Αφηρημένο

Κλινικά δεδομένα δείχνουν ότι η προγνωστική διαστρωμάτωση ριζικά εκτομή καρκίνου του παχέος εντέρου με βάση τη νόσο στάδιο μόνο δεν μπορεί να είναι πάντα επαρκής. Τα προκλινικά ευρήματα υποδεικνύουν ότι ο καρκίνος βλαστικά κύτταρα μπορεί να επηρεάσει τη βιολογική συμπεριφορά του καρκίνου του παχέος εντέρου, ανεξάρτητα από το στάδιο: Στόχος της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί εάν ένα πάνελ βλαστική ικανότητα σημειωτές συσχετίστηκαν με την κλινική έκβαση σε εκτομή σταδίου II και III ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Μία ομάδα 66 δεικτών βλαστική ικανότητα αναλύθηκαν και έτσι οι ασθενείς διαιρέθηκαν σε δύο ομάδες (Α και Β) με τους περισσότερους ασθενείς ομαδοποίησης κατά τρόπο σύμφωνο με διαφορετικά χρόνος υποτροπής με τη χρήση ενός στατιστικού αλγορίθμου. Ένα σύνολο 62 ασθενείς αναλύθηκαν. Τριάντα έξι (58%) υποτροπίασαν κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης (εύρος 1,63 έως 86,5 μήνες). Δώδεκα (19%) και 50 (81%) ασθενείς κατανεμήθηκαν σε ομάδα Α και Β, αντίστοιχα. Μια πολύ διαφορετική διάμεση ελεύθερη υποτροπής επιβίωση παρατηρήθηκε μεταξύ των 2 ομάδων (22.18 έναντι 42,85 μηνών, p = 0,0296). Μεταξύ όλων των γονιδίων που ελέγχθηκαν, τα άτομα με την υψηλότερη «βάρος» για τον προσδιορισμό διαφορετική πρόγνωση ήταν CD44, ALCAM, DTX2, HSPA9, CCNA2, Pdx1, MYST1, COL1A1 και ABCG2. Αυτή η ανάλυση υποστηρίζει την ιδέα ότι, εκτός από το στάδιο, βιολογικών μεταβλητών, όπως τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων καρκίνου του παχέος εντέρου βλαστικών κυττάρων, μπορεί να είναι χρήσιμες για τον καθορισμό αυξημένο κίνδυνο υποτροπής σε ασθενείς με εκτομή καρκίνου του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Giampieri R, Scartozzi Μ, Loretelli C, Piva F, Mandolesi Α, Lezoche G, et al. (2013) Cancer Stem Cell Gene Προφίλ ως προγνωστικός δείκτης υποτροπής στο στάδιο υψηλού κινδύνου ΙΙ και Φάση ΙΙΙ, χειρουργηθέντα καρκίνου του παχέος εντέρου ασθενείς. PLoS ONE 8 (9): e72843. doi: 10.1371 /journal.pone.0072843

Επιμέλεια: Javier Σ Castresana, Πανεπιστήμιο της Ναβάρα, Ισπανία

Ελήφθη: 18 Μάρτη 2013? Αποδεκτές: 16 του Ιούλη, 2013? Δημοσιεύθηκε: 4 Σεπτέμβρη 2013

Copyright: © 2013 Giampieri et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από AIRC (ιταλική ένωση της έρευνας για τον καρκίνο). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

χειρουργική παραμένει ο στυλοβάτης της θεραπείας των μη μεταστατικό ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου και σε ασθενείς περίπου το 50% στάδιο III εκτομή, θεραπεία επιτυγχάνεται μόνο με χειρουργική επέμβαση. Επικουρική δοκιμές θεραπείας, όπως το ψηφιδωτό [1] ή XELOXA δίκη [2] έδειξε ότι ο συνδυασμός χημειοθεραπείας με 5FU /καπεσιταβίνη και οξαλιπλατίνη δίνει ένα πλεονέκτημα επιβίωσης στις περιοχές του 10-15% για τους ασθενείς εκτομή σταδίου III.

σε ασθενείς σταδίου ΙΙ, τα στοιχεία είναι ακόμη πιο περιορισμένες: επικουρική χημειοθεραπεία συνήθως συνταγογραφείται με βάση παράγοντες κινδύνου ή «επιλογή του ογκολόγου του»: το ποσοστό του σταδίου ΙΙ οι ασθενείς συμμετείχαν σε κλινικές δοκιμές είναι πολύ μικρή για να κάνει την οριστική παραδοχές σχετικά με το όφελος της επικουρική θεραπεία σε αυτή την υποομάδα ασθενών [3] – [5].

Μέχρι σήμερα οι cathegories σύστημα TNM στάσης είναι ο πιο αξιόπιστος τρόπος για την αντιμετώπιση του κινδύνου των ασθενών σε υποτροπή για τις αποφάσεις σχετικά με την κλινική διαχείριση. Ένα πιθανό ρόλο για τον καρκίνο βλαστικών κυττάρων έχει προταθεί ως πιθανοί προγνωστικός δείκτης υψηλό κίνδυνο υποτροπής σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου εκτομή. Αυτά τα κύτταρα έχουν ταυτοποιηθεί ως προγνωστικοί δείκτες της ανεπαρκούς αποτελέσματος και σιωπηρή να έχει ένα ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου και την ανάπτυξη των μεταστάσεων, πιθανώς ως συνέπεια της υποθετικής υψηλό δυναμικό αντιγραφής τους [6], [7].

Κανονικά, ορθοκολικό καρκίνο πληθυσμός βλαστικών κυττάρων μπορεί να διαιρεθεί κυρίως σε 2 κύριες κατηγορίες: ένα τυπικό υπότυπο του ορθοκολικού καρκίνου βλαστικών κυττάρων, συνήθως προσδιορίζονται από CD133 θετική χρώση και έναν ετερογενή πληθυσμό μη-CD133 θετικά βλαστικά κύτταρα. Ωστόσο και οι δύο τάξεις φαίνεται να έχουν μία εξίσου αποτελεσματική ικανότητα να πολλαπλασιάζονται κάτω από ορισμένες συνθήκες [8] – [10]. Λόγω των βιολογικών χαρακτηριστικών τους καρκινικά βλαστικά κύτταρα αντιπροσωπεύουν μια σχεδόν απεριόριστη πηγή για την ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου και πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για τη διατήρηση ενός είδους που προστατεύεται αποθεματικού θέση για τα καρκινικά κύτταρα. Μια άλλη ιδιαιτερότητα των καρκινικών βλαστικών κυττάρων είναι σχετική ικανότητά τους να ξεφύγουν από τη χημειοθεραπεία που προκαλείται από τον κυτταρικό θάνατο, ενισχύοντας έτσι το ρόλο τους ως αυτο-ανανέωση πηγή καρκινικών κυττάρων για όγκους [11] – [13]

Με βάση αυτά. παραδοχές μπορούμε να υποθέσομε ότι ο καρκίνος πληθυσμός των βλαστικών κυττάρων μπορεί να είναι υπεύθυνη για τα βιολογικά χαρακτηριστικά των καρκινικών κυττάρων και μπορούν τελικά να επηρεάσουν την κλινική συμπεριφορά των στερεών όγκων, ακόμη και κατά τη διάρκεια της χημειοθεραπείας.

σε μια προηγούμενη ανάλυση των Gerger et al. [14] οι συγγραφείς ήταν σε θέση να προσδιορίσει κοινές γονιδιακές παραλλαγές των κυττάρων του καρκίνου του στελέχους ως προγνωστικοί παράγοντες για υποτροπών σε ασθενείς ριζικά εκτομή του καρκίνου του παχέος εντέρου. Σε αυτή τη μελέτη έχουν πολυμορφισμούς βλαστικής σειράς ενός περιορισμένου αριθμού πιθανών δεικτών βλαστικών κυττάρων έχουν αναλυθεί. Ωστόσο, είναι πιθανό ότι το προφίλ γονιδιακής βλαστικών κυττάρων σε όγκους μπορεί να διαφέρουν από ό, τι μπορεί να παρατηρηθεί στο επίπεδο βλαστικής σειράς. Επιπλέον βλαστικών κυττάρων γονιδιακής έκφρασης σε όγκους μπορεί επίσης να είναι βιολογικά σημαντική.

Στη μελέτη μας εξέτασε εάν ένα πάνελ 66 γονιδίων, που αναφέρεται να έχει ένα ρόλο στην ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό του καρκίνου του παχέος εντέρου βλαστικών κυττάρων, θα μπορούσε να επιτρέψει να κάνει μια ακριβέστερη πρόβλεψη της πιθανότητας υποτροπής σε ασθενείς εκτομή μη μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου. Ο τελικός στόχος ήταν να προσδιορίσει μια βλαστική ικανότητα, με βάση την κατηγορία κινδύνου και να υποδείξει πιθανές βλαστικά κύτταρα που συνδέονται με μοριακούς στόχους για τη μελλοντική ανάπτυξη των στρατηγικών θεραπείας βλαστικών κυττάρων-σκηνοθεσία.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς Επιλογής

για τη ριζική εκτομή ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που λαμβάνουν επικουρική χημειοθεραπεία στο Τμήμα μας 2005-2007 κρίθηκαν επιλέξιμες για τη μελέτη μας.

οι ασθενείς θα πρέπει να παρουσιάζονται είτε με κλινικά ορίζεται φάση υψηλού κινδύνου II ή με ένα σταδίου III εκτομή πλήρως όγκων του παχέος εντέρου

Υψηλός κίνδυνος στάδιο ΙΙ ορίστηκε στην παρουσία τουλάχιστον ένα από τα ακόλουθα:. pT4, κακώς διαφοροποιημένο ιστολογία, απόφραξη του εντέρου ή διάτρηση σε παρουσίαση, ιστολογικά αποδεδειγμένη αγγειακή, λεμφικό ή περινευρικό εισβολή . Εμείς αποκλείεται από τους ασθενείς που λαμβάνουν ανάλυση επικουρική χημειοθεραπεία αποκλειστικά βάσει μιας μη επαρκούς δειγματοληψίας λεμφαδένα (λεμφαδένας δειγματοληψίας μικρότερη από 12).

Είτε μόνο παράγοντα 5FU (ή καπεσιταβίνη) ή 5FU (ή καπεσιταβίνη) σε συνδυασμό με οξαλιπλατίνη θεωρήθηκαν ως αποδεκτές εναλλακτικές λύσεις. Συνέχεια συνέβη, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες. Ιστορικό, κλινική εξέταση, γενική αίματος, CEA και CA 19-9 αποφασιστικότητα έγιναν σε διαστήματα τριών μηνών για τρία χρόνια, τότε σε έξι διαστήματα μήνες κατά τα έτη 4 και 5 μετά την επέμβαση. Η αξονική τομογραφία του θώρακα και την κοιλιά έγινε κάθε 6 μήνες σε χρόνο 1 έως 3 και ετήσια στη συνέχεια κατά τα έτη 4 και 5. Η κολονοσκόπηση πραγματοποιήθηκε κατά το έτος 1 και, στη συνέχεια, κάθε 3 και 5 ετών. Ο τόπος και η ημερομηνία της πρώτης υποτροπής και η ημερομηνία του θανάτου καταγράφηκαν. Για τους σκοπούς της μελέτης τα δεδομένα ασθενείς αναδρομική ανάλυση. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Θεσμική Επιτροπή Δεοντολογίας μας (Comitato Etico Azienda Ospedaliera – Ospedali Riuniti, Ανκόνα, Via Conca 71, Ιταλία). Όλοι οι ασθενείς έδωσαν την έγγραφη συγκατάθεσή τους για τη μελέτη.

επεξεργασία δειγμάτων και ποσοτική ανάλυση PCR

ανάλυση προφίλ έκφρασης γονιδίων πραγματοποιήθηκε από εργαστηριακό προσωπικό γνώριζαν την κατάσταση των ασθενών.

Πολλαπλές τμήματα, τμήματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη συλλέχθηκαν (25 έως 30 mg του πρωτογενούς όγκου, οδηγίες μικροδιατομή ιστού)? κερί παραφίνης αφαιρέθηκε και το συνολικό RNA εκχυλίζεται από το RT

2 FFPE RNA Extraction Kit (SABiosciences Corporation, Frederick, MD, USA), ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Δείγματα RNA ποσοτικοποιήθηκαν και την ποιότητα-ελέγχονται για την παρουσία πρωτεΐνης ή /και προσμείξεων οργανικό διαλύτη με μια φασματοφωτομετρική δοκιμασία.

Πεντακόσια νανογραμμάρια από κάθε δείγμα σε αντίστροφη μεταγραφή σε cDNA και προ-ενισχύθηκε χρησιμοποιώντας το RT2 FFPE προενισχυτή cDNA Synthesis Kit και το μείγμα εκκινητή ειδικό για την προσαρμοσμένη βλαστοκυττάρων RT2Profiler PCR Array (SABiosciences Corporation).

η ποσοτική ανάλυση πραγματικού χρόνου PCR διεξήχθη σε 7300 Real-Time PCR System (Applied Biosystems Inc, Foster City, CA, USA) με μια μέθοδο SYBR® Green. Target και αναφορά γονίδια και τους ελέγχους που επιλέγονται για ανάλυση γονιδιακής έκφρασης προήλθε από τα γονίδια βλαστοκυττάρων που των βλαστοκυττάρων RT2Profiler PCR Array (# CAPH09495-ΠΑΥ-405, SABiosciences Corporation). Επίσης, λόγω της έλλειψης στο πρότυπο συστοιχία PCR των δεικτών κυτταρικής γονιδιακής Stem περισσότερο κατάλληλη για καρκίνο του παχέος εντέρου βλαστικά κύτταρα, τα ειδικά γονίδια ALCAM (επίσης γνωστή ως CD166), PROM1 (CD133), CD24 και LGR5 προστέθηκαν.

Ένας πλήρης κατάλογος των γονιδίων εξετάστηκαν μπορούν να βρεθούν στον πίνακα 1.

η

Επεξεργασία δεδομένων και Στατιστική Ανάλυση

Σχετική έκφραση του γονιδίου προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας τη μέθοδο συγκριτικής ΔCt. Χρησιμοποιήσαμε το εργαλείο «Array PCR Ανάλυση Δεδομένων Web Portal» (https://www.SABiosciences.com/pcrarraydataanalysis.php) στην ιστοσελίδα του κατασκευαστή για να πραγματοποιήσουν δοκιμές της ποιότητας των δεδομένων, υπολογισμούς σχετικά με τα δεδομένα και τα στοιχεία qPCR εξομάλυνση. Ειδικότερα, όλοι οι κύκλοι κατώφλι τιμές μεγαλύτερες από 35, ή που δεν ανιχνεύονται, θεωρήθηκαν ως αρνητικός κλήσεις. Έχουμε διατηρούνται δείγματα με αρνητικό γονιδιωματική έλεγχο DNA, σαφή έλεγχο αντίστροφης μεταγραφής και θετικές τιμές ελέγχου PCR, σύμφωνα με τις ενδείξεις του κατασκευαστή.

Για να αξιολογηθεί διαφορετικά πρότυπα γονιδιακής έκφρασης, πραγματοποιήσαμε ανάλυση ομαδοποίησης από την K-means (K = 2 ) μέθοδος [15]. Αυτή η ιδιαίτερη αλγόριθμος ανάλυσης ομαδοποίησης επιλέχθηκε για να ελεγχθεί η πιθανή ύπαρξη 2 διαφορετικά πρότυπα γονιδιακής έκφρασης, που σχετίζονται με διαφορετικές πρόγνωση. Ειδικότερα, η μέθοδος Κ-means έχει ως στόχο να σχηματίσουν προκαθορισμένο αριθμό (Κ) κατατμήσεις σε ένα σύμπλεγμα διαφορετικών παρατηρήσεις σε ένα σύνολο δεδομένων, με τη μέθοδο του πλησιέστερου μέσου. αναλύσεις ομαδοποίηση πραγματοποιήθηκαν από ΠΟΑ (MultiExperiment Viewer) εργαλείο.

Η στατιστική ανάλυση έγινε με MedCalc Πακέτο (MedCalc® v9.4.2.0)

Το κύριο τελικό σημείο της μελέτης ήταν να προσδιορίσει μεταξύ των 2 προγνωστική ομάδες μια σημαντική διαφορά στην διάμεσος χρόνος υποτροπής (TTR), υπολογίζεται ως το χρονικό διάστημα από την ημερομηνία της διάγνωσης μέχρι την ημερομηνία της επανεμφάνισης του όγκου. TTR λογοκρίθηκε κατά τη στιγμή του θανάτου ή την τελευταία παρακολούθηση, εάν ο ασθενής δεν είχε υποτροπιάσει.

Στον πρωτογενή υπόθεση ότι οι ασθενείς με σταδίου εκτομή υψηλού κινδύνου ΙΙ σταδίου ΙΙΙ καρκίνο του παχέος εντέρου έχουν περίπου 60% ελεύθερη υποτροπής κινδύνου σε 2-χρόνια παρατήρησης και ότι οι ασθενείς με κακή προγνωστική βαθμολογία έχουν 30% ελεύθεροι υποτροπών κινδύνου σε 2 έτη, με την παραδοχή λάθους άλφα-πιθανότητα της τάξης του 0,05 και του λάθους βήτα-πιθανότητα 0.10, τουλάχιστον 53 ασθενείς χρειάζονται για να δοκιμάσουν η υπόθεση.

η σχέση μεταξύ TTR και βλαστικών κυττάρων του καρκίνου γενετικό προφίλ υπολογίστηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier. Σημαντικές διαφορές στην πιθανότητα υποτροπιάζουσας μεταξύ των στρωμάτων αξιολογήθηκαν με τη δοκιμασία log-rank

Για κάθε γονίδιο που προσδιορίζονται από K-means clustering ανάλυση, στη συνέχεια αξιολογήθηκε η συσχέτιση με το χρόνο μέχρι την υποτροπή:. Η διάμεση τιμή της συνολικής συγκεκριμένων συγκέντρωση γονίδιο χρησιμοποιήθηκε ως cut-off, λόγω της έλλειψης άλλων πιο αξιόπιστη και επαναλήψιμη μέσα για να estabilish μια σωστή cut-off.

Αποτελέσματα

ένα σύνολο των 62 ασθενών που αναλύθηκαν. Μεταξύ αυτών, 36 είχαν καρκίνο του παχέος εντέρου σταδίου II (58%) ενώ το υπόλοιπο 26 (41%) είχαν μια ασθένεια σταδίου III (πίνακας 2). Διάμεση περίοδο παρακολούθησης ήταν 44 μήνες (εύρος 12,5 έως 86,5 μήνες). Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου παρακολούθησης 36 (58%) ασθενείς υποτροπίασαν.

Η

Μεταξύ 26 ασθενείς σταδίου ΙΙΙ, 10 (38%) υποτροπίασαν κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης, ενώ στους υπόλοιπους 36 ασθενείς σταδίου ΙΙ, 26 (72%) υποτροπές παρατηρήθηκαν.

Median TTR για τους ασθενείς σταδίου II ήταν 23,3 μήνες, ενώ διάμεση TTR δεν επιτεύχθηκε για τους ασθενείς σταδίου ΙΙΙ. Η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (p = 0,0696).

Κατά την εκτέλεση K-σημαίνει ανάλυση (k = 2), τα γονίδια που είχε ένα σημαντικό ρόλο στον καθορισμό κατανομή σε μία από τις 2 προκαθορισμένα ομάδες ήταν CD44 (p = 0,0004), ALCAM (p = 0,003), DTX (p = 0,005), HSPA9 (p = 0,012), CCNA (p = 0.03), Pdx1 (p = 0.04), MYST1 (p = 0.04), COL1A1 ( p = 0.03), ABCG2 (p = 0.04). Μία σύγκριση των διαφορετικών μέσων έκφρασης αυτών των γονιδίων στην ομάδα Α και Β μπορούν να βρεθούν στο Σχήμα 1.

σημαίνει διαφορετικά τη γονιδιακή έκφραση μεταξύ των ασθενών με ριζικά εκτομή ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που δείχνει ένα δυσμενές προφίλ γονίδιο καρκινικό κύτταρο στέλεχος, ΟΜΑΔΑ Α (κόκκινο) και ριζικά εκτομή ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που δείχνει ένα ευνοϊκό προφίλ γονίδιο καρκινικού κυττάρου στελέχους, ΟΜΑΔΑ Β (μπλε) όπως στρωματοποιημένη με Κ-μέσων (k = 2) μέθοδο.

η

Μετά την ομαδοποίηση εντοπίστηκαν ανάλυση δύο ομάδες ασθενών:. ομάδα Α (δυσμενείς καρκινικά βλαστικά προφίλ γονιδιακής κυττάρων) και την ομάδα Β (ευνοϊκή καρκινικά βλαστικά προφίλ γονιδιακής κυττάρων)

Δώδεκα ασθενείς (19%) διατέθηκαν από την K-means ανάλυση σε ομάδα Α, ενώ οι υπόλοιποι 50 ασθενείς (81%) διατέθηκαν σε ομάδα Β στην ομάδα Α, 2 σταδίου ΙΙΙ (17%) και 10 σταδίου ΙΙ (83%) ασθενείς είχαν χορηγηθεί, ενώ στην ομάδα Β το υπόλοιπο 24 (48 %) σταδίου III και 26 (52%) το στάδιο ΙΙ οι ασθενείς είχαν χορηγηθεί. Όλα τα άλλα κλινικά χαρακτηριστικά που αναλύθηκαν προέκυψαν καλά ισορροπημένα μεταξύ των 2 ομάδων (πίνακας 2).

Έντεκα (91%) ασθενείς της ομάδας Α υποτροπίασαν κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης, ενώ 25 (50%) ασθενείς της ομάδας Β υποτροπίασαν κατά τη διάρκεια της το ίδιο χρονικό διάστημα. Αυτή η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική στο chi-square test (p = 0.0214). Μια πολύ διαφορετική μέση TTR μεταξύ των 2 ομάδων παρατηρήθηκε: 22.18 vs 42,85 μήνες (HR: 0,46, 95% CI: 0.15-090, p = 0.02). (Εικόνα 2)

Καμπύλες κατά Kaplan-Meier για διάμεση χρόνος μέχρι την υποτροπή (ΤΤΡ) της ριζικά εκτομή ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που δείχνει ένα δυσμενές προφίλ γονίδιο καρκινικού κυττάρου στελέχους, ΟΜΑΔΑ Α (-) έναντι ριζικά εκτομή ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που δείχνει ένα ευνοϊκό προφίλ γονίδιο καρκινικού κυττάρου στελέχους, ΟΜΑΔΑ Β (—- —) (22,1 μήνες έναντι 42,8 μηνών, p = 0.02).

η

κατά την ανάλυση των επιπτώσεων του κάθε γονιδίου που προσδιορίζονται από K-means ανάλυση λαμβάνονται μεμονομένα, καμία σημαντική σχέση με το μεσαίο TTR ήταν παρατηρηθεί. Μια σύνοψη των αποτελεσμάτων αυτών μπορούν να βρεθούν στον Πίνακα 3.

Η

Συζήτηση

Ο εντοπισμός ενός υποσυνόλου ριζικά εκτομή, μη μεταστατικό ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου που διατρέχουν μεγαλύτερο κίνδυνο για υποτροπή έχει βαθιές επιπτώσεις. σύστημα σταδιοποίησης TNM, ακόμη και αν αντιπροσωπεύει διάχυση όγκου ως ο κύριος παράγοντας που επηρεάζει κίνδυνο υποτροπής δεν αντιπροσωπεύουν βιολογικά χαρακτηριστικά του ίδιου του όγκου.

Ένα πιθανός ρόλος για τα βλαστικά κύτταρα του καρκίνου έχει υποτεθεί ως πιθανοί προγνωστικός δείκτης υψηλής κίνδυνο υποτροπής σε ασθενείς με εκτομή καρκίνου του παχέος εντέρου [6] – [13]. Αυτά τα κύτταρα έχουν συνήθως αναγνωρίζεται ως προγνωστικοί δείκτες της ανεπαρκούς αποτελέσματος και σιωπηρή να έχουν ένα ρόλο στην πρόοδο και την ανάπτυξη των μεταστάσεων του καρκίνου. Στην ανάλυσή μας προτείνει ότι καρκινικά βλαστικά προφίλ γονιδιακής κύτταρο μπορεί να είναι χρήσιμες για τον καθορισμό TTR στο III ριζικά εκτομή όγκων του παχέος εντέρου υψηλού κινδύνου σταδίου II και το στάδιο. Επιπλέον, ο κίνδυνος της υποτροπής σε σειρά μας δεν φάνηκε να συσχετίζεται με το στάδιο της νόσου, γεγονός που υποδηλώνει ότι η βιολογία περισσότερο από καθοδηγεί στάδιο φυσική ιστορία του καρκίνου του παχέος εντέρου. Κατά την εκτέλεση K-σημαίνει ανάλυση (k = 2), τα γονίδια που είχε σημαντικό ρόλο στον καθορισμό κατανομή σε μία από τις 2 προκαθορισμένα ομάδες ήταν CD44 (p = 0,0004), ALCAM (p = 0,003), DTX (p = 0,005 ), HSPA9 (p = 0,012), CCNA (p = 0.03), Pdx1 (p = 0.04), MYST1 (p = 0.04), COL1A1 (p = 0.03), ABCG2 (p = 0.04).

Ένας ρόλος για CD44, ALCAM, DTX, HSPA9, CCNA, Pdx1, MYST1, COL1A1 και έκφραση ABCG2 στον επηρεασμό των παραμέτρων του όγκου, πιθανόν μέσω αλληλεπίδρασης με τον πληθυσμό αρχέγονων κυττάρων, έχει χωριστά περιγραφεί στο παρελθόν, αλλά αυτό είναι, εξ όσων γνωρίζουμε , την πρώτη φορά που έχουν πολλαπλές δείκτες έχουν εξεταστεί ταυτόχρονα, επιβεβαιώνοντας τη σχετική σημασία του κάθε ένα από αυτά.

Ωστόσο, μεταξύ των μοριακών καθοριστικών παραγόντων αναδειχθεί ως σημαντικό στη μελέτη μας, πιστεύουμε ότι τα αποτελέσματα όσον αφορά CD44, ABCG2 και CD133 θα πρέπει να συζητηθεί περαιτέρω, κυρίως λόγω της βιολογικής ιδιαιτερότητα που κατέχουν.

ειδικότερα γονιδιακής έκφρασης CD44 φαίνεται να αποτελούν την πιο σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την πιθανότητα υποτροπής στην ομάδα μας από εκτομή των ασθενών. CD44 είναι επίσης γνωστή ως ο υποδοχέας για το υαλουρονικό οξύ και έχει έναν σημαντικό ρόλο στην αλληλεπίδραση κυττάρων σε στρώμα [16] – [19]. Παρά το γεγονός ότι έχουν ήδη αναφερθεί ως προγνωστικός παράγοντας για υποτροπή σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, σημαντική διχογνωμία υπάρχει σχετικά με τις πραγματικές επιπτώσεις των διαφορετικών επιπέδων γονιδιακής έκφρασης CD44. Σε μια προηγούμενη εργασία από τους Huang et al. [20] βλαστικών κυττάρων που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο του παχέος αξιολογήθηκαν για γονιδιακή έκφραση του CD44 και CD133 και όγκων που φιλοξενούν υψηλότερα επίπεδα τόσο CD44 και CD133 σχετίζονταν με αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης πρόωρης ηπατικές μεταστάσεις.

Αντίθετα , σε μια εργασία που δημοσιεύθηκε από Ντάλας et al. [21] κύτταρα τα οποία είχαν κατασκευαστεί για να είναι knock-down για έκφραση CD44 είχε σχεδόν 10 φορές αύξηση σε μεταστατικό δυναμικό τόσο του ήπατος και των πνευμόνων. Εκτός από αυτό, τα κύτταρα CD44 αρνητικά παρουσίασαν μεγαλύτερη «μηχανική συμμόρφωσης» (την ικανότητα για κυτοσόλιο εξαρτήματα να κινηθούν ελεύθερα μέσα από το ίδιο το κυτοσόλιο), μια ιδιότητα που θεωρείται ζωτικής σημασίας για την διαδικασία της εξαγγειώσεως και της μετανάστευσης μέσω του αίματος ροή. Σε παγκόσμιο επίπεδο τα ευρήματα αυτά φαίνεται να πάει μαζί με την παρατήρηση μας ότι τα χαμηλά επίπεδα CD44 είναι σχετικές για το χρόνο μέχρι την υποτροπή σε καρκίνο του παχέος εντέρου.

Αντίθετα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης της ABCG2 ως αποτέλεσμα πιο συχνά παρούσα στην ομάδα ασθενών Α, οι με χειρότερη πρόγνωση. ABCG2 (επίσης γνωστή ως CDw338) είναι μια πρωτεΐνη στην επιφάνεια του κυττάρου, που εμπλέκονται με μεταφορά μορίων κατά μήκος των κυτταρικών μεμβρανών. Η έκφραση αυτής της πρωτεΐνης έχει συσχετιστεί με αντοχή πολυ-φαρμάκου και σε μια πρόσφατη εργασία των Oh et al. [22] ορθοκολικό καρκίνο κύτταρα καθίστανται ανθεκτικά σε χημειοθεραπεία FOLFOX εμφάνισαν υψηλά επίπεδα ABCG2. Αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει τη φαινομενική μειωμένη αποτελεσματικότητα των επικουρική χημειοθεραπεία στην ομάδα μας από τους ασθενείς με χειρότερη πρόγνωση.

Ακόμα κι αν τα δημοσιευμένα στοιχεία φαίνεται μέχρι στιγμής να δείχνουν ότι CD133 αποτελεί σημαντικό βιοδείκτη σε βλαστικά κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου, ο ρόλος της είναι πολύ από το να είναι πλήρως κατανοητοί. Αυτή η πρωτεΐνη (που ονομάζεται επίσης προμινίνη-1 ή σε συντομογραφία PROM-1) έχει ένα ρόλο στο σχηματισμό των προεξοχών μεμβράνης και φυσσαλιδώδη διακίνηση [23]. Εκτός από αυτό και όχι βάση της λειτουργίας, είναι αυταπόδεικτο ότι η PROM-1 αλληλεπιδρά με άλλα καλά και-όχι-έτσι-πολύ γνωστά ενδοκυτταρικά αγγελιοφόροι, όπως αυτές που εμπλέκονται στην WNT /β-κατενίνης, PI3K-Akt-mTOR, HIF-1alfa και μονοπάτια CXCR4 [24], [25].

ειδικότερα, η έκφραση υψηλού CD133 φαίνεται να σχετίζεται με χειρότερη πρόγνωση σε καρκίνο του παχέος εντέρου, λόγω υψηλότερη συχνότητα της σε μεταστάσεις και όχι σε πρωτοπαθή όγκο [17].

στην ανάλυσή μας, διαφορετικά επίπεδα CD133 δεν συνδέεται με υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής. Πράγματι, οι ασθενείς της ομάδας Α και Β είχαν ετερογενή επίπεδα έκφρασης CD133, χωρίς σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων. Επίσης, κατά την ανάλυση των επιπτώσεων της υψηλής έναντι χαμηλής συγκέντρωσης του CD133 δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά με TTR.

Τα στοιχεία αυτά φαίνεται να είναι σε αντίθεση με εκείνες που παρουσιάζονται από Artells et al. [26] υποδηλώνοντας ότι τα υψηλά επίπεδα της γονιδιακής έκφρασης CD133 συσχετίστηκαν με υψηλότερη πιθανότητα υποτροπής σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου εκτομή. Τα αποτελέσματά μας μπορεί να εξηγηθεί από το γεγονός ότι σε ανάλυση αρκετούς διαφορετικούς παράγοντες μας ήταν που λαμβάνονται υπόψη και όχι μόνο ένα δείκτη βλαστική ικανότητα: λόγω της φύσης του Κ-μέσου ανάλυσης, σε παρουσία πολλαπλών βιολογικών παραγόντων με μια πιο σαφή αντίκτυπο στην TTR , η επίδραση του CD133 ως δείκτης της υποτροπής θα μπορούσε να αραιωθεί.

γνωρίζουμε επίσης ότι η έκφραση CD133 IHC μπορεί να είναι επαγόμενων και ότι ακόμα και στο παρελθόν CD133 null βλαστικά κύτταρα μπορούν να εκφράζουν

de novo

CD133 σε διαφορετικές πολιτισμό μέσα και κάτω από συγκεκριμένες συνθήκες [27]. Αυτό θα μπορούσε τουλάχιστον υπόψη τα αποτελέσματα ΑΝΤΙΦΑΤΙΚΕΣ της ανάλυση που διενεργήθηκε στην έκφραση CD133 IHC και την πρόγνωση.

Επίσης, σε μια άλλη εμπειρία Shmelkov et al. [8] CD133 null κύτταρα είναι υποθετική να έχουν ακόμη και ένα πιο επιθετικό φαινότυπο από τον ομόλογό τους CD133 θετική. Ειδικότερα, όταν εμβολιάζεται σε SCIV Ποντίκια, την ανάπτυξη του όγκου από το CD133 αρνητικά βλαστικά κύτταρα ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από ό, τι CD133 πληθυσμό θετικό κυττάρων.

Σε παγκόσμιο επίπεδο τα ευρήματά μας δείχνουν για πρώτη φορά έναν πιθανό ρόλο για τον καρκίνο βλαστικών προφίλ γονιδιακής κυττάρων σε διακρίσεις διαφορετικούς κινδύνους υποτροπής ανεξάρτητα από το στάδιο της νόσου. Αυτά τα αποτελέσματα μπορεί να είναι επίσης σκόπιμο, μετά από περαιτέρω επιβεβαίωση, για τον εντοπισμό πιθανών βλαστικών κυττάρων που συνδέονται μοριακοί στόχοι για τη μελλοντική ανάπτυξη των στρατηγικών θεραπείας βλαστικών κυττάρων-κατευθυνόμενη.