3) και μια ανθρώπινη τερατοκαρκινώματος κυτταρική γραμμή ωοθηκών (ΡΑ-1). Τέλος, ερευνήσαμε τις διαγνωστικές και προγνωστικές αξίες της έκφρασης SERPINB3 σε ασθενείς με EOC.

Αποτελέσματα

Έκφραση και εντοπισμός των SERPINB3 mRNA και πρωτεΐνης σε φυσιολογικού και καρκινικού ωοθήκες των ωοπαραγωγών ορνίθων

συγκρίσεις της έκφρασης του

SERPINB3

mRNA μεταξύ των φυσιολογικών και καρκινικών ωοθήκες των ωοτόκων ορνίθων με RT-PCR αποκάλυψε ότι εκφράστηκε μόνο σε καρκινικά ωοθήκες (Εικ. 1Α και 1Β). Επιπλέον, ποσοτική RT-PCR έδειξε ότι

SERPINB3

mRNA προκλήθηκε μόνο σε καρκινικά ωοθήκες (

P

& lt? 0,01? Εικ. 1Γ). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι

SERPINB3

είναι ένας βιολογικός δείκτης για τον καρκίνο των ωοθηκών επιθήλια που προέρχονται στις όρνιθες ωοπαραγωγής.

ανάλυση RT-PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση προτύπων cDNA από κοτόπουλο

SERPINB3

και

GAPDH

-ειδικών εκκινητών. [Α] Οι διαδρομές 1 έως 4 δείχνουν τέσσερεις διαφορετικές φυσιολογικές ωοθήκες και το Ν είναι αρνητικό έλεγχο. [B] διαδρομές 1-10 εμφανίζουν 10 διαφορετικές καρκινικές ωοθήκες. ανάλυση [C] Ποσοτική RT-PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση προτύπων cDNA από φυσιολογικά και καρκινικά ωοθήκες των ωοπαραγωγών ορνίθων (μέση τιμή ± SEM? P & lt? 0,01).

Η

In situ υβριδισμού ανάλυση

έδειξαν ότι το

SERPINB3

mRNA ήταν άφθονο στον αδενικό επιθήλιο των καρκινικών ωοθήκες των ωοτόκων ορνίθων (Εικ. 2Α), αλλά δεν ήταν ανιχνεύσιμη στο στρώμα, τα αιμοφόρα αγγεία ή ανοσοκύτταρα καρκινικών ωοθήκες. Σε συμφωνία με αυτά τα αποτελέσματα, πρωτεΐνη SERPINB3 ανιχνεύθηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα των αδενικό επιθήλιο σε καρκινικά, αλλά όχι φυσιολογικές ωοθήκες των ωοτόκων ορνίθων (Εικ. 2Β). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι SERPINB3 είναι ειδικά εκφράζεται μόνο στο αδενικό επιθήλιο των καρκινικών ωοθήκες των ωοπαραγωγών ορνίθων.

[Α]

In situ υβριδισμού

αναλύσεις

SERPINB3

mRNA. Διατομές των φυσιολογικών και καρκινικών ωοθήκες από τις όρνιθες ωοπαραγωγής σε υβριδισμό με νόημα ή αντι-νόημα κοτόπουλου

SERPINB3

ανιχνευτών cRNA. [Β] Η ανοσοϊστοχημική έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3: Για αρνητικό έλεγχο, το πρωτογενές αντίσωμα υποκαταστάθηκε με καθαρισμένο μη-άνοση IgG ποντικού. F, θυλάκιο? GE, αδενικό επιθήλιο? S, στρώμα?

Κλίμακα bar

αντιπροσωπεύει 200 ​​μm (τα πρώτα στήλες πάνελ και την αίσθηση) ή 50 μm (το δεύτερο στήλες πάνελ).

Η

Μετα-μεταγραφική ρύθμιση των microRNAs που επηρεάζουν SERPINB3

Για να διερευνηθεί η πιθανότητα ότι em

SERPINB3

έκφραση ρυθμίζεται σε μετα-μεταγραφικό επίπεδο από miRNAs, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμή επικύρωσης στόχο miRNA. Ανάλυση των πιθανών θέσεων πρόσδεσης miRNA εντός της 3′-UTR για

SERPINB3

χρησιμοποιώντας μια βάση δεδομένων miRNA πρόβλεψη στόχου (miRDB? https://mirdb.org/miRDB/) αποκάλυψε τρία θεωρούμενη θέση πρόσδεσης για το

miR -101, miR-1668

και

miR-1681

(Εικόνα 3Α). Ως εκ τούτου, εμείς προσδιοριστεί εάν αυτά τα τρία miRNAs επηρεασμένη

SERPINB3

έκφρασης μέσω του 3′-UTR της. Ένα θραύσμα του

SERPINB3

3′-UTR φιλοξενούν θέσεις σύνδεσης για τις miRNAs κλωνοποιήθηκε καθοδικά του πράσινου πλαισίου ανάγνωσης φθορίζουσα πρωτεΐνη (GFP), δημιουργώντας έτσι ένα φθορίζον ανταποκριτή για λειτουργία της περιοχής 3′-UTR. Επιπλέον, SERPINB3 3′-UTR μεταλλάκτες συμπεριλαμβανομένων μεταλλαγμένες θέσεις πρόσδεσης για

miR-101

,

miR-1668

και

miR-1681

επίσης παράγεται από σημειακή μετάλλαξη στη προκειμένου να επιβεβαιωθεί η διαμόρφωση της έκφρασης eGFP από κάθε miRNA (Εικόνα 3Β). Μετά συν-επιμόλυνση του EGFP-

SERPINB3

3′-UTR και DsRed-miRNA, η ένταση της έκφρασης GFP και το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν GFP-αναλύθηκαν με μικροσκοπία φθορισμού και ΡΑΟδ (Εικόνα 3C και 3D). Με την παρουσία του

miR-101, miR-1668

και

miR-1681

, η ένταση και το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν GFP (44,8% στον έλεγχο έναντι 27,5% το

miR-101

, 24,2% στο

miR-1668

, 14,8% στο

miR-1681

) μειώθηκε (p & lt? 0,01). Ωστόσο, όταν υπήρχε συν-επιμόλυνση των EGFP-

SERPINB3

3′-UTR μεταλλάξεις, την ένταση και το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν GFP-δεν άλλαξαν (14,8% στον έλεγχο έναντι 16,1% σε

miR -101

, 13,5% στο

miR-1668

, 14,3% στο

miR-1681

) ως μάρτυρα (Εικόνα 3D). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι αυτά τα τρία miRNAs προσδένονται άμεσα στο

SERPINB3

απομαγνητοφώνηση και τη ρύθμιση

SERPINB3

έκφραση-μεταγραφικά μετά γονίδιο.

[Α] Διάγραμμα του

ΜΙΚ 101, miR-1668

και

miR-1681

θέσεις πρόσδεσης στο

SERPINB3

3′-UTR. [B] Ο φορέας έκφρασης χάρτες για eGFP με το

SERPINB3

3′-UTR και μεταλλαγμένα

SERPINB3

3′-UTR και Ds-Red με κάθε miRNA. Η άγριου τύπου (WT) και μεταλλάξεις του 3′-UTR του

SERPINB3

μεταγραφής υποκλωνοποιήθηκαν μεταξύ του γονιδίου eGFP και την ουρά πολυΑ για να δημιουργήσει το κατασκεύασμα σύντηξης της GFP μεταγραφής ακόλουθο στόχου miRNA 3′ UTR (επάνω και μεσαίο πλαίσιο) και η έκφραση των miRNAs φορέα (ροϋΝΑ-eGFP-3’UTR) σχεδιάστηκε για να συν-express DsRed και κάθε miRNA (ροϋΝΑ-DsRed-miRNA) (κάτω πίνακας). [C] Μετά την συν-επιμόλυνση του pcDNA-eGFP-3’UTR για το

SERPINB3

απομαγνητοφώνηση και pcDNA-DsRed-miRNA για το

miR-101, miR-1668

και

miR-1681

, τα σήματα φθορισμού της GFP και DsRed ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φθορισμού. [D] Ο ρυθμός αναστολής της έκφρασης eGFP από miRNA διαφοροποίηση ήταν υπολογίζονται ενεργοποιημένων με φθορισμό κυττάρων (FACS). Στερεά μπάρες αντιπροσωπεύουν WT του

SERPINB3

3′-UTR και άδειο μπάρες δείχνουν το μεταλλαγμένο του

SERPINB3

3′-UTR για κάθε miRNA. Οι ράβδοι σφάλματος δείχνουν το τυπικό σφάλμα του τριπλούν αναλύσεις. Οι αστερίσκοι υποδηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές μεταξύ WT εναντίον μεταλλάξεις (*** P & lt? 0.001).

Η

ανοσοφθορισμού Ανίχνευση SERPINB3 πρωτεΐνης στο κοτόπουλο και τα ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών

Για να συγκρίνετε το πρότυπα έκφρασης πρωτεΐνης SERPINB3 μεταξύ κοτόπουλο και ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών, πραγματοποιήσαμε ανάλυση ανοσοφθορισμού. πρωτεΐνη SERPINB3 σπάνια ανιχνεύεται σε φυσιολογικά κύτταρα, αλλά άφθονα στον πυρήνα των ωοθηκών καρκινικά κύτταρα των ωοτόκων ορνίθων (Σχ. 4Α). Παρομοίως, πρωτεΐνη SERPINB3 ήταν άφθονο στον πυρήνα τριών ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών γραμμών ωοθηκών, κύτταρα OVCAR-3, SKOV-3 και ΡΑ-1 (Σχ. 4Β).

[Α] πρωτεΐνη SERPINB3 σπανίως ανιχνεύεται σε φυσιολογικά κύτταρα, αλλά άφθονα στους πυρήνες του κοτόπουλου καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. [B] πρωτεΐνη SERPINB3 εκφράστηκε σε πυρήνες ανθρώπινου OVCAR-3, SKOV-3 και ΡΑ-1 κύτταρα. πυρήνες κυττάρων χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ (μπλε). Όλες οι εικόνες συλλήφθηκαν σε 40Χ μεγέθυνση του αντικειμενικού φακού.

Η

Έκφραση SERPINB3 Πρωτεΐνη συνδέεται με Platinum Αντίσταση και την επιβίωση σε ασθενείς με επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών

Ένα σύνολο 109 ασθενών με διάμεση ηλικία 52 χρόνια (εύρος, 23 έως 82 ετών) συμμετείχαν στην παρούσα μελέτη. Από όλους τους ασθενείς, 38 (34,9%) ήταν σε ΦΥΓΩ σταδίου Ι, 20 (18,3%) στη φάση ΙΙ, και 51 (46,8%) στη φάση III. Βαθμός όγκου ήταν G1 σε 21 (19,3%), G2 σε 41 (37,6%) και G3 σε 47 ασθενείς (43,1%). Ιστολογικά, 62 όγκοι (57%) είχαν διαγνωστεί με ορώδες καρκίνωμα, 17 (15,6%) με βλεννώδες καρκίνωμα, 12 (11%) με καρκίνωμα σαφή κυττάρου, 9 (8,3%) με καρκίνωμα ενδομητριοειδές, 4 (3,6%) με αδιαφοροποίητο καρκίνωμα και 3 (2,7%) με ενδομητριοειδές και σαφείς καρκίνωμα, και 2 (1,8%) με ορώδες και σαφείς καρκίνωμα. Βέλτιστη κυτταρομειωτική χειρουργική διεξήχθη σε 65 ασθενείς (59,6%), ενώ 44 (40,4%) υποβλήθηκαν σε υποβέλτιστες κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση. Ενενήντα ασθενείς (82,6%) έλαβαν συμπληρωματική χημειοθεραπεία μετά από χειρουργική επέμβαση, και 84 (93,3%) έλαβαν πακλιταξέλη /καρβοπλατίνη ενώ paclitaxel /σισπλατίνη χορηγήθηκε σε 6 (6,7%) ασθενείς. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης ανοσοϊστοχημεία αποκάλυψε ότι η πρωτεΐνη SERPINB3 εντοπίστηκε κυρίως στο αδενικό επιθήλιο και για το μοντέλο των ωοπαραγωγών ορνίθων, και 15 (13,8%), 66 (60,6%) και 28 (25,7%) ασθενείς είχαν αδύναμα, μέτρια και ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3 σε αδενικό επιθήλιο των ωοθηκών, αντίστοιχα (Εικ. 5).

(α και α ‘) Ασθενής, (b και b’) και μέτρια (c και c ‘) ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3 ανιχνεύθηκε σε γυναίκες με επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών. είτε δεν υπήρχε έκφραση πολύ αδύναμη έκφραση SERPINB3 σε φυσιολογικές ωοθήκες, ενώ SERPINB3 protine ήταν εύκολα ανιχνεύσιμη σε καρκινικούς ωοθήκες από τις γυναίκες. Ο αρνητικός έλεγχος που χρησιμοποιήθηκε ήταν IgG ποντικού αντί του πρωτογενούς αντισώματος.

Κλίμακα bar

αντιπροσωπεύει 200 ​​μm (τα πρώτα οριζόντια πάνελ και IgG) ή 50 μm (τη δεύτερη οριζόντια πάνελ).

Η

Ο διάμεσος χρόνος έως παρακολούθησης ήταν 69,2 μήνες (εύρος , 2-88 μήνες), και 70 ασθενείς (77,8%) έδειξε ευαισθησία λευκόχρυσος ενώ 20 (22,2%) έδειξε αντίσταση λευκόχρυσου. Ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3 ήταν περισσότερο συχνή στους ασθενείς με αντίσταση από λευκόχρυσο (n = 11, 55%) σε σχέση με εκείνους με ευαισθησία πλατίνα (n = 17, 24,3%) (

P

= 0,01). Ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3 ήταν επίσης ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την αντίσταση από λευκόχρυσο μετά τις προσαρμογές χρησιμοποιώντας κλινική-παθολογική παράγοντες (προσαρμογή OR? Αναλογία πιθανοτήτων, 5,94? 95% CI, 1,21 – 29,15) (Πίνακας 1). Ισχυρή έκφραση SERPINB3 σχετίστηκε με μικρότερη PFS από αδύναμη ή μέτρια έκφραση (μέση PFS ήταν 25,7 έναντι 47,8 μήνες?

P

= 0,03) παρά καμία διαφορά στο λειτουργικό σύστημα (OS σημαίνει? Συνολική επιβίωση, 49.5 vs . 60,9 μήνες?

P

& gt? 0,05). Επιπλέον, SERPINB3 ήταν κακό προγνωστικό παράγοντα για την PFS (επιβίωση χωρίς εξέλιξη) χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική αναλογικής ανάλυσης κινδύνου του Cox (προσαρμοσμένη HR? Αναλογία κινδύνου, 2,07? 95% CI? Διάστημα εμπιστοσύνης, 1,03 – 4,41? Πίνακας 2), ενώ δεν υπήρχε προγνωστική αξία παράγοντας για OS εκτός αναντίστοιχο cytoreduction (adjusted HR, 6.83? 95% CI, 2,34 έως 20,02).

Η

Συζήτηση

Η θέσπιση κότα είναι ένα πολύ γνωστό μοντέλο για την έρευνα των ωοθηκών καρκινογένεση και για την ανάπτυξη αντικαρκινικών παραγόντων για τις γυναίκες λόγω της ομοιότητας σε αυθόρμητα καρκινώματα που προκύπτουν από επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών [18]. Ιστολογία, μετάσταση και τα στάδια του ΕΓΚ στις όρνιθες ωοπαραγωγής είναι παρόμοιες με εκείνες στον άνθρωπο που δείχνει τη σκοπιμότητα της χρησιμοποιώντας το μοντέλο των ωοπαραγωγών ορνίθων για τη διερεύνηση των ωοθηκών καρκινογένεση [6]. Επιπλέον, αρκετοί βιοδείκτες, συμπεριλαμβανομένων CA-125, συνήθως εκφράζονται και να χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση πρώιμο στάδιο της νόσου και την παρακολούθηση θεραπευτικής απόκρισης σε γυναίκες με EOC και είναι εγκάρσια-αντιδρώσα με βιοδείκτες για EOC στις όρνιθες ωοπαραγωγής [18], [19].

σε γενικές γραμμές, ένας αριθμός πολύπλοκων αδενικού αρχιτεκτονικές βρίσκονται συνήθως σε διάφορα καρκινώματα που προκύπτουν σε διάφορα όργανα όπως στομάχι, των βρόγχων, gladder, προστάτη, όρχεις και ωοθήκης, λόγω της πανταχού παρούσα φύση των αδένων. Ειδικά, στις ωοθήκες και των δύο πτηνών και θηλαστικών ειδών, αυτές οι αδενικές δομές είναι κυρίως σε όγκους ενδομητριοειδές τύπου με διάφορα χαρακτηριστικά, όπως η πυρηνική ατυπία, ηθμοειδή εστίες και ατρησία των ωοθυλακίων στρωματικών. Επιπλέον, οι αδένες των αδενοκαρκινωμάτων σε γυναίκες αποτελείται από ένα μόνο στρώμα επιθηλιακών κυττάρων που υφίστανται μίτωση και αιχμηρά αυλού περιθωρίων [6]. προκαταρκτικά αποτελέσματα μας έδειξαν επίσης ότι το αδενικό αρχιτεκτονική στην πρωτογενή επιθηλιακά καρκινώματα των ωοπαραγωγών ορνίθων ωοθηκών αποτελείται από ένα λαβύρινθο των αδένων ή σαν δαντέλα θηλώδη πτυσσόμενο με μεγάλους plieomorphic πυρήνες που περιέχουν μιτωτικά σχήματα όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [6]. Η παρούσα μελέτη να βρει ένα νέο προγνωστικό βιοδείκτη για ασθενείς με EOC χρησιμοποιώντας το μοντέλο για τον κότα προσδιορίζονται υψηλή έκφραση του

SERPINB3

γονιδίου σε αδενικό επιθήλιο των καρκινικών ωοθήκες σε σύγκριση με εκείνη σε φυσιολογικές ωοθήκες από κότες. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι SERPINB3 μπορεί να σχετίζεται με ωοθηκικό καρκινογένεση μέσω της ενεργοποίησης των μεταγραφικών παραγόντων ή της αναστολής της απόπτωσης. Τα αποτελέσματά μας αποκάλυψε, επίσης, ότι

SERPINB3

γονιδιακής έκφρασης είναι μετα-μεταγραφικά ρυθμίζεται από διάφορους miRNAs ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη της καρκινογένεσης των ωοθηκών κοτόπουλο. Επιπλέον, η ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης SERPINB3 σχετιζόταν με αντίσταση από λευκόχρυσο και μικρότερη επιβίωση χωρίς εξέλιξη σε ασθενείς με EOC. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν την υπόθεση μας ότι SERPINB3 παίζει ρόλο στην ανάπτυξη του όγκου και τον πολλαπλασιασμό από επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών.

Αν και ο λειτουργικός ρόλος του

SERPINB3

γονιδίου σε EOC βιολογία δεν είναι γνωστή, τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης δείχνουν σαφώς ότι

SERPINB3

συνδέεται με αδενικό μορφογένεση επηρεάζουν ωοθηκών καρκινογένεση και στις δύο όρνιθες και οι γυναίκες με EOC. Σε αμφότερες τις γυναίκες και όρνιθες, SERPINB3 εκφράζεται στο αδενικό επιθήλιο, αλλά υπάρχει μικρή ή καθόλου έκφραση SERPINB3 σε άλλους ιστούς και τα κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων στρώμα και τα αιμοφόρα αγγεία της ωοθήκης. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η πρωτεΐνη SERPINB3 μπορεί να ενεργοποιήσει παράγοντες μεταγραφής ή αναστέλλουν την απόπτωση οδηγεί στην ανάπτυξη του ΕΓΚ στις όρνιθες ωοπαραγωγής και τις γυναίκες. Σε προηγούμενες μελέτες, SERPINB3 βρέθηκε να ρυθμίσει προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο από διαφορετικούς μηχανισμούς σε διάφορους καρκίνους και η υπερ-έκφραση της ήταν χαρακτηριστική των καρκινικών κυττάρων επιθηλιακής προέλευσης. Επιπλέον, SERPINB3 εξασθενεί απόπτωση που διαμεσολαβείται από αντικαρκινικά φάρμακα για ΝΚ κύτταρα και αναστέλλοντας την απελευθέρωση κυτοχρώματος c από τα μιτοχόνδρια [20], [21], [22] Επιπλέον, αδενικό μορφογένεση συνδέονται με

SERPINB3

μπορεί να συνεισφέρει σε επιθηλιακό-μεσεγχυματικών μετάβασης, η οποία μπορεί να απορρύθμιση της διαδικασίας συγκόλλησης για να επιτρέψει τη μετάσταση και την αύξηση του δυναμικού διεισδυτικότητα των καρκινικών κυττάρων σε γυναίκες [23].

ισχυρή έκφραση της SERPINB3 συσχετίστηκε επίσης με αντίσταση από λευκόχρυσο και μικρότερες PFS σε ασθενείς με EOC. Ο μηχανισμός που είναι υπεύθυνος για την ανάπτυξη των χημειοαντίσταση και ένα δυνητικό ρόλο SERPINB3 δεν έχει τεκμηριωθεί σε ΕΓΚ. Παρ ‘όλα αυτά, δυσλειτουργική διαπερατοποίηση των λυσοσωμάτων συμβάλλει στην ανάπτυξη του χημειοαντίσταση σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [24], και SERPINB3 προσδίδει αντοχή στο φάρμακο απόπτωση που επάγεται με αναστολή πρωτεασών καθεψίνης λυσοσωμικής σε καρκινικά κύτταρα [25]. Έτσι, SERPINB3 μπορεί να συνεισφέρει στην αντίσταση από λευκόχρυσο εξής προκαλούμενη από χημειοθεραπεία λυσοσωμικής αποσταθεροποίηση. Αν και ισχυρή έκφραση της SERPINB3 συσχετίστηκε με μικρότερη PFS, είναι πιθανό ότι η αντίσταση λευκόχρυσου που συνδέονται με SERPINB3 οδηγεί σε μικρότερη PFS. Το γεγονός αυτό υποστηρίζεται από μια προηγούμενη μελέτη στην οποία βρέθηκε η έκφραση SERPINB3 να σχετίζεται με κακή επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού [26].

SERPINB3 ή SCCA1 έχει διερευνηθεί σε διάφορους τύπους ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα [27 ], [28], [29], [30], αλλά έχει μόνο προταθεί ως προγνωστικός παράγοντας για τον καρκίνο του μαστού και του πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα [26], [31]. Για τις γνώσεις μας, τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης είναι σημαντικά στο να είναι ο πρώτος για να καθορίσει την πιθανότητα ενός λειτουργικού ρόλου για SERPINB3 στο ΕΓΚ των ωοπαραγωγών ορνίθων. Αυτά τα αποτελέσματα επικυρώνουν τη θέσπιση κότα ως μοντέλο για την έρευνα σχετικά με τα ανθρώπινα ΕΓΚ. Επιπλέον, τα αποτελέσματα υποδεικνύουν έντονα ότι SERPINB3 έχει σημαντικές λειτουργίες στην ανάπτυξη του ΕΓΚ στις όρνιθες ωοπαραγωγής και ότι είναι ένα μυθιστόρημα βιολογικός δείκτης για την πρόβλεψη της αντίστασης πλατίνας και φτωχών PFS σε ασθενείς με EOC. Η υπόθεσή μας που SERPINB3 έχει ένα συγκεκριμένο ρόλο στην ανάπτυξη του ανθρώπινου ΕΓΚ απαιτεί περαιτέρω αξιολόγηση σε κλινικά προοπτικές μελέτες.

Υλικά και Μέθοδοι

πειραματόζωα και φροντίδα των ζώων και χρήση

Η πειραματική χρήση των κοτόπουλων στην παρούσα μελέτη εγκρίθηκε από το Ινστιτούτο Εργαστήριο ζώων Πόρων, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ. Λευκό Λιβόρνο (WL) όρνιθες ωοπαραγωγής αντιμετωπίστηκαν σύμφωνα με τα εγκεκριμένα πρότυπα για τη λειτουργία του Πανεπιστημίου Animal Farm, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ, Κορέα. Όλες οι όρνιθες είχαν ελεύθερη

κατά βούληση

πρόσβαση σε τροφή και νερό.

Τα δείγματα ιστών σε κοτόπουλο Μοντέλο

Ένα σύνολο 136 ωοτόκων ορνίθων (88 άνω των 36 μηνών και 48 άνω των 24 μηνών της ηλικίας), η οποία είχε σταματήσει τη γέννηση των αυγών, υποβλήθηκαν σε ευθανασία για βιοψία και συλλογή των καρκινικών (n = 10) ωοθήκες. Ως μάρτυρας, η κανονική (n = 5) ωοθήκες συλλέχθηκαν από αυγό-ωοπαραγωγής του παρόμοιας ηλικίας. Εξετάσαμε τα στάδια του όγκου σε 10 όρνιθες με καρκινικές ωοθήκες βασίζεται σε χαρακτηριστικά του καρκίνου των ωοθηκών κοτόπουλου [6]. Τρεις κότες είχε Σταδίου III EOC ως καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών είχε κάνει μετάσταση στην επιφάνεια γαστρεντερικής οδού και του ήπατος με άφθονη ασκίτη στην κοιλιακή κοιλότητα. Σε πέντε κότες, οι όγκοι τους είχαν μετάσταση σε απομακρυσμένα όργανα όπως το ήπαρ παρέγχυμα, του πνεύμονα, του γαστρεντερικού σωλήνα και σάλπιγγα με ακατάσχετη ασκίτη που είναι ενδεικτικό της φάσης IV EOC. Τα άλλα δύο όρνιθες δεν είχαν όγκους σε οποιαδήποτε άλλα όργανα? Ως εκ τούτου, οι όγκοι τους ωοθηκών ήταν σταδίου Ι ΕΓΚ. Υποσύνολα αυτών των δειγμάτων καθηλώθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για περαιτέρω αναλύσεις. Μετά από 24 ώρες, σταθερό ιστοί αλλάχθηκαν σε 70% αιθανόλη για 24 ώρες και στη συνέχεια αφυδατώθηκαν και εμπεδώθηκαν σε Paraplast Plus (Leica Microsystems, Wetzlar, Germany). Κοτόπουλα με EOC ταξινομήθηκαν με βάση την κυτταρική υποτύπους και τα πρότυπα της κυτταρικής διαφοροποίησης τους με αναφορά στην ανθρώπινη κακοήθη τύπους όγκων ωοθήκης [6].

Απομόνωση RNA

Το συνολικό κυτταρικό RNA απομονώθηκε από κατεψυγμένα χρησιμοποιώντας ιστούς αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Η ποσότητα και η ποιότητα του ολικού RNA προσδιορίστηκε με φασματομετρία και μετουσιωτική ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης, αντίστοιχα.

ημι-ποσοτική RT-PCR Ανάλυση

Η έκφραση του

SERPINB3

mRNA σε φυσιολογικών και καρκινικών ωοθήκες των ορνίθων εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας ημι-ποσοτική RT-PCR όπως περιγράφεται προηγουμένως [32]. Συμπληρωματικό DNA (cDNA) συντέθηκε από ολικό κυτταρικό RNA (2 μα) χρησιμοποιώντας τυχαία εξαμερή (Invitrogen, Carlsbad, CA) και ολίγο (dT) αρχικά τεμάχια και AccuPower® RT πρόμιγμα (Bioneer, Daejeon, Κορέα). Το cDNA αραιώθηκε (1:10) σε αποστειρωμένο νερό πριν από τη χρήση σε PCR. Μετά την PCR, ίσες ποσότητες προϊόντος αντίδρασης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας 1% πηκτή αγαρόζης, και τα προϊόντα της PCR οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας χρώση βρωμιούχου αιθιδίου.

Ποσοτική RT-PCR Ανάλυση

επίπεδα έκφρασης γονιδίων μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας SYBR® Green (Sigma, St. Louis, MO, USA) και ένα StepOnePlus ™ Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). [33] Το

GAPDH

γονιδίου ταυτόχρονα αναλύεται ως έλεγχος και χρησιμοποιήθηκε για ομαλοποίηση να λαμβάνουν υπόψη μεταβολές στις φόρτωση. Κάθε γονίδιο στόχος και

GAPDH

αναλύθηκε εις τριπλούν. βαφή ROX (Invitrogen) χρησιμοποιήθηκε ως ένας αρνητικός έλεγχος για τις μετρήσεις φθορισμού. Αλληλουχία-ειδικά προϊόντα ταυτοποιήθηκαν με δημιουργία μιας καμπύλης τήξης στην οποία η C

T τιμή παριστάνεται ο αριθμός κύκλου κατά το οποίο ένα σήμα φθορισμού ήταν στατιστικά μεγαλύτερο από το υπόβαθρο, και η σχετική γονιδιακή έκφραση προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας το

-ΔΔCT μέθοδος 2 [34]. Για τον έλεγχο, η σχετική ποσοτικοποίηση της έκφρασης του γονιδίου κανονικοποιήθηκε στο C

T της ωοθήκης ελέγχου.

in situ υβριδοποίησης Ανάλυση

Για ανιχνευτές υβριδισμού, τα προϊόντα PCR παράχθηκαν και ήταν πήκτωμα εκχυλίζεται και στη συνέχεια κλωνοποιήθηκε σε φορέα ρΟΕΜ-Τ (Promega) όπως περιγράφεται προηγουμένως [35]. Μετά την επαλήθευση των αλληλουχιών, πλασμίδια που περιέχουν τις σωστές αλληλουχίες γονιδίων ενισχύθηκαν με Τ7 και SP6-ειδικούς εκκινητές τότε διγοξιγενίνη (DIG) -επισημασμένο RNA ανιχνευτές μεταγράφηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ επισήμανσης DIG RNA (Roche Applied Science, Indianapolis, ΙΝ). Μετά τον υβριδισμό και το κλείδωμα, οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύκτα με αντι-DIG αντίσωμα προβάτου συζευγμένο με αλκαλική φωσφατάση (Roche). Το σήμα οπτικοποιήθηκε με έκθεση σε ένα διάλυμα που περιέχει 0.4 mM 5-βρωμο-4-χλωρο-3-ινδολύλιο, 0,4 mM nitroblue τετραζολίου, και 2 mM λεβαμισόλη (Sigma).

microRNA Δοκιμασία Target Επικύρωση

Η 3′-UTR του

SERPINB3

κλωνοποιήθηκε και επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση. Το 3′-UTR υποκλωνοποιήθηκε μεταξύ του γονιδίου eGFP και της βόειας αυξητικής ορμόνης (bGH) πολυ-Α ουρά στο pcDNA3eGFP (Clontech, Mountain View, CA) για να δημιουργηθεί το στόχο eGFP-miRNA 3′-UTR (ροϋΝΑ-eGFP-3 «-UTR) κατασκευές σύντηξης. Επιπλέον, μεταλλάξεις του SERPINB3 3′-UTR για κάθε miRNA δημιουργήθηκαν με μετάλλαξη σημείου και στη συνέχεια κλωνοποιήθηκε εντός του ίδιου τύπου πλασμίδια. Για τη δοκιμασία ανταποκριτή διπλής φθορισμού, οι κατασκευές σύντηξης που περιέχει το γονίδιο DsRed και είτε

miR-101

,

miR-1668

και

miR-1681

είχαν σχεδιαστεί για να συν -expressed υπό τον έλεγχο του υποκινητή CMV (ροϋΝΑ-DsRed-miRNA). Το pcDNA-eGFP-3′-UTR και ροϋΝΑ-DsRed-miRNA (4 μg) συν-επιμολύνεται σε κύτταρα 293FT χρησιμοποιώντας τη μέθοδο φωσφορικού ασβεστίου. Όταν η DsRed-miRNA εκφράζεται και συνδέεται στη θέση-στόχο της 3′-UTR κατάντη της μεταγραφής GFP, πράσινη ένταση φθορισμού μειώνεται λόγω της υποβάθμισης της μεταγραφής GFP. Στις 48 ώρες μετά την επιμόλυνση, διπλή φθορισμός ανιχνεύθηκε με μικροσκοπία φθορισμού και υπολογίζεται με κυτταρομετρία ροής FACSCalibur (BD Biosciences). Για κυτταρομετρία ροής, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό FlowJo (Tree αστεριών Inc., Ashland, OR).

Κυτταροκαλλιέργεια

Ένα σύνολο πέντε κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων τρεις ανθρώπινες επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών και δύο κυττάρων των ωοθηκών κοτόπουλου πρωτογενή, χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές γραμμές ωοθηκών (OVCAR-3, SKOV-3, και ΡΑ-1) ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) και καλλιεργήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του προμηθευτή. Δύο διαφορετικά κύτταρα κοτόπουλου επιφάνεια των ωοθηκών επιθηλιακής (φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων) απομονώθηκαν και καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως με ορισμένες τροποποιήσεις [36], [37].

μικροσκοπία ανοσοφθορισμού για την ανίχνευση της ενεργοποίησης SERPINB3

ωοθηκών καρκινικά κύτταρα και φυσιολογικά κύτταρα των ωοθηκών που λαμβάνονται από ωοτόκες όρνιθες, και τρεις ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές των ωοθηκών, OVCAR-3, SKOV-3, και ΡΑ-1, εξετάστηκαν για σχήματα έκφρασης SERPINB3 με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Κάθε τύπος κυττάρου σπάρθηκε επάνω σε πλάκες θαλάμου Lab-Tek (Nunc Nalge International, Rochester, ΝΥ). Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με -20 ° C μεθανόλη και χρώση ανοσοφθορισμού πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα SERPINB3 μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-ανθρώπου (αριθμός καταλόγου: ab55733? Abcam plc, Cambridge, UK). Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με Alexa Fluor 488 Rabbit anti-κατσίκας IgG δευτερεύον αντίσωμα (A21222, Invitrogen). Τα πλακίδια επικαλύπτονται με DAPI πριν ληφθείσες εικόνες χρησιμοποιώντας ένα Zeiss συνεστιακού μικροσκοπίου LSM710 (Carl Zeiss) εφοδιασμένο με μια ψηφιακή φωτογραφική μηχανή AxioCam μικροσκόπιο και Zen λογισμικού το 2009.

Ανθρώπινο Πληθυσμός μελέτης

Τα κλινικά δεδομένα ανακτήθηκαν από μια βάση δεδομένων των ασθενών με ΕΓΚ μεταξύ Ιουνίου 2003 και Μαρτίου 2009. η έγκριση από το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review του Εθνικού Πανεπιστημίου της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο ελήφθη εκ των προτέρων για την παρούσα μελέτη. Τα κριτήρια επιλεξιμότητας ήταν τα εξής για τους ασθενείς: είχαν διαγνωστεί με EOC? που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μέγιστη χειρουργική επέμβαση κυτταρομειωτική ακολουθούμενη από επικουρική taxane- και με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία και αν αναφέρεται? είχαν κατάσταση απόδοσης Eastern Cooperative Oncology Group 0-2? και δεν είχαν καμία υποκείμενη νόσο που επηρεάζουν την επιβίωση. _ENREF_4Optimal Κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση ορίστηκε ως υπολειμματική όγκου ≤1 cm, ενώ αναντίστοιχο κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση ορίστηκε ως εναπομένουσα όγκο & gt? 1 cm σε μέγιστη διάμετρο. Όλοι οι ασθενείς εκτός από εκείνους με χαμηλού κινδύνου πρώιμο στάδιο της νόσου, όπως ΦΥΓΩ στάδιο ΙΑ ή ΙΒ με βαθμό 1 ή 2 νόσο έλαβαν επικουρική χημειοθεραπεία με πακλιταξέλη (175 mg /m

2) /καρβοπλατίνη (AUC 5,0) ή πακλιταξέλη (175 mg /m

2) /σισπλατίνη (75 mg /m

2) για 1-2 εβδομάδες μετά την επέμβαση, και τη χημειοθεραπεία επαναλαμβάνεται κάθε 3 εβδομάδες για 6 κύκλους. Επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS) ορίστηκε ως ο χρόνος που έχει παρέλθει από την ημερομηνία ολοκλήρωσης της πρωτοβάθμιας χημειοθεραπείας ανοσοενισχυτικό την ημερομηνία κλινικά αποδεδειγμένη επιδείνωση. Η συνολική επιβίωση (OS) ήταν υπολογίζεται από την ημερομηνία της στάσης λαπαροτομία με την ημερομηνία του θανάτου σχετίζονται με τον καρκίνο ή το τέλος της μελέτης. αντίσταση λευκόχρυσου ορίστηκε ως η απόκριση σε βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία με ελάχιστο θεραπεία διάστημα χωρίς μικρότερη από 6 μήνες, ενώ η ευαισθησία στην πλατίνη ορίστηκε ως η απόκριση σε βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία με ελάχιστο θεραπεία διάστημα χωρίς μεγαλύτερη από ή ίση με