Αφηρημένο

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια σχεδόν καθολικά θανατηφόρα νόσος που προκαλείται από νωρίς εισβολή των παρακείμενων δομών και τη μετάσταση και την έλλειψη ενός αποτελεσματικού τρόπου θεραπείας. προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι Qingyihuaji Τύπου (QYHJ), επτά βότανο κινεζική τύπο ιατρικής, είχε σημαντικές αντικαρκινικές επιδράσεις στον καρκίνο του παγκρέατος. Εδώ, εξετάσαμε τις επιδράσεις της QYHJ επί παγκρεατικού εισβολή των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση και την πιθανή σχετίζεται μηχανισμός (ες). Βρήκαμε ότι QYHJ ανέστειλε τόσο την ανάπτυξη και μετάσταση όγκου σε γυμνούς ποντικούς με ξενομοσχεύματα ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου των κυττάρων. Περαιτέρω μελέτη έδειξε ότι ανέστειλε QYHJ επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), η οποία χαρακτηρίζεται από αυξημένη έκφραση Ε-καδερίνης και μειωμένη βιμεντίνη, Ν-cadherin και έκφραση Slug. Η ιντερλευκίνη 6 (IL-6), μια προ-φλεγμονώδης κυτοκίνη που παράγεται κυρίως από μακροφάγους, θα μπορούσε να προωθήσει ΕΜΤ καρκινικών κυττάρων και εισβολή. Σε αντίθεση, η αγωγή με QYHJ ανέστειλε φλεγμονή σχετίζεται με τον καρκίνο σε όγκους με τη μείωση διείσδυση μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους και IL-6 παραγωγή, αποτρέποντας έτσι κύτταρο εισβολή και τη μετάσταση. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η κινεζική φυτικό φάρμακο QYHJ θα μπορούσε να αναστείλει παγκρέατος εισβολή των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση εν μέρει αντιστρέφοντας τη φλεγμονή όγκο υποστήριξη

Παράθεση:. Zhang J, Wang P, Ouyang Η, Γιν J, Liu Α, Ma C, et al. (2013) Στόχευση σχετίζονται με τον καρκίνο Φλεγμονή: Κινέζικη Βοτανοθεραπεία Αναστέλλει Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση σε καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (7): e70334. doi: 10.1371 /journal.pone.0070334

Επιμέλεια: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Ιταλία

Ελήφθη: 3 του Φεβρουαρίου 2013? Αποδεκτές: 18, Ιούνη 2013? Δημοσιεύθηκε: 29 του Ιούλη του 2013

Copyright: © 2013 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας (81001061, 81072942, 81173461)? Σαγκάη Φύση Ταμείο Επιστημών, Σαγκάη, Κίνα (09ZR1406800)? Διδακτορική Ίδρυμα Προγράμματα του Υπουργείου Παιδείας της Κίνας (20090071120076)? Σαγκάη Επιστήμης και Τεχνολογίας Επιτροπή Rising-Star Program (11QA1401300)? και Ιατρικής ταλέντα Πρόγραμμα Εκπαίδευσης του Γραφείου Υγείας της Σαγκάης (XYQ2011008). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος παραμένει μια από τις πιο δύσκολες καρκίνους για τη θεραπεία [1]. Η κακή πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος οφείλεται στην πρώιμη τοπική εισβολή των παρακείμενων δομών και μακρινή μετάσταση [2] σε μεγάλο βαθμό. Οι περισσότεροι ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος διαγνωστεί με μεταστατική νόσο, και μόνο το 10% έως 20% των ασθενών με εντοπισμένη νόσο είναι χειρουργήσιμη κατά τη στιγμή της διάγνωσης [3]. μονοθεραπεία με γεμσιταμπίνη ή θεραπεία συνδυασμού με erlotinib έχει γίνει η καθιερωμένη χημειοθεραπεία για τη θεραπεία προχωρημένο καρκίνο του παγκρέατος? Ωστόσο, η διάμεση επιβίωση είναι 5-6 μηνών [4]. Έτσι, είναι σημαντικό να βρεθεί μια θεραπευτική προσέγγιση που βοηθά στην πρόληψη ή /και θεραπεία των παγκρεατικών μετάστασης του καρκίνου.

Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), η διαδικασία των κυττάρων να χάσουν επιθηλιακών φαινότυπο τους και αποκτώντας ένα μεταναστευτικό φαινότυπο μεσεγχυματικά, έχει γίνει δεκτή για να παίξει ένα σημαντικό ρόλο στη μετάσταση του καρκίνου σε διάφορες ανθρώπινες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παγκρέατος [5], [6]. EMT έχει αποδειχθεί ότι επηρεάζει αρνητικά τη συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος [7]. Επιπλέον, EMT συμβάλλει στην αντοχή φαρμάκου σε καρκίνο του παγκρέατος [8]. Έτσι, η αναστολή της ΕΜΤ σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα μπορεί να διευκολύνουν την ανάπτυξη μιας αποτελεσματικής στρατηγικής για την πρόληψη και /ή θεραπεία του μεταστατικού καρκίνου του παγκρέατος.

Αύξηση στοιχεία δείχνουν ότι ορισμένα κινέζικα φυτικά φάρμακα, όπως

Coptis chinensis

(Huang Lian),

Scutellaria baicalensis

(Huang Qin),

Camellia sinensis

(Lu cha),

Wedelia chinensis

(Peng Qi ju) και Songyou Γιν (α κινέζικα βότανα ένωση), που περιέχει κάποια βιοδραστικών ενώσεων ή μια ποικιλία φυτοχημικών, μπορεί να αναστρέψει EMT και να μειώσει τη μετάσταση [9] – [13]. Έτσι, αυτά τα βότανα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως συμπληρωματικές και εναλλακτικές θεραπείες και /ή ως επικουρική θεραπεία για τα συμβατικά κυτταροτοξικά θεραπείες. QYHJ, επτά βότανο κινέζικα φάρμακα τύπου και χρησιμοποιείται για τον καρκίνο του παγκρέατος στην Κίνα, έχει δειχθεί ότι αναστέλλει τόσο την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση σε γυμνά ποντίκια με παγκρεατικά ξενομοσχεύματα καρκίνου κυττάρου [14] – [16]. Επιπλέον, QYHJ συνδυασμό με συμβατική δυτική ιατρική έχει δειχθεί ότι παρατείνει το χρόνο επιβίωσης σε ασθενείς με ηπατικές μεταστάσεις από καρκίνο του παγκρέατος [17]. Ωστόσο, η υποκείμενη μοριακός μηχανισμός παραμένει ασαφής.

Εδώ, έχουμε αποδείξει ότι QYHJ αναστέλλει τόσο την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση σε γυμνά ποντίκια με παγκρεατικά ξενομοσχεύματα καρκινικών κυττάρων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι QYHJ ανέστειλε σχετίζονται με τον καρκίνο φλεγμονή σε όγκους με τη μείωση διείσδυση μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους και IL-6 παραγωγή, η οποία μειώθηκε τελικά ΕΜΤ και την κυτταρική εισβολή. Ως εκ τούτου, τα παρόντα ευρήματα υποδεικνύουν ότι QYHJ είναι ικανό να αναστέλλει παγκρεατικού εισβολή των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση σε ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος εν μέρει από την αντιστροφή φλεγμονή όγκο στήριξης.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Όλα τα πειράματα ποντικού διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές των National Institutes of Health για τη Φροντίδα και Χρήση ζώων Εργαστηρίου. Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε επίσης από την Επιτροπή σχετικά με την χρήση των ζώντων ζώων στη διδασκαλία και την έρευνα, το Πανεπιστήμιο Fudan, Σαγκάη. Κατά τη διάρκεια της δημιουργίας ενός μοντέλου μετάστασης ήπατος και ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος, οι ποντικοί αναισθητοποιούνται με 3% πεντοβαρβιταλικό νάτριο (40 mg /kg) και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Γραμμές κυττάρων και ποντίκια

Η ανθρώπινη παγκρεατική καρκινική κυτταρική γραμμή BxPC3 ελήφθη από την American Type Culture Collection. SW1990HM, μια ιδιαίτερα μεταστατική σειρά ανθρώπινου παγκρεατικού καρκινώματος, υποκλωνοποιήθηκε από SW1990 από την ομάδα μας [18]. Όλα τα καλλιεργημένα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI1640 /10% ορό εμβρύου μόσχου και διατηρήθηκαν σε ένα υγροποιημένο 5% CO

2 ατμόσφαιρα στους 37 ° C. Όλες οι κυτταρικές σειρές τακτικά επικυρώνονται από τον έλεγχο της μορφολογίας τους και ελέγχθηκαν ως προς την απουσία μόλυνσης από μυκόπλασμα (MycoAlert, Lonza, Rockland, ΜΕ, USA).

Θηλυκά BALB /c-nu /nu γυμνοί ποντικοί ηλικίας 4 -6 εβδομάδες ελήφθησαν από τη Σαγκάη Ινστιτούτο Materia Medica, κινεζική Ακαδημία Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα), και στεγάζεται σε γραφεία νηματικής ροής υπό ειδικές συνθήκες ελεύθερες παθογόνων και παρέχονται με τροφή και νερό

κατά βούληση

.

φάρμακα και Αντιδραστήρια

QYHJ, επτά βότανο κινεζικά φαρμακευτικά τύπο, που αποτελείται

Scutellria barbata

(Ban Zhi Lian),

Heydyotis διάχυτη

(Bai Hua αυτή που cao),

Amorphophallus kiusianus

(εκείνη Liu Gu),

Coix Lacryma-jobi

(Yi Ren),

Gynostemma pentaphyllum

(Jiao Gu LAN),

Ganoderma luncidum

(Ling Zhi) και

Amomum cardamomum

(Bai Dou Κου). QYHJ παρασκευάστηκε όπως περιγράφηκε previouly [14] – [16]. Εν συντομία, οι σκόνες του τύπου QYHJ παρήχθησαν με Jiang-γιν Tianjiang Pharmaceutical Co, Ltd. να εξασφαλισθεί η τυποποίηση και τη διατήρηση interbatch αξιοπιστία του QYHJ, μια υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) χρωματογραφικών αποτυπωμάτων αναπτύχθηκε για τον έλεγχο της ποιότητας του. Τα χρωματογραφήματα των δακτυλικών αποτυπωμάτων του τύπου QYHJ δείχθηκε στο Σχήμα S1. Το τελικό αφέψημα του QYHJ παρασκευάστηκε με διάλυση του φυτικά σκόνη σε αποσταγμένο νερό στην απαιτούμενη συγκέντρωση. Η ημερήσια δοσολογία για γυμνούς ποντικούς ήταν 18 g /kg, όπως υπολογίζεται σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο ανθρώπου-ποντικού μεταφορά Db = Da × (Rb /Ra) × (Wb /Wa) 2/3, όπου D, R και W αντιπροσωπεύουν δοσολογία, συντελεστής σχήματος, και το σωματικό βάρος, αντίστοιχα, και τα α και b αντιπροσωπεύουν ανθρώπου και ποντικού, αντίστοιχα. Η ανθρώπινη ανασυνδυασμένη ιντερλευκίνη-6 (IL-6) αποκτήθηκε από R &? D Systems (R &? D Systems) και διαλύθηκε σε στείρο PBS που περιέχει 2% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA). Τα ακόλουθα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: αντι-Ε-καδερίνης κουνελιού, αντι-βιμεντίνη, αντι-Ν-καντερίνης και αντι-Slug (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ)? αντι-CD68 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)? κατσίκας αντι-IL-6 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)? GAPDH (Epitomics, Burlingame, CA).

Δημιουργία ενός μετάσταση στο ήπαρ μοντέλο σε άτριχα ποντίκια

Ένα μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος μετάσταση στο ήπαρ ιδρύθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. Εν συντομία, γυμνοί ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με χλωράλη ένυδρη? η σπλήνα εκτέθηκε? και του καρκίνου του παγκρέατος κύτταρα SW1990HM (5 × 10

6 /0.2 κ.εκ. PBS) εγχύθηκαν στο σπλήνα χρησιμοποιώντας μία σύριγγα. Η σπλήνα επεστράφη στην κοιλιά, και η πληγή έκλεισε σε μία στρώση με συνδετήρες τραύματος. Έξι εβδομάδες μετά την ένεση, οι ποντικοί εξετάστηκαν χονδροειδώς κατά την νεκροψία για ηπατικές μεταστάσεις. Στη συνέχεια, αξιολογήθηκε μετάσταση όγκου με μέτρηση του αριθμού των μεταστατικών αποικιών σε μία ιστολογική τομή του μεσαίου τμήματος κάθε δείγματος ήπατος από κάθε ποντικό και με προσδιορισμό του λόγου της μεταστατικής περιοχής με τη συνολική έκταση σε ιστολογικές τομές από την ενδιάμεσο τμήμα του κάθε ήπαρ [19], [20] .Η μεταστατικό σε συνολικό δείκτη περιοχή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το Adobe Photoshop έκδοση 7.0 (Adobe Systems) και ImageJ έκδοση 1.29 (National Institutes of Health), το λογισμικό, και τα αποτελέσματα εκφράζονται ως ποσοστά.

ορθοτοπική μοντέλο καρκίνο του παγκρέατος

Το ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος ιδρύθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21]. Εν συντομία, 2 χ 10

6 SW1990HM παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα ανά ζώο σε 100 μλ αλατόνερου ρυθμισμένου με φωσφορικό εγχύθηκαν υποδορίως στο αριστερό πλευρό ενός γυμνού ποντικού της. Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν 3 φορές την εβδομάδα χρησιμοποιώντας ένα παχύμετρο. Όταν οι όγκοι αναπτύχθηκαν υποδόρια φτάσει σε ένα μέγεθος από 0,5 έως 1 cm

3, αυτοί απομακρύνθηκαν ασηπτικά από τους ποντικούς και μεταφέρθηκαν σε τρυβλία Petri που περιέχει 10 κ.εκ. αλατόνερου ρυθμισμένου με φωσφορικό. Μακροσκοπικά ζωτικά σημεία του όγκου κόπηκαν σε 1-mm

3 κομμάτια χρησιμοποιώντας ένα νυστέρι. Οι ποντικοί στη συνέχεια αναισθητοποιούνται με 3% πεντοβαρβιταλικό νάτριο (40 mg /kg) και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Μια μικρή εγκάρσια τομή δημιουργήθηκε στην αριστερή κοιλιακή πλευρά του, και το πάγκρεας ήταν προσεκτικά εκτεθειμένη. Μια τσέπη του 2 έως 3 mm παρασκευάστηκε με την ουρά του παγκρέατος με τη χρήση του μείζονος φλέβα σπλήνα ως ο κορυφαίος δομή, και εισήχθησαν τεμάχια όγκου. Το πάγκρεας ακολούθως επανεισαχθεί στην κοιλία, και το κοιλιακό τοίχωμα κλείστηκε χρησιμοποιώντας 6-0 μη απορροφήσιμα ράμματα.

Ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA)

Συγκεντρώσεις ορού IL-6 και ΤΝΡ-α μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ELISA. Το δείγμα αίματος αποθηκεύτηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, φυγοκεντρήθηκε (12.000 χ g) για 15 λεπτά, και στη συνέχεια, κρυοσυντηρημένα στους -80 ° C. Οι συγκεντρώσεις της IL-6 και TNF-α μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA σάντουιτς (Duoset? R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ, USA)

Ανοσοϊστοχημεία και ανοσοφθορισμού

ανοσοϊστοχημεία (IHC. ) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Εν συντομία, τα δείγματα του ιστού του όγκου μονιμοποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη κερί. Μη προετοιμασμένο 3-μm τομές στη συνέχεια, κομμένα από τα μπλοκ παραφίνης για ανάλυση IHC. Οι τομές χρωματίστηκαν με αντι-βιμεντίνη (1:200) και κουνελιού αντι-Ε-καδερίνης (1:100) και κουνελιού αντι-CD68 (1:200) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Το δευτερεύον αντίσωμα και υπεροξειδάσης μέθοδος αβιδίνης-βιοτίνης χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις τυποποιημένες πρωτόκολλα που παρέχονται από τον κατασκευαστή (Vector Laboratories, CA). Μια ανοσοσφαιρίνη-αρνητικός έλεγχος χρησιμοποιήθηκε για να αποκλείσει την μη ειδική σύνδεση. Οι διαδικασίες διεξήχθησαν από δύο ανεξάρτητους ερευνητές (PW και JZ) και ένας παθολόγος (JF), οι οποίοι είχαν τυφλωθεί με τον τύπο /μοντέλο θεραπείας για την σειρά των δειγμάτων. Για να αξιολογηθεί ποσοτικά ΤΑΜ διείσδυση σε κάθε ομάδα, υπολογίσαμε την αναλογία της περιοχής που ήταν θετικά για χρώση CD68 με τη συνολική επιφάνεια των ιστολογικές τομές από δέκα πεδία συλλαμβάνονται χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φωτός (200 Χ). Ε-καδερίνη και η έκφραση βιμεντίνης προσδιορίστηκαν σύμφωνα με προηγούμενη αναφορά μας [16].

Για ανοσοφθορισμό χρώση, τα κύτταρα και πλάκες μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη και 10% φορμαλίνη, αντίστοιχα. Τα πλακίδια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 10 mM ρυθμιστικό κιτρικού (ρΗ 6,0) για ανάκτηση αντιγόνου, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κύτταρα ή πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα με αντι-βιμεντίνη (1:200), αντι-Ε-καδερίνης (1:100), αντι-CD68 (1:200) και αντι-IL-6 (1:200) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Τα κύτταρα ή πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με φθορισμό για 1 ώρα. Τέλος, τα κύτταρα πλύθηκαν και στερεώθηκαν με μέσο στερέωσης περιέχει DAPI (Vector Laboratories). Ένας αρνητικός μάρτυρας στην οποία παραλείφθηκε το πρωτογενές αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε για να ελεγχθεί για ειδικότητα αντισώματος. Οι εικόνες ελήφθησαν με μικροσκόπιο φθορισμού Leica συνεστιακού.

Ανάλυση Western Blot

ανάλυση κηλίδος Western έγινε όπως περιγράφεται στην προηγούμενη έκθεση μας [19]. Εν συντομία, οι πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από τα καλλιεργημένα κύτταρα και ποσοτικοποιούνται με το κιτ δικιγχονινικού οξέος (BCA) δοκιμασία (Pierce, Rockford, IL, USA) χρησιμοποιώντας BSA ως πρότυπο. Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης από διαφορετικά κύτταρα διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας 10% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης (Bio-Rad). Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο γάλα και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα. Οι πρωτεΐνες-στόχοι ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας ένα ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (ECL) κιτ (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden).

Wound Λήξη Δοκιμασίες

τραύματος δοκιμασίες κλείσιμο διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. Τα κύτταρα επιστρώθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων. Η κυτταρική μονοστιβάδα πληγώθηκε από το χέρι την κατάρτιση ενός κομματιού σε όλη τη μονοστοιβάδα με ένα 1-10-μλ ρύγχος πιπέτας. Το μέσο κυτταρικής καλλιέργειας στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο, ​​100 ng /ml IL-6 ή όχημα προστέθηκαν όπως απαιτείται, και το κλείσιμο του τραύματος παρακολουθήθηκε σε 48 ώρες χρησιμοποιώντας μικροσκοπία αντίθεσης φάσης. Μετά τον τραυματισμό, η περιοχή της πληγής προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας J Image έκδοση 1.29 (National Institutes of Health) λογισμικού. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν.

Εισβολή Δοκιμασία

κυττάρων εισβολή προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας θαλάμους εισβολή Matrigel (Matrigel επικαλυμμένα μεμβράνη, BD Biosciences). Τα κύτταρα (1.0 × 10

4) σπάρθηκαν σε μέσο ελεύθερο ορού στον άνω θάλαμο και αφήνονται να εισβάλουν προς το 10% FCS που υπάρχει στο κατώτερο θάλαμο ως χημειοελκτικό. Μετά από 48 ώρες, τα κύτταρα που είχαν ταξιδέψει μέσα και προσκολλάται στην κάτω πλευρά της μεμβράνης μετρήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19].

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση ( SD). Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ανάλυσης της διακύμανσης μοντέλα (ANOVA) και t-tests Student. Μια τιμή Ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του πακέτου λογισμικού SPSS 15.0.

Αποτελέσματα

QYHJ Καταστέλλει μετάσταση στο ήπαρ από τα ανθρώπινα καρκίνο του παγκρέατος in vivo

Κατ ‘αρχάς, επιβεβαίωσε την αποτελεσματικότητα της QYHJ σε καταστολή μετάστασης ήπατος καρκίνου του παγκρέατος. Nude ποντίκια εμβολιάστηκαν ενδοσπληνικά με την ανθρώπινη παγκρεατική καρκινική κυτταρική γραμμή SW1990HM και τυχαία διαιρεθεί σε QYHJ ή την ομάδα ελέγχου. Μία εβδομάδα μετά την τυχαιοποίηση, οι ποντικοί στην ομάδα QYHJ από του στόματος θεραπεία με QYHJ (0,2 mL, καθετηριασμό, καθημερινά), ενώ ποντίκια στην ομάδα ελέγχου έλαβε φυσιολογικό αλατούχο διάλυμα ως έλεγχος για 4 εβδομάδες (ημέρες 7-35). Έξι εβδομάδες μετά την ένεση, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία και τα συκώτια τους συγκομιδή. Τόσο η QYHJ- και κύτταρα ελέγχου επεξεργασμένα σχηματίζονται όγκους όταν εμφυτεύεται στο σπλήνα, αλλά τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με QYHJ αναπτυχθεί σημαντικά λιγότερες ηπατικές μεταστάσεις από ό, τι εκείνοι που έλαβαν θεραπεία με τον έλεγχο φυσιολογικού ορού. Επιπλέον, τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με QYHJ εμφανίζονται λιγότερες μεταστατικό αποικίες και μειωμένη μεταστατική με τη συνολική αναλογία έκταση (Σχήματα 1Α και Β). Μαζί, αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι QYHJ θα μπορούσε να καταστείλει μετάσταση στο ήπαρ σε ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος.

Α. Ένα μοντέλο μετάστασης ήπατος καθορίστηκε όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Οι ποντικοί έλαβαν 28 ημερών θεραπευτική αγωγή QYHJ ή φυσιολογικό αλατούχο ως μάρτυρας. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν 6 εβδομάδες μετά την ένεση, και τα συκώτια τους συλλέχθηκαν. Αντιπροσωπευτικά συκώτια από γυμνά ποντίκια φαίνεται. Η &? Χρώση Ε εκτελέστηκε σε τμήματα του μεταστατικών όγκων (Μ) και φυσιολογικό ήπαρ (Ν) ιστών. Τα μεταστατικά οζίδια υποδεικνύονται με βέλη. n = 6 ανά ομάδα. Αρχική μεγέθυνση, × 200. B. ηπατικές μεταστάσεις ποσοτικοποιήθηκαν μετρώντας τον αριθμό των μεταστατικών αποικιών σε μία ιστολογική τομή του μεσαίου τμήματος κάθε δείγματος ήπατος από κάθε ποντικό και με προσδιορισμό του λόγου της μεταστατικής με τη συνολική επιφάνεια σε ιστολογικές τομές από τα μέσα του τμήματος του κάθε ήπατος. t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της στατιστικής σημαντικότητας.

Η

QYHJ αναστέλλει την ανάπτυξη των ανθρώπινων παγκρεατικών όγκων σε ένα ορθοτοπικό Γυμνό μοντέλο ποντικού

Έχουμε δείξει ότι η θεραπεία με QYHJ μειώνει μετάσταση στο ήπαρ σε άτριχα ποντίκια που εμβολιάστηκαν ενδοσπληνικά με ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος. Εμείς επεκταθεί το έργο αυτό να αποκτούν περισσότερες γνώσεις σχετικά με τις επιπτώσεις της QYHJ για πρωτοπαθούς όγκου στο πάγκρεας και στο ήπαρ μετάσταση. Nude ποντίκια έλαβαν παγκρεατικών μοσχευμάτων με θραύσματα όγκου και στη συνέχεια χωρίστηκαν τυχαία σε δύο ομάδες: μία ομάδα έλαβε QYHJ και η άλλη έλαβε κανονικό φυσιολογικό ορό ως έλεγχο. Η θεραπεία χορηγήθηκε επί 28 ημέρες (Εικόνα 2Α). Οι όγκοι στο πάγκρεας εντοπίστηκαν σε 8 από 10 ποντικούς (80%) και στις δύο ομάδες. Ηπατικές μεταστάσεις δεν ήταν εμφανείς σε καμία ομάδα λόγω των κυττάρων τύπου-ειδικές αλληλεπιδράσεις «σπόρο και το έδαφος» που διέπουν τη χρονολογία και τοποθεσίες των μεταστατικών στόχων και στην σύντομη περίοδο παρατήρησης [22]. Ωστόσο, QYHJ ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη των ανθρώπινων παγκρεατικών όγκων σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο γυμνού ποντικού (Σχήμα 2Β). Το μέσο βάρος του όγκου ήταν 0.90 ± 0.25 g στην ομάδα ελέγχου και 0,51 ± 0,28 g στην ομάδα QYHJ (Ρ = 0,036) (Σχήμα 2C). Επιπλέον, QYHJ φάνηκε να επιβραδύνει την απώλεια σωματικού βάρους σε άτριχα ποντίκια που προκλήθηκαν με το φορτίο του όγκου, αν και αυτή η διαφορά δεν ήταν σημαντική (Σχήμα 2D). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι QYHJ θα μπορούσε να αναστείλει τον καρκίνο του παγκρέατος σε ένα ορθοτοπικό γυμνό μοντέλο ποντικού.

Α. Το διάγραμμα ροής του πειραματικού σχεδιασμού και θεραπεία χρονοδιάγραμμα. B-D. Ορθοτοπική μοντέλα του καρκίνου του παγκρέατος καθορίστηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Τρεις ημέρες μετά την εγκατάσταση, τα ποντίκια χορηγήθηκε από το στόμα με ή χωρίς QYHJ για 28 ημέρες, και στη συνέχεια, οι όγκοι αφαιρέθηκαν και ζυγίστηκαν. Οι φωτογραφίες του ορθοτοπική μεταμοσχευμένων όγκων και από τις δύο ομάδες δείχνεται στο Β ο όγκος βάρη που φαίνεται στο C, και το σωματικό βάρος των ποντικών σε αμφότερες τις ομάδες παρουσιάζεται στο D. η = 10 ανά ομάδα. t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της στατιστικής σημαντικότητας.

Η

QYHJ Αναστέλλει EMT της παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα

EMT, ένα αναπτυξιακό πρόγραμμα στο οποίο επιθηλιακά κύτταρα αποκτούν άξονα μορφολογία των κυττάρων και εμφανίζουν κυτταρικό κινητικότητα, έχει προταθεί ως μια προϋπόθεση για την εισβολή και τη διάδοση των καρκινικών κυττάρων και ως προηγούμενο για σχηματισμό καρκίνο του παγκρέατος και τη μετάσταση [6], ως εκ τούτου, μετρήθηκε η έκφραση του μείζονος επιθηλιακών δείκτη Ε-καδερίνης και τους δείκτες μεσεγχυματικών βιμεντίνη, Ν-καδερίνης και Slug στους ιστούς του όγκου των δύο ομάδων. Immunohistochemisty ή /και ανάλυση κηλίδας Western απεκάλυψε ότι η θεραπεία της QYHJ προκάλεσε την έκφραση της Ε-καδερίνης και κατασταλεί η έκφραση του βιμεντίνης, Ν-cadherin και την Slug παράγοντα μεταγραφής (Σχήμα 3). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι QYHJ θα μπορούσε να αναστείλει EMT σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος.

Α. Η &? Χρώση Ε και χρώση IHC με αντι-Ecadherin και αντι-βιμεντίνης αντισώματα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τομές από ορθοτοπική μεταμοσχευμένων όγκων. Ν, φυσιολογικό παγκρεατικό ιστό? Τ, όγκου. Αρχική μεγέθυνση, × 200. Η ανάλυση στυπώματος Western Β χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η έκφραση των δεικτών που σχετίζονται με ΕΜΤ-Ε-καδερίνης, Ν-cadherin, βιμεντίνη και Slug σε κύτταρα που προέρχονται από τρία αντιπροσωπευτικά δείγματα ξενομοσχεύματος από κάθε ομάδα. Οι εντάσεις ζωνών μετρήθηκαν με πυκνομετρία και τη σχετική έκφραση ενδεικνυόμενο πρωτεΐνης δείχθηκε (κατώτερο).

Η

QYHJ Καταστέλλει σχετίζονται με τον καρκίνο φλεγμονής σε καρκίνο του παγκρέατος

Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι καρκινογόνες συναφείς φλεγμονή προάγει την ανάπτυξη των όγκων [23], [24]. Επιπλέον, ορισμένες προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες, όπως IL-8, IL-6 και TNF-α, έχουν δειχθεί ότι ενεργοποιούν EMT και τελικά να διευκολυνθεί η κυτταρική εισβολή και τη μετάσταση [25] – [29]. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιήσαμε ένα ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία για την εξέταση των επιπέδων των δύο προ-φλεγμονωδών κυτοκινών IL-6 και TNF-α σε γυμνά ποντίκια ορό. Ορός IL-6 επίπεδα ήταν χαμηλότερα σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με QYHJ (15.50 ng /L ± 4,49 ng /L) σε σύγκριση με εκείνους που έλαβαν τη θεραπεία ελέγχου (29,06 ng /L ± 6,99 ng /L, P & lt? 0,01). Επιπλέον, ο ορός του TNF-α ελαττώθηκε μετά από αγωγή με QYHJ (19,94 ± 3,55 ng /L vs 29,50 ± 5,09 ng /L, P & lt? 0,01) (Σχήμα 4Α). Αυτά τα δεδομένα κατέδειξαν ότι QYHJ μείωσε την παραγωγή των προ-φλεγμονωδών κυτοκινών. Διήθηση λευκοκυττάρων παρατηρείται στους περισσότερους όγκους και εμπλέκεται στην εισβολή και μετάσταση όγκου [30]. Tumor-σχετίζεται μακροφάγα (ΤΑΜ) είναι ένα σημαντικό συστατικό του διηθήματος λευκοκυττάρων [31]. Οι ΤΑΜ διηθήσεις δειχθεί ότι συσχετίζονται με την εξέλιξη του όγκου και κακή πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο [32], [33]. Βρήκαμε ότι η διήθηση με ΤΑΜ μπλοκαρίστηκε από QYHJ (Σχήμα 4Β). Επιπλέον, QYHJ μείωσε την έκφραση της IL-6 σε ΤΑΜ (Σχήμα 4C). Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν σαφώς ότι QYHJ μειωμένη TAM διήθηση και ανέστειλε την IL-6 έκφραση, τελικά καταστολή της φλεγμονής σχετίζονται με τον καρκίνο.

Α. Ένα πρότυπο ορθοτοπικής γυμνού ποντικού καθιερώθηκε και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με QYHJ ή όχημα, όπως περιγράφεται παραπάνω. Αίμα συλλέχθηκε από κάθε ποντικό, και οι συγκεντρώσεις στον ορό των προφλεγμονωδών κυτοκινών IL-6 και TNF-α ανιχνεύθηκαν με ELISA. t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η στατιστική σημαντικότητα. Β Για την αξιολόγηση ΤΑΜ διήθηση, χρώση CD68 διεξήχθη χρησιμοποιώντας IHC. Αρχική μεγέθυνση, 200 ×. ΤΑΜ διήθηση αξιολογήθηκε ποσοτικά με υπολογισμό της αναλογίας του CD68-θετικών περιοχή με τη συνολική έκταση σε κάθε πεδίο, και η μέση τιμή από δέκα πεδία κάτω από 200 χ μικροσκόπιο προσδιορίστηκε. * P & lt? 0,05. Γ συνεστιακή μικροσκοπία των παγκρεατικών καρκινικών ιστών θεραπεία με αντι-CD68 (κόκκινο) και αντι-IL-6 (πράσινο). πυρήνες κυττάρων αντίθετα με DAPI.

Η

IL-6 Προκαλεί καρκίνο του παγκρέατος κυττάρων EMT

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η συσχέτιση μεταξύ EMT και της φλεγμονώδους μικροπεριβάλλον του όγκου, αξιολογήσαμε τις επιδράσεις της IL- 6 σχετικά με τον καρκίνο του παγκρέατος κυττάρων EMT

στο

vitro

. SW1990HM, που επέδειξε ένα υψηλό επίπεδο βιμεντίνη έκφρασης, και BxPC3, που επέδειξε ένα υψηλό επίπεδο έκφρασης Ε-καδερίνης, υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ανασυνδυασμένη ανθρώπινη IL-6. IL-6 θεραπεία οδήγησε σε αυξημένη έκφραση στα κύτταρα βιμεντίνη SW1990HM και μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης σε κύτταρα BxPC3, όπως ανιχνεύεται με immunocytofluorescence (Σχήμα 5Α). Τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαιώθηκαν με ανάλυση κηλίδος western (Σχήμα 5Β). Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η υπερβολική παραγωγή της προ-φλεγμονώδους κυτοκίνης IL-6 προωθείται παγκρεατικού EMT καρκινικών κυττάρων.

A. Τα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος SW1990HM και BxPC3 υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-6 (100 ng /mL) για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια βάφτηκαν για την ανίχνευση της Ε-καδερίνης και βιμεντίνης (πράσινο). Οι κυτταρικοί πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με DAPI. Αρχική μεγέθυνση, × 200. B. παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-6 (100 ng /mL) για 24 ώρες. Η συνολική πρωτεΐνη εκχυλίζεται, και η έκφραση Ε-καδερίνης και βιμεντίνης ανιχνεύθηκαν με κηλίδωση Western. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

IL-6 Προωθεί Μετανάστευση καρκίνο του παγκρέατος κυττάρων και εισβολή

Τα αποτελέσματα της IL-6 στην κυτταρική μετανάστευση ερευνήθηκαν περαιτέρω χρησιμοποιώντας την επούλωση των πληγών χημική δοκιμή. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι περισσότερα κύτταρα μετακινηθεί στην γρατσουνιά πληγή σε IL-6 κύτταρα σε σύγκριση με κύτταρα που δεν έλαβαν IL-6 θεραπεία σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 6Α). Για να εξεταστεί η ικανότητα εισβολής των IL-6-αγωγή παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, πραγματοποιήσαμε μια

in vitro δοκιμασία

εισβολή χρησιμοποιώντας ένα θάλαμο transwell επικαλυμμένα με Matrigel. Όπως αναμενόταν, η IL-6 θεραπεία οδήγησε σε αυξημένη εισβολή κυττάρων

in vitro

στις δύο κυτταρικές σειρές (Σχήμα 6Β). Αυτά τα αποτελέσματα σε συνδυασμό με την παρατήρηση ότι η IL-6 που προκαλείται από παγκρεατικό ΕΜΤ καρκινικών κυττάρων έδειξε ότι η φλεγμονή σχετίζεται με τον καρκίνο συσχετίστηκε με αυξημένη ικανότητα για ΕΜΤ και εισβολή (Εικόνα 7).

A. ποσοστά μετανάστευσης των κυττάρων του καρκίνου του παγκρέατος κύτταρα επεξεργασμένα με IL-6 (100 ng /mL) ή φορέα μόνο συγκρίθηκαν μέσω δοκιμασίες επούλωσης πληγών. Μικροσκοπικές παρατηρήσεις καταγράφηκαν στα 48 ώρες μετά το ξύσιμο της επιφάνειας ενός στρώματος σε συρροή των κυττάρων. Αστερίσκος υποδεικνύει το τραύμα επουλώθηκε πλήρως. B. Η επεμβατική ικανότητα των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων σε επεξεργασία με IL-6 (100 ng /mL) ή φορέα μόνο συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασίες εισβολή Matrigel. Οι αριθμοί των κυττάρων που διανύθηκε μέσω της μεμβράνης μετρήθηκαν σε 10 πεδία κάτω από ένα αντικειμενικό φακό × 20. Αρχική μεγέθυνση, × 200. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SD των τιμών που λαμβάνονται σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. Η στατιστική σημαντικότητα υπολογίστηκε με χρήση t-test του Student.

Η

QYHJ στοχεύει σχετίζονται με τον καρκίνο φλεγμονής σε καρκίνο του παγκρέατος μέσω μειώθηκαν ΤΑΜ διήθηση και παραγωγή IL-6. Επειδή η IL-6 μπορεί να προωθήσει τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολή από την πρόκληση EMT, την καταστολή της φλεγμονής του καρκίνου που σχετίζονται με QYHJ να αναστείλουν παγκρέατος εισβολή των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση.

Η

Συζήτηση

Η παρόντα αποτελέσματα έδειξαν ότι η κινέζικη ιατρική QYHJ θα μπορούσε να αναστείλει παγκρεατικό καρκίνο εισβολή κυττάρων και τη μετάσταση μέσω της καταστολής της φλεγμονής που σχετίζονται με τον καρκίνο, ειδικά τη μείωση των ΤΑΜ προερχόμενων IL-6. Τα ευρήματα αυτά επεκτείνουν τις προηγούμενες παρατηρήσεις μας σχετικά με τη σημασία της μικροπεριβάλλον του όγκου ως βασικό στόχο των κινεζικών φυτικό φάρμακο.

Η παραδοσιακή κινέζικη ιατρική (TCM), η οποία βασίζεται σε μια μοναδική θεωρία και τους μόνους διάρκειας πρακτική εμπειρία, είναι πολύ δημοφιλής στην Κίνα. Έχει αναφερθεί ότι & gt? 90% των ασθενών με καρκίνο σύγχρονης Κινέζοι έχουν λάβει κάποια μορφή TCM διάρκεια θεραπευτικό σχήμα τους [34]. Τα ποσοστά της TCM χρησιμοποιούνται από τους παρόχους υγειονομικής περίθαλψης και το συμφέρον των ασθενών έξω από την Κίνα συνεχίζουν να αυξάνονται κάθε χρόνο, κυρίως στον τομέα της ογκολογίας [35]. Εφαρμογή του TCM ως θεραπεία του καρκίνου ανοσοενισχυτικό έχει αναφερθεί ότι ενισχύει την αποτελεσματικότητα και των δύο χημείο- και ραδιοθεραπεία και να βοηθήσει στη μείωση των αρνητικών επιπτώσεων της κάθε θεραπείας [36], [37]. Επιπλέον, οι κινεζικές φυτικά φάρμακα που χρησιμοποιούνται στην TCM έχουν πρόσφατα αναγνωριστεί ως μια σημαντική πηγή για τα νέα ανάπτυξη φαρμάκων, συμπεριλαμβανομένων των φαρμάκων κατά του καρκίνου [38], [39]. Στην παρούσα μελέτη, επιβεβαίωσε ότι QYHJ ανέστειλε τη μετάσταση του καρκίνου του παγκρέατος? Ωστόσο, οι υποκείμενοι μηχανισμοί παραμένουν ασαφείς.

Πρόσφατες μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι ο καρκίνος που σχετίζονται με τη φλεγμονή επηρεάζει πολλές πτυχές της κακοήθειας, συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού και της επιβίωσης των κακοηθών κυττάρων, αγγειογένεση, μετάσταση, και την ανταπόκριση στη θεραπεία [24]. Tumor προάγουν φλεγμονώδη κύτταρα περιλαμβάνουν μακροφάγα υπότυπους, σιτευτικά κύτταρα και ουδετερόφιλα, καθώς Τ και Β λεμφοκύτταρα. Τα μακροφάγα αποτελούν ένα κύριο συστατικό του ανοσοποιητικού κυτταρικό διήθημα παρατηρήθηκε σε όλες σχεδόν τις κακοήθειες [31]. Γίνεται δεκτό ότι, σε γενικές γραμμές, καρκινογόνες και υποδοχής του προγράμματος σημάτων κυττάρων που προέρχονται από μακροφάγα να αποκτήσουν ένα M2-όπως πολωμένο και αλλιώς όγκου-υποστηρικτική φαινότυπο [40]. Σε πολλές περιπτώσεις, οι αυξημένες αριθμοί ΤΑΜ σχετίζεται με μια χειρότερη πρόγνωση [32], [33]. ΤΑΜ μπορεί να απελευθερώσει αυξητικούς παράγοντες (π.χ., ΤΟΡ-β), προ-φλεγμονώδεις παράγοντες (π.χ., IL-6) και ένζυμα (π.χ., ΜΜΡ2, ΜΜΡ9) που προάγουν την αγγειογένεση, την ογκογένεση, τη μετάσταση και [24]. Όλοι αυτοί οι παράγοντες ή ένζυμα μπορεί να προωθήσει EMT. Για παράδειγμα, το προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες ΤΝΡ-α, IL-6 και IL-8 μπορεί να διεγείρει ΕΜΤ και την προώθηση του καρκίνου μετάσταση [25] – [29]. Επιπλέον, μια κλινική έρευνα επιβεβαίωσε ότι αυτές οι κυτοκίνες είναι σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος και συνδέθηκαν με κακή πρόγνωση [41]. Ως εκ τούτου, τα φάρμακα που στοχεύουν φλεγμονή σχετίζεται με τον καρκίνο έχουν τη δυνατότητα να επανεκπαιδεύσει ένα καρκινογόνο δράση φλεγμονώδης διήθηση ή για την πρόληψη τέτοιων κυττάρων από μεταναστεύουν στη θέση του όγκου. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι QYHJ μειωμένη ΤΑΜ διήθηση και αποτελεσματικά ανέστειλε πολλαπλών προ-φλεγμονωδών κυτοκινών όπως ΤΝΡ-α και IL-6, η οποία πρότεινε ότι θα μπορούσε να αναστείλει QYHJ φλεγμονή του καρκίνου που σχετίζονται με τον καρκίνο του παγκρέατος.

Κατά τη διαδικασία της ΕΜΤ, εξωγενή σήματα ενεργοποιούν το ενδογενές μεταγραφικοί παράγοντες σαλιγκάρι, Slug, Twist και ZEB1, τα οποία καταστέλλουν την έκφραση της Ε-καδερίνης και να προωθήσει την έκφραση της βιμεντίνης και Ν-καδερίνης, έτσι ώστε τα κύτταρα να αλλάξει από μία πολωμένη επιθηλιακά φαινότυπο σε ένα μεταναστευτικό φαινότυπο μεσεγχυματικά [42]. Τα κύτταρα καρκινώματος «EMTed» πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για σπορά μακρινό διάδοση, οδηγώντας τελικά σε θνησιμότητα σχετιζόμενη με τον καρκίνο [5], [7]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι QYHJ αναστέλλει την μετάσταση των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος, δυνητικά καταστέλλοντας EMT. Όπως περιμέναμε, τα αποτελέσματά μας επιβεβαίωσαν ότι η θεραπεία QYHJ οδήγησε σε αυξημένη έκφραση Ε-καδερίνης και μειωμένη βιμεντίνης, Ν-cadherin και την έκφραση Slug, η οποία ανέφερε ότι QYHJ ανέστειλε EMT των κυττάρων και κατέστειλε την κυτταρική διείσδυση.

IL-6 , το οποίο παράγεται κυρίως από μονοπύρηνα κύτταρα, μακροφάγα και σε μικρότερο ποσοστό από ινοβλάστες, ενδοθηλιακά κύτταρα, Τ και Β λεμφοκύτταρα, χονδροκύτταρα και αμνίον κυττάρων [43], είναι μια πλειοτροπική κυτοκίνη που προκαλεί καρκινογένεση, προωθεί την ανάπτυξη του όγκου και διευκολύνει την κυτταρική μετάσταση όγκου [ ,,,0],25] – [27]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι η IL-6 συχνά αυξημένα και έτσι σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε πολλούς τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παγκρέατος [44], [45]. Επιπλέον, νέες θεραπείες που στοχεύουν IL-6 επί του παρόντος σε κλινικές δοκιμές [46]. Επειδή έχουμε αποδείξει ότι QYHJ μειωμένη TAM διήθηση και αποτελεσματικά ανέστειλε παραγωγή IL-6, επιδιώξαμε να επιβεβαιώσει εάν η μειωμένη παραγωγή IL-6 σχετιζόταν με την καταστολή της EMT και επεμβατική ικανότητα των κυττάρων.